Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация травы фиалки и экстракта сухого, полученного на ее основе
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Стандартизация травы фиалки и экстракта сухого, полученного на ее основе
На правах рукописи
СМИРНОВА МАРИНА МИРОНОВНА
СТАНДАРТИЗАЦИЯ ТРАВЫ ФИАЛКИ И ЭКСТРАКТА СУХОГО, ПОЛУЧЕННОГО НА ЕЕ ОСНОВЕ
15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата фармацевтических наук
Пермь - 2004
Работа выполнена в Государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Министерства здравоохранения России».
НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:
Кандидат фармацевтических наук, профессор Олешко Григорий Иванович. ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:
Доктор фармацевтических наук, профессор Фурса Николай Сергеевич. Кандидат фармацевтических наук, доцент Эвич Нина Ивановна.
ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ:
Государственное общеобразовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Минздрава России».
Защита состоится » сентября 2004 г.
в /3 часов на заседании Диссертационного совета Д 280.068.01 при ГОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия Минздрава России» по адресу: 614990, Пермь, ул. Ленина, 48.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «ПГФА Минздрава России»
Автореферат разослан «_» ^¿/¿¿уу-^^ 2004 г.
Ученый секретарь
Диссертационного совета Д 208.068.01, канд. фармац. наук, доцент
2005-4 12194
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы. К числу важнейших задач медицинской и фармацевтической науки относится изыскание эффективных лекарственных средств на основе природных биологически активных веществ (БАВ). В пользу последних особенно убедительно говорят низкая токсичность и ограниченный спектр побочных явлений, что выгодно отличает их от синтетических препаратов. Поэтому не случайно в настоящее время из лекарственного растительного сырья (ЛРС) получают одну треть всех разрешенных к применению лекарственных средств [Лекарственные растения Государственной фармакопеи, 1999].
Перспективным источником для получения фитопрепаратов является трава фиалки (Herba Violae), которая признана официнальным видом сырья и заготавливается от двух производящих растений: фиалки трехцветной — Viola tricolor L. и фиалки полевой -Viola arvensis Murr. Химический состав данных видов представлен различными группами БАВ, обуславливающих противовоспалительное, отхаркивающее, ранозаживляющее, противоотечное, капилляро-укрепляющее, противоязвенное действие [Соколов, Замотаев, 1990, Бубенчиков, 2002].
В настоящее время трава фиалки применяется в виде одной лекарственной формы - настоя, имеющей ряд существенных недостатков (неточность дозирования, ограниченный срок хранения, неудобство транспортировки). С учетом данных о химическом составе и биологической активности применение травы фиалки в медицинской практике является явно недостаточным и поэтому важное значение имеет создание на ее основе рациональной лекарственной формы - сухого экстракта, позволяющего расширить ассортимент лекарственных форм из растительного сырья, упростить процедуру их применения.
По литературным данным известно, что основными группами БАВ, обеспечивающих фармакологический эффект травы фиалки, являются полисахариды и флавоноиды. Однако в соответствии с ГФ XI издания оценка качества сырья проводится по содержанию экстрактивных веществ, извлекаемых водой,
что не позволяет объективно оценивать качество сырья и не обеспечивает контроль за сохранением его фармакологической активности на протяжении всего срока хранения. Вышеизложенное указывает на актуальность создания новых лекарственных средств на основе травы фиалки, а также разработки методик «сквозной стандартизации» лекарственного растительного сырья и препарата, по группам действующих веществ.
Цель и задачи исследования.
Целью настоящего исследования является разработка методик стандартизации травы фиалки по группам БАВ, получение фиалки экстракта сухого и его стандартизация.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
- провести аналитический обзор литературы по фитохимическим и фармакологическим исследованиям травы фиалки;
- исследовать химический состав травы фиалки и полученного из нее экстракта сухого на наличие БАВ;
- разработать методики качественного и количественного анализа доминирующих групп БАВ в траве и фиалки экстракте сухом;
- разработать показатели качества для травы фиалки по содержанию БАВ;
- изучить оптимальные условия экстракции БАВ травы фиалки и разработать способ получения фиалки экстракта сухого;
- провести стандартизацию полученной лекарственной формы по содержанию основных групп БАВ, технологическим, физико-химическим, микробиологическим показателям;
- установить оптимальные условия и сроки хранения фиалки экстракта сухого;
- изучить острую токсичность и фармакологическую активность фиалки экстракта сухого;
- разработать проект ФСП на траву фиалки, лабораторный технологический регламент и проект ФСП на фиалки экстракт сухой.
Научная новизна.
Разработаны показатели качества травы фиалки по сумме флавоноидов в пересчете на рутин и по сумме полисахаридов.
Впервые изучено содержание суммы флавоноидов и полисахаридов в течение срока годности сырья.
Предложено включить в проект ФСП для подтверждения подлинности сырья проведение качественных реакций на флавоноиды и полисахариды и установление максимума поглощения комплекса суммы флавоноидов с алюминия хлоридом.
Впервые проведено количественное определение суммы антоцианов в траве фиалки трехцветной.
Впервые разработана методика количественного определения аскорбиновой кислоты в траве фиалки трехцветной и фиалки полевой.
Впервые экспериментально подобраны экстрагент и условия выделения комплекса БАВ из травы фиалки. Выбранные оптимальные параметры экстракции легли в основу способа получения фиалки экстракта сухого. Изучен химический состав, показатели качества и стабильность фиалки экстракта сухого, разработаны методики его стандартизации. Проведено исследование острой токсичности и фармакологической активности фиалки экстракта сухого. Определены условия и сроки хранения.
Практическая значимость.
На основе комплексного подхода разработаны унифицированные методики «сквозной стандартизации» травы фиалки и фиалки экстракта сухого. Ре-
зультаты исследования включены в проекты ФСП на траву фиалки и фиалки экстракт сухой.
Разработан способ получения фиалки экстракта сухого. Результаты технологических исследований использованы для разработки лабораторного технологического регламента, прошедшего апробацию на ОАО «Биохиммаш» г. Москва.
Результаты исследований используются в учебном процессе:
- на кафедре фармакогнозии ГОУ ВПО «ПГФА Минздрава России» при изучении теоретического и практического материала на 3 курсе очного факультета, на занятиях интернов, слушателей элективных курсов, факультета дополнительного профессионального образования (акт от 9.06.2004);
- на кафедре фармацевтической технологии ГОУ ВПО «ПГФА Минздрава России» при изучении теоретического и практического материала на 3 курсе очного факультета, 5 курсе заочного факультета и в интернатуре (акт от 23.01.2003).
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:
- Межвузовской научно-практической конференции, посвященной 85-летию высшего образования на Урале (Пермь, 2001);
- Третьей международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2002);
- IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002);
- VI Международном съезде «Актуальные проблемы создания препаратов природного происхождения» (С- Петербург, 2002);
- Областной научной конференции молодых ученых, аспирантов и студентов «Молодежная наука Прикамья - 2002» (Пермь, 2002);
- IV Международном конгрессе молодых ученых «Науки о человеке» (Томск, 2003);
- Межвузовской научно-практической . конференции профессорско-преподавательского состава «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы» (Пермь, 2003);
- Российской научно-практической конференции «Рациональное использование лекарств» (Пермь, 2004);
- XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2004).
Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 9 печатных работ.
Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических
наук.
Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная фармацевтическая академия Минздрава России» в соответствии с планом научно-исследовательских работ по теме «Изучение лекарственной флоры РФ» (номер Государственной регистрации 01.9.10.018875). Тема утверждена на заседании Ученого совета Пермской государственной фармацевтической академии (протокол № 4 от 27.12.01).
Положения, выдвигаемые на защиту:
- Результаты изучения качественного химического анализа и количественного определения БАВ в траве фиалки трехцветной и фиалки полевой;
- Результаты исследования содержания суммы флавоноидов и полисахаридов в течение срока годности и обоснование показателей и норм качества травы фиалки.
- Результаты изучения оптимальных условий экстрагирования с целью получения фиалки экстракта сухого;
- Результаты стандартизации травы и полученной субстанции по основным показателям качества.
Объем и структура диссертации
Диссертационная работа изложена на 144 страницах машинописного текста, иллюстрирована 13 рисунками, 35 таблицами и состоит из введения, обзора литературы, трех глав, посвященных экспериментальным исследованиям, выводов, списка литературы и приложения. Библиографический указатель включает 238 источников, в том числе 31 иностранных авторов.
Во введении обоснована и сформулирована актуальность темы, цели и задачи исследования, научная новизна и практическая значимость работы.
В первой главе представлен обзор литературы по химическому составу и применению травы фиалки, фармакологической активности преобладающих групп БАВ. Показана целесообразность использования изучаемого вида сырья для создания лекарственных препаратов.
Вторая глава включает сведения об объектах и методах исследования, использованных в работе.
В третьей главе приведены результаты качественного химического анализа и количественного определения БАВ (флавоноидов, антоцианов, полисахаридов, аскорбиновой кислоты, аминокислот и микроэлементов), исследования содержания суммы флавоноидов и полисахаридов в течение срока хранения и обоснование показателей и норм качества травы фиалки.
В четвертой главе содержатся данные по установлению оптимальных условий экстрагирования травы фиалки, получению фиалки экстракта сухого, по изучению основных показателей качества, фармакологического действия, условий и сроков хранения полученного препарата.
В Приложение включены проекты ФСП «Трава фиалки» и «Фиалки экстракт сухой», лабораторный регламент получения фиалки экстракта сухого, акты апробации и внедрения.
ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты и методы исследования
Объектами исследования служили образцы травы фиалки трехцветной (Viola tricolor L.) и фиалки полевой (Viola arvensis Murr), заготовленные на территории региона Урала; образцы промышленных производителей (АО «Крас-ногорсклексредства», ОАО «Здоровье», АО «Лектравы»). Отбор проб проводили в соответствии с ГФ XI изд. Для проведения анализа готовили настой по ГФ XI издания в соотношении 1:10.
Для идентификации в сырье основных групп БАВ применяли известные качественные реакции и хроматографические исследования. Хроматографиче-ские исследования проводили методами восходящей хроматографии на бумаге (ВБХ), хроматографии в тонком слое.
Для проведения анализа методом ВБХ использовали хроматографиче-скую бумагу марки «С» производства фабрики им. Володарского (Санкт-Петербург) и следующие системы растворителей: бутанол - уксусная кислота -вода (4:1:5) и уксусная кислота - вода (15:85), хлористоводородная кислота -вода (1:99). Хроматографию в тонком слое проводили на пластинках «Silufol» и «Sorbfil» с использованием систем: бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5), хлористоводородная кислота — вода (1:99), хлористоводородная кислота - вода (3:97) и 95% этиловый спирт - конц. аммиак (16:4,5).
Для проведения анализа использовали реактивы, растворители и стандартные вещества, соответствующие требованиям НД. В качестве стандартов применяли ГСО рутина (ФС 42-2508-87), ГСО кверцетина (ФС 42-1290-79)
Количественное определение основных групп БАВ осуществляли, используя общепринятые методики, регламентированные частными статьями ГФ XI изд.
Изучение микроэлементного состава травы фиалки и фиалки экстракта сухого проводили с помощью дифракционного спектрографа ДФС-13-1 мето-
дом зтомно-абсорбционной спектроскопии в аналитическом центре ОАО «Уральская центральная лаборатория» (г. Екатеринбург).
Товароведческие показатели определяли в соответствии с требованиями ГФ XI издания и ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств».
Фиалки экстракт сухой получали на ОАО «Биохиммаш» по разработанной нами технологии из сырья травы фиалки.
Изучение показателей качества фиалки экстракта сухого проводили в соответствии с требованиями общей статьи «Экстракты» ГФ XI, вып. 2, с. 160.
Микробиологические исследования проводили на кафедре микробиологии ПГФА (зав. кафедрой доцент Одегова Т.Ф.) по статье ГФ XI, вып. 2 и Изменениям № 3 от 19.06.2003 к статье ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств».
С целью определения фармакологической активности фиалки экстракта сухого использовали наиболее адекватные модели и информативные методики.
Изучение противовоспалительных и ранозаживляющих свойств фиалки экстракта сухого проводили на кафедре физиологии с основами анатомии ПГФА (зав. кафедрой профессор Сыропятов Б Л.). Опыты проводили на белых беспородных крысах обоего пола массой 260 - 320 г. Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием лабораторных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12.08.77). Противовоспалительную активность изучали на модели острого каррагенинового отека. Фиалки экстракт сухой использовали в виде 0,0003 % водного раствора, который вводили через зонд в желудок из расчета 1 мл на 100 г массы животного. Животные контрольной группы получали физиологический раствор (Саля-мон, 1951).
Изучение ранозаживляющей активности экстракта проводили на модели линейной кожной раны. Для обработки ран исследуемой группы животных
применяли 1% водный раствор фиалки экстракта сухого, контрольной группы -дистиллированную воду (Мишарев, 1984).
Изучение острой токсичности исследуемого препарата проводили в лаборатории токсикологии ВИЛАР в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000). Фиалки экстракт сухой вводили в виде 5-25 % водных растворов в объемах 0,2-10 мл на животное (Беленький, 1963).
Статистическую обработку экспериментальных данных (р = 95 %) проводили при помощи критерия Стьюдента по методике ГФ XI.
Изучение химического состава и стандартизация травы фиалки по основным группам БАВ
С целью обеспечения доброкачественности сырья для получения фитопрепаратов проводили качественный химический и количественный анализ БАВ травы фиалки.
В результате исследования в траве фиалки трехцветной и фиалки полевой обнаружено присутствие флавоноидов, полисахаридов, аминокислот, аскорбиновой кислоты, кроме того, в траве фиалки трехцветной — антоцианов.
Хроматографирование водно-спиртовых извлечений в системе н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:5) показало наличие на хроматограммах четырех пятен веществ флавоноидной природы в траве фиалки трехцветной и трех в траве фиалки полевой. Со свидетелем идентифицированы рутин и кверцетин.
Проведение качественного анализа на наличие антоцианов показало, что положительный результат дают только извлечения из травы фиалки трехцветной. Реакции на антоцианы отрицательны для извлечений из травы фиалки полевой индивидуального сбора, а также в некоторых образцах промышленных серий, что можно объяснить двумя причинами:
- сырье заготовлено от фиалки полевой;
- сырье заготовлено от фиалки трехцветной, но не в период цветения.
и
Определение локализации антоцианов по органам фиалки трехцветной показало, что характерное для антоцианов малиновое окрашивание извлечения, синий аморфный осадок и яркое оливково-зеленое окрашивание, наблюдаются только у извлечения из лепестков фиалки трехцветной (таблица 1).
Таблица 1
Результаты качественных реакций для определения локализации
Антоцианов по органам травы фиалки трехцветной
Исследуемые Результаты реакций
органы Окраска с 1 % рас- Цвет осадка с 10% Окраска с 10% рас-
растения твором хлористово- раствором ацетата твором гидроксида
дородной кислоты свинца натрия
Стебли Слабо желтая Желтый Желто-зеленая
Листья Слабо желто-зеленая Желтый Желто-зеленая
Чашелистики Слабо желто-зеленая Желтый Желто-зеленая
Лепестки Малиновая Синий аморфный Оливково-зеленая
Створки плодов Бесцветная Желтый Слабо желто-зеленая
Семена Бесцветная Желтый Слабо желтая
Проводили хроматографирование извлечений из травы фиалки трехцветной до и после кислотного гидролиза параллельно с извлечениями из цветков василька и плодов черники, т.к. согласно литературным данным в указанных видах присутствуют антоцианы (Кнышев, 1978, Панчев, 1980).
Система хлористоводородная кислота-вода (3:97) является оптимальной для разделения антоцианов до и после гидролиза. В извлечении из травы фиалки трехцветной до гидролиза обнаружили 1 пятно ЯГ = 0,38, а после кислотного гидролиза - 2 пятна ЯГ = 0,18 и 0,52 характерной малиновой флюоресценции, соответствующие по значениям ЯГ пятнам извлечений цветков василька и плодов черники, что позволяет отнести их к антоцианам.
В последнее время все чаще лекарственные растения рассматриваются как источники аминокислот. Перспективным в этом отношении является сырье травы фиалки. Исследование аминокислотного состава травы фиалки показало, что в изученных образцах травы фиалки обнаружено 11 аминокислот, 7 из них идентифицированы как аланин, аспарагиновая кислота, валин, глицин, лейцин, серии, тирозин. В результате анализа установлено, что для всех изученных об-
разцов хроматографическая картина одинакова. Это свидетельствует об идентичности аминокислотного состава фиалки трехцветной и фиалки полевой.
Количественное определение суммы флавоноидов проводили спектро-фотометрическим методом по методике, разработанной для травы фиалки трехцветной и полевой (Печерская Л.Г., 1997).
В качестве стандартного вещества использовали рутин, спектр поглощения которого с алюминия хлоридом в предлагаемых условиях совпадает со спектром поглощения комплекса флавоноидов травы фиалки (рис. 1).
Содержание суммы флавоноидов в траве фиалки значительное и составляет от 2,10 до 3,94 %. (табл. 2).
Длина волны,
Рис. 1. Спектр поглощения комплекса флавоноидов травы фиалки и раствора ГСО рутина с алюминия хлоридом
Для количественного определения антоцианов в траве фиалки использовали спектрофотометрический метод, который включен в ГФ XI издания для цветков василька. Установлены оптимальные условия извлечения антоцианов из травы фиалки. В качестве экстрагента использовали 1 % раствор хлористоводородной кислоты, степень измельчения сырья 1 мм, соотношение сырье-
экстрагент 1:100. Сырье настаивании на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 15 минут с трехкратной сменой экстрагента. В сумме антоцианов травы фиалки содержится цианидин-3,5-диглюкозид, поэтому количественное определение антоцианов вели в пересчете на данное соединение (табл. 2).
Таблица 2
Результаты количественного определения БАВ травы фиалки (п = 5)
№ п/п Образец сырья, дата сбора или серия Содержание
флавонои-дов, % антоцианов, мг% полисахаридов, % аскорбиновой кислоты, мг%
1 Трава фиалки трехцветной (Добрянский район Пермской области, 07.1998) 3,59 ± 0,10 80,0 ± 3,4 9,44 ± 0,21 124 ±5,5
2 Трава фиалки трехцветной (Пермская область, окрестности с. Усть-Качка, 06.2002) 3,94 ±0,19 135,0 ±4,1 8,05 ± 0,34 108 ±5,1
3 Трава фиалки полевой (Пермская область, окрестности с. Усть-Качка, 07.2000) 3,70 ±0,10 9,72 ± 0,35 133 ±3,5
4 Трава фиалки, АО «Красногорсклек-средства». Серия 90799 2,29 ± 0,08 6,58 + 0,23 62 ±4,7
5 Трава фиалки, АО «Красногорсклек-средства». Серия 60500 2,41 ±0,09 7,90 ±0,26 97 ± 2,7
6 Трава фиалки, АО «Красногорсклек-средства». Серия 30401 2,10±0,06 8,55 ±0,30 118 ±2,7
7 Трава фиалки, АО «Лектравы», Украина. Серия 20198 2,25 ± 0,07 8,92 ±0,62 100 ±4,7
8 Трава фиалки трехцветной, ОАО «Здоровье» Серия 02.08. 00 3,01 ±0,14 115,0 ±4,7 7,59 ±0,41 79 ±3,8
9 Трава фиалки трехцветной, ОАО «Здоровье» Серия 01.05.01. 2,56 ±0,04 127,0 ±5,2 7,02 ±0,29 72 ±4,0
В результате анализа определили, что содержание антоцианов в траве фиалки трехцветной от 80 до 135 мг%. Относительная ошибка метода с доверительной вероятностью 95 % составляет ±4,87 %.
Одной их важных групп, обеспечивающих фармакологический эффект травы фиалки, являются полисахариды. Количественную оценку полисахарид-ного комплекса проводили гравиметрическим методом.
Содержание полисахаридов в траве фиалки трехцветной от 7,02 до 9,44%, а для фиалки полевой - 9,72% (табл. 2). Относительная ошибка метода с доверительной вероятностью 95 % составляет ± 4,15 %.
В результате качественного анализа, проведенного с помощью химических реакций и хроматографии, установлено присутствие в траве фиалки аскорбиновой кислоты. Количественную оценку данного соединения проводили титриметрическим методом по методике ГФ XI изд., модифицированной нами для травы фиалки. Определены оптимальные условия извлечения аскорбиновой кислоты из сырья. Содержание аскорбиновой кислоты в траве фиалки находится в пределах 62 - 133 мг% (табл. 2). Относительная ошибка метода с доверительной вероятностью 95 % составляет ± 5,40 %.
Природные комплексы микроэлементов играют важную роль в физиологических процессах человеческого организма и участвуют в биогенезе действующих веществ лекарственных растений. Изучение элементного состава травы фиалки показало присутствие 20 микроэлементов, которые в зависимости от концентрации располагаются в следующей последовательности: марганец, титан, барий, стронций, цирконий, цинк, медь, никель, хром, ванадий, иттрий, ниобий, свинец, галлий, кобальт, скандий, молибден, бериллий, иттербий, серебро. Содержание токсичных элементов не превышает ПДК принятые для пищевых продуктов (Сан.ПиН2.3.2.1078-01).
Исследование микробиологической чистоты травы фиалки позволило установить, что все исследованные образцы соответствовали Изменениям № 3 от
Результаты исследования стабильности содержания
Таблица 3
флавоноидов и .полисахаридов.в траве фиалки
^ Содержание сум- Продолжитель-
Вид сырья
Район сбора или поставщик
Дата сбора или серия
Дата первичного анализа и переконтроля
Содержание суммы флавоноидов, _%_
Содержание суммы полисахаридов, %
родолжитель-ность хранения
Трава фиалки трехцветной
АО Красногорск-лексредства
06.05.96
12.09.96
13.05.97
29.04.98
05.05.99
2,35 2,32 2,30 2,17
8,78 8,66 8,32 8,03
4мес. 1год
2 года
3 года
Трава фиалки трехцветной
АО Красногорск-лексредства
09.07.96
12.09.96
08.06.97
05.07.98
10.07.99
2,66 2,63 2,58 2,44
9,02 8,81 8,26 7,94
2 мес.
1год
2 года
3 года
Трава фиалки трехцветной
АО Красногорск-лексредства
03.06.97
08.09.97
05.07.98
10.07.99 06.06.00
2,57 2,50 2,45 2,38
7,87 7,55 7,16 6,93
Змее. 1год
2 года
3 года
Трава фиалки трехцветной
Пермская область
19.06.97
04.09.97
05.07.98
15.06.99 06.06.00
3,46 3,37 3,29 3.15
9,85 9,73 9.21 8,81
Змее. 1год
2 года
3 года
Трава фиалки трехцветной
Удмуртия
28.06.97
04.09.97
21.06.98
15.06.99 07.06.00
2,91 2,84 2,73 2,70
8,22 8,00 7,59 7,18
2мес.
1год
2 года
3 года
Трава фиалки трехцветной
Нижегородская область
15.06.97
05.09.97
21.06.98
15.06.99 08 06.00
3,29 3,24 3,19 3,01
9,58 9,44 9,01 8,74
Змее. 1год
2 года
3 года
Трава фиалхи полевой
Пермская область
25.07.97
05.09.97
21.06.98
15.06.99 13.06.00
3,07 3,02 2,98 2,85
9,96 9,77 9,31 8,92
2мес. 1год
2 года
3 года
Трава фиалки полевой
Кировская область
01.08.97
07.09.97
12.08.98
06.08.99 03.09.00
2,82 2,76 2,65 2,51
7.95 7,81 7,39 7,11
1мес.
1год
2 года
3 года
19.06.2003 к статье ГФ XI «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» (категория 4 А).
Результаты товароведческого, качественного химического и количественного анализа, а также определение микробиологической чистоты использованы при составлении проекта ФСП «Трава фиалки». На основании данных анализа предложено включить в проект ФСП на траву фиалки показатели - содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин - не менее 1,5 % и содержание суммы полисахаридов - не менее 5 %.
Проведены исследования по подтверждению стабильности количественного содержания суммы флавоноидов и полисахаридов на протяжении срока годности, который для травы фиалки, согласно ГФ XI изд., составляет 3 года. Установлено, что в сырье фиалки как трехцветной, так и полевой, хранившемся до 3-х лет, содержание суммы флавоноидов и полисахаридов снижалось незначительно и к концу срока хранения находилось в пределах от 2,17 % до 3,15% и от 6,93 % до 8,92 % соответственно (табл. 3).
Разработка технологии и стандартизация фиалки экстракта сухого
Основными факторами, влияющими на процесс экстракции являются тип экстрагента, температура, степень измельчения сырья, соотношение сырья и экстрагента, продолжительность и кратность экстракции.
В результате исследования установлено, что наиболее оптимальным экс-трагентом является вода очищенная. Изучение температурного режима показало, что температура 90±5 °С обеспечивает наиболее полное извлечение БАВ травы фиалки. Опытным путем подобрано оптимальное соотношение фаз 1:10 (сырье-экстрагент) и степень измельчения сырья 2-5 мм. На основании проведенных исследований установлено, что трехкратная смена экстрагента обеспечивает максимальное истощение сырья, при этом равновесное состояние в системе наступает через 30 минут на каждой из ступеней экстракции.
Рис. 2. Технологическая схема получения фиалки экстракта сухого (Кт, Кх, Км - контроль технологический, химический, микробиологический, соответственно).
Способ получения экстракта отработан на ОАО «Биохиммаш» на прямоточной распылительной сушилке «№го Atomazer». Технологическая схема получения фиалки экстракта сухого представлена на рис. 2
Экстракт представляет собой гигроскопичный аморфный порошок светло-коричневого цвета, со специфическим запахом и характерным вкусом. Мало растворим в спирте, хорошо растворим в воде.
С помощью качественных реакций и хроматографии подтверждено присутствие в фиалки экстракте сухом флавоноидов, антоцианов, полисахаридов, аминокислот и аскорбиновой кислоты.
С учетом комплексного подхода к стандартизации сырья и фитопрепарата, разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов, антоцианов и полисахаридов.
В результате количественного определения БАВ пяти серий экстракта установлено, что количество флавоноидов в пересчете на рутин составляет от 3,94 до 4,55 % (относительная ошибка методики составляет ± 4,36 %), антоцианов в пересчете на цианидин - 3,5 - диглюкозид от 109 до 158 мг% (относительная ошибка методики составляет ± 4,47 %), полисахаридов от 26,89 до 34,05 % (относительная ошибка методики составляет ± 3,52 %) (табл. 4).
Установлены нормы содержания суммы флавоноидов в фиалки экстракте сухом - не менее 2 % и суммы полисахаридов - не менее 20 %. На основании полученных данных составлен проект ФСП.
В результате исследования микроэлементного состава фиалки экстракта сухого прослеживается очевидная взаимосвязь между содержанием микроэлементов в траве и экстракте, что позволило сделать вывод об эффективности способа получения экстракта.
Результаты стандартизации 5 промышленных серий фиалки экстракта сухого по показателям: внешний вид, подлинность, содержание БАВ, рН водного раствора, потеря в массе при высушивании, содержание тяжелых металлов и
Таблица 4
Результаты стандартизации фиалки экстракта сухого
№ серии Описание: аморфный порошок светло-коричневого цвета, со специфическим запахом и вкусом Содержание флавонои-дов в пересчете на рутин, % Содержание антоцианов в пересчете нациани-дин-3,5-диглюко-зид, % Содержание полисахаридов, % Потеря в массе при высушивании, % рН водного раствора Тяжелые металлы, не более 0,01 % Микробиологическая чистота, кат. 3 Б
01 Соответствует 4,29 ± 0,07 0,122 ± 0,092 29,12 ±2,31 4,22 ± 0,30 5,36±0,10 Соответствует Соответствует
02 - «- 4,05 ± 0,02 0,115 ± 0,028 30,99 ±1,90 4,51 ±0,23 5,13+0,21 - «- - « -
03 - «- 4,55 ± 0,09 0,158 ± 0,076 26,89 ±4,01 3,90 ± 0,41 5,44±0,17 - «- - «-
04 - «- 3,94 ± 0,08 0,109 ± 0,080 34,05 ± 2,48 4,02 ± 0,29 5,31±0,11 -«- - « -
05 - «- 4,19 ±0,05 0,136 ± 0,057 32,21 ± 2,87 4,11± 0,34 5,52±0,13 - « - - «-
микробиологическая чистота, позволяют сделать вывод о том, что полученный экстракт отвечает требованиям ГФ XI изд., вып. 2 (табл. 4).
С помощью общеизвестных методик установлены технологические характеристики фиалки экстракта сухого: насыпная масса при свободном падении - 0,30 - 0,41 г/см3, насыпная масса при уплотнении 0,64 - 0,72 г/см3, сыпучесть 1,39 - 1,52 г/с, угол естественного откоса 42 - 46
При определении срока годности экстракта, проведенного методом «ускоренного старения» и естественного хранения, установлено, что фиалки экстракт сухой выдерживает хранение в течение 2 лет.
В результате изучения острой токсичности исследуемого препарата установлено, что ЛД50 ДЩ фиалки экстракта сухого при внутрибрюшинном введении белым лабораторным мышам самцам и самкам составляет 2920 ± 180 и 3200 ± 200, соответственно; крысам самцам и самкам - более 5000 мг/кг; при введении в желудок мышам и крысам обоего пола — более 15000 мг/кг.
Исследования, проведенные при однократном внутрибрюшинном и внут-рижелудочном введении различным видам лабораторных животных фиалки экстракта сухого, показали, что данный препарат является практически нетоксичным веществом (V класс токсичности, по классификации токсичности принятой в РФ и ВОЗ).
Как известно, фармакологический эффект травы фиалки обусловлен присутствием комплекса БАВ, в частности флавоноидов и полисахаридов, обладающих противовоспалительным и ранозаживляющим действием. На основании этих данных проводили исследование противовоспалительной и раноза-живляющей активности фиалки экстракта сухого.
В результате исследования противовоспалительных свойств обнаружено, что в контрольной группе прирост объема стопы составил 105,9 %, ав группах с применением раствора экстракта - 85,4% (рис. 3) Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что фиалки экстракт сухой обладает противовоспалительной активностью.
Рис 3. Результаты изучения противовоспалительной активности фиалки экстракта сухого
дуемую группу - 1 % водным раствором фиалки экстракта сухого, контрольную группу животных -водой дистиллированной,
К 5 и 7 суткам раствор экстракта достоверно увеличивал силу разрыва рубца в сравнении с контролем. Результаты исследования показали, что экстракт фиалки обладает ранозаживляющей активно-
СПЮ (рИС. 4).
О наличии ранозаживляю-щей активности судили по скорости течения репарации срастающихся тканей. Объективным показателем этого процесса являлась прочность послеоперационного рубца, которую определяли тензиометрически на 3, 5, 7 сутки эксперимента.
Раны опытных животных ежедневно обрабатывали: иссле-
Н Контроль О Фиалки экстракт сухой
Рис4. Результаты изучения ранозаживляющей активности фиалки экстракта сухого
выводы
1. На основании исследования химического состава травы фиалки, предложено проводить оценку качества сырья по показателям: содержание суммы фла-воноидов в пересчете на рутин - не менее 1,5 % и суммы полисахаридов — не менее 5 %.
2. Установлены оптимальные условия экстрагирования травы фиалки, сгущения и сушки полученного извлечения. Разработана технологическая схема получения фиалки экстракта сухого.
3. Разработаны методики качественного и количественного анализа экстракта по основным группам БАВ. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин составило 3,94 - 4,55%, антоцианов в пересчете на цианидин-3,5-диглюкозид 0,109 - 0,158 % и полисахаридов 26,89 - 34,05 %.
4. Методом атомно-абсорбционной спектроскопии определен микроэлементный состав травы фиалки и экстракта сухого, представленный 20 микроэлементами, которые в зависимости от концентрации располагаются в следующей последовательности: марганец, титан, барий, стронций, цирконий, цинк, медь, никель, хром, ванадий, иттрий, ниобий, свинец, галлий, кобальт, скандий, молибден, бериллий, иттербий, серебро.
5. Изучен аминокислотный состав исследуемых объектов. По результатам анализа, полученный экстракт соответствует траве фиалки по аминокислотному составу, который представлен 11 аминокислотами, 7 из них идентифицированы как аланин, аспарагиновая кислота, валин, глицин, лейцин, серии, тирозин.
6. С учетом принципа «сквозной стандартизацию) разработаны показатели качества фиалки экстракта сухого: содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин - не менее 2 % и содержание суммы полисахаридов - не менее 20%.
7. Проведена стандартизация полученного экстракта по показателям: внешний вид, содержание суммы флавоноидов и полисахаридов, потеря в массе при высушивании, рН водного раствора, содержание тяжелых металлов, микробиологическая чистота.
8. Исследованы условия и срок годности экстракта. Рекомендуемый срок хранения 2 года при температуре не выше 20 °С и влажности воздуха в помещении 60-65%.
9. Установлена биологическая безвредность, а также противовоспалительное и ранозаживляющее действие фиалки экстракта сухого.
ЮНа основании полученных данных разработаны и приняты к рассмотрению проекты ФСП «Трава фиалки» и «Фиалки экстракт сухой», а также заявка на патент «Способ получения противовоспалительного, ранозаживляющего, капилляроукрепляющего, иммуномодулирующего средства» (приоритетная справка № 200300112/14 от 06.2003г.).
По материалам диссертации опубликованы следующие работы:
1. Смирнова М.М., Олешко Г.И., Печерская Л.Г., Блинова О.А. Исследования по разработке экстракционных препаратов из травы фиалки // Межвузовская научно-практическая конференция, посвященная 85-летию высшего образования на Урале «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы».- Пермь, 2001. - С. 116.
2. Блинова О.А., Печерская Л.Г., Смирнова М.М, Олешко Г.И, Назаренко П.В.,Мухамеджанова Д.М. Антоцианы травы фиалки.// Фармация. -2002.-№ 4-С.16-18.
3. Олешко Г И., Блинова О.А, Мухамеджанова Д.М., Назаренко П.В., Печерская Л.Г., Смирнова М.М. Комплексная переработка травы фиалки // IX Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - Москва, 2002. — С. 666-667.
4. Печерская Л.Г., Смирнова М.М., Блинова О.А., Олешко Г.И. Исследование содержания флавоноидного комплекса травы фиалки в водном извлечении и лекарственных пленках.// Третья международная научно-практическая конференция «Здоровье и образование в XXI веке». - Москва, 2001-С. 318.
5. Смирнова ММ., Блинова ОА Разработка оптимальной технологии экстракционных препаратов из травы фиалки // Областная научная конференция
молодых ученых, аспирантов и студентов «Молодежная наука Прикамья -2002». - Пермь, 2002. - С. 148.
6. Смирнова М.М., Блинова О.А. Выбор оптимальной технологии получения экстракта фиалки сухого //IV Международный конгресс молодых ученых «Науки о человеке».- Томск, 2003. - С. 221.
7. Смирнова М.М., Блинова О.А., Рудакова И.П., Олешко Г.И. Исследование противовоспалительной и ранозаживляющей активности экстракта фиалки сухого // Межвузовская научно-практическая конференция профессорско-преподавательского состава «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы»,- Пермь, 2003. — С. 119.
8. Блинова ОА, Смирнова М.М., Олешко Г.И., Мухамеджанова Д.М. Стандартизация фиалки экстракта сухого // XI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство».- Москва, 2004. - С. 765.
9. Смирнова М.М., Блинова О.А., Олешко Г.И., Мухамеджанова Д.М. Исследование микроэлементного состава травы фиалки и фиалки экстракта сухого // Российская научно-практическая конференция «Рациональные использование лекарств». - Пермь, 2004. - С. 92.
»14379
РНБ Русский фонд
2005-4 12194
Оглавление диссертации Смирнова, Марина Мироновна :: 2004 :: Пермь
ВВЕДЕНИЕ
Список используемых сокращений
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Сведения о фиалке трехцветной и фиалке полевой
1.1.1. Морфологическая характеристика
1.1.2. Ареал и условия местообитания
1.1.3. Заготовка, сушка, хранение
1.1.4. Химический состав
1.1.5. Фармакологическое действие травы фиалки 18 1.1.6 Применение в медицине
1.2. Фармакологическое действие биологически активных веществ растительного происхождения и возможности их использования в качестве лекарственных средств
1.3. Современное состояние в области разработки сухих экстрактов 31 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 33 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объекты исследования
2.1.1. Вспомогательные материалы
2.2. Методы исследования 35 2.2.1 .Определение подлинности лекарственного растительного сырья
2.2.2. Определение числовых показателей
2.2.3.Качественный химический анализ биологически активных веществ
2.2.3.1. Качественные реакции
2.2.3.2. Хроматографический анализ биологически активных веществ
2.2.4. Количественное определение биологически активных веществ
2.2.5. Определение технологических показателей экстракта
2.2.6. Определение микробиологической чистоты
2.2.7. Определение острой токсичности
2.2.8. Определение противовоспалительного действия
2.2.9. Определение ранозаживляющего действия
ГЛАВА 3. СТАНДАРТИЗАЦИЯ И ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТРАВЫ ФИАЛКИ
3.1. Стандартизация травы фиалки
3.1.1. Определение подлинности травы фиалки
3.1.2. Оценка качества сырья
3.2. Фитохимический анализ травы фиалки
3.2.1. Качественный анализ флавоноидов
3.2.2. Качественный анализ антоцианов
3.2.3. Качественный анализ полисахаридов
3.2.4. Качественный анализ аскорбиновой кислоты
3.2.5. Исследование аминокислотного состава травы фиалки
3.3. Количественное исследование БАВ травы фиалки
3.3.1. Количественное определение флавоноидов
3.3.2. Количественное определение антоцианов
3.3.3. Количественное определение полисахаридов
3.3.4. Количественное определение аскорбиновой кислоты
3.4. Исследование микроэлементного состава травы фиалки
3.5. Исследование микробиологической чистоты травы фиалки
ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ ФИАЛКИ ЭКСТРАКТА СУХОГО И ЕГО СТАНДАРТИЗАЦИЯ 82 4.1. Подбор оптимальных условий экстрагирования травы фиалки 82 4.1.1. Выбор экстрагента 82 4.1.2 Определения размера частиц 84 4.1.3. Определение соотношения сырье - экстрагент
4.1.4. Определение температуры экстрагирования
4.1.5. Определения кратности экстракции
4.2. Разработка технологической схемы получения фиалки экстракта сухого
4.3. Стандартизация фиалки экстракта сухого
4.3.1. Количественное определение биологически активных веществ фиалки экстракта сухого
4.3.2. Исследование микроэлементного состава фиалки экстракта сухого
4.3.3. Исследование аминокислотного состава фиалки экстракта сухого
4.3.4. Исследование физико-химических и технологических показателей фиалки экстракта сухого
4.3.5. Изучение срока годности фиалки экстракта сухого
4.3.6. Изучение микробиологической чистоты фиалки экстракта сухого 111 4. 4. Исследование токсичности фиалки экстракта сухого
4.5. Определение противовоспалительного действия фиалки экстракта сухого
4.6. Изучение ранозаживляющего действия фиалки экстракта сухого
ОБЩИЕ вывода
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Смирнова, Марина Мироновна, автореферат
Актуальность темы. К числу важнейших задач медицинской и фармацевтической науки относится изыскание эффективных лекарственных средств на основе природных биологически активных веществ (БАВ). В пользу последних особенно убедительно говорят низкая токсичность и ограниченный спектр побочных явлений, что выгодно отличает их от синтетических препаратов. Поэтому не случайно в настоящее время из лекарственного растительного сырья (JIPC) получают одну треть всех разрешенных к применению лекарственных средств [Лекарственные растения Государственной фармакопеи, 1999].
Перспективным источником для получения фитопрепаратов является трава фиалки (Herba Violae), которая признана официнальным видом сырья и« заготавливается от двух производящих растений: фиалки трехцветной - Viola tricolor L. и фиалки полевой -Viola arvensis Murr. Химический состав данных видов представлен различными группами БАВ, обуславливающих противовоспалительное, отхаркивающее, ранозаживляющее, противоотечное, капилляро-укрепляющее, противоязвенное действие [Соколов, Замотаев, 1990, Бубенчиков, 2002].
В настоящее время трава фиалки применяется в виде одной лекарственной формы - настоя, имеющей ряд существенных недостатков (неточность дозирования, ограниченный срок хранения, неудобство транспортировки). С учетом данных о химическом составе и биологической активности применение травы фиалки в медицинской практике является явно недостаточным и поэтому важное значение имеет создание на ее основе рациональной лекарственной формы - сухого экстракта, позволяющего расширить ассортимент лекарственных форм из растительного сырья, упростить процедуру их применения.
По литературным данным известно, что основными группами БАВ, обеспечивающих фармакологический эффект травы фиалки, являются полисахариды и флавоноиды. Однако в соответствии с ГФ XI издания оценка качества сырья проводится по содержанию экстрактивных веществ, извлекаемых водой, что не позволяет объективно оценивать качество сырья и не обеспечивает контроль за сохранением его фармакологической активности на протяжении всего срока хранения. Вышеизложенное указывает на актуальность создания новых лекарственных средств на основе травы фиалки, а также разработки методик «сквозной стандартизации» лекарственного растительного сырья и препарата, по группам действующих веществ.
Цель и задачи исследования.
Целью настоящего исследования является разработка методик стандартизации травы фиалки по группам БАВ, получение фиалки экстракта сухого и его стандартизация.
Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:
Заключение диссертационного исследования на тему "Стандартизация травы фиалки и экстракта сухого, полученного на ее основе"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. На основании исследования химического состава травы фиалки, предложено проводить оценку качества сырья по показателям: содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин - не менее 1,5 % и суммы полисахаридов - не менее 5 %.
2. Разработана технологическая схема получения фиалки экстракта сухого. Установлены оптимальные условия экстрагирования травы фиалки, сгущения и сушки полученного извлечения.
3. Разработаны методики качественного и количественного анализа экстракта по основным группам БАВ. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин составило 3,94 - 4,55%, антоцианов в пересчете на цианидин-3,5-диглюкозид 0,109 - 0,158 % и полисахаридов 26,89 -34,05 %.
4. Методом атомно-абсорбционной спектроскопии определен микроэлементный состав травы фиалки и экстракта сухого, представленный 20 микроэлементами, которые в зависимости от концентрации располагаются в следующей последовательности: марганец, титан, барий, стронций, цирконий, цинк, медь, никель, хром, ванадий, иттрий, ниобий, свинец, галлий, кобальт, скандий, молибден, бериллий, иттербий, серебро.
5. Изучен аминокислотный состав исследуемых объектов. По результатам анализа, полученный экстракт соответствует траве фиалки по аминокислотному составу, который представлен 11 аминокислотами, 7 из них идентифицированы как аланин, аспарагиновая кислота, ва-лин, глицин, лейцин, серин, тирозин.
6. С учетом принципа «сквозной стандартизации» разработаны показатели качества фиалки экстракта сухого: содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин - не менее 2 % и содержание суммы полисахаридов - не менее 20%.
7. Проведена стандартизация полученного экстракта по показателям: содержание суммы флавоноидов и полисахаридов, потеря в массе при высушивании, содержание тяжелых металлов, микробиологическая чистота.
8. Исследованы условия и срок годности экстракта. Рекомендуемый срок хранения 2 года при температуре не выше 20 °С и влажности воздуха в помещении 60 - 65 %.
9. Установлена биологическая безвредность, а также противовоспалительное и ранозаживляющее действие фиалки экстракта сухого.
10. На основании полученных данных разработаны и приняты к рассмотрению проекты ФСП «Трава фиалки» и «Фиалки экстракт сухой», а также заявка на патент «Способ получения противовоспалительного, ранозаживляюще-го, капилляроукрепляющего, иммуномодулирующего средства» (приоритетная справка № 200300112/14 от 06.2003 г.).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Анализ литературных данных показывает, что трава фиалки является ценным источником БАВ. Доминирующими и определяющими фармакологический эффект данного вида являются флавоноиды и полисахариды. С целью объективной оценки качества сырья необходима разработка методик стандартизации по этим группам БАВ.
Применение травы фиалки в научной медицине ограничено настоями и сборами для лечения воспалительных заболеваний органов дыхания и мочевы-водящей системы. Ввиду отсутствия промышленно выпускаемых лекарственных форм травы фиалки и недостаточное использование данного сырья в терапевтической практике, назрела насущная потребность в комплексных препаратах фиалки, обеспечивающих весь спектр фармакологического действия ценного растительного сырья.
Собранный нами материал по химическому составу и фармакологическому действию травы фиалки позволяет рекомендовать данный вид сырья для получения экстракта сухого и разработки методики «сквозной стандартизации» сырья и экстракта.
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Объектами нашего исследования служили образцы травы фиалки трехцветной и фиалки полевой, заготовленные на территории региона Урала и промышленные образцы, а также водные и водно-спиртовые извлечения из сырья, полученные в лабораторных условиях; и субстанция «фиалки экстракт сухой».
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2004 года, Смирнова, Марина Мироновна
1. Акопов, И. Э. Важнейшие лекарственные растения и их применение / И.Э. Акопов. Ташкент : Медицина, 1990. - 370 с.
2. Аносова, О.Г. Совершенствование анализа и технологии настоев и отваров, содержащих флавоноиды / О.Г. Аносова, М.В. Колпа-кова // Фармация. 1994. - № 1. - С. 30-34.
3. Антоцианы травы фиалки / O.A. Блинова, Л.Г. Печерская, М.М. Смирнова и др. // Фармация. 2002. - № 4. - С. 16-18.
4. Ареалы лекарственных и родственных им растений СССР: Атлас. 2-е изд., испр. - Л.: Изд-во ЛГУ, 1990. - 222 с.
5. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. М., 1976.-319 с.
6. Балицкий, К.П. Лекарственные растения и рак / К.П. Балицкий. -Киев : Наукова думка, 1982. 244 с.
7. Бандюкова, В.А. Дослщжения флавонощного складу деяких рос-лин швшчного Кавказу / В.А. Бандюкова, Н.В.Сергеева, А.Л Шинкаренко // Фармац. журн. 1964. - №2. - С. 40-44.
8. Бандюкова, В.А. Применение цветных реакций для обнаружения флавоноидов путем хроматографирования на бумаге / В.А. Бандюкова // Растит, ресурсы. 1965. - № 4. - С. 591-597.
9. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. Л., 1963.- 152 с.
10. Беликов, В.В. Ускоренный способ количественного определения суммы флавоноидов в растительном сырье / В.В. Беликов, М.Т.
11. Колесник, T.B. Точкова // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока. Т. 2. Томск, 1989. - С.20.
12. Беликов, В.В. Избирательный метод анализа флавоноидов в фи-тохимических препаратах / В.В. Беликов, Т.В. Точкова, М.Т. Колесник // Проблемы стандартизации и контроля качества лекарственных средств.-М., 1991.-С. 13.
13. Беляков, К.В. Количественное определение полисахаридов в листьях мать-и-мачехи / К.В. Беляков, Д.М. Попов //Фармация. -1999.-№ 1.-С. 23-24.
14. Битюцкий, Н.П. Микроэлементы и растения : Учебное пособие / Н.П. Битюцкий. СПб.: Изд-во Санкт-Петербург. Ун-та, 1999. 232 с.
15. Блинков, И.А. Лекарственные растения в клинике / И.А. Блинков. -М, 1983.-340 с.
16. Боровик-Фоманова, Т.Ф. Спектральное определение микроэлементов в растениях и почве / Т.Ф. Боровик-Фоманова, М.М. Фа-рафонов, И.Ф. Грибовская. М.: Наука, 1973. - 158 с.
17. Бубенчикова, В.Н. Содержание дубильных веществ в растениях рода фиалка / В.Н. Бубенчикова, В.В. Гвоздиков, P.A. Бубенчиков // Человек и его здоровье: Сб. науч. работ. Курск, 1999. - Вып. 2. -С. 271-272.
18. Бубенчикова, В.Н. Фенольные соединения и полисахариды листьев Fragaria vesca L. / В.Н. Бубенчикова, И.Л. Дроздова. / Растит, ресурсы. 2003. - № 4. - С. 94-99.
19. Бубенчиков, P.A. Фотохимическое и фармакологическое изучение растений рода фиалка: Автореф. дис.канд. мед. наук // P.A. Бубенчиков. Купавна, 2002.- 23 с.
20. Бубенчиков, P.A. Флавоноиды фиалки трехцветной / P.A. Бубенчиков, И.Л. Дроздова // Фармация. 2004. № 2. - С. 11-12.
21. Бунатян, Н.Д. Природные антиоксиданты как гепатопротекторы / Н.Д. Бунатян, O.A. Герасимова // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1999. - № 2. - С. 64-67.
22. Василенко, Ю.К. Курс биологической химии для студентов фарм-вузов / Ю.К. Василенко. Пятигорск, 2003. - 360 с.
23. Васильев, С.Н. Фенольные экстрактивные вещества видов рода Picea А. Dietr. / С.Н. Васильев, В.Н. Рощин, H.A. Артемкина // Растит, ресурсы. 1999. - № 2. - С. 15-31.
24. Венчиков, А.И. Основные приемы статистической обработки результатов наблюдений в области физиологии / А.И. Венчиков, В.А. Венчиков. М.: Медицина, 1974.- 151 с.
25. Верещагин, В.И. Полезные растения Западной Сибири / В.И. Верещагин, К.А. Соболевская, А.И. Якупова. М.: АН СССР, 1959. -346 с.
26. Володарский, А.И. Практическое руководство по сбору и заготовке дикорастущих лекарственных растений / А.И. Володарский. -М.: Медгиз, 1959.-220 с.
27. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре. 42-2-28. -М., 1983.-8 с.
28. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Под ред. Е.Е. Сироткиной. Томск : Изд-во Томского ун-та, 1987. -184 с.
29. Галишевская, Е.Е. Фармакогностическое исследование марьянника лугового: Автореф. дис.канд. фарм. наук / Е.Е. Галишевская. -Пермь, 2004.-21 с.
30. Галушкина, Н.В. Об эффективности применения микродоз растительных экстрактов / Н.В. Галушкина, Е.Е. Лесиовская, Е.И. Са-канян // Человек и лекарство: Тез. докл. VII Рос. нац. конгр. — М.2000.-С. 568.
31. Гаммерман, А.Ф. Лекарственные растения / А.Ф. Гаммерман, Г.Н. Караев, A.A. Яценко-Хмелевский. -М.: Высш. шк., 1990. 544 с.
32. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. Новосибирск: Наука, 1990. - 327 с.
33. Головкин, Б.Н. Биологически активные вещества растительного происхождения: В 3-х томах / Б.Н. Головкин. Т.1. — М.: Наука,2001.-С. 109.
34. Голышенков, П.П. Лекарственные растения Мордовской АССР и их практическое использование / П.П. Голышенков. Саранск, 1961.- 180 с.
35. Гончарова, Т.А. Энциклопедия лекарственных растений: лечение травами / Т.А. Гончарова. Т. 2. М.: Издательский дом МСП, 1997. - 528 с.
36. Горницкий, К.С. Заметки об употреблении в народном быту некоторых дикорастущих и разводимых растений украинской флоры / К.С. Горницкий. Харьков, 1887. - 220 с.
37. Государственный Реестр лекарственных средств.-М., 2001 -173 с.
38. Государственная Фармакопея СССР. Изд. XI, вып. 1. М.: Медицина, 1987.-336 с.
39. Государственная Фармакопея СССР. Изд. XI, вып. 2. М.: Медицина, 1990. - 400 с.
40. Гринкевич, Н.И. Актуальные проблемы сердечно-сосудистой патологии и болезней обмена веществ / Н.И. Гринкевич, В.В. Ковальский, И.Ф. Грибовская. М.: Наука, 1970. - 138 с.
41. Гром, И.И. Сведения о лекарственных растениях народной медицины Коми АССР / И.И. Гром // Вопросы фармакогнозии. -JL, 1965.-С. 199-214.
42. Давыдова, В.Н. Современные технологии получения сухих экстрактов и их ассортимент / В.Н. Давыдова // Новая аптека. Аптека и рынок. 2002. - № 4. - С. 64-71.
43. Дадали, В.А. Биохимические механизмы действия природных он-копротекторов / В.А. Дадали, В.Г. Макаров // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: Мат. IV Междунар. конф. СПб. -2002. - С.563-569.
44. Данкова, С.К. Некоторые проблемы фитотерапии в Болгарии / С.К. Данкова, З.Д. Дмитрова // Фармация. 1991. - № 4 -С. 82-83.
45. Дербенцова, H.A. Антимжробш властивост1 лжарських рослин /H.A. Дербенцева, A.C. Бондаренко, A.C. Рабшович // Фармац. журн.- 1959.-№3.-С. 55-59.
46. Дрожина, Е.В. Разработка биологически активной добавки на основе сухого экстракта травы овса посевного / Е.В. Дрожина, Н.Ю. Фролова // Человек и лекарство: Тез. докл. VII Рос. нац. конгр. -М. 2000. - С. 569.
47. Дроздова, И.А. Аминокислоты фиалки полевой и донника рослого / И.А. Дроздова, P.A. Бубенчиков // Фармация. 2003. - № 5. -С.14-15.
48. Дурнеев, А.Д. Антиоксиданты как средства защиты генетического аппарата / А.Д. Дурнеев, С.Б. Середенин // Хим.-фармац. журн. -1990.-№2.-С. 92-100.
49. Забазная, Е.И. Полисахариды Viola tricolor // Химия природ, соединений. 1985. - №1.- С.116.
50. Забазная, Е.И. Токсикологическая и фармакологическая характеристика полисахаридов травы фиалки трехцветной / Е.И. Забазная // Актуальные вопросы фармации и экспериментальной медицины: Тез. докл. науч. конф. Пятигорск, 1985.- С.40.
51. Запрометов, М.Н. Фенольные соединения и методы их исследования / М.Н. Запрометов // Биохимические методы в физиологии растений.-М.: Наука, 1971. С. 121-139.
52. Захаров, В.П. Лекарственные вещества из растений и способы их производства / В.П. Захаров, Н.И. Либизов, Х.А. Асланов. Ташкент: ФАН, 1980.-С. 3-34.
53. Золотницкая, С.Я. Лекарственные ресурсы флоры Армении / С.Я.
54. Золотницкая. Т. 2 Ереван, 1965. - 669 с.
55. Ивашин, Д.С. Инструкция по сбору и сушке травы фиалки полевой / Д.С. Ивашин, С.Д. Иванова // Правила сбора и сушки лекарственных растений (Сборник инструкций). М.: Медицина, 1985. - С.270-272.
56. Измайлов, С.Ф. Азотный обмен в растениях / С.Ф. Измайлов. -М., 1986.-489 с.
57. Ильин, В.Б. Элементный химический состав растений / В.Б. Ильин. -Новосибирск: Наука, 1985. 129 с.
58. Инструктивно- методические указания / Под ред. А.К. Горяйнова. -М., 1987.-№3.-С. 3-12.
59. Исследование' микроэлементного состава травы фиалки и фиалки экстракта сухого / М.М. Смирнова, O.A. Блинова, Г.И. Олешко, Д.М. Мухамеджанова // Рациональные использование лекарств: Рос. науч.-практ. конф. Пермь, 2004. - С. 92.
60. Ищенко, В.И. Микроэлементы в витаминном лекарственном сырье и витаминных препаратах: Дисс.канд. фарм. наук / В.И. Ищенко. Витебск, 1966. - 156 с.
61. Йорданов, Д. Фитотерапия / Д. Йорданов, П. Николов, А. Бойчинов. София, 1970. - 349 с.
62. Кабата-Пендиас, А. Микроэлементы в почвах и растениях / А. Ка-бата-Пендиас, X. Пендиас. М., 1989. - 519 с.
63. Казаринова, Н.В. Лекарственные растения Сибири для лечения сердечно-сосудистых заболеваний / Н.В. Казаринова, М.Н. Ломоносова, В.М Триль. Новосибирск: Наука. Сибирское отделение, 1991.-240 с.
64. Казаринова, Н.В. Лекарственные растения в лечении разных форм туберкулеза (обзор русскоязычной литературы) / Н.В. Казаринова, К.Г. Ткаченко // Растит, ресурсы. 2000. - №1. - С. 92-127.
65. Каталог растений Донецкого ботанического сада / Л.Р. Азарх, В.В. Баканова, Р.И. Бурда и др. Киев: Наук, думка, 1988.-528 с.
66. К вопросу разработки показателей качества экстракта «Норма-фит» сухого / З.И. Урбанович, A.A. Сорокина, В.А. Ермакова и др. // Человек и лекарство: Тез. докл. VII Рос. нац. конгр. М. -2000.-С. 555.
67. Клобукова-Алисова, E.H. Дикорастущие полезные и вредные растения Башкирии / E.H. Клобукова-Алисова М. - Л., изд-во АН СССР, 1958.- 125 с.
68. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений / Л.К. Клышев, В.А. Бандю-кова, A.C. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.
69. Компанцева, Е.В. Идентификация и количественное определение флавоноидов в многокомпонентном лекарственном средстве кар-диотонического действия / Е.В. Компанцева, А.Ю. Айрапетова // Фармация. 2000. - № 1. - С. 40-41.
70. Комплексная переработка травы фиалки / Г.И. Олешко, O.A. Блинова, Д.М. Мухамеджанова, М.М. Смирнова // Человек и лекарство: IX Рос. нац. конгр. М. - 2002. - С. 666-667.
71. Кортиков, В.И. Секреты целебных трав: Популярная энциклопедия / В.И. Кортиков, A.B. Кортиков. Минск: Белмаркет, 1995.511 с.
72. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.К. Кочетков. M., 1970. - 631 с.
73. Крылова, И.Л. Выявленные запасы дикорастущих лекарственных растений, изучение и рациональное использование их для увеличения заготовок сырья / И.Л. Крылова, С.Д Кур // Растительные ресурсы дикорастущих лекарственных растений СССР. М., 1975. - С.28-36.
74. Кузник, Б.И. Иммуногенез, гемостаз и неспецифическая резистен-тость организма / Б.И. Кузник, Н.В. Васильев, Н.Н Цыбаков. М: Медицина. - 1989.- 112 с.
75. Кугач, В.В. Лекарственные формы флавоноидов (обзор) / В.В Ку-гач, Н.И. Никулыпина, В.И. Ищенко // Хим.-фармац. журн.-1988. -№ 8. С.1018-1025.
76. Купчак, Т.В. Количественное определение антоцианов в надземной части гибридной формы Zea mais / T.B. Купчак, Л.А. Николаева, Л.Л. Шимолина // Растит, ресурсы. 1995. - №3. - С. 106108.
77. Кучеров, Е.В. Полезные растения Южного Урала / Е.В. Кучеров, Г.К. Байков, И.Б. Гуфранова. М., Наука, 1978. - 228 с.
78. Ладыгина, Е.Я. Химический анализ лекарственных растений. (Учеб. пособие для фармац. вузов) / Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафро-нич, В.Э. Отряшенкова. -М., 1983. 359 с.
79. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Ладынина, P.C. Морозова. -Л.: Медицина, 1990. 304 с.
80. Лебединская, М.А. Методы микробиологической диагностики / М.А. Лебединская. М., 1978. - 35 с.
81. Левчук, А.П. Сердечные и мочегонные средства растительногопроисхождения / А.П. Левчук // Научн. Тр. хим.-фармац. ин-та. -М., 1959.- № 21. С.1-25.
82. Лекарственные растения / Н.И. Гринкевич, И.А. Баландина, В.А. Ермакова и др. -М.: Высш. шк., 1991. -215 с.
83. Лекарственные растения в акушерско-гинекологической практике. Свердловск, 1978. - 113 с.
84. Лекарственные растения в научной и народной медицине. Саратов, 1978.- 192 с.
85. Лекарственные растения в стоматологии / Под. ред. И.С. Чекман. -Кишинев, 1981,- 192 с.
86. Лекарственные растения: Растения-целители / Под. ред. А.Ф. Гаммерман. М, 1976. - 389 с.
87. Лесиовская, Е.Е. Фармакотерапия с основами фитотерапии: Учебное пособие / Е.Е. Лесиовская, Л.В. Пастушенков. М.: ГЭОТАР - МЕД, 2003. - 592 с.
88. Лобанова, О.Н. Фитотерапия аллергических дерматозов у детей / О.Н. Лобанова, Д.А. Ходов // Лекарственные и ядовитые растения и их значение в педиатрии. Л., 1986. - С. 74-44.
89. Макеенко, С.Г. Лечение травами / С.Г. Макеенко, Б.Д. Алексеев, А.Ф. Гаммерман. Л.: Лениздат, 1970.- 132 с.
90. Маркарян, A.A. Характеристика сухого экстракта, полученного из желудочно-кишечного сбора / A.A. Маркарян, И.А. Самылина // Человек и лекарство: Тез. докладов VII Рос. нац. конгр. М. -2000.-С. 615.
91. Мартынов, Е.Г. Полисахариды Berberiis vulgaris / Е.Г. Мартынов, Е.А. Строев, Д.Д. Песков // Химия природных соединений. -1984.-Вып. 1.-С. 103.
92. Марченко, Л.Г. Лекарственные растительные сборы / Л.Г. Марченко, Л.В. Пастушенков, Д.Н. Синев. СПб, 1991.- 135 с.
93. Махлаюк, В.П. Лекарственные растения в народной медицине / В .П. Махлаюк. Саратов, 1967.- 559 с.
94. Мацку, Я. Атлас лекарственных растений / Я. Мацку, И. Крейча. -Братислава, 1981.-461 с.
95. Машковский, М.Д. Лекаственные средства. Практ. пособие. В 2 т. Т. 2. / М.Д. Машковский. 14 изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2000. - 688 с.
96. Меньшикова, З.А. Лекарственные растения в каждом доме / З.А. Меньшикова, И.Б. Меньшикова, В.Б. Попова. М.: Адонис, 1993. - 225 с.
97. Методика бумажной хроматографии Сахаров, органических и аминокислот из растений. М.: Издат-во АН СССР, 1962. - 86 с.
98. Методические указания по химическому анализу сырья лекарственных растений / Под. ред. Олешко Г.И. Пермь, 1979. - 110 с.
99. Минаева, В.Г. Лекарственные растения Сибири / В.Г. Минаева. -Новосибирск, 1970. 272 с.
100. Минаева, В.Г. Флавоноиды в онтогенезе растений и их практическое использование / В.Г. Минаева. Новосибирск, 1978. - 253 с.
101. Мирович, Н.В. Исследования фенольных соединений душицы обыкновенной / Н.В. Мирович // Ресурсоведческое и фармакогно-стическое изучение лекарственной флоры СССР: Труды НИИФ. 1987. -Т.25 С.105.
102. Михайленко, Е.Г. Лекарственные растения в акушерстве и гинекологии / Е.Г. Михайленко, В.Е. Радзинский, К.А. Захаров. Киев: Здоровье, 1987. 191 с.
103. Мишарев, О.С. Об оценке прочности сращения краев раны / О.С. Мишарев, Ю.К. Абаев, Н.Р. Прокопчук // Вестник хирургии. -1984.-№ 11.-С. 28-83.
104. Мозгов, И.Е. Ветеринарная фармакология. М.; Л., 1948.- 616 с.
105. Моисеева, Г.Ф. Иммуностимулирующие полисахариды высших растений / Г.Ф. Моисеева, В.Г. Беликов // Фармация. 1992.- № 3. -С. 79-84.
106. Молчанов, Г.И. Интенсивная обработка лекарственного сырья / Г.И. Молчанов. М.: Медицина, 1981. - 208 с.
107. Муравьева, Д.А. Полисахариды некоторых высших и низших растений / Д.А. Муравьева, Д.А. Яковлева, И.А Горбачева // Актуальные проблемы создания новых лек. препаратов природного происхождения: Мат. IV Междунар. конф. СПб. - 2002. - С. 260261.
108. Муравьева, Д.А. Фармакогнозия / Д.А. Муравьева. М.: Медицина, 1991.-560 с.
109. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / Под ред. В.Л. Багировой, В.А. Северцева. СПб.: СпецЛит, 2001. - 223 с.
110. Николенко, Н.В. Получение экстракта из клубней топинамбура в электрическом поле постоянного тока / Н.В. Николенко // Процессы и оборудование экологических производств: Мат. 6 науч.-практич. конф стран СНГ. Волгоград: Политехник, 2002. - С.161.165.
111. Новые методы анализа аминокислот, пептидов и белков: Пер. с англ. / Под. ред. Ю.А. Овчинникова. М., 1974. - 85 с.
112. Ноздрюхина, JI.P. Нарушение микроэлементного обмена и пути его коррекции / JI.P. Ноздрюхина, Н.И. Гринкевич. М.: Наука, 1980.-280 с.
113. Носаль, H.A. Лекарственные растения в народной медицине / H.A. Носаль, И.М. Носаль. М.: Внешиберика, 1991.- 256 с.
114. Носов, A.M. Лекарственные растения / A.M. Носов. М.: ЭКС-МО-Пресс, 2001. - 350 с.
115. Нургалиева, Г.М. Антоцианы ревеня татарского / Г.М. Нургалие-ва, Т.К. Чумбалов // Фенольные соединения и их биологические функции. М.: Наука, 1968. - С. 93-95.
116. Об утверждении инструкции по организации хранения в аптечных учреждениях различных групп лекарственных средств и изделий медицинского назначения: Приказ МЗ РФ от 13.11.98 № 377.-20 с.
117. О введении в действие санитарных правил. Сан.ПиН2.3.2.1078-01, 2001.-С. 87-88.
118. Оводов, Ю.С. Полисахариды цветковых растений, структура и физиологическая активность / Ю.С. Оводов // Биоорган, химия. -1998.-Т. 24, №7.- С. 45-48.
119. ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. Введ. 01.11.01.- Б.м., 2000. 48 с.
120. Палов, М. Энциклопедия лекарственных растений: Энциклопедия / М. Палов.- М.: Мир.-1998. 457 с.
121. Паламарчук, A.C. Запасы лекарственных растений в некоторых типах сосновых лесов Гомельской области / A.C. Паламарчук, В.Е. Бондаренко, П.С. Хилькевич // Растит, ресурсы 1975. - № 1. -С.15-23.
122. Панчев, С.С. Антоцианы в плодах и овощах / С.С. Панчев. М.: Пищевая промышленность, 1980. - 304 с.
123. Пастушенков, JI.B. Растения антигипоксанты (Фитотерапия) / JI.B. Пастушенков, Лесиовская Е.Е. - СПб., 1991.- 96 с.
124. Пастушенков, Л.В. Лекарственные растения: использование в народной медицине и быту / Л.В. Пастушенков, А.Л. Пастушенков, В.Л. Пастушенков. Л.: Лениздат, 1990. - С. 272-273.
125. Передрий, В.А. Рецептурный справочник фитотерапевта / В.А. Передрий. Киев, 1995. - 531 с.
126. Петров, Н.В. Определение микроэлементов и примесей тяжелых металлов в лекарственных средствах и сырье методом пламенной атомно-абсорбционной спектроскопии / Н.В. Петров // Фармация. 1993.-№5.-С. 30-33.
127. Петухова, О.В. Фармакогностическое изучение листьев земляники лесной и садовой региона Урала: Автореф. дис.канд. фармац. наук / О.В. Петухова. Пермь,' 2003. - 24 с.
128. Печерская, Л.Г. Идентификация и оценка качества лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов методом круговой хроматографии в сочетании с микро диагностикой: Автореф. дис.канд. фармац. наук / Л.Г. Печерская. Пермь, 1997.-18 с.
129. По дымов, А.И. Лекарственные растения Марийской АССР / А.И. Подымов, Ю.Д. Суслов. Йошкар-Ола, 1974. - 294 с.
130. Поиск новых фитопрепаратов на основе растений, применяемых в народной медицине / H.H. Гужва, Д.А. Муравьева, Бахаж Ануар и др. // Человек и лекарство: Тез. докл. VI Рос. нац. конгр. М. -1999.-С. 401.
131. Поиск эффективных антимикробных и противовоспалительных средств растительного происхождения / Ю.Г. Пшуков, Л.П. Лежнева, A.M. Домунян и др.// Человек и лекарство: Тез. докл. VII Рос. нац. конгр. М. - 2000. - С. 538.
132. Покровский, М.В. Противовоспалительная активность растений рода фиалка / М.В. Покровский, P.A. Бубенчиков, И.Л. Дроздова // Человек и его здоровье: Сб. науч. работ. Курск, 2000. - Вып.З.-С.333-334.
133. Покровский, М.В. Влияние растений рода фиалка на проницаемость капилляров кожи при воспалении / М.В. Покровский, P.A. Бубенчиков, И.Л. Дроздова. // Мат. науч. конф., посвящ. 35-летию фармац. факультета КГМУ. Курск, 2001. - С. 261-262.
134. Пономарев, В.Д. Экстрагирование лекарственного растительного сырья / В.Д. Пономарев. М.: Медицина, 1976. - 202 с.
135. Попов, А.П. Лесные целебные растения / А.П. Попов. М., 1973.192 с.
136. Прокопенко, А.П. Новые технологические приемы в производстве препаратов растительного происхождения. Исследования по изысканию лекарственных средств растительного происхождения / А.П. Прокопенко // Тез. докл. Всесоюз. науч. конф. JL, 1981. - С. 34.
137. Проченко, Г.Е. Правильное питание и фитотерапия в лечении заболеваний желудочно-кишечного тракта / Г.Е. Проченко // Новая аптека. Аптека и рынок. 2001. - № 8. - С. 61-67.
138. Пясяцкене, A.A. Водорастворимые полисахариды растений, их локализация, биологическое и хозяйственное назначение / A.A. Пясяцкене. Вильнюс, 1994. - 74 с.
139. Пясяцкене, A.A. Образование слизи у видов рода Viola L., произрастающих в Литве / A.A. Пясяцкене, О.В. Яковлева, Я.Л. Вайчу-нене //Растит, ресурсы. 1991. - № 1 - С. 10-21.
140. Рабинович, М.И. Лекарственные растения в ветеринарии / М.И. Рабинович. -М., 1981.-224 с.
141. Рабинович, A.M. Лекарственные растения на приусадебном участке / A.M. Рабинович. М.: Росагропромиздат, 1989.- 207 с.
142. Разработка лекарственных средств на основе сухих экстрактов астрагала эспарцетного и земляники / Человек и лекарство: Тез. докл VI Рос. нац. конгр. M. - 1999. - С. 401.
143. Распространение антиоксидантов среди цветковых растений Приморского края / О.Б. Максимова, Н.Г. Горовой, М.В. Криво-щекова и др.// Растит, ресурсы. 1984. - № 4. - С. 426-431.
144. Растения в медицине. Саратов, 1988. - 275 с.
145. Растительные лекарственные средства / Под редакцией Максюти-ной Н.П. Киев: Здоровье, 1975. - 397 с.
146. Растительные ресурсы СССР. JL: Наука, 1986, т. 2. - С. 20-29.
147. Растительные ресурсы России и сопредельных государств: Ч.1.-Сем. Lycopodiaceae. Ephedraceae. - 4.2. -Дополнения к 1-7-му томам. - СПб: Мир и семья, 1996. - С. 157-158.
148. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. — М., 2000. 398 с.
149. Румянцева, Ж.Н. Поиски гепатопротекторов среди препаратов растительного происхождения / Ж.Н. Румянцева, Я.С. Гудивок // Растит, ресурсы. 1993. - № 1. - С. 88-97.
150. Салямон, JI.C. Фармакология противовоспалительных средств / JI.C. Салямон // Фармакология патологических процессов. — М., 1951.-С. 15-69.
151. Сафронова, М.Ю. Спектрофотометрический метод определения содержания полисахаридов в слоевищах Cetraria islandica (L.) ACH / М.Ю. Сафронова, Е.И. Саканян, Е.Е. Лесиовская // Растит.ресурсы. 1994. - № 2. - С. 101-105.
152. Сафонов, В.В. Фармакологическое изучение экстракта караганы колючей //В.В. Сафонов, Е.Е. Лесиовская // Человек и лекарство: Тез. докл. VI Рос. нац. конгр. М. - 1999. - С. 467.
153. Сенчило, В.И. Биохимические различия яровой и озимой форм Viola arvensis Murr. / В.И. Сенчило // Тез. докл. IV съезда фармацевтов, фармакологов и токсикологов БССР. Минск, 1983.-С.107-108.
154. Смирнова, М.М. Выбор оптимальной технологии получения экстракта фиалки сухого / М.М. Смирнова, O.A. Блинова // Науки о человеке: IV Международ, конгр. молодых ученых. Томск, 2003. -С. 221.
155. Смирнова, М.М. Разработка оптимальной технологии экстракционных препаратов из травы фиалки / М.М. Смирнова, O.A. Блинова // Молодежная наука Прикамья 2002: Обл. науч. конф. молодых ученых, аспирантов и студентов. - Пермь, 2002. - С. 148.
156. Справочник Видаль. Лекарственные препараты в России: Справочник Видаль. М.: АстраФармСервис, 1997. - 1504 с.
157. Соколов, С .Я. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия) / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев.-2-е изд. М.: Недра, 1989.512 с.
158. Сокольская, Т.А. Методы стандартизации сухих экстрактов / Т.А. Сокольская, С.А. Пинеев, В.Н. Давыдова // Новая аптека. Аптека и рынок. 2002. - С. 64-66.
159. Справочник по клиническим и лабораторным методам исследования / Под ред. Е. А. Кост. М.: Медицина, 1975. - 359 с.
160. Справочник по лекарственным растениям / A.M. Задорожный, А.Г. Кошкин, С.Я. Соколов и др. М.: Лесная промышленность, 1988.-415 с.
161. Стандартизация фиалки экстракта сухого / O.A. Блинова, М.М. Смирнова, Г.И. Олешко, Д.М. Мухамеджанова // Человек и лекарство: XI Рос. нац. конгр. Москва, 2004. - С. 765.
162. Старцева, H.A. К оценке качества травы фиалки / H.A. Старцева, Л.Г. Печерская // Актуальные вопросы фармацевтической науки и практики: Тез. докл. науч.-практ. конф., посвящ. 25-летию фар-мац. факультета Курского мед. ин-та. Курск, 1991.-С. 216.
163. Старцева, H.A. Фармакогностическое изучение фиалки трехцветной и фиалки полевой / H.A. Старцева, Л.Г. Печерская // Тр. Томского мед. ин-та. Томск, 1996. - С. 255 - 256.
164. Сурина, Л.Н. Целебные растения Тюменского края / Л.Н. Сурина, М.Н. Сурина, И.Ф. Спиридонова. Свердловск, 1974. - 76 с.
165. Сухие экстракты из растений основа создания современных лекарственных форм / С.М. Николаев, Т.А. Асеева, И.Т. Николаева и др. // Фармация в XXI веке: инновации и традиции: Тез. докл. науч. конф. - СПб.: СПФА, 1999. С. 142.
166. Технология и стандартизация лекарств / Под. ред. В.П. Георгиевского, Ф.А. Конева. Харьков: Ригер, 1996. - 428 с.
167. Тодорова, В.И. Использование листа подорожника и травы фиалки трехцветной и полевой в фитотерапии пульмонологических больных / В.И. Тодорова, Е.И. Гриценко // Мат. XVIII научн-практ. конф. молодых ученых и специалистов КГИУВ. Киев, 1990.-С. 78-79.
168. Трава фиалки / Л.Г. Печерская, Т.И. Жебелева // Государственнаяфармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР.- 11-е изд., доп. М.: Медицина, 1989.-С. 340-341.
169. Трава фиалки трехцветной и фиалки полевой. ГОСТ 16989-71 // Лекарственное растительное сырье. М.: Изд-во стандартов, 1980.-С. 103-109.
170. Турова, А.Д. Лекарственные растения СССР и их применение / А.Д. Турова. М., 1974. - 424 с.
171. Ужегов, Г.Н. Лечение органов дыхания / Г.Н. Ужегов. М., 1999. -319 с.
172. Уткин, Л.А. Дикорастущие лекарственные растения Урала / Л.А. Уткин. Челябинск, 1948. - 108 с.
173. Уткин, Л.А. Лекарственные растения Челябинской области / Л.А. Уткин, Н.И. Шарапов. Челябинск, 1951. - 127 с.
174. Фшь, У.Г. Виявлення флавоновых сполук у лшарськш сировиш методом nanepoBoi хроматограф^ / У.Г. Фшь, Л.Э. Мухтарова, Т.У. Муцет // Фармац. журн. 1963. - № 2. - С. 20-27.
175. Флавоноиды листьев малины и ежевики и их антиоксидантная активность // B.C. Никитина, Г.В. Шендель, А.Я. Герчиков, Н.Б. Ефименко // Хим. фармац. журнал. 2000. - № 11. - С. 25-27.
176. Флора СССР / Под. ред. В.П. Комарова. М.-Л.: изд-во АН СССР, 1949. Т. 15.-С. 350-479.
177. Химические элементы и аминокислоты в жизни растений: Учеб. пособие для фармац. вузов / Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафронич; под. ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. М.: Высш. шк., 1983. -176.С.
178. Хроматография в тонких слоях. / Под. ред. Э.Шталя. М.: Мир, 1965.-493 с.
179. Хроматография на бумаге / Под ред. И.М. Хайса, К. Мацека. М.,1962.-851 с.
180. Хроматография: Практ. прилож. метода: В 2-х ч. / Под.ред. Э. Хефмана. М.: Мир, 1986. - 422 с.
181. Хушбактова, З.А. Влияние флавоноидов на течение гиперлипиде-мии и атеросклероза / З.А. Хушбактова, В.Н. Сыров, Э.Х. Батиров // Хим.-фармац. журн. 2001. - № 4. - С. 53-67.
182. Чащина, С.В. Фармакологическая эффективность мазей с новым местным анестетиком анилокаином: Автореф. дис.канд. биол. наук / С.В. Чащина. Томск, 1991. - 22 с.
183. Черепанов, С.К. Сосудистые растения России и сопредельных государств / С.К. Черепанов. СПб.: Мир и семья, 1995. - 915 с.
184. Чуролинов, П. Фитотерапия в дерматологии и косметике / П. Чу-ролинов. София, 1979. - 147 с.
185. Шасс, Е.Ю. Фитотерапия / Е.Ю. Шасс. М., 1952. - 219 с.
186. Шварда, И.И. Антиоксидантная активность видов флоры Алтая / И.И. Шварда // Растит, ресурсы. 1998. - № 2. - С.
187. Шретер, Г.К. Лекарственные растения и растительное сырье, включенные в отечественные фармакопеи / Г.К. Шретер. М., 1972.-119 с.
188. Юзепчук, С.В. Фиалковые Violaceae Juss. / С.В. Юзепчук. Флора СССР. - М.-Л.: изд-во АН СССР., 1949. - Т. 15. - С.452-469.
189. Ященко, В.К. Исследования в области технологии фармацевтических препаратов, содержащих макро- и микроэлементы: Автореф. дис. докт. фармац. наук. Львов, 1975. - 40 с.
190. Antioxidant properties of flavonoids: reduction potentials and election transfer reactions of flavonoid radical / S.V. Jovanovic, S. Steenken, M.G. Simic et al // Flavonoids in health and diseases. 1999. - Chapter 5.-P. 137-161.
191. Chopra, R.N. Glossary of Indian medicinal plants / R.N. Chopra, S.L.
192. Nayar, I.C. Chopra. New Delhi, 1956. - 330 p.
193. Cu, J.Q. Volatile components of violet leaves / J.Q.Cu, F. Perineau, A. Gaset//Phytochemistry. 1992. - Vol.31, № 2. - P.571-573.
194. Franz, G. Untersuchurgen über die Schlempolyssic charile von Tussi-lago farfara L., Symphytum officinalis L., Borago officinalis L. Und Viola tricolor L. / G. Franz // Planta med. 1969. - № 3. - Z. 217-220.
195. Geissman, T.A. Chemistry of flavonoid compaunds / T.A. Geissman. -Oxford, 1962.-399 p.
196. Harnander-Richter, H.Y. Nouere Vorteilungen zur Theorie der Wundheilung H.Y./ Hemander-Richter, U. Struck // Hippokrates.-1971. Bd. 42. - № 3. - S. 332-345.
197. Hartwell, J.L. Plants used against cancer/ J.L. Hartwell // Lloydia.1968.-Vol.31, №2.-P. 71-170
198. Hartwell, J.L. Plants used against cancer / J.L. Hartwell // Lloydia.1969. Vol. 32, № 1. - P. 79-107.
199. Hartwell J.L. Plants used against cancer / J.L. Hartwell // Lloydia.-1971. Vol. 34, № 2. - P. 204, 255.
200. Hayashi, K. Notes on violet flower color in pansy Viola tricolor L. / K. Hayashi, K. Takeda // Proc. Jap. Acad. 1962. - Vol. 38, № 4.- P. 161-165.
201. Homoopatisches Arzneibuch. -Berlin, 1950. 465 s.
202. Hoppe, H. Drogenkunde / Hoppe H.- Berlin; New Jork, 1975. Bd.l.-1311 s.
203. Jnsson, O. Phylloquinone (vitamin Ki) levels in leaves of plant species differing in susceptibility to 2,4-dichlrophenoxyacetici / O. Jnsson // Physiol. Plant. 1974, Vol. 31, fask. 4. - P. 323-325.
204. Karrer, P. Uber Volaxanthin, Auroxanthin and andere Pigmente der Bluten von Viola tricolor / P. Karrer, J. Rutschmann // Helv. Chim. Acta. 1944. - Vol. 27, № 7. - P. 1684-1690.
205. Klan, Z. Drogy vsech lecopisue v prehledu / Z. Klan. Praha, 1948.78 s.
206. Kolosne Pethes, E.A. Violae arvensis herba rutin-es osszflavonoid -tartalmanakvmeghatarozalasa es ezek valtozasa a vegetacios idoszakban / E.A. Kolosne Pethes // Acta pharm. Hung., 1965. Vol. 35, № 5.- P. 225-230.
207. Komorowski, T Kwasi fenolowe w krajowych gatunkach Viola tricolor i Viola arvensis Murr. / T Komorowski, T Mosiniak, Z. Kryszszuk et al. // Herba pol. 1983. - T.29, № 11. - S. 5-11.
208. Kuhn, R. Viola-xanthin, das Xantophyll des gelben Stiefmutterchens (Viola tricolor)/ R. Kuhn, A. Winterstein //Ber. Dtsch. ehem. Ges.-1951.-Jd.64.- №1.-S.326-332.
209. Matlavska, I. Antioxidants in foods and phytomedicines /1. Matlavska, E. Ignatowicz, M. Wojcinska // Актуальные проблемы создания новых лек. препаратов природного происхождения: Тез. докл. IV Междунар. конф. СПб. - 2002. - С. 283-284.
210. Molnar P. Naturally occuring di-cis-violaxanthins from Viola tricolor / Molnar P., Szabolcs J., Radics L. // Phytochemistry. 1986. - Vol.25, № l.-P. 195-199.
211. Molnar, P. Occurrence of 15-cis-violaxanthin in Viola tricolor / P. Molnar, J. Szabolcs // Phytochemistry. 1980. - Vol.19, № 4. . p. 623627.
212. Muszynski, J. Liololecznictwo I leci roslinne (Fitoterapia) / J. Muszynski Warszawa, 1958. - 140 p.
213. Peacock, E. Van Winkle W. / E. Peacock // Wound Repair. Philadelphia, Sannders.-l 976.-699 p.
214. Phytosynthese de rutoside marque C14/ J. Michaud, J. Laparra, M. Harinand // Bull. Soc. Pharmac. Bordeaux. 1969, 108.- № 3. - P. 133-142.
215. Sandblom, Ph. Determination of the tensile strength of healing wound as a clinical test / Ph. Sandblom, P. Peterson, A. Muren // Acta Chir. Scand. -1953. V. 105. - P. 252.
216. Sinner, V. The chromatografic behvior of polysaharides / V. Sinner, J.J. Puis // J. Chromatogr. 1978. - Vol. 156, № 1. - P. 194-204.
217. Szabolcs, I. Violeoxanthin and taraoxathin (Prelim commun). / I. Szabolcs, Y. Toth // Acta chim. Acad. Scient hung. 1970.- № 2. - P. 229-239.
218. Tabor E. Plant poisons in Shakespeare / E. Tabor //Econ. Bot.- 1970.-Vol. 24, № l.-P. 81-84.
219. Takeda, K. Crystallization and some properties of the genuine antho-cyanin inherent to the deep violet color of pansy / K. Takeda, K. Haya-shi // Proc. Jap. Acad. 1965. - Vol. 41, № 6. - P. 449-454.
220. ToMijiiH, C.A. JliicapcbKi pocjihhh b TepaneBTHHHni npaicnmi / C.A. ToMijiiH. KniB, 1959. - 228 c.
221. Vinczene-Vermes, M. A rutin isolasa a Viola tricolor L. / M. Vinczene-Vermes, G. Marczal // Herbajabol.-Gyogyszereszet. 1972.-Vol. 16, №2.-P. 58-60.
222. Vinzene-Vermes, M. A rutin isolalasa a Viola tricolor L. Herbajabol. / M. Vinzene-Vermes, G. Marczal // Gyohyszeresszet, 1972, Vol. 16, №2.-P. 58-60.
223. Vinzene-Vermes, M. Occurrence of rutin in some Viole shecies. / M. Vinzene-Vermes, G. Marczal // Acta agron. Acad. Sei. hung. 1974, T. 23.- fasc. 3-4. - P. 448-453.
224. Wagner, H. Die Flavon 7-glikoside von Viola tricolor L./ H. Wagner, L. Rosprim, P. Dull // Z. Naturforsch. - 1972. - № 8. - P. 954-958.
225. Wollenweber, E. Flavones and flavonols / E. Wollenweber // The Flavonoids: Advanses in Research. London-New York, 1982. - P. 189260.
226. Кроме того, автор выражает признательность сотрудникам кафедры фармакогнозии, фармацевтической технологии и РИЦ «Фарматест» за содействие в ходе выполнения работы, ценные советы и замечания.