Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фенотропил и его производные как психоиммуномодуляторы в условиях цитостатического и стрессогенного воздействия

На правах рукописи

СЕРЕЖНИКОВА ТАТЬЯНА КОНСТАНТИНОВНА

ФЕНОТРОПИЛ И ЕГО ПРОИЗВОДНЫЕ КАК ПСИХОИММУНОМОДУЛЯТОРЫ В УСЛОВИЯХ ЦИТОСТАТИЧЕСКОГО И СТРЕССОГЕННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

1 5 МАР 2012

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Волгоград-2012

005014494

Работа выполнена в ГБОУ ВПО «Астраханская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития РФ и ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Научный руководитель: кандидат медицинских наук, доцент

Самотруева Марина Александровна

Официальные оппоненты: Заслуженный деятель наук РФ,

доктор медицинских наук, профессор Резников Константин Михайлович доктор медицинских наук, профессор Косолапое Вадим Анатольевич

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Ростовский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится « ^ » 2012 г. в «/¿>% ч. на заседании

Диссертационного Совета Д 208f.008.02 при ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов, 1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития РФ (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов,

Автореферат разослан «_»___2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

А.Р. Бабаева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Третье тысячелетие существования человечества характеризуется все более усложняющимися социально-экономическими условиями, ускорением темпа жизни, увеличением объема информации, постоянным психоэмоциональным напряжением и пр. Воздействие этого сложного комплекса негативных факторов на организм человека не может не отразиться на состоянии здоровья и часто приводит к стрессу. При увеличении длительности и интенсивности воздействия стрессоров адаптивный эффект стресс-реакции трансформируется в общее неспецифическое звено патогенеза многих заболеваний, которое дезорганизует работу органов и систем, в том числе нервной и иммунной, истощая антистрессовые механизмы защиты организма (Калуев A.B. и др., 2004; Glaser R., 2005; Dhabhar F.S., 2009; McEwen В.S. et al., 2010; Liu R. T. et al., 2011).

В настоящее время доказано, что в основе развития стресс-реакции и ряда патологических процессов лежат нарушения взаимодействия между нервной и иммунной системами, в регуляции которых важную роль играет гамма-аминомасляная кислота (ГАМК) (Boranic M. et al., 2008; Adelman J.S. et al., 2010; Расе T.W. et al., 2010). ГАМК обеспечивает защиту нервных клеток от чрезмерного истощения, ограничивая перевозбуждение стресс-активирующих систем организма (Калуев A.B. и др., 2004; Cullinan W.E. et al., 2008; Hasler G. et al., 2010; Delgado A. et al., 2011). Аналоги ГАМК (фенотропил, фенибут, пирацетам, пикамилон и др.) способны поддерживать энергетические и пластические процессы в ЦНС, сохраняя в условиях стресса адекватный паттерн внимания, когнитивных функций мозга. ГАМК-ергические средства повышают «активную» резистентность к стрессорам, что позволяет рассматривать их не только в качестве блокаторов стресс-реакции, но и как стресспротекторы (Воронина Т.А. и др. 1998; Аведисова A.C. и др., 2000; Ахапкина В.И. и др., 2004; Вахов В.П. и др., 2004; Малюгин В.Н. и др., 2004; Португалов С.Н. и др., 2004). Кроме того, доказано участие ГАМК и ее производных в процессах иммуномодуляции, в частности, установлено регулирующее влияние на показатели специфического и неспецифического звеньев иммунитета (Alam S. et al., 2006; Reyes-Garcia M.G. et al., 2007; Bjurstöm H., 2008; Wang Y. et al., 2009; Roopa Bhat et al., 2010). Принимая во внимание важную и многогранную роль ГАМК в регуляции многих физиологических функций организма, становится очевидной необходимость поиска лекарственных средств среди её производных, применение которых позволило бы ограничить не только чрезмерную стресс-реакцию, но и вызываемые ее негативным действием последствия со стороны функционирования различных органов и систем, в том числе иммунной и нервной.

Большой интерес в этой связи представляет фенотропил, обладающий широким спектром фармакологической активности, проявляющий психостимулирующее, ноотропное, нейропротекторное, антигипоксическое, анксиолити-ческое, антидепрессивное, проти восудорожное, вегетостабилизирующее и др.

виды действия (Ахапкина В.И. и др., 2004; Белоусов Ю.Б. и др., 2005). Являясь оригинальным отечественным препаратом, он может служить основой для создания новых химических соединений, исследование эффективности которых при различных патологических процессах представляет несомненную актуальность.

Цель исследования: оценить психоиммуномодулирующую активность фенотропила и его производных в условиях цитостатического и стрессогенно-го воздействия.

Задачи исследования.

1. Провести в ряду новых производных фенотропила скрининг веществ, обладающих выраженными психоиммуномодулирующими свойствами в условиях цитостатического воздействия. Выбрать наиболее активное соединение.

2. Изучить особенности иммунореактивности и психоэмоционального состояния у животных на различных моделях экспериментального стресса (острый иммобилизационно-болевой, хронический информационно-физический, хронический информационный, а также хронический стресс, вызванный принудительным плаванием).

3. Изучить психоиммуномодулирующее действие фенотропила и его наиболее активного производного Fia различных моделях экспериментального стресса.

4. Изучить особенности стресс-реакции в условиях хронического информационно-физического воздействия, а также провести сравнительную оценку психоиммуномодулирующих свойств фенотропила и его наиболее активного производного в половом аспекте.

5. Изучить возможные механизмы психоиммуномодулирующего действия фенотропила и его наиболее активного производного.

Научная новизна исследования. Впервые было выявлено, что:

- фенотропил и его производные (РГПУ-138, РГПУ-154, РГПУ-155, РГПУ-216) проявляют психоиммуномодулирующую активность в условиях цикло-фосфамидной (ЦФА) иммунодепрессии. Наиболее активным веществом по результатам скрининга является соединение РГПУ-138;

- фенотропил и РГПУ-138 обладают психоиммуномодулирующей активностью в условиях воздействия различных видов экспериментального стресса (острый иммобилизационно-болевой, хронический информационно-физический, хронический информационный; а также хронический стресс, вызванный принудительным плаванием);

- половая принадлежность определяет особенности иммунного и психоэмоционального реагирования, а также направленность фармакологической активности фенотропила и РГПУ-138 у животных, подвергшихся хроническому информационно-физическому стрессу;

- фенотропил и РГПУ-138 устраняют изменения перекисного окисления ли-пидов и активности каталазы в иммунокомпетентных органах, гипоталамиче-

ской области головного мозга в условиях воздействия различных видов экспериментального стресса;

- одним из механизмов психоиммуномодулирующего действия фенотропила и РГПУ-138 является влияние на гипоталамическую область головного мозга, а также способность восстанавливать уровень сывороточных ИЛ-1Р и ИЛ-4;

- иммунотропный эффект фенотропила на Т- зависимое звено иммуногенеза реализуется, вероятно, через ГАМКА-бензодиазепиновый ионофорный комплекс, на В-зависимые иммунные реакции - через ГАМКв-рецепторы.

Научно-практическая значимость работы.

Тема диссертационного исследования является составной частью плана совместной научно-исследовательской работы Астраханской государственной медицинской академии и Волгоградского государственного медицинского университета.

Результаты, полученные при изучении иммуномодулируюшей активности фенотропила и его новых производных указывают на перспективность дальнейшего поиска веществ с иммунотропными свойствами в ряду производных нейроактивных аминокислот. Комплексная оценка психо- и иммунотропных свойств фенотропила и его производных в условиях цитостатического воздействия позволяет выделить вещество под лабораторным шифром РГПУ-138, обладающее выраженным психоиммуномодулирующим действием. Результаты изучения активности РГПУ-138 на фоне воздействия различных стрессо-генных факторов демонстрируют перспективность создания на его основе эффективного средства коррекции стресс-индуцированных нейроиммунных нарушений. Доказанное в работе психоиммуномодулирующее действие фенотропила позволяет позиционировать препарат как психоиммуномодулятор, применение которого будет способствовать оптимизации фармакотерапии патологических состояний, развивающихся на фоне стресса.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Фенотропил и его новые производные РГПУ-138, РГПУ-154, РГПУ-155, РГПУ-216 проявляют выраженное психоиммуномодулирующее действие в условиях ЦФА-иммунодепрессии. Наиболее активными являются фенотропил и его аналог под лабораторным шифром РГПУ-138.

2. Степень и направленность нарушений иммунитета и психоэмоционального состояния животных зависят от вида, продолжительности стрессогенного воздействия, а также от половой принадлежности организма и проявляются как активацией, так и угнетением со стороны нервной и иммунной систем.

3. Психоиммуномодулирующая активность фенотропила и РГПУ-138 определяется видом, продолжительностью стресса, половой принадлежностью организма.

4. Психоиммуномодулирующее действие фенотропила и РГПУ-138 определяется, вероятно, влиянием на гипоталамическую область головного мозга, а также способностью восстанавливать уровень сывороточных ИЛ-1 р и ИЛ-4.

5. Иммунотропный эффект феногропила обусловлен, вероятно, влиянием на ГАМКА-бензодиазепиновые и ГАМКв-рецепторы иммунокомпетентных органов и эффекторных иммунных клеток.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на конференциях: III международная медицинская научная конференция молодых ученых и студентов (Архангельск, 2010); «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2010); 6-я Российская конференция «Нейроиммуно-патология» (Москва, 2010); XXI Съезд Физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва-Калуга, 2010); Международная научно-практическая конференция «Физиологические механизмы адаптации человека» (Тюмень, 2010); III общероссийская научная конференция «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Сочи, 2010); Международная научно-практическая конференция «Фундаментальные и прикладные проблемы стресса» (Витебск, 2010). По материалам диссертации опубликовано 16 работ, из них 6 - в журналах, рецензируемых ВАК; получен патент РФ на изобретение №2432949 от 10.11.2011.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения и обсуждения результатов собственных исследований, выводов. Список литературы включает 330 источников, в том числе 159 иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование выполнено на 350 мышах линии СВА 3-4 мес. возраста обоего пола и 530 крысах линии Wistar 5-7 мес. возраста обоего пола. Животные каждой серии эксперимента были синхронизированы по условиям содержания и питания, соответствующим правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТЗ 51000.3-96 и 51000.496). Структура экспериментальной работы представлена в таблице 1.

Иммунореактивность животных изучали посредством постановки реакций гиперчувствительности замедленного типа (РГЗТ) с определением индекса реакции (ИР) и прямой гемагглютинации (РПГА) с определением титра антител; а также латексного теста по оценке фагоцитарной активности нейтрофи-лов периферической крови (Хаитов P.M., 2005). При постановке РГЗТ и РПГА животных иммунизировали эритроцитами барана (ЭБ). Кроме того, определяли массу и клеточность иммунокомпетентных органов (тимус, селезенка), общее количество лейкоцитов в крови, лейкоцитарную формулу (мазки окрашивали по Романовскому-Гимзе, изучали под масляной иммерсией). Уровень плазменных цитокинов (ИЛ-Iß и ИЛ-4) определяли твердофазным иммуно-ферментным методом «сэндвича» с использованием наборов фирмы «Bender Medsystems» (Австрия).

В гомогенате тканей внутренних органов (тимус, селезенка, гипоталамус) определяли исходный уровень малонового диальдегида (МДА), скорость спонтанного и аскорбатзависимого окисления липидов (Стальная И.Д., 1977; Гончаренко М.С., 1985), активность каталазы (Королюк М.А. и др., 1988).

Поведение животных изучали в тестах: «Открытое поле», «Приподнятый крестообразный лабиринт», «Неизбегаемое плавание» (Порсолт), «Суок-тест» (CT) (Воронина Т.А. и др., 1982, 2000; Калуев A.B., 2005; Porsolt R.D., 1978-PellowS. et al., 1985).

Таблица 1. Этапы диссертационного исследования

Модели экспериментальной __патологии

Изучаемые показатели

Вещества

ЦФА-иммунодепрессия

I. Скрининговое изучение иммунотропной и психотропной активности фенотропила и его новых производных

Клсточпзе и гуморальное звено иммунного

1.

ответа в РГЗТ и РПГА соответственно ' Пролифсративные процессы в иммунокомпетентных органах с определением массы, а также количества тимоцитов и спленоцитов 3 Поведение животных в СТ

фенотропил, РГИУ-87, РГПУ-138, РГПГУ-140, РГПУ-154, РПТУ-155, РГПУ-156, РГПУ-158, РГПУ-206, РГПУ-207, РГПУ-216

ОИБС

2. Изучение иммуномодулирующего действия фенотропила и РГПУ-Ш на различных моделях стресса

ХИС

ХСП11

ХИФС

1. Клеточное и гуморальное звено иммунного ответа в РГЗТ и РПГА соответственно

2. Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови в латексном тесте

3. Общее количество и популяции лейкоцитов в лейкоцитарной формуле

4. Интенсивность ПОЛ а активность каталазы в иммунокомпетентных органах (тимус и селезенка)

фенотропил РГПУ- 138

4. Изучение психомодулирукщего действия фенотропила и РГПУ-138 на различных моделях стресса

ОИБС

ХИС

ХСПП

ХИФС

1.CT

2. «Порсолг»

3. «Открытое поле»

4. «Приподщггый крестообразный лабиринт»

фенотропил РГПУ-138

ХИФС

5. Изучение возможных механизмов психоиммунамодулирующего действия производных ГАМК

ОИБС

ХИС

ХСПП

ОИБС

Морфометрическое исследование гилоталамиче-ской области головного мозга животных

Интенсивность ПОЛ и активность каталазы гипоталамической области головного мозга

Определение уровня цитокинов (ИЛ-1 ß и ИЛ-4) в сыворотке крови

Нейрохимический анализ иммунотропного действия: взаимодействие с антагонистами рецепторов основных нейромедиаторов ЦНС in vivo (РГЗТ, РПГА, масса и клеточность иммунокомпетентных органов')

фенотропил

фенотропил РГПУ-138

фенотропил РГПУ-138

фенотропил РГПУ-138

фенотропил РГПУ-138

фенотропил

В работе использовались следующие модели экспериментальной патологии: ЦФА-иммунодепрессия (Аркадьев В.Г. и др., 2003); хронический информационный стресс (формирование сложного пищедобывательного поведения в многоальтернативном лабиринте) (Никольская К.А., 2005); хронический стресс, вызванный принудительным плаванием (плавание с грузом 10 % от массы тела, время «до предела», t воды + 30°С) (Усик C.B. и др., 1981; в ав-

7

торской модификации); хронический информационно-физический стресс (сочетание информационного воздействия и нагрузки, вызванной принудительным плаванием); острый иммобилизационно-болевой стресс (сочетание иммобилизации в тесных пластиковых пеналах и неизбегаемой электростимуляции лап крыс) (Коломейцева И.А., 1988; в авторской модификации). Продолжительность стрессирования при хроническом воздействии составила 20 дней, при остром - 3 дня.

Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакетов программ: Microsoft Office Excel 2007, BIOSTAT 2008 Professional 5.1.3.1. Характер полученных результатов позволил использовать параметрический метод с определением t-критерия Стьюдента с поправкой Бон-феррони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений.

СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Скринииговое изучение иммунотропиой и психотропной активности фенотропила и его новых производных. Первый этап исследования был посвящен отбору наиболее перспективных веществ в ряду фенотропила и его еювых производных с учетом выраженности иммунотропных свойств. Изуча-ги активность следующих аналогов ГАМК: фенотропила (25 мг/кг), РГПУ-87 (25 мг/кг), РГПУ-138 (50 мг/кг), РГПУ-140 (45 мг/кг), РГПУ-154 (62,8 мг/кг), РГПУ-155 (57 мг/кг), РГПУ-156 (50 мг/кг), РГПУ-158 (47 мг/кг), РГПУ-206 (30 мг/кг), РГПУ-207 (31 мг/кг) и РГПУ-216 (35,4 мг/кг), полученных на кафедре органической химии Российского государственного педагогического университета им. А.Н. Герцена (Санкт-Петербург).* Эксперимент проводили на мышах линии СВА, которым вводили однократно внутрибрюшинно (в/б) цитостатик ЦФА (125 мг/кг), вызывающий тотальную иммунодепрессию (по литературным данным, подтвержденным нашими исследованиями). Изучаемые соединения вводили в/б, один раз в сутки в течение трех дней (в качестве растворителя использовали физиологический раствор). Контрольные группы животных получали физиологический раствор в эквивалентном объеме. Оценка активности веществ проводилась на основании изучения показателей клеточного и гуморального звеньев иммунного ответа, лимфопролифератив-ных процессов в иммунокомпетентных органах.

Результаты исследования показали, что фенотропил и его новые производные обладают иммунотропными свойствами, однако, в большей степени способность устранять все проявления ЦФА-иммунодепрессии была выражена у исходного вещества и соединений РГПУ-138, РГПУ-154, РГПУ-155 и РГПУ-216. Следующим этапом скрининга явилось изучение психотропных свойств наиболее активных веществ в условиях ЦФА-иммунодепрессии по результатам оценки психоэмоционального статуса животных в СТ. На фоне введения ЦФА у животных отмечалось угнетение двигательного и исследова-

'Быражаем искреннюю благодарность завкафедрой органической химии РГПУ им. А.И. Герцена, З.Д.Н., д.х.н., проф. Берестовицкой ВМ, к.х.н., доц. Васильевой О.С. и всем сотрудникам кафедры за предоставленные для исследования вещества

тельского компонентов поведения, а также появление тревожно-депрессивных изменений (фризинг, кратковременный груминг, признаки мотосенсорной дезинтеграции и др.). Фенотропил и его производные уменьшат.: нарушения психоэмоционального состояния у животных с ЦФА иммунодепрессией; наиболее выраженные психомодулирующие свойств: проявили фенотропил и соединение РГПУ-138.

Изучение психоилшуномодулирующей активности фенотропила и со -единения РГПУ-138 на различных моделях экспериментального стресса Исследования были проведены на крысах линии \Vistar. Фенотропил (25 мг/кг) и РГПУ-138 (50 мг/кг) вводили в/б 1 р/сут курсом 6 дней при остром стрессе и 10 дней - при хронических вариантах воздействий. Оценку стресс-протекторного действия веществ проводили с учетом выраженности соматических проявлений стресс-реакции (гипертрофия надпочечников, инволюция тимуса, эрозивно-язвенное поражение слизистой оболочки желудка, наличие эозинопении), а также, анализируя поведение животных, показатели иммуногенеза в сочетании с интенсивностью ПОЛ и активностью каталазы в имму-нокомпетентных органах (тимус, селезенка).

Острый иммобилизационно-болевой стресс. У стрессированных животных наблюдалась активация клеточного звена иммуногенеза и фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови; тогда как показатели гуморальной иммунореактивности и общее количество лейкоцитов в крови, наоборот, достоверно снижались (таблица 2, 3).

Таблица 2. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на показатели РГЗТ и РПГА

в условиях воздействия различных видов стресса

Иммунологические показатели (М ± ш) | ИРГЗТ,% | Титр анппел в РПГА, 1г

Острый иммобилизационно-болевой стресс

Контроль 1 (физ. р-р) 4.9 ± 0,3 2,8 ±0,0?

Контроль 2(стресс) 6,2 ±0,94 1.9 ± 0.03А

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 2, 6:1 0.5 * 2,В,: 0,16*

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 3,9 ±0,6* 2,8 Нт 0,09*

Хронический информационный стресс

Контроль 1 (физ. р-р) 2,2 + 0,3 1,9 ±0,06

Контроль 2 (стресс) 3,5 * О.ЗА 2,3 ±0,1А

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 2,6.1 0,5 2,5 ±0,1

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 5,0 ± 0,5* 2,4 ± 0.2

Хронический стресс, вызванный принудительным плаванием

Контроль 1 (физ. р-р) 2,2 ±0,3 1,9 ± 0,06

Контроль 2 (стресс) 5,9 ±0,5А 2,4 1 0.06А

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 4,3 .1 0,4* 2,8 ± 0,1*

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 6.6 ь 0,5 2,5 ±0,1

Хронический информационно-физический стресс

Контроль 1 (физ. р-р) 2,9 ±0,6 1.8 ± 0.03

Контроль 2 (стресс) 5,4 ± ОМ 2,2 = 0,1/1

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 5.5 = 0,6 2,4 ± 0.2

РГПУ-138^50 мг/кг1+ стресс 6,4 + 0,3 2,2 ±0.1

Примечание: Ли*- р<0,05 - достоверность рамичий по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (I- критерий Стъюдента с поправкой Бонферрони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнении)

В лейкоцитарной формуле отмечалось достоверное увеличение числа сегмен-тоядерных нейтрофилов и моноцитов; количество лимфоцитов, наоборот, достоверно снижалось по сравнению с интактными животными. В тимусе и селезенке стрессированных особей возросла активность каталазы на фоне интенсификации перекисного окисления липидов (ПОЛ), что сопровождалось увеличением скоростных показателей ПОЛ и исходного уровня МДА.

Таблица 3. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на фагоцитарную активность нейтрофилов периферической крови _в условиях воздействия различных видов стресса

Иммунологические показатели (М ± т) ФИ, % ФЧ

Острый инмобилизационно-болевой стресс

Контроль 1 (физ. р-р) 74,0 ±1,6 2,8 ±0,3

Контроль 2 (стресс) 79,8 ±0,У А 3,7 ~ 0,(14А

Фенотропил (25 ыг/кг) + стресс 71.8 ±1,4* 3,6 1 0,1

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 65,8 + 1,7* 4.0± 0,15*

Хронический информационно-Физический агоесс

Контроль I (физ. р-р) 65.5 ±2,5 5,0 ±0,2

Контроль 2 (стресс) 77,5 1 1,4А 5,« = 0,24

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 64,0 ± 3.0* 3,6 ±0,3*

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 58,7 ± 3,0* 3,3 1 0.3*

Примечание: Да*- р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (I- критерий Стьюдента с поправкой Бонферрот и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений)

Изменения наблюдались также и в поведении животных, проявляющиеся гнетением двигательной (число посещенных сегментов, средняя скорость) и ■сследовательской («заглядывания» вниз, направленные движения головой) дгстивности в обеих половинах СТ. В тесте «Порсолт» у стрессированных фыс регистрировались показатели, подтверждающие развитие тревожно-депрессивного состояния: увеличился латентный период (ЛП) до первого движения и продолжительность иммобильности; изменилось соотношение «активное/пассивное» плавание в сторону увеличения последнего (таблица 4).

На фоне введения фенотропила и РГПУ-138 наблюдалось восстановление практически до исходных значений показателей РГЗТ, РПГА, общего числа лейкоцитов, а также количества фагоцитов (ФИ), в то время как их функциональная активность (ФЧ) оставалась либо на высоком, как при стрессе, уровне (фенотропил), либо в еще большей степени возрастала (РГПУ-138) (таблица 2, 3). Под влиянием РГПУ-138 достоверно увеличилось число палочкоядерных (молодых форм) нейтрофилов, что свидетельствует о стимулирующем влиянии вещества на процесс лейкопоэза. Фенотропил способствовал снижению интенсивности ПОЛ в иммунокомпетентных органах, при этом активность каталазы либо сохранялась на высоком уровне (селезенка), либо еще больше возрастала (тимус). Под влиянием РГПУ-138 показатели липидной перокси-дации сохранялись повышенными, что, объясняется возможным стимулирующим влиянием вещества на эндогенные антиоксидантные системы организма за счет интенсификации ПОЛ. Отсутствие прооксидантного действия у веществ было показано при изучении активности фенотропила и РГПУ-138 в

фоновых условиях, согласно которым у животных наблюдалось снижение интенсивности ПОЛ и повышение активности каталазы.

Таблица 4. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на поведение животных в Суок-тесте и тесте «Порсолт» в условиях острого иммобияизационно-болевого стресса

Группы животных (п = 9 Поведенческие показатели (М ± ш) Контроль 1 (физ. р-р) Контроль 2 (стресс) Фенотропил (25 мг/кг) + стресс РШУ-138 (50 мг/кг) + стресс

СТ (светлый отсек)

Врем», проведенное в отсеке, с 109,4 ±7,5 80,3 ± 0,8 144,6 ±4,2* 162,4 ±5,3*

Посещенные сегменты 7,0*1,9 6,1 ±1,1 9,8 ±1,3* 7,0 ± 3,0

Остановки в отсеке 1,9 л 0,3 0,4 ±0,1 Д 2,8 ±0,8' 2,2 ±0,6*

«Заглддывания» вниз 3,5 ± 0,3 2,0 ±0,3Д 8,1 ±1,3* 5,1 ±1,0*

Направленные движения головой 0.8 ±0.4 0,7 ±0.4 3,0 ±0,4* 2,8 ±0,2*

Средняя скорость, посещенные сегменш/время в отсеке 0.13*0.02 0,06 ± 0,009А 0,1 ±0,01* 0,07 ±0,02

Среднее расстояние между остановками, посещенные сегыенты/число остановок 2.0 ± 0,4 1,8 ±0,09 3,4 ±0,7* 1.9 ±0,5

Средняя скорость движения, посещенные сегменты/ЗООс 0,04 + 0,01 0,04 ± 0,01 0,06 ±0,01* 0,06 ±0.01*

СТ (темный отсек)

Время, проведенное в отсеке, с 190,6 i 7,6 219,7 ± 11,0 155,4 ± 12,3 137,6 ±6,6*

Посещенные сегмегггов 18.3 * 1,8 7,1 ± 0,9А 19,7 ±2,3* 5,8 л 2,2

Остановки в отсеке 5,1 ±0,8 2,6±0,5А 3.2 ± 0,3 2.6 ± 0,6

«Заглядывания» вниз 7,0*0,4 5,1 ± 0,5& 10,7 ± 1,3* 4,6 ±0,3

Направленные движения головой 8,4 ± 1,1 4,0 ± 0,6А 7.6 ±1,1* 2.9 ±0,2

Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке 0,16 1 0,02 0,07 ± 0,002А 0,21 ±0,04* 0,04 ± 0,002*

Среднее расстояние между остановками, посещенные сегменты/число остановок 2,7 10,4 2,8 ± 0,4 3,7 ±0,5 1,2 ±0.2*

Средняя схоростъ движения, посещенные сегменты/ЗООс 0.2-0,01 0,14 ±0,02& 0,14 ±0,02 0,07 ±0,01*

ЛП выхода из центра, с 4.1 ±1.1 10,7 ± 2,4А 5,6 ±0,5* 4,0 ±0,9*

Фекальные болюсы 0,4 ¿0,1 1,2 ±0,1 Д 0,3±0,1* 0,6 ±0,2*

«ПОРСОЛТ»

ЛП до первого движения, с 1,9 ±0.2 3,6 А ом 1,8 ±0,2* 1,9 ±0,4*

Иммобильность, с 39.3 ± 1,6 64,0 ±4,3А 56,2 ±7,1 50,4 3,3

Время пассивного плавания, с 91,9*7,3 114,5±5,9А 83,5 ±3,7* 102,1 ± 4,2

Время активного плавания, с 168,8*9,4 120,5 ± 9.2А 160,5 ±5,4* 146,5 ±7,7*

Примечание: Д и * - р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем 1 и контролем 2 соответственно (1-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений)

Оценка психотропной активности фенотропила и РГПУ-138 в условиях острого стресса показала наличие у них анксиолитического действия, что проявлялось достоверным увеличением времени пребывания в светлом отсеке СТ, а также исследовательского компонента поведения. Кроме того, изучаемые вещества устраняли депрессивноподобные нарушения в поведении животных, о чем свидетельствовало уменьшение продолжительности иммобиль-ности и изменение соотношения времени «активное/пассивное» плавание за счет активного компонента в тесте «Порсолт» (таблица 4). Наибольшую пси-хомодулирующую активность проявил фенотропил.

Хронический информационный стресс. В группе стрессированных животных отмечалась активация как клеточного, так и гуморального звеньев иммунитета (таблица 2). В лейкоцитарной формуле с различной степенью достоверности снижалось общее количество лейкоцитов за счет уменьшения числа нейтрофилов; содержание моноцитов и лимфоцитов, наоборот, возрастало. В тимусе наблюдалась интенсификация ПОЛ и усиление активности каталазы; в селезенке значимых изменений выявлено не было.

Таблица 5. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на поведение животных в Суок-тесте и тесте «Порсолт»

Группы живсгпш' (п = 8 Поведенческие показатели СМ * т1 Контроль 1 (физ. р-р) Кошроль 2 (стресс) Фенотропил (25 мг/кг) + РГПУ-138 (50 мг/кг) +

—-- иг/светлый пмжЬ

Время, проведенное в отсеке, с 41,4*. 8,0 79,0 ±8,1 А 108,9±12,5* 131,7 ±2,9*

Посещенные сегменты 11,7 ±2,9 20,1 ± 2.2А 23,8 ± 1,6 49,3 ±3,3*

Остановки в отсеке 0,8 ±0,2 1.7 ± ОМ 2,1 ±0,1 5,0 ±0 5*

«Загпядываты» вниз 2,8 ±1,0 6,3 ± 1,0А 8,9 ±0,4* 8,5 ±0,3*

Направленные движения головой 2,2 ±0,1 3,7 ±0,66. 4,7 ±0.8 1,8 ±0,3*

Стойки 0,2 ±0,05 0,3 ± 0,05 0,4 ±0,1 3,0 ±0,4*

«Соскальзывание» задних лап 0.2 ± 0,05 1,0 ±0,1/1 0,9 ±0,1 0,5 ±0,05*

Средняя скорость, посещенные сегменгы/время в отсеке 0,29 ± 0,02 0,24±0,01А 0,26 ±0.07 0,37 ±0,02*

Среднее расстояние между остановками, посещенные сегменты/число остановок 7,7 ±0,9 5,3 ± 0,7А 3,7 ±0,6 11,4 ±1,4*

Средняя скорость движения, посещенные сегметы/ЗООс 0,06 ±0,02 0,05 ± 0.008 0,06 ±0,008 0,17 ±0,01*

- СТ (тгмный птгек)

Время, проведенное в отсеке, с 258,6 ±8,3 221,0±13,2А 191,1 ±12,5 168,3 ±3,1*

Посещенные сегменты 44,3 ± 2,3 40,1 ± 4,0 39,1 ± 5,2 59.0 ± 1,8*

Остановки в отсеке 6,5 ± 0,9 6,1 ±1,1 5,1 ± 0,6 9,3 ± 0,8*

«Заглядывания» вниз 11,7 ±0,9 12,0 ± 1,2 15,4 ±1,7 13,5 ±0,8

Направленные движения головой 7,7 ±0,9 6,9 ±0,4 11,4 ±1,0* 6,5 ±0 5

Стойки 1,7 ±0,1 1,0 ± 0,1А 1.7 ±0,3* 1.5 ±0,2*

«Соскальзывание» задних лап 2,3 ± 0,3 1,1 ±0,1А 1,3 ±0,1 1,5 ±0,1*

Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке 0,18 ±0,01 0,19 ±0,03 0,21 ±0,03 0,35 ±0,01*

Среднее расстояние между остановками, посещенные сегменты/число остановок 5,8 ±0,4 6,7 ±0,5 6,8 ± 0,9 6,7± 0,6

Средни скорость движения, посещенные сегменгы/ЗООс 0,26 + 0,02 0,2*0,02 0,16 ±0,02 0,22± 0.006

ЛП выхода из центра, с 8,8 ±1,0 9,1 ±2,1 2,3 ± 0.2* 3,0 ±0,4*

Остановка на границе 0,5 ±0,1 1,3 ±0,1 й 1,4 ±0.2 2,8 ±0,4*

Число актов груминга 0 0,4 ±0,14 0,1 ±0,05* 1,0 ±0,2*

«ППРСПШТ»

ЛП до первого движения, с 1,3 ± 0,2 5,9±0,5А 1,6 ±0,1* 3,3 ±0,4*

ЛП до первой иимобильности, с 74,9 ±2,1 64,6 ±6,8 73,4 ±5,5 71,1 ±6,6

Иммобкльность, с 53.7 ±4,6 86,3 ± 8,2А 66,2 ± 4,4* 67,0 ±2,5*

Время пассивного плавания, с 150,7 ±7,2 23,0 ± 2,4& 117,7 ±10,0* 36,0 ±4,9

Время активного плавания, с 95,6 ±5.0 190,7 ± 7,6А 116,1 ±6,0* 197,0 ± 6.3

--, ...... —пи ьривпеним V кинтршем I и контролем / СООТП'

еетстеенно (¡-критерий Стъюдента с поправкой Бонферрони и Ныамена-Кейлса для множественных сравнений)

Поведение животных в СТ характеризовалось рядом особенностей, а именно, отмечалось увеличение времени пребывания в аверсивной половине теста на фоне двигательной гиперреактивности, однако, движения крыс носили хаотичный характер и напоминали беспорядочное перемещение по тесту. В тоже время, регистрировались признаки, отражающие состояние эмоционального напряжения: увеличилось число «соскальзываний» задних лап, остановок на границе, актов кратковременного груминга (таблица 5). В тесте «Порсолт» у стрессированных особей наблюдались депрессивноподобные изменения поведения, проявляющиеся увеличением продолжительности им-мобильности, ЛП до первого движения (таблица 5).

Применение фенотропила сопровождалось снижением ИР ГЗТ практически до контрольных значений; тогда как РГПУ-138 проявило стимулирующий эффект, в еще большей степени увеличив изучаемый показатель (таблица 2). В обеих опытных группах достоверно возросло общее количество лейкоцитов за счет палочкоядерных нейтрофилов. На фоне введения РГПУ-138 увеличилось число сегментоядерных нейтрофилов и восстановилось содержание лимфоцитов. В тимусе под влиянием изучаемых веществ наблюдалось снижение интенсивности липидной пероксидации, при этом активность катал азы сохранялась на высоком уровне; в селезенке - изменения незначительны.

Изучаемые вещества оказали влияние и на поведение животных в СТ. Наибольшую психомодулирующую активность проявило соединение РГПУ-138, под влиянием которого возросли горизонтальная активность (число посещенных сегментов, средняя скорость движения) и ориентировочно-исследовательские реакции (стойки, число «заглядываний» вниз); а также снизилась частота «соскальзывания» задних лап, как признак мотосенсорной дезинтеграции. Под влиянием фенотропила отмечалась лишь активация исследовательского поведения (число стоек, «заглядываний» вниз). Результаты, полученные в тесте «Порсолт», свидетельствуют о проявлении фенотропилом и РГПУ-138 антидепрессивного действия, что проявлялось достоверным снижением продолжительности иммобильности (таблица 5).

Хронический стресс, вызванный принудительным плаванием. У стрессированных животных отмечалась активация как клеточного, так и гуморального звеньев иммуногенеза (таблица 2). В лейкоцитарной формуле наблюдалось лишь снижение числа эозинофилов, других значимых изменений выявлено не было. В тимусе стрессированных крыс достоверно возросла скорость аскор-батзависимого ПОЛ; в селезенке показатели липидной пероксидации практически не отличались от аналогичных у интактных особей. Оценка психоэмоционального состояния животных в условиях СТ показала формирование тревожно-депрессивных нарушений в поведении, что проявлялось снижением с различной степенью достоверности исследовательской активности («заглядывания» вниз, направленные движения головой); увеличением частоты «соскальзывания» задних лап, числа остановок на границе (таблица 6). В тесте «Порсолт» на фоне стресса снизился ЛП до первой иммо-

бильности и увеличился ЛП до первого движения. Сокращение же продолжительности иммобильности и увеличение времени активного плавания у стрес-сированных животных, вероятно, обусловлено особенностями выбранной модели стресса (плавание) (таблица 6).

Таблица 6. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на поведение животных в Суок-тесге и тесте «Порсолт» _в условиях хронического стресса, вызванного 1

Группы животных (п = 8

Поведенческие показатели (М ± ш)_

Контроль 1 (фю. р-р)

принудительным плаванием

Контроль 2 (стресс)

СТ (светлый отсек)

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс

Время, проведенное в отсете, с

Посещенные сегменты

40,5 ± 8,0

11,7 ±2,9

50,1 ±5,3

16,3 ±3,8

74,8 ± 11,4*

5,3 ± 0,6 *

81,3 ± 13,5 *

16,7 ±3,5

Остановки в отсеке

0,8 ± 0,2

1.6 ±0,2А

0,6±0,1*

1.5 ±0,1

«Заглядывания» I

2,8 ± 1,0

3,9 ±0.8

0*

4,5 ±0,8

Направленные движения головой

2,2 ±0,1

0,9 ± 0.1А

0,5 ± 0,05 *

«Соскальзывание» задних лап

0,2 ± 0,05

1,1 ± 0,2й

0,1 ±0,05*

1,2 ±0,2

Средня* скорость, посещенные сегменты/время в отсеке Среднее расстояние между остановками, посещенные сешенты/число остановок

0,29 ±0,02

0,28 ±0,04

0,17 ±0,02*

0,28 ± 0,05

7,7 ±0,9

8.3 ± 0,3

6,2 ± 1,2

5,9 ± 1,6

Средняя скорость движения, посещенные сегмевгы/ЗООс

0.06 ±0,02

0,05 ± 0,01

0,04 ± 0,01

0,03 ± 0,01

Время, проведенное в отсеке, с

Посещенные сегменты

Остановки в отсеке

«Заглядывания» вниз

Направленные движения головой

«Соскальзывание» задних лап

Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке Среднее расстояние между остановками, посещенные сегменты/число остановок Средняя скорость движения,

_посещенные сегменты/ЗООс_

_ЛП выхода из центра. с_

Остановки на границе

СТ (темный отсек!

259,5 ± 8,3 249,9 ±10.6

44,3 ± 2.3

6,5 > 0,9

11,7 ±0,9

7,7 ±0,9

2,3 * 0.3

0.18 ±0.01

5,8 ± 0,4

0.26 ±0,02

8.8 ±1.0

0.5 ±0,1

40,3 ±3.7

7,4 ±1,0

8,1 ±0,8А

3,4 + 0.2А

2,4 ±0,4

0,17 ±0,02

5,3 ± 0,6

0,2 ±0,01 А

12,1 ± 1.3А

1,6 ± 0.2А

«ПОРСОЛТ»

225,2 ±25.6 218,7 ± 17,3

30,4 ±2,1*

5,3 ± 0.5

4,4 ± 0,6*

4,3 ±0,3*

2,6 ±0,5

0,17 ±0,06

5,9 ± 0,3

0,2 ± 0.02

¡3,3 ± 2,4

0,4± 0,1*

39,0 ± 6,4

4,5 ±0,9*

5,5 ±0,6*

1,2 ±0.3*

2,0 ±0,2

0,17 ±0,03

6,7 ±0,5

0.18 ±0,03

7,5 ±1,3*

1,8 ±0,3

ЛП до первого движения, с

ЛП до первой иммобильности. с

Иммобияьность. с

Время пассивного плавания, с Время активного плавания, с

1,3 ± 0,2

74,9 ±2,1

53,7 ±4,6

150,7 ±7.2

95,6 ±5,0

4,3 ± 1,0а

58,3 ±4,4 А

44,0 ± 6,5

47,1 ± 9,2А

208,9±13,7А

1,3*0,1*

126.0 ±6.7*

21,2 ±1,9*

77,3 ±8,0*

----------- . --,----------201,5±12,7 м/!,и±и1

примечание: А и *-р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем I и контролем 2 соот-ветстеенш (¡-критерий Стыодента с поправкой Бонферрони и Нъюмена-Кешса для множественных сравнен ий)

Под влиянием фенотропила и РГПУ-138 показатели клеточного и ^морального иммунитета сохранялись на высоком уровне (таблица 2). В периферической крови отмечалось повышение общего количества лейкоцитов; при этом фенотропил в условиях стресса проявил стимулирующее влияние на процесс лейкопоэза, о чем свидетельствовало достоверное увеличение палоч-

1.3 ±0.1*

24,5 ±2,7*

104,5 * 5,5*

171,0 ±12,1

коядерных нейтрофилов. У животных, получавших фенотропил и РГПУ-138, в тимусе наблюдалось снижение интенсивности липидной пероксидации на фоне усиления активности каталазы.

Изучаемые в работе вещества оказали влияние и на поведение животных. Так, введение фенотропила и РГПУ-138 сопровождалось увеличением времени пребывания в светлой половине СТ. Кроме того, под влиянием фенотропила снизились частота «соскальзываний» задних лап и остановок на границе (таблица 6). Результаты изучения поведения в тесте «Порсолт» показали, что под влиянием фенотропила и РГПУ-138 снизилось время иммобильности, а также увеличилась продолжительность пассивного плавания, что, вероятно, обусловлено включением «защитных» механизмов, позволяющих длительно сохранить жизнеспособность в аверсивной среде, учитывая выбранную модель стресса (плавание) (таблица 6).

Хронический информационно-физический стресс. На фоне продолжительного сочетанного воздействия информационной и физической нагрузок у животных достоверно возросли все изучаемые показатели иммунореактивности (ИР ГЗТ, тигр антител в РПГА, фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови) (таблица 2, 3). Кроме того, наблюдалось увеличение общего количества лейкоцитов в крови за счет сегментоядерной фракции на фоне лимфо- и эозинопении. В тимусе и селезенке отмечалось лишь усиление активности каталазы.

У стрессированных животных отмечались также изменения и психоэмоционального состояния. Так, в условиях СТ возросла двигательная (число посещенных сегментов, средняя скорость) и исследовательская активность («заглядывания» вниз, направленные движения головой, число остановок в отсеке) как в темном, так и светлом отсеках на фоне повышения уровня эмоционального напряжения, о чем свидетельствовало увеличение числа актов кратковременного груминга и остановок на границе (таблица 7). В тесте «Порсолт» достоверно снижались ЛП до первой иммобильности и ЛП до первого движения (таблица 7). Комплексная оценка поведения стрессированных животных показала, что в условиях хрошгческого комбинированного информационно-физического воздействия сформировались нарушения тревожно-депрессивного характера, характеризующиеся локомоторной гиперреаюгивно-стью, что объясняется выбранной моделью стресса (длительное пребывание в многоальтернативном лабиринте).

Под влиянием фенотропила и РГПУ-138 наблюдалось восстановление до «нормы» общего количества лейкоцитов в крови и показателей неспецифической резистентности (ФИ, ФЧ); кроме того, увеличилось число эозинофилов. Соединение РГПУ-138 оказало стимулирующее влияние на клеточное звено иммунного ответа, а также па лейкоцитарный росток кроветворения, достоверно увеличив количество палочкоядерных нейтрофилов (таблица 2, 3). На фоне введения фенотропила и РГПУ-138 активность каталазы в тимусе сохра-

нялась на высоком (как при стрессе) уровне, тогда как показатели ПОЛ практически не изменялись.

Таблица 7. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на поведение животных в Суок-тесте и тесте «Порсолт» в условиях хронического информационно-физического стресса

Группы животных! Контроль 1 <п = 81 (физ.р-р) 1 Юведенческие показатели (М ± га) | Контроль 2 (стресс) Фенотропил (25 мг/кг) + стресс РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс

—---— С.Т(Сйртныы лтг?г)

Время, проведенное в отсеке, с 10,1 ±1,5 30,7 + 2.ЗА 90,3 + 5,6* 123,4 + 3,6*

Посещенные сегмента 2.0 ±0,3 5,0 ± 1,0А 20,3 ±4,6* 14,6 + 2,4*

Остановки в отсеке 0,8 ±0,1 0,7 ± 0,1 2,9 + 0,6* 2,0 + 0,4*

«Заглядывания» вниз 1,1 ±0,4 2,7 ж 0,2А 5,6 + 0,8* 6,7 + 0,6*

Направленные движения головой 0,4 ь 0,1 2,0 ± 0.2А 2,0 ± 0,4 3,9 + 0 5*

Стойки 0 0 1,6 t 0,3* 0,9 + 0,1*

Средняя скорость, посещенные сегменты/время в отсеке 0,17 ±0,01 0,25± 0,02А 0,3+0,01* 0,2 J 0,04

Среднее расстояние между остановками, посещенные сегменты/число остановок 1,4 ±0,2 2.9 t 0.4А 4.7+0,2* 2,9 ± 0,8

Средняя скорость движения, посещенные сегменты/ЗООс 0,01 ±0,02 0,01 + 0.03 0,07+0,01* 0,04+0,009*

-- CT (Темный птсек)

Время, проведенное в отсеке с 289,9 ±4.3 269.3+ 4.6А 209,7+11,1* 176,6+10 9*

Посещенные сегменты ¡3,01 1,5 32,2 L 4.2А 29,9 ж 3,7 33,7 + 5,2

Остановки в отсеке 3,6±0.3 6.8 11,1А 6,1 + 0,2 3,1 J 0,6*

«Заглядывания» вниз 7,9 ±0,6 14,8 ± 1.5А 8,3 1 1,5* 13,0+1,7

Направленные движения головой 6,9 >1,6 7.8 ±1.3 3,0 + 0,5* 5,7 1 1,0*

Стойки 0,3 >,0,1 0,3 ±0.1 1,7 + 0,1* 1,0 J 0,3*

Средняя скорость, посещенные сегмекты/время в отсеке 0,05 ± 0,005 0,13+ 0,02 А 0,18+0,006* 0,19+0,01*

Среднее расстояние между остановками, посещенные сегменты/число остановок 3,1 ~лз 5,2 + 0,5А 3,4 ±0,4* 9,5 ±1,3*

Средняя скорость движения, посещенные сегменты/ЗООс 0,14 +.0,02 0,19 ±0,01 А 0,13i 0,02* 0,I2±0,01*

ЛП выхода из центра, с 17.4 ±3.8 28.5 ± 2,5А 12.7 -. 2,2* 10,3 и 1,9*

Остановки на границе 0,3 ±0,1 1,0+ 0,1 А 1,3 + 0,2 0,9 1 0,1

Число актов груминга 0,4 ±0,1 6,2 ± 1.0А 1,4 + 0,2* 2,3 + 0,6*

«Соскальзывание» задних лал 1,0 ±0,2 1.3 ±0, и 1,9 + 0.1* 1.1 + 0,1

«ПОРСОЛТ»

ЛИ до первого движения, с 5,0 + 1,0 1,4 -1 0,2 А 2.7 + 0.3* 1,9 + 0,2

ЛИ до первой иммобилыюсти, с 100.9+ 12,7 56,0 t 7.8А 69,6 ± 6,3 U7,8±13,7*

Иммобильность, с 26,0 ± 3,8 22,4 + 2.3 10,7 ±3,1* 7,7+ 1.5*

Время пассивного плавания, с 92,2.1 11.1 100,8 + 8,0 121,6 + 8,3* 126,0 t 12 5

Время активного плавания, с 181,8 +. 11,8 176,8 + 10,3 167,7+18.1 166,3 + 11,0

Примечание: А и *-р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем I и контролем 2 сооп. -еетственно (t-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони и Ньюмена-КеОлса для множественных

Фенотропил и РГПУ-138 в условиях хронического информационно-физического стресса проявили анксиолитическое действие, характеризующееся увеличением времени пребывания в аверсивном отсеке СТ, а также повышением двигательной и исследовательской активности (таблица 7). По результатам, полученным в тесте «Порсолт», было выявлено, что вещества

уменьшали депрессивноподобный характер поведенческих реакций, что проявлялось снижением продолжительности иммобильности (таблица 7).

Таким образом, комплексная оценка влияния фенотропила и РГПУ-138 на показатели иммуногенеза, интенсивность ПОЛ и активность каталазы в им-мунокомпетентных органах, поведение животных, а также способность устранять соматические проявления стресс-реакции (гипертрофия надпочечников, инволюция, тимуса, эрозивно-язвенное поражение слизистой оболочки желудка, эозинопения) позволяет сделать вывод о проявлении фенотропилом и РГПУ-138 стресспротекторных свойств в условиях воздействия различных видов стресса.

Изучение особенностей стресс-реакции, а также сравнительная оценка психоиммуномодулирующих свойств фенотропила и РГПУ-138 в условиях хронического информационно-физического воздействия в половом аспекте. Установлено, что у самок в условиях воздействия комбинированного стресса происходит активация иммунной системы, проявляющаяся увеличением ИР ГЗТ, титра антител, общего количества лейкоцитов. Кроме того, наблюдалось снижение интенсивности ПОЛ и повышение уровня каталазы в тимусе. У самцов в аналогичных условиях отмечалось подавление гуморального звена иммунитета, снижение общего количества лейкоцитов в крови, а также усиление ПОЛ в тимусе на фоне незначительного повышения активности каталазы. В селезенке у самцов и самок изменения отсутствовали.

Поведение самок в условиях СТ характеризовалось двигательной гиперреактивностью на фоне формирования состояния эмоционального напряжения (увеличилось число актов кратковременного груминга и остановок на границе); в то время как у самцов, наоборот, отмечалось подавление и двигательной, и исследовательской активности. В тесте «Порсолт» у самок достоверно снизились ЛП до первой иммобильности и ЛП до первого движения; тогда как у самцов достоверно увеличился ЛП до первой иммобильности, а также изменилось соотношение «активное/пассивное» плавание в сторону увеличение последнего.

Введение фенотропила и РГПУ-138 самкам сопровождалось восстановлением до исходных значений общего количества лейкоцитов в крови, а также сохранением активности каталазы в тимусе на высоком (как при стрессе) уровне; кроме того, РГПУ-138 оказало стимулирующее влияние на клеточное звено иммунного ответа при отсутствии изменений под влиянием фенотропила. У самцов на фоне применения изучаемых веществ отмечалось повышение в крови титра антител, общего количества лейкоцитов, а также снижение интенсивности липидной пероксидации в иммунокомпетентных органах. В отношении клеточного звена иммунного ответа у самцов РГПУ-138 оказало стимулирующее влияние; тогда как введение фенотропила, наоборот, подавляло клеточно-опосредованную реакцию замедленного типа.

Оценка поведения самок в СТ показала, что фенотропил и РГПУ-138 проявили анксиолитическое действие, характеризующееся увеличением времени

пребывания в светлой половине теста, повышением в еще большей степени двигательной активности; при этом движения самок носили упорядоченный характер. У самцов под влиянием РГПУ-138 наблюдалось усиление двига-тельно-исследовательского поведения, тогда как применение фенотропила сопровождалось увеличением только локомоторной активности. В тесте «Порсолт» у самцов и самок под влиянием изучаемых веществ уменьшилась продолжительность иммобильности. На фоне введения РГПУ-138 наблюдалось увеличение продолжительности пассивного плавания, что можно расценить как «включение» защитного механизма, позволяющего животным длительно сохранять жизнеспособность в аверсивной среде. Увеличение же времени активного плавания у самцов под влиянием фенотропила, возможно, связано с повышением физической выносливости, что также позволяет длительно, но уже активно преодолевать «трудности».

Изучение возможных механизмов психоиммуномодулирующего действия фенотропила и соединения РГПУ-138. Учитывая ведущую роль гипоталамуса в нейроиммунных взаимодействиях (Irwin M.R., 2008; Schubert С. et al., 2009; Ranabir S. et al., 2011), на одном из этапов нашей работы мы определяли участие данной зоны головного мозга в реализации психоиммуномодулирующего действия аналогов ГАМК. Нами было изучено влияние фенотропила и РГПУ-138 на интенсивность ПОЛ и активность каталазы в гипотала-мической области, а также под влиянием фенотропила оценивали особенности морфофункционапьного состояния основных структур гипоталамуса. Установлено, что на фоне острого иммобилизационно-болевого стресса интенсивность ПОЛ нарастала, тогда как хроническое воздействие (информационный стресс и стресс, вызванный принудительным плаванием), наоборот, сопровождалось снижением показателей липидной пероксидации. Активность каталазы возрастала во всех экспериментальных сериях (таблица 8).

На фоне острого иммобилизационно-болевого стресса, а также хронического стресса, вызванного принудительным плаванием, введение фенотропила и РГПУ-138 сопровождалось сохранением показателей ПОЛ на уровне стрессированных крыс; тогда как в условиях хронического информационного воздействия изучаемые параметры в еще большей степени снижались. Во всех экспериментальных группах наблюдалось восстановление активности каталазы в гипоталамической области (таблица 8).

Оценка морфофункционального состояния структур гипоталамуса стрессированных животных показала, что в нейронах паравешрикулярных ядер определялись характерные для стресса признаки: вакуолизация цитоплазмы; деформация и смещение к периферии клетки ядра, отсутствие ядрышек (Писарев В.Б., 2004; Гуров Д.Ю., 2005; Потанин М.Б., 2008), что подтверждало участие данного отдела мозга в развитии стресс-реакции. На фоне введения фенотропила отмечалось уменьшение выраженности признаков повреждения паравентрику-лярных ядер, свидетельствующих о том, что стресспротекторное действие препарата опосредуется влиянием на данную зону головного мозга.

Таблица 8. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на показатели ПОЛ и активность каталазы в гипоталамической области

Показатели (М ± ш) Группы животных (п = 8) Исходное содержание МДА (кмоль/мг) Скорость спонтанного ПОЛ, (им оль/ч) Скорость аскорбатзависимо-го ПОЛ, (нмоль/ч) Активность каталазы, (%)

Острый иммобилизационно-болевой стресс

Контроль 1 (физ. р-р) 1,95 ± 0,31 10,7 ±0,66 4,5 ± 0,56 37,0 .1 1,3

Контроль 2 (стресс) 2,8 ± 2,5А 12.8 ± 0,64 А 5.9 ±0.71А 57,5±З.ЗА

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 2.8 ±0,21 11,9 ±0.78 3,2 ±0,57 40,3 ±5,3*

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 2,8 ±0,31 12,1 ±0.4 8,7 ±0,87* 41,6 ±1,3*

XI эоннческий инфо рмационный ст ресс

Контроль 1 (физ. р-р) 3.7 ± 0.17 39,0 ±3,4 44,3 -с 3,9 1,5 ± 0,2

Контроль 2 (стресс) 3,6 ±0,09 27,6 ! 3,1 А 34,3 ±4,1 2,1 ± 0.2А

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 3,4 ± 0,05 28.6 ±1,7 35,4 ¡- 1,5 . 2,2 ± 0.2

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 3,4 ±0,15 21,1 ±0,7 26,8 ±1.6 1.5 ±0,1*

Хронический стресс, вызванный принудительным плаванием

Контроль 1 (физ. р-р) 3,7 ±0,17 39,0 ±3,4 44,3 ± 3,9 1,5 а 0.2

Контроль 2 (стресс) 3,1 * 0,04& 23,3 ^ 1,6А 35,1 ±3,7 2,7 ±0,3 А

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 3,3 ±0,08 23,3 ± 1.0 31,8 ±2,2 1.4 ±0.1*

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 3,6 ±0,12А 24,8 ±0,7 28,6 ±0,4 1.6 1-0,1*

Примечание: А и • - р<0,05 - достоверность различий по сравнению с контролем 1 и контролем г соответственно (¡-критерий Стьюдента с поправкой Бонфгррони и Ньюмена-Кейлса для множественных сравнений)

В настоящее время доказано, что взаимодействие нервной и иммунной систем осуществляется посредством цитокиновой регуляции (Корнева Е.А. и др., 2000; АДе1тап й а1., 2010); к ключевым нейроиммунным цитокинам относятся ИЛ-1Р и ИЛ-4. Одним из этапов исследования, посвященного изучению механизмов психоиммуномодулирующего действия аналогов ГАМК, стало определение уровня плазменных ИЛ-1 р и ИЛ-4 на модели острого им-мобилизационно-болевого стресса. В группе стрессированных животных отмечалось достоверное увеличение ИЛ-1(3; тогда как содержание ИЛ-4, наоборот, снижалось (таблица 9). Фенотропил и РГПУ-138 восстанавливали до исходного уровня содержание цитокинов, при этом наиболее выраженное действие проявило РГПУ-138.

Таблица 9. Влияние фенотропила и РГПУ-138 на уровень ИЛ-1Р и ИЛ-4 в сыворотке крови животных

Уровень ИЛ (пг/мл; Группы животных (п = 8) шыр ИЛ-4

Контроль 1 (физ. р-р) 127,8 ±6,2 32,8 ± 2,3

Контроль 2 (стресс) 236,2 ± 16,6Д 17,7±1,4Д

Фенотропил (25 мг/кг) + стресс 180,0 ±9,8* 31,9 ±2,7»

РГПУ-138 (50 мг/кг) + стресс 137,5 ±10,9» 31,8 ±1,7»

Примечание: Д и *-р<0,05 ----------1----------г--------------,. -

еетственно (¡-критерий Стьюдента с поправкой Бонферрони и Ныомена-Кейлса для множественных сравнений)

На этапе изучения возможных механизмов действия аналогов ГАМК мы провели нейрохимический анализ иммунотропной активности фенотропила в

условиях применения основных нейромедиаторных систем мозга: неконкурентного антагониста пресинаптических ГАМКА-рецепторов, блокатора хлорного канала ГАМКА-бензодиазепинового комплекса - пикротоксина (2 мг/кг); селективного антагониста ГАМКА-рецепторов - бикукуллина (1,5 мг/кг); антагониста ГАМКв-рецепторов - факлофена (3,5 мг/кг); антагониста бензодиазепинового сайта ГАМКА-бензодиазепинового комплекса - флюма-зенила (0,01 мг/кг); антагониста ионных каналов ЫМОА-рецепторов - дизо-циллина (0,15 мг/кг); антагониста центральных постсинаптических дофаминовых рецепторов - галоперидола (5 мг/кг); антагониста 5-НТ2а - серотони-новых, Н] -гистаминовых и М-холинергаческих рецепторов - ципрогегггадина (30 мг/кг).

Установлено, что влияние фенотропила на Т-зависимые звенья иммуногенеза реализуется, вероятно, через ГАМКд- бензодиазепиновый ионофорный комплекс, что объясняется снижением иммунотропной активности фенотропила на фоне применения бикукуллина и флюмазенила. Что касается интенсивности процесса антителообразования под влиянием фенотропила, введенного на фоне блокады различных типов ГАМК рецепторов, то выявлено, что наиболее чувствительными рецепторами на эффекторных антителообразую-щих клетках являются ГАМКв-рецепторы, т.к. именно в условиях применения факлофена достоверно значимо снижается стимулирующее влияние фенотропила на гуморальное В-зависимое звено иммуногенеза.

Комплексный анализ результатов, полученных в ходе проведения диссертационного исследования, показал, что фенотропил и его новый аналог РГПУ-138 обладают психоиммуномодулирующей активностью, проявляющейся в условиях цитостатического и стрессогенного воздействия. При этом характер фармакологической активности веществ зависит не только от вида и продолжительности действия стрессогенных факторов, но и от половой принадлежности организма.

ВЫВОДЫ

1. Фенотропил и его новые производные РГПУ-138, РГПУ-154, РГПУ-155 и РГТГУ-216 в условиях ЦФА-иммунодепрессии оказывают выраженное психо-иммуномодулирующее действие, уменьшая проявления иммунной недостаточности и нарушения психоэмоционального состояния. Наиболее активными являются фенотропил и его аналог под лабораторным шифром РГПУ-138.

2. Воздействие острого иммобилизационно-болевого стресса сопровождается активацией клеточного (РГЗТ) и угнетением гуморального (РПГА) звеньев иммунитета. Введение фенотропила и соединения РГПУ-138 оказывает корригирующее действие на показатели РГЗТ- и РПГА-тестов. Хроническое стрессогенное воздействие (информационно-физическое, информационное; стресс, вызванный принудительным плаванием) приводит к активации клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Влияние соединения РГПУ-138 выражается в еще большей стимуляции показателей клеточной иммунореактивности (РГЗТ) в условиях хронического информационного воз-

действия, а также при его сочетании с физической нагрузкой. Фенотропил проявляет иммуномодулирующую активность лишь на фоне хронического информационного стресса и стресса, вызванного принудительным плаванием, уменьшая гиперреактивность клеточного звена (РГЗТ). На модели хронического стресса, вызванного принудительным плаванием, фенотропил способствует восстановлению показателей гуморального звена иммунитета (РПГА).

3. Воздействие различных видов стресса (иммобилизационно-болевой; информационный, принудительное плавание, их комбинация) сопровождается формированием тревожно-депрессивного состояния; при этом на фоне острого стресса отмечается угнетение локомоторной и исследовательской активности, тогда как при хронических видах стресса - двигательная гиперреактивность.

Фенотропил и соединение РГПУ-138 при остром и хронических вариантах воздействия проявляет психомодулирующее (анксиолитическое и антидепрессивное) действие. При остром иммобшшзационно-болевом стрессе наиболее активен фенотропил; при хроническом информационном - РГПУ-138; на фоне хронического информационно-физического и хронического стресса, вызванного принудительным плаванием - в равной мере оба изучаемых вещества.

4. Особенности формирования сгресс-реакции и выраженность психоимму-номодулирующей активности фенотропила и РГПУ-138 при сочетанном действии информационной и физической нагрузок зависят от половой принадлежности: для самок характерна активация клеточного (РГЗТ) и гуморального (РПГА) звеньев иммунного ответа; для самцов - угнетение гуморального звена. На фоне формирования состояния повышенного эмоционального напряжения у самок наблюдается двигательная гиперреакгивность; у самцов - подавление всех видов активности (локомоторной, исследовательской). Соединение РГПУ-138 оказывает стимулирующее влияние на клеточное звено иммунного ответа (РГЗТ) независимо от пола; а также восстанавливает у самцов процесс антигелообразования (РПГА). Фенотропил, не проявляя им-муномодулирующей активности у самок, у самцов на фоне угнетения клеточных реакций (РГЗТ) стимулировал антителообразование (РПГА). Фенотропил и соединение РГПУ-138, уменьшая нарушения психоэмоционального состояния у самок и самцов, проявляют психомодулирующее действие.

5. Психоиммуномодулируюгцее действие фенотропила и соединения РГПУ-138 определяется регулирующим влиянием на гипоталамическую область головного мозга, а также способностью восстанавливать уровень сывороточных ИЛ-фи ИЛ-4.

6. Иммунотропный эффект фенотропила на Т- зависимое звено иммуногенеза реализуется, вероятно, через ГАМКл-бензодиазепиновый ионофорный комплекс, на В-зависимые иммунные реакции - через ГАМКв-рецепторы.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Доказанная в проведенном исследовании психоиммуномодулирующая активность фенотропила, проявляющаяся в условиях цитостатического и стрессогенного воздействия, позволяет рекомендовать его при осложнениях цитостатической терапии и стресс-индуцированных нарушениях иммунитета, что расширяет перечень показаний к назначению препарата.

2. Полученные в ходе исследования данные о способности нового аналога фенотропила под лабораторным шифром РГПУ-138 уменьшать нарушения иммунореакгивности и психоэмоционального состояния, позволяют рассмотреть его как основу для создания нового лекарственного препарата с психо-иммуномодулирующим действием.

3. Зависимость стресспротекторной активности фенотропила и соединения РГПУ-138 от половой принадлежности организма определяет необходимость дальнейшего проведения изучение фармакологического действия веществ в половом аспекте.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Влияние фенотропила на клеточное звено иммунного ответа мышей линии СВА с экспериментальной иммунопатологией / Н.Р. Кулешевская, М.М. Магомедов, Т.К. Сережникова и др. // Фармацевтическая наука и практика: достижения и перспективы. - 2009. - № 7. - С. 51-52.

2. Самотруева, М.А. Антиоксидантная активность сукцината фенотропила в условиях острого иммобилизационно-болевого стресса / М.А. Самотруева, Т.К. Сережникова // Международный журнал экспериментального образования. - 2011. -№3.-С. 145.

3. Изучение иммунокорригирующих свойств нового производного фенотропила в условиях информационно-физического стресса / М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Т.К. Сережникова и др. // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2010. - № 11. - С. 35-36.

4. Изучение психоиммуномодулирующего действия сукцината фенотропила в эксперименте / М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Д.Л. Теплый, Т.К. Сережникова и др. // Медицинская иммунология. - 2011. - Т. 13, № 1. - С. 55-60.

5. Иммуномодулирующие свойства производных фенотропила / М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Т.К. Сережникова и др. // Фармация. - 2011. - № 1. -С. 28-30.

6. Иммуномодулирующие эффекты фенотропила и его органических солей / М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Д.Л. Теплый, Т.К. Сережникова и др. // Астраханский медицинский журнал. - 2011. - Т. 6, № 1. - С. 100-103.

7. Сукцинат фенотропил как средство коррекции нейроиммунных нарушений в условиях информационо-физического стресса / М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков, Д.Л. Теплый, Т.К. Сережникова и др. И Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. - 2011. - Т. 5, № 97. - С. 492-497.

8. Влияние информационного и физического стресса на поведение крыс в тесте «Приподнятый крестообразный лабиринт» / Т.К. Сережникова. Е.С. Насунова, Е.А. Кушниренко и др. // Бюллетень Северного государственного медицинского университета. - 2010. -№ 1 (вып. XXIV). - С. 160.

9. Влияние информационного и физического стресса на клеточное звено иммуногенеза / Т.К. Сережникова, М.А. Самотруева, Д.Л. Теплый и др. // XXI Съезд Физиологического общества им. И.П.Павлова. Тезисы докладов, Москва-Калуга. -2010. — С. 555-556.

10. Влияние информационного стресса на показатели неспецифичесхоГ резистентности и поведение крыс / Т.К. Сережникова- М.А. Самотруева, Д.Л. Теплый и др. // Международная научно-практическая конференций 115УИДаМеНТаЛЬНЫе И приклалпые пРоблемы стресса», Витебск. - 2010. - С. 11311. Сережникова, Т.К. Изменение резистентности организма в условиях экспериментального информационного стресса / Т.К. Сережникова // Материалы международной научно-практической конференции «Физиологические механизмы адаптации человека», Тюмень. - 2010 г. - С. 367-3 70.

12. Изучение иммуномодулирующего действия фенотропила на модели информационно-физического стресса / Т.К. Сережникова М.А Самотруева, И Н Тюрен-ков и др. // Патогенез. - 2010. - № 2. - С. 58.

13. Изучение психоиммуномодулирующих свойств фенотропила на модели информационного стресса / Т.К. Сережникпчя. М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков и др. // Астраханский медицинский журнал. - 2011. - Т. 6, № 1. - С. 110-113.

14. Психомодулирующее действие сукцината фенотропила в условиях информационно-физического стресса /Т.К. Сережникова. М.А. Самотруева, И.Н. Тюренков и др. // Современные наукоемкие технологии. - 2010. - № 9. - С. 212.

15. Тюренков, И.Н. ГАМК-ергическая система и препараты ГАМК в регуляции иммуногенеза / И.Н. Тюренков, М.А Самотруева, Т.К. Сепежникоия // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 20 Н. - Т. 74, № 11. - С.

16. Experimental learning of dose-related influence of phenotropil on humoral link of immunogenesis / M. Samotrueva, I. Tyurenkov , T. Serezhnikovn et al.// European Journal Of Natural History. -2010. -ЛЬ 3. -P. 61.

17. Патент РФ на изобретение № 2432949 «Способ коррекции нарушений иммунного и психоэмоционального статуса организма при экспериментальном информационном стрессе» от 10.11.2011.

Перечень использованных сокращений

ГАМК- гамма-аминомасляная кислота

РПГА - реакция прямой гемагглютинации

ИЛ - интерлейкиц

кислота CT- суок-тест

ИР - индекс реакции

ТБК- тиобарбитуровая кислота

ХИС-хронический информационный стресс ХИФС- хронический информационио-физический стресс _

ОИБС - острый иммобилизаиионно-болевой стресс_

ХСПП- хронический стресс, вызванный принудительным плаванием_

ПОЛ- перекисное окисление липидов

липидов__ЭБ- эритроциты барана

РГЗТ - реакция гиперчувсгвительности замедленного типа

СЕРЕЖНИКОВА ТАТЬЯНА КОНСТАНТИНОВНА

ФЕНОТРОПИЛ И ЕГО ПРОИЗВОДНЫЕ КАК ПСИХОИММУНОМОДУЛЯТОРЫ В УСЛОВИЯХ ЦИТОСТАТИЧЕСКОГО И СТРЕССОГЕННОГО

ВОЗДЕЙСТВИЯ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 07.02.2012 г. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага кн.-журнальная. Печать ротапринтная. Издательство ГБОУ ВПО «Астраханская ^сударственная медицинская академия» Минздравсоцразвития России 414000, г.Астрахань, ул.Бакинская, 121 Тираж 100 экз. Заказ № 3185

Актуальность. В последние десятилетия стресс является актуальным предметом исследований различных отраслей науки: биологии, медицины, психологии, социологии. Действие различных по силе, интенсивности и продолжительности факторов на организм может привести к возникновению повреждений со стороны различных органов и систем, в том числе, иммунной и нервной (Адо А.Д., 1993; Ветлугина Т.П. и др., 2000; Корнева Е.А., 2000; Полетаев А.Б. и др., 2000; Акмаев И.П., 2003; Девойно Л.В., 2004; Пальцев М.А., 2006; Abramov V.V. et al., 2001; Marques-Deak A. et al., 2004; Galinowski A., 2006; Goncharova L.B. et al., 2007).

Имеющиеся в литературе данные свидетельствуют о неоднозначном влиянии стресса на параметры иммунитета (Крыжановский Г.Н. и др., 2003; Магаева C.B. и др., 2005; Bauer Wu S.M, 2002; Godbout J.P. et al., 2006; Alford L., 2007; Alves G.J. et al., 2007; Freund G.G., 2009). Стресс изменяет иммунореактивность и увеличивает подверженность организма определенным заболеваниям, особенно к тем из них, возникновение которых тесно связано с нарушениями иммунологических механизмов защиты - инфекции, злокачественные опухоли, аутоиммунные заболевания и т.д. (Идова Г.В., 1999; Пшенникова М.Г., 2000; Акмаев И.Г., 2003; Фомичева Е.Е. др., 2006; Schneiderman N. et al., 2005; Godbout J.P., 2006; McEwen B.S., 2008; Dhab-har F.S., 2009). Многочисленными исследованиями доказано изменение популяци-онного состава лейкоцитов, фагоцитарной активности нейтрофилов, уровня циркулирующих иммунных комплексов и других параметров иммунитета под влиянием стрессогенных факторов (Горизонтов П.Д. и др., 1983; Семьянов A.B., 2002; Афанасьева И.А., 2007; Hassig A. et al., 1996; Satoh Е. et al., 2006).

Единство и сочетанность стресса и иммунитета, как универсальных биологических процессов, проявляются еще и в том, что достаточно интенсивный стресс той или иной физиологической системы сопровождается появлением специфических антител к структурам этой системы (Першин С.Б. и др., 1996; Корнева Е.А., 2003; Крыжановский Г.Н. и др., 2010; Miller А.Н., 1998; Moynihan J.A., 2003). Хорошо известно возникновение антител к мозговой ткани при эмоциональных, эмоционально-болевых и поведенческих стрессах, при неврозах; антител к мышечной ткани при стрессах, охватывающих нервно-мышечный аппарат. Сохранение антител при отсутствии антигенной стимуляции приводит к нарушению гомеостатиче-ской регуляции и, как следствие, к вторичной иммунной патологии (Крыжановский Г.Н. и др., 2003; Motzer S.A. et al., 2004; Dhabhar F.S., 2009).

Стресс оказывает влияние и на поведение, что проявляется формированием разнообразных психоэмоциональных нарушений: тревожность, депрессия, неврозы, нарушение памяти, бессонница, повышенная утомляемость и др. (Айрапетянц М.Г. и др., 1992; Симонов П.В., 1993; Хананашвили М.М., 1998).

Важную роль в регуляции стресс-реакции организма играют стресс-лимитирующие системы, одной из которых является ГАМК-ергическая. Она является неизбежным спутником стресс-синдрома - неспецифическим, как и сам стресс, тормозным механизмом, ограничивающим развитие этого синдрома. Естественные медиаторы стресс-лимитирующих систем или их стабильные химические аналоги повышают устойчивость организма к стрессорным повреждениям, оказывают профилактическое и терапевтическое действие за счет ограничения чрезмерной или «застойной» стресс-реакции. Поэтому очевидно, что перспективным принципом профилактики и коррекции стрессорных повреждений является применение средств, позволяющих ограничить чрезмерную активацию стресс-системы, повысить эффективность естественных стресс-лимитирующих систем, или средств, «подражающих» действию этих стресс-лимитирующих систем (Меерсон Ф.З. и др., 1988; Ковалев Г.В., 1990; Аведисова A.C. и др., 2000; Акопян В.П., 2003; Ахапкина В.И., 2004; Elenkov I.J. et al., 2006). Среди таких средств следует назвать, прежде всего, препараты, активирующие функцию ГАМК-ергической системы или дублирующие ее. Существенный интерес представляют так называемые ноотропные препараты, являющиеся главным образом производными гамма-аминомасляной кислоты (ГАМК): фенотропил, фенибут, пикамилон, аминалон, пирацетам и др. Они поддерживают энергетические и пластические процессы в ЦНС на высоком уровне и позволяют сохранить в условиях стресса адекватный паттерн внимания и когнитивных функций мозга. Кроме того, производные ГАМК повышают «активную» резистентность к стрессорам, что позволяет рассматривать эти препараты не только в качестве блокаторов стресс-реакции, но и как стресспротекторы (Аведисова A.C. и др., 2000; Ахапкина В.И., 2004; Краснов В.Н. и др., 2004).

В последние годы проводится интенсивное изучение роли нейроактивных аминокислот в иммунологических процессах. В частности, получены данные о влиянии ГАМК и ее производных на клеточное и гуморальное звенья иммунного ответа, показатели неспецифической резистентности организма (Беляева С.С., 2004; Самотруева М.А. и др., 2008; Alam S. et al., 2006; Reyes-Garcia M.G. et al., 2007; Bjurstôm H., 2008; Wang Y. et al., 2009). В этой связи, особую актуальность приобретают исследования, направленные на разработку средств, способных не только регулировать активность ГАМК-ергической стресс-лимитирующей системы, но и восстанавливать функции иммунокомпетентных клеток.

Среди производных ГАМК интерес представляет фенотропил, обладающий широким спектром фармакологических эффектов. Экспериментальными и клиническими исследованиями показано, что фенотропил улучшает когнитивные функции, оказывает психостимулирующее, антигипоксическое, анксиолитическое, антиагрессивное, противосудорожное, анальгетическое, антидепрессивное, вегето-стабилизирующее, анорексигенное действие, улучшает мозговое кровообращение, повышает работоспособность и устойчивость к экстремальным воздействиям (Ахапкина В.И. и др., 2004; Вахов В.П. и др., 2004; Малюгин В.Н. и др., 2004; Пор-тугалов В.Н. и др., 2004; Белоусов Ю.Б.и др., 2005). Кроме того, в условиях экспериментальной иммунопатологии была доказана иммунотропная активность фено-тропила, проявляющаяся его корригирующим влиянием на различные звенья иммунитета (Самотруева М.А., 2009; Тюренков И.Н. и др., 2009).

Фармакологами Волгоградского государственного медицинского университета и Астраханской государственной медицинской академии в тесном сотрудничестве с химиками Российского государственного педагогического университета имени А.И. Герцена (г. Санкт-Петербург)* ведется поиск среди новых и известных производных ГАМК, в том числе фенотропила, соединений с психоиммуномоду-лирующей активностью. Одним из этапов данного сотрудничества является изучение иммунотропных и психотропных свойств фенотропила и его новых производных в условиях цитостатического и стрессогенного воздействия, чему и посвящено настоящее исследование.

Выражаем искреннюю благодарность зав. кафедрой органической химии РГПУ им. А.И. Герцена, З.Д.Н., д.х.н., проф. Берестовицкой В.М., к.х.н., доц. Васильевой О.С. и всем сотрудникам кафедры за предоставленные для исследования вещества

Цель исследования: оценить психоиммуномодулирующую активность фе-нотропила и его производных в условиях цитостатического и стрессогенного воздействия.

Задачи исследования:

1. Провести в ряду новых производных фенотропила скрининг веществ, обладающих выраженными психоиммуномодулирующими свойствами в условиях цитостатического воздействия. Выбрать наиболее активное соединение.

2. Изучить особенности иммунореакгивности и психоэмоционального состояния у животных на различных моделях экспериментального стресса (острый иммобили-зационно-болевой, хронический информационно-физический, хронический информационный, а также хронический стресс, вызванный принудительным плаванием).

3. Изучить психоиммуномодулирующее действие фенотропила и его наиболее активного производного на различных моделях экспериментального стресса.

4. Изучить особенности стресс-реакции в условиях хронического информационно-физического воздействия, а также провести сравнительную оценку психоиммуно-модулирующих свойств фенотропила и его наиболее активного производного в половом аспекте.

5. Изучить возможные механизмы психоиммуномодулирующего действия фенотропила и его наиболее активного производного.

Научная новизна исследования. Впервые было выявлено, что:

- фенотропил и его производные (РГПУ-138, РГПУ-154, РГПУ-155, РГПУ-216) проявляют психоиммуномодулирующую активность в условиях циклофосфамид-ной (ЦФА) иммунодепрессии. Наиболее активным веществом по результатам скрининга является соединение РГПУ-138;

- фенотропил и РГПУ-138 обладают психоиммуномодулирующей активностью в условиях воздействия различных видов экспериментального стресса (острый им-мобилизационно-болевой, хронический информационно-физический, хронический информационный; а также хронический стресс, вызванный принудительным плаванием);

- половая принадлежность определяет особенности иммунного и психоэмоционального реагирования, а также направленность фармакологической активности фенотропила и РГПУ-138 у животных, подвергшихся хроническому информационно-физическому стрессу;

- фенотропил и РГПУ-138 устраняют изменения перекисного окисления липидов и активности каталазы в иммунокомпетентных органах, гипоталамической области головного мозга в условиях воздействия различных видов экспериментального стресса;

- одним из механизмов психоиммуномодулирующего действия фенотропила и РГПУ-138 является влияние на гипоталамическую область головного мозга, а также способность восстанавливать уровень сывороточных ИЛ-10 и ИЛ-4;

- иммунотропный эффект фенотропила на Т-зависимое звено иммуногенеза реализуется, вероятно, через ГАМКд-бензодиазепиновый ионофорный комплекс, на В-зависимые иммунные реакции - через ГАМКв-рецепторы.

Научно-практическая значимость работы. Тема диссертационного исследования является составной частью плана совместной научно-исследовательской работы Астраханской государственной медицинской академии и Волгоградского государственного медицинского университета.

Результаты, полученные при изучении иммуномодулирующей активности фенотропила и его новых производных указывают на перспективность дальнейшего поиска веществ с иммунотропными свойствами в ряду производных нейроак-тивных аминокислот. Комплексная оценка психо- и иммунотропных свойств фенотропила и его производных в условиях цитостатического воздействия позволяет выделить вещество под лабораторным шифром РГПУ-138, обладающее выраженным психоиммуномодулирующим действием. Результаты изучения активности РГПУ-138 на фоне воздействия различных стрессогенных факторов демонстрируют перспективность создания на его основе эффективного средства коррекции стресс-индуцированных нейроиммунных нарушений. Доказанное в работе психо-иммуномодулирующее действие фенотропила позволяет позиционировать препарат как психоиммуномодулятор, применение которого будет способствовать оптимизации фармакотерапии патологических состояний, развивающихся на фоне стресса.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Фенотропил и его новые производные РГПУ-138, РГПУ-154, РГПУ-155, РГПУ-216 проявляют выраженное психоиммуномодулирующее действие в условиях

ЦФА-иммунодепрессии. Наиболее активными являются фенотропил и его аналог под лабораторным шифром РГПУ-138.

2. Степень и направленность нарушений иммунитета и психоэмоционального состояния животных зависят от вида, продолжительности стрессогенного воздействия, а также от половой принадлежности организма и проявляются как активацией, так и угнетением со стороны нервной и иммунной систем.

3. Психоиммуномодулирующая активность фенотропила и РГПУ-138 определяется видом, продолжительностью стресса, половой принадлежностью организма.

4. Психоиммуномодулирующее действие фенотропила и РГПУ-138 определяется, вероятно, влиянием на гипоталамическую область головного мозга, а также способностью восстанавливать уровень сывороточных ИЛ-1(3 и ИЛ-4.

5. Иммунотропный эффект фенотропила обусловлен, вероятно, влиянием на ГАМКА-бензодиазепиновые и ГАМКв-рецепторы иммунокомпетентных органов и эффекторных иммунных клеток.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на конференциях: III международная медицинская научная конференция молодых ученых и студентов (Архангельск, 2010); «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург, 2010); 6-я Российская конференция «Нейроиммунопатология» (Москва, 2010); XXI Съезд Физиологического общества им. И.П. Павлова (Москва-Калуга, 2010); Международная научно-практическая конференция «Физиологические механизмы адаптации человека» (Тюмень, 2010); III общероссийская научная конференция «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Сочи, 2010); Международная научно-практическая конференция «Фундаментальные и прикладные проблемы стресса» (Витебск, 2010).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 работ, из них 6 -в журналах, рецензируемых ВАК; получен патент РФ на изобретение № 2432949 от 10.11.2011.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения и обсуждения результатов собственных исследований, выводов. Общий объем диссертации 181 страница с 41 таблицей и 28 рисунками. Список литературы включает 330 источников, в том числе 159 иностранных.

ВЫВОДЫ

1. Фенотропил и его новые производные РГПУ-13 8, РГПУ-154, РГПУ-155 и РГПУ-216 в условиях ЦФА-иммунодепрессии оказывают выраженное психоиммуномодулирующее действие, уменьшая проявления иммунной недостаточности и нарушения психоэмоционального состояния. Наиболее активными являются фенотропил и его аналог под лабораторным шифром РГПУ-138.

2. Воздействие острого иммобилизационно-болевого стресса сопровождается активацией клеточного (РГЗТ) и угнетением гуморального (РПГА) звеньев иммунитета. Введение фенотропила и соединения РГПУ-138 оказывает корригирующее действие на показатели РГЗТ- и РПГА-тестов.

Хроническое стрессогенное воздействие (информационно-физическое, информационное; стресс, вызванный принудительным плаванием) приводит к активации клеточного и гуморального звеньев иммунитета. Влияние соединения РГПУ-138 выражается в еще большей стимуляции показателей клеточной иммунореактивности (РГЗТ) в условиях хронического информационного воздействия, а также при его сочетании с физической нагрузкой. Фенотропил проявляет иммуномодулирующую активность лишь на фоне хронического информационного стресса и стресса, вызванного принудительным плаванием, уменьшая гиперреактивность клеточного звена (РГЗТ). На модели хронического стресса, вызванного принудительным плаванием, фенотропил способствует восстановлению показателей гуморального звена иммунитета (РПГА).

3. Воздействие различных видов стресса (иммобилизационно-болевой; информационный, принудительное плавание, их комбинация) сопровождается формированием тревожно-депрессивного состояния; при этом на фоне острого стресса отмечается угнетение локомоторной и исследовательской активности, тогда как при хронических видах стресса - двигательная гиперреактивность.

Фенотропил и соединение РГПУ-138 при остром и хронических вариантах воздействия проявляет психомодулирующее (анксиолитическое и антидепрессивное) действие. При остром иммобилизационно-болевом стрессе наиболее активен фенотропил; при хроническом информационном - РГПУ-138; на фоне хронического информационно-физического и хронического стресса, вызванного принудительным плаванием - в равной мере оба изучаемых вещества.

4. Особенности формирования стресс-реакции и выраженность психоиммуномодули-рующей активности фенотропила и РГПУ-138 при сочетанном действии информационной и физической нагрузок зависят от половой принадлежности: для самок характерна активация клеточного (РГЗТ) и гуморального (РПГА) звеньев иммунного ответа; для самцов - угнетение гуморального звена. На фоне формирования состояния повышенного эмоционального напряжения у самок наблюдается двигательная гиперреактивность; у самцов - подавление всех видов активности (локомоторной, исследовательской). Соединение РГПУ-138 оказывает стимулирующее влияние на клеточное звено иммунного ответа (РГЗТ) независимо от пола; а также восстанавливает у самцов процесс антите-лообразования (РПГА). Фенотропил, не проявляя иммуномодулирующей активности у самок, у самцов на фоне угнетения клеточных реакций (РГЗТ) стимулировал антителооб-разование (РПГА). Фенотропил и соединение РГПУ-138, уменьшая нарушения психоэмоционального состояния у самок и самцов, проявляют психомодулирующее действие.

5. Психоиммуномодулирующее действие фенотропила и соединения РГПУ-138 определяется регулирующим влиянием на гипоталамическую область головного мозга, а также способностью восстанавливать уровень сывороточных ИЛ-10 и ИЛ-4.

6. Иммунотропный эффект фенотропила на Т- зависимое звено иммуногенеза реализуется, вероятно, через ГАМКд-бензодиазепиновый ионофорный комплекс, на В-зависимые иммунные реакции - через ГАМКв-рецепторы.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Доказанная в проведенном исследовании психоиммуномодулирующая активность фенотропила, проявляющаяся в условиях цитостатического и стрессогенного воздействия, позволяет рекомендовать его при осложнениях цитостатической терапии и стресс-индуцированных нарушениях иммунитета, что расширяет перечень показаний к назначению препарата.

2. Полученные в ходе исследования данные о способности нового аналога фенотропила под лабораторным шифром РГПУ-138 уменьшать нарушения иммунореактивности и психоэмоционального состояния, позволяют рассмотреть его как основу для создания нового лекарственного препарата с психоиммуномодулирующим действием.

3. Зависимость стресспротекторной активности фенотропила и соединения РГПУ-138 от половой принадлежности организма определяет необходимость дальнейшего проведения изучение фармакологического действия веществ в половом аспекте.