Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Фенотипические характеристики клеток и строение экстрацеллюлярного матриса в плеоморфной аденоме слюнных желез

V . 0 О»

Г» "" ' • ''

1» ' ' А

,) и

МОСКОВСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи УДК: 616.316-006.03/.04-091.8-092

ИВАНОВА Светлана Андреевна

ФЕНОТИПИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

КЛЕТОК И СТРОЕНИЕ ЭКСТРАЦЕЛЛЮЛЯРНОГО МАТРИКСА В ГЛЕОМОРФНОЙ АДЕНОМЕ СЛЮННЫХ ЖЕЛЕЗ (Иммуногистохимическое исследование)

(14.00.15 — патологическая анатомия)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА — 1997г.

Работа выполнена в Московском медицинском стоматологическом институте (ректор института — академик РАМ1 профессор Е.И.СОКОЛОВ).

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор А.А.ЧУМАКОВ доктор медицинских наук Б.В.ШЕХОНИН

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.П.БЫКОВА доктор медицинских наук, профессор В.П.ТУМАНОВ

Ведущее учреждение:

Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится «_»_1997 г

в_часов на заседании Специализированного Учёного Совета

Д.084.08.03 при Московском медицинском стоматологическом институте (103473, Москва, ул.Делегатская, д.20/1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (125206, Москва, ул.Вучетича, д. 10 «А»),

Учёный секретарь Специализированного Учёного Совета доктор медицинских наук, профессор

Б.М.УРТАЕВ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Плеоморфная аденома, долгое время носившая название "смешанная опухоль", привлекала к себе внимание исследователей с конца XIX века, когда были открыты ее необычные черты: сочетание эпителиальных структур с тканями, имеющими мезенхимальный вид (слизистый, хрящеподобный). Тем не менее эта опухоль, несомненно, представляющая интерес с точки зрения как оральной (она является самым распространенным среди новообразований слюнных желез [Солнцев A.M., Колесова И.А, 1991]), так и общей патологии, до сих пор служит объектом дискуссий. Прежде всего, в наше время, когда вопросы взаимодействия клетки со средой являются одной из интереснейших областей и предметом рассмотрения молекулярной биологии, биохимии и патологии, почти совершенно отсутствуют иммуногистохимические исследования строения экстрацел-люлярного матрикса (ЭЦМ) плеоморфной аденомы слюнных желез как одного из самых необычных новообразований человеческого организма.

Помимо отсутствия данных о строении ЭЦМ плеоморфной аденомы слюнных желез, сам орган, в котором она возникает, слюнные железы, остается до сих пор недостаточно исследованным. Неполны наши сведения относительно компонентов ЭЦМ в различных структурах слюнных желез (ацинусах, протоках), а также фенотипических характеристик составляющих ее клеток. Дефицит информации об этом призвано также восполнить настоящее исследование, с тем, чтобы после определения нормальных фенотипов клеток и присутствующих в ЭЦМ компонентов произвести сравнение с таковыми в плеоморфной аденоме слюнных желез.

Широко обсуждаются вопросы гистогенеза плеоморфной аденомы слюнных желез. После того как усилиями отечественного автора [В.Е.Цымбал, 1938] в опытах с эксплантацией опухолей было убедительно доказано, что так называемые смешанные опухоли имеют эктодермальное происхождение, в настоящее время эта точка зрения разделяется практически всеми специалистами. Однако остается неясным, какие именно эпителиальные клетки (резервные, вставочные, выводных протоков) дают начало их возникновению. До сих пор дискутируется происхождение этой опухоли из протокового эпителия, традиционно считающегося источником регенерации ткани слюнной железы у взрослого человека (J.Batsakis, 1983). В последнее время возникла тенденция придавать значение в гисто- и морфогенезе плеоморфной аденомы миоэпителиальным клеткам (МЭК) [Н.Ш.Шамсутдинов, 1991; I.Dardrick, 1982; Palmer, 1984; H.Y.Kahn et al., 1985]; ультраструктурными исследованиями подтверждается участие модифицированных МЭК в синтезе компонентов ЭЦМ [А.К.Салман, 1993]. Однако имеются иммуногистохимические данные о том, что клетки плеоморфной аденомы, которые с точки зрения световой и электронной микроскопии имеют признаки эпителиальных и миоэпителиальных, в действительности несут маркеры, которые не позволяют полностью отнести их к эпителиальному или мезенхимальному фенотипу [В.А.Гельштейн, Т.А.Чипышева и соавт. 1989; J.Caselitz, 1989]. Тем не менее, выводы, которые делают на основании этих фактов, различными единого мнения на эту проблему нет.

1

Мы не встретили в литературе иммуногистохимических исследований, позволяющих сделать вывод.о том, как отражается клеточный фенотип на синтезе компонентов ЭЦМ. Имеются лишь единичные работы, посвященные этой теме, взятой в довольно узком аспекте, как-то: выявление протеина Б-ЮО и коллагена II типа в хондроидных зонах плеоморфной аденомы слюнных желез [С.ЬапсИгн, 1991], в то время как выявление других типов коллагена проводилось всего лишь однократно [Б.К.Р.ипе, 1989], к тому же не иммуногистохимическим методом, который является наиболее перспективным в современной патологии, а окраской пикросириус-гематоксилином. Исследования компонентов экстрацеллюлярного матрикса смешанных опухолей других органов - кожи, молочной железы [А.РгапсЫ. е1 а1., 1995; К.Ага, К.иеЬага, У.К'а£а1,1995], - по нашему мнению, могут быть полезны в установлении общих закономерностей строения, гисто- и морфогенеза смешанных опухолей, однако эти данные не могут быть механически перенесены на плеомор-фную аденому слюнных желез и, следовательно, не способны дать исчерпывающую характеристику имеющихся компонентов ее ЭЦМ.

Следует также заметить; что при исследовании плеоморфных аденом ранее обращалось большое внимание на определенные участки, выделяющиеся необычностью строения (хондроидные, миксоидные зоны), в то время как другие (фиброзные структуры) практически игнорировались. Мы намерены восполнить этот недостаток и определить характер фиброзной ткани в этих областях, их сходство или отличие от соединительной ткани нормальных слюнных желез, а также выяснить фенотип продуцирующих ее клеток.

Все отмеченное выше послужило основанием для проведения настоящей

работы.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью исследования является определение неопластической трансформации в плеоморфной аденоме слюнных желез, базируясь на фенотипических маркерах клеток и особенностях экстрацеллюлярного матрикса.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить фенотипические характеристики клеток и строение экстрацеллюлярного матрикса (ЭЦМ) в нормальных больших слюнных железах человека.

2. Исследовать фенотипы клеток в эпителиальных структурах, миксоидных и фиброзных зонах плеоморфной аденомы слюнных желез.

3. Выявить состав и строение ЭЦМ в различных структурах плеоморфной аденомы слюнных желез.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые дана полная характеристика ткани.нормальных больших слюнных желез с позиций фенотипических характеристик и компонентов ЭЦМ.

Впервые выявлены закономерности между фенотипами клеток и составом продуцируемого ими ЭЦМ.

Изложены соображения, касающиеся гистогенеза плеоморфной аденомы, а таТЬке общих гистогенетических теорий опухолей слюнных желез и вопросов общепатологического характера: неопластической трансформации, клеточной диф-ференцировки, влияния окружающей среды на реализацию фенотипа опухолевой клетки.

В работе использован иммуногистохимический метод выявления клеточного фибронектина с ЕД-А последовательностью, который, насколько нам известно из доступной литературы, не применялся для изучения опухолей слюнных желез.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ. Результаты настоящего исследования выявили, что иммуногистохимический метод может быть успешно применен для характеристики новообразований слюнных желез с перспективой дальнейшей научной работы.

Полученные результаты могут быть использованы в лекционном курсе и практических занятиях на кафедрах патологической анатомии при подготовке стоматологов.

ВНЕДРЕНИЕ. Результаты диссертационного исследования внедрены в практическую работу кафедры патологической анатомии Московского медицинского стоматологического института. Новые данные о фенотипических характеристиках клеток и строении ЭЦМ плеоморфной аденомы слюнных желез используются в учебном процессе при преподавании оральной патологии на стоматологическом факультете Московского медицинского стоматологического института.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации докладывались на конференции полодых ученых Московско! о медицинского стоматологического института (1996) на конференции кафедры патологической анатомии (1997).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 4 работы.

СТРУКТУРА И ОБЪЁМ ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 130 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, характеристики материала и методов исследования, четырех глав собственных исследований и обсуждения полученных результатов. Работа содержит 10 таблиц, 1 схему и 27 рисунков. Библиография включает 106 работ, из них 35 - отечественных и 71 -иностранных авторов, цитированных в работе.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Исследовали 14 образцов операционного материала плеоморфной аденомы подчелюстной и околоушной слюнных желез, а также нормальные подчелюстная и околоушная слюнные железы, полученные при ранних аутопсиях (до 3 часов после

смерти [). Образцы ткани замораживали в жидком азоте и серийно резали в крио-стате с толщиной срезов 5 мкм. Для иммуногистохимических исследований срезы фиксировали 5 мин в абсолютном ацетоне при комнатной температуре. Исследование проводилось методом непрямой иммунофлюоресценции с использованием стрептавидин-биотиновой системы (Amersham, UK). Идентификация клеток осуществлялась при помощи моноклональных антител против цитокератина 8 (Sigma, USA), тяжелых цепей миозина гладкомышечных клеток (ГМ К), И-калдесмона.тсаль-понина [12], виментина, десмина, РЕСАМ-1 (Dakopatts, Denmark). Исследование ЭЦМ проводилось при помощи поликлональных антител против коллагена I, III, IV, V типов, плазменного фибронектина, ламинина (Inpharm, Moscow) и клеточной формы фибронектина с ED-A последовательностью. При использовании метода двойной иммунофлюоресценции в ряде случаев применяли поликлональные кроличьи антитела против миозина ГМК. Для контроля на первом этапе реакции вместо специфических антител срезы инкубировали с нормальной сывороткой кролика или мыши в разведении 1/10 и 1/100 соответственно. Часть срезов из каждой серии фиксировали в формалине и окрашивали гематоксилином и эозином, а также по методу Vergoff для выявления эластических волокон.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Результаты клинического и патологогистологического исследований В соответствии с принятой в зарубежной литературе классификацией, мы разделяли пациентов на группы по декадам жизни. Из 14 пациентов 2 находились во 2-й декаде, 1 - в 3-й, 6 - в 4-й, 3 - в 6-й, 2 - в 7-й (старше 60 лет) (ТаблЛ).

ТАБЛИЦА 1 ВОЗРАСТ БОЛЬНЫХ ВО ВРЕМЯ ОПЕРАЦИИ

Декада

жизни 2 3 4 5 6 7

Число случаев 2 0 6 1 0 1

Среди оперированных больных отмечалось преобладание женщин: 10 из 14-и, что составляло 71,4%, мужчин было 4, т.е. 28,6%. Такое распределение согласуется с данными литературы [R.A.Willis, 1960; А.К.Салман, 1993]. Околоушная слюнная железа наиболее часто поражалась опухолевым процессом (9 случаев). Остальные возникали в подчелюстной железе (3 случая) и слюнных железах неба (2 случая).

Не наблюдалось никаких отличий между плеоморфными аденомами, происходившими из разных слюнных желез. Все исследованные опухоли отличались неоднородностью строения: в них наблюдались структуры, различные как по клеточному составу, так и по характеру экстрацеллюлярного матрикса. Мы

использовали, в соотвествии с классификацией А.К.Салмана [1993], подразделение опухолей на плеоморфные аденомы солидного и тубулярно-трабекулярного типа, причем 13 случаев относились к второму типу и только 1 - к первому. В соответствии с субклассификацией G.Seifert [1990] 5 плеоморфных аденом относились к подтипу 1,8 - к подтипу 2,1 - к подтипу 3, и не было отмечено ни одной опухоли, имеющей мономорфную дифференцировку, обусловившую бы отнесение ее к подтипу 4. В изученном материале нами были выделены следующие структуры плео-морфной аденомы (Табл.2).

2. Илшуногистохилшческое исследование тканей слюнных желез

Все исследованные ткани слюнных желез, как взятые от трупов, так и полученные в результате удаления опухолей слюнных желез, были единообразны по клеточным фенотипам и характеру экстрацеллюлярного матрикса и отличались от тканей пле-оморфной аденомы.

ТАБЛИЦА 2

Структуры плеоморфной аденомы, обнаруженные в исследованном материале

I. "Эпителиальный" компонент:

1) солидные пласты;

2) тубулярные (протокоподобные) структуры

3) трабекулярные структуры

4) очаги ороговения; } особые структуры

5) гиалинизированные участки.

II. "Мезенхимальный" компонент:

1) миксоидные зоны

2) хондроидные зоны

3) фиброзные зоны.

При исследовании, фенотипических маркеров клеток протоков и ацинусов было выявлено, что все клетки ацинарного и протокового эпителия содержат цитокера-тин 8 и не содержат h-калдесмона, кальпонина, виментина и десмина. Отличий в экспрессии цитокератина 8 между эпителиальной выстилкой вставочных, исчерченных и выводных протоков отмечено не было. Единственной чертой, отличавшей протоковый эпителий от ацинарного, было отсутствие в последнем РЕСАМ-1.

Иной, мезенхимальный по подбору определяемых маркеров, фенотип в нашем исследовании имели миоэпителиальные клетки, экспрессировавшие миозин ГМК и виментин, однако не экспрессировавшие цитокератин 8. Они также не содержали h-калдесмона, кальпонина, десмина.

Нив ткани слюнных желез, взятых от трупов, ни в тех, которые были получены в результате операции, не было отмечено клеток, которые имели бысмешанный фенотип, т.е. экспрессировали бы одновременно цитокератин 8 и виментин с миозином ГМК. Данные других авторов [J.Caselitz, 1987], согласно которым базальные клетки междольковых протоков могут содержать виментин, на нашем материале не нашли подтверждения.

Единственными анатомическими образованиями, содержавшими h-калдесмон, кальпонин, десмин, были сосуды, клетки медии которых экспрессировали данные маркеры.

В ЭЦМ ацинарно-вставочного отдела отмечалось значительное количество стро-. мального коллагена I, III, Утипов, причем коллаген V типа преобладал. Базальные мембраны содержали коллаген IV типа и ламинин с относительным преобладанием коллагена IV типа. Применение антител к фибрину дало равномерное окрашивание всех структур с наибольшей интенсивностью вокруг сосудов, что указывает на травматический характер операции. Антитела к плазменному фибронектину выявили относительно небольшое его количество в тканях нормальных слюнных желез. Клеточный фибронектин в тканях слюнных желез отсутствовал.

В междольковой соединительной ткани, опознаваемой по комплексам "выводной проток — артерия — вена — нервные стволы", выявлялось абсолютное преобладание стромальных коллагенов I и III типов и умеренное количество коллагена Утипа, который располагался преимущественно в стенках сосудов и оболочках нервных стволов; во-вторых, большее, чем в ацинарно-вставочном комплексе, содержание, плазменного фибронектина вокруг сосудов. По-видимому, отличия между ацинар-но-вставочным и междольковым ЭЦМ могут быть объяснены деятельностью фиб-робластов, наличие которых отмечено исключительно в междольковых перегородках; как представляется, они ответственны за выработку большого количества стромальных коллагенов I и III типов в данном регионе. Что же касается ацинарно-вставочного комплекса, то мы полагаем, что здесь ЭЦМ является продуктом деятельности исключительно эпителиальных и миоэпителиальных клеток.

Применение метода двойной метки показало, что клетки, имеющие фенотип МЭК, т.е. экспрессирующие виментин и миозин ГМК, всегда имели связь с базальными мембранами, располагаясь между ними и ацинарными или протоковыми клетками.

Таким образом, в нормальных слюнных железах все эпителиальные клетки ацину-сов и протоков экспрессируют цитокератин 8, но лишены виментина, миозина гладко'мышечных клеток (ГМК) и других маркеров ГМК. Напротив, миоэпители-альные клетки (МЭК) содержат виментин и миозин ГМК, не экспрессируют цитокератин 8 и некоторые фенотипические маркеры ГМК (десмин, h-калдесмон, каль-понин).

ЭЦМ ацинарно-вставочного комплекса и междольковый ЭЦМ нормальных слюнных желез имеехт свои особенности. В первом отмечается преобладание коллагена V типа, тогда как во втором — I и III типов. Коллаген IV типа и ламинин локализуются в базальных мембранах ацинусов и протоков.

При исследовании плеоморфной аденомы слюнных желез наблюдались следующие особенности.

3.Исследование "эпителиального"компонента слюнных желез

Практически во всех клетках структур, охарактеризованных в гл.З как эпителиальные, наблюдалось окрашивание с антителами против цитокератина 8. Главной особенностью "эпителиального" компонента плеоморфной аденомы слюнных желез, отличающей ее от нормальной ткани слюнной железы, была совместная экспрессия эпителиального и мезенхимальных фенотипических маркеров: цитокератина 8, виментина и миозина ГМК.

Клетки солидных пластов были единообразны по фенотипу: при повсеместном окрашивании с антителами, направленными против цитокератина 8, наблюдалось также окрашивание с антителами против миозина ГМК и виментина.

В трабекулярных структурах было отмечено более интенсивное и распространенное по сравнению с тубулярными окрашивание с антителами против миозина ГМК: распределение миозина ГМК почти совпадало с распределением цитокератина 8. Менее было выражено содержание виментина. В целом, здесь невозможно было выявить какую-либо закономерность, подобную тем, которые отмечались в прото-коподобном компоненте: расположение скоплений клеток, содержащих миозин и виментин одновременно либо только миозин ГМК или только виментин, при том что все они экспрессировали цитокератин 8, было хаотичным.

Клетки с признаками плоскоклеточной метаплазии, формирующие зоны ороговения, давали, как это можно было предположить, интенсивное окрашивание с ци-токератином 8, однако при этом в них отмечался виментин и миозин ГМК. Таким образом, использование Н.Ш.Шамсутдиновым наличия в плеоморфной аденоме

слюнных желез ороговевших жемчужиноподобных структур какдоказательства того, что в ее формировании принимают участие эпителиальные клетки, является не вполне корректным, т.к. мы можем говорить только о способности клеток со смешанным эпителиально-мезенхимальным фенотипом к образованию данных структур.

Мы можем констатировать, что подавляющее большинство клеток в "эпителиальных" структурах, независимо от своего строения, имело смешанный фенотип.

Что касается экстрацеллюлярного матрикса, то в эпителиальных структурах он был весьма скуден. Коллаген I и V типов отсутствовал. Коллаген IV типа и ламинин были единственными компонентами ЭЦМ, которые выявлялись постоянно. Они могли формировать подобия базальных мембран по периферии протокоподобных или трабекулярных структур, но, в целом, формирование базальных мембран являлось привилегией протокоподобных структур и не было свойственно солидным. Иногда мембраноподобные образования состояли только из коллагена IVтипа или только из ламинина. Отмечалось большое количество плазменного фибронектина; однако увеличение его содержания можно отнести на счет травматического характера операции. Окрашивание с антителами 1БТ-9 против клеточного фибронектина с ЕД-А последовательностью не наблюдалось.

Практически полное отсутствие коллагена I, III, Vтипoв и ламинина наблюдалось в зонах ороговения; антитела, направленные против них, демонстрировали только неспецифическое свечение с роговыми чешуйками. То же относится к плазменному фибронектину и фибрину. Коллаген IV типа также демонстрировал аутофлюо-ресценцию, однако отмечалось подобие образования тонких, извитых мембрано-подобных структур по периферии роговых зон.

Такое же отсутствие компонентов ЭЦМ наблюдалось в участках гиалинизирован-ной ткани. Фенотипы клеток данных областей не имели каких-либо отличительных особенностей.

Таким образом, было обнаружено, что интерстициальный коллаген и коллаген V типа в "эпителиальных" структурах опухоли отсутствуют. Коллаген IV типа и ламинин формируют базальные мембраны вокруг протокоподобных структур и не выявляются в участках солидного строения.

4.Исследоеание миксоидных зон

Среди всех исследованных мезенхимальных структур миксоидные зоны были, пожалуй, единственными, которые не отличались разнообразием клеточных маркеров. Наличие миозина ГМ К отмечалось только в единичных клетках, зато практически все клетки экспрессировали виментин, что совпадает с данными других исследователей р.СавеШг, М.ОвЬогп е1 а1., 1981; В.НВипк е1 а1., 1988]. Обнаружение клеток, экспрессирующих цитокератин 8, было крайне редким, к тому же они, как правило,

имели форму, напоминающую клетки эпителиальных пластов, что заставляло предположить артефакт; в целом, мы можем констатировать, что данный эпителиальный маркер несвойствен клеткам миксоидных зон. Окрашивание с антителами против h-калдесмона, кальпонина, десмина в опухолевых клетках миксоидных зон отсутствовало, наблюдаясь только в медии редких тонкостенных сосудов, находящихся в этих тканях. Отсутствовало также, как везде в ткани плеоморфной аденомы, окрашивание с иммуноглобулином РЕСАМ-1. Таким образом, клетки, традиционно описывающиеся как миоэпителиальные, не содержат такого характерного элемента цитоскелета, как миозин ГМК, и по фенотипу скорее напоминали фиб-робласты.

ЭЦМ миксоидных зон также не отличался богатством компонентов. Единственным среди коллагенов был коллаген IV типа, не формировавший базальных мембран, а располагавшийся в миксоидной ткани в виде фибриллярных образований. Коллагены I, III, Утипа находились только в сосудистой стенке. Ламинин в миксоидной ткани отсутствовал. Плазменный фибронектин диффузно откладывался в довольно больших количествах. Окрашивания с антителами к клеточному фибро-нектину с ЕД-А последовательностью отмечено не было.

5. Исследование фиброзных зон

Нами получены данные, касающиеся фиброзных зон, которые, насколько нам известно, ранее не подвергались иммуногистохимическому исследованию. Их вытянутые клетки, напоминающие гладкомышечные или фибробласты, содержали полный набор фенотипических маркеров, характерных для клеток слюнных желез: они содержали цитокератин 8, миозин ГМК и виментин, причем наряду с выявлением цитокератиновых полипептидов в веретенообразных клетках, они наблюдались также в отдельных клетках, напоминающих протоковый эпителий и располагающихся кластерами, которые также отмечаются в этих зонах. Окрашивания с антителами против десмина, h-калдесмона и кальпонина не происходило.

В ЭЦМ фиброзных структур отмечалось интенсивное окрашивание с антителами, направленными против стромальных коллагенов I и III при малом содержании в нем коллагена V типа (присутствовал исключительно в стенке сосудов); стромаль-ные коллагены имели строение хаотичных пучкообразных структур. Коллаген IV типа не формировал базальные мембраны, а выявлялся в виде множества фибриллярных структур, которые локализовались вместе с интерстициальным коллагеном. Окрашивания с антителами против ламинина в фиброзных структурах не наблюдалось. Отмечалось высокое содержание плазменного фибронектина в ЭЦМ фиброзных зон, где он давал интенсивное окрашивание. Характерным признаком фиброзных зон, не встречавшихся в других отделах плеоморфной аденомы слюнных желез, было наличие клеточного фибронектина с ЕД-А последовательностью, случаях, фибрин равномерно окрашивал все структуры, концентрируясь вокруг сосудов.

Итак, нами установлено, что в нормальной слюнной железе все эпителиальные клетки ацинусов и протоков имели одинаковый эпителиальный фенотип и экспресси-ровали цитокератин 8. Все МЭК имели мезенхимальный фенотип и экспрессиро-вали миозин ГМК и виментин. Фибробласты экспрсссировали виментин и обнаруживались только в междольковой соединительной ткани. Десмин, h-калдесмон и кальпонин присутствовали только в медии сосудов. Иммуноглобулин РЕСАМ-1 содержался только в протоковом эпителии. В ЭЦМ нормальной ткани слюнных желез присутствовали коллаген I, III, IV, V типов и ламинин; отмечалось умеренное количество плазменного фибронектина; клеточный фибронектин отсутствовал. ЭЦМ ацинарно-вставочного комплекса и междольковый ЭЦМ имели свои особенности: в первом отмечалось преобладание коллагена V типа, тогда как во втором -1 и III типов.

При исследовании плеоморфных аденом был обнаружен фенотипический полиморфизм клеток и некоторые особенности строения ЭЦМ в различных структурах опухоли. В эпителиальных по светооптическому строению структурах имелись признаки как эпителиальной, так и мезенхимальной дифференцировки: все клетки экспрессировали цитокератин 8, многие клетки содержали также виментин, а часть клеток экспрессировала миозин ГМК. Десмин, h-калдесмон и кальпонин везде в ткани плеоморфной аденомы локализовались исключительно в медии сосудов. Синтез компонентов ЭЦМ в эпителиальных структурах почти отсутствовал, за исключением коллагена IVтипа и ламинина. В миксоидных зонах преобладали признаки эпителиальной дифференцировки: все клетки экспрессировали виментин, однако миозин ГМК отмечался только в единичных клетках. Признаки эпителиальной дифференцировки были мало выражены, так как только отдельные клетки содержали цитокератин 8. Синтез интерстициального коллагена, коллагена Vтипа и ламинина в этих участках был минимальным, но выявлялся коллаген IV типа в виде хаотично расположенных фибриллярных структур. Фенотип клеток в фиброзных структурах также был довольно однородным, причем наблюдались признаки как эпителиальной, так и мезенхимальной дифференцировки: практически все клетки экспрессировали цитокератин 8 одновременно с виментином и миозином ГМК, но не содержали десмин, h-калдесмон и кальпонин. При этом отмечалось наличие в ЭЦМ коллагена I и III типов, а также плазменного и клеточного фибронектина. Наблюдалось также высокое содержание и атипичное расположение коллагена IV типа в ЭЦМ, где он был представлен в виде множества фибриллярных структур, локализующихся вместе с интерстициальным коллагеном. Нами показано, что в нормальной ткани слюнных желез имеются две группы клеток, четко различающихся по своим промежуточным филаментам: эпителий и ми-оэпителий. ЭЦМ слюнных желез является продуктом деятельности их клеток, имеющих эпителиальное происхождение, за исключением междолькового ЭЦМ, имеющего, по-видимому, смешанное происхождение из-за присутствия в этом регионе фибробластов.

Клетки ацинарно-вставочного региона (железистые, протоковые эпителиальные

клетки и миоэпителий) в норме способны вырабатывать как компоненты базаль-ных мембран (коллаген 1Утипаи ламинин), так и коллагены I, III, V типов. Четкое подразделение ткани слюнных желез на два отдела, отличающиеся по характеру ЭЦМ, — ацинарно-вставочный и междольковый, — очевидно, соответствует характеру функциональной роли каждого из отделов.

Наши данные свидетельствуют о том, что в различных по гистологическому строению структурах опухоли была обнаружена фенотипическая гетерогенность клеток, что отражалось на особенностях строения ЭЦМ. Интересной чертой фенотипичес-ких характеристик клеток и продуцируемых компонентов ЭЦМ было то, что связь между ними, как показано выше, существует, однако она не является абсолютной.

Все клетки плеоморфной аденомы не могут быть названы в полной мере ни эпителиальными, ни миоэпителиальными как по характеру фенотипических маркеров, так и по способности к синтезу компонентов ЭЦМ, а являются в первую очередь опухолевыми клетками, имеющими свои особые характеристики. В настоящее время сформировалась точка зрения о едином происхождении эпителиальных клеток слюнных желез и МЭК из одной клетки-предшественника, а наличие в опухолевых клетках плеоморфной аденомы ультраструктурных и фенотипических признаков МЭК может быть рассмотрено как проявление клеточной трансформации. В развивающейся опухоли взаимодействие трансформированных клеток друг с другом, с компонентами ЭЦМ и различными гуморальными факторами приводит к фенотипическим модификациям, вызывая клеточный полиморфизм [О.Ь.Оех1ег, Р.Са1аЬге$1, 1982]. При этом подвергаются ревизии привычные представления об ограниченности возможных трансформаций рамками одного зародышевого листка.

Известно, что опухолевые клетки способны выделять факторы, стимулирующие синтез коллагена и фибронектина фибробластами предсуществующей стромы, что в ряде случаев приводит к увеличению синтеза компонентов ЭЦМ — десмоплазии [Б.Н.Вагеку е1 а!., 1982]. Мы предполагаем, что усиление продукции гликозаминог-ликанов в миксоидных зонах [.ГЛакеисЫ, М.БоЬие й а1., 1978], выработка коллагена II типа [О.ЬапсПш, 1991], а также описанные в настоящей работе особенности строения ЭЦМ в фиброзных зонах, и десмоплазия — явления одного порядка, но при этом происходит не влияние опухолевых клеток на стромальные фибробласты с усилением продукции коллагенов и других компонентов ЭЦМ, а взаимодействие между неопластическими клетками с тем же результатом.

В заключение следует сказать, что по отношению к плеоморфной аденоме такие термины, как "эпителиальные структуры", "эпителиальные" и "миоэпителиаль-ные" клетки могут применяться лишь условно, поскольку она представлена в основном клетками с признаками как эпителиального, так и мезенхимального фенотипа. Очевидно, что характер ЭЦМ, синтезируемого в различных структурах плеоморфной аденомы, может служить дополнительным критерием клеточной трансформации.

выводы

1. В нормальных слюнных железах все эпителиальные клетки ацинусов и протоков экспрессируютцитокератин8, но лишены виментина, миозина гладко-мышечных клеток (ГМК) и других маркеров ГМК. Напротив, миоэпителиальные клетки (МЭК) содержат виментин и миозин ГМК, не экспрессируют цитокератин 8 и некоторые фенотипические маркеры ГМК (десмин, h-калдесмон, кальпонин).

2. ЭЦМ ацинарно-вставочного комплекса и междольковый ЭЦМ нормальных слюнных желез имеет свои особенности. В первом отмечается преобладание коллагена V типа, тогда как во втором -1 и III типов. Коллаген IVтипа и ламинин локализуются в базальных мембранах ацинусов и протоков.

3. В плеоморфной аденоме в эпителиальных по гистологическому строению структурах имеются признаки как эпителиальной, так и мезенхимальной диффе-ренцировки. При этом все клетки экспрессируют цитокератин 8, многие клетки содержат также виментин, а часть клеток экспрессирует миозин ГМК.

4. Интерстициальный коллаген и коллаген Ути па в эпителиальных структурах опухоли не обнаружены. Коллаген IV типа и ламинин формируют базальные мембраны вокруг протокоподобных структур и не выявляются в участках солидного строения.

5. В миксоидных зонах преобладают признаки мезенхимальной дифферен-цировки, так как все клетки экспрессируют виментин. В отличие от МЭК, миозин ГМК выявляется только в единичных клетках.

6. В миксоидных зонах отсутствуют исследованные компоненты ЭЦМ, за исключением коллагена IV типа, который местами представлен в виде хаотично расположенных фибриллярных структур.

7. В фиброзных структурах наблюдаются признаки как эпителиальной, так и мезенхимальной дифференцировки. Практически все клетки экспрессируют цитокератин 8 вместе с виментином и, подобно МЭК, содержат миозин ГМК при отсутствии десмина, h-калдесмона и кальпонина.

8. В ЭЦМ фиброзных структур преобладает коллаген I и III типов, содержится плазменный и клеточный фибронектин. Коллаген IVтипа представлен в виде множественных фибриллярных структур.

9. К клеткам плеоморфной аденомы слюнных желез термины "эпителиальные" и "миоэпителиальные" могут применяться лишь условно, т.к. все они являются продуктом неопластической трансформации с различной ее выраженностью. Последнее проявляется в пестроте гистологического строения, сложной феноти-пической характеристике и составе ЭЦМ.

список

работ, опубликованных по теме диссертации

1. Иванова С.А., Шехонин Б.В., Чумаков A.A. Фенотипические характеристики клеток и строение экстрацеллюлярного матрикса в плеоморфной аденоме слюнных желез. //Труды 1-го съезда Российского общества патологоанатомов (2124 января 1997 г.). - М. - 1996. - Стр.83-84.

2. Иванова С.А., Шехонин Б.В., Чумаков A.A. Фенотипические модификации клеток и экстрацеллюлярный матрикс в плеоморфной аденоме слюнных желез (иммуногистохимическое исследование). //Сборник научных работ (Московскому медицинскому стоматологическому институту — 75 лет). — М., 1997. — Стр.9394.

3. Иванова С.А., Шехонин Б.В., Чумаков A.A. Фенотипические характеристики клеток и строение экстрацеллюлярного матрикса в плеоморфной аденоме слюнных желез. //Арх.пат. — 1997. — №4. — Стр.49-55.