Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Фазовая динамика показателей клеточного иммунитета при остром и хроническом гепатитах В

РГБ ОД

1 п АПР 1935

■ МЖ1СТЕРС1ВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РЕСПУБМКЛ КАЗАХСТАН АЛМАШСКЙй ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИН®ИИ ИНСТИТУТ имени С.Д. АС8ЕНДИЯРОВА

На правах рукописи УДК:616.36-002.Т.2-С97

ЗЛЗЕ-ХРЛПУНОЗА Марина Анатольевна

БАЗОВАЯ ДИНАМЛКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КЛЕТОЧНОГО ИММУНИТЕТА ПРИ ОСТРОМ Л ХР0НЛ4ЕСК0М ГЕПАТИТАХ В

14.ОС. 1С - инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

С

у: . \

Алматы - 1995

Работа выполнена врСемипалатинском государственном ме-. дииинском институте

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Р.Л.ИВАНОВА

кандидат медицинских наук А.X.СЬКЕРБАЕБ

Научный консультант:

заслуженный деятель науки Республики Казахстан,

доктор медицинских наук, профессор Е.С.БЕЛОЗЕРСВ

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор И.Л.КАСАТКЛНА

кандидат медицинских наук Н.Н. НУРКйНА

Ведущее учреждение: Казахский научно-исследовательский институт эпидемиологии, микробиологии и инфекционных заболеваний.

Зашита диссертации состоится "_"_ 1995 г.

в "_" часов на заседании специализированного Совета

Д 09.01.01 при Алматинском государственном медицинском институте ( 480012, г. Алматы, ул. Толе Би, 88 )

С диссертацией можно ознакомиться е библиотеке Алма-тинского государственного медицинского института

Автореферат разослан " 1995 г.

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат медицинских наук

Т. А. СУЛТАНША

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Острые и хронические поражения печени вирусной этиологии являются одной из наиболее распространенных групп инфекционных заболеваний, характеризующихся глобальностью распространения, многообразием клинических вариантов, высоким удельным весом остаточных явлений, сопровождающихся длительной нетрудоспособностью, нередко быстрой инвалидизацией и представляющих серьезную проблему для здравоохранения всех стран мира

U.Zt 1? .Д967; St.2i.iiz ■•! . ,I987;.4.ti..ii.';ri J.5. г.;., 1988; Михайлов -1. Л.,IS9C; Логинов A.C. ,1991; Белозеров Е.С., Огай Е.А.,1392; Евник д. А. с соавт.,1992; Белозеров Е.С.,1994).

По данным г !.r\zxi С. '¿1 з.г. ( 1957 )t в МИре ежегодно заболевают острым вирусным гепатитом В более 2 млн.человек и около % человечества страдает хроническим гепатитом (.'f«o¿л " > з.а. ., 1985 ). Наиболее тяжелым по течению и склонным к хронизации является вирусный гепатит В ( Негреску Г.В. с соавт.,1992 ). Существование бессимптомного вирусоносительства затрудняет борьбу с этим заболеванием. Острые гепатиты вирусной этиологии являются основной причиной формирования хронических заболеваний печени. 67-70$ всех форм хронических гепатитов имеет вирусное происхождение ( Логинов A.C.,Елок Ю.Е.,1987; Рысс Е.А.,$ишзон-?ысс ta.il., 1991 ).

Несмотря на большое число клинико-иммунологических исследований по изучению различных иммунологических гестов у больных с различными формами острого вирусного гепатита В и его исходами в настоящее время нет единого мнения об основных звеньях имму-нопатогенеза, определяющих характер течения инфекционного процесса и его исходов. Чрезвычайно важным аспектом для практической гепатологии является поиск клинических, лабораторных, инстру-

- А -

ментальных критериев прогнозирования тяжести течения болезни, возможности хронизации процесса, дифференциальной диагностики различных форм хронических гепатитов. В последние годы поиску та ких критериев посвящен ряд исследований ( Елюгер А.Ф. с соавт., I98Y; Крупникова 2.3. с соавт., 1968; Федорченко C.B.,1991;Яко-венко 3.П.,1991; Логиков A.C., 1992). К сожалению, до настоящего времени не найдены способы, которые могли бы использоваться для прогнозирования тяжести течения вирусного гепатита В.

Ряд авторов исследовал возможность использования для прогнозирования течения вирусного гепатита В и его исходов иммунологических показателен ( Белозеров E.G. с соавт.,1981-1994; Асфан-диярова Н.С. ,1967; Bxiiiizti. У. F. .,1986; Курманова К.Б. с соавт 1990; Бокарев A.A. с соавт. ,1992). Имеются единичные работы, указывающие, что одним из Факторов, определяющих течение острого гепатита В и его хронизацию является нарушение Функциональной активности иммунорегуляторных клеток и связанным с ними характером формирования специфической иммунологической перестройки организма к антигенам возбудителя "г.^г 5. е.t. -".,1985; Логинов А.С.-,1991 ; Хаитов P.M. .Маркова Т.П. ,1992). Поиск адекватных методов оценки антигенспецифической реактивности, позволяющих решать вопросы течения и прогнозирования острого гепатита В, а также дифференциальной диагностики острых и хронических гепатитов В приобретает большое значение, которое и диктует необходимость продолжения работы в данном направлении.

Цель исследования. Выявить диагностическое, прогностическое значение разовых изменений показателей клеточного иммунитета у больных острым vi хроническими гепатитами В.

Основные задачи исследования:

I. Проанализировать сроки формирования хронических НВУ-индуцированных гепатитов после перенесенной острой Фазы.

2. Определить прогностическую значимость изменений показате-ек фагоцитарной активности нейтро^ильных гранулоцитов у больных ¡строй и хроническими формами НВУ-вирусной инфекции.

3. Изучить клиническую и прогностическую значимость количест-¡енных и функциональных показателей клеточного иммунитета в ходе ттологического процесса при остром и хронических гепатитах В.

4. На основании комплексного изучения показателей иммунитета разработать критерии тяжести, прогнозирования течения и исхо-аа гепатита В.

Научная новизна. 'Лз числа всех наблюдаемых больных хроническим гепатитом В у 75,5,';- больных хроническим активным гепатитом и у 66,7/с больных хроническим персистирующим гепатитом регистрировалось наличие острой фазы в анамнезе. Чаще хронический гепатит В формируется в течение первого года после перенесенной острой фазы - 62,1а, у 25,8/' больных -втечение последующих пяти лет.

Дана оценка фагоцитарной активности гранулоцитов в острый . период вирусного гепатита В как прогностического критерия течения и исхода заболевания.

Впервые, используя модифицированный вариант определения аутерозеткообразующих клеток ( ауто-РОК) в период реконвалес-иениип у больных острым вирусным гепатитом В выявлены дополнительные критерии прогноза заболевания. Нарастание ауто-РОК трактуется как благоприятным признак клинико-иммунодогического выздоровления, отсутствие прироста ауто-РОК в период реконвалесценции свидетельствует о риске хронизации.

Выявлено, что при остром вирусном гепатите В формируется сенсибилизация к антигенам вируса гепатита В у большей части больных уже на первой неделе болезни. Сенсибилизация к липопро-

теиду печени человека начинает выявляться лишь на третьей-четвертой неделе. При ХПГ выявлено преобладание сенсибилизации к вирусным антигенам, а при ХАГ - к липопротелду печени человека. Активность' супрессоров ГЗТ у большинства больных ХАГ снижена, а у больных ХПГ отмечается преимущественно нормальная супрессор-ная активность к ЛПЧ.

Практическая значимость работы. Результаты работы позволя ют рекомендовать исследование Фагоцитарной активности гранулоци-тов в период разгара острого вирусного гепатита В как дополнительный тест для прогнозирования течения и исхода заболевания.

Для определения сенсибилизации, блокированном супрессорны-ми Факторами, предложен модифицированный тест РТМЛ с облучением крови в экспозиционной дозе 258 мКл/кг, который повышает объективность метода.

Как дополнительны/ новый ди^еренииально-диагностический лабораторный критерии, для разделения НЗУ-индуцлрованного ХПГ и ХАГ рекомендован метод определения сенсибилизации лимфоцитов в РТМЛ с применением ляпопротеида печени человека, а также определение активности клетск-супрессоров с использованием в качестве стимулятора НЗсАс) .

Основные положения,выносимые на зациту:

Региональной особенностью Формирования НВУ-индуцированного хронического гепатита явилось преобладание больных с четко выраженной острой фазой болезни в анамнезе ( 75%) по сравнению с данными литературы ( 10-15Я). Хрониаация острого вирусного гепатита В нами регистрировалась в 62,1$ случаев в течение первого года после перенесенной острой г^азы, у 26,&% - в течение последующих пяти лет.

Степень снижения фагоцитарной активности нейтро^илов в ост-

рый период вирусного гепатита В коррелирует с зыраженностью НВзА^-емии, свидетельствуя о нарушении глиминирующей способности ней тростильных фагоиитов.

Нарастание ауторозегкообразующих клеток в период реконвалес-иенции в модифицированном варианте с НЗь'Ао является благоприятным признаком клинического и иммунологического выздоровления,-отсутствие- неблагоприятным, с высоким риском хронизации.

У ботьнкх острым и хроническими гепатитами В имеются существенные различия в интенсивности иммунного ответа и активности регуляторных клеток в изученных антигенных системах и отражает тяжесть течения и "¡сход заболевания.

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на конференции молодых ученых Семипалатинского государственного ме-диг.мнского института (1989), 7-м Международном Конгрессе иммунологов (Западны/, Берлин, 1969), съезде терапевтов Казахстана (1990), на заседаниях терапевтического общества города Семипалатинска с приглашением инЗекпионистов (1954), на межкафедральном заседании и проблечной комиссии по иммунологии, аллергологии и инфекционным болезням Семипалатинского государственного м'едиилнского института (1995) и Алматинского государственного медицинского института (1995).

Внедрение. Результаты работы внедрены в лечебную практику гастроэнтерологического и П инфекционного отделения Областной кллнйческой больницы, инфекционного отделения I Городской клинической больнипы города Семипалатинска.

Основные положения и выводы из диссертационной работы включены также в чекиионные и семинарские занятия для студентов и практических врачей, проводимые на кафедре госпитальной терапии Семипалатинского медицинского института.

В процессе выполнения работы в практику здравоохранения внедрено 2 рационализаторских предложения.

Пубяикаиии. По теме диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура диссертации, диссертация изложена на страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, • материалов и методов исследования и 2 глав собственных результатов. В работе содержится 33 таблицы и рисунков. Список литературы содержит НЦ источников, из них '/'/ на иностранных языках.

МАТЕРЛАЛЬ Л ИЬТОДЬ ЛССЛЕДОВАНЖ

В работе приведены данные клинического наблюдения и обследования 163 больных различными формами вирусного гепатита В в возрасте от 16 до 60 лет.

диагноз острых и НВУ-индуцированных хронических гепатитов ставился на основании клинико-т.пидечиологических данных и результатов лабораторного обследования. При отом использованы общепринятые критерии, изложенные в методических рекомендациях по раздельной диагностике вирусных гепатитов А и В, разработанные сотрудниками НЛИ вирусологи 1 им. д.у!. Лвановского АМН СССР. Клинические Яормы вирусного гепатита В ставились в соответствии с классификацией Е.С.Белозерова (I&Ô9).

Верификация диагноза хронических гепатитов у большинства боль ных ( 42 - 63,) проводилась путем морфологического исследования при лапароскопии печени с прицельной биопсией.

Острый вирусныи гепатит В диагностирован у 117 больных. В 5,1$ ( 6 ) случаев он протекал в легкой ^орме, в 86,3^ (ICI) -в среднегяжелой и у 8,б£ (10) - в тяжелой г^орме. По наличию в крови HBs-антигена все больные были разделены на две подгруппы: HBsAcj-позитйвные и HBsAcj- негативны е. Больные острыми гепатитами

наблюдались нами в период разгара болезни и в период ранней ре-конвалесцении 1 ( с момента нормализации показателей билирубина в сыворотке крови ).

НВУ-индуцированныи хроническим гепатит диагностирован у 66 больных. В этой группе у 33 больных был выявлен хронический пер-систирующий гепатит, из них 9 человек были НВ^А^-позитивннми. В группу больных ХАГ входило 33 человека, у 19 из которых в сыворотке крови был обнаружен поверхностный антиген вируса гепатита В ( 57,6$ ).

Верификаиия острого и хронического вирусного гепатита проводилась обнаружением специфических маркеров вирусного гепатита В в реакциях пассивной гечйгглютинаци1 и иммуноферментного анализа, при отсутствии антител к вирусу гепатита А и дельта-антигену.

В качестве контрольной группы обследовано 94 здоровых липа ( донора ).

В процессе работы использовались следующие иммунологические методы: определение Т-лим*оцитов в периферическое кровл в реакции Е-роэеткосбразования по методу г? (1973);

содержания тео*иллинчувствительных и теосуиллинрезистентных Е-РОК по методу и'яагчЬа? г' (1978); подсчет количества ауто-

РОК по методу Лозового В.П. с соавт. (1986) в модифицированном гесте с использованием НВэАо; оценка э*лекторной и регуляторной функции клеток крови по методу Е.С.Белозерова с соавт. (1987); оценка фагоцитарной способности нейтрофилов по методу Лебедева К.А., Понякиной И.Д. (1990).

Статистическую обработку данных осуществляли общепринятыми методами вариационной статистики с вычислением критерия Стью-дента, корреляционного анализа, однофакторного дисперсионного анализа количественных и качественных признаков ( Иванов 1.И., Погорелюк Е.Н.Д99С). Для статистическок обработки результатов

- 10 -

использована IBM PC AT-466.

FboyJlbTATU СОБСТВЕННЫХ ИССЩОВАНйм

Анализлруя данные анамнеза мы выявили наличие острой Фазы у 75,81? больных хроническим активным гепатитом и у 66,7$ больных хроническим персистирукщим гепатитом. При этом у 62,1% больных формирование хронического гепатита отмечалось в течение первого года после перенесенного острого гепатита В и у 25,2/<5-в течение последующих пяти лет.

Выраженность клинических проявлении при остром и хронических гепатитах В коррелировала со степенью тяжести и Формой заболевания. Важная роль в элиминации вируса из организма принадлежит Фагоцитарным механизмам иммунологических реакций. Нами выявлено снижение фагоцитарной активности нейтроФилов в период разгара у больных острым вирусным гепатитом В ( 36,0+1,1% ) по сравнению с группой доноров ( 42,0+1,4; Р<С,С1 ). наиболее выраженное при тяжелом течении заболевания С 28,1+1,5; Р<0,002). К периоду реконвалесиенции показатели Фагоцитоза достоверно снижались у больных с легким и среднетяжелым течением (29,С+ 3,8/ и 31,4+2,3л соответственно ) и имели некоторую тенденцию к повышению у больных с тяжелым течением. HBs-антигенемия в оба периода сочеталась с достоверно более сниженной фагоцитарной активностью. Низкая Фагоцитарная активность гранулоиитов в периоде разгара острого гепатита В является ранним признаком неблагоприятного течения и исхода заболевания, С одной стороны избыток антигена может приводить к антигенной перегрузке фагоцитарной системы, с другой стороны из-за низкой фагоцитарной активности нарушается процесс элиминации вируса из организма.

При хронических гепатитах также выявлено достоверное снижение фагоцитарной активности не/.трофилов, которая при ХПГ со-

ставля'ла 30,6+2,7/' по сравнению с контрольной ( 42,0+1,4/0, а при ХАГ - 28,9+2,0% ( Р<0,001). Антигенемия в-обеих группах сочетается с достоверно низкой фагоцитарной активностью нейтрофиг-лов, особенно у больных ХПГ, снижаясь в 2,2 раза (Р<0,01). По видимому низкая фагоцитарная активность способствует более длительней персистенции вируса в организме.

Нами проведено комплексное динамическое исследование Т-сис-темы иммунитета при вирусном гепатите В и НВУ-индуцированных хронических гепатитах. Как показали исследования, в период разгара ОВГВ наблюдается достоверное снижение как относительного, так и абсолютного количества Е-РОК С 37,6+0,9% ; 723,>41,7 кл/мкл соответственно). Максимально выраженные изменения отмечались у больных со среднетяжелым и тяжелым течением с преимущественным снижением тео'иллинрезистентных клеток.

В период реконвалесценции содержание Т-лимФоцитов хотя л несколько нарастало, но в сравнении с контрольной группой было достоверно снижено ( 36,9+1,3; Р^-.С,01).Антигенемия сопровождалась в оба периода более низким содержанием Е-РОК (Р<0,С01). Динамика лммунорегуляторнкх сдвигов определяется повышенной супрес-сорной активностью в начале заболевания с ее дальнейшим снижением в период реконвалесцениии.

У больных хроническими гепатитами также й&блюдается снижение Т-лимфоиитов в основном за счет гео^иллинрезистентных Е—РОК. При л'ПГ содержание Т-лимфоцитов достигало 36,1+1,5$, пш ХАГ-37,2+1,3,? в сравнении с группой доноров С 41,1+0,7; Р-^О,01). Однако зависимости содержания Т-лимфоцитов от формы гепатита и антигенемии не выявлено.

Количество ауто-РОК в периферической крови определялось в классическом варианте постановки реакции с параллельной поста-

новкой модифицированного варианта, где лимфоциты больного предварительно инкубировались с НВ^Ад.

Количество ауто-РОК у больных острым вирусным гепатитом В при классической постановке метода не зависело от периода болезни и антигенемии. 3 модифицированном тесте с предварительной ин-кубаиией с НЕгА^ выявлено высокодостоверное повышение ауто-РОК в 1,5-2,4 раза в период реконвалесценции, более выраженное у

-позитивных больных (Р<0,001). Повышение стих показателей возможно связано с параллельным определением В-лим^оцитов, несущих на своей мембране рецептор к НВ5А^ и является благоприятным признаком клинико-иммунологического выздоровления,

Иммунорегуляторные изменения прослежены нами при использовг нии модели РТ.МЛ в 2-х вариантах - классическом и в варианте с тестированием образца крови, облученного в экспозиционной дозе 258 мКл/кг ( 1000 р). ¿тот модифицированный метод позволяет определить уровень продукции леикоцитинглбирущего фактора (Л/Ц>) отражающий степень сенсибилизации Т-лимфоцитов к используемому стимулятору. Облучение образца крови в вышеуказанной дозе позволяет снять тормозящее влияние супрессорных Факторов на продукцию ЛЛ? и оненлть истинный уровень сенсибилизации к конкретному стимулятору.

В качестве стимуляторов нами были использованы поликлональ-ный митоген Т-клеток - КонА, поверхностный (КВ.ь'А9) и серд:'евин-ный (НЗсАд) антигены вируса гепатита 13 и липопротеид печени человека ( ЛПЧ ).

Обследование больных данным методом проводилось в различные пешоды заболевания- от I недели до УТ недели болезни с момента появления первых клинических симптомов.

Исследование в динамике уровня продукции Л/1Ф в присутствии

{онА показало, что этот параметр остается стабильным на протяжении всего периода наблюдения в облученных образцах крови, в то время как в необлученных образцах крови уровень продукции ЛИФ колебался, особенно на 2-й неделе заболевания, увеличиваясь в 3,5 раза ( Р<С,С1), что свидетельствует о наличии супрессирующе-го влияния радиочувствительных клеток на продукцию ЛЛФ, особенно на 2-й неделе заболевания.

Уровень активности супрессорных клеток при стимуляции КонА 5ыл несколько выше показателя доноров уже на первой недели болезни (51,3£7,4?), на 2-й неделе болезни уровень возрастал до 55,2+10,1^, в последующем отмечалось снижение активности радиочувствительных кгеток-супрессоров.

Большой интерес представляют иммунорегуляторные изменения з использован1ем в качестве стимуляторов вирусассоциированных антигенов.

Нами установлено постепенное повышение уровня продукции 1ЫФ в РТМЛ на НВ5А9 в облученных образцах крови. Максимальное нарастание уровня продукции отмечено на 4-и неделе болезни, в последующем уровень продукции ЛЯФ несколько снижался.

Супрессорная активность ЛЛФ-продукции на НВ^Ад была макси-сальной на 1-й неделе заболевания (63,4+10,За), затем отмечалось резкое снижение активности супрессоров вплоть до 4-к недели болезни ( 27,6+6,ЗЯ). На 5-й и б-й неделе болезни супрессорная активность несколько повышалась.

Полученные нами данные позволяют обратить внимание на наличие супрессирующего влияния радиочувствительных клеток на ранних стадиях болезни при стимуляции НВ^А^.

Несколько иная картина наблюдалась при изучении уровня продукции ЛЛФ в РТМЛ на НВсАо. Степень сенсибилизации клеток в

используемой системе была максимальной на 1-й неделе заболевания. По мере увеличения продолжительности болезни отмечалось постепенное уменьшение уровня продукции ЛЛ-5 в присутствии НВсА^ и на 6-й неделе этот параметр был минимальным.

На неделе болезни нами выявлена низкая активность суп-рессоров продукции ЛИФ в РТМЛ на НВсА^ ( 23,6+7,7$). На 2-й и 3-й неделе мы наблюдали резкое повышение данного параметра. В пс следующем активность супрессоров Л/1Ф-продукции снижалась и на 5-й - б-й неделе была минимальном. Подобные колебания уровня супрессорной активности можно связать с динамикой экспрессии НЗсАо на мембране гепатоцитов.Вероятно на 2-й и 3-й неделе экспрессия НВсА^ достигает максимальных значений, что и соответствует наиболее выраженному уровню цитолиза в этот период болезни.

Аутоиммунный компонент был прослежен нами на модели продукции ЛЛФ в присутствии ЛПЧ. Учитывая, что достоверный ответ лимфоцитов к данному антигену выявлялся лишь у 25>» больных, нами ■изучены и уровень продукции ЛЛФ и частота достоверного ответа лимфоцитов в РИЛ на ЛПЧ в теже периоды болезни.

На первой неделе болезни ни у одного больного ОВГВ не выявлено достоверного ответа лимфоцитов при стимуляции ЛПЧ. На 2-й неделе достоверный ответ лимфоцитов был выявлен у 25/о больных и затем отмечалось повышение частоты достоверного ответа лимфоцитов до 5-й недели болезни. На 5-/ неделе болезни частота ответа была максимальной и составила 57,1%. На б-й неделе болезни частота ответа несколько снижалась и составила 50%. Средний уровень продукции ЛЛФ в РТМЛ на ЛПЧ, начиная со 2-й недели болезни постепенно возрастал и достигал максимальных цифр (16,8$). на 6-Р неделе болезни.

- 15 -

Исследование частоты и уровня продукции J№ в 2-х вариантах ( с облучением кроги и без него ) позволяет предположить появление скрытой сенсибилизации лимфоцитов на ЛПЧ на б-й неделе болезни. Причем клеточные ответ на этот аутоантиген в данном случае был супрессирован радиочувствительными клетками-супрес-сорами.

Супрессорная активность в РТМЛ на ЛПЧ была минимальном на 2-й неделе болезни С 31,7+12,7£), затем отмечалось постепенное нарастание этого показателя, вплоть до 5-й недели болезни, а на 6-й неделе нами обнаружено резкое повышение этого параметра в 2,3 раза. Бее это свидетельствует о прогрессивном нарастании су-прессорнои активности к ЛПЧ по мере перехода периода разгара к периоду реконвалесиенции. Весьма интересным является тот факт, чте уровень супрессорнои активности в данной ситуации и уровень сенсибилизагии были однонаправленными. По мере нарастания клеточной сенсибилизации к ЛПЧ параллельно резко возрастала супрессорная активность на данный антиген, что, по всей видимости, является физиологическим тормозом для дальнейшего повреждения печени в период реконвалесценции.

Нами было проведено исследование функциональной активности эфЛекторов и супрессоров продукции ЛИФ у больных HBУ-индуцированными хроническими гепатитами - активным ( 33 человека ) и персистирующим ( 33 человека ).

Установлено, что частота достоверного подавления миграции лейкоцитов в РТ!4Л на КонА при использовании облученного и необ-лученного образцов крови у больных ХПГ достоверно различалась. В то же время в донорской группе подобной разницы в частоте выявления достоверного подавления миграции леикоцитов при тестировании облученного и необлученного образцов крови нами не выявлено.

Полученные данные свидетельствуют о том, что у больных ХПГ

отмечается снижение функциональной активности Т-клеток, продуцирующих лимбокины, причем это снижение связано с действием радиочувствительных Т-супрессоров.

Подобные результаты были получены и при изучении группы болных ХАГ, разница между частотой ответа в облученных и необ-лученных образцах крови была статистически достоверна (Р<0,С5), хотя и не такой выраженной, как в группе больных ХПГ (Р<0,001).

Следовательно, применение предложенного метода постановки РТМЛ с использованием облученных и необлученных образцов крови позволило зафиксировать в группе больных ХАГ супрессирование клеточного ответа радиочувствительными Т-супрессорами.

При анализе ответа лимфоцитов в присутсвич поверхностного антигена вируса гепатита В у больных ХПГ установлено, что у подавляющего большинства больных отмечалось наличие ответа в облученном образце крови, в то время как в необлученном образце ртот показатель был достоверно более низким (Р<0,01). Несколько ре*е отмечалось наличие ответа лим^оцлтов в РТ.4Л с применением

у больных ХАГ. Так в необлученном образце крови наличие ответа* было зафиксировано у 6С$ больных, в то же время как в пнтактном образце крови этот процент составил 37,6$.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о наличии у части больных хроническими гепатитами супрессии сенсибилизации к НВ^Ас)., причем частота ответа на НВ^Ао была достоверно выше в группе больных ХПГ в сравнении с группой больных ХАГ. ста тенденция была четко заметна как при использовании необлученных (Р<0,05), так л при использовании облученных (Р<0,С2)образцов.

Исследование частоты ответа лимфоцитов на НВсАо в предложенном нами тесте показало наличие ответа у 75$ больных ХПГ, в то время как в необлученном образце крови частота наличия ответа составила лишь 22,7$. Разница была статистически достовер-

ной С" Р<С.0С1 \

Б группе больных ХАГ частота достоверного ответа в облученных образцах крови составила 58,0, в то вре^я как в необлучен-нь:х образцах крови этот показатель составил 37,1%,

Мы полагаем, что у большей части больных ХПГ низкая частота выявления сенсибилизации к НЗсА^ обусловлена блокирующим воздействием радиочувствительных клеток-супрессоров, в то же время как в группе больных ХАГ разница ме»ду частотой выявления сенсибилизации к НВсАо была не столь значительной при тестировании облученного и необлученного образцов. Следовательно супрессирование ответа лимфоцитов в присутствии НВсАо у больных ХАГ встречалось значительно реже, чем у больных ХПГ.

Противоположная картина отмечена нами при исследовании частоты ответа лимфоцитов в РТМЛ на ЛПЧ. У больных ХПГ частота ответа в облученном образце крови составила б2,7;ь, а в необлученном -52,9£, в то вре^я кач б группе больных ХАГ частота достоверного ответа лимфоцитов в облученном образце крови составила 84,1,'С, а в необлученном была более чем в 2 раза ниже и равнялась 40,9$.

Степень сенсибилизации к различным антигенам у больных НВУ-индуцированными хроническими гепатитами мы оценивали, исследуя урсвень продукции Л: 15 в РТ'.'Л до я после облучения крови. Л в группе бопьных ХАГ, и в группе больных ХПГ нами выявлено достоверное преобладание продукции ЛИФ в облученных образцах крови в сравнении с необлученными при '^пользовании в качестве стимулятора поликлональный митоген Т-клеток - КонА. Сравнение уровня продукции Л:® у больных ХПГ и ХАГ не выявило достоверной разницы между ними, хотя показатели Л/й-продукции были несколько выше в группе больных ХПГ.

Также более высокий уровень продукции ЛЛ5 нами выявлен в

группе больных ХПГ ( в Сравнении с ХАГ ) при применении в качестве стимулятора НВзАс|. Вместе с тем, различия в уровне продукции МФ в облученных и необлученных образцах крови были более высокими в группе больных ХПГ ( Р<0,001 ), а в группе больных ХАГ эти различия были менее выражены ( Р<С,С5).

Полученные данные свидетельствуют о более выраженном супрес-сировании ответа на НВгАр у больных ХПГ по сравнению с группой больных ХАГ.

В противовес етом.у,: отмечена значительная разница между уровнем продукции Л7и> в интактном и облученном образце крови больных ХАГ при использовании НВсА^. Гораздо меньшая разница, хотя и тоже достоверная, отмечена нами в. группе больных ХПГ. В целом же уровень продукции ЛЛ§ при стимуляции НВсА^ был несколько выше в группе больных ХАГ.

Ответ на ЛПЧ в группе больных ХАГ был в 2 раза интенсивнее, чем в группе больных ХПГ при тестировании необлученных образцов крови. Сравнение облученных образцов крови между собой в группе больных ХАГ и ХПГ были менее разительными, хотя и в группе больных ХАГ да особенно в группе больных ХПГ уровни продукции ЛЛЗ в РТМЛ до и после облучения крови были более высокими.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о наличии диссоциации степени активности клеточного иммунитета при использовании невирусных стимуляторов и вирусных антигенов в РТМЛ. Так при использовании КонА степень подавления преобладала в группе больных ХАГ по сравнению с группой больных ХПГ. В противовес сто му пш использовании вирусных антигенных стимуляторов, а также ЛПЧ уровень сенсибилизации значительно превышал аналогичные параметры в группе больных ХПГ, причем степень сенсибилизации к ЛПЧ была значительно менее вкражена в группе больных ХПГ как в

облученных, так л в необлученнах образцах крови, сто может служить доказательством того, что основной мишенью для од,*екторнь!х клеток в группе больных ХАГ является ЛПЧ. Ланный <"■ акт помимо научного интереса имеет также и практическую значимсотс, позволяющую в определенной степени использовать данный тест для дифференциальной диагностики хронических гепатитов, особенно на гта-пе предварительного обследования и прогнозирования течения хронического гепатита. Кроме того, полученные результаты косвенно свидетельствуют о более низком уровне супрессорнои активности в группе больных ХАГ по сравнению с группой больных ХПГ.

В дальнейшем мы проверили уровень активности супрессоров Г5Т на различные антигенные и неантигенные компоненты у больных хроническими гепатитами, индуцированными НВУ-инфекцией.

При изучении уровня активности супрессоров с использованием различных стимуляторов были получены следующие данные. Установлено, что у больных ХАГ имеются различия в активности супрессоров продукции Х-15 при использовании поликлональных и антигенных стимуляторов. Так, естн в группе больных ХАГ при использовании КонА уровень супрессорнои иктивности был достоверно более высоким, составляя 43,6,? ( Р<С,01), чем в группе больных ХПГ,го при использовании ЛПЧ уровень активности супрессоров был ниже аналогичного показателя больных ХПГ. Вместе с тем, на наш взгляд, такой подход к оценке супрессорнои активности не отражает в полной мере истинной картины состояния супрессорных клеток у больных хроническими Нормами гепатита В, так как в каждой и.з зтих групп встречаются больные и с низкой, и с нормальной, и с повышенной супрессорнои активностью.

'¡сходя из этого мы проанализировали частоту распределения больных в зависимости от состояния функционирования радиочувст-

вительных клеток-супрессоров. .

При исследовании достоверности, различий в уровнях активности радиочувствительных клеток-супрессоров у больных ХПГ и ХАГ при использовании в качестве стимулятора КонА нами не было обнаружено.

Умеренная и высокая супрессорная активность на НВзА<з у больных ХПГ встречалась соответственно вП,9/ и 57,1%, в то же время в группе больных ХАГ умеренная супрессия выявлена в II,4$, а высокая супрессия зарегистрирована в 34,1$.

Активирующее влияние радиочувствительных клеток в группе больных ХАГ бь'по достоверно выше, чем в группе больных ХПГ ( 27,3$ и 9,5$ соответственно ).

Обобщая сказанное, можно указать на более частое выявление

лиц с повышенной супрессоинои активностью к НЗ$Ао з группе боль-

о

ных ХПГ и более частое активирующее влияние радиочувствительных клеток в группе больных ХАГ.

Наши наблюдения показали, что у подавляющего большинства больных ХАГ отмечается либо активирующее влияние, либо сниженная активноать радиочувствительных клеток-супрессоров при использовании в качестве стимулятора НЗсА^, в то время как у подавляющего большинства больных ХПГ отмечалась нормальная или высокая активность при использовании того же стимулятора, что можно использовать как дополнительные дифференциальный признак.

При изучении частоты супрессорной активности на ЛПЧ выявлено, что частота низкои супрессорнои активности была достоверно более высокой в группе больных ХАГ (Р<0,и1), частота умеренной супрессии в этих группах не различалась, а частота высокой су-прессорной активности в 2 раза чаще встречалась в группе больных ХПГ. сто свидетельствует о более выраженной активности

клеток-супрессоров при использовании в качестве стимулятора ЛПЧ у больных ХПГ.

Выявленные изменения активности гсфекторных и супрессорных клеток позволяют использовать ряд изученных показателей в качестве дополнительных тестов для оценки тяжести течения, дифференциальной диагностики различныл клинических шорм хронического гепатита 3, прогноза болезни, а также рекомендовать данный тест постановки РТ'МЛ для повышения его чувствительности и для одновременной оценки активности эффекторов и регуляторов Г5Т.

ВЫВОДЫ

I.Особенностью Нормирования НВУ-индуцированных хронических гепатитов является преобладание выраженной острой фазы болезни з анамнезе. У больных хроническим персистирующим гепатитом она мела место в 66,7$, при активной Форме заболевания - у 75,5/'" 5ольных. Хронизация вирусного гепатита В формируется чаще в пер-зыР. год после перенесенной острой фазы ( 62,1$ ). 3 течение по-зледувщих пяти лет формирование хронического гепатита зарегистрировано в 25,6/..

2. Иммунологические сдвиги при остром вирусном гепатите В юсят цихличны/, характер. Период разгара острого' вирусного ге-татита В характеризуется Т-лимфопенией с преимущественным снижением теоФиллинрезистентных клеток, угнетением Фагоцитоза, коррелирующими со степенью тяжести заболевания. Фазность им-1уноре-?уляторнкх сдвигов определяется повышенной супрессорнои активно-:тью в начале заболевания с ее дальнейшим снижением в период выздоровления.

3. Количество ауто-РОК у больных острым вирусным гепатитом ! при инкубации с НЗэА^ сопровождается значительным ( в 1,5 -

раза ) увеличением в период реконвалесценции, являясь про-

гностическим показателем клинико-иммунологического выздоровления.

Развитие острого вирусного гепатита В сопровождается формированием' сенсибилизации к различным антигенным детерминантам возбудителя гепатита 3. У больше!-, части больных уже на пер-..воР неделе заболевания отмечается повышенная чувствительность замедленного типа к вирусным антигенам - НЗзАд и КОсАр. Развн-

'ч

тие сенсибилизации на липопротеид печени человека отчетливо регистрируется лить на третье/.-четвертои неделе от начала заболевания, что позволяет использовать'данны/. тест в качестве ди*'"е-ренциально-лиагностического признака между острой и хронической фазой гепатита В.

5. Хронические НЗУ-индуиированные гепатиты характеризуются стойкими изменениями количественных показателей иммунитета- сни жен чем содержания Т-лимфоцитов,в основном за счет тео^иллинре-зистентных Е-РОК, угнетением Фагоцитоза, снижением содержания ауто-РОК, которые не зависят ни от формы гепатита, ни от анти-генемии.

6. При хроническом активном и хроническом персисгчрукщем гепатитах наблюдаются разнонаправленные сдвиги в формировании сенсибилизации к различным вирусным и печеночным антигенам. При хроническоч персистируки;ем гепатите преобладает сенсибилизация к вирусным антигенам, в то время как при хроническом активном гепатите - к липопротеиду печени человека. Уровень активности супрессоров продукции лепкоцитингибирующего фактора на липопротеид печени человека у большей части больных хроническим активным гепатитом снижен, в отличие от персистирующего, что свидетельствует о преобладании аутоиммунного компонента у больных хроническим активным гепатитом.

ПРАКТЛЧЬСНЛЬ РЬКОМЕНДАЦЛЛ

1.Низкая фагоцитарная активность гранулоцитов в период разгара острого вирусного гепатита Б является ранним признаком неблагоприятного течения и исхода заболевания.

2.Применение модифицированного теста РТМЛ с облучением крови в экспозиционной дозе 258 мКл/кг повышает эффективность метода и позволяет определить сенсибилизацию, блокированную су-прессорными факторами.

3.Степень сенсибилизации лимфоцитов в РТМЛ с применением липопротеида печени человека является дифференциально-диагностическим лабораторным критерием для разделения КЗУ-индуцирован-ного хронического персисгирукщего гепатита и хронического активного гепатита.

4.Определение активности клеток-супрессоров в РТМЛ с использованием в качестве стимулятора HBcA<3 рекомендуется как дополнительный тест при обследовании больных хроническими гепатитами для дифференциальной диагностики.

СПЛСОл РАЬСТ.СПУБЛЛКОВАЬЖХ ПО ТЬ.МЬ ¿ЛССЬРТАЦЛЛ

I. S4%&*&ie</ 4ii;:opir t'.L., KostniOA ПЛ.,

StltUikovx 1.Р., Т s <;? о г О.Ч., Txijuh I.A.,

V t'.iz-Khxipunovr Ч.А. Thf. ibi?it!j о {, zxtjth iocij I ?л to HCs\g in Px1ie.nti ¿it\ «ч/г vin? '.i&pztitib tijpz С iti outc.o ms. 7-tb Iniz\natioMt Солцьги o{ InnunoГоцу - Vzit I9S7

р. 105-105

2. Секербаев A.X., Архипов Г.С., Тригуб Л.А., Зизе-Хрипу-эва М.А. Нарушение дифференцировки Т-супрессоров у больных 35Ас}-позитизными ХПГ и ХАГ // Тезисы ХХХП итоговой научной кон-гренции. Семипалатинск, 1989,- С. 41-43.

3. Секербаев А.Х., Лсинова Г.Н., Визе-Хрипунова М.А., Три/б Л.А. Система комплемента у больных острым вирусным гепати-

том А и В //Лечение поврекдений и заболеваний суставов. Сб. на-учн. трудов.-Алма-Ата, 1989.- С. 233-236.

4. Секербаев А.Х., Визе-Хрипунова М.А. Трнгуб Л.А. Количество прекурсоров Т-супрессоров у больных НЗУ-индуцированныи хроническим гепатитом // Тезисы докладов 17 съезда терапевтов Казахстана,- Караганда, I99C'.- С. 219-219.

5. Визе-Хрипунова 'I.A., Иоинова Г.Н.., Секербаев А.Х. Роль С^-компонента комплемента в периферическое■крови у больных ИЗУ-индуцированными хроническими гепатитами // Актуальные вопрись: организации здравоохранения и клиническое медицины. Сб. научн. трудов.- Семипалатинск, 1992.- С. 74-75.

6. Зизе-Хрипунова М.А. Особенности клинического течения острого вирусного гепатита А // стиопатогенез, клиника, диагностика и лечение заболевании печени. Сб. работ.- Семипалатинск, 1993.- С. 11-13.

7. Секербаев А.Х. Розенсон Р.Л., Распопин В. Л., Знзе-Хр'.пу-нова i.A. Реакция бластной трансформации лимфоцитов у больных

НЗ/-индуцированными хроническими гепатитами ( ,У.ПГ и ХАГ) // стаопатогенез, клиника, диагностика и лечение заболевании печени, Сб. работ.- Семипалатинск, 1993.- С. 83-85..

Визе-Хрипунова Марина Анатольевна

^епел жаке созылмалы гепатит В тсе31нпегх ^лет^алнк; иммуни-теттть( корсет"1ттер1Н1ц ^азалык линамитгасы

Т У & Ы Р ы и

^иссертацияда желел вирусты гепатит Ь жэне ШУ-иклуцирлен-гег созылмалы гепатиттщ иммунопатогенез1нщ сурак;тары зерттелелх.

183 наукасты / П7 нау^ас желел гепатит В жэне 66 наук;ас созылмалы персистирлеутх жэне атггивт1 / «линиталкк ^ацыяаульщ же не теч-серулщ леретеерх тгелт1р1лген.

РТКЛ-пьщ лимфоидты »леткапарншц эййетторян жэне реттеу Нунциясын тексеру жэне 8.уто-?0т/,-тн ашк,таульщ молМицирленген эл1стер1 ^ул жумыста. алгат рет н;олланылап.ы»

Созыямалы жэне желел гепатит В тсезодег! патологиялык; про-

цесстщ барчсынлага тслетталык; иммунитеттщ сацпык; жэне йунтгци-

оналлыц т'орсеттаттершщ телинитальщ жэне болжамдык; кацыры зерттелелI.

ИКУ- вирусты инТ'.е^циянчч желел жэне созылмалы йормасымен ауыргаи иау^астарпагк ауто-г'О.ч' жэне неитро<*)ильлI грацулоциттерпщ ^агоцнтарлык; белсенп1л1Г1нщ "орсеттгшгер1Н1ц ^олжамльщ иачкзм яныцталган.

Созылмалы жэне желел гепатитпен ауырган науцастарльщ вирусты / ПЬ^Ло на не Ш-:сАо / жэне аутоантигенперге / Л!"1! / кммун-

* и

пм?? жауа^ыннц аимрыадылыгы мен Аазаларн тгелт1рхлген.

Аурульщ эртурлг периолтарч мен йормасч »езгнпе Г'ТШ эл1с1Н коллану созылмалы жэне желел гепатиттщ йормаснн жэне желел гепатиттщ *езенпер1н атырату лиагноститеасына мумИнл^ релх.

Vise-Khripunova Marina Anatolievna

PHASE DYNAMICS OF CELLULAR IMMUNITY INDICES

IN CASE OF ACUTE AND CHRONIC HEPATITIS B SUMMARY

The problems of acute viral hepatitis B and HBV-induced chronic hepatitis pathogenesis are studied in this thesis.

The findings of clinical observation and examination of 183 patients (117 patients with acute vira hepatitis B and 66 villi chronic persisting and active one) arc adduced.

In this work for the firsttime the modified methods of a-ROK definition and investigation of effector and regulator functions of lymphoid cells are used.

Clinical and prognostic importance of quantitative and functional indices of cellular immunity in the coursc of phatologic process in acutc and chronic hepatitis B arc studied.

The prognostic importance of phagosytic activity of ncutrophile indices and a-ROK in patients with acute and chronic types of HBV-viral infection arc determined.

The significant differences and periodicity in immune responcc to the viral (HBsAg and HBcAg) and autoantigen in patients with acute and chronic hepatitis B in different periods and forms of disease give the possibility to apply these methods of RTML for differential diagnosis of periods of acutc hepatitis and types of chronic hepatitis.

БОП ОУС г. Сем-ск Заказ №44 Тира* ioc экз. 1995г.