Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакотерапевтическая эффективность вентрофита при цитостатической болезни

На правах рукописи

003056259

Санданова Юлия Николаевна

ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ВЕНТРОФИТА ПРИ ЦИТОСТАТИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Улан-Удэ 2007 г.

003056259

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Николаев Сергей Матвеевич

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

Ажунова Татьяна Александровна кандидат медицинских наук Елаева Эржена Борисовна

Ведущая организация: ^бслжъ

Защита диссертации состоится заседании Диссертационного совета экспериментальной биологии СО Сахьяновой 6)

"23" апреля 2007 г. в 10°° часов на К 003.028.01. при Институте общей и РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул.Сахьяновой 6

Автореферат разослан « 22 » марта 2007 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

кандидат биологических наук ' 0 Хобракова Валентина Бимбаевна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы Низкая избирательность цитостатического действия противоопухолевых препаратов, применяемых в онкологии, требует постоянного внимания к проблеме токсичности лекарственных средств данной группы в отношении интактных органов с высоким темпом клеточного обновления. Несмотря на различия по токсичности, химиопрепараты действуют на активно делящиеся клетки, вследствие чего возникают миелодепрессивный, диспепсический, иммунодепрессивный синдромы, подавляется репродуктивная функция органов, поражается кожа и ее придатки (Гарин A.M., Хлебанов A.B., 1995; Гольдберг Е.Д. и др., 1998; Goldberg E.D. е.а.,2000). Возникающие в процессе химиотерапии больных с опухолями осложнения в значительной степени ограничивают возможности продолжения курса терапии и в ряде случаев являются показанием для прерывания лечения больных (Гершанович M.JI. 1982, Переводчикова Н.И., 2000). Арсенал существующих в настоящее время средств и способов коррекции осложнений в результате химиотерапии больных крайне невелик, а эффективность их в ряде случаев явно недостаточна.

В связи с этим перспективным направлением в плане повышения эффективности и оптимизации химиотерапии опухолевых заболеваний является поиск и изучение средств, способных повышать резистентность организма к повреждающему действию цитостатиков, экранирующих их побочные эффекты (Макаров, 1989)

Перспективными для разработки методов фармакологической коррекции побочного действия цитостатиков являются средства растительного происхождения, отличающиеся, как правило, способностью подавлять отрицательные эффекты химиопрепаратов, широтой терапевтического действия, малой токсичностью и связанной с этим возможностью длительного применения без риска возникновения токсических реакций (Барабой, 1992; Баркаган, 1997).

В лаборатории экспериментальной фармакологии Института общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской Академии наук (ИОЭБ СО РАН) проводятся исследования многокомпонентного растительного средства вентрофит.

Фармакологическая активность данного средства обусловлена наличием биологически активных веществ: флавоноидов, органических кислот, аскорбиновой кислоты, карогиноидов, тритерпеновых сапонинов, кумаринов, фенолокислот, глицирризиновой кислоты, рутина, гиперазида, дубильных веществ и других соединений.

Цель исследования - определить фармакотерапевтическую эффективность комплексного растительного средства вентрофит в качестве средства, уменьшающего миелотоксические, иммунотоксические, гастротоксические эффекты цитотоксической химиотерапии.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

• исследовать токсическое действие цитостатиков на систему гомеостаза крови, основные звенья иммунного ответа и состояния слизистой желудочно-кишечного тракта у лабораторных животных;

•определить фармакотерапевтическую эффективность вентрофита при нарушениях в системах крови, иммунитета и морфо-функционнального состояния ЖКТ при экспериментальной цитостатической болезни;

• выявить основные механизмы фармакотерапевтического влияния вентрофита.

Научная новизна. В работе определены особенности фармакологического действия вентрофита, его способности корригировать систему гемостаза, поддерживать иммунную систему и предупреждать развитие повреждений органов пищеварения на фоне цитостатической болезни у лабораторных животных.

Практическое значение. Полученные данные могут

явиться основой для применения вентрофита в клинической практике с целью коррекции нарушений, возникающих в кроветворной, иммунной и пищеварительной системах, при проведении цитостатической терапии больных с новообразованиями.

Положения выносимые на защиту:

• Комплексное растительное средство вентрофит обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при цитостатической болезни.

• Особенностями в фармакотерапевтическом влиянии вентрофита являются способности его оказывать мембраностабилизирующее, противовоспалительное, спазмолитическое и иммуномодулирующее действия.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на: научно-практической конференции "Биологически активные добавки в профилактической медицине" (Улан-Удэ, 2003); 4-ой региональной межвузовской конференции "Медицина завтрашнего дня" (Чита, 2005); научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения доктора медицинских наук Базарона Э.Г. (Улан-Удэ, 2006);

Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии» (Улан-Удэ,2006).

Публикации. По материалам диссертационного исследования опубликовано 7 научных работ, из них 2 в центральных журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа состоит их введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, экспериментальной части, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Материал изложен на 120 страницах машинописного текста, иллюстрирован 15 таблицами, 14 рисунками и 20 фотографиями. Список литературы состоит из 182 источников, из которых 32 - на иностранных языках.

Материалы и методы исследования

Исследования выполнены на 446 белых крысах - самцах линии Вистар с исходной массой 160 - 190 г. До начала исследований животных выдерживали в стандартных условиях в виварии на обычном рационе (Приказ МЗ СССР №1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.).

Объектом исследования служил комплексный растительный препарат вентрофит (Патент № 2281114 от 10.08.2006г.), представляющий собой сумму экстрактивных веществ из 9 видов растительного сырья: соцветий календулы лекарственной CALENDULA OFFICINALIS L. (25 ч.), листьев подорожника большого PLANTAGO MAJOR L. (10 ч.), травы сушеницы топяной GNAPHALIUM ULIGINOSUM L. (5 ч.), корней солодки уральской CLYCYRRHIZA GLABRA L. (10 ч.), корней девясила высокого INULA HELENIUM L. (5 ч.), плодов боярышника CRATAEGUS L. (15 ч.), плодов шиповника ROSA CINNOMOMEA L. (20 ч.), плодов кориандра посевного CORIANDRUM SATIVUM L. (5 ч.), плодов облепихи крушиновидной HYPPOPHAE RHAMNOIDES L. (5 ч.). В качестве экстрагента был использован 40 % этанол, кратность экстракции — 3; время экстракции - 45 минут, последующие - 30 минут.

Основными биологически активными соединениями полиэкстракта являются флавоноидные соединения. Стандартизация данного средства осуществлена по сумме флавоноидов в пересчете на рутин.

Для моделирования цитостатической болезни у белых крыс использовали: циклофосфан (ЦФ) (Саранский завод медицинских препаратов), который непосредственно перед применением растворяли в физиологическом растворе и вводили животным внутрибрюшинно в максимально переносимой дозе (МПД), равной 7 мг/кг, ежедневно с

интервалом 24 часа, в течение 10 дней; в другой серии опытов 6-меркаптопурин (6-МП) (компании Glaxo Wellcome Operation, Великобритания) растворяли в физиологическом растворе и вводили внутрижелудочно в МПД, равной 20 мг/кг, 1 раз в день, в течение 10 дней (Гарин и др., 1982; Переводчикова 2000).

Животным опытной группы вентрофит вводили внутрижелудочно, в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг, 1 раз в день, в течение 24 суток, начиная с первого дня эксперимента. Для сравнения отдельной группе крыс вводили настойку календулы в объеме 10 мл/кг в аналогичном режиме. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. Исследования проводили на 3, 14,28 сутки после последнего ведения цитостатика.

Для оценки корригирующего действия вентрофита определяли клеточность и качественный состав костного мозга по общепринятым методикам (Кост 1975; Белоусова и др., 1979; Меньшиков и др., 1987).

Показатели периферической крови определяли на автоматическом гематологическом анализаторе «Абакус» со стандартными реактивами (производство Австрии). Активность аланинаминотрансферазы (АЛТ) и аспартатаминотрансферазы (ACT), содержание холестерина, билирубина в сыворотке крови определяли на автоматическом биохимическом анализаторе «Сапфир-400» (производства Японии). Исследование системы гемостаза проводили согласно методическим рекомендациям МЗ РФ (Методы исследования гемостаза, 1995) с использованием набора высокостандартизованнных реагентов, прошедших предварительное тестирование на эталонных образцах плазмы фирмы "Технология - стандарт" (г.Барнаул). Используемые тесты характеризуют состояние тромбоцитарного и коагуляционного гемостаза (внутренний и внешний механизмы свертывания крови, конечный этап свертывания крови). Для определения состояния тромбоцитарного звена гемостаза использовали унифицированные методы подсчета тромбоцитов в камере Горяева и функциональные свойства тромбоцитов по М.А. Одесской и соавт. (1971). При характеристике коагуляционного гемостаза применяли методы исследования внутреннего механизма свертывания крови, в частности аутокоагуляционный тест (АКТ), разработанный и модифицированный JT.3 Баркаганом (1986). Также определяли активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ) (Caen и соавт., 1986). Для характеристики внешнего механизма свертывания крови определяли протромбиновое (ПВ) и тромбиновое время (ТВ) (Балуда, 1980).

Оценка иммунного статуса у белых крыс в условиях экспериментальной цитостатической болезни осуществлялась с помощью

комплекса стандартных и унифицированных тестов (Караулов, 1999). Для идентификации Т- и В- лимфоцитов использовали метод непрямой реакции поверхностной иммунофлуоресценции (РИФ) с применением люминесцентного микроскопа. Для постановки непрямой РИФ применяли стандартные реактивы моноклональных антител (МКА) к клеткам крови (лимфоцитам) -CD3, CD4,CD8, CD22,CD16 производства НПО «Препарат» (г.Нижний Новгород). Для определения CD3 (общее количество Т-лимфоцитов) использовали МКА ИКО-90, CD22 (общее количество В-лимфоцитов) -МКА ИКО-12, CD 16 (антиген), характерный для NK-клеток - МКА ИКО-16.

Для оценки фагоцитоза в пенициллиновые флаконы с монослоем полученных макрофагов (ПМ) на покровных стеклах вносили 1,8 мл питательной среды и 0,2 мл раствора суточной культуры на микробиологическом питательном агаре (МПА) Staph. Aureus в стерильном физиологическом растворе (2,5 X 10 клеток/мл), инкубировали в течение 1 часа при t=+37°C. Затем, покровные стекла с монослоем макрофагов отмывали 3-4 раза в стерильной среде Хенкса. Клетки фиксировали метанолом в течение 4-5 минут и окрашивали по Романовскому-Гимза в течении 30 минут. Далее покровные стекла отмывали дистиллированной водой, высушивали и приклеивали на предметные стекла с помощью кедрового бальзама в ксилоле.

Степень токсичности цитостатиков оценивали по изменению массы внутренних органов, таких как селезенка, тимус и печень. Численность клеток иммунных органов (селезенка и тимус) определяли путем подсчета ядро содержащих клеток на массу всего органа.

Для проведения гистологических исследований материал фиксировали в 10 % нейтральном формалине, обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в целлоидин-парафин. Срезы, приготовленные на микротоме МС-2, окрашивали гематоксилин-эозином.

На препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином, с помощью компьютерной программы «Motic Images 2000» определяли толщину слизистой оболочки и глубину эрозий. Степень повреждения слизистой оболочки желудка определяли по формуле:

Степень повреждения слизистой оболочки желудка, % =

Глубина эрозии, мм

Толщина слизистой х 100

оболочки желудка, мм

Фотографирование микропрепаратов проводили с помощью германского цифрового микроскопа Motic DMW В1-223.

Исследования по опенке влияния "вентрофита" на изменения, вызванные введением цитостатика, у животных по указанным методикам проводили на 3, 14, 28 сутки с момента начала экспериментов.

Результаты экспериментов обработаны статистически общепринятыми методами (Лакин, 1990) для малой выборки с определением средней арифметической величины (М) и средней ошибки средней арифметической величины (ш). Для оценки достоверности различий между средними значениями выборки использовали критерий Стьюдента. Различия считали достоверными при вероятности 95% (Р <0,05).

Результаты исследований и их обсуждение.

Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что в результате курсового введения цитостатиков наблюдается развитие цитостатической болезни.

Курсовое введение вентрофита на фоне экспериментальной цитостатической болезни оказывает выраженное экранирующее действие на проявления ее основных симптомов, о чем свидетельствует уменьшение уже на ранних сроках исследования выраженности гематоксического синдрома. Так, компенсаторная реакция костного мозга проявлялась в возрастании морфологически дифференцированных и зрелых элементов костного мозга, более выраженное в эритроидном ростке кроветворения, что происходило за счет увеличения интенсивности дифференциройки гемопоэтических предшественников (рис 1,2,3).

40 т

35-Т 30

25 % 20 15 10 5

о

*

II ■ I

Г I I

ш 181

3 сутки 14

28

□ Контрольная группа животных ■ Опытная группа животных

сутки сутки

Рис.1. Влияние вентрофита на численность клеток эритроидного ряда на фоне введения 6-МП.

□ Контрольная группа животных ■ Опытная группа животных

Рис,2, Влияние вентрофита на численность клеток гранулоцитарного рядана фэне введения 6-МП.летки

11IIIII

О Контрольная группа яодалмьв ■ Олытая группа животных

3 с/тип 14 2?;

сутки сутки

Рис 3. Влияние вентрофита на численности клеток лимфоидного ряда на фоне введения 6-МП.летки Клетки лимфоидного ряда

Учитывая, важное значение для организма функциональной активности эритроцитов, первоочередное восстановление их численности при повреждающих воздействиях на систему крови является позитивным фактором, обеспечивающим восстановление клеток лейко-тромбоцитарного ростков кроветворения. В целом, динамика л е й к озри тр обл ас т и четкого отношения характеризует менее выраженную напряженность костного мозга у животных, получавших вентрофит (рис 4).

□ Контрольная группа

животных ■ Опытная группа животных

3 сутки 14 28 сутки сутки

Рис.4 Лейкоэритробластическое отношение при введении вентрофлта на фоне цитостатической миелодегтрессии

Положительное влияние вентрофита на состояние костного мозга при экспериментальной миелосупрессии находили в периферической крови (таб.1). Так, на 3 сутки после окончания введения указанного цитостатика количество эритроцитов у животных опытной группы было выше на 22,4 %, концентрация гемоглобина - на 17 %, чем у животных контрольной группы за счет ускоренного выхода из костного мозга предшественников эритроцитов. На 14 -28 сутки эксперимента наблюдали восстановление численности эритроцитов за счет их гиперрегенерации в костном мозге, характерной для популяции клеток эритроидного ряда. В периферической крови на 3 сутки снижение общего количества лейкоцитов у животных контрольной группы на 27 % происходило за счет значительной убыли лимфоцитов в костном мозге. У животных, получавших вентрофит, численность лейкоцитов была в пределах физиологической нормы. На 14-е сутки повышение общего количества лейкоцитов происходило за счет лимфоцитов, на 28-е сутки восстановление численности лейкоцитов у животных опытной группы сопровождалось увеличением всех форменных элементов лейкоцитарного ряда, тогда как у животных контрольной группы этого не наблюдалось. Таким образом, "вентрофит" при развитии цитостатической болезни оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние на клеточный гомеостаз периферической крови, предупреждая убыль клеток в результате повреждающего действия цитостатиков.

Следует отметить, что "вентрофит" по корригирующему действию на лейкоцитарный росток превосходил действие препарата сравнения -настойки календулы (таб. 1).

Полученные данные свидетельствуют, что на 3-14 сутки после окончания введения 6-МП у животных, получавших вентрофит, количество лимфоцитов в периферической крови на 40% и 21,6% соответственно больше, чем у животных контрольной группы.

На 28 сутки эксперимента у животных опытной группы не наблюдали лимфоцитоза, тогда как у крыс контрольной группы повышение лимфоцитов составило 19,7%, что очевидно, связано с их миграцией из лимфоидных органов, как проявление компенсаторной реакции на миелосупрессию, вызванную введением данного цитостатика (рис.5).

На всех сроках эксперимента показатели иммунного ответа были выше у животных, получавших вентрофит. При определении фагоцитарной активности установлено, что вентрофит стимулирует активность макрофагов. Так, на протяжении всего эксперимента (3-14-28 сутки) активность фагоцитоза у животных, получавших вентрофит, на 11%,24% и 27,7% соответственно было выше, чем у животных контрольной группы (таб. 2).

Влияние вентрофита на показатели периферической крови белых крыс на фоне введения 6-еркаптопурина

Таблица 1

Пока-за-тели 3сутки 14сугки 28сутки

контроль вентрофит календула контроль вопрофит календула контроль вентрофит календул а

Эритроциты 5,9±0,22 7,6±0,46* 6,7±0,19* 6,4+-0,14 6,5±0,55 6,5±0,12 7Д±0,27 7,5±0,13 7,4±0,46*

Гемоглобин 112,0*4,42 135,0±5,0* 129,0±5,00* 122,0±1,19 123,0±7,88 130±1,47* 124,0±3,65 141,0±2,11* 135,0±5,0*

Гемато-крит 30,7± 1,42 41,1±1,42* 36,6±0,83 37,1±1,78 36,9±2,36 37,9±1,03 41,0±1,38 43,8±0,46* 42,1±1,42*

Лейкоциты 7,7±0,16 7,7±0,34* 5,1±0,15* 8,8±0,82 7,9±0,16 14,3±1,77* 9,2±0,43 7,2±0,60* 6,1±0,15*

Примечания: * - здесь и далее различия существенны по сравнению с данными в контроле при р<0,05.

60 % 40 20 0

3 сутки 14 сутки 28 сутки

Рис.5 Влияние вентрофита на численность лимфоцитов у белых крыс

I

Таблица 2

Влияние вей графита на показатели иммунного ответа у белых крыс «а фоне введения 6-меркаптопурииа

I Указатели / грукггы животных 3 сутки ! 4 сутки 28 сутки

контроль опыт контроль опыт контроль ОПЫТ

Лейкоциты: % 5,4*1.15 11 Л ±0,78* 10,9±0,44 12,4±0,55* 7,9±0,17 8,0±0,44

Лимфоциты абс. ч 3,5±О,50 5,3 ±0.03* 4,0±0,28 5.3±0,30* 7.1±К02 5,4±0,90

СОЗ: абс.ч ],5±0,19 1,7±0,()7 1,2±0,12 !,9±0,22* 1.1 ±0,03 0,9±0,68

С 1)22; абс.ч 0,7±0,02 0,9±0,09* ),2±0,05 1,5*0.08* ),2±0,25 1.1 ±0,29

СЭ16: абс.ч 0,2±0,05 0.3±0,01* 0,7±0,09 1,0±0.04* 1т2±0,19 [,{ЫЗ,11

Фагоцитоз: % 33,3± 1,15 37,5±0,38* 33,0±3Т85 43,5± 1.92* 23,7±4.03 32,3±2,30

Таким образом, вентрофит поддерживает активность основных звеньев иммунной системы а условиях развития синдрома цитостатической болезни у белых крыс.

О Контрольная группа

ж и и ОТНЫХ

■ Опытная группа животных

Используя базисные показатели системы гемостаза, исследовано влияние вентрофита на состояние тромбоцитарного и коагуляционного звеньев гемостаза и фибринолиза на фоне действия 6-МП.

Из таблицы 3 следует, что у животных, получавших вентрофит, на 314 сутки после окончания введения 6-МП количество и агрегационная способность тромбоцитов существенно ниже, чем у животных контрольной группы. На 28 сутки наблюдали во всех экспериментальных группах повышение численности тромбоцитов и их агрегационной активности, очевидно за счет появления молодых тромбоцитов. Таким образом, в период выраженного проявления цитостатической болезни (314 сутки) вентрофит препятствует развитию тромбоцитоза, что свидетельствует о менее выраженной миелосупрессии, вызванной 6-МП, и по степени протекторного действия данное средств превосходит действие настойки календулы.

На основании изучения базисных показателей коагуляционного звена (таб.3) установлено, что на 3 сутки после окончания введения 6-МП у животных экспериментальных групп активации механизмов свертывания крови по «внешнему» пути не происходило, протромбиновое время существенно не изменялось.

Начиная, с 14 суток активность свертывания крови возрастала, наблюдаемая гиперкоагуляция развивалась до 28 суток.

Несколько иная картина была с изменениями АЧТВ, характеризующие активность механизмов свертывания крови по «внутреннему» пути. Так, на 3 сутки в опытной группе животных наблюдали гипокоагуляцию, тогда как у животных контрольной группы наблюдалась стойкая гиперкоагуляция, которая сохранялась в течение всего эксперимента. На 14- 28 сутки у животных, получавших вентрофит, АЧТВ в пределах физиологической нормы. Показатели АКТ свидетельствуют, что вентрофит способствует сохранению сопряженности реакций между процессами свертывания крови и фибринолиза (рис.6)

Исследования влияния вентрофита на конечную стадию свертывания крови - переход фибриногена в фибрин под действием тромбина показало замедление образования сгустка фибрина. На 3-14 сутки тромбиновое время у животных, получавших вентрофит, удлинилось на 14 и 30 % соответственно по сравнению с данными в контрольной группе животных. На 28 сутки наблюдалась активация образования фибрина (укорочение тромбинового времени).

Таким образом, курсовое введение вентрофита при развитии цитостатического синдрома, вызванного 6-МП, существенно повышает свертываемость крови на 14-28 сутки по «внешнему» пути.

Таблица 3

Влияние вентрофита на показатели системы гемостаза белых крыс на фоне введение 6-меркаптопурина

Показатели 3 сутки 14сутки 28сутки

6-МП Вентрофи т Календула 6-МП Вентрофит Календула 6-МП Вентрофит Календула

11В 11,4±0,3 12,0±0,46 10,0±0,23 7,9±0,29 7,5 ±0,31 * 9,0±1,48 7,0±0,23 5,8±0,19* 8,2±0,05*

АЧ1В 7,8±0,56 14,2±1,1* 35,4±1,46* 8,4±0,69 Ю,1±0,38* 36,4±2,8* 9,9±0,71 9,7±0,28 34,5±4,34*

ТВ 29,9±1,65 34,7±1,92* 26,2±2,35 32,0±2,83 45,9±0,48* 65,6±3,63* 32,4±0,52 35,3±1,04 31,1±3,48

ЛДФ 6,7±0,48* 8,0±0,76 8,5±0,58 11,0±0,38* 8,3±0,19 5,8±0,38 6,0±0,38 10,0±0,38*

Тром-бсц!1-ты 1431,0±Ю73 985ДЙЦ38* 1026,7±63,46* 5620411,73 646,3±24,8 1392±8,46* 1029,0±77,88 1318,0±35,57* 1315,0±18,20*

Рис 6 Влияние вентрофита на свертывающую активность (А,%) крови у белых крыс при введении б-МП.

У животных, получавших препарат сравнения (экстракт календулы), в динамике эксперимента наблюдалась стойкая ги потшагу л я ция.

Гистологическое исследование желудка крыс контрольной группы показало, что курсовое введение 6-м ер капто гсур и на вызывает развитие глубокого эрозивного гастрита. На микропрепаратах желудка животных, получавших вентрофит, на 3 сутки исследования выявляются все признаки гастрита: дистрофические изменения клеток покровноямочного и железистого эпителия, интенсивная клеточная инфильтрация слизистой оболочки желудка, нарушения микроциркуляции. На 14 сутки у животных, получавших вентрофит, дистрофическим изменениям подвергается лишь по крой но-я мо ч н ы й эпителий. Наблюдается их уплощение, вакуолизация и слушивание в просвет желудка.

На 21 сутки исследования у животных, получавших вентрофит, слизистая оболочка желудка находилась без выраженных структурных изменений; выявляется незначительный отек и клеточная инфильтрация поверхностного эпителия. Эрозивные повреждения отсутствовали. Отмечено, что введение 6-МП сопровождается снижением весовых коэффинентов селезенки и тимуса на 35% и 40% соответственно по сравнению с данными у крыс интактной группы. Введение цитостатика в сочетании с вентрофитом приводило к увеличению данных показателей на

27 и 52 % соответственно по сравнению с показателями у животных, которым вводили только цитостатик.

Таблица 4

Влияние вентрофита на показатели глубины эрозии при введение 6-меркаптопурина

Группы Сроки Толщина Глубина Степень

животных исследования, слизистой эрозии, мм повреждения,

сутки оболочки %

желудка, мм

Контрольная 3 1,59±0,180 1,08±0,098 68

14 0,63+0,056 39

21 0,20±0,017 13

Опытная 3 0,87+0,076 55

14 0,34+0,034 21

21 0 0

В результате ежедневного введения ЦФ (7 мг/кг массы животного в течение 10 дней) во все указанные сроки наблюдения уменьшается число активно-пролиферирующих бластных клеток, значительно снижается количество лимфоцитов, увеличивается численность морфологически дифференцируемых элементов эритроидного ростка. Наибольшее угнетение лейкопоэтической функции костного мозга, в том числе и лимфопоэза наблюдали на 3 сутки после окончания введения цитостатика. Лейкоэритробластическое отношение (Л:Э), характеризующее состояние напряженности костного мозга, восстанавливалась на 14-28 сутки за счет повышения кроветворной активности лейко-эритробластической популяции.

Изменение картины костномозгового кроветворения вызвано нарушением клеточного гомеостаза в периферической крови в результате токсического действия ЦФ. Развитие анемии обусловлено практически полным выходом в периферическую кровь менее зрелых предшественников эритроцитов-полихроматофильных и оксафильных нормобластов. Так, на 3 сутки уровень этих клеток снизился на 81,6% и 77%, на 14 сутки - на 43,4% и 92% соответственно относительно данных в интактной группы животных. Существенное увеличение числа базофильных нормобластов обусловлено их ускоренной дифференцировкой в ответ на убыль из костного мозга в кровь более дифференцированных клеточных популяций эритроидного ростка.

Анализируя, полученные данные следует отметить, что на 3 -28 сутки явления анемии, менее выражены при курсовом введении вентрофита.

Динамические наблюдения за реакцией эритроидного ростка костного мозга в ответ на анемизацию у животных, вызванную токсическим действием цитостатика, показали, что повышается количество клеток эритроидного ряда, начиная сос тоадии базофильных и полихроматофильных нормобластов, тогда как у животных контрольной группы наблюдали увеличение клеток со стадии базофильных нормобластов, ускоренной дифференцировкой и практически полным выходом полихроматофильных и оксифильных нормобластов в периферическую кровь, чем обусловлена более выраженная анемия, отмеченная в разные сроки наблюдения (таб.5)

Таблица 5

Влияние вентрофита на показатели системы крови белых крыс на фоне

введения ЦФ

Показатели 14 сутки 28сутки

контроль опыт контроль Опыт

Эритроциты 6,3±0,38 7,0±0,23 6,0±0,29 7,4±0,39

Гемоглобин,г/л 112,5±6,73 127,0±0,68* 110,8±2,88 124,3±4,42

Гематокрит,% 38,3±1,75 39,2±1,78 44,0±2,88 35,5±0,73

Лейкоциты хЮ 6,3±1,00 7,7±0,47* 7,0±1,35 7,2±1,15

Лимфоциты, абс 3,2±0,37 3,8±0,52 40,2±2,61 2,7±0,28 51,6±2,27 3,5±0,54

Моноциты, абс 0,47±0,03 0,90±0,07 12,2±1,17 0,8±0,15 10,9±1,40 0,8±0,11

Гранулоциты, абс 2,4±0,39 3,0±0,35 47,6±2,50 3,4±0,040 39,3±3,52 3,0±0,53

Тромбоцитах 10 903,5±56,73 705,5±60,32 672,3±26,73 638,0±39,2 3

АЧТВ.сек 37,1±3,46 27,5± 1,21 69,2±5,61 32,9±2,19*

ПВ, сек 8,7±0,15 8,3±0,05 8,6±0,84 8,1±0,12

ТВ, сек 37,0±0,21 17,4±1,63 18,7±1,55 23,4±1,14

Результаты проведенного исследования не позволили выявить закономерных сдвигов со стороны морфологического состава гранулоцитарного ростка костного мозга, но общая клеточность у животных, получавших вентрофит, была выше, чем у животных контрольной группы. При изучении показателей белой крови у животных опытной группы наблюдали менее выраженную лейкопению.

Так, в период максимального угнетения кроветворения (7-10 сутки от начала введения ЦФ) выживаемость животных опытной группы составила 60%, контрольной - 46%. На 14 сутки от начала введения ЦФ у животных опытной группы количество лейкоцитов было выше по сравнению с

данными в контрольной группе на 23%, эритроцитов - на 18%, гемоглобина - на 14%.

Введение вентрофита не вызывало существенных изменений показателей коагуляционного звена гемостаза у животных опытной группы в отличие от данных крыс контрольной группы, у которых наблюдали повышение свертывающей активности крови.

Так, при исследовании тромбоцитарного звена установлено, что у животных, получавших вентрофит, количество тромбоцитов на 14 сутки увеличивается меньше по сравнению с данными в контрольной группе (на 41%). При исследовании гемокоагуляционного звена гемостаза в опыте выявлено незначительное укорочение АЧТВ, а на 28 сутки эксперимента происходила нормализация данного показателя. У животных контрольной группы увеличение АЧТВ составило на 28 сутки - 48,4%, что свидетельствует о значительном снижении свертывающей активности крови. В опытной группе животных подтверждается корригирующее действие "вентрофита" (таб. 6).

Таблица 6

Влияние вентрофита на показатели системы гемостаза у белых крыс на фоне введения ЦФ

Показатели Интакт. Контроль Опыт Контроль Опыт 28

14 сутки 14 сутки 28 сутки сутки

Тромбоциты*10 482,7±29,40 903,5±56,73 705,5±60,32 672,3±26,73 638,0±39,23

АЧТВ,сек 35,7±1,84 37,1±3,46 27,5±1,21 69,2±5,61 32,9±2,19*

ПВ, сек 7,3±0,07 8,7±0,15 8,3±0,05 8,6±0,84 8,1±0,12

ТВ, сек 24,2±0,26 37,0±0,21 17,4±1,63 18,7±1,55 23,4*1,14

Лейкоциты 15,3±1,15 8,7±1,54 12,2±0,51 8,8±0,71 13,4±0,69

Лимфоциты, абс. 7,9±0,63 4,5±0,50 6,4±0,48 3,6±0,15* 5,9±0,58

Кроме того, в опытной группе крыс при введении вентрофита установлено, что на 14-28 сутки после окончания введения ЦФ у животных, показатели активности иммунного ответа были более выражены, чем у крыс контрольной группы. В серии экспериментов показано, что у животных получавших вентрофит на 14 сутки, количество лейкоцитов выше на 34% относительно данных контрольной группы животных. При этом СО 3 больше на 12%,С О 22 - на 46,7%. На 28 сутки численность лимфоцитов выше на 39 %, СО 3 - на 36,8 %, СО 22 - на 31%, СО 16-на26,7% (таб.7).

Таблица 7

Влияние вентрофита на показатели иммунного ответа у белых крыс на фоне введения циклофосфана

Показатели 14 сутки 28 сутки

контроль опыт контроль опыт

Лейкоциты 8,7+1,54 12,2±0,51 8,8±0,71 13,4±0,69

Лимфоциты, абс. 4,5±0,50 6,4±0,48 3,6±0,15* 5,9±0,58

СБЗ, абс 1,5±0,19 1,7±0,14 1,2±0,08* 1,9±0,14

СБ22,, абс 0,8±0,02 1,6±0,16 1,1±0,09* 1,6±0,19

СО 16,, абс 1,9±0,14 1,8±0,20 1,1±0,09* 1,5±0,16

Фагоцитоз, % 47,6±2,53 50,0±3,07 52,3±1,73 49,0±3,84

Таким образом, установлено, что курсовое введение вентрофита на фоне экспериментального иммунодефицита, вызванного введением ЦФ, сопровождается коррекцией клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа. Можно полагать, что корригирующее действие используемого средства обусловлено комплексом биологически активных веществ - флавоноидов, органических кислот, полисахаридов, кумаринов и др.

Гистологическая картина стенки тонкого кишечника при введении вентрофита на фоне ЦФ характеризуется дистрофическими изменениями эпителия: призматические клетки уплощаются до кубических, приобретая нечеткие контуры, щеточная кайма не выявляется. Наблюдается клеточная инфильтрация и отек собственной пластинки слизистой оболочки кишки. Апикальные части единичных ворсинок подвергаются некрозу и слущиваются в просвет кишечника.

Таким образом, установлено, что вентрофит способствует сохранению костного мозга, картины периферической крови, состоятельности иммунитета, а также слизистой желудочно-кишечного тракта, нивелируя токсическое действие химиопрепаратов.

Курсовое введение вентрофита в используемой дозе на фоне повреждающего действия 6-МП и циклофосфана оказывает гемопротекторное, иммуномодулирующее действие и способствует сохранению слизистой желудочно-кишечного тракта. При этом, регенерация поврежденных тканей и нормализация функций происходили на более ранних сроках наблюдения.

Полученные данные, свидетельствуют о том, что комплекс растительных полифенолов, содержащихся в вентрофите, оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при цитостатической болезни. Биологически активные вещества вентрофита (флавоноиды,

витамины, полисахариды и др.) оказывают влияние на биомембраны, поддерживают структурно-функционнальное состояние клеток, активность связанных с ними ферментов и клеточный метоболизм. Известно, что растительные флавоноиды способствуют восстановлению важнейших эндогенных антиоксидантов (Балуда.,1995; Макаров., 1998).

Заключение

Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что указанные цитостатики приводят к развитию синдрома цитостатической болезни, обусловленногоих гематотоксическим действием.

Курсовое введение вентрофита на фоне экспериментальной цитостатической болезни оказывает выраженное экранирующее действие, о чем свидетельствует уменьшение уже на ранних срокахнаблюдения выраженности гематоксического синдрома.

При исследовании характера влияния вентрофита на состояние иммунной системы, установлено, что он обладает иммуномодулирующей активностью по данным реакций клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа в условиях экспериментальной иммуносупрессии. При изучении фагоцитарной активности установлено, что вентрофит стимулирует активность макрофагов. Так, на протяжении всего эксперимента активность фагоцитоза у животных, получавших вентрофит, была выше, чем у животных из контрольной группы.

Полученные в настоящей работе данные свидетельствует, что вентрофит оказывает корригирующее влияние на механизмы свертывающей, противосвертывающей и фибринолитической систем гемостаза. Это свойство обусловлено присутствием биологически активных веществ таких как, фенольные соединения, алкалоиды, кумарины, иридоиды и возможным влиянием их на реактивность вегетативной системы (Николаев, 1992; Барабой, 1993; Соколов,2000; Базаров,2001). Не исключается, что присутствие кумаринов обусловливает антикоагулянтное действие. Кумариновые антикоагулянты, как известно, нарушают образование тромбина и тромбопластина. Снижая концентрацию в крови протромбина и факторов VII,VIII и X свертывания крови, они ингибируют превращения фибриногена в фибрин (Барабой, 1976). Механизм прокоагулянтного действия возможен также за счет мембранстабилизирующего действия фенольных соединений и блокирования адренорецепторов (Николаев, 1992).

Слизистые оболочки, являясь эволюционно созданным барьером между организмом и средой обитания, подвергаются наиболее интенсивно

внешним воздействиям, что приводит к повреждению этого барьера, и как показали Г.И. Непомнящих, Л.М.Немомнящих и др. (1982), формируется регенераторно-пластическая недостаточность, приводящая к дистрофически-атрофическим процессам в слизистых оболочках, расположенных на границе внешней и внутренней среды организма. Цитостатическая энтеропатия может стать грозным осложнением химиотерапии и в тяжелых случаях привести к перфорации стенки кишечника с развитием перитонита, бактериемией кишечной флорой, эндотоксического шока (Переводчикова, 2000).

Полученные данные позволяют вскрыть некоторые особенности в фармакотерапевтическом влиянии вентрофита. Очевидно, что комплекс растительных полифенолов, коим является вентрофит, обладает выраженным антиоксидантными, противоопухолевыми,

мембранстабиилзирующими свойствами. Они способны непосредственно воздействовать на биомембраны, влияя на их структурно-функционнальное состояние, изменяя их селективную проницаемость и активность связанных с ними ферментов и далее клеточный метаболизм (Воскобойникова, 1993; Ажунова,1998; Васильев, 2001 и др.).

Показано, что при цитостатической болезни вентрофит способствует поддержанию гемостатического потенциала, восстанавливая численность лейкоцитов, препятствуя развитию инфекционных осложнений; снижает иммунодепрессивный синдром. Кроме того, указанное средство способствует сохранности слизистой желудочно-кишечного тракта животных.

Выводы:

1.Курсовое введение вентрофита в экспериментально-терапевтической дозе на фоне экспериментальной цитостатической болезни оказывает выраженное экранирующее действие, уменьшая выраженность гематоксического синдрома.

2.Вентрофит обладает иммуномодулирующей активностью, восстанавливая клеточное, гуморальное и макрофагальное звенья иммунного ответа в условиях экспериментальной иммуносупрессии.

3.Вентрофит оказывает корригирующее влияние на механизмы свертывающей, противосвертывающей и фибринолитической систем гемостаза

4.Основными механизмами фармакотерапевтического влияния вентрофита при цитостатической болезни являются, иммуномодулирующее действие и ранее обнаруженные антиоксидантные и мембраностабилизирующее свойства.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Санданова Ю.Н., Шпак И.И., Бураева Л.Б. Влияние растительных средств на систему гемостаза. - Вестник БГУ,- Улан-Удэ, 2004. -Вып.4. - С.178-183.

2. Санданова Ю.Н., Бураева Л.Б., Шпак И.И. Применение антиязвенного средства при цитостатической болезни.// -Материалы 4-й региональной международной конф. «Медицина завтрашнего дня». - Чита, 2005. - С. 157-158.

3. Санданова Ю.Н., Бураева Л.Б. Фармакотерапевтическая эффективность "вентрофита" при гематологических нарушениях, вызванных применением цитостатиков.//Сборник тезисов: Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии. Иркутск-Аршан,2005.С.148-150.

4. Санданова Ю.Н., Бураева Л.Б. Влияние "вентрофита" на состояние костного мозга и периферической крови белых крыс при экспериментальной миелосупрессии.//Сибирский медицинский журнал. - Улан-Удэ,2006-Вып.З. - С. 58-ЙО

5. Санданова Ю.Н., Бураева Л.Б., Шпак И.И Влияние "вентрофита" на иммунный статус белых крыс при экспериментальном иммунодефиците. - Вестник БГУ,- Улан-Удэ, 2005,-Вып. - С. 168172.

6. Санданова Ю.Н., Бураева Л.Б., Шпак И.И. Применение "вентрофита" с целью коррекции побочных эффектов цитостатиков в системе крови.//. Сборник научных трудов. Серия: Химия и Биологически активные природные соединения. - Выпуск 10. — Улан-Удэ,2005,- С.97-101.

7. Санданова Ю.Н., Бураева Л.Б., Шпак И.И. Коррекция токсического влияния цитостатических препаратов на гемопоэз лекарственными средствами растительного происхождения // Тезисы всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии».-Улан-Удэ,2006.- С.-112

8. Санданова Ю.Н. Влияние вентрофита на показатели иммунного статуса белых крыс на фоне применения циклофосфана // Материалы научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д.м.н. Базарона Э.Г.-Улан-Удэ, 2006,- С.-53-54.

Подписано в печать 21.03.2007 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,3 печ. л. Тираж 100. Заказ № 13.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

Актуальность проблемы. Низкая избирательность цитостатического действия противоопухолевых препаратов, применяемых в онкологии, требует постоянного внимания к проблеме токсичности лекарственных средств данной группы, в отношении интактных органов с высоким темпом клеточного обновления. Несмотря на различия по токсичности, химиопрепараты действуют на активно делящиеся клетки, вследствие чего возникают миелодепрессивный, диспепсический, иммунодепрессивный синдромы, подавляется репродуктивная функция органов, поражается кожа и ее придатки [20,24,39,44,119]

В клинической онкологии осложнения со стороны системы крови относятся к наиболее часто встречаемым паранеопластическим синдромам и нередко являются основной причиной смерти больных со злокачественными опухолями. Чаще всего эти осложнения проявляются артериальными и венозными тромботическими окклюзиями, мигрирующим тромбофлебитом, эмболией легочной артерии, небактериальным тромбоэндокардитом, парадоксальными кровотечениями, тромботической микроангиопатией. Частота тромботических осложнений у больных с опухолями в "процессе лечения составляет 5-17 %, что значительно выше, чем в общей популяции [169]. Как уже отмечалось^ механизм изменений системы свертывания крови под влиянием противоопухолевой терапии указанных больных остается невыясненным до конца. Предполагается, что применение больными химиотерапевтических средств вызывает дефицит некоторых факторов свертывания крови. В частности, обнаружен дефицит протеинов С и 8 после применения больными раком молочной железы циклофосфамида, метотрексата и фторурацила. Многие цитотоксические препараты способны стать причиной васкулярных фиброзов за счет стимуляции пролиферации фибробластов, атонии гладкой мускулатуры сосудистой стенки, активации тромбоцитов и функциональной активации или повреждения эндотелия сосудов [155]. Наряду с этим, исследования иммунологической реактивности в зависимости от характера и ритма применяемой терапии дают возможность представить степень «виновности» самого опухолевого процесса и применяемой терапии в нарушении иммунной защиты от инфекций. Так, основные изменения иммунной системы при этом сводятся к нарушению фагоцитарной защиты и снижению активности показателей гуморального и клеточного иммунитета, что определяет предрасположенность больных гемабластозами к инфекциям, а также влиянию цитостатической и лучевой терапии на чувствительность к экзоинфицированию при гемобластозах, что связано с индукцией агранулоцитоза и расширением входных ворот инфекции путем повреждающего влияния на слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта. Следует отметить, что интенсивность иммунодепрессии цитостатиками находится в непосредственной зависимости от дозы применяемых препаратов и ритма их введения [42,75,80,91,119].

Слизистая оболочка желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) является местом приложения многих патогенных факторов при различных патологических процессах и заболеваниях. Несмотря на то, что в литературе отмечены значительная частота и опасность поражения ЖКТ при проведении цитостатической химиотерапии больных, до настоящего времени не существует единого и четкого представления о характере повреждения и не принята единая терминология [42;64;132].

Например, М.Л. Гершанович (1982) все изменения ЖКТ, возникшие на фоне применения цитостатиков, объединяет под термином «диспепсический синдром», который сопровождается анорексией, тошнотой, рвотой, поражением слизистых оболочек пищеварительного тракта, в том числе язвенного и геморрагического характера. Диспепсический синдром обусловлен общетоксическим действием цитостатиков на организм, повреждением нервных окончаний по ходу ЖКТ, связан с непосредстванным цитостатическим действием химиопрепаратов на эпителий, в том числе и ротовой полости [119].

Возникающие в процессе химиотерапии больных с опухолями осложнения в значительной степени ограничивают возможности продолжения курса терапии и в ряде случаев являются показанием для прерывания лечения больных .

В связи с этим перспективным направлением в плане повышения эффективности и оптимизации химиотерапии опухолевых заболеваний является поиск и изучение средств, способных повышать резистентность организма к повреждающему действию цитостатиков, экранирующих их побочные эффекты [4,8,21,24,54,109,112,42].

Арсенал существующих в настоящее время средств и способов коррекции диспепсических и иммунологических осложнений крайне невелик, а эффективность их в ряде случаев явно недостаточна.

Перспективными для разработки методов фармакологической коррекции побочного действия цитостатиков являются средства растительного происхождения, отличающиеся, как правило, способностью подавлять отрицательные эффекты химио препаратов, ^ широтой терапевтического действия, малой токсичностью и связанной с этим возможностью длительного применения без риска возникновения токсических реакций [15,17].

Цель исследования — определить фармакотерапевтическую эффективность комплексного растительного средства вентрофит в качестве средства, уменьшающего миелотоксические, иммунотоксические, гастротоксические эффекты цитотоксической химиотерапии.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи: исследовать токсическое действие цитостатиков на систему гомеостаза крови, основные звенья иммунного ответа и состояние слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта у лабораторных животных; определить фармакотерапевтическую эффективность вентрофита при нарушениях в системах крови, иммунитета и морфо-функционнального состояния слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта при экспериментальной цитостатической болезни;

Научная новизна. В работе определены особенности фармакологического действия вентрофита, его способности корригировать систему гемостаза, поддерживать иммунную систему и предупреждать развитие повреждений органов пищеварения на фоне цитостатической болезни у лабораторных животных.

Практическое значение. Полученные данные могут явиться основой для применения вентрофита в клинической практике с целью коррекции нарушений, возникающих в кроветворной, иммунной и пищеварительной системах, при проведении цитостатической терапии больных с новообразованиями.

Положения, выносимые на защиту.

1. Комплексное растительное средство вентрофит обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при цитостатической болезни.

2. Особенностями в фармакотерапевтическом влиянии вентрофита являются его мембраностабилизирующее, противовоспалительное, спазмолитическое и иммуномодулирующее действия.

ГЛАВА 5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Развитие опухолевых процессов сопровождается, как правило, нарушением всех видов метаболизма, тканевой гипоксией, дистрофическими изменениями органов и тканей, а интенсивная цитостатическая химиотерапия, нередко приводит к тяжелым последствиям для организма в целом [1,2]. Несмотря на определенные различия в токсичности, многие химиопрепараты действуют на активно делящиеся клетки, вследствие чего развиваются миелодепрессивный, диспепсический, иммунодепрессивный синдромы и подавляется репродуктивная функция органов [1,4,6]. Токсическое влияние цитостатических препаратов на гемопоэз является наиболее частым осложнением химиотерапии. Поражая в основном пролиферирующие клетки костного мозга и, значительно реже покоящиеся клетки, цитостатики способны вызвать угнетение любого ростка кроветворения. Такое осложнение не всегда позволяет провести полный курс противоопухолевой терапии [2,3,4,5]. Для того чтобы нивелировать миелоингибирующий эффект цитостатиков, при проведении химиотерапии назначаются препараты, обладающие гемостимулирующим действием. К ним относятся неспецифические протекторы гемопоэза (спленин, зимозан), предшественники синтеза нуклеиновых кислот (пентоксил, метоцил), гормоны и соли лития. Однако широкое применение их в клинике всегда безопасно для больного [1,5,6,8].

В связи с этим, поиск путей и методов снижения выраженности побочных реакций цитостатической химиотерапии становится все более актуальным. С этих позиций представляет интерес использование лекарственных средств растительного происхождения. Анализ всего многообразия эффектов таких препаратов показал, что одним их перспективных источников поиска являются флавоноиды. Выявлено, что многие из этих средств повышают эффективность цитостатических воздействий, одновременно усиливая противоопухолевую активность антибластомных средств и снижая их токсичность.

Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что в результате курсового введения цитостатиков с различным механизмом действия в МПД наблюдается развитие синдрома цитостатической болезни, обусловленный гематотоксическим действием противоопухолевых препаратов. Так, результаты исследований показали, что после оканчания введения 6-МП в дозе 20 мг/кг массы животного происходит снижение уровня численности большинства клеточных популяций костного мозга у белых крыс. Общее количество клеток снизилось на 27%, в наибольшей степени уменьшилось количество лимфоцитов. Численность клеток гранулоцитарного ряда костного мозга поддерживалась на уровне физиологической нормы и выше. Достоверно снижено количество лейкоцитов, эритроцитов, показатели гемоглобина и гематокрита периферической крови.

Курсовое введение вентрофита на фоне экспериментальной цитостатической болезни оказывает выраженное экранирующее действие на проявления ее основных симптомов, о чем свидетельствует уменьшение уже на ранних сроках исследования выраженности гематоксического синдрома. Так, на 3-28 сутки после окончания введения цитостатика численность эритроидных клеток у животных, получавших вентрофит в 2,6 раза больше, чем у животных контрольной группы и тенденция восстановления лимфоидных клеток наблюдалась у животных, получавших вентрофит. В целом, динамика лейкоэритробластического отношения свидетельствует о менее выраженной напряженности костного мозга у животных, получавших вентрофит.

Положительное влияние вентрофита на состояние костного мозга при экспериментальной миелосупрессии отражено и в картине периферической крови. Так, на 3 сутки после окончания введения цитостатика количество эритроцитов у животных опытной группы выше на 22,4 %, концентрации гемоглобина - на 17 %, чем у животных контрольной группы, за счет ускоренного выхода из костного мозга предшественников эритроцитов. На 14 -28 сутки эксперимента наблюдали восстановление численности эритроцитов за счет их гиперрегенерации в костном мозге, характерной для популяции клеток эритроидного ряда. В периферической крови на 3 сутки снижение общего количества лейкоцитов у животных контрольной группы на 27 % происходит за счет значительной убыли лимфоидных клеток в костном мозге. У животных, получавших вентрофит, численность лейкоцитов в пределах физиологической нормы. На 14-е сутки повышение общего количества лейкоцитов происходит за счет лимфоцитов, на 28-е сутки восстановление численности лейкоцитов у животных опытной группы сопровождается увеличением количества всех форменных элементов лейкоцитарного ряда, тогда как у животных контрольной группы этого не наблюдалось. Таким образом, "вентрофит" при развитии цитостатической болезни оказывает положительное влияние на клеточный гемостаз периферической крови, предупреждая убыль клеток в результате повреждающего действия цитостатиков на мембраны клеток.

Полученные данные свидетельствуют, что курсовое введение цитостатиков в зависимости от дозы, угнетают активность иммунного ответа, характеризующееся снижением всех исследуемых показателей, что особенно выражено у животных контрольной группы. Наблюдается угнетение активности иммунного ответа, характеризующееся снижением всех исследуемых показателей. Связано это, со способностью цитостатиков подавлять процесс трансформации малых лимфоцитов в большие лимфобласты, способные продуцировать антитела и вступать в реакцию с антигеном, а также иммуносупрессивное действие цитостатика возможно за счет, вызываемой им, миелодепрессией.

При исследовании характера влияния вентрофита на состояние иммунной системы, установлено, что он обладает иммуномодулирующей активностью по данным реакций клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунного ответа в условиях экспериментальной иммуносупрессии. При изучении фагоцитарной активности установлено, что вентрофит стимулирует активность макрофагов. Так, на протяжении всего эксперимента активность фагоцитоза у животных, получавших вентрофит, выше, чем у животных из контрольной группы. Следует отметить, что изучаемый препарат по коррегирующему действию на лейкоцитарный росток превосходит действие препарата сравнения - настойку календулы.

Показано, что цитостатики оказывают повреждающее действие на органы и системы, участвующие в процессах поддержания гемостатического потенциала, что приводит к развитию у крыс ДВС - синдрома, характеризующейся спонтанной агрегацией тромбоцитов и образованием в крови большого количества тромбина. Нарушается сопряженность реакций свертывания крови и фибринолиза, что вызывает дезорганизацию периферического кровообращения с развитием тромбогеморрагий, гипоксии, полиорганной недостаточности, заканчивающейся интоксикацией метоболитами, продуктами распада белков и протеолитических ферментов, которые в свою очередь увеличивают фибринолитическую активность. Все это приводит к возникновению профузных кровотечений из органов и тканей.

Анализ, полученных внастоящей работе данных свидетельствует, что вентрофит оказывает корригирующее влияние на механизмы свертывающей, противосвертывающей и фибринолитической систем гемостаза. Это свойство обусловлено присутствием биологически активных веществ таких как, фенольные содинения, алколоиды, кумарины, иридоиды и возможным влиянием их на реактивность вегетативной системы. Не исключается, что присутствие кумаринов обусловливает антикоагулянтное действие. Кумарииовые антикоагулянты, как известно, нарушают образование тромбина и тромбопластина. Снижая концентрацию в крови протромбина и факторов VII,VIII и X свертывания крови ингибируют превращения фибриногена в фибрин. Механизм прокоагулянтного действия возможен также за счет мембранстабилизирующего действия фенольных соединений и ингибирования адренорецепторов.

Особый интерес представляет изучение состояния слизистой оболочки желудка и тонкого кишечника после цитостатической химиотерапии. Слизистые оболочки, являясь эволюционно созданным барьером между организмом и средой обитания, подвергаются наиболее интенсивно внешним воздействиям, что приводит к повреждению этого барьера, и как показали Г.И. Непомнящих и др. (1982 г.), формируется регенераторно-пластическая недостаточность, приводящая к дистрофически-атрофическим процессам именно в слизистых оболочках, расположенных на границе внешней и внутренней среды организма.

Цитостатическая энтеропатия может стать грозным осложнением химиотерапии и в тяжелых случаях привести к перфорации стенки кишечника с развитием перитонита, бактериемией кишечной флорой, эндотоксического шока. Повреждающее действие химиотерапии на органы пищеварения хорошо известны клиницистам. Наиболее тяжелые осложнения проявляются со стороны кишечника. Гистологическое исследование желудка крыс контрольной группы показало, что курсовое введение цитостатиков вызывает развитие глубокого эрозивного гастрита. Так, на 3 сутки после прекращения введения исследуемых цитостатиков, в стенке желудка животных контрольной группы наблюдаются дистрофические и некротические процессы, как в покровно-ямочном, так и в железистом эпителии. Воспалительная инфильтрация проникает в базальные отделы слизистой оболочки желудка и подслизистую основу. На фоне выраженных дистрофических изменений слизистой оболочки желудка выявляется значительное количество поверхностных и глубоких эрозий. На фоне введения вентрофита наблюдаются менее выраженные изменения в СОЖ. Микроскопически выявляются дистрофические и некробиотические изменения преимущественно покровно-ямочного эпителия, слущивание которого приводит к появлению микроэрозий. Единично выявляются эрозии, проникающие в собственную пластинку слизистой оболочки желудка. Дистрофические процессы в железистом эпителии наблюдаются только в области глубоких эрозий.

Полученные данные позволяют выявить накоторые особенности механизма фармакотерапевтической эффективности вентрофита. Очевидно, что комплекс растительных полифенолов, входящих в состав вентрофита, обладает выраженными . антиоксидантным, противоопухолевым, мембранстабилизирующим свойствами [15,75,112,116]. Они способны непосредственно воздействовать на биомембраны, влияя на их структурно-функционнальное состояние, изменяя их селективную проницаемость и активность связанных с ними ферментов и далее клеточный метоболизм. Легко окисляясь по средствам окислительно-восстановительных реакций, растительные флавоноиды способствуют восстановлению важнейших эндогенных антиоксидантов-адреналина, аскорбиновой кислоты, тиоловых групп белков, фарментов, в том числе глутатиона, играющих важнейшую роль в системе антиоксидантной защиты организма [48,138].

Показано, что при цитостатической болезни вентрофит способствует поддержанию гемостатического потенциала, восстанавливает численность лейкоцитов, препятствуя развитию инфекционных осложнений; снижает иммунодепрессивный синдром. Кроме того, указанное средство способствует сохранности слизистой желудочно-кишечного тракта животных.

1. При введении 6-меркаптопурина и циклофосфана в указанных дозах, у экспериментальных животных развивается синдром цитостатической болезни, проявляющийся в угнетении кроветворной функции костного мозга, изменении функциональной активности клеточного гомеостаза периферической крови, иммунного статуса, а также развитием деструкции слизистой оболочки желудка и тонкого кишечника.

2. Курсовое введение вентрофита в экспериментально-терапевтической дозе оказывает выраженное экранирующее действие, уменьшая выраженность гематотоксического синдрома, уже на ранних сроках развития цитостатической болезни.

3. Вентрофит обладает иммуномодулирующей активностью, восстанавливая клеточное, гуморальное и макрофагальное звенья иммунного ответа в условиях экспериментальной иммуносупрессии.

4. Вентрофит оказывает корригирующее влияние на механизмы свертывающей, противосвертывающей и фибринолитической систем гемостаза, а также предохраняет слизистую оболочку желудочно-кишечного тракта животных от деструкции.