Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакотерапевтическая эффективность сухого экстракта "Ортэкс" при экспериментальной нефропатии

*

На правах рукописи

Эрдынеев Юрий Баирович

ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ СУХОГО ЭКСТРАКТА «ОРТЭКС» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ НЕФРОПАТИИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Улан - Удэ 2005 г.

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук, проф. Шантанова Лариса Николаевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Маланов Ким Жапович кандидат медицинских наук Бартыков Евгений Геннадьевич

Ведущие организации:

Бурятский государственный университет МО и науки РФ

Защита состоится «15» сентября 2005 года в 10 часов на заседании диссертационного совета К 003.028.01 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан " ^ " августа 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук

Хобракова В.Б.

¿ш-Ь- ншм

У4 Мб

Общая характеристика работы Актуальность темы. Актуальными проблемами медицинской науки и практического здравоохранения являются вопросы профилактики и лечения заболеваний почек; 'Заболевания почек, как правило, характеризуются тяжелым течением, развитием рецидивов заболевания, приводящим к длительной потере трудоспособности и инвалидизации (Горбачев и со-авт., 1994; Арьев и соавт., 1997). При этом, несмотря на использование современных методов лечения, гломерулярные и тубулоинтерстициаль-ные заболевания почек в 1,5 % случаев .приводят к развитию почечной недостаточности, при которой летальность достигает 40 - 50 % (Пермяков, Зимина, 1982; Милованов, Николаев, 1998).

Социальная значимость нефрологической патологии, помимо широкой распространенности, определяете^ также тем фактом, что в последние десятилетия отмечается ее значительное омоложение, в связи с чем заболевания почек в настоящее время становятся одной из ведущих причин инвалидизации и смертности в трудоспособном возрасте (Горбачев и соавт., 1984; Тареева, 2000).

Экологическое неблагополучие, широкое внедрение в быт продуктов химического производства обусловливают существенный рост экзотоксических поражений почек (Аллазов, 1998; Вестник ВОЗ, 1994). В последнее время все чаще встречаются случаи лекарственной нефропатии, возникающие при использовании препаратов широкого использования (антибиотиков и нестероидных противовоспалительных средств), а также препаратов, применяемых в базисной терапии онкологических заболеваний и туберкулеза (Хоменко, 1998; Тареева, 1998; 2000; Астахова, 2000; Лукьянова, 2002). При этом, лекарственные средства вызывают самые разнообразные поражения почек, оказывая как прямое нефротоксическое действие,, связанное с их токсическим влиянием на метаболические и транспортные системы, так и вызывая поражения интерстиция, сосудистой и эндокринной систем почек (Тареева и соавт., 2000).

В этой связи фармакотерапия и фармакопрофилактика заболеваний почек требует щадящего подхода, поскольку применяемые для лечения заболеваний почек отдельные нрепараты вызывают побочные эффекты, в том числе - нефротоксические, они требуют осторожного дозирования ввиду снижения функциональной состоятельности почек при их повреждении и сама медикаментозная терапия может явиться причиной развития рецидивов заболевания.

С этим обстоятельством связано значительное повышение интереса к использованию растительных препаратов, имеющих ряд преимуществ перед химиопрепаратами: поливалентность действия, низкая токсичность, отсутствие негативных побочных эффектов при длительном приеме. I <юс. нлциенАльнл$Г

| БИБЛИОТЕКА I 3 С.1 • О»

П1И111и1 Г^Д I

Одним из рациональных подходов к решению задач по расширению арсенала нефропрогекторных растительных средств является перевод их галеновых форм в аналогичные по составу экстракционные препараты, содержащие сумму биологически активных веществ в концентрированном виде и сохраняющие все преимущества растительных препаратов. Указанный принцип получения сухих экстрактов- концентратов способствует рациональному, экономичному использованию растительного сырья, позволяет обеспечить стандартизацию препарата как на стадии изготовления, так и конечного продукта, а также точность дозирования, хорошую растворимость, стойкость и удобство при применении.

Обьектом настоящего исследования явился сухой экстракт ор-тосифона тычиночного (Orthosiphon stamineus Benth.), разработанный совместно с сотрудниками ВИЛР, условно названный «ортэкс» (АС РФ №1737797, 1993).

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось определение фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности «ортэкса» при повреждениях почек различной этиологии, а также выявление возможных механизмов его мочегонного и нефропротек-торного действия.

Для достижения указанной цели необходимо было решить

задачи:

- определить основные фармакологические свойства «ортэкса»;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность «ортэкса» при нефропатиях - ишемической, токсической и лекарственной этиологии;

- выявить особенности механизма мочегонного и нефропротек-торного действия «ортэкса»;

- оценить безопасность «ортэкса».

Научная новизна. Работа представляет собой экспериментальное исследование фармакологической активности и определение фармакотерапевтической эффективности «ортэкса», представляющего собой сухой экстракт из сырья ортосифона тычиночного. Установлено, что «ортэкс» обладает диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, антиэкссудативной активностью, стимулирует процессы регенерации; оказывает спазмолитическое, гипокоагуляционное, сосудоукрепляющее действие.

Показано, что курсовое введение «ортэкса» белым крысам в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг на фоне нефропатий ишемической, токсической и лекарственной этиологии оказывает выраженное фармакотерапевтическое действие, способствуя нормализации функционального состояния почек животных на более ранних сроках патологического процесса.

Установлено, что диуретическое',действие испытуемого фитоэкс->. : .< г •

гракта обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность канальцевой реабсорбции; один из механизмов мочегонного эффекта связан с угнетением активности Na+, К+ -АТФазы. Механизмы нефропротекторного действия «ортэкса» обусловлены базисной мембраностабилизирующей активностью, реализация которой обеспечивается антиоксидантным действием комплекса феноль-ных соединений, оказывающих прямое антирадикальное действие и повышающих активность системы антиоксидантной защиты организма.

Экстракт является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает негативного влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма, не приводит к нарушению обменных процессов, является малокумулирующим веществом; не оказывает местнораздражающего действия; не обладает аллергенными, имму-нотоксическими, эмбриотоксическими и тератогенными свойствами; не оказывает отрицательного влияния на постнаталыюе развитие потомства лабораторных животных.

Практическая значимость. Материалы исследований фармакологической активности, определения фармакотерапевтической эффективности и безопасности «ортэкса» включены в отчет по доклиническому испытанию. Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета МО и науки РФ.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004); региональной конференции «Экология, здоровье, спорт» (Чита, 2004); четвертой региональной межвузовской конференции «Медицина завтрашнего дня» (Чита, 2005); научной конференции «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии» (Тунис, 2005); ежегодных научно-практических конференциях преподавателей и сотрудников медицинского факультета БГУ (2003; 2004 г.г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН в соответствии с программой «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов» (№ гос. регистрации 01.9.400031.83), утвержденной 06.12.95 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. «Ортэкс» в экспериментально-терапевтических дозах (100, 150, 300 мг/кг) обладает выраженным мочегонным и гипоазотемическим

действием; проявляет противовоспалительную, сосудоукрепляющую, спазмолитическую и антибактериальную активность; стимулирует процессы регенерации; оказывает гипокоагуляционное и мембраностабили-зирующее действие.

2. Курсовое введение «ортэкса» в дозе 150 мг/кг оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при повреждениях почек ишемической, токсической и лекарственной этиологии, нормализуя функциональное состояние почек животных на более ранних сроках патологического процесса. .

3. Диуретическое действие «ортэкса» обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность канальцевой реабсорбции; механизмы мочегонного эффекта связаны с угнетением активности Na+, К+ -АТФазы.

4. Механизмы нефропротекторного действия «ортэкса» связаны с наличием базисной мембраностабилизирующей активности, реализация которой обеспечивается антиоксидантным действием комплекса феноль-ных соединений, оказывающих прямое антирадикальное действие и повышающих активность антиоксидантной системы организма.

5. «Ортэкс» является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает токсического влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма; не обладает побочными негативными эффектами.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, четырех глав собственных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 213 источников: 154 отечественных и 59 зарубежных авторов.

Работа изложена на 133 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 45 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальная работа выполнена на крысах линии Вистар массой 160 - 200 г, мышах линий СВА и F, массой 18 - 20 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН на обычном рационе (Приказ МЗ СССР №1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.). Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Кроме того, в экспериментах были использованы штаммы условно-патогенных бактерий, культуры тканей: суспензия эритроцитов, суспензия липосом, препараты тонкого

кишечника; модельные биохимические тест-системы.

Суспензию эритроцитов готовили из свежей эритроцитарной массы донорской крови путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе в соотношении 1 10 и центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 мин (Ковалев и соавт., 1986).

Суспензию липосом получали из свежего куриного яичного желтка путем суспендирования с фосфатным буфером (рН 7,4) в соотношении 1 : 10 на магнитной мешалке в течение 15 мин (Лопухин и соавт., 1983).

В модельных биохимических тест-системах в качестве субстратов использовали: глутатион окисленный, глутатион восстановленный, фос-фоенолпируват, гидроксибутил, аденозинди- и трифосфаты, Р-никотинамидадениндинуклеотид восстановленный и р- никотинамидаде-ниндинуклеотид фосфат фирмы «Sigma».

Двустороннюю ишемию почек воспроизводили путем выделения почек белых крыс из жировой капсулы и окклюзии сосудистых пучков обеих почек на 60 мин (Шепотиновский и соавт., 1989). Операцию проводили под барбамиловым наркозом (80 мг/кг внутрибрюшинно). По истечении 60 мин зажимы с почечных ножек снимали и рану ушивали послойно наглухо в асептических условиях.

Токсический некронефроз у белых крыс вызывали однократным внутрибрюшинным введением раствора хлорида ртути в дозе 2 мг/кг (Соколова и соавт., 1975).

Лекарственное поражение почек вызывали внутримышечным введением канамицина в дозе 300 мг/кг массы 1 раз в сутки в течение 14 дней (Руководство, 2001).

Введение водного раствора «ортэкса» осуществляли по соответствующим схемам внутрижелудочно 1 раз в день в дозе 150 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали раствор леспенефрила или ка-нефрона в объеме 1,5 мл/кг. Исследование функционального состояния почек проводили на 1, 3 и 7 сутки после введения нефротоксинов.

С целью оценки функционального состояния почек животных определяли: диурез по общепринятому методу без нагрузки и с 2,5 % водной нагрузкой (Берхин, Иванов, 1972); концентрацию катионов натрия и калия в моче - методом пламенной фотометрии; депурационную функцию Ночек оценивали по содержанию мочевины и креатинина в сыворбтке крови и моче - унифицированными методами с использованием наборов реактивов Био-Ла-Тест "Лахема"; содержание белка в моче - реакцией с сульфо-салициловой кислотой (Меньшиков и соавт., 1987); оценку скорости клу-бочковой фильтрации (СКФ) - по клиренсу эндогенного креатинина (Ка-питаненко, Дочкин, 1985).

Оценку антиэкссудативной активности экстракта проводили на

моделях острого асептического воспаления задней конечности, индуцированного введением формалина (Стрельников, 1960), декстрана (Лещин-ский, 1976), гистамина гидрохлорида. Острый перитонит воспроизводили путем внутрибрюшинного введения нитрата серебра (Александров и со-авт., 1986), при этом определяли объем экссудата и количество деграну-лированных тучных клеток в брыжейке. Оценку влияния «ортэкса» на образование фиброзно-грануляционной ткани осуществляли по методу Тринус Ф. и соавт. (1975); на процессы альтерации и регенерации - по методу Menkin (Ойвин, Шетель, 1961); на сосудистую проницаемость - с использованием метода меченых сосудов (Горизонтова и соавт., 1975).

Изучение спазмолитической активности испытуемого средства проводили на изолированном отрезке тонкой кишки белых крыс с использованием серотонина (10'4 М) и карбахолина (10"6 М) (Furchgott, 1967).

Оценку антибактериальной активности экстракта осуществляли методом двукратных серийных разведений в жидкой среде (Першин, 1971). В качестве тест-бактерий использовали Escherichia coli 408, Staphylococcus aureus 209P, Proteus vulgaris H 50, Streptococcus faecal is, Pseudomonas aeruginosa. Микробная нагрузка составляла 250000 клеток в 1 мл.

Оценку мембраностабилизирующей активности осуществляли по степени осмотического гемолиза и перекисного гемолиза эритроцитов, вызываемого реактивом Фентона (Ковалев и соавт., 1986).

Антиоксидантные свойства оценивали по степени ингибирования генерации супероксидного анион-радикала (Nichikimi et al., 1972) и образования продуктов перекисного окисления липидов: диеновых конъюга-тов (ДК) (Гаврилов, Мишкорудная, 1983), накопления ТБК-активных продуктов (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981) и в го-могенате коркового слоя почек (Стальная, Гаришвили, 1977). Для оценки влияния испытуемого средства на состояние системы антиоксидантной защиты определяли активность каталазы крови (Королюк и соавт., 1986), глутатионпероксидазы (Flon, 1988), глутатион-редуктазы (Cotariu et al., 1992) в модельных тест-системах (Бродова и соавт., 2004).

Определение уровня Fe2+ - индуцированной хемилюминесценции (XJI) проводили на «Хемилюминометре PXL - 01» (Россия) по общепринятому методу с расчетом коэффициента антиоксидантной активности (Клебанов и соавт., 1988; Сергеев и соавт., 1991).

Активность №+,К.'-АТФазы определяли in vitro с использованием метода (Болдырев, 1977), концентрацию белка в препаратах микросом определяли по Lowry (1951).

Определение острой токсичности DL50 осуществляли по методу Кербера (Требования..., 1984), оценку общетоксических свойств и специфических видов токсичности при длительном введении «ортэкса» осуществляли в соответствии с «Руководством по экспериментальному (докли-

ническому изучению новых фармакологических веществ» (2000).

Полученные в ходе экспериментов данные статистически обработаны общепринятыми методами для малой выборки с определением средней величины (М) и ошибки средней арифметической (ш). Достоверность результатов (Р) оценивалась с применением критерия Манна-Уитни (Сергиенко, Бондарева, 2000). Различие считали достоверным при вероятности 95 % (Р < 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследования специфической фармакологической активности «ортэкса» включали определение его влияния на функциональное состояние почек; оценку противовоспалительной, спазмолитической и антибактериальной активности, влияние на сосудистую проницаемость и холерез. При исследовании диуретической активности проведено определение доза-, время- и кратность-зависимых эффектов испытуемого средства.

При исследовании мочегонной активности «ортэкса» установлено, что при однократном введении белым крысам в диапазоне доз 50 - 300 мг/кг наиболее выраженное диуретическое действие (в 1,5 раз по сравнению с контролем) отмечалось при использовании его в дозах 150, 200 и 300 мг/кг. При этом диуретическая активность испытуемого средства на 20 - 25 % превосходила таковую у препарата сравнения - настоя ортоси-фона. При исследовании время- и кратность-зависимых эффектов было установлено, что наиболее выраженное диуретическое действие «ортэкс» оказывает при введении за 1 сутки до исследования; его эффективность повышается при многократном введении: оптимальная кратность введения - в течение 7 дней. Наряду с повышением водовыделительной функции почек, испытуемое средство оказывает салуретическое действие, повышая экскрецию ионов калия и натрия с мочой. Более существенное стимулирующее действие «ортэкса» обнаружено в отношении натрийуре-тической реакции: выведение ионов натрия повышалось на 84 % по сравнению с контролем.

Исследование влияния «ортэкса» на функциональное состояние клубочкового и канальцевого аппарата почек показало, что его однократное введение в дозе 150 мг/кг сопровождается существенным повышением скорости клубочковой фильтрации - более чем в 3 раза; концентрационной функции - на 65 % по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы; на уровень канальцевой реабсорбции испытуемое средство существенного влияния не оказывает.

Установлено, что «ортэкс» в экспериментально-терапевтической дозе (150 мг/кг) способствует повышению депурационной функции почек, о чем свидетельствует повышение экскреции мочевины и креатинина соответственно на 64 и 37 % по сравнению с показателями у животных контрольной группы.

Поскольку значительную долю в общей структуре заболеваний почек занимают нефропатии, протекающие на фоне воспалительных процессов, было проведено изучение противовоспалительной активности «ортэкса» с использованием различных моделей асептического воспаления, позволяющих оценить его влияние на основные стадии воспалительного процесса: альтерацию, экссудацию и регенерацию. В результате проведенного исследования установлено, что «ортэкс» обладает выраженной противовоспалительной активностью, оказывая положительное влияние на все стадии воспалительной реакции. При остром асептическом воспалении, вызванном подкожным введением уксусной кислоты курсовое введение «ортэкса» в дозе 150 мг/кг уменьшало выраженность альтерации тканей и стимулировало регенерацию поврежденных тканей, о чем свидетельствует уменьшение площади кожно-мышечного дефекта на 2, 14 и 25 сутки соответственно на 23, 34 и 25 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Наряду с этим «ортэкс» в указанной дозе оказывает достоверное антиэкссудативное действие, уменьшая степень отека конечности, вызванного введением формалина и декстрана.

При изучении влияния «ортэкса» на сосудистую проницаемость, проведенного с использованием метода меченных сосудов, установлено, что у животных опытной группы, получавших его в дозе 150 мг/кг, количество брыжеечных окон без метки увеличивается почти в 2 раза по сравнению с контролем, а также отмечается существенное уменьшение количества окон с более 10 мечеными сосудами и некоторое увеличение количества брыжеечных окон с 1-10 мечеными сосудами. При исследовании проницаемости сосудов, по интенсивности метки, количество животных с самыми интенсивными метками, соответствующими 3 и 4 степеням проницаемости, у крыс опытной группы уменьшалось соответственно на 20 и 100 % по сравнению с контролем.

Исследование спазмолитического действия «ортэкса», проведенного на изолированном отрезке тонкого кишечника крысы, показало, что экстракт в концентрации, соответствующей экспериментально-терапевтической, обладает выраженной спазмолитической активностью по отношению к серотониновым спазмам, уменьшая способность препарата тонкого кишечника к сокращениям в среднем на 70 % по сравнению с контролем; на величину реакции при действии карбохолина испытуемое средство не оказывает заметного влияния.

Выявлено, что «ортэкс» в дозе 150 мг/кг проявляет умеренную желчегонную активность, стимулируя скорость секреции желчи, синтез и выделение желчных кислот. Под его влиянием скорость секреции желчи повышалась в среднем на 16 %, суммарное содержание желчных кислот в сецернируемой желчи увеличивалось на 29 % по сравнению с данными у животных контрольной группы. На концентрацию билирубина и холесте-

рина в желчи «ортэкс» отчетливого влияния не оказывал.

При изучении антибактериальной активности «ортэкса» установлено, что фитоэкстракт оказывает выраженное антимикробное действие только по отношению к стафилококку, причем в высоких концентрациях (J 2,44 - 24,88 мг/кг) он обладает бактерицидным действием, а в меньших (0,38 - 6,33 мг/кг) - бактериостатическим. Кроме того, высокие концентрации «ортэкса» оказывают бактриостатическое действие по отношению к протею и синегнойной палочке.

Исследование фармакотерапевтической эффективности «ортэкса» проведено с использованием1 моделей почечной недостаточности токсической, ишемической и лекарственной этиологии.

Фармакотерапевтическая эффективность «ортэкса» при сулемовом некронефрозе Установлено, что превентивно-курсовое введение «ортэкса» в экспериментально-терапевтической дозе (150 мг/кг) на фоне острого поражения почек белых крыс сулемой оказывает выраженное нефропротек-торное действие, сопровождающееся повышением функциональной активности почек животных: повышением экскреции азотистых метаболитов и диуреза, увеличением СКФ и снижением протеинурии (табл. 1).

Таблица 1

Влияние «ортэкса» на показатели функционального состояния почек белых крыс при сулемовой нефропатии

Показатели' Группы животных

Интактная Контрольная Ортэкс Леспенефрил

1 2 3 4 5

1 сутки

Мочевина в сыво-пптке.ммоль/л 6,4±1,3 28,9±0,3 28,9±1,2 27,9±1,3

Креатинин в сыво-потке.мкмоль/л 94,9±1,1 416,2±46,9 328,2±36,7 295,5±18,9*

Креатинин в моче, мкмоль/л 1190,2± 100,5 168,5±9,55 337,1 ±38,9* 252,8±32,6*

СКФ, мкл/мин 96,2±4,6 2,4±0,1 4,6±0,2* 4,28±0,37*

Диурез, мл/100 г/ч 0,46+0,010 0,ЗОЮ,027 0,27 ±0,013 0,30± 0,013

К+ й моче, мг/мл 2,5±0,06 1,4±0,05 1,6±0,12 1,8±0,06*

Nab в моче, мг/мл 0,7±0,07 0,5±0,09 0,5±0,04 0,8±0,15*

Продолжение таблицы 1

Белок в моче, г/л 0,8 ±0,03 6,2 ±0,11 4,4 ±0,21* 3,2 ±0,34*

3 сутки

Мочевина в сыво-погке. ммоль/л 6,44± 1,3 71,0±5,2 27,9±7,2* 38,8±1,8*

Креатинин в сыво-потке. мкмоль/л 94,9±1,1 621,3±26,2 497,5±18,8* 536,0±14,4

Креатинин в моче, мкмоль/л 1197,7±102,9 788,8±11,2 1256,9±59.6* 1757,3±119,2*

СКФ, мкл/мин 96,2±4,6 5,3±0,06 12,9±0,87* 20,5±2,87*

Диурез, мл/100г/ч 0,46±0,010 0,20 ±0,010 0,32± 0,023* 0,58 ±0,05*

К + в моче, мг/мл 2,5±0,06 0,9±0,10 1,2*0,05 1,2±0,08

N3 * в моче, мг/мл 0,7±0,07 0,5±0,08 0,6±0,02 0,6±0,01

Белок в моче, г/л 0,8 ±0,03 2,2 ±0,21 1,2 ±0,15* 1,5 ± 0,11*

7 сутки

Мочевина в сыворотке. млмоль/л 6,44±1,30 16,3±1,3 11,6±0,52* 9,4±0,09*

Креагииин в сыво-оогке. мкмоль/л 94,9±1,1 202,0±9,53 102,3±18,6 97,7±15,5

Креатинин в моче, мкмоль/л 1190,7± 102,9 1409,9±138,0 1727,3±154,5 1855±116,3*

СКФ. мкл/мин 96,2±4,6 63,6±4,33 202,5±8,05* 169,1 ±8,26*

Диурез, мл/100г/ч 0,46±0,010 0,49 ±0,013 0,72 ±0,022* 0,53± 0,006

К+ в моче, мг/мл 2,5±0,06 1,б±0,08 2,5±0,26* 2,2±0,25*

№+в моче, мг/мл 0,7±0,07 0,6±0,11 0,8±0,11 1,0±0,23*

Белок в моче, г/л 0,8 ±0,03 1,25 ±0,0 0,9 ±0,01* 0,9 ±0,02*

Примечание: * - здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от данных контрольной группы при Р 5 0,05.

При этом гипоазогемическое действие испытуемого фитоэкстракта наблюдалось на 3 и 7 сутки исследования; скорость клубочковой фильтрации на I и 3 сутки достоверно превышала аналогичный показатель у крыс контрольной группы, а на 7 сутки СКФ у животных опытной группы более чем в два раза превышала значения физиологической нормы, очевидно за счет повышения диуреза и экскреции креатинина. В целом благо-

приятное влияние испытуемого фитоэкстракта проявлялось в нормализации показателей функционального состояния почек белых крыс на более ранних сроках патологического процесса. При этом фармакотерапевтиче-ская эффективность экстракта ортосифона тычиночного была аналогичной таковой у препарата сравнения леспенефрила.

Таблица 2

Влияние «ортэкса» на содержание продуктов перекисного окисления ли-пидов в сыворотке крови белых крыс при сулемовой нефропатии

Показатели Сроки, сутки Группы животных

Интактная Контрольная Ортэкс

МДА мкмоль/мл 1 21,0±1,09 39,2± 1,60 35,6±2,33

ДК, усл.ед. 1,52±0,14 4,58±0,38 4,05±0,31

МДА мкмоль/мл 3 21,4±1,80 40,4±2,05 30,5±2,46*

ДК, усл.ед. 1,52±0,14 4,32±0,27 2,66±0,18*

МДА мкмоль/мл 7 22,3± 1,18 33,7± 1,32 23,6±1,55*

ДК, усл.ед. 1,52*0,14 3,56±0,35 1,75±0,12*

Как следует из данных, приведенных в таблице 2, курсовое введение экстракта ортосифона на фоне интоксикации сулемой оказывало ингибирующее действие на процессы свободнорадикального окисления липидов, о чем свидетельствует достоверное уменьшение содержания продуктов липопероксидации в сыворотке крови животных опытной группы по сравнению с контролем во все сроки исследования.

Фармакотерапевтическая эффективность «ортэкса» при постишемической нефропатии Как следует из данных, приведенных в таблице 3, превентивно-курсовое введение белым крысам «ортэкса» в экспериментально-террлевтической дозе (150 мг/кг) на фоне постишемической ОПН оказывает выраженное нефропротекторное действие.

В частности, об этом свидетельствует динамика изменений биохимических показателей, характеризующих функциональное состояние почек белых крыс.Так, под влиянием испытуемого средства во все сроки исследования отмечалось уменьшение степени азотемии: в крови животных опытной группы достоверно уменьшалось содержание азотистых метаболитов при одновременном ускорении выведения их из организма.

При этом на 7 сутки у животных опытной группы концентрация азотистых метаболитов в сыворотке крови снизилась до значений физио-

логической нормы, тогда как у крыс контрольной группы к указанному сроку отмечалась умеренная азотемия.

Таблица 3.

Влияние «ортэкса» на показатели функционального состояния почек белых крыс при ишемической ОПН

Показатели Группа животных

Интактная Контрольная Ортэкс

1 2 3 4

1 сутки

Креатинин в сыворотке, мкмоль/л 97,35 ± 1,08 213,0 0± 10,03 172,25 ±6,01*

Мочевина в сыворотке, ммоль/л 6,24 ± 0,65 22,05 ± 2,35 16,15 ±0,93*

Креатинин в моче, мкмоль/л 1127,0 ± 110,2 394,5 ± 38,4 577, 0± 43,2*

СКф, мкл/мин 144,1 ± 13,52 11,8± 0,95 32,8 ± 1,44*

Диурез, мл 100г/час 0,74 ±0,10 0,38 ± 0,04 0,59 ± 0,03*

К4" в моче, мг/мл 3,02 ± 0,26 1,26 ±0,08 51,46 ±0,06*

Ыа+ в моче, мг/мл 1,13 ±0,20 0,42 ± 0,05 0,56 ± 0,03*

Белок в моче, г/л 1,05 ±0,11 2,25 ±0,21 1,08 ±0,14*

3 сутки

Креатинин в сыворотке, мкмолЬ/л 97,35 ± 1,08 144,60 ± 5,29 108,05 ± 15,29*

Мочевина в сыворотке, ммоль/л 6,24 ± 0,65 17,37 ±2,19 11,16± 1,21*

Креатинин в моче, мкмоль/л • 1127,0 ±110,2 511,5 ±31,0 535,0 ±41,58

СКФ, мкл/мин 144,1 ± 13,52 14,5±1,58 37,6± 3,62*

Диурез, мл 1 (Юг/час 0,67 ±0,09 0,25±0,004 0,46 ± 0,02*

К+ в моче, мг/мл 3,02 ± 0,26 1,38 ±0,27 2,29 ±0,18*

в моче, мг/мл 1,13 ±0,20 0,62 ±0,10 1,38 ±0,50*

Белок в моче, г/л 1,05 ±0,11 1,87 ±0,16 1,12 ± 0,10*

7 сутки

Креатинин в сыворотке. мкмоль/л 97,35 ± 1,08 И 3,68 ±8,54 95,23 ± 6,52

Мочевина в сыворотке, ммоль/л 6,24±0,65 11,15±0,95 9,82 ±1,21

Креатинин в моче, мкмоль/л 1127,0 ± 110,2 854,0 ±785,5 1022,0 ± 106,0*

Продолжение таблицы 3

СКФ, мкл/мин 144,1 ± 13,52 63,8 ± 5,87 134,5± 11,22*

Диурез, мл 100г/час 0,67 ± 0,09 0,£1 ± 0,05 0,75 ±0,08*

К4 в моче, мг/мл 3,02 ± 0,26 2,54 ±0,16 2,95 ±0,18

Ма+ в моче, мг/мл 1,13 ±0,20 0,94 ± 0,06 1,28 ±0,14*

Белок в моче, г/л 1,05±0,11 1,13±0,10 1,17± 0,09

Можно полагать, что в основе гипоазотемического действия «ортэкса» лежит его способность повышать скорость клубочковой фильтрации, что и было установлено в эксперименте. Так, на 1 и 3 сутки исследования СКФ у крыс, получавших испытуемое средство, повышалась соответственно в 2 и 1,5 раза по сравнению с таковой у животных контрольной группы, а на 7 сутки приближалась к уровню физиологической нормы. Наряду с этим, испытуемый фитоэкстракт оказывал выраженное диуретическое и салуретическое действие, а также уменьшал степень протеину-рии, о чем свидетельствует достоверное повышение концентрации катионов натрия и калия, с уменьшением содержания белка в моче.

Таблица 4

Влияние «ортэкса» на содержание продуктов перекисного окисления ли-пидов и активность каталазы на фоне постишемической нефропатии

Показатели Группы

Интактная Контрольная Ортэкс

1 сутки

Диеновые копъгога- 1,33±0,06 4,55±0,38 4,42±0,55

ты, усл.сд

МДА в сыворотке, мкмоль/мл 2,69±0,10 3,60±0,12 3,41 ±0,15

МДА в почках, 14,70±0,83 38,62±1,40 32,52±2,31

мкмоль/г ткани

Катал аза, мкмоль/мл 0,41 ±0,03 0,21± 0,01 0,33± 0,02*

3 сутки

Диеновые конъюга- 1,33±0,0б 4,65±0,26 3,82±0,26*

ты, усл.ед.

МДА в сыворотке, мкмоль/мл 2,69±0,10 3,68±0,07 3,18+0,14*

МДА в почках, 15,53±1,09 41,06±2,58 25,45±1,68*

чкмольЛ ткани

Катал аза. 0,41± 0,03 0,24± 0,01 0,38± 0,03"

мкмоль/мл

7 сутки

Продолжение таблицы 4

Диеновые коньки а-ты, усл.ед. 1,33±0,06 2,63±0,18 1,51 ±0.09*

МДА в сыворотке, мкмоль/мл 2,69±0,10 2,90±0,14 2.75+0.24

МДА в почках, мкмоль/г ткани 14,90±0,75 28,45±2,66 16.43-ь 1,28*

Катал аза, мкмоль/мл 0,41 ±0,03 0,32± 0,03 0,40± 0,03

Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют, что под влиянием «ортэкса» снижается интенсивность процессов перекисного окисления липидов, индуцированных острой ишемией почек, на что указывает достоверное снижение концентрации продуктов ПОЛ: диеновых конъюгатов и МДА в сыворотке крови и гомогенате почек белых крыс. При этом наиболее отчетливое снижение отмечалось на 3 сутки исследования, а на 7 сутки эти показатели у крыс опытной группы достигали значений физиологической нормы. На фоне введения «ортэкса» животным с ишемией почек наблюдали активацию антиокислительной активности организма. Так, в сыворотке крови белых крыс возрастала активность катапазы по сравнению с показателями в контроле в среднем на 30-40 %.

Фармакотерапевтическая эффективность «ортэкса» при канами-циновой нефропатии Данные, приведенные в таблице 5, свидетельствуют, что при курсовом введении канамицина развивается гиперазотемический и олигури-ческий синдром с нарушением экскреторной функции почек и умеренно выраженной протеинурией (табл. 5).

Курсовое введение «ортэкса» на фоне канамицинового поражения почек белых крыс оказывало выраженное нефропротекторное действие, о чем свидетельствовало повышение диуретической, депурационной и экскреторной функций почек, увеличение выделения электролитов с мочой на фоне введения данного средства.

Таблица 5.

Влияние «ортэкса» на функциональное состояние почек _ белых крыс при канамициновой нефропатии_

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (канамицин) Опытная 1 (канамицин + ортэкс) Опытная 2 (канамицин + а-ТФ)

8 сутки

Белок в моче, 1,02±0,52 г/л 3,49±0,43 1,12±0,17* 1,83±0,17

Продолжение таблицы 5

СКФ. мкл/мин 84,97±7,3 1 45,34±3,72 68,91±4,11* 51,79±4,35

Диурез мл/100 г/ч 0,70±0,06 0,54±0,03 0,71±0,025* 0,69±0,03

Креатинин, мкмоль/мл 54,01±5,1 2 87,54±2,03 69,50±3,44* 84,00±4,19

Мочевина, ммоль/мл 5,23±0,28 9,13±0,92 6,24±0,81* 6,75±0,94

15 сутки

Белок в моче, г/л 1,02±0,52 4,59±3,85 1,42±0,08* 4,08±3,20

СКФ,мкл/ми н 84,97±7,31 13,92±1,4 22,96±3,78* 16,84±1,67

Диурез мл/100 г/ч 0,70±0,06 0,44±0,035 0,68±0,045* 0,65±0,035

К+ в моче, мг/мл 2,93±0,17 1,35±0,14 2,57±0,20* 2,19±0,17

в моче, мг/мл 1.01±0,08 0,24±0,04 0,77±0,07* 0,51 ±0,08

Креатинин, мкмоль/мл 54,01±5,12 304,76±24,51 176,38±16,99* 262,09±31,01

Мочевина, ммоль/мл 5,23±0,28 23,18±2,06 12,27±1,08* 20,39±1,72

Так, на 8 и 15 сутки опыта экскреция белка с мочой у животных опытных групп уменьшалась на 68 % и в 3,2 раза соответственно; креати-нинемия снижалась на 21 и 42%, а концентрация мочевины - на 32 и 47%; кроме того происходило увеличение СКФ на 52 и 64 %; объем мочи белых крыс был больше на 32 и 55 % соответственно по сравнению с аналогичными данными у контрольных животных. Выделение катионов калия и натрия с мочой при курсовом введении «ортэкса» возрастало в 1,9 и 3,2 раза соответственно по сравнению с показателями контрольной группы.

Данные, приведенные в таблице 6, свидетельствуют, что введение канамицина сопровождается индукцией процессов свободнорадикального окисления (СРО) липидов и снижением активности эндогенной антиокислительной системы организма. Курсовое введение экстракта животным, получавших канамицин, сопровождается достоверным снижением скорости накопления ДК и МДА в крови и почках. Так, при введении «ортэкса» на 8 и 15 сутки отмечалось снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 33 и 36 % соответственно; уменьшение содержания МДА в крови и гомогенате почек белых крыс на 26 и 40 % и -

\п

гомогенате почек белых крыс на 26 и 40 % и -на 28 и 41 % соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы.

Таблица 6.

Влияние «ортэкса» на показатели перекисного окисления липидов и активность ферментов в сыворотке крови белых крыс при канамициновой

нефропатии

Группы животных ДК, усл. ед. МДА, в сыворотке крови, мкмоль/ мл мин МДА. нмоль/г ткани Каталаза, мкат/л СОД, в эритроцитах, мкмоль/л

8 сутки

Интактная 5,93±0,48 4,20±0,21 2,40±0,15 8,34±0,49 27,01±1,50

Контрольная (канамицин) 12,69±1,34 6,05±0,22 5,74±0,29 5,82±0,57 19,31±1,52

Опытная 1 (канамицин+ ортэкс) 8,54±0,81* 4,47±0,19* 4,11±0,26* 7,20±0,48* 24,93±1,31*

Опытная 2 (канамицин+ «Канефрон») 10,10±0,95 5,38±0,27 4,93±0,42 6,08±0,54 17,88±1,64

15 сутки

Интактная 5,93±0,48 4,20±0,33 5,46±0,31 8,34±0,49 27,01 ±1,60

Контрольная (канамицин) 20,75±0,87 8,89±0,93 15,37±1,24 3,6 ¡±0,17 15,67±1,39

Опытная 1 (каиамицин+ ортэкс) 13,28±0,76* 5,34±0,21* 9^06±0,85* 5,56±0,21* 22,25±2,31 *

Опытная 2 (канамицин+ «Канефрон») 18,26±1,12 7,35±0,39 13,06±1,29 4,72±0,19 18,02±0,91

Наряду с этим, под влиянием «ортэкса» повышается активность антиоксидантной защиты: при его курсивом назначении через 8 суток активность каталазы и СОД в сыворбтке крови возрастает по сравнению с контролем на 23 и 29 % соответственно; через 15 суток - на 54 и 42 %. Антиоксидантная активность препарата сравнения «Канефрон» значительно уступала таковой у «ортэкса».

Таким образом, результаты исследования фармакотерапевтиче-ской эффективности «ортэкса» при Повреждениях почек различной этиологии показали, что его курсовое введение в экспериментально-терапевтической дозе оказывает нефропротекторное действие, механизм которого связан во многом с его способностью ингибировать процессы

свободнорадикального окисления. Полученные данные потребовали проведения дополнительной серии экспериментов, посвященных выявлению возможных молекулярно-клеточных механизмов нефропротекторного и диуретического действия испытуемого средства.

Установлено, что один из базисных механизмов нефропротекторного л действия «ортэкса» связан с его способностью повышать устойчивость мембранных структур клеток. В частности, наличие мембраноста-билизирующей активности экстракта было подтверждено данными о способности испытуемого средства уменьшать выраженность осмотического и перекисного гемолиза эритроцитов донорской крови, а также степень дегрануляции тканевых базофилов при остром асептическом воспалении у белых крыс.

Добавление в инкубационную среду «ортэкса» в концентрациях, соответствующих условно-терапевтическим дозам, сопровождалось дозо-зависимым уменьшением степени перекисного гемолиза эритроцитов. Менее выраженное мембраностабилизирующее действие выявлено по отношению к осмотическому гемолизу, причем установлено, что использование «ортэкса» в высокой концентрации (300 мг/кг) сопровождалось снижением устойчивости мембран эритроцитов в гипоосмотичсской среде. Показано также, что курсовое введение «ортэкса» белым крысам при остром воспалительном процессе способствует уменьшению дегрануляции тучных клеток, что также служит свидетельством способности испытуемого средства повышать устойчивость клеточных мембран при действии различных альтерирующих факторов.

Испытуемое средство в диапазоне концентраций 0,03 - 1,0 мг/мл оказывает выраженное ингибирующее действие на скорость накопления ТБК-активных продуктов в модельной системе. При этом установлена линейная зависимость выраженности ингибироваНия 1 от ко'нцей+рации испытуемого средства: с увеличением концентрации средства содержание ТБК-активных продуктов уменьшаемся.' При ' дальнейшем увеличении концентрации экстракта (до 3,0/мг/мл) его антйоксидантная активность уменьшается. Концентрация Половинного ингибирования, вызывавшая уменьшение содержания ТБК-активных продуктов в реакционной системе в 2 раза (С1/2) составила 0,035^мг/мл. Индекс антиокислительной активности испытуемого препарата, рассчитанный по ТБК-тесту, составил 28,5 (г/л)"1. I , '

При исследовании влияния «ортэкса» на кинетику Ре2+ - индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) установлено, что в концентрациях 0,03 - 1,0 мг/мл оказывает ингибирующее влияние на интенсивность сво-боднорадикальных реакций, о чем свидетельствует уменьшение амплитуды «быстрой вспышки» и снижение скорости ХЛ. При этом выявлен дозо-зависимый эффект: увеличение концентрации «ортэкса» вызывало более

выраженное ингибирование параметров ХЛ. Индекс антиоксидантной активности «ортэкса» по данному тесту составил 8,7 (г/л)Полученные данные свидетельствуют, что ортэкс обладает умеренной антиоксидантной активностью, составляющей приблизительно 1/2 - 1/3 от активности а-токоферола.

Установлено, что механизм антиоксидантной активности «ортэкса» обусловлен прямым радикалперехватывающим действием, доказательством чему служат полученные данные о способности испытуемого средства уменьшать скорость генерации супероксидных анион-радикалов (02) в модельной системе: уровень их перехвата под его влиянием составил от 32 до 46 % по отношению к контролю. Принимая во внимание, что 02 ' является пусковым звеном свободнорадикальных реакций, можно полагать, что фенольные соединения, наличествующие в данном фитоэкс-тракте, обладая антирадикальной активностью по отношению к О2, " предотвращают развитие цепных реакций уже на начальной стадии процесса.

Другой аспект механизма антиоксидантного действия «ортэкса» связан с его способностью повышать активность ферментов антиоксидантной защиты: супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы (на 44 - 82 % по сравнению с контролем). При этом, во всех случаях отмечалась линейная зависимость степени активации фермента от концентрации испытуемого средства: в диапазоне концентраций, соответствующих экспериментально-терапевтическим дозам эффективность «ортэкса» увеличивается до определенных значений, а при дальнейшем повышении концентрации - снижается, что согласуется с данными литературы о проявлении прооксидантных свойств у истинных антиоксидантов в высоких концентрациях (Биленко, 1998).

Результаты исследования влияния «ортэкса» на активность К+-п-нитрофенилфосфатазы (К+-п-НФФазы) свидетельствуют, что экстракт в диапазоне доз 0,05; 0,30; 1,25 мг/мл снижает общую активность К+-п-НФФазы соответственно на 12, 38 и 67 % по отношению к контролю. При этом испытуемое средство оказывает существенное ингибирующее действие на уабаин-чувствительную К+-п-НФФазу, тогда как активность уа-бин-резистентной К+-п-НФФазы практически не изменяется. Учитывая, что часть ферментной активности К+-п-НФФазы, чувствительная к специфическому ингибитору Иа+, К+-АТФ-азы - уабаину, является косвенной характеристикой Ыа+, Кн-АТФ-азной активности (Болдырев, 1977), можно полагать, что «ортэкс» является специфическим ингибитором К+-АТФазы.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что сухой экстракт из ортосифона тычиночного - «ортэкс» обладает диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, антиэкссудативной активностью, стимулирует процессы регенерации; оказывает спазмолитическое, гипокоагуляционное, сосудоукрепляющее действие. Мочегонная активность «ортэкса» в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 150 мг/кг, превышает таковую у настоя ортосифона тычиночного.

Показано, что курсовое введение данного экстракта в экспериментально-терапевтической дозе на фоне нефропатий ишемической и токсической этиологии, а также лекарственного повреждения почек оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние, способствуя нормализации функционального состояния почек животных на более ранних сроках патологического процесса. В частности, на фоне введения испытуемого фитоэкстракта повышалась депурационная, диуретическая, салуретиче-ская функции почек и СКФ, уменьшалась протеинурия, что согласуется с данными исследования настоя из ортосифона (Кирютина, Драке, 1962; Пашинский,1986; Сало, 1975; Englert, Harnschfeger, 1992).

Установлено, что диуретическое действие испытуемого фитоэкстракта обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность канальцевой реабсорбции; один из механизмов мочегонного эффекта связан с угнетением активности Na+, К+ -АТФазы. Нефропротекторное действие «ортэкса» обусловлено наличием базисной мембраностабилизирующей активности. В свою очередь, механизм антиоксидантной активности «ортэкса» обеспечивается как непосредственным радикалперехватывающим действием биофлавоноидных соединений, так и опосредованным, связанным с активацией системы антиоксидантной защиты организма (Барабой, 1993; Барабой, Брехман, Го-лотин и соавт., 1992).

Экстракт является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает негативного влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма, не приводит к нарушению обменных процессов, является малокумулирующим веществом; не обладает последействием; не оказывает местнораздражающего действия; не обладает аллергенными, иммунотоксическими, мутагенными, эмбриоток-сическими и тератогенными свойствами; не оказывает отрицательного влияния на постнатальное развитие потомства лабораторных животных.

Полученные данные о выраженной диуретической и нефропро-текторной активности «ортэкса» позволяют рекомендовать его для применения в комплексной фармакотерапии заболеваний почек, с целью повышения эффективности базисной терапии, а также для профилактики рецидивов заболевания.

ВЫВОДЫ:

Сухой экстракт из ортосифоиа тычиночного - «ортэкс» в экспериментально-терапевтических дозах обладает выраженной мочегонной и гипоа-зотемической активностью; оказывает противовоспалительное, антиэкс-судативное, желчегонное и антибактериальное действие;

Курсовое введение «ортэкса» на фоне повреждений почек ишемиче-ской, токсической и лекарственной этиологии сопровождается нормализацией функционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса;

Диуретическое действие «ортэкса» обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность канальцевой реабсорбции, механизм которого связан с угнетением активности К+ -АТФазы;

Механизмы нефропрртекторного действия «ортэкса» обеспечиваются наличием базисной мембраностабилизирующей активности, реализация которой связана с ингибированием процессов свободнорадикального окисления и повышением активности системы антиоксидантной защиты, обусловленных наличием веществ фенольной природы;

«Ортэкс» является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает токсического влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма; побочными негативными эффектами не обладает.

ВНЕДРЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ В ПРАКТИКУ

Результаты исследований фармакологической активности, определения фармакотерапевтической эффективности и безопасности «ортэкса» включены в отчет по доклиническому испытанию.

Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета МО РФ.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Эрдынеев Ю.Б., Башкуева Ю.Л., Бутуханова И.С., Мондодоев А.Г., Шантанова Л.Н. Влияние растительного экстракта на течение экспериментальной постишемической нефропатии //Мат-лы научн. конф. «Экология, здоровье, спорт.» -Чита, 2004. -С. 178-181.

2 Шантанова Л.Н., Мондодоев А.Г., Эрдынеев Ю.Б,, Леднева И.П. Диуретическое и спазмолитическое действие сухого экстракта ортосифона тычиночного //Сборник научных трудов БГУ. Медицина. - Улан-Удэ, 2004. -С.45-49.

3. Унагаева A.A., Эрдынеев Ю.Б. Сравнительная характеристика антиокси-дантных свойств отвара и экстракта ортосифона тычиночного //Материалы четвертой региональной межвузовской конф. -Чита. -2005. -С.162-163.

4 Эрдынеев Ю.Б., Мондодоев А.Г., Шантанова Л.Н., Лоншакова К.С. Исследование безопасности экстракта ортосифона тычиночного // Мат-лы научн. конф. «Развитие традиционной медицины в России.» -Улан-Удэ, 2004. -С.44-45.

5 Башкуева Ю.Л., Эрдынеев Ю.Б., Бутуханова И.С., Бураева Л.Б., Мэрды-геева А.К., Максаров B.C. Влияние растительного средства на систему свертывания крови // Мат-лы научн. конф. «Развитие традиционной медицины в России.» -Улан-Удэ, 2004.. - С.47-48.

6 Эрдынеев Ю.Б., Мондодоев А.Г., Шантанова Л.Н., Даргаева Т.Д. Влияние экстракта ортосифона тычиночного на течение сулемового некронефроза // Мат-лы научн. конф. «Развитие традиционной медицины в России.» -Улан-Удэ, 2004.. -С.81-82.

7. Эрдынеев Ю.Б., Мондодоев А.Г. Исследование безопасности экстракта ортосифона тычиночного // Мат-лы научн. конф. «Развитие традиционной медицины в России.» -Улан-Удэ, 2004.. -С.84.

8 Эрдынеев Ю.Б., Михеева А.К., Мондодоев А.Г., Шантанова Л.Н. Влияние растительного экстракта на течение экспериментальной постишемической нефропатии //Сб. тр. научн. конф. «Фундаментальные и прикладные проблемы медицины и биологии». -Тунис, 2005. -С. 154.

Подписано в аенагь 10.08. 2005 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,4 печ. л. Тираж 100. Заказ № 90

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН, 670047 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

г

11 58 75

РНБ Русский фонд

2006-4 14346

Актуальность темы. Актуальными проблемами медицинской науки и практического здравоохранения являются вопросы профилактики и лечения заболеваний почек. Заболевания почек, как правило, характеризуются тяжелым течением, развитием рецидивов заболевания, приводящим к длительной потере трудоспособности и инвалидизации (Горбачев и соавт., 1994; Арьев и соавт., 1997). При этом, несмотря на использование современных методов лечения, гломерулярные и тубулоинтерстициальные заболевания почек в 1,5 % случаев приводят к развитию почечной недостаточности, при которой летальность достигает 40 - 50 % (Пермяков, Зимина, 1982; Милованов, Николаев, 1998).

Социальная значимость нефрологической патологии, помимо широкой распространенности, определяется также тем фактом, что в последние десятилетия отмечается ее значительное омоложение, в связи с чем заболевания почек в настоящее время становятся одной из ведущих причин инвалидизации и смертности в трудоспособном возрасте (Горбачев и соавт., 1984; Та-реева, 2000).

Экологическое неблагополучие, широкое внедрение в быт продуктов химического производства обусловливают существенный рост экзотоксиче-ских поражений почек (Аллазов, 1998; Вестник ВОЗ, 1994). В последнее время все чаще встречаются случаи лекарственной нефропатии, возникающие при использовании препаратов широкого использования (антибиотиков и нестероидных противовоспалительных средств), а также препаратов, применяемых в базисной терапии онкологических заболеваний и туберкулеза (Хоменко, 1998; Тареева, 1998; 2000; Астахова, 2000; Лукьянова, 2002). При этом, лекарственные средства вызывают самые разнообразные поражения почек, оказывая как прямое нефротоксическое действие, связанное с их токсическим влиянием на метаболические и транспортные системы, так и вызывая поражения интерстиция, сосудистой и эндокринной систем почек (Тареева и соавт., 2000).

В этой связи фармакотерапия и фармакопрофилактика заболеваний почек требует щадящего подхода, поскольку применяемые для лечения заболеваний почек отдельные препараты вызывают побочные эффекты, в том числе — нефротоксические, они требуют осторожного дозирования ввиду снижения функциональной состоятельности почек при их повреждении и сама медикаментозная терапия может явиться причиной развития рецидивов заболевания.

С этим обстоятельством связано значительное повышение интереса к использованию растительных' препаратов, имеющих ряд преимуществ перед химиопрепаратами: поливалентность действия, низкая токсичность, отсутствие негативных побочных эффектов при длительном приеме.

Одним из рациональных подходов к решению задач по расширению арсенала нефропротекторных растительных средств является перевод их галеновых форм в аналогичные по составу экстракционные препараты, содержащие сумму биологически активных веществ в концентрированном виде и сохраняющие все преимущества растительных препаратов. Указанный принцип получения сухих экстрактов- концентратов способствует рациональному, экономичному использованию растительного сырья, позволяет обеспечить стандартизацию препарата как на стадии изготовления, так и конечного продукта, а также точность дозирования, хорошую растворимость, стойкость и удобство при применении.

Объектом настоящего исследования явился сухой экстракт ортосифо-на тычиночного (ОгИкшрИоп з1агшпеи8 ВепШ.), разработанный совместно с сотрудниками ВИЛР, условно названный «ортэкс» (АС РФ №1737797, 1993).

Цель исследования. Целью настоящей работы явилось определение фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности «ортэкса» при повреждениях почек различной этиологии, а также выявление возможных механизмов его мочегонного и нефропротекторного действия.

Для достижения указанной цели необходимо было решить задачи:

- определить основные фармакологические свойства «ортэкса»;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность «ортэкса» при нефропатиях - ишемической, токсической и лекарственной этиологии;

- выявить особенности механизма мочегонного и нефропротектор-ного действия «ортэкса»;

- оценить безопасность «ортэкса».

Научная новизна. Работа представляет собой экспериментальное исследование фармакологической активности и определение фармакотерапев-тической эффективности «ортэкса», представляющего собой сухой экстракт из сырья ортосифона тычиночного. Установлено, что «ортэкс» обладает диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, антиэкссудативной активностью, стимулирует процессы регенерации; оказывает спазмолитическое, гипокоагуляционное, сосудоукрепляющее действие.

Показано, что курсовое' введение «ортэкса» белым крысам в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг на фоне нефропатий ишемической, токсической и лекарственной этиологии оказывает выраженное фар-макотерапевтическое действие, способствуя нормализации функционального состояния почек животных на более ранних сроках патологического процесса.

Установлено, что диуретическое действие испытуемого фитоэкстракта обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность канальцевой реабсорбции; один из механизмов мочегонного эффекта связан с 'угнетением активности Na+, К+ -АТФазы. Механизмы нефропротекторного действия «ортэкса» обусловлены базисной мембраностабилизирующей активностью, реализация которой обеспечивается антиоксидантным действием комплекса фенольных соединений, оказывающих прямое антирадикальное действие и повышающих активность системы антиоксидантной защиты организма.

Экстракт является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает негативного влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма, не приводит к нарушению обменных процессов, является малокумулирующим веществом; не оказывает местно-раздражающего действия; не обладает аллергенными, иммунотоксическими, эмбриотоксическими и тератогенными свойствами; не оказывает отрицательного влияния на постнатальное развитие потомства лабораторных животных.

Практическая значимость. Материалы исследований фармакологической активности, определения фармакотерапевтической эффективности и безопасности «ортэкса» включены в отчет по его доклиническому испытанию. Материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета Ми-нобрнауки РФ.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН в соответствии с программой «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов» (№ гос. регистрации 01.9.400031.83), утвержденной 06.12.95 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. «Ортэкс» в экспериментально-терапевтических дозах обладает выраженным мочегонным и гипоазотемическим действием; проявляет противовоспалительную, сосудоукрепляющую, спазмолитическую и антибактериальную активность; стимулирует процессы регенерации; оказывает гипокоа-гуляционное и мембраностабилизирующее действие.

2. Курсовое введение «ортэкса» в дозе 150 мг/кг оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при повреждениях почек ишемиче-ской, токсической и лекарственной этиологии, нормализуя функциональное состояние почек животных на более ранних сроках патологического процесса.

3. Диуретическое действие «ортэкса» обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность канальцевой реабсорбции; механизмы мочегонного эффекта связаны с угнетением активности К+ -АТФазы.

4. Механизмы нефропротекторного действия «ортэкса» связаны с наличием базисной мембраностабилизирующей активности, реализация которой обеспечивается антиоксидантным действием комплекса фенольных соединений, оказывающих прямое антирадикальное действие и повышающих активность антиоксидантной системы организма.

5. «Ортэкс» является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает токсического влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма; не обладает побочными негативными эффектами.

выводы

1. Сухой экстракт из сырья ортосифона тычиночного - «ортэкс» в экспериментально-терапевтических дозах обладает выраженной мочегонной и ги-поазотемической активностью; оказывает противовоспалительное, анти-экссудативное, желчегонное и антибактериальное действие;

2. курсовое введение «ортэкса» на фоне повреждений почек ишемической, токсической и лекарственной этиологии сопровождается нормализацией функционального состояния почек на более ранних сроках патологического процесса;

3. диуретическое действие «ортэкса» обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность ка-нальцевой реабсорбции, механизм которого связан с угнетением активности Ыа+, К+ -АТФазы;

4. механизмы нефропротекторного действия «ортэкса» обеспечиваются наличием базисной мембраностабилизирующей активности, реализация которой связана с ингибированием процессов свободнорадикального окисления и повышением активности системы антиоксидантной защиты, обусловленных наличием веществ фенольной природы;

5. «Ортэкс» является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает токсического влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма; побочными негативными эффектами не обладает.

ВНЕДРЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ ДАННЫХ В ПРАКТИКУ

1. Результаты исследований фармакологической активности, фармакотера-певтической эффективности и безопасности «ортэкса» включены в отчет по доклиническому изучению новой лекарственной формы из сырья орто-сифона тычиночного;

2. материалы диссертационной работы используются в процессе преподавания курсов фармакологии, клинической фармакологии, фитотерапии и традиционной медицины на кафедрах медицинского факультета Бурятского государственного университета МО РФ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные в работе данные свидетельствуют, что сухой экстракт из сырья ортосифона тычиночного - «ортэкс» обладает диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, антиэкссудатив-ной активностью, стимулирует процессы регенерации; оказывает спазмолитическое, гипокоагуляционное, сосудоукрепляющее действие. Мочегонная активность «ортэкса» в экспериментально-терапевтической дозе, составляющей 150 мг/кг, превышает таковую у настоя ортосифона тычиночного.

Показано, что курсовое введение «ортэкса» в экспериментально-терапевтической дозе на фоне нефропатий ишемической и токсической этиологии, а также лекарственного повреждения почек оказывает выраженное фармакотерапевтическое действие, способствуя нормализации функционального состояния почек животных на более ранних сроках патологического процесса. В частности,, на фоне введения испытуемого фитоэкстрак-та повышалась депурационная, диуретическая, салуретическая функции почек и СКФ, уменьшалась протеинурия.

Установлено, что диуретическое действие испытуемого фитоэкстрак-та обусловлено его способностью повышать скорость клубочковой фильтрации и уменьшать интенсивность канальцевой реабсорбции; один из механизмов мочегонного эффекта связан с угнетением активности Na+, К+ -АТФазы. Нефропротекторное действие «ортэкса» обусловлено наличием базисной мембраностабилизирующей активности. В свою очередь, механизм антиоксидантной активности «ортэкса» обеспечивается как непосредственным радикалперехватывающим действием биофлавоноидных соединений, так и опосредованным, связанным с активацией системы антиоксидантной защиты организма.

Ортэкс» является практически не токсичным веществом, при длительном применении не оказывает негативного влияния на состояние жизненно важных органов и систем организма, не приводит к нарушению обменных процессов, является малокумулирующим веществом; не обладает последействием; не оказывает местнораздражающего действия; не обладает аллергенными, иммунотоксическими, мутагенными, эмбриотоксическими и тератогенными свойствами; не оказывает отрицательного влияния на постна-тальное развитие потомства лабораторных животных.

Полученные данные о выраженной диуретической и нефропротек-торной активности «ортэкса» позволяют рекомендовать его для применения в комплексной фармакотерапии заболеваний почек, с целью повышения эффективности базисной терапии, а также для профилактики рецидивов заболевания.

110