Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Влияние экстрактов Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) Reichenb и Hypecoum erectum L. на течение экспериментального гепатита

На правах рукописи

ФЕДОРОВ АНДРЕЙ ВИТАЛЬЕВИЧ

ВЛИЯНИЕ ЭКСТРАКТОВОМУ ТОввЫШМ сляттнмсим (\J1ULFEN) ^Е1СНЕ^В И НУРЕСОиМЕЯЕСТиМ Ь. НА ТЕЧЕНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ГЕПАТИТА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 ?п1' I I 1Л1 ¡¡ /и ¡ч

005547149

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Бурятский государственный университет» Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель:

Гунзынов Галан Дамбиевич - доктор медицинских наук Официальные оппоненты:

Мондодоев Александр Гаврилович - доктор медицинских наук, Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Институт общей и экспериментальной биологии» СО РАН / лаборатория экспериментальной фармакологии, заведующий

Цыбиков Еши Нянюевич - доктор медицинских наук, Государственное бюджетное учреждение здравоохранения «Республиканская клиническая больница им. H.A. Семашко» Министерства здравоохранения Республики Бурятия / отделение хирургии №2, консультант

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Читинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения РФ

Защита состоится «30» мая 2014 года в Ю00 часов на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского Отделения РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан « »апреля 2014г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, доцент

В.Б. Хобракова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Заболевания гепатобилиарной системы в настоящее время являются серьёзной проблемой здравоохранения России и за рубежом и составляют 40% в группе заболеваний пищеварительной системы. По данным исследований, проведённых Европейским региональным бюро Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), уровень смертности от хронических заболеваний печени является высоким в семи странах СНГ и пяти странах Центральной и Восточной Европы из 43 стран Европейского региона. При этом смертность по указанному региону в среднем составляет 17 случаев на 100 тыс. населения (Кутепов Д.Е., 2014; Чистякова М.В., 2014). Несмотря на принятые меры в предотвращении инфицирования донорского материала, среди причин, приводящих к развитию печеночной недостаточности, на первом месте остаются вирусные гепатиты (Firat Z.M., 2014). Так, ежегодно в мире, по данным ВОЗ, регистрируют приблизительно 50 млн. человек, заболевших гепатитом В (Власова О.Н., 2013), а больных гепатитом С насчитывается от 100 до 200 млн. человек (Перевертень Л.Ю., 2014; Nevers F., 2012; Ide T., 2009; Grany M.G., 2009; Di Bisceglie A.M., 2007). Кроме того, в последние годы выяснена роль отрицательного воздействия на печень ряда лекарственных средств и других экотоксикантов, гепатотоксичность которых резко возрастает в процессе биотрансформации в организме в связи с образованием активных метаболитов (Христенко Н.Е., Ананько С .Я., 2013). Установлено, что отравление ксенобиотиками и накапливаемыми в организме метаболитами гормонов и белков вызывает интоксикацию и способствует увеличению интенсивности свободнорадикального окисления биомакромолекул (Салыга Ю.Т., 2013,), развитие гиповитаминозов и иммунодефицитных состояний (Fizioterapija..., 2008; Kovelenov A.Ju., 2004).

В связи с этим, проблема изыскания новых эффективных гепатопротеторных препаратов остаётся весьма актуальной, несмотря на то, что в настоящее время предлагается достаточно много лекарственных средств различных химических групп, оказывающих разнонаправленное воздействие на устранение патологических процессов в гепатобилиарной системе. Каждый из этих препаратов, обладая определённым положительным воздействием, базирующимся на механизмах различного типа, проявляет серьёзные побочные эффекты (Воробиевская C.B., 2013). К тому же большинство применяемых препаратов дорогостоящие, что инициирует провизоров и фармакологов к поиску высокоактивных и безопасных отечественных гепатопротекторов. Растительные препараты в отличие от синтетических оказывают комплексное действие на патогенетические факторы заболевания, безопасны в применении, не проявляют побочных эффектов (Циммерман, 2006; Shiller, 2010). Перспективным является изучение видов, широко используемых в традиционных медицинских системах. Так, по данным тибетских трактатов

«Чжуд-ши» (2001) и «Кунпан дудзи» (2008) в составе прописей, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний гепатобилиарной системы, входит гипекоум прямой (Нуресоит erectum L.) (Багаажав, 1977; Асеева Т. А., 1979; Николаев С.М., 2008). В частности, установлена возможность использования Н. erectum при лечении «халгем» - тяжелой общетоксической формы инфекционного гепатита с аллергическими реакциями (Асеева Т. А., 1979). Предпосылками для изучения эффективности ломатогониума каринтийского (Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) Reichenb) при заболеваниях гепатобилиарной системы послужили рекомендации монгольской медицины (Li L., 2011), а также данные тибетских трактатов о выраженной противовоспалительной активности данного растения (Дашиев Д.Б., 2001).

Изложенное выше послужило основанием для изучения фармакотерапевтической эффективности экстрактов сухих из указанных видов растительного сырья при повреждениях печени.

Целью исследований явилось определение фармакотерапевтической эффективности экстрактов сухих Нуресоит erectum L. и Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) Reichenb при экспериментальных повреждениях печени.

Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи:

- оценить фармакотерапевтическую эффективность экстракта Нуресоит erectum при D-галактозаминовом гепатите;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность экстракта Lomatogonium carinthiacum при тетрациклиновом гепатите;

- выявить основные механизмы гепатопротекторного влияния экстрактов Нуресоит erectum и Lomatogonium carinthiacum.

Научная новизна. В данной работе впервые установлена фармакотерапевтическая эффективность экстрактов Н. erectum и L. carinthiacum при экспериментальных повреждениях печени и установлены механизмы их гепатопротекторного влияния. Выявлено, что экстракт Я. erectum в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг оказывает выраженное гепатопротекторное влияние при D-галактозаминовом гепатите, снижая развитие синдромов цитолиза и холестаза, повышая энергетический потенциал и ограничивая дистрофические и некротические изменения гепатоцитов, ингибируя свободнорадикальное окисление биомакромолекул и активируя антиоксидантную систему организма. Экстракт L. carinthiacum в дозе 100 мг/кг обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при тетрациклиновом гепатите, ингибируя нарушения холатокинетической и холатосинтетической функций печени, ограничивая дистрофические и некротические процессы, интенсивность воспалительной инфильтрации в печени, а также стимулируя регенерацию печеночных клеток. Показано, что гепатопротекторное влияние испытуемых экстрактов реализуется за счет их выраженной ангиоксидантной, мембраностабилизирующей,

противовоспалительной, желчегонной активности, а также их способности стимулировать метаболические и репаративные процессы в печени. Отличительной особенностью в действии испытуемых экстрактов является то, что экстракт Н. erectum в большей степени обладает способностью предотвращать и уменьшать явления цитолиза, за счет более выраженных антиоксидантных свойств, экстракт L. carinthiacum - предупреждать развитие синдрома холестаза. По степени гепатопротективного и желчегонного влияния экстракты Н. erectum и L. carinthiacum сопоставимы, а в некоторых случаях превосходят указанные эффекты референтного препарата - карсил.

Практическая значимость работы. По результатам исследования в Роспатент направлена заявка на предполагаемое изобретение «Способ получения средства, обладающего желчегонной, противовоспалительной активностью» (№ 2014100564/000746 от 09.01.2014 г). Экспериментально обоснована целесообразность использования экстрактов сухих Я. erectum и L. carinthiacum в комплексной фармакотерапии и профилактике заболеваний гепатобилиарной системы. Полученные данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета (Акт внедрения от 04.11.13).

Положения, выносимые на защиту

1. Экстракт сухой Нуресоит erectum в дозе 50 мг/кг оказывает выраженное гепатопротекторное влияние при токсическом повреждении печени D-галактозамином.

2. Экстракт сухой Lomatogonium carinthiacum в дозе 100 мг/кг обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при токсическом повреждении печени тетрациклином.

3. Фармакотерапевтическая эффективность экстрактов Н. erectum и L. carinthiacum при повреждениях печени обусловлена выраженным антиоксидантным, мембраностабилизирующим, противовоспалительным, желчегонным действием, а также их способностью стимулировать метаболические и регенераторные процессы в гепатоцитах.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

• V International Symposium on Present Situation and Future Development of Mongolian Traditional Medicine (Ulaanbaatar, 2011);

• XX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2013);

• Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы управления здоровьем населения» (Нижний Новгород, 2012);

• II Межвузовской научно-практической конференции студентов и аспирантов «Социально-экологические проблемы Байкальского региона» (Улан-Удэ, 2013);

• VI International Scientific Conference "Traditional Medicine: Ways of Integration with Modern Health Care» (Ulan-Ude, 2013);

• научно-практических конференциях ординаторов, аспирантов и преподавателей медицинского факультета БГУ (Улан-Удэ, 2011; 2012; 2013).

Личный вклад автора в получении научных результатов. Автором диссертационной работы проведен поиск и анализ данных по теме, осуществлены планирование экспериментов, сбор данных; соискателем непосредственно проведены все фармакологические исследования полученного средства. Согласно сформулированным задачам подготовлены доклады, написаны тезисы и статьи, оформлены диссертация, автореферат, которые представлены к защите.

Данная работа выполнена в соответствии с программой №21.1.3 «Регуляция свободнорадикальных процессов при повреждениях органов пищеварения с использованием биологически активных веществ из арсенала традиционной медицины», утвержденной Президиумом СО РАН.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 11 научных работ, из них 5 статей - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 116 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов собственных исследований (3 главы), обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 19 таблицами и 20 рисунками. Список литературы включает 210 источников, из них 73 - на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования выполнены на 230 белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 180-230 г. и 72 белых мышах обоего пола массой 25-30 г. Содержание животных соответствовало «Правилам лабораторной практики» (GLP) и Приказу МЗ РФ № 708Н от 23.08.2010 г. «Об утверждении правил лабораторной практики». Перед началом экспериментов животные, отвечающие критериям включения в эксперимент, распределялись на группы с учетом пола, возраста, массы и принципа рандомизации. Экспериментальную работу осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.), «Правилами, принятыми в Европейской конвенции по защите позвоночных животных» (Страсбург, 1986). Протокол исследования согласован с этическим комитетом БГУ (протокол №5 от 05.09.2000). Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Кроме того, в экспериментах {in vitro) были использованы суспензии эритроцитов и желточных липопротеидов, препараты тканей и биохимические тест-системы.

В качестве объектов исследования были использованы экстракты сухие из травы ломатогониума каринтийского - Lomatogonium carinthiacum (Wulfen)

КеюЬепЬ (семейство СепПапасеае) и гипекоума прямого - Нуресоит егесшт Ь. (семейство Рараусгассае). Экстракты сухие были получены из травы указанных видов путем последовательной экстракции (96% и 40% этанол, горячая вода) с последующей вакуумной сушкой. В полученном экстракте ¿.сагШМасит содержатся: каротиноиды, в пересчете на р-каротин - 9,95 ± 0,36 мг %; тритерпеновые сапонины (липофильные вещества) в пересчете на олеаноловую кислоту - 16,50 ± 0,53 %; кумарины, в пересчете на скополетин - 0,43 ± 0,01 %; ксантоновые агликоны, в пересчете на сверциаперенин 1,02 ± 0,03 %; флавоноиды, в пересчете на лютеолин - 1,90 ± 0,04 %; полифенолы' (среднеполярные), в пересчете на танин - 6,03 ± 0,18%; иридоиды, в пересчете на сверциамарин - 5,84 ± 0,22 %; аскорбиновая кислота - 7,52 ± 0,22 %; водорастворимые полисахариды - 2,0 ± 0,08%. В полученном экстракте Н. егесшт содержатся: каротиноиды, в пересчете на р-каротин - 27,97 ± 0,85 мг %; полифенолы - 3,17 ± 0,09 %; флавоноиды - 0,14 ± 0,01 %: аскорбиновая кислота - 3,54 ± 0,07 %; водорастворимые полисахариды ± 17,0 ± 0,8 %. Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии (метод ВЭЖХ) обнаружено содержание в экстракте: кверцетина - 14,81 мкг/г; лютеолина - 15,56 мкг/г; цинарозида - 98.89 мкг/г; рутина - 430,37 мкг/г.

Экстракт Н. егесшт в дозе 50 мг/кг и экстракт Ь.сагтМасит в дозе 100 мг/кг вводили животным внутрижелудочно через зонд в форме водного раствора один раз в сутки. Конечный объем водного раствора составлял 10 мл/кг. Продолжительность введения фитоэкстрактов, а также сроки исследования варьировали в зависимости от цели и продолжительности экспериментов. Животные контрольной группы получали воду очищенную в соответствующем объеме по аналогичным схемам введения испытуемых экстрактов. В качестве препарата сравнения использовали карсил в изоэффективной дозе 50 мг/кг.

Определение острой токсичности экстрактов сухих Н. егесшт и I. сагШЫасит проводили согласно Методическим рекомендациям (Руководство..., 2005). Класс токсичности определяли по классификации Кербера.

Острое повреждение печени моделировали у крыс путем внутрибрюшинного введения Б-галактозамина в дозе 0,5 г/кг в течение 3 дней 1 раз в сутки (Руководство..., 2005). Модель острого тетрациклинового гепатита вызывали внутрижелудочным введением тетрациклина гидрохлорида в виде водной взвеси с Т\уееп-80 (1:10) в дозе 1 г/кг массы ежедневно в течение 7 дней (Руководство..., 2005).

Для оценки функциональной состоятельности печени в сыворотке крови определяли активность аланинаминотрансферазы (АЛТ),

аспартатаминотрансферазы (АСТ), щелочной фосфатазы (ЩФ); концентрацию холестерина, р-липопротеидов, общего билирубина с использованием стандартного набора реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск) на биохимическом анализаторе «Сапфир».

Для оценки влияния экстрактов с Н. erectum и L. carinthiacum на состояние перекисного окисления липидов (ПОЛ) определяли спектрофотометрически концентрацию диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови (Гаврилов В.Б., 1983), содержание малонового диальдегида (МДА) в гомогенате печени (Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977). Состояние антиоксидантной системы (АОС) организма оценивали по активности каталазы в гомогенате печени (Королюк М.А. и др., 1988) и содержанию восстановленного глутатиона (ВГ) в сыворотке крови (Чевари С. и др., 1985).

Для оценки энергетического обмена клеток определяли содержание АТФ и концентрацию пировиноградной и молочной кислот в гомогенате печени (Методы..., 1982).

Для патоморфологических исследований кусочки печени крыс фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Для выявления активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) свежезамороженные срезы печени окрашивали тетразолиевым синим (по Нахласу), содержания гликогена - ШИК-реакцией и нейтральных жиров - Суданом IV (Микроскопическая техника..., 1996).

Мембраностабилизирующую активность экстрактов Н. erectum и L. carinthiacum оценивали in vitro по степени торможения перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов донорской крови (Ковалев И.Е. и др., 1986). Антирадикальную активность испытуемых экстрактов и его компонентов определяли с применением DPPH-метода (Seyoum A. et al„ 2006). Влияние исследуемых средств на связывание супероксидных анион-радикалов (02") определяли в неэнзиматической системе феназин метосульфат/НАДН (Chen А.-S. et al., 2003); Ре2+-хелатирующую активность - фенантролиновым методом (Олейников Д.Н., 2008); связывание молекул оксида азота (NO) - согласно R. Govindarajan et al. (2003). Для оценки влияния экстрактов на процессы ПОЛ использовали также модельную систему, состоящую из суспензии желточных липопротеидов (Клебанов Г.И., 2003).

С целью изучения влияния экстрактов Н. erectum и L. carinthiacum на процессы желчеобразования и желчеотделения определяли скорость секреции желчи и общее количество выделенной желчи по методике Н.П. Скакуна и А.Н. Олейник (1967), а также определяли количество выделенных с желчью билирубина по методу Ван-ден-Берга в модификации Н.П. Скакуна (1967), концентрацию в желчи общего холестерина - по методу С.М. Дроговоз (1971) и суммарную концентрацию в желчи желчных кислот по методу Я.И. Карбача (1961). Животным водный раствор испытуемых экстрактов вводили однократно в двенадцатиперстную кишку в дозах 25, 50, 75, 100, 125, 150 и 200 мг/кг (тиопентал натрия, 45 мг/кг).

Антиэкссудативную активность экстрактов изучали по методу Ю.В. Стрельникова (Руководство..., 2005). Влияние экстрактов на альтеративную фазу воспаления оценивали по методу Менкина (Руководство..., 2005), на

пролиферативпую фазу воспалительного процесса согласно рекомендациям Ф.П. Тринуса и соавт. (1975).

Данные экспериментов обработаны статистически для малой выборки с определением средней величины (М) и средней ошибки (гп). Для оценки значимости различий между средними значениями при нормальном распределении использовали критерий I Стьюдента, а в других случаях -непараметрический критерий «и» Манна-Уитни. Различия считались значимыми при вероятности 95% (Р< 0,05) (Сергиенко, Бондарева, 2006).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение острой токсичности экстрактов Н. егесШт и Ь. сагШМасит при их внутрибрюшинном введении проводили на белых мышах массой 25-30 г. обоего пола. Результаты исследований показали, что при однократном внутрибрюшинном введении животным ОЬ50 экстракта Н. егесШт составляет 2217±147,3 мг/кг, Ь. сагтМасит - 6659,4±430,2 мг/кг. Таким образом, результаты проведенных исследований позволяют отнести указанные экстракты к группе относительно безвредных веществ по действующей классификации (Руководство..., 2005).

Фармакотерапевтическая эффективность экстракта Н. егесШт при О-галактозаминовом гепатите

Предварительно, опираясь на данные литературы и проведенных экспериментов (табл. 1) определены экспериментально-терапевтические дозы исследуемых экстрактов. В связи с этим, для последующих экспериментов экстракт Н. егесШт использовали в дозе 50 мг/кг, т.к. последующее увеличение дозы не имело преимущества.

Таблица 1 - Влияние экстракта Н. егесШт на секрецию желчи у белых крыс

Н. егесШт, мг/кг 25 50 75 100 125 150 200

Прирост скорости секреции желчи, % 25,0 31,3 37,4 35,0 30,6 36,2 34,6

Результаты исследований показывают (табл. 2), что у животных на фоне введения О-галактозамина отмечалось развитие синдромов цитолиза и холестаза. Так, на 3 сутки исследований у крыс контрольной группы активность трансаминаз в сыворотке крови повышалась в среднем в 4,0 раза, активность ЩФ - в 2,6 раза, концентрация р -липопротеидов и билирубина - в 1,9 и 2,4 раза соответственно по сравнению с аналогичными показателями животных интактной группы.

Введение животным экстракта Н. егесШт в дозе 50 мг/кг на фоне О-галактозаминового гепатита оказывало выраженное гепатопротекторное влияние, уменьшая выраженность нарушений функциональной состоятельности печени.

Таблица 2 - Влияние экстракта Н. егесШт и карсила на функциональную

активность печени белых крыс при D - галактозаминовом гепатите

Показатели Группы животных

Интактн ая (Н20) Контрольная (D- галактозамин + н2о) Опытная (D-галактозамин + Н. erectum) Опытная (D-галактозамин +карсил)

3 сутки

АлТ, мкмоль/мл 2,1± 0,12 9,0±0,31 6,9±0,45* 7,3±0,24*

АсТ, мкмоль/мл 1,9± 0,14 7,8±0,37 6,2±0,18* 6,8±0,38

ЩФ, ед. боданск. 5,7± 0,32 14,3±0,95 12,6±0,56 12,4±1,02

Билирубин общ., мг% 5,2± 0,43 12,4±0,87 10,7±0,41 10,0±0,77

Р-липопротеиды, усл. ед. 2,6±0,12 4,9±0,24 4,0±0,26 4,1 ±0,29

Холестерин, ммоль/л 1,7±0,13 4,1±0,16 3,6±0,13* 3,5±0,22

7 сутки

АлТ, мкмоль/мл 2,1±0,12 8,1 ±0,53 6,0±0,57* 6,4±0,31*

АсТ, мкмоль/мл 1,9±0,14 7,6±0,41 4,2±0,12* 4,6±0,35*

ЩФ, ед/л 5,7±0,32 11,4±0,93 7,9±0,64* 7,7±0,71*

Билирубин общ., мг% 5,2±0,43 9,7±0,57 6,9±0,47* 6,4±0,56*

Р -липопротеиды, усл. ед. 2,6±0,12 4,8±0,36 3,8±0,23* 3,2±0,26*

Холестерин, ммоль/л 1,7±0,13 3,6±0,18 2,8±0,17* 2,1±0,19*

Примечание: * - здесь и далее означает, что различия значимы по сравнению с данными у животных контрольной группы при р<0,05.

Так, у крыс опытной группы на фоне введения указанного экстракта на 3 и 7 сутки эксперимента активность AJIT снижалась соответственно на 23% и 26%, ACT - на 20% и 44%, активность ЩФ - на 12% и 30%, концентрация Р-липопротеидов - на 18% и 21% и билирубина - на 14% и 29% по сравнению с указанными показателями контрольных животных.

Как следует из данных, представленных в таблице 3, развитие D-галактозаминового гепатита сопровождалось выраженным угнетением желчеобразовательной и желчевыделительной функций печени. Применение экстракта Н. erectum ингибировало нарушения желчеобразовательной функции печени, вызванные введением животным D-галактозамина. Так, скорость секреции желчи у животных опытной группы возрастала и превышала таковую у крыс контрольной группы на 3 сутки опыта в среднем на 19%, на 7 сутки - на 45%. Кроме того, экстракт Н. erectum повышал экскрецию билирубина и холестерина с желчью. Содержание их в желчи на 3 сутки опыта превышало контроль в среднем на 27%, а на 7 сутки соответственно на 19% и 41% (табл. 3).

Таблица 3 - Влияние экстракта Н. erectum и карсила на общее количество и

биохимический состав желчи у белых крыс при Р - галактозаминовом гепатите

Общее Желчны Билир Холест

Группа животных кол-во е убин ерин

желчи за 4 кислоты мг% мг%

ч опыта, мг%

мг/ЮОг

3 сутки

Интактная (Н20) 1242±31,2 907,7 29,0 46,9

Контрольная (0-галактозамин+Н20) 968±20,5 740,6 15,0 32,8

Опытная (D-галактозамин + Н. erectum) 1122±27,6* 821,9 19,0 41,6

Опытная (D-галактозамин+карсил) 1092±53,0 833,4 17,0 35,6

7 сутки

Интактная (Н20) 1170±24,6 934,8 27,0 48,6

Контрольная (0-галактозамин+Н20) 840±22,4 752,4 19,0 32,0

Опытная (D-галактозамин + Н. erectum) 1206±23,5* 843,6 22,6 45,2

Опытная (D-галактозамин+карсил) 1056±20,9* 889,2 22,0 37,0

Примечание: здесь и далее указано суммарное содержание компонентов желчи

Повреждение печени лабораторных животных D-галактозамином сопровождается резкой активацией процессов ПОЛ, о чем свидетельствовало повышение концентрации продуктов пероксидации липидов в тканях, а также угнетение активности эндогенной АОС животных контрольной группы (табл. 4).

Так, содержание МДА в гомогенате печени контрольных животных на 3 сутки эксперимента повышалось в 2,6 раза, содержание ДК в сыворотке крови -в 7,0 раз по сравнению с показателями крыс интактной группы. Наряду с этим, на 3 и 7 сутки опыта активность каталазы в гомогенате печени снижалась в среднем в 2,0 раза, содержание ВГ в сыворотке крови - в 3,0 и 2,0 раза соответственно по сравнению с контролем. На фоне курсового введения животным экстракта Н. erectum концентрация МДА в гомогенате печени на 3 и 7 сутки опыта снижалась соответственно на 29% и 37% , ДК в сыворотке крови - на 32% и 22% по сравнению с аналогичными показателями контрольных крыс. Одновременно с этим, под влиянием испытуемого средства отмечалось повышение активности каталазы соответственно на 58% и 11%, содержание ВГ в крови на 56% и 36% по отношению к контролю.

Установлено, что введение животным D-галактозамина вызывает ухудшение энергообеспеченности гепатоцитов. Так, в гомогенате печени животных контрольной группы на 7 сутки эксперимента отмечается снижение количества АТФ на 52%, а также двукратное увеличение содержания молочной кислоты по сравнению с указанными показателями животных интактной группы, что свидетельствует о напряженности метаболических процессов аэробного и анаэробного гликолиза в организме.

Таблица 4 - Влияние экстракта Я. егесШт и карсшта на интенсивность процессов перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы белых крыс при Р — галактозаминовом гепатите_

Группы животных

Показатели Интактная Контрольная Опытная Опытная

(Н20) (О- (С- (О-

галактозамин галактозамин галактозамин

+Н20) + Н. егесЫт) +карсил)

3 сутки

МДА, нмоль/г ткани 2,4± 0,12 6,3±0,45 4,5±0,33* 4,7± 0,26

ДК, ед.оп. 5,3+0,29 38,6±1,42 26,4+ 1,71* 20,2+ 1,37*

Каталаза, мкат/мг белка 2,6± 0,50 1,2±0,12 1,9± 0,51 1,8± 0,10

ВГ, мкмоль/л 14,0±1,02 4,7+0,21 7,3±0,63* 7,8±0,47*

7 сутки

МДА, нмоль/г 2,4± 0,13 5,7±0,41 3,6±0,45 3,2±0,35

ДК, ед.оп. 5,3+0,24 31,0+2,54 24,3+ 1,99* 27,0+ 2,38

Каталаза, мкат/мг белка 2,6±0,16 1,8±0,09 2,0± 0,18 2,1± 0,10*

ВГ, ммоль/л 14,0±1,02 5,2+0,22 7,1+0,41* 6,3+0,44*

Введение животным экстракта Я. егесШт и карсила нормализует энергетическое состояние тканей печени при Б-галатозаминовом гепатите: концентрация АТФ в гомогенате печени повышается в 1,7 и 1,4 раза соответственно, содержание молочной кислоты снижается на 28% и 23% по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы. Соотношение пируват:лактат в опытных группах составляет 1:15 и 1:16, тогда как в контрольной группе - 1:24, что указывает на нормализацию углеводного обмена в гепатоцитах (табл. 5).

Таблица 5 - Влияние экстракта Я. егесШт и карсила на показатели энергообеспеченности гепатоцитов белых крыс при О - гал актоз амин о в ом повреждении печени, 7 сутки_

Показатели Группы животных

Интактная (Н20) Контрольная (О- галактозамин +Н20) Опытная (О- галактозамин + Н. егесШт) Опытная (О- галактозамин +карсил)

АТФ, мкМ/г ткани 2,35±0,16 1,12±0,09 1,90±0,17* 1,57±0,13*

Пируват, мМ/г ткани 0,136±0,012 0,124±0,060 0,142±0,012 0,139±0,003

Лактат, мМ/г ткани 1,45±0,04 2,93±0,10 2,12±0,07* 2,26±0,06*

Пируват/Лактат 1:11 1:24 1:15 1:16

Результаты патоморфологических исследований показали выраженные структурные изменения в печени животных контрольной группы на фоне введения Б-галактозамина, характерные для вирусного гепатита. На 3 сутки эксперимента в печени контрольных животных выявлялись кровенаполнение центральных вен с эритростазами, краевое стояние и диапедез лейкоцитов. Синусоидальные пространства, прилежащие к центральным венам, были неравномерно расширены и заполнены слипшимися эритроцитами. В строме дольки по ходу синусоидных капилляров отмечали мелкие очажки слабо выраженной полиморфноклеточной инфильтрации; в зоне портальных трактов -значительное количество апоптических гепатоцитов с эозинофильной цитоплазмой и гиперхромным ядром. Наблюдали выраженную зернистую дистрофию гепатоцитов, локально - гидропическую с наличием вакуолей, а также пятнистый некроз. На 7 сутки наблюдений в печени животных контрольной группы дистрофические и некротические изменения приобретали более масштабные размеры. У 4 из 6 животных наблюдалась тотальная гидропическая дистрофия гепатоцитов, сопровождающаяся множественным мелкоочаговым некрозом. У двух животных гидропическая дистрофия гепатоцитов сочеталась с жировой дистрофией. Увеличилось количество гепатоцитов с баллонной дистрофией. В некротизированных зонах отмечалась лейкоцитарная инфильтрация; повсеместно - гиперплазия и очаговая пролиферация звездчатых эндотелиоцитов; в зоне портальных трактов -гепатоциты с эозинофильной цитоплазмой. В результате чего балочно-радиальное строение печёночных долек было стёрто.

Курсовое введение животным экстракта Н. егесШт и карсила ограничивало развитие дистрофических и некротических изменений, воспалительных процессов в паренхиме печени на фоне О-галактозаминового гепатита во все сроки наблюдений. На 3 сутки эксперимента в отдельных центральных венах печени животных опытных групп выявлялись кровенаполнение и стаз эритроцитов, краевое стояние в них лейкоцитов и их диапедез. Синусоидальные пространства, прилежащие к центральным венам, были умеренно расширены. В капиллярах не отмечали стаз эритроцитов. Локально встречались клетки с умеренной гидропической и единично с жировой дистрофией. Некрозу были подвержены единичные гепатоциты. На 7 сутки наблюдений гидропической дистрофии были подвержены гепатоциты, расположенные в зоне центральной вены. Единично встречались гепатоциты с баллонной дистрофией. Отмечался локальный пятнистый некроз гепатоцитов. Балочно-радиальное строение печёночных долек не было нарушено.

Фармакотерапевтнческая эффективность экстракта Ь. сагШЫасит при тетрациклиновом гепатите

На основании полученных данных (табл. 6), для последующих экспериментов экстракт Ь. сагШЫасит использовали в дозе 100 мг/кг, т.к. последующее увеличение дозы не имело преимущества.

Таблица 6 — Влияние экстракта Ь. сагггйЫасит на секрецию желчи у белых крыс

Ь. сагШЫасит, мг/кг 25 50 75 100 125 150 200

Прирост скорости секреции желчи, % 24,6 27,0 39,3 50,0 45,3 43,2 36,5

Результаты исследований, представленные в таблице 7, показывают, что на фоне введения высоких доз тетрациклина гидрохлорида у белых крыс развиваются цитолитический и холестатический синдромы, нарушается обмен липидов. Так, на 14 сутки опыта активность трансаминаз АсТ и АлТ повышалась соответственно на 55% и 54%, активность ЩФ - более чем в 2,0 раза, концентрация Р-липопротеидов — на 68% и содержание билирубина — на 56% по отношению к показателям интактных животных. На 26 сутки эксперимента биохимические показатели по-прежнему были высокими, однако их уровень стабилизировался.

Таблица 7 — Влияние экстракта Ь. сагШЫасит и карсила на функциональную активность печени белых крыс при тетрациклиновом гепатите_

Показатели Группы животных

Интактн ая (Н20) Контрольная (тетрациклин + Н,0) Опытная (тетрациклин Ь. сагтМасит) Опытная (тетрациклин+ карсил)

14 сутки

АЛТ, мкмоль/мл 2,7±0,18 4,2±0,34 3,5±0,20 3,6±0,25

ACT, мкмоль/мл 2,4±0,19 3,7±0,32 2,9±0,12* 2,8±0,10*

ЩФ, ед.Боданск. 6,4±0,52 14,6±1,36 8,2±0,40* 8,9±0,62*

Р -липопротеиды, усл. ед. 3,8±0,04 6,4± 0,44 4,5±0,35* 4,7±0Д7*

Билирубин общ., мг% 6,0±0,58 15,3±1,12 11,9±0,92* 11,3±0,86*

Холестерин, ммоль/л 4,6±0,33 9,5±0,91 7,0±0,51* 7,8±0,47

26 сутки

АЛТ, мкмоль/мл 2,7±0,18 3,8±0,36 3,3±0,28 3,4±0,21

ACT, мкмоль/мл 2,4±0,19 3,6±0,23 2,9±0Д2* 2,4±0,14*

ЩФ, ед/л 6,4±0,52 12,4±0,87 7,7±0.54* 8,8±0,71*

Р -лииопротеиды, усл.ед. 3,8±0,04 6,0± 0,43 4,5±0,28* 4,3±0,92

Билирубин общ., мг% 6.0±0,58 12,8±1,02 6.6±0.46* 7,2±1,29*

Холестерин, ммоль/л 4,6±0.33 8,б±0,43 7,2±0,31 7,5±0,65

Установлено, что курсовое введение животным экстракта L carinthiacum в дозе 100 mi/кг уменьшает интенсивность синдромов цитолиза и холестаза при тетрациклиновом гепатите. В частности, на 16 и 26 сутки опыта у животных опытной группы активность AJIT снижалась относительно показателя контрольных животных соответственно на 16% и 13%, активность ACT - на 21% и 19 %, активность ЩФ - на 44% и 38 %, концентрация p-липопротеидов -на 30% и 25%, содержание билирубина - на 22% и 48% (табл. 7).

Сравнение показателей холеретической реакции у крыс интактной и контрольной групп отражало холестатическое действие тетрациклина, что проявлялось в снижении скорости секреции желчи, а также содержания в ней желчных кислот и билирубина (табл. 8). Курсовое введение животным экстракта L. carinthiacum в указанной дозе характеризовалось выраженным фармакотерапевтическим влиянием на течение тетрациклинового гепатита.

Таблица 8 - Влияние экстракта I. сагШЫасит и карсила на общее количество и биохимический состав желчи у белых крыс при тетрациклиновом гепатите

Группа животных Общее кол- Желчны Билир Холест

во желчи за 4 е убин ерин

ч опыта, кислоты мг% мг%

мг/ЮОг мг%

14 сутки

Интактная (НгО) 1614±64,3 1117,2 36,0 163,1

Контрольная (тетрациклин+ Н-Ю) 1296±73,8 769,5 27,0 112,7

Опытная (тетрациклин L. carinthiacum) 1602±58,6* 1140,0 32,0 155,0

Опытная (тетрациклин+ карсил) 1536± 22,6* 1083,0 30,0 156,0

26 сутки

Интактная (Н20) 1614 ± 81,3 1500,8 33,0 111,7

Контрольная (тетрациклин+ Н20) 1428 ± 50,0 1288,2 18,0 85,5

Опытная (тетрациклин L. carinthiacum) 1620 ±61,2* 1504,8 24,0 97,4

Опытная (тетрациклин+ карсил) 1506 ±48,8 1389,0 19 111,8

У крыс, получавших указанный экстракт, на 14 сутки наблюдения скорость секреции желчи превышала показатели крыс контрольной группы на 25, 27, 26 и 36 % соответственно на 1 - 4 часы опыта. Общее количество выделенной желчи у животных указанной группы превышало контроль на 24%. При биохимическом исследовании желчи установлено, что экстракт Ь. сагШЫасит ограничивает нарушения холатосинтетической функции печени, о чем свидетельствовало сохранение концентрации холатов в желчи. На этом фоне содержание билирубина в желчи было выше контроля на 19% и холестерина -на 38%. На 26 сутки опыта у крыс, получавших экстракт Ь. сагЬпЫасит. сохранялась положительная динамика холеретической реакции. При этом скорость секреции желчи возрастала на 13%, а содержание холатов в желчи превышало контроль на 17%, холестерина - на 14%. Под влиянием указанного

экстракта содержание билирубина в желчи превышало в 1,3 раза таковое у крыс контрольной группы, у которых продолжалось снижение уровня содержания билирубина в желчи (табл. 8). По степени желчегонного действия экстракт Ь. сагШЫасит сопоставим с действием референтного препарата карсил.

Установлено, что введение животным тетрациклина в высоких дозах вызывает усиление процессов ПОЛ в мембранах гепатоцитов и снижение активности эндогенной АОС, о чем свидетельствует увеличение концентрации МДА в гомогенате печени на 14 сутки опыта в 1,6 раза и снижение активности каталазы и содержания ВГ на 35% и 39 % соответственно по сравнению с данными животных интактной группы. Следует отметить, что ВГ — наиболее важный и эффективный антиоксидант тиоловой группы и снижение его содержания свидетельствует о выраженном напряжении прооксидантно-антиоксидантного баланса организма.

На фоне введения экстракта Ь. сагШЫасит в дозе 100 мг/кг во все сроки исследований наблюдалось ингибирование свободнорадикальных реакций в биологических мембранах гепатоцитов при стимуляции антиоксидантного потенциала (табл. 9). Так, содержание МДА в гомогенате печени животных указанной группы снижалось на 22% и 16%, а активность каталазы повышалась на 28% и 17%, содержание ВГ — на 29% и 18% соответственно срокам наблюдения по сравнению с данными крыс контрольной группы (табл. 9). По своей антиоксидантной активности экстракт сухой Ь. сагШЫасит превосходил карсил.

Таблица 9 — Влияние экстракта Ь. сагШЫасит и карсила на интенсивность процессов перекисного окисления липидов и состояние антиоксидантной системы белых крыс при тетрациклиновом гепатите_

Показатели Группы животных

Интактная (Н20) Контрольная (тетрациклин + Н20) Опытная (тетрациклин Ь. сагтМасит) Опытная (тетрацик лин+ карсил)

14 сутки

МДА, нмоль/г ткани 3,7±0,26 5,9±0,36 4,6±0,22* 4,8±0,31*

Каталаза, мкат/мг белка 7,2±0,15 4,7±0,38 6,0±0,46 5,8±0,51

ВГ. мкмоль/л 14,0±1,02 8,6±0,47 11,1 ±0,29* 10,1±0,36

26 сутки

МДА, нмоль/г ткани 3,7±0,26 4,3±0,29 3,6±0,17 3,8+0,30

Каталаза. мкат/мг белка 7,2±0,15 5,9±0,34 6,9±0,22* 6,5±0,46

ВГ, мкмоль/л 14,0±1,02 11,2±0,62 13,2±0,63* 12,6±0,45

При исследовании метаболических функций печени установлено, что тетрациклина гилдрохлорид в высоких дозах вызывает ухудшение энергообеспеченности гепатоцитов. Так, в гомогенате печени животных

контрольной группы отмечается снижение количества АТФ в 2,8 раза, увеличение содержания молочной кислоты на 87 % по сравнению с указанными показателями животных интактной группы. Полученные результаты согласуются с данными литературы о том, что на фоне введения больших доз указанного антибиотика происходит торможение аэробного фосфорилирования и снижение содержания АТФ (Баган Н.В., 1991). Уровень пирувата на фоне тетрациклинового гепатита изменяется не столь значительно, как молочной кислоты, в связи с тем, что пировиноградная кислота - величина нестабильная и является «точкой пересечения» многих метаболических путей. Введение животным исследуемого экстракта Ь. сагШМасит нормализует энергетическое состояние тканей печени при тетрациклиновом гепатите. Так, концентрация АТФ в гомогенате печени животных указанной группы повышается в 2,6 раза, содержание молочной кислоты снижается на 30 % по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. Соотношение пируватглактат в опытных группах составляет 1:14, тогда как в контрольной группе - 1:20, что указывает на нормализацию углеводного обмена в гепатоцитах (табл. 10).

Таблица 10 - Влияние экстракта Ь. сагШЫасит и карсила на показатели энергообеспеченности гепатоцитов белых крыс при тетрациклиновом гепатите

Показатели Группы животных

Интактная №0) Контрольная (тетрациклин+ Н20) Опытная (тетрациклин Ь. сапшЫасит) Опытная (тетрациклин+ карсил)

АТФ, мкМ/г ткани 2,35±0,16 0,82±0,08 2,15±0,08* 1,17±0,13*

Пируват, мМ/г ткани 0,136±0,012 0,130±0,007 0,137±0,009 0,139±0,003

Лактат, мМ/г ткани 1,45±0,04 2,71±0,07 1,89±0,05* 1,96±0,06*

Пируват/Лактат 1:11 1:20 1:14 1:14

При проведении патоморфологических исследований установлено, что в печени животных, получавших экстракт Ь. сагШЫасит на фоне введения тетрациклина, на 14 сутки наблюдения отмечались менее выраженные структурные изменения по сравнению с контролем, характеризующиеся нарушениями микроциркуляции и умеренно выраженными дистрофическими процессами в печени. Гепатоциты в зоне центральной вены были подвержены зернистой дистрофии, при этом лейкоцитарная инфильтрация была менее выраженной, чем в контроле. По данным морфометрических исследований количество гепатоцитов с жировой дистрофией на фоне введения Ь. сагШЫасит составляло в среднем 8-10 %, что было в среднем на 48 % ниже показателя контрольных животных.

I 2

Контроль L. carinthiacum Карсш

Рисунок 1 - Влияние экстракта L. carinthiacum и карсила на количество гепатоцитов с жировой дистрофией при тетрациклиновом гепатите (14 сутки).

К механизму гепатозащитного и холеретического действия экстрактов Я.

erectum и L. carinthiacum

In vitro на моделях перекисного и осмотического гемолиза изучали мембраностабилизирующую активность экстрактов L. carinthiacum и Я. erectum в широком диапазоне концентраций. Установлено, что экстракт L. carinthiacum оказывает умеренное мембраностабилизирующее действие. Так, в концентрации 4.0 мг/мл степень перекисного и осмотического гемолиза снижается на 50,1% и 73,4 % соответственно. Экстракт Я erectum обладает более выраженной мембраностабилизирующей активностью: в концентрации 4,0 мг/мл степень перекисного и осмотического гемолиза снижается на 72,6% и 82,8% соответственно по сравнению с контролем.

Установлено, что в модельных системах in vitro, в которых происходит генерация свободных радикалов, экстракт L. carinthiacum проявляет умеренную антиоксидантную активность, а экстракт Я. erectum оказывает выраженную антиоксидантную активность сопоставимую с таковой препарата сравнения -аскорбиновой кислотой. В частности, исследуемые экстракты обладают антирадикальной активностью в отношении DPPH-радикала (ДФПГ-метод). Так, концентрация, при которой происходит 50 % ингибирование радикала (1С50) составляет: L. carinthiacum - 65,0 мкг/мл, Я. erectum - 97,1 мкг/мл, а для препаратов сравнения аскорбиновой кислоты и кверцетина данный показатель составил 4,8 и 9,9 мкг/мл, соответственно. При изучении влияния указанных [ экстрактов на активные формы кислорода (02'' и NO) и ионы Fe2+ установлено, что они обладают способностью к их инактивации. В эксперименте по определению хелатирования ионов Fe2+ 1С50 для экстракта L. carinthiacum составляет 1100 мкг/мл. Для препарата сравнения - кверцетина данный показатель - > 5000 мкг/мл. Экстракт Н. erectum проявляет выраженную активность по связыванию ионов Fe2+ (1С50 =180,0 мкг/мл), сопоставимую с таковой препарата сравнения - аскорбиновой кислотой (1С50 =150,0 мкг/мл). По-

видимому, Ре-хелатирующая активность Н. егесШт обусловлена наличием преимущественно в его химическом составе флавоноидов (производных рутина, изорамнетина (Растительные..., 1985). В отношении связывания супероксид-анион радикалов (02'") характерна умеренная активность для экстракта Ь. сагШЫасит (1С50 = 422,5 мкг/мл), а сухой экстракт Н. егесШт характеризуется выраженной инактивирующей способностью в отношении 02" -радикала (1С50 = 81,3 мкг/мл), превышающей активность аскорбиновой кислоты (1С50 = 101,0 мкг/мл).

Установлено, что исследуемые экстракты препятствуют накоплению ТБК-активных продуктов в модельной системе, защищая биологический субстрат от перекисного окисления липидов. 1С50 для экстракта Ь. саппМасит составляет 346,0 мкг/мл, для Н. егесШт — 85,0 мкг/мл. В отношении связывания молекул N0, исследуемые экстракты проявляли умеренную активность. Так, для указанных экстрактов концентрация, при которой происходит 50 % ингибирование N0, составила > 5000 мкг/мл.

При оценке желчегонной активности исследуемых экстрактов установлено, что более выраженное желчегонное действие проявляет экстракт Н. егесШт в дозе 50 мг/кг. При этом скорость секреции желчи возрастала по сравнению с таковой у крыс контрольной группы на 30% — 37%, в то время как у препарата сравнения карсила - на 23% — 32% соответственно на 2 — 5 часы опыта. Общее количество выделенной желчи превышало контроль на 31%, а под влиянием карсила - на 28%. Холеретическая реакция сохранялась в течение всего опыта. Экстракт Н. егесШт в указанной дозе оказывал умеренное стимулирующее влияние на синтез и выделение холатов, а также секрецию билирубина с желчью. При введении животным указанного экстракта в дозах 100 и 200 мг/кг содержание билирубина в желчи повышалось на 10% и 17% соответственно и содержание холестерина - на 26% и 22%.

Экстракт сухой Ь. сагШЫасит также оказывает желчегонное действие, но менее выраженное, чем Н. егесШт. В частности, при введении животным экстракта Ь. сагШЫасит в дозе 50 мг/кг скорость секреции желчи через 2 и 3 часа возрастала на 27 и 31 % по сравнению с аналогичным показателем контрольных животных. При увеличении дозы Ь. сагШЫасит до 100 мг/кг скорость секреции желчи превышала данные контрольных животных в среднем в 1,5 раза. Использование экстракта в дозе 200 мг/кг повышало данный показатель через 1 и 2 часа на 39% и 21% соответственно по отношению к контролю. Общее количество выделенной желчи у животных опытной группы повышалось на 22% — 29% по сравнению с таковой в контроле. При этом холеретическая реакция сохранялась на высоком уровне в течение всего периода наблюдения. Наряду с этим, экстракт Ь. сагШЫасит стимулировал синтез и выделение желчных кислот, суммарное содержание которых в желчи, в частности, в дозе 100 мг/кг превышало таковое у крыс контрольной группы на 40%. Кроме этого, испытуемый экстракт способствовал экскреции билирубина

и холестерина с желчью. Полученные результаты согласуются а данными литературы (МягмарЛ., 1974)

При определении противовоспалительных свойств испытуемых экстрактов выявлено их выраженное антиэкссудативное и антиальтеративное влияние. Так, на фоне введения животным экстрактов Н. erectum и L. carinthiacum степень формалинового отека угнеталась соответственно на 31 % и 28% по сравнению с показателем контрольных животных. При оценке влияния на фазу альтерации установлено, что исследуемые экстракты стимулируют заживление кожно-мышечного дефекта, вызванного 9 % раствором уксусной кислоты. На 9 сутки опыта площадь некротизированной ткани у крыс, получавших экстракты Н. erectum и L. carinthiacum, сокращалась по сравнению с таковой у крыс контрольной группы на 22% и 21% соответственно, на 20 сутки - 29% и 33% и на 29 сутки - 30% и 28%, что свидетельствовало о стимулировании процессов регенерации в очаге воспаления под влиянием испытуемых экстрактов. При оценке влияния испытуемых экстрактов на фазу пролиферации установлено, что Н. erectum и L. carinthiacum стимулируют образование фиброзно-грануляционной ткани на 15% и 19% соответственно.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В последние годы отношение к лекарственным растениям кардинальным образом изменилось. Фитопрепараты имеют выраженные преимущества перед синтетическими аналогами: широкий диапазон действия, малая токсичность, высокая эффективность, доступность, взаимозаменяемость и возможность длительного применения без проявления побочных эффектов (Масленников П.В., 2012; 2013; Николаев С.М., 2012).

Полученные данные доказывают, что экстракты Н. erectum и L. carinthiacum в экспериментально-терапевтических дозах оказывают выраженное гепатопротекторное влияние при экспериментальных гепатитах, снижая развитие синдромов цитолиза, ингибируя нарушения холатокинетической и холатосинтетической функций печени, повышая энергетический потенциал и ограничивая дистрофические и некротические изменения гепатоцитов, интенсивность воспалительной инфильтрации, а также стимулируя регенерацию печеночных клеток. При этом экстракт Н. erectum в большей степени обладает способностью предотвращать и уменьшать явления цитолиза, экстракт L. carinthiacum - предупреждать развитие синдрома холестаза.

При фармакотерапии экспериментальных гепатитов экстрактами Н. erectum и L. carinthiacum наблюдали значительное снижение продуктов ПОЛ, которое объясняется синергизмом антиоксидантного действия содержащихся в них каротиноидов, аскорбиновой кислоты и полифенолов. Параллельно повышалась функция антиоксидантной защиты (активность каталазы и содержание ВГ). Исследования in vitro показали, что более выраженное

мембраностабилизирующее и антиоксидантное действие проявляет экстракт Н. erectum. Известно, что флавоноиды ингибируют ПОЛ на стадии как инициации, так и продолжения цепи, выступая донорами атомов водорода для перекисных радикалов. Образующиеся при этом флавоноидные радикалы вступают в реакции диспропорционирования с другими радикалами (Куркина A.B., 2012; Farghuli, 2000; Gebhardt, 2002). Другим важнейшим показателем биологической ценности исследованных растительных экстрактов, определяющим их антиоксидантную активность, является содержание в них аскорбиновой кислоты. Существенным является также синергизм действия аскорбиновой кислоты с флавоноидами в регуляции окислительно-восстановительных процессов (Масленников П.В., 2014).

Нормализация процессов желчеобразования и желчевыделения связана со свойством биофлавоноидов — активизировать энергетический обмен в гепатоцитах (Дроговоз, 1987; Николаев, 1992; Василенко, 1997). Определенно, биофлавоноиды, ингибируя процессы перекисного окисления липидов, предотвращают дезинтеграцию холестерингидроксилазы - основного фермента утилизации холестерина в желчные кислоты. Наряду с этим, полифенолы способствуют транспорту холатов, экскреции билирубина и холестерина, а также ускоряют регенерацию и восстановление функциональной активности гепатоцитов. Холеретические и гепатопротекторные свойства экстракта Н. erectum и L. carinthiacum являются весьма ценным сочетанием для комплексного лечения и профилактики заболеваний печени и желчевыводящих путей. Обладая выраженной холеретической активностью, экстракт Н. erectum по силе холатостимулирующего действия уступал экстракту L. carinthiacum, что, по-видимому, обусловлено некоторым различием в их химическом составе -присутствием полифенолов, водорастворимых полисахаридов, алкалоидов. Наиболее выраженное холатостимулирующее действие в этих условиях оказывал L. carinthiacum, что обусловлено присутствием в его составе флавоноидов, обладающих спазмолитическим действием на гладкую мускулатуру желчного пузыря и протоков, что способствует оттоку желчи (Погоцкая A.A., 2013).

Выраженное противовоспалительное действие исследуемых экстрактов также обусловлено значительным количеством природных антиоксидантов фенольного класса, присутствующих в испытуемых экстрактах. В очаге экспериментального воспаления воздействие природных антиоксидантов ингибирует СРО и стабилизирует клеточные мембраны, за счет чего уменьшается выделение гуморальных и клеточных медиаторов воспаления, что ведет к подавлению вторичной альтерации и как следствие - стимуляции пролиферации. Механизм сосудоукрепляющего действия фенольных соединений (рутина, кверцетина и др.) заключается также в их способности ингибировать гиалуронидазу (Куркин В.А., 2013; Farghuli, 1999).

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о выраженной фармакотерапевтической эффективности экстрактов Н. erectum и L.

carinthiacum и аргументируют целесообразность их использования при профилактике и лечении повреждений печени.

ВЫВОДЫ

1. Экстракт Нуресоит erectum сухой в дозе 50 мг/кг оказывает выраженное гепатопротекторное влияние при D-галактозаминовом гепатите, снижая развитие синдромов цитолиза и холестаза, повышая энергетический потенциал и ограничивая дистрофические и некротические изменения гепатоцитов, ингибируя свободнорадикальное окисление биомакромолекул и активируя антиоксидантную систему организма.

2. Экстракт Lomatogonium carinthiacum сухой в дозе 100 мг/кг обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при тетрациклиновом гепатите, ингибируя нарушения желчеобразовательной, холатосинтетической функций печени, ограничивая дистрофические и некротические процессы, интенсивность воспалительной инфильтрации в печени, а также стимулируя регенерацию печеночных клеток.

3. Основными механизмами, определяющими гепатопротекторное влияние экстрактов Н. erectum и L. carinthiacum, являются их выраженное антиоксидантное, мембраностабилизирующее, противовоспалительное, желчегонное действие, а также стимуляция метаболических и регенераторных процессов в печени.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Fedorov, A.V. Choleretic action of an extract of Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) Reichenb. / A.V. Fedorov // Abstracts of the V international symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine. — Ulaanbaatar, 2011. - P. 147-148.

2. Самбуева, 3. Г. Желчегонное действие экстракта ломатогониума каринтийского / З.Г. Самбуева, Б.Г. Бальжиров, A.B. Федоров // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. — 2011.— № 1 (77)-С. 174-176.

3. Федоров, A.B. Влияние экстрактов Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) Reichenb and Нуресоит erectum L. на холерез у белых крыс при экспериментальном гепатите / A.B. Федоров, З.Г. Самбуева, П.Б. Лубсандоржиева // Мат-лы Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы управления здоровьем населения». - Нижний Новгород, 2012. - Выпуск V. - С. 137-142.

4. Торопова, A.A. Антиоксидантная и мембраностабилизирующая активность экстрактов Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) Reichenb and Нуресоит erectum L. в модельных системах / A.A. Торопова, Я.Г. Разуваева, С.М. Николаев, A.B. Федоров, З.Г. Самбуева // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2012,- № 6 (88) -С. 94-97.

5. Федоров, A.B. Влияние экстракта гипекоума прямого на внешнесекреторную функцию печени при экспериментальном гепатите / А.В.Федоров // Мат-лы II Межвузовской научно-практической конференции студентов и аспирантов «Социально-экологические проблемы Байкальского региона». - Улан-Удэ, 2013.-С. 102-105.

6. Торопова, A.A. Мембраностабилизирующее действие экстракта Нуресоит erectum L. в условиях in vitro / A.A. Торопова, A.B. Федоров, Я.Г. Разуваева, С.В. Лемза, З.Г. Самбуева, О.В. Хабаева // Тез. докл. XX Росс, национ. конгресса «Человек и лекарство». — М., 2013. — С. 443.

7. Федоров, A.B. Антиоксидантная активность экстракта Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) Reichenb в модельных системах / A.B. Федоров A.A. Торопова, Я.Г. Разуваева, С.В. Лемза, З.Г. Самбуева, О.В. Хабаева // Тез. докл. XX Росс, национ. конгресса «Человек и лекарство». - М., 2013. - С. 450.

8. Fedorov, A.V. Choleretic effect of the extract from Нуресоит erectum L / A.N. Fedorov, Z.G. Sambueva, P.B. Lubsandorzhieva // Proceedings of the VI International Scientific Conference «Traditional medicine: Ways of Integration with Modern Health Care». - Ulan-Ude, 2013. -C. 73.

9. Николаев, C.M. Влияние Lomatogonium carinthiacum на метаболические процессы в печени крыс при тетрациклиновом гепатите / С.М. Николаев, A.A. Торопова, A.B. Федоров, Я.Г. Разуваева, З.Г. Самбуева, И.П. Убеева, С.В. Лемза // Сибирский медицинский журнал. —2013—№ б. -С. 145-147.

10. Федоров, A.B. Фармакотерапевтическая эффективность экстракта Lomatogonium carinthiacum при экспериментальном гепатите / A.B. Федоров, С.М. Николаев, З.Г. Самбуева, Я.Г. Разуваева, A.A. Торопова, Е.В. Ферубко // Бюллетень ВСНЦСО РАМН.-2013,-№ 5 (93)-С. 162-166.

11. Николаев, С.М. Влияние экстракта Lomatogonium carinthiacum (Wulfen) А. Вг. на желчевыделительную функцию печени / С.М. Николаев, З.Г. Самбуева, A.B. Федоров, П.Б. Лубсандоржиева, Е.В. Ферубко // Вестник Бурятского государственного университета. Серия медицина и фармация. - 2013—№ 12. - С. 46-49.

Подписано в печать 28.03.2014 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,4 печ. л. Тираж 100. Заказ №11.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.