Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакотерапевтическая эффективность растительного средства "Фитолисан" при экспериментальном уролитиазе

На правах рукописи

БУТУХАНОВА ИРИНА СЕРГЕЕВНА

ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ФИТОЛИСАН» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ УРОЛИТИАЗЕ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Улан - Удэ 2005

Работ выполнена в бурятском государственном университете Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Тамара Петровна Сизых

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Лариса Николаевна Шаитанова доктор медицинских наук Еши Нянюевич Цыбиков

Ведущая организация: Иркутский государственный институт усовершенствования врачей МЗ и социального развития РФ

Защита состоится^^февраля 2005 г. в^ часов на заседании Диссертационного совета К 003.028.01. при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН (670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой 6).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

Авторефера г разослан «¡М» января 2005 г.

Ученый секретарь Диссертационного ^—

совета кандидат биологических наук ' В.Б Хобракова

WW 3

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Актуальность поиска методов повышения эффективное! и лечения заболеваний почек определяется их широкой распространенное 1ыо и наблюдающейся тенденцией к росту в структуре обшей заболеваемости. В настоящее время более 8 % взрослого населения России страдает заболеваниями нефроурологического профиля. Одной из наиболее часто встречаемых патологий органов мочевыводящей системы является уролитиаз. В 2002 г. заболеваемость мочекаменной болезнью в России составила 535,8 на 100 тыс. населения (Здоровье населения.. , 2002). Ежегодный прирост первичной заболеваемости уролитиазом составляет 0,1 % (Кузнецов. 2002).

Рост заболеваемости мочекаменной болезнью в России связан, в первую очередь, с ухудшением качества продуктов питания и питьевой воды, а также с увеличением употребления населением ксенобиотиков, способных спровоцировать развитие мочекаменной болезни, неблагоприятным воздействием изменившихся экологических, социальных и бытовых условий (Панин, 2000). Мочекаменная болезнь приводит к длительной потере трудоспособности и инвалидизации населения, ей характерны рецидивы, осложнения, что подчеркивает актуальность этой проблемы (Горбачев и соавт., 1994; Козлов, 1997; Лопаткин и соавт., 1998; Александров 2002; Rose, 1982).

В настоящее время в комплексной терапии мочекаменной болезни с успехом применяются методы оперативного и консервативного лечения. Оперативное лечение предусматривает хирургическое удаление уролитов и дистанционную литотрипсию, консервативное лечение - физиотерапию, санаторно-курортное и медикаментозное лечение, в том числе, фитотерапию. Тем не менее, медикаментозное лечение мочекаменной болезни сопряжено с определенными трудностями, связанными с полиэтио-логичностью и сложным патогенезом этого заболевания, и в подавляющем большинстве случаев приводит к оперативным методам лечения. В то же время, частота рецидивного камнеобразования отмечается в 40-50 % случаев (Тиктинский, 1990;Лопаткин и соавт., 1998).

Таким образом, несмотря на значительные успехи в лечении мочекаменной болезни, проблема профилактики и терапии уролитиаза остается актуальной до настоящего времени, что обусловливает необходимость поиска новых высокоэффективных препаратов.

Одним из путей решения этой проблемы является использование многокомпонентных растительных препаратов, содержащих большое количество биологически активных веществ, относящихся к различным классам химических соединений и оказывающих комплексное фармакотерапевти-ческое воздействие на различные звенья патогенеза заболевания. Кроме ж>го, растительные препараты, как правило, нетоксичны, не оказывают побочного действия при длительном применении, что особенно важно при такой хронической патологии, как мочекаменная болезнь.

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИ£.'!ЬОТЕКА _ХЛетерб)рг

шу»к

В связи с этим, перспективным направлением представляется изучение многокомпонентных растительных сборов из арсенала тибетской медицины, обладающих широким спектром фармакологической активности, предназначенных для лечения и профилактики мМбкаме'нной болезни Высокая фармакотерапевтическая эффективность ^й* средств обусловлена гармоничным сочетанием биологически активййб^'йеЩеСгВ, содержащихся в растениях, обеспечивающих не только адекватное воздействие на основные звенья патологического процесса, по и спосёбствукмцих фармакологической регуляции многих функциональных сист'еМ' И повышающих адаптивные возможности организма в целом. В соответствии с этим, разработано новое комплексное растительное средство, предназначенное для терапии и профилактики мочекаменной болезни. В состав этого средства входят: листья ортосифона тычйночного, земляники лесной, брусники обыкновенной, трава горца птичьего, цветки пижмы обыкновенной, плоды шиповника, корень петрушки, в соотношениях по весовым частям: 18: 18: 18:18:6: 18:4, условно Названное «фитолисан».

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось определение фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности «фитолисана» при экспериментальном уролитиазе.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить специфическую фармакологическую активность «фитолисана»

- оценить фармакотерапевтическую эффективность «фитолисана» при экспериментальном уролитиазе; I

- выявить механизмы литолитического и литокинетическоГо действия «фитолисана».

Научная новизна. Работа представляет собой исследование специфической фармакологической активности и фармакйтерапёвтинейкой эффективности многокомпонентного растительного средства - «фй+олмсан». Установлено, что «фитолисан» обладает диуретйчёской, ЬтоазбтеМйче-ской, противовоспалительной, антибактериальной,' спазмолитической, мембраностабилизирующей и антиоксидантной активностью.

Установлена активация свободнорадикального окисления липидов в механизме повреждения почек и мочевыводящих путей и инициация процессов камнеобразования. На этом фоне «фитолисан» обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной введением сублетальной дозы витамина Д2, этиленгликоля и перекиси водорода. Показано, что превентивно-курсовое введение испытуемого средства в экспериментально-терапевтической дозе на фоне экспериментального уролитиаза сопровождается снижением выраженности процесса камнеобразования и явлений воспалительного процесса в паренхиме почек, а также препятствует развитию нефропатии и способствует нормализации функционального состояния почек лабораторных животных. В частности, «фитолисан» предупреждает образование мочевых ьамней. а гакже оказывает литолитическое и

литокииетичсское действие, способствуя более быстрому выведению образовавшихся камней. Кроме того, на фоне введения «фи1-олисана» отмечается повышение диуретической и депурационной функции почек, скорости клубочковой фильтрации, снижение протеииурии, нормализация фосфор-но-кальциевого обмена и кислотно-основного равновесия.

Впервые установлен один из базисных механизмов нефронротекторного, литолитического и литокинетического действия «фи-толисана», заключающийся в ингибировании процесса перекисного окисления липидов, лежащего в осногсе' стабилизации мембранных структур нефронов, что обеспечивает нормализацию функционального состояния почек при мочекаменной болезни и снижет интенсивность Процессов кам-необразования.

Практическое значение. Полученные данные о наличии выраженной нефропротектОрной, литокинетической и литолитической активности у «фитолисана» ар^ментируют целесообразность его применения в комплексной терапии и профилактике Первичною уролитиаза и рецидивного камиеобразования. На основании этою разработаны методические рекомендации но использованию «фитолисана» в клинической практике для лечения и профилактики мочекаменной болезни. Материалы диссертации используются в учебном процессе на медицинском факультете БГУ.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на:

- ежегодных научных сессиях Института общей и экспериментальной биологиии СО РАН (Улан-Удэ, 2002; 2003; 2004);

- научно-практической конференции «Биологически активные добавки и перспективы их применения в медицине» (Улан-Удэ, 2002);

- Всероссийской научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004);

- Региональной научно-практической конференции «Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники» (Чита, 2004). Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных

работ.

Основные положения выносимые на защиту:

- «фитолисан» обладает диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, регенераторной, спазмолитической, антибактериальной, мембраностабилизирующей и антиоксидантной активностью;

- одним из патогенетических механизмов развития мочекаменной болезни является индукция процессов перекисного окисления липидов, ведущая к деструкции мембранных структур нефронов и инициации процесса камиеобразования;

- курсовое введение «фитолисана» оказывает выраженное фармакотерапевтическое действие при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной введением сублстльных доз ви1 амина Д2, эти-лешликоля а также введением 3 % раствора перекиси водорода,

препятствуя камнсобрачованию в органах мочевыделительной системы и нормализуя функциональное состояние почек лабораторных животных,

- одним из молекулярно-клеточных механизмов нефропрочекторнот, литолитичсского и лиюкинетического действия «фитоцисанй» является его способность нормализовать минеральный обмен, а1 также ингибировагь процессы свободнорадикального окисления липидов и .'Повышать активность эндогенной антиокислительной системы организма,- ">"

Структура и объем диссертации. Диссертационная1 работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов' исследований, глав экспериментальных исследований, обсуждения,1 заключения, выводов и списка литературы Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста, включая 22 таблицы и 8 рисунков.

Указатель литературы содержит 272 источника, из которых 50 работ -на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Для оценки функционального состояния почек были использованы наиболее адекватные модели и информативные методики, позволяющие объективно оценить фармакологические свойства и фармакотерапевтиче-скую эффективность испытуемого растительного комплексного средства. Отвар готовили в соответствии с ГФ XI (1990).

Эксперименты выполнены на 965 крысах обоего пола линии Wistar массой 160-220 г., содержащихся на стандартном рационе кормления в виварии (Приказ МЗ № 1179 от 10.10.83 г).

Учитывая основные патогенетические факторы мочекаменной болезни, использованы три модели экспериментального уролитиаза.

Первую модель мочекаменной болезни воспроизводили внутрижелу-дочным введением витамина Дг в дозе 12000 ЕД/кг массы животного в течение 20 дней (Higgcns, 1965). Животным опытных групп одновременно с введением витамина Д2 внутрижелудочно вводили отвар комплексного растительного средства в объеме 10 мл/кг массы. Введение испытуемого средства проводили один раз в сутки в течение 3 дней до начала эксперимента и затем на протяжении 30 дней. Крысам контрольной группы вводили эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме.

Второй экспериментальный уролитиаз воспроизводили путем введения 0,1 мл 3 % раствора перекиси водорода в полость лоханки правой почки (Николаев и соавг.. 2004). Операцию производили под гексеналовым наркозом в дозе 70 мг/ki внутрибрюшинно. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили отвар комплексного растительного средства в объеме 10 мл/кг 1 pas в лень в течение 3 дней до оперативного вмешательства и затем на протяжении всего эксперимента (30 дней). Крысам контрольной группы ввочпли эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме.

Модель кальций-оксалагного уролитиаза воспроиходили п>тем Biiyi-рижелудочного введения белым крысам I % водною раствора аммония

хлорида в обьемс 10 мл/к1 в течение 3 дней. Одновременно с началом эксперимента животные получали 0,75 % водный раствор этиленглик'оля путем свободного доступа в течение 21 дня (АПпаш е1 а1., 2003) 'Опытная группа животных получала отвар «фитолисана» в объеме 10 ^(К!1' 1 раз в сутки на протяжении всего эксперимента. Крысам контрольной группы вводили эквиобьемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. ' • ' /¡у'

В качестве препарата сравнения во всех случаях использовали «Урологический сбор» (АО «Красногорсклексредства») в объеме 10 мл/кг.

Для определения фармакологической активности и фармакотерапев-тической эффективности «фитолисана» при экспериментальном уролитиа-зе различной этиологии были использованы наиболее информативные методики, с помощью которых определяли динамику развивающихся патологических изменений.

С целью оценки функционального состояния почек жиЬотн:-.:х определяли скорость диуреза по общепринятому методу без нагрузки и с 2,5 % водной нагрузкой (Берхин, Иванов, 1972), а также концентрацию катионов натрия, калия и кальция в моче методом пламенной фотометрии на приборе «Р1арЬо - 4» (Германия); фосфора - по Хаями Тадаси (Асатиани, 1965). Депурационную функцию почек оценивали по содержанию мочевины и креатинина в сыворотке крови и моче унифицированными методами с использованием наборов реактивов Био-Ла-Тест «Лахема» (Чехия); содержание белка в моче - реакцией с сульфосалициловой кислотой (Меньшиков и соавт., 1987); определение скорости клубочковой фильтрации осуществляли по клиренсу эндогенного креатинина (Капитаненко, Дочкин, 1985); рН мочи определяли с использованием иономера универсального ЭВ - 74 (Россия) с применением устройства для малых объемов.

Сбор мочи осуществляли в течение 3 часов в обменных клетках. Ин-1енсивность канал ьцевой реабсорции оценивали по изменению скорости клубочковой фильтрации в зависимости от минутного диуреза (Шюк,1985).

Концентрационную функцию почек оценивали по изменению концентрации электролитов и мочевины в выделяемой моче. Величину осмотической концентрации мочи рассчитывали по О. Шюк, (1985)

Для оценки противовоспалительной активности комплексного растительного средства «фитолисан» определяли его втчяние на основные стадии воспалительного процесса.

Моделирование воспалительного процесса с преобладанием явлений альтерации проводили подкожным введением 0,5 мл 9 % раствора уксусной кислоты с одновременным внутрибрюшным введением 0,4 мл 10 % р!створа реоролиглюкина (Ойвин, Шетель, 1961). Оценку площади некро-тизированной ткани проводили планиметрическим методом на 7-е, 14-е и 21-е сутки.

И {учение атиэкссудагивной активности проводили на модели острого асептического воспаления, осуществляемого путем субплантарного вве-

дения в заднюю конечности крысы - 0,1 мл водного раствора 3 % формалина (Стрельников, i960). Выраженность антиэкссудативной активностг оценивали по разнице объемов здоровой и отечной лап через 24 часа после введения формалина.

Степень дегрануляции тучных клеток изучали на модели острого перитонита, вызванного внутрибрюшинным введением I мл 0,2 % раствора нитрата серебра (Александров и соавт., 1986). Определяли объем экссудата в брюшной полости, его характер и количество дегранулированных клеток в брыжейке. Для этого брыжейку фиксировали смесыо Карнуа и окрашивали 0,05 % раствором толуидинового синего. Подсчет количества дегранулированных тучных клеток осуществляли в 100 окнах при увеличении (х20).

Оценку влияния «фитолисана» на образование фиброзно-грапуляционной ткани осуществляли по методу Ф. Тринус и соавт. (1975).

Исследования спазмолитической активности проводили на изолированном отрезке тонкой кишки белых крыс с массой 180-220 г по методу (Furchgott, 1967).

Оценку мембраностабилизирующей активности изучаемого растительного средства осуществляли по степени гемолиза эритроцитов, который вызывали реактивом Фентона (перекисный гемолиз) и добавлением дистиллированной воды (осмотический гемолиз) (Ковалев и соавт., 1986) Степень гемолиза измеряли через 24 часа по изменению оптической плотности при длине волны >.=420 нм. Суспензию эритроцитов готовили из свежей эритроцитарной массы донорской крови путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе в соотношении 1.10 и центрифугирования при 1500 об/мин в течение 10 минут.

Антиоксидантные свойства «фитолисана» оценивали по степени ин-гибирования образования продуктов перекисного окисления липидов (малонового диальдегида), по его влиянию на эндогенную антиокислительную систему и на кинетику Fe2+- индуцированной хемилюминссценции суспензии липосом.

Концентрацию малонового диальдегида определяли спектрофотомет-рически при Х= 532 и 580 нм по степени образования окрашенного комплекса с 2-тиобарбитуровой кислотой в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981) и в гомогенате почек (Стальная, Гаришвили, 1977).

Активность катал азы крови определяли спектрофотометрическим методом (Королюк и соавт., 1988).

Определение SH-ipynn в сыворотке крови почек проводили колори-мефическим методом (Фаломеев, 1981).

Определение уровня Fe" - индуцированной хемилюминесценции суспензии многослойных липосом проводили на приборе «Хемилюминометр PXL-0I» (Россия) по общепринятому методу (Клебанов и соавт., 1988 CepiccB и соавт., 1991). Суспензию липосом получали из свежего куриного яичного желтка путем суспеидирования с фосфатным буфером 20 mM (pH 7,4) в соотношении 1:10 на мапнпной мешалке в течение 15 минут (Лопу

хин и со авт., 1983).

Для определения антибактериальной активности «фитолисана» использовали метод двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде (Першин, 1971). Тест-объектами служили штаммы условно-паюгенных бактерий: Staphylococcus aureus 209, Proleus vulgaris H-50, Escherichia coli - 408, Pseudomonas aeroginosa ATCC - 10145, Streptococcus faecalis.

Полученные ре!ультаты обрабатывались общепринятыми статистическими методами с определением средней величины (М) и средней ошибки средней арифметической величины (ш). Достоверность результатов исследований (Р) оценивалась с помощью непараметрического критерия по Манну-Уитни (Лакин, 1990). Различие средних величин считали достоверным при вероятности 95 % (Р<0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Уролитиаз представляет собой комплекс клинических и метаболических нарушений, обусловленных нарушением функции почек. Для подобных состояний характерны: накопление в организме продуктов азотистого обмена (гиперазотемия), олигурия, нарушение водно-электролитного и кислотно-щелочного равновесия. В связи с этим, было изучено влияние «фитолисана» на основные показатели функционального состояния почек.

При изучении влияния «фитолисана» на функциональное состояние почек белых крыс установлено, что его однократное введение в объеме 10 мл/кг (экспериментально-терапевтическая доза) оказывает выраженное мочегонное действие, повышая водовыделительную функцию почек на 91 % по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом диуретическое действие значительно превышало таковое у препарата сравнения - урологического сбора. Кроме того, однократное введение белым крысам комплексного растительного средства оказывало существенное влияние на экскрецию ионов натрия, увеличивая их концентрацию в моче в 2 раза по сравнению с данными у животных контрольной группы. При этом на концентрацию ионов калия в моче испытуемое средство влияния практически не оказывало. Фармакологическая активность препарата сравнения уступала действию такового у комплексного растительного средства.

Введение испытуемого средства белым крысам в объеме 10 мл/кг сопровождается повышением концентрации мочевины в моче у животных опытной группы в среднем на 32 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Вместе с этим, у лабораторных животных, получавших испытуемое фитосредство, концентрация креатинина 1 сыворотке крови снижалась на 17 %, а содержание креатинина в моче повышалось на 25 % по сравнению с показателями в контроле. Полученные результаты свидетельствуют о повышении' депурационной функции почек крыс под влиянием комплексного растительного средства. При этом депурационная активность «фитолисана» превосходила таковую у препарата сравнения.

Показано, что однократное введение «фитолисанаЛ сопровождается повышением ионов натрия и мочевины в моче соответственно на 86 % и 30 %, чго свидетельствовало о повышении концентрационной функции почек по сравнению с данными у животных контрольной группы При этом влия-шме испытуемого средства превосходило таковое у препарата сравнения.

Кроме того, введение «фитолисана» способствовало повышению скорости клубочковой фильтрации на 88 % по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Установлено, что при однократном введении комплексного растительного средства отмечалась тенденция к увеличению интенсивности канальцевой реабсорбции - на 21 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы, а также на 77 % увеличивался минутный диурез.

Оценка антиэкссудативной активности «фитолисана» показала, что данное средство обладает выраженным антиэкссудативным действием, угнетая развитие формалинового отека на 42,9 % по сравнению с показателями у животных контрольной группы. При этом по своему действию он значительно превосходил препарат сравнения.

При изучении процессов альтерации показано, что «фитолисан» оказывает противовоспалительное действие, о чем свидетельствовало уменьшение степени альтерации тканей и повышение интенсивности регенераторных процессов в очаге воспаления. На 7 сутки исследования выраженный антиальтеративный эффект обнаруживался у крыс, получавших «фитолисан»: площадь деструкции уменьшалась на 42 % по сравнению с данными у животных контрольной группы. Исследования, проведенные через 14 и 21 сутки эксперимента, показали, что на фоне курсового введения испытуемого средства отмечалось стимулирование процессов регенерации, что сопровождалось ускорением заживления кожно-мышечных дефектов. Так, у животных, получавших «фитолисан» в указанном объеме, на 14 сутки исследования площадь альтерированной ткани была на 36 % меньше по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы: на 21 сутки исследования поврежденные участки кожи у животных опытной группы практически полностью восстанавливались.

Отвар комплексного растительного средства оказывал существенное противовоспалительное действие, угнетая процессы пролиферации на модели «ватной гранулемы» на 37,6 % по сравнению с данными животных контрольной группы. При этом препарат сравнения оказывал менее выраженное влияние на процессы образования грануляционно-фиброшой ткани. Разность масс гранулем была обусловлена, по-видимому, антиэкссудативным действием испытуемою средства.

Как известно, критерием развития и выраженности перитонита являются объем экссудата в брюшной полости и процент дегранулированных тучных клеток в брыжейке. Установлено, что на фоне превентивного введения испытуемого фитосбора объем ннутрибрюшной жидкости уменьшался на 28 % по сравнению с контролем Кроме этого, внутрибрюшинная жидкость представлялась профачной и имела лишь опалесцирующий от-

телок, что свидетельствовало о значительном снижении в ней числа эритроцитов.

Наряду с этим установлено, что в брыжейке крыс, получавших «фитолисан», количество дегранулированпых тучных клеток снижалось на 19,5 % по сравнению с данными животных контрольной группы.

В результате(проведенных исследований установлено, что отвар изучаемою ф^тосредетва облагает мембраностабиЯйзирующим действием, о чем свидетельствовало'уменьшение степени гемолиза эритроцитов, вызванного реактивом Фестона, на 70 % по сравнению с данными в контроле. Выраженность осмотического гемолиза снижалась при введении «фитолисана» на 62 % по сравнению с аналогичными данными контрольной группы. При этом «Урологический сбор» не оказывал существенног о влияния на осмотический гемолиз.

Для оценки влияния «фитолисана» на кинетику Fe2"1-индуцированной хемилюминесценции (XJI) определяли амплитуду «быстрой вспышки» (I б.в.), интенсивность «медленной вспышки» (I м.в.) и скорость XJ1 на начальной стадии «медленной вспышки» (5). Было установлено, что введение «фитолисана» снижает показатели I б.в. и I м.в., характеризующие амплитуду «быстрой вспышки» и «медленной вспышки», в среднем на 36 и 41 % соответственно по сравнению с данными контрольных проб, не содержащими испытуемого средства. Наряду с этим, введение исследуемого фитосбора в инкубационную среду сопровождалось снижением скорости XJ1 на 35 % по сравнению с контролем.

Изучение спазмолитической активности показало, что «фитолисан» снижает величину сокращения отрезка тонкой кишки в ответ на введение спастических веществ карбахолина и серотонина на 30 и 36 % соответственно по сравнению с этими же показателями до введения спастических средств.

При исследовании антибактериальной активности установлено, что «фитолисан» обладает бактерицидным действием в концентрации 10 мг/мл по отношению к кишечной палочке, в концентрации 12 мг/мл - к золотистому стафилококку, а к вульгарному протею - в концентрации 15 мг/мл. Следует подчеркнуть, что указанные свойства изучаемого многокомпонентного растительного средства особенно важны, так как именно эти культуры чаще всего выделяются из мочи больных мочекаменной болезнью (Тиктинский, 1990; Harrison, 1977; Norrby, 1990; Jepson, 1998; Nicofle, 1999; Rosenberg, i999). Концентрации, при которых проявлялось бактериостатическое действие «фитолисана» к кишечной палочке и стрептококку, составляли 3 и 8 мг/мл соответственно, а по отношению к протею - 0,6 мг/мл, что свидетельствует об антибактериальной активности испытуемого фитосредства.

Таким образом, «фитолисан» обладает выраженной диуретической, спазмолитической, антибактериальной, ант иоксидантной, мембраноста-билизнрующей и противовоспалительной активностью. Наряду с этим, следует ошегить, что указанное фитосредство в сметной степени повы-

шает скорость клубочковой фильтрации и интенсивность канальцевой ре-абсорбции, увеличивает натрийурез, не повышая выведения с мочой ионов калия Вместе с тем, «фитолисан» снижает концентрацию азотистых метаболитов в сыворотке крови животных и увеличивает их выведение с мочой.

Фармакотерапевшческая эффективность «фитолисана» при экспериментальном уролитиазе, индуцированном введением витамина Д2

При исследовании влияния «фитолисана» на процессы камнеобразо-вания в мочевыводящих путях при экспериментальном уролитиазе, индуцированном введением витамина Д2 установлено, что превентивное введение отвара испытуемого фитосредства в указанном объеме препятствует образованию камней в мочевыводящей системе: конкременты выявлялись лишь у 23,3 % крыс опытной группы. При этом курсовое введение препарата сравнения оказывало менее выраженное влияние на камнеобразование в мочевой системе, снижая частоту возникновения уролитиаза до 46,7 %.

Показано, что масса конкрементов, обнаруженных у животных опытной группы была более чем в 2 раза меньше аналогичного показателя у крыс контрольной группы, а средние размеры конкрементов у животных, получавших испытуемое средство меньше, чем в контроле. При этом эффективность «фитолисана» превосходила таковую у препарата сравнения Следует отметить, что введение сублетальных доз витамина Д2 вызывало образование конкрементов у животных контрольной группы во всех отделах мочевыделительной системы. При этом преимущественным местом локализации камней являлся мочевой пузырь.

Наряду с этим, введение сублетальных доз витамина Д2 сопровождалось нарушением функционального состояния почек: снижением скорости диуреза, клубочковой фильтрации, протеинурией, защелачиванием мочи (табл. 1). Установлено, что превентивно-терапевтическое введение испытуемого средства в объеме 10 мл/кг к 10 суткам исследования препятствовало развитию нарушений функционального состояния почек у животных опытной группы, повышая скорость диуреза на 55 %, а концентрацию ионов натрия в моче - на 83 % по сравнению с данными в контрольной группе. При этом концентрация ионов калия практически не отличалась от показателей у интактных животных. Показано, что СКФ у крыс опытной группы превышает аналогичный показатель у животных контрольной группы в 2 раза, а рН мочи снижалась на 46 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы. Кроме того, введение «фитолисана» препятствовало возникновению протеинурии у животных опытной группы: количество белка в моче не отличалось от аналогичного показателя у интактных крыс.

На 20 сутки скорость диуреза у крыс контрольной группы была в 2 раза ниже, чем у интактных крыс, а у животных, получавших отвар «фитолисана», повышалась на 52 % по сравнению с данными в контрольной группе Концентрация ионов натрия у крыс опытной группы превышала аналогичный показатель в контроле в 1,5 раза, при этом СКФ у крыс опытной группы увеличивалась почти в 2 раза. К этому сроку

Таблица 1

Влияние «фиголисана» на показатели функциональной активности почек при экспериментальном уролитиазе, индуцированным введением

Пока М1вли Группы животных

Интактная Контрольная Фитолисан Урологич сбор

10 сутки

Диурез, мл/100 г/ч 0,46*0,02 0,27*0,03 0,42*0,04* 0,39*0,04*

Ыа+ п моче, мг/мл 1,5*0,04 0,6±0,01 1,1*0,12* 1,0*0,08*

К' в моче мг/мл 2,1*0,15 1,7+0,09 2,5*0,12* 2,1*0,18

СКФ, мкл/мин/ЮОг 96,2*4,65 43,6* 1,26 86,4*3,54* 76,0*2,93*

Белок в моче, г/л 0.3±0,02 0,7*0,05 0,4*0,02* 0,5*0,04*

рН мочи 5,7±0,25 , 9,1-Ц),67 4,9*0,28 * 6,3*0,64*

20 сутки

Диурез, мл/100 г/ч 0,46*0,03 0,25*0,04 0,38*0,05* 0,32*0,06

Ыа+ в моче, мг/мл 1,5±0,04 0,8*0,02 1,2*0,08* 2,8*0,11*

К+ в моче, мг/мл 2,1*0,15 1,8*0,09 2,7*0,16* 2,3*0,19

СКФ, мкл/мин/ЮОг 96,2±4,65 39,4*0,92 77,2*4,68* 66,5*4,23

Белок в моче, |/л 0,3*0,02 0,7*0,03 0,4*0,03* 0,5*0,03

рН мочи 5,7*0,25 8,8*0,56 5,0*0,46* 6,3*0,49*

Здесь и далее: * - значения достоверно отличающиеся от данных в контрольной группе животных при Р < 0,05.

исследования также отмечалось снижение концентрации ионов водорода в моче животных опытной группы на 57 %.

Установлено, что введение витамина Д2 сопровождается нарушениями фосфорно-кальциевого обмена, на что указывало выраженное повышение концентрации фосфора как в сыворотке крови, гак и в моче животных контрольной группы во все сроки исследования. Курсовое введение комплексного растительного средства способствовало снижению уровня фосфора в кровй* и в моче на 10 сутки эксперимента в 3 и 2,4 раза соответственно по ■гравн'ению с аналогичными показателями крыс контрольной группы. 'На 20'сутки отмечалось дальнейшее увеличение концентрации фосфора в моче у крыс контрольной группы; причем в моче этот показатель превышал почти в 8 раз данные у интактных животных. При этом у крыс опытной группы концентрация фосфора была достоверно ниже, чем у живоI ных контрольной группы. На 30 сутки эксперимента уровень фосфора в крови и в моче крыс контрольной группы превышал в 10 и 9 раз соответственно показатели у животных интактной фуппы, тогда как у опытных крыс аналогичные данные снижались в 4 и 2 раза по сравнению с показателями у животных контрольной группы При этом эффективность препарата сравнения значительно уступала дейаиию комплексного раститель-

ного средства.

В связи с вышей воженным, оценивалось влияние «фитолисана» на интенсивность процесса перекисного окисления липидов (ПОЛ) и состояние антиокислшельной активности организма при уролитиазе, индуцированном витамином Д?.

Таблица 2

Влияние «фитолисана» на содержание МДА в сыворотке крови и гомогенате почек, концентрацию 5Н-групп в сыворотке крови и активность каталазы крови при экспериментальном уролитиазе, индуцирован-

ном введением витамина Д2

Показатели Группы Животных

Интактиая Контрольная Фшолисан Урологич сбор

10 сутки

МДЛ в сыворотке крови, мкмоль/мин 0,3510.02 0,68±0,04 0,43±0,02* 0,53±0,04*

МДА в почках, пмоль/г ткани 2,9710 28 4,92±0,17 3.71±0,11 * 4.0510,12*

Каталаза, мкат/л 57,4±2.51 41,513,21 51,3+2,39* 45,214,05

5Н-группы, мкмоль/л 0,4910,025 0,24±0,01 0,3410,02* 0,2910,02

I 20 сутки

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мин 0,34*0,02 0,6310,04 0 37Ю,02* 0,4010,03*

МДА в почках, нмоль/г ткани 3,1410,28 4,17Ю,25 3.55±0,18* 4,0910,26

Кагал ата, мкач/л 54,0+2,4 44,213,9 52.1±2 15* 48,7±3.15

БН-группы, мкмоль/л 0.45±0,02 0,21 ±0,02 0,3910,03* 0.30Ю.02*

Данные, приведенные в таблице 2, свидетельствуют, что введение витамина Д2 сопровождается индукцией процесса свободнорадикального окисления липидов и снижением антиоксидантного статуса организма, о чем свидетельствовало повышение концентрации МДЛ в сыворотке крови и гомогенате почек, снижение концентрации 5Н-групп и снижение активности каталазы в крови у крыс контрольной группы. Так, на 10 сутки исследования уровень МДА в сыворотке и в гомогенате почек у животных контрольной группы превышал в 1,9 и 1,7 раза соответственно по сравнению с аналогичными данными у интактных крыс. Концентрация БН-групп в контроле снижалась более чем в 2 раза, а активность каталазы - на 28 %. На фоне введения «фитолисана» концентрация малонового диальдегида (МДА) у животных опытной группы снижалась, а концентрация БН-групп повышалась по сравнению с показателями животных контрольной группы

На 20 сутки от начала эксперимента уровень МДА в сыворотке крови и в гомогенате почек животных контрольной группы незначительно снижался. в то время как. у крыс опытмой группы эти показа гели приближались к значениям, регистрируемых у животных интактной группы.

Таким образом, ре ¡ультаты проведенною исследования свидетельст-

вуют о выраженной фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной внутрижелудочным введением витамина Д2, о чем свидетельствует снижение интенсивности процессов камнеобразования, повышение морфофункциональной состоятельности почек, нормализация кальций-фосфорного обмена, снижение интенсивности процессов свободно-радикального окисления и повышение мощности эндогенной антиокис-ли1слыюй системы организма животных.

Фармакотерапевтичсская эффективность «фитолисана» при экспериментальном уролитиазе, индуцированном внутрилоханочным введением 3 % раствора перекиси водорода

На 10, 20 и 30 сутки после введения перекиси водорода определяли наличие конкрементов, их локализацию в мочевыводящей системе, количество, массу, проводили макроскопическое описание камней и микроскопическое исследование мочевого осадка, а также показатели, характеризующие функциональное состояние почек, включая оценку интенсивности процессов перекисного окисления липидов.

Внутрилохэночное 1 введение перекиси водорода индуцирует процесс камнеобразования в мрчевыводящей системе, о чем свидетельствует повышение на 88 % частоты возникновения конкрементов в мочевыводящем тракте у крыс контрольной группы. Превентивно-терапевтическое введение отвара «фитолисана» в указанном объеме снижает интенсивность камнеобразования у животных. Так, конкременты мочевыводящего тракта выявлялись лишь у 35,7 % крыс опытной группы. При этом курсовое введение препарата сравнения оказывало менее выраженное влияние на кам-необразование в мочевой системе, снижая частоту возникновения уроли-тиаза до 67.8 %.

У крыс контрольной группы мочевые конкременты обнаруживались во всех отделах мочевыделительной системы, а у животных опытной группы - только в мочевом пузыре.

Установлено, что у животных контрольной группы количество обнаруженных камней, а также их общая масса значительно превышали анало-1 ичный показатель у животных опытной группы У белых крыс, получавших отвар испытуемого средства, количество конкрементов снижалось в 2 раза по сравнению с данными у крыс контрольной группы, а общая масса уролитов уменьшалась в 2,3 раза. При этом эффективность комплексного раст ительного средст ва превосходила таковую у препарата сравнения

При макроскопическом осмотре выявленные конкременты преимущественно имели округлую форму, белесоватый цвет, полуаморфную консистенцию. Часть камней имели желтоватый цвет и плотную консистенци-

ию Известно, что первый тип конкрементов можно отнести к фосфатам, а второй - к уратам (Тиктинский и соавт , 1980)

Введение 3 % раствора перекиси водорода сопровождалось развитием воспалительной реакции в почкач"животных контрольной группы, о чем свидетельствовало пбвышение кй!пичества лейкоцитов, эпителиальных клеток, а также появ^енй'ё кристаллов солей в осадке мочи. Превентивное введение «фитбЛисана» предупреждало развитие воспалительного процесса в почках, снижая степень лейкоцит- и эпителийурии у животных опытной группы во все сроки исследования. Также под влиянием испытуемого средства наблюдалось значительное снижение количества фосфатов и ура-тов в моче животных, получавших «фитолисан». ,

В таблице 3 приведены результаты исследования влияния комплексного растительногр средства на показатели функционального состояния почек животные при экспериментальном уролитиазе, индуцированным введением 3 % раствора перекиси водорода.

Таблица 3

Влияние «фитолисана» на показатели функционального состояние почек белых крыс при экспериментальном уролитиазе, индуцированном

введением 3 % раствора перекиси водорода

Показатели I руппы животных

Интакшая Контрольная Фитолисан Урологиче ский сбор

10 сутки

Диурез, мл/100 г/ч 0,44±0,02 0.21*0,04 0,40*0.04* 0.35*0,09*

Ыа' в моче, мг/мл 1,7±0 05 0.3*0.01 1,5*0.12* 1.1±0,08*

К' в моче, м|/мл 2.3±0 14 1.2*0,08 2.510,12* 2.1*0,18*

СКФ. мкл/мин/100 г 91,7*5.43 27 8±1,25 56.4*2.15* 46 2±3.17*

Ьелок в моче г/п 0,4*0,02 0,8*0,05 0 5±0,02* 0,б±0 04

рН мочи 5,9±0.25 9 1±0 53 6.7±0,39* 8.710 62

20 сутки

Диурс!, мл/100 г 0,44:10 02 0 30*0,04 0,41*0 03* 0.38*0,02

Ыа+ в моче, мг/мл 1,7*0 05 0 5*0,03 1 7*0 09* 0 9*0,06*

К+ в моче, мг/мл 2,3*0.14 1.5*0.09 2,5*0.19* 1,8*0.08

СКФ, мкл/мин/100 1 91,7*5 43 34 5±2 69 78.6*6.24* 60,4*5.26*

Белок в моче, г/л 0 4±0 02 0 7*0.05 0.4*0,03* 0 5*0 05

рН мочи 5 9*0 25 7 9X0.64 5.2*0 27* 6 3*0 53

Как следует из данных, приведенных в таблице 3, внутрилоданочир?. введение 3 % раствора перекиси водорода сопррво^дается нарушенном функционального состояния почек у подопытных животных: снижением скорости диуреза в 2 раза, скорости клубочковой фильтрации - более чем в

3 раза, алкализацией мочи, снижением салуре*а Установлено, что на 10 сутки курсовое введение отвара «фитолисаиа» оказывало выраженйое диуретическое и салуретическое действие, о чем свидетельствовало повышение скорости диуреза и клубочковой фильтрации в среднем в 2 раза по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. При этом установлено, что концентрация ионов натрия и калия в моче животных, получавших испытуемое средство, было сопоставимо с данными у крыс интактной группы. Кроме того, отмечалось снижение концентрации ионов водорода в моче в среднем на 26 % по сравнению с данными контрольной группы. Установлено, что к указанному сроку у животных контрольной группы повышалось содержание белка в моче более чем в 2 раза по сравнению с аналогичным показателем у интактных крыс, тогда как, ведение испытуемого средства снижало выраженность протеинурии на 37,5%.

На 20 сутки диурез у крыс контрольной группы оставался сниженным, а у животных, получавших отвар «фитолисана», скорость диуреза приближалась к физиологическим показателям СКФ у крыс опытной группы превышала аналогичный показатель животных контрольной группы более чем в 2 раза. К этому сроку исследования отмечалась нормализация концентрации ионов водорода в моче животных опытной группы.

При оценке сдстряния .системы антиоксидантной защиты организма животных было установлено, что введение 3 % раствора перекиси водорода сопровождалось индукцией процессов свободнорадикального окисления липидов и снижением антиоксидантного статуса организма, о чем свидетельствовало повышение концентрации МДА в сыворотке крови и в гомогенате почек, а тг^кже снижение активности каталазы крови у крыс контрольной группы (табл. 4).

На 10 сутки исследования уровень МДА в сыворотке крови и в гомогенате почек у животных контрольной группы превышал соответствующие показатели интактной группы на 140 % и на 87 %, а активность каталазы крови снижалась на 28 %. При курсовом введении «фитолисана» концентрация малонового диальдегида у животных опытной группы снижалась на 36,8 % в сыворотке крови и на 35,9 % - в тканях почек по сравнению с показателями животных контрольной группы.

На 20 сутки от начала эксперимента уровень МДА в сыворотке крови и в гомогенате почек животных контрольной группы лишь незначительно снижался, в то время как, у крыс опытной группы эти показатели приближались к значениям у крыс ин гак той фуппы.

Таблица 4

Влияние «фитолисана» на содержание МДД в сыворотке крови и

гомогенате почек и активность каталазы крови при экспериментальном уролитиазе, индуцированном введением 3 % раствора перекиси водорода

Пока «а гели I рупиы животных

Ишактнаи Кошрольная Фиго))исан Уроло-1ич сбор

10 су 1ки

МДЛ в сыво- 0 36±0.025 0,87±0,058 0,55±0 036* 0 75±0 024

ршке крови, мкмоль/мим

МДЛ в почка\. 3,14±0 284 5,84±0,092 3,74+0,028* 4 26±0.124

нмоль/г ткани *

Каталаза, мкаг/л 54,0+2.45 38.7±2.64 49,3±3,15* 45.3x2,94

20 сутки

МДЛ в сыво- 0,36±0,025 0,76±0,026 0,44±0,031 * 0,68±0,052

ротке крови, мкмоль/мим

МДА в почках, 3,14±0.284 4,62±0,024 3,33±0,018* 3 52±0,020

нмоль/г ткани *

Каталаза, мкат/л 54,0±2,45 42,2±3,08 49,3±2.67 45.9±1 78

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о выраженной фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной внутрилоханочным введением 3 % раствора перекиси водорода, о чем свидетельствует снижение интенсивности процессов кам-необразования, повышение функциональной состоятельности почек, снижение интенсивности процессов свободнорадикального окисления и повышение мощности эндогенной антиокислительной системы организма животных.

Фармакотерапевтическая эффективность «фитолисана» при экспериментальном уролитиазе, индуцированном введением этиленг-

ликоля

Внутрижелудочное введение этиленгликоля индуцирует процессы камнеобразования в мочевыводящей системе, о чем свидетельствует 100 % частота возникновения конкрементов в мочевыводящем тракте у крыс контрольной группы Превентивно-терапевтическое введение отвара «фитолисана» в указанном объеме снижает интенсивность камнеобразования у животных Так, уролиты выявлялись лишь у 28,6 % крыс опытной группы. При этом курсовое введение препарата сравнения оказывало менее выраженное влияние на камнеобразование в мочевой системе, снижая частоту возникновения уролитиаза до 60,7 %.

Установлено, что у животных контрольной группы количество обнаруженных камней, а также их общая масса значительно превышали анашиичные

покаотсли у животных опытной групп. У крыс, получавших отвар испытуемою средс1ва, выявлялось в среднем в 4,2 pasa меньше конкрементов, чем у крыс контрольной группы

У крыс кон i рольной группы мочевые конкременты обнаруживались во всех отделах мочевыделительной системы, а у животных опытной группы - только в мочевом пузыре.

При макроскопическом осмотре выявленные конкременты были преимущественно правильной геометрической формы, практически не окрашенными и плотной консистенции Обнаруженный тип конкрементов можно отнести к оксалатам кальция (Тиктинский и соавт., 1980).

Как следует из данных, приведенных в таблице 5, внутрижелудочное введение этиленгликоля сопровождается нарушением функционального состояния почек.

Таблица 5

Влияние «фиголисана» на показатели функционального состояние почек белых крыс при экспериментальном уролитиазе, индуцированном вве-

дением этиленгликоля

Показатели Группы животных

Иитактиая Контрольная Фитолисан Уротогиче скин сбор

10 сутки

Диурез, мл/100 г/ч 0,48*0,03 0,33*0,03 0,44*0,03* 0,41*0,05*

1Ма' в моче. \п/мл 1,7*0,02 1,2*0,01 1,4*0,12 1,3*0,08

К' в моче, м|/мл 2,4±0.19 1,8*0,09 2,2*0,15 2,1*0,14

СКФ, мкл/мин/100 1 99,5*6.12 67,8*4.32 91,1*6,34* 76 2*3 17

Белок в моче, г/л 0 3*0 02 0,5*0.05 0,4*0,02 0,5*0 04

пН мочи 5.6*0 31 8,2*0,64 6,0*0,39* 7,5*0,62

20 сутки

Дн}рез, мл/100 г/ч 0 48*0,03 0.30*0.02 0,41*0.03* 0,34±0,03

NaH в моче, мг/мл 1,7*0 02 0.9*0,03 1.4*0,09* 1 0*0 03

К' п МОЧС М|/МЛ 2,4i.0.!9 1,610 09 2,5*0,19* 1.7*0 11

СКФ мк'|/мш|/100 г 99 5+6 12 53 1*3,54 86.3*5 12* 69 4*4 67

Бепокв моче i/л 0 3*0,02 0 5*0,03 0,4*0,03* 0 5_i_0 05

pl 1 мочи 5 6*0.31 8.9*0 54 5.2*0.27* 6 4±0 4Г

На 10 сутки исследования курсовое введение отвара «фитолисана» оказывало выраженное диуретическое и салуретическое действие, о чем свидетельствовало повышение объема выделенной мочи в 1,3 pasa по сравнению с аналогичным показателем у крыс контрольной группы Также установлено, чго концентрация ионов калия и натрия в моче животных, почучавшнч нспыгусмое средство, не отличалось от данных у крыс нн-гакгной группы Пока юно, что СКФ у животных опытной группы на 34 % превышал аналогичный показатель у крыс контрольной группы Кроме

того, отмечалось снижение концентрации ионов водорода в моче в среднем на 27 % по сравнению с данными контрольной группы

На 20 сутки диурез у животных, получавших отвар «фитолисана», повышался в 1,4 раза по сравнению с данными в контрольной группе Концентрация ионов натрия в моче опытных крыс приближалась к показателям у интактных животных. СКФ у крыс опытной группы превышала аналогичный показатель животных контрольной группы на 63 % и незначительно отличалась от данных у интактных животных. К этому сроку исследования отмечалась нормализация концентрации ионов водорода в моче у животных опытной группы: рН мочи снижалась на 42 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы.

В таблице 6 представлены результаты изучения влияния комплексного растительного средства на интенсивность процесса перекисного окисления липидов (ПОЛ) и показатели антиокислительной системы организма. Введение этиленгликоля сопровождается индукцией процессов свободно-радикального окисления липидов и снижением антиоксидантного статуса организма, о чем свидетельствовало повышение концентрации МДА в сыворотке крови и в гомогенате почек, а также уменьшение активности каталазы в крови у крыс контрольной группы.

Таблица 6

Влияние «фитолисана» на содержание МДА в сыворотке крови и гомогенате почек и активность каталазы крови при экспериментальном

уролитиазе, индуцированном введением этиленгликоля

Показатели I руппы животиых

Интактпая Контрольная Фиюлисан Уролог сбор

10 сут кн

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мин 0 30+0 02 0.54±0,04 0,37±0.01* 0.43±0 04*

МДА в почках, имоль/г ткани 3,26±0 24 4,85±0.33 3 75±0,28* 4,36±0,14

Кашша, мка|/л 45,01±3 15 29.70±3 64 39,4±2,25* 35 3±2,94*

20 су)ни

МДЛ в сыворотке крови мкмоль/мин 0,33±0.04 0.67±0,06 0.41 ±0.03* 0.61 ±0.04

МДА в почках. нмольЛ 1кани 3.34±0.04 у71±0 44 3.45±0.18* 3.92±0.20*

Каталаза мка|/л 64,00±2,21 43.0±2 18 59.3±1.67* 46,9±1.70

На 10 сутки исследования уровень МДА в сыворотке и в гомогенате ночек у животных контрольной группы превышал аналогичные данные у интактных крыс соответственно на 44,5 и 33 %, а активность каталазы снижалась на 44 %. Концентрация малонового диальдегида у животных опытной группы, которые получали испьпуемое фитосредство, снижалась на 46 % в сыворотке кровн и на 23 % в тканях почек по сравнению с пока-

чателями у животных кошрольной группы.

На 20 сутки от начала эксперимента уровень МДА в сыворотке крови и в юмогенате почек живошых опытной группы снижался на 39 и на 41 % по сравнению с данными у крыс контрольной группы, исследуемые пока-штели у которых превышали аналогичные значения у интактных животных в 2 и 1,7 раза соответственно. Также под влиянием испытуемого средства происходило восстановление активности катала ш до уровня показателей у интактных животных.

Таким образом, курсовое введение «фитолисана» белым крысам при оксалатно-кальциевом уролитиазе способствует снижению образования конкрементов в мочевых путях, сохранению функциональной активности почек, ингибированию процессов перекисного окисления липидов.

Полученные в работе данные свидетельствуют, что введение подопытным животным указанных индукторов уролитиаза способствует образованию конкрементов в мочевыделительной системе, со значительными нарушениями функционального состояния почек, минерального обмена, активацией перекисного окисления липидов и угнетением активности эндогенной антиоксидантной системы.

Установлено, что курсовое введение «фитолисана» белым крысам оказывает выраженное фармакотерапевтическое влияние при экспериментальном уролитиазе, способствуя снижению процессов камнеобразования в мочевых путях, сохранению функционального состояния почек и ингибированию перекисного окисления липидов. Из приведенных данных следует, что наиболее выраженный фармакотерапевтический эффект испытуемый фитосбор оказывает при кальций-оксалатном уролитиазе. Это можно объяснить наибольшим соответствием видов его фармакологической активности основным звеньям патогенеза вызываемых нарушений.

По данным литературы, главным патогенетическим звеном в развитии мочекаменной болезни являются метаболические нарушения (Cicerello et al.. 1997, Cuhan et al., 1997). Установлено, что при экспериментальном уролитиазе, вызванном введением сублетальных доз витамина происходит нарушение фосфорно-кальциевого обмена, характеризующегося увеличением концентрации фосфора в моче и сыворотке крови животных, появлением фосфатов в мочевыделительной системе белых крыс. Снижение концентрации фосфора в сыворотке крови и моче при курсовом рведе-нии «фитолисана» свидетельствует о его регулирующем влиянии на процессы минерального обмена у подопытных животных Возможно, что ли-толитическая активность испытуемого средства обусловлена содержанием н нем органических кисло1, антрахинопов, которые, по данным литературы. обладают указанным видом активное]и (Гомула и соавт., 1988).

При уролитиазе, индуцированном введением эгиленгликоля. важнейшим патогенетическим звеном является образование оксалатов пугем его гидролиза и токсическим влиянием на эпителий канальцев (АИпаш, 2003) Показано, ч1ч5 курсовое введение «фитолисана» способствует сохранению функциональной активности клеток канальцев, препятствуя образованию уролитов в мочевых путях подопытных животных. Поскольку этиленгли-коль относится к группе спиртов, его метаболизм в организме возможен через алкогольдегидрогеназу 3 типа Ь альдегиды и кетоны (Середенин, 2004) Потенцирование фармакотераневтического эффекта «фитолисана» при уролитиазе, индуцированного этиленгликолем, возможно, опосредовано его влиянием на детоксицирующую функций) печени, так как в составе испытуемого фитосбора присутствуют горец птичий, пижма обыкновенная, которые оказывают гепаТопротективное действие (Лебедев, 2003), в том числе при алкогольном гепатите

Основным звеном паго(енеза мочекаменной болезни, вызванной перекисью водорода, является индукция свободно-радикального окисления Свободные радикалы, являясь поверхностно-активными веществами, способны формировать ядра мочевых конкрементов (Аскегтапп,' 1997)., Кроме того, активация окислительных процессов, в частности, перекисное окисление липидов (ПОЛ) мембран' клеток, способствует ухудшению функционального состояния поче^ и образованию уролитов в мочевом тракте у подопытных животных, что был'о доказано в работе. Полученные данные об антиоксидантных и нефропрО+екторных свойствах «фитолисана» позволяют объяснить его фармакотерапсвтическую эффективность при данном виде патологии,, предупреждая 'развитие уролитиаза у подопытных животных при окислительном стрессе, индуцированном непосредственно в почках. Кроме того, антиоксидантные свойства испытуемого средства, скорее всего, положительно влияют на динамику развития уролитиаза при его индукции витамином' Д2 и этиленгликолем, поскольку активация ПОЛ установлена в том и в другом случае.

Также, полученные в работе данные свидетельствуют о развитии воспалительного процесса в мочевыделительных путях животных при всех видах индуцированного уролитиаза. что подтверждается данными ряда авторов (Голованов, Дрожжева, 1995; Голод и соавт., 1995). Можно полагать, что наличие у «фитолисана» выраженной противовоспалительной активности способствует снижению образования конкрементов при экспериментальном уролитиазе

Известно, что инфицирование мочевыводящих путей при уролитиазе является дополншельным фактором, способствующим образованию мочевых конкрементов (Тикгинский, 1990: Лопаткин, 1994). Антибактериаль-

ные свойства испытуемою сродства имеют определенное значение в реа-лииции е1Ъ фармакотерамевшческой эффективности при'мочекаменной болезни. ''

Наличие у испытуемою фитосбора диуреТи^ескбй, Сатуретической, спазмолитической активности обьясняет его литокинетМёСкое действие при экспериментальном уролитиазе у лабораторных животных. Предполагается, что определенная часть мочевых конкрементов выводится из организма, не достигнув размеров, при которых их выведение физиологическим путем невозможно Кроме того, горец птичий, содержащийся в фитосборе, образует гликопротеиновый слой на слизистой мочевых путей, облегчая скольжение конкрементов (Соколов, Замотаев, 1988).

Известно, что при мочекаменной болезни происходит нарушения коллоидно-осмотического состояния мочи (Тиктинский, 1990; Тареева, 2000). Возможно, что ведение «фитолисана» животным нормализует это состояние, поскольку горец птичий поддерживает коллоидность мочи за счет соединений кремниевой кислоты, препятствуя кристаллизации содержащихся в ней солей (Лебедев, 2003).

Большинство уролитов образуется при защелачивании мочи, что характерно для солей ортофосфорной кислоты (Тиктинский, 1990). Введение «фитолисана» животным повышает содержание ионов водорода в моче, что, возможно, обеспечивает сохранение солей в ионном состоянии, препятствуя их кристаллизации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные в работе данные свидетельствуют, что комплексное растительное средство «фитолисан» обладает широким спектром фармакологической активности, оказывая гипоазотемическое, диуретическое, противовоспалительное, спазмолитическое, антибактериальное, мембраноста-билизируюгцее и антиоксидантное действие, коюрое обеспечивает его выраженную фармакотерапевтическую эффективность при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной введением сублетальных доз витамина Д2, этиленгликоля и впутрилоханочным введением перекиси водорода. Показано, что превентивно-курсовое введение испытуемого средства в экспериментально-терапевтической дозе на фоне уролитиаза различной этиологии сопровождается снижением выраженности процесса камнеобразования и явлений воспалительного процесса в почечной паренхиме, а также препятствует развитию нефропатии и способствует нормализации функционального состояния почек лабораторных животных В частности. ввсдеНйе «фитолиейиа»' предупреждает (Образование мочевыч камней, а также оказывает литолПтческое и литокинетическое действие, спо-собавуя более быстрому выветенто образовавшихся камней Кроме того.

на фоне введения <<фиголисана» отмечается повышение диуретической и депурационной функции почек, скорости клубочковой фильтрации, уменьшение протеинурии, нормализация фосфорно-кальциевого обмена и кислотно-основного равновесия. , ,;

В реализации фармакотерапевтической эффективности «фитолисана» участвуют как базисные ренальные факторы, обеспечивающие его лефро-протекторное действие, так и экстраренапьные фармакологические эффекты: противовоспалительное, спазмолитическое, антибактериальное, мем-браностабилизирующее и антиоксиданцюе действие.

Установлено, что одним из важнетэдних аспектов в механизме нефро-протекторного действия «фитолисана» является наличие мембраностаби-лизирующей и антиоксидантной активности, обусловленной комплексом фенольных соединений, обладающих прямым радикалперехватывающим действием.

Полученные данные аргументируют возможность и целесообразность применения «фитолисана» в комплексной терапии и профилактике первичного уролитиаза и рецидивного камнеобразования.

ВЫВОДЫ

1. Фитолисан обладает выраженной диуретической, салуретической, гипоазо1емической, противовоспалительной, спазмолитической, антибактериальной, мембраностабилизирующей и антиоксидантной активностью.

2. Превентивно-терапевтическое введение «фитолисана» при экспериментальном уролитиазе оказывает выраженное фармакотерапевтическое действие, снижая интенсивность процесса камнеобразования в мочевыде-лительном тракте и явлений воспалительного процесса в почечной паренхиме, а также препятствует развитию нефропатии и способствует нормализации функционального состояния почек лабораторных животных на более ранних сроках патологического процесса.

3. Фитолисан оказывает наиболее выраженное фармакотерапевтическое действие при кальций-оксалатном уролитиазе.

4 Одним из базисных механизмов, обеспечивающих реализацию фармакотерапевтической эффективности «фитолисана», является ингибирова-ние процессов перекисного окисления липидов, лежащее в основе стабилизации клеточных мембран нефронов при повреждениях почек

Список опубликованных работ по теме диссертации:

I Ьутуханова И. С., Мондодоев А.Г, Шантанова Jl.l l. Диуретическое н спазмолитическое действие ««фитолисана» // Практическая фитотерапия -2004.-№3.-С. 31-34.

2 Эрдынесв Ю.Б.. Башкуева ЮЛ., Бутуханова И.Г Мондодоев А Г, Шанганова Л Н Влияние растительного экстракта на течение экспериментальной постишемической нефропатии // Материалы научно-практической конференции «Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники. - Чита, 2004. - С. 36-37.

3. Бу1ухапова И.С., Петров А.Г., Мондодоев А.Г., Занданов А.О. Противовоспалительное действие «фитолисана» // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Улан-Удэ, 2004 - С. 45-46.

4. Бутуханова И.С., Петров Е.В., Мондодоев А.Г., Занданов А.О. Влияние ««фитолисана»» на течение нефролитиаза индуцированного витамином Д2.- // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Улан-Удэ, 2004 -С. 52-53.

5. Башкуева Ю.Л., Эрдынеев Ю.Б., Бутуханова И.С., Бураева Л.Б. Влияние растительного средства на систему свертывания крови // Материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Улан-Удэ, 2004. - С. 52-53.

6. Занданов А.О., Батудаева Т.И., Маланов К.Ж., Бутуханова И.С. и др. Фитотерапия в клинической медицине. - Улан-Удэ, 2004. - 31 с.

Подписано в печать 21.01.2005 Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная. Объем 1,5 печ.л. Тираж 100. Заказ № 12.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

I I

I

i

I

I

1

I

I i

! / •Ц

1

Î

I

РНБ Русский фонд

2005-4

46281

ш

2 2 МАР 2005\

Актуальность темы. Актуальность поиска методов повышения эффективности лечения заболеваний почек определяется их широкой распространенностью и наблюдающейся тенденцией к росту в структуре общей заболеваемости. По статистическим данным более 8 % взрослого населения России страдает заболеваниями нефроурологического профиля. Одной из наиболее часто встречаемых патологий органов мочевыво-дящей системы является уролитиаз. В 2002 году заболеваемость мочекаменной болезнью в России составила 535,8 на 100 тыс. населения (Здоровье населения., 2002). Ежегодный прирост первичной заболеваемости уролитиазом составляет 0,1 % (Кузнецов, 2002).

Рост заболеваемости мочекаменной болезнью в России связан, в первую очередь, с ухудшением качества продуктов питания и питьевой воды, а также с увеличением употребления населением ксенобиотиков, способных спровоцировать развитие мочекаменной болезни, неблагоприятным воздействием изменившихся экологических, социальных и бытовых условий (Панин, 2000). Мочекаменная болезнь приводит к длительной потере трудоспособности и инвалидизации населения, ей характерны рецидивы, осложнения, что подчеркивает актуальность этой проблемы (Горбачев и соавт., 1994; Козлов, 1997; Лопаткин и соавт., 1998; Александров, 2002; Rose, 1982).

В настоящее время в комплексной терапии мочекаменной болезни с успехом применяются методы оперативного и консервативного лечения. Оперативное лечение предусматривает хирургическое удаление уро-литов и дистанционную литотрипсию, консервативное лечение -физиотерапию, санаторно-курортное и медикаментозное лечение, в том числе, фитотерапию. Тем не менее, медикаментозное лечение мочекаменной болезни сопряжено с определенными трудностями, связанными с полиэтиологичностыо и сложным патогенезом этого заболевания и, в подавляющем большинстве случаев, приводит к оперативным методам лечения. В то же время, частота рецидивного камнеобразования отмечается в 40-50 % случаев (Тиктинский, 1990; Лопаткин и соавт., 1998).

Таким образом, несмотря на значительные успехи в лечении мочекаменной болезни, проблема профилактики и терапии уролитиаза остается актуальной до настоящего времени, что обусловливает необходимость поиска новых высокоэффективных препаратов.

Одним из путей решения этой проблемы является использование многокомпонентных растительных препаратов, содержащих большое количество биологически активных веществ, относящихся к различным классам химических соединений и оказывающих комплексное фармако-терапевтическое воздействие на различные звенья патогенеза заболевания. Кроме этого, растительные препараты, как правило, нетоксичны, не оказывают отрицательного побочного действия при длительном применении, что особенно важно при такой хронической патологии, как мочекаменная болезнь.

В связи с этим перспективным направлением представляется изучение многокомпонентных растительных сборов из арсенала тибетской медицины, обладающих широким спектром фармакологической активности, предназначенных для лечения и профилактики мочекаменной болезни. Высокая фармакотерапевтическая эффективность этих средств обусловлена гармоничным сочетанием биологически активных веществ, содержащихся в растениях, обеспечивающих не только адекватное воздействие на основные звенья патологического процесса, но и способствующих фармакологической регуляции многих функциональных систем и повышающих адаптивные возможности организма в целом. В соответствии с этим, разработано новое комплексное растительное средство, предназначенное для терапии и профилактики мочекаменной болезни. В состав этого средства входят: листья ортосифона тычиночного, земляники лесной, брусники обыкновенной, трава горца птичьего, цветки пижмы обыкновенной, плоды шиповника, корень петрушки, в соотношениях по весовым частям: 18:18:18:18:6:18:4, условно названное «фитолисан».

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилось определение фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности фитолисана при экспериментальном уролитиазе.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

- определить специфическую фармакологическую активность фитолисана;

- оценить фармакотерапевтическую эффективность фитолисана при экспериментальном уролитиазе различной этиологии;

- выявить механизмы литолитического и литокинетического действия фитолисана.

Научная новизна. Работа представляет собой исследование специфической фармакологической активности и фармакотерапевтической эффективности многокомпонентного растительного средства — фитолисана. Установлено, что фитолисан обладает диуретической, гипоазотеми-ческой, противовоспалительной, антибактериальной, спазмолитической, мембраностабилизирующей и антиоксидантной активностью.

Установлена активация свободнорадикального окисления липи-дов в механизме повреждения почек и мочевыводящих путей и инициация процессов камнеобразования. На этом фоне, фитолисан обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной введением сублетальной дозы витамина Д2, этиленгликоля и перекиси водорода. Показано, что превентивно-курсовое введение испытуемого средства в экспериментально-терапевтической дозе на фоне уролитиаза сопровождается снижением выраженности процесса камнеобразования и явлений воспалительного процесса в паренхиме почек, а также препятствует развитию нефро-патии и способствует нормализации функционального состояния почек лабораторных животных. В частности, фитолисан предупреждает образование мочевых камней, а также оказывает литолитическое и литокине-тическое действие, способствуя более быстрому выведению образовавшихся камней. Кроме того, на фоне введения фитолисана отмечается повышение диуретической и депурационной функции почек, скорости клу-бочковой фильтрации, снижение протеинурии, нормализация фосфорно-кальциевого обмена и кислотно-основного равновесия.

Впервые установлен один из базисных механизмов нефропротекторного, литолитического и литокинетического действия фитолисана, заключающийся в ингибировании процесса перекисного окисления липидов, лежащего в основе стабилизации мембранных структур нефронов, что обеспечивает нормализацию функционального состояния почек при мочекаменной болезни и снижет интенсивность процесса камнеобразования.

Практическое значение. Полученные данные о наличии выраженной нефропротекторной, литокинетической и литолитической активности у фитолисана аргументируют целесообразность его применения в комплексной терапии и профилактике первичного уролитиаза и рецидивного камнеобразования. На основании этого разработаны методические рекомендации по использованию фитолисана в клинической практике для лечения и профилактики мочекаменной болезни. Материалы диссертации используются в учебном процессе на медицинском факультете Бурятского государственного университета.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на: ежегодных научных сессиях Института общей и экспериментальной биологиии СО РАН; (Улан-Удэ, 2002; 2003; 2004); научно-практической конференции «Биологически активные добавки и перспективы их применения в медицине» (Улан-Удэ, 2002);

Всероссийской научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004); региональной научно-практической конференции «Экологическая патология: вопросы биохимии, фармакологии, клиники» (Чита, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Основные положения выносимые на защиту: фитолисан обладает диуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, спазмолитической, антибактериальной, мембраностабилизирующей и антиоксидантной активностью; одним из патогенетических механизмов развития мочекаменной болезни является индукция процессов перекисного окисления липи-дов, ведущая к деструкции мембранных структур нефронов и инициации процесса камнеобразования; курсовое введение фитолисана оказывает выраженное фармакотерапевтическое действие при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной введением сублетальных доз витамина Дг, эти-ленгликоля а также введением 3 %-ного раствора перекиси водорода, препятствуя камнеобразованию в органах мочевыделительной системы и нормализуя функциональное состояние почек лабораторных животных; одним из молекулярно-клеточных механизмов нефропротекторного, литолитического и литокинетического действия фитолисана является его способность нормализовать минеральный обмен, а также ингибировать процессы свободнорадикального окисления липидов и повышать активность эндогенной антиокислительной системы организма.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, глав экспериментальных исследований, обсуждения, заключения, выводов и указателя литературы. Материал изложен на 135 страницах машинописного текста, включая 22 таблицы, 2 рисунка.

ВЫВОДЫ

1. Фитолисан обладает выраженной диуретической, салуретической, гипоазотемической, противовоспалительной, спазмолитической, антибактериальной, мембраностабилизирующей и антиоксидантной активностью.

2. Превентивно-терапевтическое введение фитолисана при экспериментальном уролитиазе различной этиологии оказывает выраженное фармакотерапевтическое действие, снижая интенсивность процесса камнеобразования в мочевыделительном тракте и явлений воспалительного процесса в почечной паренхиме, а также препятствует развитию нефропатии и способствует нормализации функционального состояния почек лабораторных животных на более ранних сроках патологического процесса.

3. Фитолисан оказывает наиболее выраженное фармакотерапевтическое действие при кальций-оксалатном уролитиазе.

4. Одним из базисных механизмов, обеспечивающих реализацию фармакотерапевтической эффективности фитолисана, является ингибирование процессов перекисного окисления липидов, лежащее в основе стабилизации клеточных мембран нефронов при повреждениях почек.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные в работе данные свидетельствуют, что комплексное растительное средство обладает широким спектром фармакологической активности, оказывая гипоазотемическое, диуретическое, противовоспалительное, спазмолитическое, антибактериальное, мембраностабилизирующее и антиоксидантное действие, которое обеспечивает его выраженную фармакотерапевтическую эффективность при экспериментальной мочекаменной болезни, индуцированной введением сублетальных доз витамина Д2, этиленгликоля и внутрилоханочным введением перекиси водорода. Показано, что превентивно-курсовое введение испытуемого средства в экспериментально-терапевтической дозе на фоне уролитиаза различной этиологии сопровождается снижением выраженности процесса камнеобразования и явлений воспалительного процесса в почечной паренхиме, а также препятствует развитию нефропатии и способствует нормализации функционального состояния почек лабораторных животных на более ранних сроках патологического процесса. В частности, введение фитолисана предупреждает образование мочевых камней, а также оказывает литолитическое и литокинетическое действие, способствуя более быстрому выведению образовавшихся камней. Кроме того, на фоне введения фитолисана отмечается повышение диуретической и депурационной функции почек, скорости клубочковой фильтрации, уменьшение протеинурии, нормализация фосфорно-кальциевого обмена и кислотно-основного равновесия.

В реализации фармакотерапевтической эффективности фитолисана участвуют как базисные ренальные факторы, обеспечивающие его нефропротекторное действие, так и экстраренальные фармакологические эффекты: противовоспалительное, регенераторное, спазмолитическое, антибактериальное, мембраностабилизирующее и антиоксидантное действие.

Установлено, что одним из важнейших аспектов механизма нефропротекторного действия фитолисана является наличие мембраностабилизирующей и антиоксидантной активности, обусловленной комплексом фенольных соединений, обладающих прямым радикалперехватывающим действием.

Полученные данные аргументируют целесообразность применения фитолисана в комплексной терапии и профилактике первичного уролитиаза и рецидивного камнеобразования.