Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакотерапевтическая эффективность гепатона при повреждениях печени

На правах рукописи

ГАРМАЕВА МАРИНА ЛУПСАНСУРУНОВНА

фармакотерапевтичрхкая эффективность гепатона при повреждениях печени

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

003159571

Работа выполнена а Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук

Научный руководитель:

доктор биологических наук

Ажунова Татьяна Александровна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

Жамсаранова Сэсэгма Дашиевна

кандидат медицинских наук

Хоцаев Жамбо Цыбикович

Ведущая организация: ГОУ ВПО Иркутский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Защита состоится « 25 » октября 2007 г на заседании диссертационного совета К 003.028.01, в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан «__» сентября 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета.

кандидат биологических наук

В.Ь.Хобракова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы. Поражения печени занимают ведущее место в структуре заболеваемости и смертности населения, прежде всего, вследствие увеличения числа алкогольных интоксикаций, неконтролируемым широкомасштабным применением лекарственных препаратов, загрязнением окружающей среды, в том числе воды и продуктов питания, чужеродными химическими соединениями (Ивашкин, 2007; Маевская,

2006, Полонский, 2005, Полунина, 2006, Хазанов, 2007).

Среди огромного многообразия лекарственных средств, применяемых в комплексной терапии заболеваний печени, выделяют группу гепатопротекторов, действие которых направлено на восстановление метаболизма, функции и структуры печени (Буеверов, 2003, Винницкая, 2004, Машковский, 2006; Оковитый, 2006, Осипова, 2005). Несмотря на то, что арсенал гепатозащитных препаратов с каждым годом расширяется, на их долю приходится всего около 10% от общего числа средств, применяемых для лечения заболеваний гепатобилиарной системы (Ильченко,

2007, Королева, 2005; Лопаткина, 2007, Оковитый, 2006; Подымова, 2005; Радченко, 2004) Поэтому остается высокой потребность в гепатозащитных средствах, особенно растительного происхождения, поскольку они обладают поливалентностью действия, высокой эффективностью, низкой токсичностью и возможностью длительного применения без выраженных побочных эффектов (Ильченко, 2007, Николаев, 2003; Соколов, 2006; Оковитый, 2006, Лопаткина, 2007)

В Отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН получено новое гепатопротектор-ноё средство, условное названное гепатон Оно представляет собой сумму сухих фитоэкстрактов семи видов лекарственных растений Rosa sp, Crataegus sp, Matricaria recutita L, Mentha piperita L, Hypericum perforatum L, Glycyrrhiza uralensis Fisch, inula helenium L

Цель исследования. Целью настоящей работы явилась оценка фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства гепатона при повреждениях печени.

Задачи исследования Для достижения указанной цели были сформулированы следующие задачи

1 Изучить гепатопротекторное действие гепатона на течение острых повреждений печени, вызванных введением парацетамола, тетрациклина гидрохлорида и этанола

2 Изучить гепатопротекторное влияние гепатона на течение хронического токсического гепатита, вызванного введением четырех-хлористого углерода

3 Установить основные механизмы гепатопротекторного действия гепатона

Научная новизна. В работе впервые дана оценка фармакотерапев-тической эффективности комплексного растительного средства гепатона На основании морфофункциональной оценки установлена его гепато-протекторная активное!в при острых лекарственных и алкогольных повреждениях печени, а также при хроническом ССЦ-гепатите Получены новые данные о коррекции липидного обмена и белково-синтетическом функции печени, об ингибирующем влиянии гепатона на интенсивность процессов цитолиза, холестаза, фиброгенеза и свободнорадикального окисления липидов, а также о благоприятном влиянии фитосредства на состояние антиоксидантной системы

Практическое значение работы. Материалы по проведенным Экспериментальным исследованиям фармакотерапевтической эффективности Гепатона включены в заключительный отчет Отдела биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по проекту № 21 1 3 «Регуляция свободнорадикальных процессов при повреждениях органов пищеварения с использованием биологически активных веществ из арсенала традиционной медицины»

Результаты исследований позволяют рекомендовать гепатон для дальнейшего доклинического и клинического изучения с целью его применения в практической медицине в качестве эффективного гепатоза-щитного средства при повреждениях печени различной этиологии

Полученные в работе данные используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета Бурятского государственного университета

Поданы заявки на предполагаемое изобретение «Гепатопротектор-ное средство растительного происхождения» (№ 2006124093/15 (053802)) и на «Способ получения средства, обладающего гепатопротекторной активностью» (№ 2007153671 /15(018793))

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Гепатон обладает гепатопротекторным действием и стимулирует регенераторные процессы при острых повреждениях печени, вызванных введением парацетамола, тетрациклина и этанола

2 Гепатон обладает гепатопротекторным действием и тормозит процессы фиброгенеза при хроническом токсическом гепатите, вызванном введением четыреххлористого углерода

3 Основными механизмами гепатозащитного действия гепатона является ингибирование процессов перекисного окисления липидов, повышение активности антиоксидантной защиты и стабилизация мембранных структур клеток гепатоцитов, что ведет к купированию синдромов ци-

толиза и холестаза, нормализации внешнесекреторной, дезинтоксика-ционной и синтетической функций печени.

Апробация материалов диссертации. Основные результаты исследований были доложены и обсуждены на:

• научно-практической конференции, посвященной 80-летию Д.Ш. Федорова (Улан-Удэ, 2005),

• IV региональной межвузовской конференции (Чита, 2005),

• научно-практической конференции «Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии» (Иркутск -Аршан, 2005);

• международной научной конференции «Монос-15» (Улан-Батор, 2005),

• The Second International Symposium on Chemistry of Herbal Medicine and Mongolian Drug (Ulaanbaatar, 2006),

• научно-практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д м н База£рона Э Г (Улан-Удэ, 2006),

• ежегодных научных сессиях Восточно-Сибирского технологического yHHBepcHTeTá по Секции «Химия биологически активных веществ» (Улан-Удэ, 2005, 2006),

• Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» (Улан - Удэ, 2006)

Связь задач исследования с проблемным планом медицинских и фармацевтических наук. Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с программой «Регуляция свободнорадикальных процессов при повреждениях органов пищеварения с использованием биологически активных веществ из арсенала традиционной медицины» (№ roc per 21 1.3), утвержденной 21 02 2004 г. Президиумом СО РАН

Публикации По теме диссертации опубликовано 15 научных работ, в том числе 2 статьи в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

Структура и объем диссертации Работа изложена на 135 страницах компьютерного текста и состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего 288 источников, из которых 155 иностранных авторов Работа иллюстрирована 11 таблицами и 26 рисунками

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования выполнены на 480 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-220 г Животные находились в стандартных усло-

виях содержания в виварии ИОЭБ СО РАН на обычном рационе (Приказ МЗ СССР №1179 от 10 10 83 г)

В работе использовали суммарный фитоэкстракт гепатона, который вводили животным в виде водного раствора внутрижелудочно в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг В качестве препарата сравнения использовали растительный гепатопротектор карсил в дозе 100 мг/кг Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в соответствующем объеме по аналогичным схемам.

Повреждение печени вызывали внутрижелудочным введением белым крысам парацетамола в дозе 250 мг/кг; тетрациклина гидрохлорида в дозе 1000 мг/кг, 40% водного раствора этилового спирта в объеме 7 мл/кг массы крыс и 50% масляного раствора тетрахлорметана в объеме 0,2 мл/100 г массы животного (Руководство.. ,2005)

Функциональное состояние печени оценивали по биохимическим показателям сыворотки крови активности аланинаминотрансферазы (АлТ) и аспартатаминотрансферазы (АсТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), концентрации ß-липопротеидов и общего билирубина с использованием стандартного набора реактивов ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск) Концентрацию общего белка в сыворотке крови определяли по унифицированному способу по биуретовой реакции (Меньшиков, Делекторская и соавт, 1987)

Для оценки интенсивности процессов перекисного окисления ли-пидов (ПОЛ) определяли содержание малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981) и гомогенате печени (Стальная, Гаришвили, 1977), а также диеновых конъюгатов (ДК) в сыворотке крови (Гаврилов, Мишкорудная, 1983) Функцию антиоксидантной системы печени оценивали по уровню активности каталазы в сыворотке крови (Королюк и соавт, 1988) и супероксиддисмутазы (СОД) в плазме крови - по (Чевари и соавт, 1985),содержанию восстановленного глута-тиона (ВГ) в крови - по (Anderson, 1989)

Для проведения гистологических исследований кусочки печени крыс фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина, смеси Кар-нуа с последующей заливкой в парафин (Волкова, Елецкий, 1982) Срезы окрашивали гематоксилином-эозином (Меркулов, 1969, Елисеев и соавт, 1967). В свежезамороженных срезах определяли активность сукцинатде-гидрогеназы (СДГ) по Нахласу и содержание гликогена в печени с помощью ШИК-реакции (Меркулов , 1969, Саркисов, 1996)

Полученные данные обработаны статистически с использованием U - критерия Манна-Уитни (Сергиенко и соавт, 2000) Различия считали достоверными при Р<0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Фармакотерапевтическая эффективность «Гепатона» при повреждении печени парацетамолом Токсический метаболит парацетамола N-ацетил-р-бензохинон детоксицируется в печени путем связывания с глутатионом При образовании избыточных количеств метаболита уровень глутатиона в печени снижается, и N-ацетил-р-бензохинон ковалентно связывается с нуклео-фильными макромолекулами гепатоцитов, вызывая, таким образом, некроз печени (Ивашкин, 2002; Cohen, et al 1999, Шерлок, 2002)

Таблица 1

Влияние «Гепатона» на функциональную активность печени белых крыс

при повреждении печени парацетамолом

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (парацетамол) Опытная 1 (парацетамол + гепатон) Опытная 2 (парацетамол + карсил)

1 сутки

Щф, ед Боданск 7,41 ±0,68 16,77± 1,40 10,50± 1,00* 10,7± 1,01

Тимоловая проба, ед. ОП 0,53± 0,03 1,61±0,10 0,50± 0,03* 0,50± 0,Q4

Общий билирубин, мкМ/л 5,81± 0,51 24,30± 1,53 11,80± 1,13* 12,10±1,20

3 сутки

АлТ, мкмоль/мл час 2,60± 0,12 3,12± 0,13 2,54± 0,11* 2,61± 0,16

АсТ, мкмоль/мл час М0±0,11 2,22± 0,07 1,60± 0,08* 1,96± 0,l4

Р- липопротеиды, уел ед 3,10±0,01 4,77±-,Ю 3,30± 0,10* " 3,60± 0,07

Примечание * - здесь и далее различия статистически достоверны по сравнению с контролем при Р<0,05

Результаты исследований показали, что на фоне интоксикации парацетамолом у животных через сутки после введения гепатона снижались активность аминотрансфераз в среднем на 11% и щелочной фосфата-зы - на 37%, а также концентрация (3-липопротеидов - на 28%, билирубина - в 2 раза, показатели тимоловой пробы - в 3 раза по сравнению с соответствующими показателями у крыс контрольной группы На З и 7 сутки

эксперимента снижение активности ферментов составляло- АлТ - на 19 и 16%, АсТ - на 28 и 15%, ЩФ - на 16 и 29% соответственно В указанные сроки наблюдалось снижение содержания билирубина в сыворотке крови в 2 раза, показателей тимоловой пробы - на 24 и 61%, содержания (3-липопротеидов - на 39 и 38% соответственно срокам наблюдения по сравнению с данными у животных в контрольной группе (табл 1).

Таблица 2

Влияние «Гелатона» на интенсивность процессов перекисно! о окисления липидов и состояние антиоксидантной системы белых крыс при повреж-

дении печени парацетамолом

Показатели Группы животных

Интактная „ Контрольная (парацетамол) Опытная 1 (парацетамол + гепатон) Опытная 2 (парацетамол + карсил)

1 сутки

МДА в гомогенате печени, нмоль/г 2,30± 0,11 4,50±0,14 2,91± 0,25* 3,22±0,09

Каталаза, мкат/л 2,13± 0,13 0,52± 0,04 0,84± 0,05" 0,77± 0,06

3 сутки

МДА в сыворотке крови, мкмрль/мл 12,3± 0,40 24,5± 1,85 14,5± 0,08* 18,3±1,34*

ДК, нмоль/мл 5,1+0,01 40,6± 3,52 23,9± 2,15* 28,8±2,54*

7 сутки

ДК, нмоль/мл 5,1± 0,15 32,5± 1,54 12,2+ 1,03* 23,4+1,57*

СОД, мкмоль/л мин 8,6± 1,77 5,7+ 0,48 8,7+ 0,56* 6,3± 0,45

Каталаза, мкат/л 3,3+ 0,18 2,06± 0,02 3,2± 0,19* 2,9± 0,10*

ВГ, мкмоль/л 2,33± 0,24 1,12± 0,07 1,88+ 0,12* 1,72± 0,14*

Одновременно, курсовое назначение исследуемого фитосредства в экспериментально-терапевтической дозе приводило к торможению процесса ПОЛ в биологических мембранах гепатоцитов и повышению активности ферментов антиоксидантной защиты организма Как следует из таблицы 2, под действием пепатона снижалась концентрация МДА в гомоге-нате печени на 35% и повышалась активность каталазы крови - на 61% по сравнению с показателями в контрольной группе На 3 сутки исследования содержание МДА в гомогенате печени и сыворотке крови снижалось до показателей у животных интактной группы, а содержание ДК было существенно ниже, чем в контроле Наряду с этим, у животных, получав-

ших гепатон, к указанному сроку повышались активность СОД и каталазы соответственно на 45 и 17% и концентрация восстановленного глутатиона - на 51 % по сравнению в аналогичными показателями у крыс контрольной группы На 7 сутки исследования у животных опытной группы активность СОД и каталазы, концентрация ВГ достигали показателей у интакт-ных крыс, а концентрация диеновых конъюгатов в сыворотке крови была в 3 раза ниже значений в контрольной группе

При введении животным гепатона снижалась выраженность некротических и некробиотических процессов, характерных для парацетамо-лового повреждения печени; исчезали дистрофические изменения, увеличивалось количество двуядерных и гипертрофированных гепатоцитов О репаративных процессах в печени животных, получавших исследуемое средство, свидетельствовало повышение активности СДГ и содержание гликогена по сравнению с данными в контрольной группе животных Фармакотерапевтическая эффективность гепатона при повреждении печени тетрациклином

Тетрациклины подавляют выработку транспортных белков, обеспечивающих выведение фосфолипидов из гепатоцита, что приводит к развитию жировой печени Также их гепатотоксичное действие связано с прогрессирующей деструкцией малых междольковых протоков, приводящих к внутрипеченочному холестазу (Ивашкин, 2002, Николаев, 1992, Полунина, 2006)

Результаты исследований показали, что на фоне интоксикации тетрациклином курсовое введение гепатона в дозе 50 мг/кг уменьшало на 7 и 14 сутки опыта активность АлТ в сыворотке крови животных на 14 и 34 % и АсТ - на 22 и 59% соответственно срокам наблюдения по сравнению с аналогичными данными в контрольной группе Уменьшалась выраженность синдрома холестаза активность щелочной фосфатазы к 7, 14 и 21 суткам снижалась на 49, 45 и 46% и содержание общего билирубина в сыворотке крови - на 46, 28 и 23% соответственно по сравнению с показателями у животных в контрольной группе Отмечалось положительное влияние фитосредства на липидный обмен содержание холестерина снижалось на 26, 31 и 53% и Р-липопротеидов - на 22, 21 и 30% соответственно срокам исследования по сравнению с соответствующими данными в контрольной группе (табл 3).

Как следует из данных, приведенных в таблице 4, повреждение печени белых крыс, вызванное введением тетрациклина, сопровождается индукцией процессов ПОЛ Установлено, что курсовое введение гепатона в дозе 50 мг/кг на 7 сутки опыта оказывало умеренное антиоксидантное действие, о чем свидетельствовало снижение концентрации МДА в гомо-генате печени на 25 % по сравнению с данными животных контрольной

группы На 21 сутки опыта концентрация МДА и ДК в сыворотке крови, а также активность СОД и концентрация восстановленного глутатиона у животных опытной группы достигала значений у интактных животных

Таблица 3

Влияние «Гепатона» на функциональную активность печени белых крыс _при повреждении печени тетрациклином _

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (тетрациклин) Опытная 1 (тетрациклин + гепатон) Опытная 2 (тетрацик-, лин+ кар-сил)

7 сутки

ЩФ, ед.Боданск. 8,12±0,66 ' 12,83± 1,20 6,59±0,63* 8,97± 0,70

Общий билирубин, мкМ/л 5,44± 0,23 10,83± 1,02 5,84± 0,49" 7,12± 0,12

14 сутки

АлТ, мкмоль/мл час 2,10± 0,12 3,20± 0,10 2,10± 0,20* 1,67±0,13

АсТ, мкмоль/мл час 0,87± 0,66 2,49± 0,08 1,03± 0,07* 1,77± 0,13

21 сутки

Холестерин, ммоль/л 2,33± 0,12 5,70± 0,54 2,66± 0,14* 2,00±0,11

Общий билирубин, мкМ/л 5,44± 0,23 12,54± 1,03 9,69± 0,82* 10,16±1,01

При патоморфологическом исследовании печени крыс, получавших гепатон на фоне введения тетрациклина, уменьшались нарушения микроциркуляции, ослабевала выраженность дистрофических процессов В паренхиме органа не выявлялась жировая дистрофия, характерная для контроля О репаративных процессах в печени свйдетельствовало увеличение количества двуядерных и гипертрофированных гепатоцитов, повышение активности СДГ Подтверждением этому служили также данные ШИК-реакции содержание гликогена в печени животных, получавших гепатон, было значительно выше такового в контроле

Таблица 4

Влияние «Гепатона» на интенсивность процессов перекисного окисления

липидов и состояние антиоксидантной системы _белых крыс при повреждении печени тетрациклином_

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (тетрациклин) Опытная (тетрацик-лин+гепатон)

21 сутки

МДА в гомоге-нате печени, нмоль/г ткани 0,56± 0,04 1,16± 0,20 0,86± 0,07*

МДА в сыворотке крови, мкмоль/мл 11,5± 1,16 15,7± 1,26 12,8± 0,69

ДК, нмоль/мл 6,8± 0,20 8,4± 0,71 5,7± 0,43*

сод, мкмоль/л мин 18,4±1,02 11,9± 1,25 20,П 2,03*

Каталаза, мкат/л 6,6± 0,54 6,3± 0,32 5,9± 0,46

ВГ, мкмоль/л 3,7± 0,27 2,2± 0,52 4,3± 0,36*

Фармакотерапевтическая эффективность гепатона при повреждении печени этанолом Известно, что этанол обладает прооксидантным действием и снижает скорость р-окисления жирных кислот, что способствует их отложению в печени и приводит к развитию жирового гепатоза (Белобородова, 2003, Буеверов, 2002, Ивашкин, 2002, Калинин, 2001, 2005, Шерлок, 2002, Подымова, 2005)

Результаты исследований свидетельствуют, что при алкогольном повреждении печени после введения гепатона ко второму сроку наблюдения уменьшалась проницаемость клеточных мембран, на что указывало снижение активности АлТ на 12 %, АсТ - на 1! % по сравнению с аналогичными показателями у животных в контрольной группе Наиболее выраженное позитивное влияние гепатон оказывал на выраженность холе-статического синдрома, о чем свидетельствовало снижение активности ЩФ на 15, 38 и 28%, содержания билирубина - в 1,6 - на 7 сутки и в 2 раза - через 14 и 21 сутки по сравнению с соответствующими показателями у крыс контрольной группы (табл 6)

Таблица 6

Влияние «Гепатона» на функциональной состояние печени _белых крыс п'ри алкогольном гепатите_

Показатели Группы животных

Интакт-ная Контрольная (этанол) Опытная 1 Этанол + г„ атон Опытная 2 Этанол+ карсил

14 сутки

ЩФ, ед Бодан 7,4±0,68 16,7±1,40 10,5±1,0* 10,7±1,01*

Билирубин мкМ/л 5,8±0,51 24,3±1,53 11,8±1,13* 12,1±1,20*

21 сутки

АлТ,мкМ/мл час 2,б±0,12 2,7±0,25 2,3±0,18 2,4±0,16

АсТ,мкМ/мл час 1,4+0,11 1,7±0,13 1,5+0,12 1,5±0,10

Курсовое введение исследуемого фитосредства животным значительно снижало токсическое действие этанола Через 7 и 14 суток отмечалось снижение активности ПОЛ содержание ДК в сыворотке крови снижалось на 31 и 16%, МДА в крови и гомогенате печени белых крыс - на 16 и 31% и на 16 и 35% соответственно срокам исследования по сравнению с показателями у крыс в контрольной группе Одновременно с этим, гепа-тон повышал активность аНтиоксидантной защиты Так, через 7 суток от начала опыта активность каталазы и СОД в сыворотке крови возрастала по сравнению с контролем на 27 и 16% соответственно, через 14 суток -на 50 и 34% соответственно по сравнению с показателями у животных контрольной группы. Также под влиянием испытуемого средства повышалось содержание восстановленного глутатиона в сыворотке крови на 18 и 45% соответственно срокам наблюдения по сравнению с аналогичными данными в контрольной группе (табл 7)

Морфологиче^кое исследование печени животных показало, что-на фоне интоксикаций этанолом наблюдались нарушение углеводного, белкового обмена; крупнокапельная жировая дистрофия, ч^о свидетельствовало о развитии алкогольного гепатоза Курсовое введение гепатона приводило к нормализации структуры печени снижалось количество ге-

патодитов, подверженных жировой и белковой дистрофии, повышалось содержание гликогена в гепатоцитах, увеличивалось количество гипертрофированных и двуядерных гепатоцитов, что-свидетельствовало об активации регенераторных процессов

Таблица 7

Влияние «Гепатона» на интенсивность процессов перекисного окисления лииидов и состояния антиоксидантной защиты белых крыс при поврежде-

нии печени этанолом

Показатели Сроки Группы животных

Интактная Контрольная ССЦ Опытная СС14 + гепатон

МДА в сыворотке, мкмоль/мл 7 сутки 11,43±0,57 17,61±0,81 14,75±0,1,14*

МДА в гомоге-нате печени, Нмоль/г ткани 2,30+0,11 3,20±0,12 2,70+0,12*

ДК, нмоль/мл 5,56±0,39 10,32+0,93. 7,12±0,54*

Катал аза, мкат/л 8,67±0,44 5,20+0,31 6,62+0,17*

сод мкмоль/л-мин 12,01±1,50 8,39±0,73 9,70±0,67

ВГ, мкмоль/л 2,61 ±0,12 1,81±0,14 2,13±0,14

МДА в сыворотке, мкмоль/мл 14 сутки 11,43±0,57 20,60±0,70 14,20±0,76*

МДА в гомоге-нате печени, нмоль/г ткани 2,ЗОЮ, 11 4,50±0,14 2,90±0,25*

рК, нмоль/мл. 5,56±0,39 18,9±1,16 15,8±1,51

Катал аза, мкат/л 8,67±0,44 3,25+0,17 4,9±0,32*

сод мкмоль/л мин 12,01±1,50 6,73±0,29 9,05+0,76*

ВГ,мкмоль/л 2,6110,12 1,24±0,06 1,87±0,19*.

Фармакотерапевтическая эффективность гепатона при повреждении печени тетрахлорметаном Токсическое повреждение печени, вызванное длительным введением СС14, является адекватной моделью цирротического поражения печени у человека (Карташова, 1975)

Таблица 9

Влияние «Гепатона» на функциональную активность печени белых крыс

при хроническом тетрахлорметановом гепатите _ (45 сутки) _

Показатели Интактная Контрольная (ССЬ4) Опытная 1 (сси +гепатон) Опытная 2 (ССЬ4 + карсил)

АлТ, мкмоль/мл час 0,68± 0,01 3,40± 0,20 2,54± 0,17* 2,77± 0,16

АсТ, мкмоль/мл час 0,41± 0,05 3,48± 0,20 2,12± 0,23* 3,00± 0,12

Общий белок, г/л 7,45± 0,01 6,46± 0,06 6,73± 0,18 7,02± 0,35

Тимоловая проба, ед. оп 1,36± 0,19 5,90± 0,28 3,00± 0,27* 3,00± 0,12

Р" липопро-теиды, уел ед 9,0± 2,5 16,0± 1,0 13,1± 1,1 12,8± 1,7

Холестерин, ммоль/л 5,1± 0,2 11,0± 0,3 7,8± 0,5* 9,0± 0,8

ЩФ,ед Бод 14,4± 1,0 25,2± 1,9 19,6± 1,0* 21,2± 2,0

Общий билирубин, мкМ/л 0,90± 0,02 3,63± 0,26 2,41± 0,21* 2,55± 0,11

Результаты исследований показали, что ари курсовом введении гепатона в дозе 50 мг/кг через 45 суток от начала эксперимента у животных опытной группы значительно снижалась активность трансаминаз и щелочной фосфатазы на 25, 39 и 22 % соответственно пек сравнению с аналогичными данными в контроле Концентрация общего билирубина уменьшалась на 34 % в большей степени за счет прямой фракции, тщщ же благоприятная динамика отмечалась при оценке содержания холестерина и Р-липопротеидов в сыворотке крови Также гепатон способствовал нормализации белково-синтетической функции печени, о. чем свидетель-

ствовало снижение показателя тимоловой пробы на 49 % и повышение концентрации общего белка в сыворотке крови животных опытной труппы.

Таблица 9

Влияние «Гепатона» на функциональную активность печени белых крыс при хроническом тетрахлррметановом гепатите

Показатели Интактная Контрольная (ССЬ4) Опытная 1 (СС1ч+ гепатон) Опытная 2 (ССЬ4 + карсил)

АлТ, мкмоль/мл час 0,68±0,01 3,40± 0,20 2,54± 0,17* 2,11 ± 0,16

АсТ, мкмоль/мл час 0,41± 0,05 3,48± 0,20 2,12± 0,23* 3,00± 0,12

Общий белок, г/л ' 7,45± 0,01 6,46± 0,06 6,73± 0,18 7,02± 0,35

Тимоловая проба, ед ОП., 1,36± 0,19 5,90± 0,28, 3,00± 0,27* 3,00± 0,12

Р- липопро-теиды,' уел ед. 9,0± 2,5 16,0± 1,0 13,1± 1,1 12,8± 1,7

Холестерин, ммоль/л 5,1 ±0,2 11,0±0,3 7,8± 0,5* 9,0± 0,8

ЩФ, ед Бод 14,4± 1,0 25,2± 1,9 19,6± 1,0* 21,2± 2,0

Общий билирубин, мкМ/л 0,90± 0,02 3,63± 0,26 2,41± 0,21* 2,5 5± 0,11

, Курсовое введение гепатона животным опытной группы сопровождалось через 30 и 45 суток достоверным снижением концентраций ДК в сыворо гке крови на 31 и 24% и МДА в сыворотке крови и гомогенате печени на 23 и 17% и на 29 и 27% соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы Наряду с этим, при введении гепатона через 30 суток повышалась активность катапазы в сыворотке крови и СОД в плазме крови на 26 и 22% и через 45 суток - на 33 и 13% соответственно по сравнению с данными у крыс контрольной группы Также под влиянием испытуемого средства повышалось содержание ВГ в крови на 19 и 13% соответственно срокам наблюдения по сравнению с аналогичными показателями в контрольной группе

Таблица 10

Влияние «Гепатона» на содержание продуктов перекисного окисления

липидов и состояние антиоксидантной защиты у белых крыс __ при интоксикации терахлорметаном_

Группы животных

Показатели Сроки Интактная Контрольная (ССЦ) Опытная (СС14 + гепатон)

МДА в сыворотке, мкмоль/мл 11,43±0,57 18,45±1,24 14,21 ±0,1,27*

МДА в гомоге-нате печени, нмоль/г ткани 30 2,3±0,11 4,14+0,32 2,95+0,24*

ДК, нмоль/мл сутки 5,56±0,39 13,53±1,05 9,36+0,62*

Катал аза, мкат/л 8,67±0,44 4,87±0,43 6,15±0,32*

СОД мкмоль/л мин 12,01±1,50 7,23±0,48 9,21 ±0,51*

ВГ, мкмоль/л 2,61+0,12 1,72+0,29 2,12+0,14

МДА в сыворотке, мкмоль/мл 11,43±0,57 16,38+1,12 13,59±0,92

МДА в гомоге-нате печени, нмоль/г ткани 45 2,3±0,11 3,90±0,27 2,85 ±0,21*

ДК, нмоль/мл сутки 5,56±0,39 10,67±0,87 8,12±0,39*

Катал аза, мкат/л 8,67±0,44 5,21 ±0,3 7 7,75±0,67*

СОД мкмоль/л мин 12,01±1,50 9,82+0,94 11,25+1,68

ВГ, мкмоль/л 2,61 ±0,12 2,27+0,16 2,62±0,31

Курсовое введение гепатона на фоне хронического гепатита оказывало выраженное гепатозащитное действие, о чем свидетельствовало уменьшение выраженности структурных изменений печени уменьшались лймфоидно-гистиоцитарнЫе инфильтраты, существенно снизилось количество гепа'юцитов, подвергшихся некрозу и баллонной дистрофии, отсутствовали разрастания тяжей соединительной ткани, повышалось содержание гликогена и СДГ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные в работе данные свидетельствуют о том, что комплексное растительное средство гепатон обладает выраженной гепатопро-текторной активностью при повреждениях печени, вызванных введением парацетамола, тетрациклина, этанола и тетрахлорметана

Установлено, что под действием испытуемого средства снижается проницаемость мембран гепатоцитов, что препятствует выходу в кровь мембраносвязинных ферментов, улучшается течение метаболических процессов в паренхиме печени, тем самым уменьшаются явления цитолиза Динамика содержания общего билирубина, холестерина, щелочной фос-фатазы и р-липопротеидов в сыворотке крови при применении гепатона указывает на положительные изменения, происходящие в печени, предупреждающие развитие холестаза Испытуемое средство также способствует нормализации белково-синтетической функции и устранению диспро-теннемии, о чем свидетельствует повышение концентрации общего белка и снижение показателей тимоловой пробы Показано, что гепатон уменьшает некротические, мезенхимально-воспалительные и дистрофические процессы в гепатоцитах, а также снижает интенсивность воспалительной инфильтрации печени и стимулирует регенерацию печеночных клеток При хроническом токсическом гепатите гепатон тормозит развитие фиброзной ткани

В основе гепатопротекторного действия гепатона лежит его способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления липи-дов и стабилизировать мембраны гепатоцитов за счет комплекса биологически активных веществ, преимущественно полифенольной природы, обладающих выраженной антиокислительной и антирадикальной активностью

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о выраженной фармакотерапевтической эффективности многокомпонентного фитосредства гепатона и аргументируют целесообразность его использования при фармакокоррекции повреждений печени

ВЫВОДЫ

1 Гепатон в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг обладает гепатопротекторным действием и стимулирует регенераторные процессы в печени при ее острых повреждениях, вызванных введением парацетамола, тетрациклина и этанола

2 Гепатон в экспериментально-терапевтической дозе 50 мг/кг обладает гепатопротекторным действием и тормозит процессы фиброгене-за при хроническом токсическом гепатите, вызванном введением четыреххлористого углерода

3. Основными механизмами гепатопротекторного действия гепатона является ингибирование процессов перекисного окисления липидов, повышение активности антиоксидантной защиты и стабилизация мембранных структур клеток гепатоцитов, что ведет к купированию синдромов цитолиза и холестаза, нормализации внешнесекретор-ной, дезинтоксикационной и синтетической функций печени

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Николаев С М., Чехирова Г.В, Ажунова Т А, Гуляев С.М, Лоншако-ва К С., Гармаева МЛ., Михайлова Е А, Попова Н В. Заявки на предполагаемое изобретение № 2006124093/15 (053802) «Гепатопротек-торное средство растительного происхождения» и «Способ получения, средства, обладающего гепатопротекторной активностью» (№ 2007153671/15(018793)).

2. Ажунова Т А, Гармаева МЛ, Михайлова Е.А, Бидогаева Т Г. Фар-макотерапевтическая оценка комплексного растительного средства при экспериментальном парацетамоловом гепатите // Дорно-орнийн анагаахухааны хосолмол тогщлцоо. - Улан - Баатар, 2005, - С 91 -92

3 Гармаева М Л, Разуваева ЯГ, Ажунова ТА, Жапова В В. Морфо-метрическая оценка гепатопротекторного действия многокомпонентного растительного средства при тетрациклиновом гепатите // Дорно-орнийн анагаах ухааны хосолмол тогтолцоо - Улан - Баатар, 2005 -С 97-98

4 Хобракова В Б., Ажунова Т А, Гармаева М Л Влияние гепатозащит-ного средства на состояние иммунной системы при экспериментальном иммунодефиците // Дорно-орнийн анагаах ухааны хосолмол тог, толцоо - Улан - Баатар, 2005 - С 100 - 101.

5 Гуляев С М, Ажунова Т А, Михайлова Е А, Гармаева М Л, Попова Н А Гепатозащитное влияние лекарственного сбора при иммобили-зационном стрессе // Актуальные вопросы восстановительной медицины, курортологии и физиотерапии - Иркутск - Аршан, 2005 -С. 142-144

6 Гармаева М Л, Ажунова Т А, Самбуева З.Г Желчегонная активность комплексного гепатозащитного средства // Материалы научной конференции, посвященной 80-летию Д Ш Фролова - Улан - Уда, 2005 -С23-24

7 Гармаева М Л, Унагаева А А., Чукаев С А Влияние гепатозащитного средства на процессы свободнорадикального окисления в модельной

системе m vitro // Материалы IV региональной межвузовской конференции -Чита,2005 -С 139-140

8 Ажунова Т А, Чехирова Г В, Николаев С М, Разуваева Я Г, Лонша-кова К С, Лемза С В., Гармаева М Л, Михайлова Е А, Попова Н А Фармакотерапевтическая эффективность нового растительного средства при экспериментальном токсическом гепатите // Вестник Бурятского государственного университета -2006.-Серия 11.Медицина -Вып.6 -С 178-184

9. Лемза С В., Михайлова Е А, Попова Н А., Гармаева МЛ, Унагаева А А., Ажунова Т.А, Мондодоев А Г Влияние нового растительного средства на активность каспазы-3 при остром токсическом поражении клеток печени // Вестник Бурятского государственного университета. -2006 - Серия 11 Медицина-Вып 6 -С.128-131

10. Azhunova Т А, Gulyayev S.M, Chehirova G V, Garmaeva M L, Mik-hailova E.A The Hepatoprotective Action of a Vegetative Dry Polyextract at Immobilization Stress at White Rats - Abstracts "The Second International Symposium on Chemistiy of Herbal Medicine and Mongolian Drag" - Ulaanbaatar, 2006 -P 86

11 Mikhailova E A, Popova N A, Garmaeva M.L, Lemza S.V, Mondodoev A G Caspase-3 Activity m Acute Toxic Liver Injury // The Second International Symposium on Chemistry of Herbal Medicine and Mongolian Drag -Ulaanbaatar,2006 -P 148.

12. Михайлова E A, Попова H A, Гармаева M Л, Лемза С В, Мондодоев А Г Повышение активности каспазы-3 при остром токсическом поражении печени - Тезисы Всероссийской конференции с международным участием «Биоразнообразие экосистем внутренней Азии» -Улан-Удэ,2006 -Т 2 - С 99

13 Гармаева М Л, Михайлова Е А Фармакотерапевтическая эффективность «Гепатона» при повреждении печени белых крыс парацетамолом // Материалы научно- практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д м н Базарона Э Г - Улан-Удэ, 2006 - С 60

14 Михайлова Е А, Попова Н А, Гармаева М Л, Лемза С В Повышение активности каспазы-3 в гепатоцитах при остром токсическом поражении печени // Материалы научно- практической конференции, посвященной 75-летию со дня рождения д м н Базарона Э.Г - Улан-Удэ, 2006 - С 61

15 Гармаева М Л, Самбуева 3 Г Желчегонная активность комплексного гепатозащитного средства «Гепатон» // Сборник научных трудов Серия Химия и биологическая эффективность природных соединений -Улан-Удэ,2006 - Вып 10 -С 30

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АлТ - аланинаминотрансфераза АсТ - аспартатаминотрансфераза ВГ - восстановленный глутатион ДК - диеновые конъюгаты МДА - малоновый диальдегид ПОЛ - перекисное окисление липидов СДГ - сукцинатдешдрогеназа СОД - супероксиддисмутаза ЩФ - щелочная фосфатаза

Подписано в печать 25 09 2007 г Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная Объем 1,25 печ л Тираж 100 Заказ № 50

Отпечатано в типографии Изд-ва БМЦ СО РАН 670047 г Улан-Удэ, ул Сахьяновой, 6