Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Фармакотехнологические исследования по разработке и изучению стабильности лекарственных форм с азитромицином

На правах рукописи

005535628

БРЕДИХИНА ТАТЬЯНА АЛЕКСАНДРОВНА

ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ И ИЗУЧЕНИЮ СТАБИЛЬНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ С АЗИТРОМИЦИНОМ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

г 4 ОКТ 2013

Пятигорск - 2013

005535628

Диссертационная работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: Панкрушева Татьяна Александровна

доктор фармацевтических наук, профессор

Официальные оппоненты: Степанова Элеонора Федоровна

доктор фармацевтических наук, профессор, Пятигорский медико-фармацевтический

институт - филиал ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России,

профессор кафедры технологии лекарств

Жилякова Елена Теодоровна доктор фармацевтических наук, профессор, ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный научно-исследовательский университет», зав. кафедрой фармацевтической технологии, управления и экономики здравоохранения

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Первый Московский

государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Минздрава России

Защита состоится 7 ноября 2013 года в 10:00 часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.09 при ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России по адресу: 357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России по адресу: 357532, Ставропольский край, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

Автореферат разослан 7 октября 2013 г. Учёный секретарь

диссертационного совета ^¿Г^ Компанцева Евгения Владимировна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования. Заболевания, передающиеся половым путем, относятся к числу наиболее часто регистрируемых во всем мире, включая страны с высоким уровнем развития системы здравоохранения. Это является серьёзной проблемой, так как перенесенные урогинекологические инфекции значительно снижают качество жизни и оказывают неблагоприятное воздействие на репродуктивную функцию женского и мужского организма.

В терапии данной группы заболеваний широко используются лекарственные препараты, оказывающие как общее воздействие на организм, так и местное. Последнее позволяет существенно повысить концентрацию активного вещества в очаге поражения, снизить уровень аллергических реакций, уменьшить количество побочных эффектов и т.д. Поэтому перспективным направлением фармацевтической технологии продолжает оставаться разработка новых препаратов противомикробного действия для местного применения в гинекологической и урологической практике.

Среди антимикробных препаратов одной из самых эффективных групп признаны макролиды, представителем которых является азитромицин. Он действует бактериостатически и бактерицидно, активен в отношении внутриклеточных возбудителей, грамположительных и некоторых грамотрицательных бактерий, в том числе вызывающих урогенитальные инфекции. Указанные факторы обосновывают актуальность разработки лекарственных форм азитромицина для местного применения.

Степень разработанности темы. В настоящее время азитромицин выпускается в лекарственных формах для энтерального (таблетки, капсулы, порошок для приготовления суспензии) и парентерального (лиофилизат для инфузионных растворов) применения. Известны результаты эксперимента, проведенные P.M. Гусовым и Э.Ф. Степановой (2011), по разработке офтальмологического геля азитромицина. Однако исследования по созданию лекарственных форм локального воздействия (суппозиториев и геля) для использования в урологической и гинекологической практике отсутствуют. В

связи с чем новым направлением развития темы является разработка структуры и дизайна исследований, связанных с выбором оптимальных вспомогательных веществ и технологической схемы получения, влияющих на качество лекарственных препаратов, их фармакологическую активность и стабильность. Полученные результаты представлены в настоящей диссертационной работе.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является экспериментальное и теоретическое обоснование составов, технологии получения и оценки качества эффективных лекарственных форм азитромицина - вагинальных суппозиториев и геля, предназначенных для лечения инфекционных урогенитальных заболеваний.

Задачи исследования:

- обосновать и разработать составы и технологию получения вагинальных суппозиториев, содержащих азитромицин;

- обосновать и разработать состав и технологию получения вагинального геля азитромицина;

- провести биофармацевтические исследования in vitro по выбору вспомогательных веществ при создании лекарственных форм азитромицина и оптимизации технологии их получения;

- разработать и валидировать методики количественного анализа азитромицина в суппозиториях и геле;

- осуществить оценку качества разработанных лекарственных форм азитромицина, исследовать их стабильность и установить сроки годности;

- изучить антибактериальную активность суппозиториев и геля азитромицина;

- разработать проекты нормативной документации на предлагаемые лекарственные препараты.

Научная новизна. На основании проведенных комплексных исследований впервые предложены состав и технология получения вагинальных суппозиториев с азитромицином на основах бутирол и витепсол

Н-15, предназначенных для лечения урогенитальных инфекционных заболеваний.

Обоснован и предложен состав и технология получения вагинального геля азитромицина, предназначенного для лечения урогенитальных инфекционных заболеваний.

Предложены и валидированы методики количественного анализа азитромицина в суппозиториях и геле с использованием метода высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).

Установлена антибактериальная активность суппозиториев и геля азитромицина.

Определены показатели оценки качества суппозиториев и геля азитромицина. Изучена стабильность лекарственных препаратов в процессе длительного хранения, установлены сроки их годности.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретическая значимость работы заключается во всестороннем обосновании оптимальных составов вагинальных лекарственных форм азитромицина, подтверждающем влияние фармацевтических факторов (вид основы, поверхностно-активные вещества (ПАВ), дисперсность, технологические приемы), на терапевтическую эффективность лекарственных препаратов.

Практическая значимость работы заключается в том, что в результате комплексных исследований разработаны и предложены лекарственные формы азитромицина (суппозитории и гель), внедрение которых расширит ассортимент отечественных лекарственных препаратов антимикробного действия для местного применения в гинекологической и урологической практике.

На основании проведенных исследований разработаны проект фармакопейной статьи предприятия «Азитромицина суппозитории вагинальные на витепсоле Н-15, 200 мг», лабораторный регламент производства «Азитромицина суппозитории вагинальные на витепсоле Н-15, 200 мг».

По результатам исследований составлены методические рекомендации «Изготовление и контроль качества суппозиториев и мазей азитромицина», «Технология, контроль качества и применение комбинированных суппозиториев в терапии воспалительных заболеваний различной этиологии», информационное письмо «Разработка и исследование суппозиториев для лечения инфекционных урогенитальных заболеваний», которые внедрены и используются в научно-исследовательской работе и учебном процессе на кафедрах ГБОУ ВПО Курского государственного медицинского университета (КГМУ), ФГБОУ ВПО Воронежского государственного университета (ВГУ); ГБОУ ВПО Воронежской государственной медицинской академии им. H.H. Бурденко (ВГМА им. H.H. Бурденко); ГБОУ ВПО Смоленской государственной медицинской академии (СГМА); ФГАОУ ВПО НИУ Белгородского государственного университета (БелГУ); ГБОУ ВПО Казанского государственного медицинского университета (Казанский ГМУ).

Методология и методы исследования. Методологической основой проведения эксперимента явились базовые научные теоретические положения фармацевтической технологии и биофармации, которые легли в основу разработки состава и технологии лекарственных форм азитромицина и нормативной документации. При выполнении работы использован комплекс физических, физико-химических, технологических, биофармацевтических, микробиологических методов исследований.

Положения, выносимые на защиту:

- результаты исследований по разработке состава и технологии получения вагинальных суппозиториев азитромицина;

- результаты исследований по разработке состава и технологии получения вагинального геля азитромицина;

-результаты биофармацевтических исследований in vitro по разработке суппозиториев и геля;

- результаты оценки качества и стабильности суппозиториев и геля азитромицина.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность результатов обоснована комплексным использованием современных методов анализа, проведением валидационной оценки методики количественного определения. Статистическая обработка результатов проведена по общепринятым методикам ГФ XI изд. (1987, вып. 1) с использованием пакета компьютерных программ Microsoft Excel.

Основные положения и научные результаты диссертационной работы докладывались и обсуждались на: Всероссийской научно-практической конференции «Биотехнология. Биомедицинская инженерия и технология современных социальных практик» (Курск, 2009); секционном заседании Всероссийской школы-семинара «Современные наукоемкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых ученых» (Белгород, 2009); IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2010); V и VI Всероссийских Бурденковских студенческих научных конференциях (Воронеж, 2009 - 2010); Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование - 2010» «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Поиск новых физиологически активных веществ» (Воронеж, 2010); XVII и XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2010, 2012); 66-й и 67-й региональных конференциях по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2011, 2012); 76-й и 77-й Всероссийских научных конференциях студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность» (Курск, 2011, 2012); Всероссийской научно-практической интернет-конференции с международным участием «Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм» (Курск, 2011); Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 45-летию фармацевтического факультета КГМУ «Традиции и инновации фармацевтической науки и практики» (Курск, 2011); научно-

практической интернет-конференции «Биофармацевтические особенности создания лекарственных препаратов в аспекте их медицинского использования» (Харьков, 2011); Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики» (Владикавказ, 2013).

По материалам диссертации, опубликовано 19 работ, в том числе 3 - в рецензируемых научных изданиях, рекомендуемых ВАК.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Глава 1 Обзор литературы Изложены проблемы распространенности урогенитальных инфекционных заболеваний и подходы к их профилактике и лечению. Дана характеристика антибиотиков макролидного ряда, в том числе объекта исследования - азитромицина. Проанализирована литература, отражающая фармакотехнологические исследования, проводимые по разработке мягких лекарственных форм - суппозиториев и мазей.

Глава 2 Материалы и методы исследования В эксперименте использованы лекарственные и вспомогательные вещества, отвечающие требованиям нормативной документации и разрешенные к медицинскому применению. Описаны использованные в работе фармакопейные, общепринятые и разработанные методики анализа.

Глава 3 Разработка состава и технологии получения вагинальных суппозиториев с азитромицином При изготовлении суппозиториев особое внимание уделяется подбору состава основы, которая оказывает значительное влияние на фармакотехнологические свойства лекарственной формы. По результатам анализа литературы были использованы основы витепсол Н-15, ГХМ 5-'Г, бутирол (сплав гидрожира, парафина, масла какао - 60:10:30), желатино-глицериновая, полиэтиленоксидная (сплав ПЭО 400 и ПЭО 1500 - 1:9).

Обоснование оптимальной концентрации азитромицина и выбор основы при разработке суппозиториев осуществляли на основании данных изучения

процесса его высвобождения, полученных в опытах in vitro методами диализа через полупроницаемую мембрану и прямой диффузии в агар.

Исходя из анализа нормативной документации на выпускаемые лекарственные формы азитромицина энтерального применения (таблетки и капсулы), в состав модельных образцов суппозиториев его вводили в количестве 100, 200 и 300 мг. Суппозитории готовили методом выливания, антибиотик вводили в основу по типу суспензии. Выбор дозировки осуществляли методом диффузии в агар в отношении наиболее чувствительных к нему тест-штаммов микроорганизмов. Критерием оценки служили зоны ингибирования роста тест-культур при сравнении с контролем - водной суспензией азитромицина. Результаты опыта представлены в таблице 1.

Таблица 1 — Антимикробная активность модельных образцов суппозиториев

( х±Д х, п = 6, р < 0,05)

Объекты исследования Содержание азитромицина, мг Зоны задержки роста тест-микроорганизмов, мм

St. aureus АТСС 6538-Р В. cereus АТСС 10702 В. subtilis АТСС 6633 Е. coli АТСС 25922

суппозитории на основе бутирол 100 22,18±0,25 16,21±0,24 15,41±0,58 16,32±0,93

200 26,07±0,30 18,48±0,90 19,29±0,19 19,67±0,53

300 26,94±0,59 19,31±0,46 19,48±0,89 20,00±0,20

суппозитории на основе витепсол 100 24,03±0,35 17,29±0,39 16,29±0,47 16Д0±0,58

200 25,89±0,08 19,80±0,31 18,98±0,94 18,58±0,93

300 26,23±0,31 20,43±0,47 19,20±0,29 19,14±0,08

суппозитории на основе ГХМ -5 Т 100 21,92±0,21 15,49±0,42 15,65±0,38 15,43±0,29

200 24,50±0,90 18,94±0,30 18,02±0,18 17,83±0,42

300 24,11±0,19 19,07±0,95 18,90±0,87 18,11±0,14

суппозитории на ПЭО-основе 100 20,19±0,16 16,34±0,52 15,39±0,28 14,71 ±0,67

200 23,87±0,54 18,94±0,67 18,34±0,53 17,01±0,36

300 22,78±0,65 19,31±0,76 18,96±0,32 17,73±0,38

суппозитории на желатино-глице риновой основе 100 19,02±0,74 16,02±0,76 15,05±0,32 14,20±0,39

200 21,06±0,28 17,87±0,76 17,80±0,35 17,33±0,73

300 21,97±0,67 18,50±0,39 18,18±0,52 17,82±0,75

водная суспензия азитромицина (контроль) 100 28,89±0,30 19,78±0,41 18,34±0,27 18,03±0,01

200 32,78±0,57 22,74±0,89 20,43±0,63 20,54±0,20

300 33,46±0,32 23,42±0,63 21,84±0,89 21,39±0,75

Из результатов исследования следует, что диаметр зон угнетения роста

микроорганизмов увеличивается пропорционально содержанию антибиотика в суппозиториях, независимо от используемой основы. При этом оптимальной следует считать дозировку 200 мг, т.к. ее повышение до 300 мг не приводит к статистически достоверному увеличению зоны ингибирования роста тест-

культур. Отмечено, что лучшее высвобождение, при любом содержании азитромицина, обеспечивают липофильные основы.

Выбор основы осуществляли также методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану (целлофановая пленка МСАТ-200, толщина 0,25 мм, размер пор 50 мкм). В качестве диализной среды (с учетом свойств растворимости азитромицина) использовали 0,05 М раствор калия фосфата двузамешенного в смеси вода - ацетонитрил (9:11). Азитромицин в диализате определяли методом спектрофотометрии. Результаты эксперимента, как среднее значение пяти определений свидетельствуют, что наиболее полное высвобождение азитромицина обеспечивают суппозитории на бутироле и витепсоле Н-15 - к 6 ч опыта в диализате его обнаружено 71,12 % и 60,18 % от содержания в навеске исследуемого образца, соответственно (рисунок 1).

Рисунок 1 - Высвобождение азитромицина из суппозиториев на основах: бутирол (1), витепсол Н-15 (2), ГХМ-5 Т (3), ПЭО (4), желатино-глицериновой (5) Результаты, полученные методом диализа in vitro, соотносятся с полученными ранее методом диффузии в агар: оптимальные показатели обеспечивают основы бутирол и витепсол Н-15, которые были использованы в дальнейших исследованиях.

С биофармацевтической точки зрения значительное влияние на технологические и фармакокинетические характеристики лекарственного препарата, содержащего суспендированное вещество, оказывает степень его дисперсности. Размеры частиц исходной (неизмельченной) субстанции азитромицина и измельченной в мельнице марки MJI-1 проанализированы с

10

использованием микроскопа Микмед-1 (вариант 2-20), камеры «Minton» MTV-62 W1P. Установлено, что исходная субстанция полидисперсна, в ней присутствуют частицы размером до 500 мкм. После измельчения получен однородный порошок с размером частиц, не превышающих 10 мкм. При этом основную фракцию составили частицы размером до 5 мкм (92 %).

Влияние степени дисперсности на высвобождение азитромицина из суппозиториев изучено методом диализа in vitro в течение б ч. Результаты свидетельствовали, что уменьшение размера частиц ведет к повышению скорости и полноты высвобождения антибиотика: из суппозиториев на основе бутирол его высвободилось 88,90 %, на основе витепсол Н-15 - 75,18 %. Таким образом, установлена необходимость проведения технологической стадии предварительного измельчения субстанции перед ее введением в основу.

Известно, что на биодоступность лекарственной субстанции влияет наличие в лекарственной форме ПАВ. В таблице 2 представлены результаты высвобождения азитромицина из суппозиториев на основах бутирол и витепсол Н-15 с различным качественным и количественным содержанием ПАВ, полученные методом равновесного диализа, проведенного в течение 2 ч.

Таблица 2 - Влияние ПАВ на высвобождение азитромицина из суппозиториев ( х±Д х, п = 5,р<0,05)

ПАВ Время, ч Содержание ПАВ, %

основа - бутирол основа - витепсол

0,5 | 1 | 2 0,5 | 1 | 2

Высвобождение азитромицина в диализат, %

эмульгатор № 1 0,5 17,14±0,87 19,34±0,73 20,71=Ю,54 14,96±0,82 17,04±0,49 18,42±fl,54

1 28,53±1,13 30,93±0,57 32,28±0,50 23,03±0,69 24,78±0,70 27,73±0,84

1,5 39,39±0,54 40,89±0,60 42,38±0,55 31,19±0,50 32,38iO,43 35,27±0,78

2 47,62±0,74 49,39±0,50 52,12±1,22 39,24±0,76 41,47±0,58 42,92±0,57

эмульгатор Т-2 0,5 17,08±1,14 20,74±1,20 23,48±0,90 16,65±0,31 17,04±0,33 18,92±0,72

1 21,28±1,44 30,4Ш,54 40,56±1,32 21,28±1,0б 23,93i0,83 26,16iO,84

1,5 31,08±1,08 41,9&±1,62 51,48±1,69 30,35±1,38 33,92±0,50 35,43±0,56

2 39,27±1,40 50,37±1,63 62,57±1,71 40,37i0,76 42,49±0,92 44,91i0,98

твин-80 0,5 15,54±0,68 17,21±0,60 20,14±1,14 19,15±0,40 20,26±0,33 20,68i0,46

1 33,63±1,14 37,33±0,81 39,32±0,74 36,89±0,36 37,87±0,50 38,19i0,47

1,5 42,61±1,30 45,82tl,26 49,46±1,14 40,04±0,98 42,71 ±0,73 43,07±0,60

2 52,38±0,84 54,48t0,78 57,58±1,13 45,б8±0,46 47,08i0,79 48,82±0,99

Как следует из представленных данных, рациональным является сочетание бутирола с эмульгатором Т-2, взятого в концентрации 2% и витепсола-Н 15 - с твином-80. Увеличение концентрации твина-80 от 1 % до 2% практически не сказывается на профиле высвобождения азитромицина, поэтому в дальнейших исследованиях его использовали в 1 % концентрации.

Влияние выбранных ПАВ на высвобождение азитромицина изучено методом диализа в течение 6 ч. Установлено, что эмульгатор Т-2 увеличивает полноту высвобождения азитромицина из основы бутирол с 89 % до 96 %, а твин-80 из витепсола - с 75 % до 85 %. Это свидетельствует о целесообразности их введения в состав суппозиторной массы в подобранных концентрациях.

При изучении микробиологической чистоты суппозиториев установлено увеличение общего числа аэробных бактерий и грибов (суммарно), в связи с чем сделан вывод о необходимости введения консервантов. Методом диализа через мембрану в течение 6 ч установлено, что их введение не изменяет профиль высвобождения азитромицина. Не отмечено также статистически достоверного влияния консервантов на антимикробную активность экспериментальных препаратов, о чем свидетельствуют зоны угнетения роста тест-микроорганизмов при проведении исследований методом диффузии в агар.

Таким образом, на основании проведенных исследований разработаны составы и технологическая схема (рисунок 2) производства суппозиториев.

Состав 1 Состав 2

Азитромицина 0,2 г Азитромицина 0,2 г

(ФС 42-0213-07) (ФС 42-0213-07) 0,0011 г

Твина-80 0,015 г Нипагина

(ФС 42-2540-88) (ФС 42-1460-89) 0,0004 г

Нипагина 0,0011 г Нипазола

(ФС 42-1460-89) (ТУ 64-19-83-91) 0,13 г

Нипазола 0,0004 г Парафина

(ТУ 64-19-83-91) (ГОСТ 23683-89) 0,03 г

Витепсола Н-15 1,285 г Эмульгатора Т-2

(ТУ 3-2004) (ФС 42-2689-96) 0,76 г

Жира кондитерского

(ГОСТ 28414-89)

Масла какао 0,38 г

(ГФ X, ст. 486)

ТП-4.1

ТП-5.1

ВР-2.1 Подготовка воздуха <—

ВР-2.2 Приготовление дезрастворов

ВР-2.3 Подготовка помещений, оборудования и технологической тары

ВР-2.4 Подготовка технологической одежды

ВР-2.5 Подготовка персонала

ВР-3.1 Измельчение азитромицина

ВР-3.2 Отвешивание азитромицина, основ, ПАВ и консервантов

Плавление витепсола

или сплавление компонентов бутирола

хп-41 Фильтрация

11 • расплавленной основы

Получение суппозиторной массы (получение концентрата азитромицина, введение в основу, гомогенизация)

ТП-5.2

Дозирование суппозиторной массы и формование суппозиториев

УМО-6.1

Фасовка суппозиториев в контурную ячейковую упаковку

УМО-6.2

Маркировка

вм Кт Кх, к!б Подготовка воды очищенной

I

ВР-2 - Кт, Кб Санитарная обработка производства

ВР-3 Кт Подп ловка сырья

ТП-4 Кт Приготовление основы

ТП-5 Кт, Кх Получение суппозиториев

1

УМО-б Кт, Кх Упаковка и маркировка

! Сточные воды в "Г канализацию

Сточные воды в канализацию

Потери механические, в т.ч. в канализацию

Потери 4. механические, в т.ч. в канализацию

Потери механические, в т.ч. в канализацию

Потери механические на утилизацию

Рисунок 2 - Технологическая схема производства суппозиториев с азитромицином Примечание - ВР - стадии вспомогательных работ; ТП - стадии основного технологического процесса; УМО - стадии упаковки, маркировки; Кт, Кх, Кб - контроль технологический, контроль химический и контроль биологический.

Глава 4 Разработка состава и технологии получения вагинального геля с азитромицином

Обоснование концентрации азитромицина осуществляли по результатам изучения его антимикробной активности в составе геля одного из выбранных для исследования полимеров - натрий карбоксиметилцеллюлозы (Ма-КМЦ). С учетом нормативной документации и данных литературы по содержанию антибиотиков в мазях для вагинального и наружного применения (как правило до 1-2 %) интервал концентраций азитромицина, исследуемый в модельных образцах геля, составил от 0,25 % до 2 %.

Полученные данные эксперимента (рисунок 3) позволяют сделать вывод, что оптимальной концентрацией азитромицина в геле следует считать 1 %, поскольку при ее увеличение до 2 % изменение диаметра ингибирования роста тест-микроорганизмов статистически недостоверно.

30 -

В St. aureus □ В cereus В В. subtilis 0 Е. coli

0,25 0,5 1 2

Содержание азитромицина в модельном геле, %

Рисунок 3 - Антимикробная активность модельных гелей азитромицина Исходя из анализа литературы, с целью выбора основы геля были использованы производные целлюлозы (метилцеллюлоза (МЦ), Ыа-КМЦ) и полиэтиленоксиды (ПЭО) с различной молекулярной массой. В качестве пластификатора вводили глицерин в концентрации 5 % и 10 %. Из исследуемых образцов на основании визуального контроля, удовлетворительных консистентных и осмотических свойств, наиболее приемлемыми оказались глицерогели МЦ и Ыа-КМЦ с содержанием полимера 4 % и глицерогель на

основе ПЭО с молекулярной массой 400 и 1500 в соотношении 6 : 3,5. В указанные основы вводили азитромицин (1 %) и изучали методом диализа через мембрану профиль его высвобождения. Установлено, что большая интенсивность высвобождения характерна для состава, приготовленного на основе 4 % глицерогеля МЦ. Через б ч от начала эксперимента выход азитромицина в диализную среду составил 51,26 % от содержания в исследуемом образце.

Влияние гелеобразователя на высвобождение азитромицина также изучали с использованием диффузии в агар в отношении тест-микроорганизмов St. aureus АТСС 6538-Р, В. cereus АТСС 10702 и Е. coli АТСС 25922. Максимальный диаметр задержки их роста отмечен вокруг образцов геля на основе МЦ. По результатам, полученным методами диализа через полупроницаемую мембрану и диффузии в агар, в качестве оптимальной основы для образования геля был выбран состав, содержащий 4 % МЦ и 10 % глицерина.

Для 4 % глицерогеля МЦ установлена выраженная осмотическая активность, которая была изучена in vitro, в сравнении с контролем - 10% раствором натрия хлорида. За 4 ч эксперимента он абсорбировал около 30 % воды, против 10 % контроля.

Таким образом, глицерогель на 4 % полимере МЦ обеспечивает полноту высвобождения, пролонгированность действия лекарственного вещества и осмотическую активность.

При изготовлении гелей, учитывая свойства растворимости азитромицина, его вводили по типу суспензии, предварительно измельчив а мельнице марки MJI-1. Для равномерного распределения частиц дисперсной фазы и предотвращения их седиментации в геле азитромицин измельчали совместно с твином-80 или натрия лаурилсульфатом, взятых в концентрациях 0,1 %; 0,25 % и 0,5 %. С целью выбора ПАВ и обоснования их концентрации изучали процесс высвобождения антибиотика методом диффузии в агаровый гель в отношении указанных выше тест-культур. Измельчение азитромицина с

натрия лаурилсульфатом не привело к изменению зон ингибирования роста тест-культур. Увеличение антибактериальной активности отмечено при его диспергировании с твином-80 в концентрации 0,25 % и 0,5 %. Однако различия в показателях статистически недостоверны, в связи с чем, в качестве оптимальной выбрана 0,25 %.

Путем микроскопического анализа изучено влияние твина-80 на дисперсность частиц азитромицина в составе геля. Установлено, что присутствие ПАВ не оказывает существенного влияния на степень измельченности твердой фазы. Размеры частиц азитромицина не превышали 10 мкм, при этом фракция до 5 мкм составила 92 % при измельчении без ПАВ и 94 % при измельчении с твином-80. Однако, его добавление способствовало более равномерному распределению и отсутствию слипания диспергированных частиц.

Для исследования микробиологической чистоты экспериментальные образцы геля готовили в условиях асептики и хранили в холодильнике при температуре (5±3) °С. Исследования проводили в соответствии с общей фармакопейной статьей ГФ XII изд. «Микробиологическая чистота». Установлено, что суммарное число аэробных бактерий и грибов в 1 г геля превышает нормируемые показатели. В связи с чем сделан вывод о необходимости введения консервирующего агента, в качестве которого использовали 0,1 % смеси нипагина и нипазола, взятых в соотношении 3:1. По результатам исследований предложен состав и технологическая схема производства (рисунок 4) геля азитромицина.

Твина-80 (ФС 42-2540-88) Нипагина (ФС 42-1460-89) Нипазола (ТУ 64-19-83-91)

Азитромицина (ФС 42-0213-07)

Метилцеллюлозы (ТУ-64-11-129-92) Глицерина (ФС 42-2202-99) Воды очищенной (ФС 42-2619-97)

1,0 г 0,25 г 0,025 г 0,075 г 4,0 г 10,0 г

до 100 мл

Рисунок 4 - Технологическая схема производства геля с азитромицином Примечание - ВР - стадии вспомогательных работ; ТП - стадии основного технологического процесса; УМО - стадии упаковки, маркировки; Кт, Кх, Кб - контроль технологический, контроль химический и контроль биологический.

ГЛАВА 5 Оценка качества и стабильности лекарственных форм азитромицина локального действия

Важным в исследовании лекарственных препаратов является наличие точной и высокочувствительной методики количественного определения лекарственного вещества. Для количественного анализа азитромицина в суппозиториях и гелях адаптирована методика ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием при длине волны 210 нм. Исследования проводили на жидкостном хроматографе «вН^ОМ», колонка ИБК^еЮВ-г Р\У. В качестве подвижной фазы использовали 0,05 М раствор калия фосфата двузамещенного в смеси вода : ацетонитрил (9:11), скорость ее потока - 0,5 мл/мин. Последовательно хроматографировали по 25 мкл испытуемого раствора, полученного из лекарственной формы, и раствора государственного стандартного образца азитромицина. Время выхода пика азитромицина около 9 минут. Проведена валвдация разработанной методики количественного определения по показателям: специфичность, линейность, правильность, сходимость, диапазон аналитического метода (таблица 3).

Таблица 3 - Результаты валидационной оценки методики количественного

определения азитромицина методом ВЭЖХ

Тестируемый параметр Принятый критерий Полученный результат Соответствие установленно му критерию. Да/Нет

Специфичность При сравнении времени выхода пика азитромицина на хромато-грамме испытуемого раствора с аналогичным параметром пика на хроматограмме раствора ГСО должны отсутствовать отклонения более чем на 5 %. Отсутствуют Да

Линейность растворов модельных смесей г >0,950 г =0,995 Да

Правильность (в диапазоне 80-120%) 11=98,0-102,0 % 1 - 100,17-100,63% 2-98,67-98,96% 3 - 99,83-100,79% Да

Сходимость (повторяемость) (п=5) СУ <; 2,0 % 1-1,23%; 2-0,92%; 3 -1,40 % Да

Диапазон аналитического метода 80 -120 % от номинального 80 - 120 % от номинального Да

Примечание - испытуемый раствор, полученный из: 1 - суппозиториев на основе витепсол; 2 - суппозиториев на основе бутирол; 3 - геля на основе метшщеллюлозы

Для идентификации азитромицина предложена методика тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинах «БогЬШ», с использованием систем хлороформ - ацетон - аммиака раствор концентрированный 25 % (1:5:0,5) и хлороформ - этанол - аммиака раствор концентрированный 25 % (1:1:0,5). Значения коэффициентов подвижности М азитромицина в указанных системах составили 0,83±0,02 и 0,79±0,02, соответственно. Чувствительность методики определения - 2 мкг азитромицина.

Полученные методом выливания на двух основах суппозитории оценивали по показателям нормативной документации: суппозитории однородные, белого (на витепсоле) или белого с желтоватым оттенком (на бутироле) цвета, торпедовидной формы, без механических включений, средней массой 1,5 г ± 5 %, с размером частиц азитромицина не более 10 мкм. Температура плавления суппозиториев на бутироле - (35,5±0,5) °С, на витепсоле - (36,4±0,5) °С; время полной деформации - 10,0±1,0 мин и 11,0±2,0 мин; значение рН водной вытяжки - 6,0-6,8 и 6,5-7,2, соответственно. Содержание азитромицина в суппозиториях на основе бутирол и витепсол находится в пределах 96,77 % - 99,01 % и 96,75 % - 100,17%, соответственно. Подлинность азитромицина подтверждается методами ВЭЖХ и ТСХ по соответствию времени выхода и значению ЯГ исследуемых образцов стандарту. При использовании прибора «Вращающаяся корзинка» (тест «Растворение») -за 45 мин из суппозиториев на основе бутирол в среду растворения (0,05 М раствор калия фосфата двузамещенного в смеси ацетонитрил : вода 11:9, объем 500 мл) переходит не менее 75 % азитромицина, из суппозиториев на основе витепсол - не менее 80 %. Суппозитории обладают антибактериальной активностью в отношении исследуемых тест-штаммов микроорганизмов, их микробиологическая чистота соответствует требованиям ГФ XII изд.

Установлено, что в процессе хранения суппозиториев в течение 30 мес (срок наблюдения) все показатели качества соответствовали нормативу.

Для оценки геля азитромицина его фасовали по 10 г в алюминиевые тубы с лаковым покрытием и исследовали стабильность в процессе хранения при

температуре (5±3) °С. Полученный гель представляет собой однородную, полупрозрачную массу белого цвета без запаха. Значение рН водного 10 % раствора 6,6 - 7,4, размер частиц азитромицина не превышает 10 мкм. Гель термо- и коллоидностабилен. Количественное содержание находится в пределах 97,02 % - 100,02 %. Подлинность подтверждена методами ВЭЖХ и ТСХ. Гель обладает антибактериальной активностью, по микробиологической чистоте соответствует требованиям ГФ XII изд. Указанные характеристики соответствовали нормируемым требованиям в течение всего срока наблюдения (30 мес), что свидетельствует о стабильности разработанного геля.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основные итоги выполненного диссертационного исследования сводятся к следующим основным положениям:

1. На основании биофармацевтических исследований и изучения технологических параметров разработаны состав и технология суппозиториев с противомикробным препаратом группы макролидов - азитромицином для лечения урогенитальных инфекционных заболеваний. Для суппозиториев промышленного производства рекомендована основа витепсол Н-15, экстемпорального изготовления - бутирол.

2. На основании комплексных исследований разработан состав и технология геля с азитромицином, обладающего широким спектром противомикробной активности, предназначенного для интравагинального применения. В качестве основы геля предложена композиция МЦ с

добавлением глицерина.

3. По результатам изучения высвобождения азитромицина из состава лекарственных форм, полученных методами диализа через мембрану и диффузии в агаровый гель с тест-микроорганизмами, доказана целесообразность введения ПАВ: в состав суппозиториев на основе витепсол -твина-80, на основе бутирол - эмульгатора Т-2, в состав геля - твина-80. Микробиологическая стабильность препаратов обеспечена добавлением консервантов нипагина и нипазола в соотношении (3:1).

4. Разработана методика количественного анализа азитромицина в суппозиториях и геле с использованием метода ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием при длине волны 210±2 нм. Относительная ошибка определения в суппозиториях на основе витепсол составила 1,74 %, на основе бутирол - 1,15 %, в геле на основе МЦ - 1,53 %.

5. Для качественного анализа разработанных суппозиториев и геля, а также подтверждения их стабильности предложена методика ТСХ с использованием двух систем растворителей: хлороформ - ацетон - аммиака раствор концентрированный 25 % (1:5:0,5) и хлороформ - спирт этиловый -аммиака раствор концентрированный 25 % (1:1:0,5).

6. По показателям нормативной документации осуществлена оценка качества и изучена стабильность суппозиториев и геля с азитромицином. Установлено соответствие разработанных лекарственных препаратов нормативным требованиям и их стабильность в процессе хранения, что позволило установить сроки годности суппозиториев и геля - 2 года и рекомендации к их хранению - при температуре (5±3) °С.

7. На разработанные лекарственные формы подготовлена нормативная документация: проект ФСП «Азитромицина суппозитории вагинальные на витепсоле Н-15, 200 мг» и лабораторный регламент производства суппозиториев с азитромицином на витепсоле Н-15.

Результаты данного диссертационного исследования могут быть рекомендованы для использования в фармацевтической и медицинской практике с целью расширения ассортимента лекарственных препаратов антимикробного действия для местного применения.

Перспективы дальнейшей разработки темы диссертационного исследования заключаются в совершенствовании технологической схемы производства, разработки на ее основе опытно-промышленного регламента и продолжении внедрения предложенных лекарственных препаратов азитромицина.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кедров, С.И.| Применение азитромицина в терапии инфекционных

урогенитальных заболеваний / С.И. Кедров, Т.А. Бредихина // Теория и практика фармации : сборник научных статей, посвященный 90-летию ВГМА им. H.H. Бурденко. - Воронеж, 2009. - С. 114 -117.

2. Бредихина, Т.А. Влияние измельченности азитромицина на его высвобождение из суппозиториев / Т.А. Бредихина, С.С. Пашенцева // Материалы V Всероссийской Бурденковской студенческой научной конференции. - Воронеж, 2009. -Том И. - С. 994 - 996.

3. Бредихина, Т.А. Изучение совместимости компонентов в разрабатываемых суппозиториях методом тонкослойной хроматографии /

Т.А. Бредихина, Т.А. Панкрушева, С.И. Кедров // Биотехнология. Биомедицинская инженерия и технология современных социальных практик : сборник трудов Всероссийской научно-практической конференции. - Курск, 2009.-С. 109-111.

4. Панкрушева, Т.А. Разработка офтальмологического геля с азитромицином / Т.А. Панкрушева, Т.А. Бредихина // «Современные наукоемкие лечебные и фармацевтические технологии для офтальмологии» для молодых ученых» : сборник материалов Всероссийской школы-семинара. -Белгород, 2009. - С. 100 - 103.

5. Бредихина, Т.А. Хроматографическое определение азитромицина в разрабатываемых лекарственных формах для местного применения / Т.А. Бредихина // Вестник молодежного инновационного центра. - Воронеж,

2009. - Выпуск II. - С. 6-8.

6. Бредихина, Т.А. Разработка и исследование вагинальных суппозиториев с азитромицином / Т.А. Бредихина И Материалы IV Международной научной конференции молодых ученых-медиков. - Курск,

2010.-Том I.-C. 172- 174.

7. Бредихина, Т.А. Спектрофотометрическое определение азитромицина в лекарственных формах для местного применения / Т.А. Бредихина, Т.А. Панкрушева // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Поиск новых физиологически активных веществ : материалы 4-й Всероссийской с международным участием научно-методической конференции «Фармобразование - 2010». - Воронеж, 2010. - Часть II. - С. 73 - 74.

8. Бредихина, Т.А. Выбор основообразующей композиции для суппозиториев с азитромицином / Т.А. Бредихина, С.С. Пашенцева // Материалы VI Всероссийской Бурденковской студенческой научной конференции, посвященной 65-летию Победы в Великой Отечественной войне. - Воронеж, 2010. - Том I. - С. 469 - 471.

9. Бредихина, Т.А. Разработка и анализ суппозиториев антимикробного действия, содержащих азитромицин / Т.А. Бредихина, Т.А. Панкрушева, O.A. Медведева // Человек и лекарство : сборник материалов конгресса (тезисы докладов). - Москва, 2010. - С. 585.

Ю.Панкрушева, Т.А. Оценка качества разработанных суппозиториев с азитромицином // Т.А. Панкрушева, Т.А. Бредихина // Разработка исследование

и маркетинг новой фармацевтической продукции : сборник научных трудов. -Пятигорск, 2011. - С. 438 - 439.

Н.Бредихина, Т. А. Влияние дисперсности азитромицина на его высвобождение из лекарственных форм локального действия / Т.А. Бредихина, Д.В. Василенко, Т.А. Панкрушева // Современные аспекты разработки и совершенствования состава и технологии лекарственных форм : сборник научных трудов. - Курск, 2011. - С. 36 - 39.

12.Панкрушева, Т.А. Исследования по разработке интравагинальных суппозиториев с азитромицином для лечения урогенитальных инфекционных заболеваний / Т.А. Панкрушева, Т.А. Бредихина, O.A. Медведева // Забайкальский медицинский вестник.-2011,-№2.-С. 146- 155.

13.Бредихина, Т.А. Разработка хроматографической методики анализа азитромицина и ее использование при оценке качества и стабильности лекарственных форм локального действия / Т.А. Бредихина, Т.А. Панкрушева // Научные ведомости Белгородского государственного университета. - 2011. - № 22 (117). - Выпуск 16/2. - С. 195 - 199.

14.Разработка геля с азитромицином для лечения урогенитальных инфекционных заболеваний / Т.А. Бредихина [и др.] // Вестник новых медицинских технологий. - 2011. - Том XVIII, № 4. - С. 177 - 179.

15.Панкрушева, Т.А. Микробиологические исследования при разработке геля с азитромицином / Т.А. Панкрушева, Т.А. Бредихина, O.A. Медведева // Традиции и инновации фармацевтической науки и практики : материалы Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 45-летию фармацевтического факультета КГМУ. - Курск, 2011. -С. 231 -233.

16. Биофармацевтические исследования при разработке технологии лекарственных форм азитромицина локального действия / Т.А. Панкрушева, Т.А. Бредихина [и др.] // Биофармацевтические особенности создания лекарственных препаратов в аспекте их медицинского использования : материалы научно-практической интернет-конференции. - Харьков, 2011. -С. 30.

17.Панкрушева, Т.А. Изучение стабильности суппозиториев с азитромицином / Т.А. Панкрушева, Т.А. Бредихина // Человек и лекарство : сборник материалов конгресса (тезисы докладов). - Москва, 2012. - С. 410.

18.Панкрушева, Т.А. Биофармацевтические аспекты изучения влияния поверхностно-активных веществ на качество разработанного геля с азитромицином / Т.А. Панкрушева, Т.А. Бредихина // Разработка исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сборник научных трудов. -Пятигорск, 2012. - С. 186 - 188.

19.Бредихина, Т.А. Биофармацевтические исследования при разработке суппозиториев с азитромицином / Т.А. Бредихина, Т.А. Панкрушева // Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики : материалы Всероссийской научно-практической конференции. - Владикавказ. - 2013. -С. 237 - 243.

Бредихина Татьяна Александровна

ФАРМАКОТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ПО РАЗРАБОТКЕ И ИЗУЧЕНИЮ СТАБИЛЬНОСТИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ С АЗИТРОМИЦИНОМ

14.04.01 - технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати «05» октября 2013 г. Формат 60x84 1/16. Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печатл. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № ¿160

Отпечатано в типографии ООО «Компир» 394036, г. Воронеж, ул. Степана Разина, 38, Тел. (473) 250-29-92