Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологический анализ применения наружных лекарственных форм метронидазола при экспериментальном воспалении

□03485184

НА ПРАВАХ РУКОПИСИ

Гусоева Олеся Валерьевна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРИМЕНЕНИЯ НАРУЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ МЕТРОНИДАЗОЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ВОСПАЛЕНИИ

14.00.25 - ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

КУРСК - 2009

2 б ноя 2009

003485184

Работа выполнена в ГУ «Научный центр биомедицинских технологий» Российской Академии Медицинских Наук

Научные руководители:

доктор биологических наук Сергиенко Аэлита Валерьевна доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН Каркищенко Николай Николаевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ Резников Константин Михайлович

доктор медицинских наук, профессор Яворский Александр Николаевич

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

•JA

Защита состоится «11» декабря 2009 г. В 13 часов на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса,3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан "10" ноября 2009г. Учёный секретарь

диссертационного совета Пашин E.H.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

В настоящее время, несмотря на появление новых, все более эффективных препаратов, методов лечения и диагностики, и все большую осведомленность населения относительно дерматологических заболеваний, не наблюдается значительного снижения общего количества больных дерматозами различной этиологии. Поэтому очень остро стоят проблемы эффективности и доступности дермато-протекторной терапии и профилактики дерматологических заболеваний и их осложнений. При осложненных инфекциях рекомендуются препараты группы нитроимидазола. Родоначальником препаратов нитроимидазольной структуры, не потерявшим свою значимость, и по сей день является метронидазол - один из высокоактивных лекарственных препаратов с выраженным влиянием на смешанные инфекции, осложненные анаэробными инфекциями. По данным ВОЗ (2001 г.), однократный прием 2,0 г этого препарата приводит к излечению у 88% дерматовенерологических больных [Inceboz Т., 2004, Европейские стандарты диагностики и лечения заболеваний, передаваемых половым путем., 2006.; Забиров, К., 2008г.].

Комплексное применение метронидазола с иммуномодулирую-щими и антисептическими препаратами в настоящее время является актуальной и широко дискутируемой проблемой [A.A. Кубанова, 2006, Шестопалов А.Е., 2005г.]. В частности, имеются клинически доказанные и экспериментально обоснованные факты целесообразности сочетания метронидазола с полиоксидонием и хлоргексидином в стоматологии и хирургии для купирования воспаления [Нисанова С. Е.,2009г, Завадский Р.В. 2008г].

В связи с этим очевидный практический интерес представляют препараты, активные в отношении анаэробных микроорганизмов, и среди них новые разрабатываемые отечественные лекарственные

формы уже известных препаратов: аэрозоль нитазола, раствор метронидазола [Нисанова С. Е., 2009г.].

Не достаточно изучена возможность использования метронида-зола в наружных лекарственных формах комбинированного состава. В доступной литературе сведений о сочетании метронидазола с микробиологическим ß-каротином в виде мазевой композиции и препаратов, аппретированных на волокнистых материалах для нужд современной дерматологии нет. Это послужило основой для комплексиро-вания метронидазола с ß- каротином.

В этой связи, изучение биологической активности предлагаемых наружных лекарственных форм метронидазола - олеогеля и тканевых аппретов представляется особенно актуальным и перспективным.

С появлением новых методов анализа, технологии, биомоделирования многие лекарственные препараты, давно и хорошо изученные, вновь привлекают внимание ученых в связи с открывающимися возможностями их применения [Каркищенко H.H., 2008]. Комплекси-рование метронидазола с препаратами других фармакологических групп с разным механизмом действия (каротиноиды, антисептики) способно обеспечить потенцированный синергизм, что позволит снизить дозу и лекарственную нагрузку на организм при оптимизации фармакологического эффекта [Сергиенко A.B., Ивашев М.Н. 2007г., Сергиенко В.Б. 2006г.]. В практической медицине традиционно достаточно одностороннее применение препарата метронидазола не позволяет полностью использовать его скрытые резервы фармакологического эффекта при экономической доступности. В литературе недостаточно данных об использовании метронидазола в качестве дермато-протекторного лекарственного средства при неинфекционных воспалениях кожи. В настоящем исследовании ставится проблема изучить метронидазол и его комплексные варианты с микробиологическим ß-каротином и антисептиком хлоргексидином на заживление ран и воспалительных процессов инфекционной и неинфекционной этиологии в коже экспериментальных животных и провести оценку кинетики в

4

очаг воспаления. Для своевременной диагностики и терапии воспалительного процесса независимо от его топографии и стадии необходимы фармакологически активные средства с максимальной фиксацией в воспалительном очаге и в этом плане метронидазол перспективен.

Лекарственные формы метронидазола: таблетки, суппозитории вагинальные, раствор для инфузий; гель для местного применения представлены преимущественно зарубежными производителями. Импортные медикаменты отличаются высоким не только качеством, но и ценой. Метронидазол (дженерик) и микробиологический Р-каротин -субстанции отечественного производства. На их основе были изготовлены лабораторные образцы наружных лекарственных форм: геля на липофильной основе и аппреты на тканевом носителе. Актуальность исследований связана с необходимостью создания отечественных наружных лекарственных средств, обладающих дерматотропной активностью комбинированных по составу с поливалентным механизмом действия, проявляющих противовоспалительный, ранозаживляющий и антибактериальный эффект.

Исследования по фармакологическому изучению мазевой композиции (олеогеля) метронидазола с микробиологическим (5-каротином и тканевых аппретов с метронидазолом, хлоргексидином и Р-каротином актуально, своевременно и перспективно.

Цель исследования Фармакологическое обоснование применения наружных лекарственных форм метронидазола с микробиологическим Р-каротином: геля и тканевых аппретов при моделированном воспалении.

Задачи исследования I. Установить противовоспалительную активность мазевой композиции (олеогеля) и тканевых аппретов метронидазола с микробиологическим Р-каротином на острое экссудативное воспаление, индуцированное инъекцией каррагенина и асептическое субхроническое воспаление кожи, индуцированное имплантацией под кожу

ватного шарика. Изучить кинетику метронидазола в воспалительный очаг крыс с применением радиологических методов.

2. Изучить ранозаживляюрую активность мазевой композиции (олео-геля) метронидазола с микробиологическим ß-каротином и тканевых аппретов метронидазола с ß-каротином и хлоргексидином по влиянию на заживление термического повреждения кожи крыс и кроликов на модели ожоговой раны по снижению ее площади и на модели линейной кожной раны тензиометрически.

3. Экспериментально изучить фармакотерапевтическую эффективность мазевой композиции (олеогеля) и тканевых аппретов метронидазола с ß-каротином в отношении лабораторных штаммов бактерий in vitro (метод серийных разведений, метод диффузии в агар) и in vivo на моделях гнойных ран у кроликов, инфицированных госпитальными штаммами, выделенными из патологического материала больных с гнойно-воспалительными процессами.

4. Изучить токсикологические свойства изучаемых наружных лекарственных форм метронидазола с микробиологическим ß-каротином: мазевой композиции (олеогеля) и тканевых аппретов, на лабораторных животных: острая токсичность in vivo на мышах, степень раздражающего действия in situ ХЕТ KAM - тестом на куриных эмбрионах, in vivo на переднем сегменте глаза млекопитающих; тканевых аппретов in vivo методом Draize-test кроликах (кожная проба).

База для проведения исследований

ГУ Научный центр биомедицинских технологий РАМН (г. Москва); Пятигорская государственная фармацевтическая академия (г. Пятигорск); Научно - производственный кардиологический комплекс (г. Москва). Тема диссертационной работы утверждена в ГУ Научный центр биомедицинских технологий РАМН 15 декабря 2008 года, протокол №10.

Научная новизна исследований

Впервые выявлена противовоспалительная, ранозаживляющая, антибактериальная активность комплекса, заключенного в липофиль-ный гель, содержащий метронидазол, микробиологический р-каротин и жирные полиненасыщенные кислоты.

Впервые изучено и предложено сочетание метронидазола и микробиологического Р-каротина с хлоргексидином, обладающее выраженным противоожоговым, противовоспалительным и антимикробным действием, оформленное в тканевые аппреты. Экспериментально установлен оптимальный образец ткани для изготовления аппретов с оптимальными адсорбционными свойствами -лигниновое полотно.

Научно - практическая значимость исследования

• Результаты проведенного фармакологического изучения комплексных лекарственных форм метронидазола с микробиологическим Р-каротином (олеогель), метронидазола с микробиологическим р-каротином и хлоргексидином (тканевые аппреты) в условиях экспериментальной патологии, свидетельствуют о выраженном противовоспалительном, противоожоговом, ранозаживляющем, антимикробном действии предлагаемых лекарственных средств, указывают на перспективность их применения в терапии воспалительных заболеваний в дерматологии и хирургии.

• Способность метронидазола накапливаться в зоне воспаления, установленная радиобиологическим методом, дает возможность использовать его в медицинской практике, как с целью диагностики, так и мониторинга терапии воспалительных процессов в дерматологии.

Объем и структура диссертации

Работа выполнена на 131 стр. текста компьютерного набора, иллюстрирована 27 таблицами, 6 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований. Список цитируемой литературы содержит 194 источника литературы, из которых 44 иностранных источников.

Апробация и публикация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы доложены на XV, Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", (г. Москва, 2008г.), на 63 ежегодной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2008г.); на Конгрессе иммунологии и аллергологии (г. Паттайа, Таиланд, 2007г.); на международной конференции «Физиология и патология иммунной системы», IV Международной конференции по иммунотерапии, (г.Москва, 2008г.).

Публикации

По теме кандидатской диссертации опубликовано 7 научных работ, 3 из которых входят в журналы, рекомендованные ВАК.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследование проводилось с 2006 по 2009 год в Научном Центре биомедицинских исследований (г. Москва) и Пятигорской государственной фармацевтической академии (г. Пятигорск). Для решения поставленных задач использовался комплекс современных и модифицированных методик, что позволило исследовать наружные лекарственные формы метронидазола на экспериментальное воспаление кожи различного генеза, получить количественные и динамические характеристики. Острое экссудативное воспаление моделировали введением 1% р-ра каррагенина в количестве 0,1 мл субплантарно дорсовен-трально в правую заднюю конечность крыс. Противовоспалительную эффективность исследуемых образцов мазей рассчитывали по формуле [Тринус Ф.П., 1985г., Мотов A.A. 2005г.]:

Vk — V0

Р =-• 100%;

Vk

где: Р - процент угнетения воспаления, vk - среднее увеличение объема отечной лапки в контроле, v0 - среднее увеличение объема отечной лапки у леченых животных.

Субхроническое пролиферативное воспаление моделировали имплантацией инородного тела под кожу мышей - ватной гранулемы массой 15 мг. Олеогель^аносили животным накожным способом, не втирая ежедневно в течение 7 дней. О величине экссудативной фазы воспаления судили по разнице в массе (мг) шарика до и после высушивания, о величине пролиферативной фазы - по разнице в массе (мг) высушенного шарика и его исходной массы. [Фисенко В.П, 2000].

Кинетику метронидазола определяли, интегрируя каолиновое воспаление, имплантацию ватного шарика и радиоизотопные методы: сцинтиграфия и прямая радиометрия очага воспаления крыс.

Ранозаживляющая активность олеогеля и аппретов оценивалась по следующим параметрам: тензиометрия линейной раны кожи крыс; скорость заживления и площадь ожогового повреждения, моделированного контактным методом. Антибактериальная активность олеогеля и аппретов оценивалась in vitro методом диффузии в агар (для оценки активности олеогеля применяли метод колодцев, для оценки активности аппретов применяли метод тканевых дисков); серийных разведений и in vivo моделированием гнойных ран кроликов с использованием госпитальных штаммов микроорганизмов. Токсикологическую оценку олеогеля определяли по раздражающей активности на куриных эмбрионах, на переднем сегменте глаза морских свинок и аппретов скарификацией кожи кроликов, атрибутом острой токсичности и ЦНС-токсичности олеогеля метронидазола на мышах. Препараты сравнения из разных фармакологических групп были выбраны не случайно, с целью продемонстрировать широкий фармакодинамиче-ский диапазон олеогеля и тканевых аппретов: мазь индометацина (Balcanpharma, Болгария), мазь метилурацила 10% производства «Нижфарм» (Россия), облепиховое масло жидкое производства "Ал-тайвитамины" (Россия), мазь Клион (Гедеон Рихтер, Венгрия)

Статистическая обработка полученных результатов проводилась с использованием т-критерия Стьюдента, в пакете компьютерной программы Microsoft Excel Ver 9, 2000

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

По результатам предпочтений дерматологов, полученных на основании опроса врачей и изучения медицинского документооборота, наиболее эффективные препараты, имеющие перспективный спрос и благоприятную конъюнктуру были включены в рациональный комплекс, который был заключен в лекарственные формы - липофиль-ный гель и тканевые аппреты, что и стало объектом для дальнейших экспериментальных исследований.

Официально выпускаемые каротин - содержащие препараты -облепиховое масло, масло шиповника и калины и др. [А.Н.Богданов, 2008] являются суммарными, не имеют общих методов стандартизации и зависят от сорта растительного сырья и качества растительного масла, используемого в качестве растворителя. Использование растительных источников каротинов зависит от различных факторов: сезонность, территория произрастания растительных объектов, сорт. При применении этих лекарственных форм сложно контролировать точность дозирования. Доступность, дешевизна, освоенный промышленностью выпуск, безотходная технология, высокая фармакологическая активность микробиологического Р-каротина говорит в пользу расширения его использования в медицинской практике.

ТАБЛИЦА 1 - РЕЗУЛЬТАТЫ ПРЕДПОЧТЕНИЙ ДЕРМАТОЛОГОВ КМВ о МРТРОНИЛАЗОЛ. РУЛИД. АЦИКЛОВИР, ЛЕВОМИЦЕТИН, ЦЕФАЛЕКСИН, СОЛКОДЕРМ, Р-Р САЛИЦИЛОВОЙ КИСЛОТЫ, ИОДА, КАРОТИНСОЛКРЖАТПИР ПРЕПАРАТЫ. ЛАМИЗИЛ. НИЗОРАЛ. ХЛОРГЕКСИДИН- наиболее эффективные ЛС, имеющие перспективный спрос и благоприятную конъюнктуру, о РИБАВИРИН, КЕТОКОНАЗОЛ, МИКОСЕПТИН, ОРУНГАЛ, НИСТАТИН, РОАККУТАН, ФГОРОКОРТ, ГИДРОКОРТИЗОН -достаточно эффективные, но имеющие неблагоприятную конъюнктуру, тенденции стабилизации или снижения спроса, о АЛПИЗАРИН, УНДЕЦИН, КЛАЦИД, МИКОЗОЛОН, ЗИНЕРИГ, АЗЕЛАИНОВАЯ КИСЛОТА - не пользуются спросом, либо же имеют серьёзные побочные эффекты.

РАЦИОНАЛЬНЫЙ КОМПЛЕКС

Кафедра О ЭФ ПятГФА. проф. В. В. Гаи, ан 20 07а.

КафеОра УЭФ ФПО ПятГФА. проф. С.А. Парфейникое 2008г.

Лабораторные образцы лекарственных форм: мазевая композиция (олеогель), гель - плацебо, тканевые аппреты были изготовлены под руководством доктора фармацевтических наук, профессора кафедры технологии лекарств Пятигорской государственной фармацевтической академии (г.Пятигорск). Э.Ф. Степановой и доктора биологических наук, кандидата фармацевтических наук, профессора кафедры фармакологии Пятигорской государственной фармацевтической академии (г.Пятигорск) А.В.Сергиенко. Олеогель с метронидазолом и тканевые аппреты содержат р-каротин, полученный методом микробиологического синтеза из триспоровых грибов В1акез1еа Цтзрога и комплекс жирных полиненасыщенных кислот. Раствор Р-каротина в растительном масле в концентрации 1% известен под торговым наименованием «Каролин» и применяется в качестве источника провитамина А Р-каротина. Тканевые аппреты представляют собой салфетки размером 9x12 см, пропитанные 0,5% водным раствором метрони-дазола, 0,5%водным раствором хлоргексидина и масляным раствором р-каротина. Олеогель представляет собой желеобразную мазевую композицию с характерным для Р-каротина оранжевым оттенком, легко наносится на кожу.

ТАБЛИЦА 2 - СОСТАВ ПРЕДЛАГАЕМЫХ НАРУЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ

ФОРМ МЕТРОНИДАЗОЛА

СОСТАВ ГЕЛЯ: НА 100 г СОСТАВ ТКАНЕВЫХ АППРЕТОВ (НА 1 САЛФЕТКУ):

Метронидазол - 1 % 0,1 % Масляный раствор Р-каротина (Каролин) -0,1% Бутилокситолуол - 0,01 % Аэросил 12,94% Масло растительное 85,95% Ткань размером 9x12 см. Хлоргексидина биглюконата 0,5% р-р водный - 1,6 мл Метронидазол 0,5% р-р водный - 1,6 мл Раствор 0,1 % микробиологического Р-каротина в растительном масле (Каролин) 0,008-0,011 мл

Противовоспалительную активность олеогеля определяли по двум моделям: острое экссудативное воспаление с использованием каррагенинового отека конечности крыс и субхроническое экссуда-

тивно-пролиферативное воспаление с применением имплантации инородного тела под кожу мышей (ватная гранулема). На модели кар-рагенинового отека изучали противоэкссудативное действие олеогеля по динамике объема лапки крысы через 3 часа и через сутки после индукции. Прирост объема лапки составлял степень выраженности экссудации. Начальный объем лапки животных с моделированным отеком, не получившими лечения составил 1,01 мл, через 3 часа 1,61 мл, окончательный объем лапки 1,16 мл. Прирост объема лапки нелечен-ных животных составил через 3 часа 0,6 мл ± 0,02, через сутки прирост объема лапки от начального объема составил 0,15± 0,01. мл. Основа геля (плацебо) практически противоэкссудативного действия не оказала, прирост объема лапки составил 0,5 ± 0,02 мл через 3 часа и 0,15 в конце эксперимента (через сутки). Исследуемый олеогель мет-ронидазола с Р-каротином проявил выраженное противоэкссудативное действие: снижение стадии экссудации отмечалось как через 3 часа, так и через сутки после индукции экспериментального воспаления. Через 3 часа эксперимента действие олеогеля метронидазола с (3-каротином обеспечило выраженное достоверное угнетение экссуда-тивной фазы воспаления: отек был на 30,34% меньше, чем в контроле (нелеченные животные). А через сутки этот показатель был меньше показателя контрольной группы (нелеченные животные) на 16,01% (р<0,05). Этот результат не отличался достоверно от показателей группы сравнения (мазь индометациновая) через 3 часа прирост объема лапки составил в этой группе 15,31%, что достоверно отличалось от показателей нелеченных животных на 44,1% и не отличалось достоверно от показателей опытной группы, получившей гель метронидазола с р-каротином (разница 13,76%).

При использовании изучаемого олеогеля метронидазола с р-каротином на фоне моделированного экссудативного воспаления крыс наблюдалась положительная динамика всех симптомов моделированной воспалительной реакции: кроме достоверного снижения отека,

отмечалось снижение гиперемии и нормализация температуры воспаленной конечности крыс. Таким образом, изучаемая многокомпонентная наружная лекарственная форма проявила выраженный противовоспалительный эффект, достоверно не отличаясь от классического противовоспалительного препарата - мази индометациновой.

ТАБЛИЦА 3 -ДИНАМИКА ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО ОТЕКА, ПОЛУЧЕННАЯ ПО ОБЪЕМУ ВЫТЕСНЕННОЙ ВОДЫ В _АБСОЛЮТНЫХ ЕДИНИЦАХ (МЛ)

Группы животных Объем лапки исходный % Р Объем лапки через 3 часа Объем лапки через сутки

Нелеченные животные, п=6 1,01 ±0,05 1,61 ±0,2 1,16±0,05

Животные, получившие изучаемый гель, п=6 0,86±0,03 14,85 р>0,05 1,11+0,2 0,85±0,05

Животные, получившие гель-плацебо п=б 0,87±0,03 13,86 р>0,05 1,39±0,03 1,02±0,05

Животные, получившие мазь индометаци-новую 4=6 0,98+0,03 -2,97 р>0,05 1,13+0,03 0,96±0,03

Р - показатель достоверности отличий к объему лапок на исходном уровне к группе нелеченных животных (контроль); % - к показаниям нелеченных животных; п= количество животных

Для оценки степени выраженности противовоспалительного эффекта необходимо было рассчитать индекс противовоспалительной эффективности изучаемого олеогеля, геля-плацебо и препарата сравнения. Индекс противовоспалительной эффективности исследуемых образцов мазей составила:

Р геля метронидазол+каролин=[(0,6-0,25)/0,6] * 100%=58,33% Р гель-плацебо = [(0,6-0,5)/0,6]*100%=16,67% Р мази индометацина=[(0,6-0,15/0,6]*100%=75,0% Противовоспалительная активность мазевой композиции (олеогеля) 58,3% обеспечивается входящими в него компонентами, что объясняется тем, что гель-плацебо проявил меньшую эффективность в 3,49 раза. Результаты представлены на рисунках 1 и 2.

ьЧИЙРД

и&хЩбЗс

РИСУНОК 1 - ВЛИЯНИЕ ОЛЕОГЕЛЯ НА ЭКССУДАТИВНУЮ СТАДИЮ ОСТРОГО ВОСПАЛЕНИЯ КОНЕЧНОСТИ КРЫС (КАРРАГЕНИНОВЫЙ ОТЕК)

39

38,5

38

37,5

37

иС . 38,55

38,1 ^^ . 38,05

37 95 37,75 .37,7

1 I I

■гель

Ж*

3 часа. -О-гель плацебо

24 часа ■контроль

РИСУНОК 2 - ВЛИЯНИЕ ОЛЕОГЕЛЯ НА ДИНАМИКУ ТЕМПЕРАТУРЫ ПРИ ОСТРОМ ВОСПАЛЕНИИ КОНЕЧНОСТИ КРЫС (КАРРАГЕНИНОВЫЙ

ОТЕК)

Для моделирования субхронического воспаления кожи мышей использовали модель cotton pellet - имплантации инородного тела под кожу в асептических условиях. Результаты см. таблица 4.

ТАБЛИЦА 4 -ВЫРАЖЕННОСТЬ СТАДИИ ЭКССУДАЦИИ И _ ПРОЛИФЕРАЦИИ_

Группы животных Стадии воспаления

экссудация % пролиферация %

Нелеченные животные, п=6 46,8+0,4 100% 9,3±0,21 100%

Животные, получившие изучаемый олеогель, п=6 36,7+0,3 78,41% 7,3±0,22 75,38%*

Животные, получившие олеогель-плацебо п=6 40,5±0,2 86,54% 11,07+0,18 119,03%

Животные, получившие мазь индо-метациновую п=6 37,2+0,3 79,49%* 7,01 ±0,11 78,49%*

Примечание: Высушивание шарика до постоянной массы проводили в сушильном шкафу при (I 50 °С). * - достоверность к контролю (нелеченные животные).

На 8е сутки после ежедневного нанесения олеогеля метронида-зола с р-каротином, олеогеля-плацебо и препарата сравнения (мазь индометациновая) на кожу спинки мышей ватный шарик с образовавшейся вокруг него грануляционной тканью был извлечен под общим наркозом. У контрольной группы животных, которыми являлись мыши с моделированным воспалением, но не получившими препарат, также были извлечены шарики. Сразу после извлечения шарики взвешивали, затем после достижения ими постоянной массы взвешивали повторно. У контрольной группы (нелеченные животные) экссудатив-ный компонент асептического воспаления составлял 46,7±2,9 мг, а пролиферативный компонент 9,3±0,8 мг. Результаты контрольной группы животных были приняты за 100%. При нанесении на кожу мазевой композиции (олеогеля) метронидазола и р-каротина в течение 7 суток степень экссудации понижалась на 21,2% (р<0,05), а интенсивность пролиферативного процесса уменьшалась на 24,7% (р<0,05) по

сравнению с животными, не получавшими лекарственную форму. У

мышей, получивших основу-плацебо также наблюдалось некоторое

понижение экссудации на 14,3% (р>0,05), интенсивность пролифера-,— -тивного процесса, напротив, увеличивалась на 18,3% (р<0,05) по

сравнению с животными, не получившими лекарственную форму.

Официнальный препарат - мазь индометациновая 10% обусловила

снижение экссудации на 20,3% (р<0,05), а пролиферации на 21,5%

(р<0,05). Результаты олеогеля существенно не отличались по своей

эффективности от препарата сравнения.

Для определения кинетики метронидазола в очаге воспаления использовали радиологические методы исследования. Было визуализировано острое экссудативное и пролиферативное воспаление в статике и динамике с применением меченого технеция методами in vivo, in vitro. В эксперименте учитывались такие показатель воспаления, как отек, гиперемия, температура тела крыс до введения каолина и через 24 часа после введения каолина. У животных серии метронидазол средняя температура была 37,6 °С до введения каолина и 38,2°С после введения каолина соответственно; у животных серии индометацин средняя температура была 37,8 °С до введения каолина и 38,9 °С после введения каолина. Через 24 часа животным внутривенно вводили радиоизотопные препараты в хвостовую вену. Через 90 минут после введения радиоизотопного препарата животное фиксировали и помещали в камеру для проведения компьютерной сцинтиграфии. После этого, в воспаленной и здоровой конечностях измеряли радиоактивность по у-излучению. От показателей излучения отнимали показания фона и делили на объем лапы. Находили коэффициент накопления у-лучей в нормальной и воспаленной лапке. Метронидазол показал коэффициент накопления у-лучей 1006,7, тогда как препарат сравнения индометацин 136,7. Таким образом, радиобиологически было установлено, что антипротозойный препарат метронидазол, являющийся производным нитроимидазола, обнаружил включение в зону воспаления, что объясняет его противовоспалительные свойства.

Следующим этапом исследования явилось определение раноза-живляющей и репаративной активности олеогеля.

Оценивали лечебное действие мазевой композиции (олеогеля) на модели линейной кожной раны крыс. У животных, не получивших лекарственную форму прочность рубца при ранотензиометрическом испытании составляла 4,0±0,34 Н. При нанесении олеогеля с (5-каротином и метронидазолом прочность рубца линейной кожной раны увеличилась: нагрузка разрыва повысилась на 34,24% (р<0,05), что в 1,19 раза превосходило тензиометрическую характеристику рубца в случае применения ранозаживляющего препарата сравнения, содержащего растительные каротиноиды - облепиховое масло жидкое. По степени выраженности противоожогового эффекта косвенно судили о репаративной активности олеогеля при комбустиозной патологии эпителиальной ткани.

При исследовании олеогеля на наличие противоожоговой активности на модели термического ожога, вызванного контактным способом, установлено следующее. У контрольной группы, которыми являлись животные, не получившие изучаемую лекарственную форму, ожоговое повреждение, вызванное контактным способом на 2-е сутки имело площадь раны в весовых единицах 2,8+0,25 мг, а на 8-е сутки 2,5±0,25 мг, что было принято за 100%.

Применение геля уменьшило площадь ожогового повреждения: на 2-е сутки площадь раны составила 46,4%, то есть разница по сравнению с контролем была на 53,6% (р<0,05), а на 8-е сутки площадь раны составила 36,0%, разница с контролем на 64,0% (р<0,01). У животных, получивших основу геля (плацебо) отмечалось понижение общей площади раны на 2-е сутки на 39,3% (р<0,001), площадь при этом составила 60,7%, на 8-е сутки площадь ожога 56,0%, а разница на 44,0% (р<0,05) по сравнению с нелеченными животными. Это было статистически достоверно ниже, чем в опытах с олеогелем. Мазь ме-тилурациловая снижала на 2-е сутки площадь ожоговой поверхности лишь на 42,9% (р<0,05) а на 8-е сутки на 56,0% (р<0,05) по сравнению с контролем. Таким образом, противоожоговый эффект геля превосходил действие мази метилурациловой и этот эффект обусловлен комплексированием действия метронидазола и Р-каротина.

ТАБЛИЦА 5 - ВЛИЯНИЕ ГЕЛЯ С МЕТРОНИДАЗОЛОМ И Р-КАРОТИНОМ НА ПЛОЩАДЬ ОЖОГОВОЙ РАНЫ КРЫС

Группы животных Площадь раны в весовых единицах, мг

2й сутки 8-сутки

М±ш Р % М±т Р %

Контроль, п=6 2,8+0,25 100,0 2,5±0,25 100,0

гель п=6 1,3±0,15 Р|<0,05 Р2<0,05 Р3<0,05 46,4 0,7±0,04 Р,<0,01 Р2<0,01 Р3<0,05 36,0

Гель плацебо, п=6 1,7±0,15 Р,<0,01 60,7 1,4±0,34 Р,<0,05 56,0

мазь метилураци-ловая п=6 1,6+0,27 Р,<0,05 57,1 1,1+0,12 Р|<0,05 44,0

Примечание: Р, - вероятность различия к контролю; Р2 -к животным, получившим основу; Р3-к животным, получившим метилурациловую мазь.

Перед исследованием фармакологической активности тканевых аппретов целесообразно было провести оценку тканевого носителя. Для определения тканевого носителя с лучшей высвобождающей способностью, провели скрининговые исследования с участием разных образцов тканей на высвобождение веществ, которыми пропитывали образцы ткани. Степень высвобождения определяли по диаметру окрашенной зоны, проникшей в агаровый гель без посева микроорганизмов. Проведенные сравнительные исследования позволяют предложить лигниновое полотно как наиболее оптимальную ткань в плане высвобождения данной лекарственной композиции.

Противоожоговая и антибактериальная активность тканевых аппретов изучалась на модели ожогового повреждения кожи кроликов (температура 100 °С, время экспозиции 20 сек.). Оценивали площадь ожогового повреждения на 2е и 8е сутки после ежедневной смены повязки. У контрольной группы кроликов, (животные, не получившие лекарственную форму), ожоговое повреждение на 2-е сутки имело площадь раны в весовых единицах 3,48±0,20 мг, а на 8-е сутки 2,98+0,15 мг, что было принято за 100%. Применение тканевого аппрета с метронидазолом, Каролином и хлоргексидином уменьшило общую площадь ожогового повреждения на 2-е сутки на 40,52% (р<0,05) и составило 59,48%, а на 8-е сутки уменьшило на

18

62.75%(р<0,05), по сравнению с контролем, что составило 37,25% от контроля. У животных, получивших тканевой аппрет с мазью метилу-рациловой, отмечалось уменьшение площади ожоговой поверхности на 2-е сутки на 33,99% (р<0,05), составило 66,09% от контроля, а на 8-е сутки на 42,95% (р<0,05), составило 57,05% от контроля. Изучение антибактериальных свойств олеогеля и аппретов в сравнении с препаратом Клион проводили методом серийных разведений в отношении лабораторных штаммов бактерий и штаммов, выделенных из патологического материала больных с гнойно-воспалительными процессами. В этих исследованиях использовали лабораторные образцы тканевых пропиток с метронидазолом, (З-каротином, хлоргексидином и олеогель метронидазола с p-каротином в сравнении с зарубежным препаратом.

В отношении стафилококков и кишечной палочки комбинированный олеогель с метронидазолом, P-каротином и аппрет с метронидазолом, p-каротином и хлоргексидином был такой же активный, как и препарат Клион. Изучение активности лекарственных форм с метронидазолом и каротином in vitro показало, что они являются активным средством с широким спектром антимикробного действия, имеющим преимущества перед зарегистрированными препаратами метронидазола. Бактероиды и пептококки были более чувствительны к комбинированным лекформам, чем к монопрепарату метронидазола.

При моделированной инфекционной экспериментальной патологии кожи кроликов, инфицированных S.aureus 209Р, установлена высокая фармакотерапевтическая эффективность олеогеля. Смена повязок выполнялась ежедневно до появления признаков развития в ране регенерационного процесса. При ежедневном нанесении олеогеля на рану отмечалось сокращение сроков полного закрытия раны при заражении кроликов госпитальными штаммами микроорганизмов на 3,6 дня.

Все компоненты, входящие в состав олеогеля и тканевых аппретов, являются официнальными препаратами с хорошо изученными свойствами, в том числе и токсикологическими характеристиками. Однако, такая комбинация фармакологических веществ изучается впервые. Это обстоятельство позволяет предположить возможные от-

ношения фармакологического синергизма входящих ингредиентов в лекарственные формы. Для экспериментального обоснования безопасности использования олеогеля и тканевых аппретов, необходимо изучение острой токсичности и раздражающего действия. Острую токсичность олеогеля изучали при наружном применении на мышах, раздражающее действие определяли тестированием на хорион-аллантоисной оболочке куриных эмбрионов, на переднем сегменте глаза морских свинок (методом Драйза) и определяли раздражающее действие тканевых аппретов метронидазола с р-каротином и хлоргек-сидином на коже кроликов, используя скарификацию с оценкой кожной реакции в течение 72 часов.

Безопасность применения определяли интегрально по оценке раздражающего действия, острой токсичности и ЦНС-токсичности. Установлено, что при нанесении олеогеля на эпилированный участок спины мышей в течение первых суток и последующих 14 дней гибели животных не наблюдали, ЬО50 > 5г/кг. Поведенческие и неврологические реакции мышей и крыс не выходили за пределы группы сравнения. Нетоксичность олеогеля и аппретов обеспечивает возможность длительного применения в комплексном лечении воспалительных процессов в коже.

Результаты, полученные экспериментально позволяют предложить олеогель и тканевые аппреты метронидазола с Р-каротином в качестве вспомогательного лекарственного средства при раневой и ком-бустиозной патологии кожи и воспалительных процессах в ней. При этом удачно сочетаются противовоспалительный эффект, антимикробное действие и стимуляция регенеративных процессов. Учитывая портативность, стабильность и технологичность таких лекарственных форм метронидазола, можно предположить комфортность и перспективность их применения. Полученные экспериментальные материалы позволяют предложить комплекс метронидазола с Р-каротином микробиологическим в качестве противовоспалительного и ранозажив-ляющего средства с учетом приоритетности использования изученных нами лекарственных форм - олеогеля и тканевых аппретов.

выводы

1. На основании системного анализа и выбора адекватных биомоделей экспериментально доказана противовоспалительная эффективность олеогеля метронидазола с р-каротином в статике и динамике, наблюдалась положительная динамика всех симптомов воспалительной реакции: снижение отека, гиперемии и нормализация температуры воспаленной конечности крыс. Действие олеогеля метронидазола с р-каротином обеспечило достоверное угнетение экссудативной фазы острого воспаления на 30,34%(р<0,05), по сравнению с нелеченными животными. Противовоспалительная эффективность олеогеля составила 58,33%. При субхроническом воспалении олеогель степень экссудации понижал на 21,2% (р<0,05), а интенсивность пролиферативного процесса уменьшал на 24,7% (р<0,05) по сравнению с животными, не получавшими лекарственную форму. Результаты не отличались достоверно от показателей группы сравнения (мазь индо-метациновая). Радиобиологически установлена кинетика метронидазола и его фиксация в очаге воспаления.

2. Олеогель и тканевые аппреты метронидазола и Р-каротина обладают регенеративным и ранозаживляющим эффектом при экспериментальной патологии кожи крыс и кроликов: ожог, линейная и инфицированная рана. При нанесении олеогеля с метронидазо-лом и Р-каротином прочность рубца линейной кожной раны увеличилась на 34,24% (р<0,05), что в 1,19 раза превосходило тен-зиометрическую характеристику рубца в случае применения ра-нозаживляющего препарата сравнения, содержащего растительные каротиноиды - облепиховое масло. Применение олеогеля уменьшило площадь ожогового повреждения: на 2-е сутки на 53,6% (р<0,05), на 8-е сутки на 64,0% (р<0,01) по сравнению с контролем. Тканевые аппреты с метронидазолом, Р-каротином и хлоргексидином уменьшили общую площадь ожогового повреждения на 2-е сутки на 40,52% (р<0,05), на 8-е сутки на 62.75%(р<0,05), по сравнению с контролем, что составило 37,25% от контроля и этот эффект превосходит действие ранозаживляю-

щего препарата мази метилурациловой в ранние и более поздние сроки.

3. Антибактериальная активность олеогеля и аппретов установлена в отношении лабораторных и госпитальных штаммов микроорганизмов. Зоны задержки роста облигатных анаэробов при применении олеогеля составляли 32-55 мм, в зависимости от вида бактерий, и в некоторых случаях превышали зоны, образующиеся при использовании зарубежного монопрепарата (25-40 мм). Отмечалось сокращение сроков полного закрытия раны при заражении кроликов госпитальными штаммами микроорганизмов на 3,6 дня. Экспериментально проведен выбор оптимального тканевого носителя для тканевых аппретов: лигниновое полотно.

4. Согласно табуляции классов токсичности исследуемый олеогель метронидазола с р-каротином является практически нетоксичным лекарственным средством и безопасен при наружном применении иЭ50 > 5000 мг/кг. На кожу и слизистые оболочки оказывает слабое раздражающее действие, что установлено по степени раздражения хорион-аллантоисной оболочки куриных эмбрионов (2,33 балла), слизистой оболочки глаза морских свинок (3,67 балла) и кожи кроликов (2,9 балла для геля и 2,8 балла для аппрета) Поведенческие реакции экспериментальных животных не выходили за пределы животных группы сравнения.

5. Эффект олеогеля, содержащего метронидазол и микробиологический Р-каротин и эффект тканевых аппретов, содержащих метронидазол, хлоргексидин и Р-каротин по степени влияния на воспаление, заживление раны и антибактериальной активности не уступали действию официнальных средств - мази индометациновой 10%, мази метилурациловой 10%, облепиховому маслу, импортной мази с метронидазолом. Олеогель и тканевые аппреты можно отнести к группе комбинированных лекарственных средств, сочетающих антибактериальную активность, противовоспалительную эффективность и стимуляцию регенерацию кожи.

ОСНОВНЫЕ ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ РАБОТЫ

1. Гусоева, О.В, Методы фармакоэкономического анализа использования метронидазола в дерматологии / О.В. Гусоева // Экология и здоровье: сб. науч. тр. - Ессентуки: Ассоц. мед. центров ЮНЕСКО, 2007. - Вып. 11.-С. 151-158.

2. Гусоева, О.В. Экспериментальное изучение геля и аппретов метронидазола на моделях гнойных ран кроликов Влияние глюкозами-нилмурамилдипептида на некоторые биохимические показатели крыс при экспериментальной патологии / О.В. Гусоева, A.B. Сер-гиенко, В.Н. Каркищенко // Экология и здоровье: сб. науч. тр. - Ессентуки: Ассоц. мед. центров ЮНЕСКО, 2008. - Вып. 12. - С. 204211.

3. Сергиенко, A.B. Фармакоэкономический анализ применения метронидазола в дерматологической практике методом «анализ-эффективность» / A.B. Сергиенко, О.В. Гусоева // Разработка, исследование и маркетинг новой фармац.продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск. ГФА. - Пятигорск, 2008. - Вып. 63.- С.564-565.

4. Гусоева, О.В. Сравнительная фармакоэкономическая оценка применения метронидазола при кожных инфекциях / О.В. Гусоева, A.B. Сергиенко // Человек и лекарство: тез. докл. 15 Рос. нац. конгр. (14-18 апр. 2008г.).- М., 2008.-С.616.

5. Гусоева, О.В. Фармакологическая эффективность метронидазола при воспалении кожи крыс инфекционной и неинфекционной этиологии / О.В. Гусоева, A.B. Сергиенко // Междунар. конгр. по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (13; 26-29 апр. 2008; Дубай, ОАЭ). Всемирный форум по астме. (26-29 апр.2008; Дубай, ОАЭ) // Аллергология и иммунология. - 2008.-Т.9.-№1. - С. 153.

6. Сергиенко, A.B. Перспектива метронидазола как вектора для терапии неспецифического воспаления в дерматологии / A.B. Сергиенко, О.В. Гусоева, В.Б. Сергиенко // Междунар. конф. «Физиология и патология иммунной системы», Междунар. конф. по иммунотерапии (4; 15-17 сент. 2008; Москва) // Аллергология и иммунология,- 2008.-Т. 9, №3. - С. 293.

7. Гусоева, О.В. Фармакологическое обоснование использование метронидазола при экспериментальной патологии кожи неинфекционной и инфекционной этиологии / О.В. Гусоева, А.В.Сергиенко, Н.Н.Каркищенко // Научно-практич.конф.с международным участием «Достижения клинической фармакологии в России» (07-08 сент. 2009; Москва) // - Клиническая фармакология и терапия. -2009. -№6.-С. 270-271.

w 7

Гусоева Олеся Валерьевна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ПРИМЕНЕНИЯ НАРУЖНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ МЕТРОНИДАЗОЛА ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ВОСПАЛЕНИИ

14.00.25 - ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

Подписано в печать 20.10.2009 г. Формат 60 х 84/16. Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ.л. 1,0. Уч.-изд. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №.

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЙ

В настоящее время, несмотря на появление новых, все более эффективных препаратов, методов лечения и диагностики, и все большую осведомленность населения относительно дерматологических заболеваний, не наблюдается значительного снижения общего количества больных дерматозами различной этиологии. Поэтому очень остро стоят проблемы эффективности и доступности дерматопротекторной терапии и профилактики дерматологических заболеваний и их осложнений. При осложненных инфекциях рекомендуются препараты группы нитроимидазола. Родоначальником препаратов нитроимидазольной структуры, не потерявшим свою значимость, и по сей день является метронидазол - один из высокоактивных лекарственных препаратов с выраженным влиянием на смешанные инфекции, осложненные анаэробными инфекциями. По данным ВОЗ (2001 г.), однократный прием 2,0 г этого препарата приводит к излечению у 88% дерматовенерологических больных [28, 29].

Не достаточно изучена возможность использования метронидазола в наружных лекарственных формах комбинированного состава. В доступной литературе сведений о сочетании метронидазола с микробиологическим Р~ каротином в виде мазевой композиции и препаратов, аппретированных на волокнистых материалах для нужд современной дерматологии нет. Это послужило основой для комплексирования метронидазола с [3-каротином микробиологического происхождения [49, 136].

Комплексное применение метронидазола с иммуномодулирующими и антисептическими препаратами в настоящее время является актуальной и широко дискутируемой проблемой. В частности, имеются клинически доказанные и экспериментально обоснованные факты целесообразности сочетания метронидазола с полиоксидонием и хлоргексидином в стоматологии и хирургии для купирования воспаления [30, 81, 82].

В связи с этим очевидный практический интерес представляют препараты, активные в отношении анаэробных микроорганизмов, и среди них новые разрабатываемые отечественные лекарственные формы уже известных препаратов: аэрозоль нитазола [2], раствор метронидазола [82]. В этой связи, изучение биологической активности предлагаемых наружных лекарственных форм — олеогеля и тканевых аппретов представляется особенно актуальным и перспективным.

С появлением новых методов анализа, технологии, биомоделирования многие лекарственные препараты, давно и хорошо изученные, вновь привлекают внимание ученых в связи с открывающимися возможностями их применения. Комплексирование метронидазола с препаратами других фармакологических групп с разным механизмом действия (каротиноиды, антисептики) способно обеспечить потенцированный синергизм, что позволит снизить дозу и лекарственную нагрузку на организм при оптимизации фармакологического эффекта [63,

108]. В практической медицине традиционно достаточно одностороннее применение препарата метронидазола не позволяет полностью использовать его скрытые резервы фармакологического эффекта при экономической доступности. В литературе недостаточно данных об использовании метронидазола в качестве дерматопротекторного лекарственного средства при неинфекционных воспалениях кожи. В этой связи, в настоящем исследовании ставится проблема изучить метронидазол и его комплексные варианты с микробиологическим Р-каротином и антисептиком хлоргексидином на заживление ран и воспалительных процессов инфекционной и неинфекционной этиологии в коже экспериментальных животных и провести оценку кинетики в очаг воспаления. Для своевременной диагностики и терапии воспалительного процесса независимо от его топографии и стадии необходимы фармакологически активные средства с максимальной фиксацией в воспалительном очаге [142, 145].

Лекарственные формы метронидазола: таблетки, суппозитории вагинальные, раствор для инфузий; гель для местного применения представлены преимущественно зарубежными производителями. Импортные медикаменты отличаются высоким не только качеством, но и ценой.

Актуальность исследований связана с необходимостью создания отечественных наружных лекарственных средств, обладающих дерматотропной активностью комбинированных по составу с поливалентным механизмом действия, проявляющих противовоспалительный, ранозаживляющий и антибактериальный эффект.

В этой связи исследования по фармакологическому изучению мазевой композиции (олеогеля) метронидазола с микробиологическим p-каротином и тканевых аппретов с метронидазолом, хлоргексидином и Р-каротином актуально, своевременно и перспективно.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Фармакологическое обоснование применения наружных лекарственных форм метронидазола с микробиологическим р-каротином: геля и тканевых аппретов при моделированном воспалении. ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Установить противовоспалительную активность мазевой композиции (олеогеля) и тканевых аппретов метронидазола с микробиологическим Р-каротином на острое экссудативное воспаление, индуцированное инъекцией каррагенина и асептическое субхроническое воспаление кожи, индуцированное имплантацией под кожу ватного шарика. Изучить кинетику метронидазола в воспалительный очаг крыс с применением радиологических методов.

2. Изучить ранозаживляющую активность мазевой композиции (геля) метронидазола с микробиологическим Р-каротином и тканевых аппретов метронидазола с Р-каротином и хлоргексидином по влиянию на заживление ожогового повреждения кожи крыс и кроликов на модели ожоговой раны по снижению ее площади и на модели линейной кожной раны тензиометрически.

3. Экспериментально изучить фармакотерапевтическую эффективность мазевой композиции (геля) и тканевых аппретов метронидазола с Р-каротином в отношении лабораторных штаммов бактерий in vitro (метод серийных разведений, метод диффузии в агар) и in vivo на моделях гнойных ран у кроликов, инфицированных госпитальными штаммами, выделенными из патологического материала больных с гнойно-воспалительными процессами.

4. Изучить токсикологические свойства изучаемых наружных лекарственных форм метронидазола с микробиологическим Р-каротином: мазевой композиции (геля) и тканевых аппретов, на лабораторных животных: острая токсичность in vivo на мышах, степень раздражающего действия in situ ХЕТ КАМ - тестом на куриных эмбрионах, in vivo на переднем сегменте глаза млекопитающих; тканевых аппретов in vivo методом Draize-test кроликах (кожная проба).

БАЗА ДЛЯ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

Пятигорская государственная фармацевтическая академия (г. Пятигорск);

ГУ Научный центр биомедицинских технологий РАМН (г. Москва); Научно -производственный кардиологический комплекс (г. Москва). Тема диссертационной работы утверждена в ГУ Научный центр биомедицинских технологий РАМН 15 декабря 2008 года, протокол №10.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЙ

Впервые выявлена противовоспалительная, ранозаживляющая, антибактериальная активность комплекса, заключенного в липофильный гель, содержащий метронидазол, микробиологический Р-каротин и жирные полиненасыщенные кислоты.

Впервые изучено и предложено сочетание метронидазола, микробиологического Р-каротина с хлоргексидином, обладающее выраженным противоожоговым, противовоспалительным и антимикробным действием, оформленное в тканевые аппреты. Экспериментально установлен оптимальный образец ткани для изготовления аппретов с наилучшими адсорбционными свойствами - лигниновое полотно. НАУЧНО - ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

• Результаты проведенного фармакологического изучения комплексных лекарственных форм метронидазола с микробиологическим Р-каротином (гель), метронидазола с микробиологическим Р-каротином и хлоргексидином (тканевые аппреты) в условиях экспериментальной патологии, свидетельствуют о выраженном противовоспалительном, противоожоговом, ранозаживляющем, антимикробном действии предлагаемых лекарственных средств, указывают на перспективность их применения в терапии воспалительных заболеваний в дерматологии и хирургии.

• Способность метронидазола накапливаться в зоне воспаления, установленная радиобиологическим методом, дает возможность использовать его в медицинской практике, как с целью диагностики, так и мониторинга терапии воспалительных процессов в дерматологии.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ

Работа выполнена на 131 стр. текста компьютерного набора, иллюстрирована 27 таблицами, 6 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований. Список цитируемой

-10/ литературы содержит 194 источника литературы, из которых 44 иностранных источников.

АПРОБАЦИЯ И ПУБЛИКАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Основные положения диссертационной работы доложены на XV, Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство", (г.Москва, 2008г.), на 63 ежегодной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (г. Пятигорск, 2008г.); на Конгрессе иммунологии и аллергологии (г. Паттайа, Таиланд, 2007г.); на международной конференции «Физиология и патология иммунной системы», IV Международной конференции по иммунотерапии, (г.Москва, 2008г.).

ПУБЛИКАЦИИ

По теме кандидатской диссертации опубликовано 6 научных работ, 2 из которых входят в журналы, рекомендованные ВАК. Направлена в печать 1 статья в соавторстве с руководителями.

выводы

1. На основании системного анализа и выбора адекватных биомоделей экспериментально доказана противовоспалительная эффективность олеогеля метронидазола с p-каротином в статике и динамике, наблюдалась положительная динамика всех симптомов воспалительной реакции: снижение отека, гиперемии и нормализация температуры воспаленной конечности крыс. Действие олеогеля метронидазола с Р-каротином обеспечило достоверное угнетение экссудативной фазы острого воспаления на 30,34%(р<0,05), по сравнению с нелеченными животными. Противовоспалительная эффективность олеогеля составила 58,33%. При субхроническом воспалении олеогель степень экссудации понижал на 21,2% (р<0,05), а интенсивность пролиферативного процесса уменьшал на 24,7% (р<0,05) по сравнению с животными, не получавшими лекарственную форму. Результаты не отличались достоверно от показателей группы сравнения (мазь индометациновая). Радиологически установлена фиксация метронидазола в очаге воспаления.

2. Олеогель и тканевые аппреты метронидазола и p-каротина обладают регенеративным и ранозаживляющим эффектом при экспериментальной патологии кожи крыс и кроликов: ожог, линейная и инфицированная рана. При нанесении олеогеля с метронидазолом и Р-каротином прочность рубца линейной кожной раны увеличилась на 34,24% (р<0,05), что в 1,19 раза превосходило тензиометрическую характеристику рубца в случае применения ранозаживляющего препарата сравнения, содержащего растительные каротиноиды - облепиховое масло. Применение олеогеля уменьшило площадь ожогового повреждения: на 2-е сутки на 53,6% (р<0,05), на 8-е сутки на 64,0% (р<0,01) по сравнению с контролем. Тканевые аппреты с метронидазолом, Р-каротином и хлоргексидином уменьшили общую площадь ожогового повреждения на 2-е сутки на 40,52% (р<0,05), на 8-е сутки на 62.75%(р<0,05), по сравнению с контролем, что составило 37,25% от контроля и этот эффект превосходит

-110действие ранозаживляющего препарата мази метилурациловой в ранние и более поздние сроки.

3. Антибактериальная активность геля и аппретов установлена в отношении лабораторных и госпитальных штаммов микроорганизмов. Зоны задержки роста облигатных анаэробов при применении олеогеля составляли 32-55 мм, в зависимости от вида бактерий, и в некоторых случаях превышали зоны, образующиеся при использовании мазь "Klion" (25-40 мм). Отмечалось сокращение сроков полного закрытия раны при заражении кроликов госпитальными штаммами микроорганизмов на 3,6 дня. Экспериментально проведен выбор оптимального тканевого носителя для тканевых аппретов: лигниновое полотно.

4. Согласно табуляции классов токсичности исследуемый гель метронидазола с Р-каротином является практически нетоксичным лекарственным средством и безопасен при наружном применении LD50 > 5000 мг/кг. На кожу и слизистые оболочки оказывает слабое раздражающее действие, что установлено по степени раздражения хорион-аллантоисной оболочки куриных эмбрионов (2,33 балла), слизистой оболочки глаза морских свинок (3,67 балла ) и кожи кроликов (2,9 балла для геля и 2,8 балла для аппрета) Поведенческие реакции экспериментальных животных не выходили за пределы животных группы сравнения.

5. Эффект геля, содержащего метронидазол и микробиологический |3-каротин и эффект тканевых аппретов, содержащих метронидазол, хлоргексидин и (3-каротин по степени влияния на воспаление, заживление раны и антибактериальной активности не уступает действию официнальных средств - мази индометациновой 10%, мази метилурациловой 10%, облепиховому маслу, импортной мази с метронидазолом. Гель и аппреты можно отнести к группе комбинированных лекарственных средств, сочетающие антибактериальную активность, противовоспалительную эффективность, и стимуляцию регенерацию кожи.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ Комбинирование в одной лекарственной форме биологически активных компонентов из разных фармакологических групп антимикробные, регенеративные) целесообразно для расширения спектра фармакологической активности и снижения побочных токсических эффектов. Назрела необходимость в создании и исследовании наружных дерматопротекторных лекарственных средств отечественного производства, содержащих антибактериальный и ранозаживляющий компоненты, удобных в применении и стабильных при хранении. Отечественные препараты этой группы представлены скромно. На рынке представлены наружные монокомпонентные лекарственные формы, содержащие метронидазол гидрофильные гели и вагинальные таблетки) только импортного производства, тканевых аппретов вовсе нет. Импортные лекарственные средства отличаются высоким не только качеством, но и стоимостью, что делает их для большинства пациентов недоступным, особенно в период экономического кризиса. Этим объясняется социальная значимость исследований в данной области. Нет сочетанных лекарственных форм, содержащих кроме антимикробного препарата, ранозаживляющий компонент: микробиологический p-каротин и антисептик хлоргексидин.

Настоящее дает право считать актуальным проведение комплекса исследований, направленных на фармакологическое изучение комбинированной лекарственной формы наружного применения содержащей синтетический антибактериальный препарат метронидазол и микробиологический p-каротин в виде олеогеля и метронидазол в соченании с хлоргексидином и (3-каротином в виде тканевых аппретов. Следует подчеркнуть, что это соединения с разным механизмом действия, что способно обеспечить наиболее оптимальных протективный эффект в фармакотерапии кожных ран. Такой подход основан на проведенных теоретических и экспериментальных исследованиях в данной области.

Из данных литературы следует, что раствор хлоргексидина биглюконата является одним из наиболее активных местных антисептических средств, оказывающих быстрый и сильный бактерицидный эффект, особенно в случаях инфицирования ран антибиотикорезистентными возбудителями. Микробиологический (3-каротин, полученных из триспоровых грибов, в виде масляного раствора является удобным и перспективных для сочетания с другими препаратами при наличии определенной лекарственной формы. Метронидазол — антибактериальный препарат нитроимидазольной структуры. Сочетание этих компонентов перспективн для комплексирования в таких наружных лекарственных формах, как олеогель и тканевые аппреты.

Для этого фармакологического обоснования применения наружных лекарственных форм метронидазола целесообразно исследование комплексного действия метронидазола и микробиологического (3-каротина на разных по этиологическому фактору моделях воспаления кожи: острое экссудативное, подострое пролиферативное, линейная кожная рана, комбустиозное воспаление (индуцированное термическим ожогом), инфекционное воспаление кожи кроликов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ПРЕПАРАТЫ

Опытные группы животных получали мазевую композицию (олеогель) и тканевые аппреты. Олеогель - мягкая лекарственная форма вязкой консистенции, способная сохранять форму и обладающая упругостью и пластичностью. По типу дисперсных систем мазевая композиция представляет собой липолипофильную систему геля, что позволяет отнести ее к олеогелям. [78, 135].

Тканевые аппреты — представляют собой кусочки тканей, пропитанные компонентами в определенной последовательности и с точным соблюдением технологии.

Лабораторные образцы изучаемых лекарственных форм: мазевая композиция (олеогель), олеогель - плацебо, тканевые аппреты были изготовлены под руководством доктора фармацевтических наук, профессора кафедры технологии лекарств Пятигорской государственной фармацевтической академии (г.Пятигорск). Э.Ф. Степановой и доктора биологических наук, кандидата фармацевтических наук, профессора кафедры фармакологии Пятигорской государственной фармацевтической академии (г.Пятигорск) А.В.Сергиенко.

СОСТАВ ОЛЕОГЕЛЯ: НА 100 г

• Метронидазол - 1 %

• 0,1 % Масляный раствор p-каротина (Каролин) - 0,1%

• Бутилокситолуол -0,01%

• Аэросил 12,94 %

• Масло растительное 85,95 %

СОСТАВ ТКАНЕВЫХ АППРЕТОВ (НА 1 САЛФЕТКУ):

• Ткань размером 9x12 см.

• Хлоргексидина биглюконата 0,5% р-р водный - 1,6 мл

• Метронидазол 0,5% р-р водный - 1,6 мл

• Раствор 0,1 % микробиологического (3-каротина в растительном масле (Каролин) 0,008 - 0,011 мл

ПРЕПАРАТЫ СРАВНЕНИЯ:

• - мазь метилурацила 10% производства «Нижфарм» (Россия)

• - облепиховое масло жидкое производства "Алтайвитамины" (Россия)

• - индометацин мазь (Balcanpharma, Болгария).

• - мазь Клион (Гедеон Рихтер, Венгиря)

ОПИСАНИЕ КОМПОНЕНТОВ, ВХОДЯЩИХ В МАЗЕВУЮ

КОМПОЗИЦИЮ

• Субстанция метронидазол (ЗАО «Северная Звезда», Москва).

• Аэросил (диоксид кремния) - производитель ООО Орисил г. Москва. ГОСТ 14922-77. Аэросил - кремния диоксид Si02, очень легкий микронизированный порошок с выраженными адсорбционными свойствами. Применяют для стабилизации суспензий. Загущенную способность аэросила используют при получении гелей, для мазевых основ. Адсорбционные свойства используют с целью стабилизации сухих экстрактов (уменьшается их гигроскопичность). В порошках применяют при изготовлении гигроскопичных смесей и как диспергатор.

• Бутилокситолуол - Агидол-1 кристаллический, марка А. Изготовитель ОАО «Стерлитамакский нефтехимический завод», Республика Башкортостан, г. Стерлитамак, применяется в качестве антиокислительной добавки Е-321 в пищевой промышленности для улучшения качества пищевых масел, жиров, для защиты от окисления полимеров, контактирующих с пищевыми продуктами. ТУ 2425-41505742686-2008.

• Масло растительное - жир, извлекаемый из плодов растений методом отжима, либо экстрагирования. Использовалось подсолнечное рафинированное вымороженное дезодорированное масло марки «Премиум» ГОСТ Р 52465-2005, производитель АПГ «Юг Руси» г.Ростов-на-Дону.

• Хлоргексидина биглюконат водный 0,5% раствор № регистр. № J1C-001933, 2006-08-25; производитель: Фармстандарт-Лексредства (Россия)

• Раствор 0,1 % (3-каротина в растительном масле «Каролин» ВФС 42-255395 (ЗАО Роскарфарм, г.Краснодар), полученный из Blakeslea trispora.

• Лигнин ТУ 64-11-05-87. - Вторая после целлюлозы основная часть древесины. Структурными элементами лигнина являются производные фенилпропана и гидроцеллюлозы. Используется в производстве медицинских препаратов (сорбентов) Фармакологическое действие -сорбирующее, дезинтоксикационное, антидиарейное, антиоксидантное, комплексообразующее, гиполипидемическое. Лекарственные средства: полифепан, энтегнин, фильтрум-сти.

ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ И ТКАНИ

Раздражающую активность in situ проводили на 24 куриных эмбрионах белых кур породы Leggron возрастом 9-10 суток, in vivo на 12 морских свинках, m 350-400г [77]. Острую токсичность изучали in vivo на 12 мышах, m 21±1,0г (6 самцов и 6 самок).

Противовоспалительную и ранозаживляющую активность исследовали на белых мышах, белых крысах и кроликах. Антибактериальную активность изучали на тест - культурах микроорганизмов. Радиоизотопные исследования проводили с участием белых крыс. Количество животных и распределение их по экспериментальным группам представлено в таблице.