Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка, исследование и технологическое обоснование медицинских карандашей, содержащих метронидазол

На правах рукописи

РГБ ОД

15 Ш1Ш

ЛАЗАРЕВА ЕЛЕНА АРКАДЬЕВНА

РАЗРАБОТКА, ИССЛЕДОВАНИЕ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ МЕДИЦИНСКИХ КАРАНДАШЕЙ, СОДЕРЖАЩИХ МЕТРОНИДАЗОЛ

15.00.01 - технология лекарств, организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва -2002

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете

Научные руководители:

Доктор фармацевтических наук, профессор Доктор медицинских наук, профессор

В.А.Лиходед Х.М.Насыров

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Доктор фармацевтических наук

И.И.Краснюк Л.В.Гладских

Ведущее учреждение: Институт фармакологии АМН РФ

Защита состоится «_»

2002 г. в

часов на

заседании Диссертационного совета (Д 208.040.09) при Московской медицинской академии им. И.М.Сеченова по адресу: г. Москва, Никитский бульвар, д. 13

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ММА им. И.М.Сеченова (г. Москва, Зубовская площадь, д. 1).

Автореферат разослан: «_»_2002 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета (Д 208.040.09)

Доктор фармацевтических наук Н.П.Садчикова

Актуальность: Значимость болезней пародонта как общемедицинской и социальной проблемы определяется значительной распространенностью их в мире, большой потерей зубов и отрицательным влиянием очагов инфекции в связи с образованием пародонтального кармана на организм в целом. В патогенезе пародонтита важная роль принадлежит воспалительным процессам. В настоящее время известно, что воспаление вызывается инфекционными, химическими, физическими, механическими, иммуногенными и другими факторами. Агрессивность микробной флоры в полости рта постоянно побуждает к совершенствованию средств защиты от нее, а также поиску и разработке новых антибактериальных препаратов. Среди их множества, предпочтение отдается антисептикам, так как к ним медленнее, чем к антибиотикам, вырабатывается устойчивость бактериальных штаммов, и они реже вызывают аллергическую реакцию организма.

Полученные в последние годы, данные о роли анаэробной и смешанной бактериальной флоры в развитие заболеваний пародонта, позволили широко использовать метронидазол (МЗ) в стоматологической практике. Выявлено, что МЗ вызывает гибель 100% грамотрицательных анаэробных бактерий, являющихся одним из главных факторов в развитии воспалительных заболеваний пародонта (ВЗП), поэтому для лечения заболеваний пародонта рекомендуется применение препарата как в монотерапии, так и в комплексном лечении.

Большинство существующих в настоящее время антибактериальных средств, и МЗ, в частности, являются продуктами синтетического происхождения, обладающими высокой терапевтической активностью, однако при длительном применении таких препаратов, возможно появление резистентных штаммов микроорганизмов, что ведет к снижению эффективности лечения. Кроме того, ассортимент лекарственных препаратов, разработанных на основе доступных отечественных лекарств и вспомогательных веществ, является недостаточным.

В связи с вышеизложенным значительный интерес представляют исследования прополиса - продукта пчеловодства, содержащего большой комплекс биологически активных природных соединений. Целесообразно сочетание МЗ с экстрактом прополиса (ЭП), что ведет к повышению антимикробной активности, способствует проявлению обезболивающего, гемостатического, иммуномодулирующего, ре-паративного эффекта лекарственной формы.

Следует отметить, что особое внимание уделяется не только разработке препаратов, но и поиску новых лекарственных форм, которые отвечали бы следующим требованиям: возможность пролонгированного действия, защита и изоляция очага поражения, дозированная минимально необходимая концентрация лекарственных веществ, хорошая адгезия к слизистой оболочке полости рта, отсутствие раздражающего действия и дискомфорта для пациента, простота использования. Все это подтверждает целесообразность проведения исследований по созданию эффективных лекарственных форм для лечения ВЗП в виде медицинских стоматологических карандашей.

А также, перспективным является использование медицинских карандашей, содержащих метронидазол в дерматологической практике для лечения периоралыю-го дерматита и розацеа - распространенных хронических дерматозов, имеющих тенденцию к распространению заболеваемости.

Использование карандаша позволит наносить лекарственное вещество на пораженные участки, лекарственное средство легко дозируется количеством наносимых мазков, карандаш гигиеничен в применении, удобен в хранении и транспортировке.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилось проведение комплексных исследований по разработке научно-обоснованных составов, технологии, методов анализа и изучению фармакологической активности стоматологических карандашей, содержащих метронидазол и экстракт прополиса, с использованием комплекса вспомогательных веществ, предназначенных для лечения ВЗП и дерматологических карандашей, содержащих метронидазол, предназначенных для лечения розацеа и периорального дерматита, обеспечивающих высокую технологичность и биодоступность, стабильность при хранении.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- осуществить выбор современных вспомогательных веществ, обеспечивающих создание лекарственной формы в виде стоматологического и дерматологического карандашей, содержащих метронидазол и экстракт прополиса;

-изучить влияние вспомогательных веществ на физико-химические, антимикробные, биофармацевтические свойства карандашей с метронидазолом и его сочетание с экстрактом прополиса;

- теоретически и экспериментально обосновать оптимальный состав и технологию карандашей с метронидазолом и экстрактом прополиса для стоматологии, с метронидазолом для дерматологии;

-изучить структурно-механические и физико-химические свойства формообразующих композиций и лечебных карандашей для обоснования технологии производства, а также определения влияния их на фармацевтическую и биологическую доступность;

- разработать методы качественного и количественного определения метро-нидазола и экстракта прополиса в медицинских карандашах;

, -провести сравнительные фармакологические исследования разработанных лекарственных форм, содержащих метронидазол и экстракт прополиса, с традиционно используемыми лекарственными формами для лечения воспалительных заболеваний пародонта;

-изучить влияние тароупаковочных материалов и условий хранения на стабильность стоматологического и дерматологического карандашей; определить сроки хранения карандашей;

- на основание полученных результатов разработать нормативную документацию в виде ФСП на лекарственные формы, содержащие метронидазол и экстракт прополиса для стоматологической и метронидазол для дерматологической практик;

Научная новизна. На основании комплексных исследований с использованием методов математического планирования эксперимента, а также микробиологических и фармакологических методов изучено влияние вспомогательных веществ на технологические и биофармацевтические свойства исследуемых композиций. Обоснованы и разработаны состав, технология, упаковка и условия хранения медицинских карандашей, для стоматологической и дерматологической практик, содержащие в качестве основообразователя низкомолекулярный полиэтилен (НМПЭ), в сочетании с парафином, вазелиновым маслом и пентодом, обеспечивающих высокую биодоступность, равномерность распределения действующих компонентов на ели-

зистой оболочке полости рта и коже. Разработанные карандаши предназначаются для лечения ВЗП, розацеа и периорального дерматита. Предложена методика для количественного определения метронидазола и флавоноидных соединений в медицинских карандашах, способ определ'ения смываемости стоматологического карандаша со слизистой оболочки полости рта, а также метод оценки противовоспалительного действия разработанных лекарственных форм.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

• Состав и технология стоматологического карандаша (патент на изобретение № 2175865 «Карандаш для лечения пародонтита» от 20.11.2001 г.)

• Способ определения противовоспалительного действия стоматологического и дерматологического карандашей (удостоверение на рационализаторское предложение № 2333 «Способ оценю! противовоспалительного действия мягких лекарственных форм» от22.03.2001 г.)

• Состав, технология и методы анализа медицинских карандашей для стоматологической и дерматологических практик внедрены в учебный процесс кафедры терапевтической стоматологии БГМУ, фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии БГМУ, Региональный центр по контролю качества лекарственных средств.

• «Карандаш с метронидазолом» (проект ФСП ).

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы обсуждались на научных конференциях студентов и молодых ученых БГМУ (Уфа, 2001г.), V Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2001г.), заседании проблемной комиссии БГМУ по фармакологии и фармации (2000 г.), совместном заседании научного общества фармакологов и фармацевтов РБ (Уфа, 2000 г.), межкафедральном заседании БГМУ (Уфа, 2000, 2001г. г.) и на научно-практической конференции, посвященной 20-летию открытия фармацевтического факультета БГМУ (Уфа, 2002 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 1 патент на изобретение и 1 удостоверение на рационализаторское предложение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом НИР БГМУ по

проблеме "Изыскание и изучение новых фармакологических средств" (номер Госрегистрации 01990005538) и соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и фармакологии, а также в рамках программы Академии наук Республики Башкортостан, Отделения медицинских наук "Изучение и изыскание новых лекарственных средств" по теме "Разработка состава и технологии лечебных карандашей, содержащих метронидазол".

Положения, выносимые на защиту:

• Составы и технология медицинских карандашей с метронидазолом и экстрактом прополиса для лечения ВЗП и дерматологических заболеваний, обладающих противомикробным, противовоспалительным и ранозаживляющим действием;

• Методы и результаты оценки качества стоматологических и дерматологических карандашей;

• Результаты биофармацевтических антимикробных свойств медицинских карандашей с метронидазолом и экстрактом прополиса;

• Показатели стандартизации и стабильности разработанных составов медицинских карандашей в процессе хранении.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 139 стр. текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, одной главы экспериментальных исследований, общих выводов, библиографии и приложений. Работа иллюстрирована 24 табл. и 10 рис. Библиографический указатель включает 244 источников, из них 50 иностранных авторов.

В главе 1 представлен обзор литературы, в котором обобщены сведения о роли в современной медицине подходов к лечению и профилактике заболеваний па-родонта, сведения о лекарственной терапии ВЗП и дерматитов, ассортимент современных лекарственных препаратов, обладающих местным противовоспалительным действием; приведены данные об использовании карандашей в медицине, а также сведения о вспомогательных веществах, используемых в технологии карандашей.

В главе 2 приведены сведения о лекарственных и вспомогательных веществах, использованных при разработке состава и технологии дерматологических карандашей, содержащих метронидазол и стоматологических карандашей, содержащих метронидазол и экстракт прополиса; методы исследований, а также методики

разработанные в процессе эксперимента: методы количественного определения метронидазола и флавоноидные соединений в медицинских карандашах; способ определения смываемости стоматологического карандаша со слизистой оболочки полости рта; способ оценки противовоспалительного действия медицинских карандашей, содержащих метронидазол.

В главе 3 («Разработка, исследование и технологическое обоснование медицинских карандашей, содержащих метронидазол») содержатся данные по разработке состава, технологии и биофармацевтическим исследованиям медицинских карандашей, предназначенных для лечения ВЗП и дерматитов, а также методы их стандартизации.

При выполнении экспериментальной работы были использованы: субстанция метронидазола (ВФС 42-5905-96), экстракт прополиса спиртовый (ТУ 64-0307-1191), прополис (ВФС 42-1084-81) и вспомогательные вещества, соответствующие действующей в настоящее время нормативно-технической документации и стандартам.

В процессе исследований изучали структурно-механические параметры различных композиций карандашей на приборе «Реотест-2».

Разработаны методы количественного определения метронидазола и флаво-ноидных соединений в медицинских карандашах. Метод определения метронидазола основан на предварительном растворение навески карандаша в гексане, с последующим титровании хлорной кислотой в среде неводных растворителей. Флавоноидные и фенольные соединения определялись путем экстракции 95% этанолом из петролейного эфира, в котором растворялась навеска карандаша, дальнейшим фото-электроколориметрическим определением при длине волны 400 нм, светофильтр №3 с толщиной светопоглощающего слоя 10мм. Предложен способ определения смываемости стоматологического карандаша со слизистой оболочки полости рта, основанный на определение присутствия метронидазола в слюне добровольцев после использования карандаша, методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей хлороформ - диметилформамид (8:2), основанный на способности метронидазола в УФ - свете при 254 нм образовывать пятна розового цвета. Разработан способ оценки противовоспалительного действия медицинских карандашей, содержащих метронидазол.

Испытания на микробиологическую чистоту и активность карандашей проводили по методикам ГФ XI изд. и изменению к статье ГФ XI изд. «Методы микробиологического контроля лекарственных средств». Полученные результаты экспериментальных исследований, обработанные статистически согласно ГФ XI издания.

Разработка исследований и технологическое обоснование медицинских карандашей, содержащих метронндазол.

В настоящее время в технологии мягких лекарственных форм применяется различные вспомогательные вещества, не все из которых могут быть использованы в качестве основы для стоматологических карандашей ввиду несоответствия их современным структурно-механическим и биофармацевтическим требованиям, предъявляемым к этой лекарственной форме.

Основообразующие вещества должны придавать карандашу форму, определенное сопротивление нажиму и однородность, обеспечивать хорошую намазывае-мость. Правильный подбор вспомогательных веществ позволяет карандашу не гнуться, не крошиться, не портиться под действием света и влаги. Основа карандаша должна осуществлять оптимальный контакт с кожей - обеспечивать высвобождение лекарственных веществ, мягкий мазок, оставляющий ровную, сплошную пленку на слизистой.

В качестве основоносителя карандаша нами был выбран и составил большую часть основы низкомолекулярный полиэтилен (НМПЭ) молекулярной массы 1500-5000 благодаря таким свойствам, как высокая пластичность, хорошая прилипаемость к кожным и слизистым покровам, сочетаемость с различными вспомогательными веществами (особенно углеводородной природы). Но в то же время, вследствие высокой вязкости НМПЭ необходимо сочетать с другими вспомогательными веществами, улучшающими его технологические свойства: намазывае-мость и совместимость с лекарственными веществами.

В качестве уплотняющих добавок исследовали материалы, широко применяемые в технологии лекарств: парафин, воск жёлтый, ПЭГ 4000.

Экспериментально установлено, что введение парафина в основу в количестве 5-10% значительно изменяет вязкоупругие свойства НМПЭ, дальнейшее увеличение

содержания парафина не целесообразно, так как не существенно влияет на вязкость сплава.

Для получения равномерного мазка необходимо введение в состав карандаша пластифицирующей добавки и вспомогательных веществ, увеличивающих биодоступность лекарственной формы. Для улучшения упруго- пластичных свойств основы карандаша нами изучены: вазелиновое масло, ПЭГ-400, димексид, которые совместимы с основообразующим составом. Димексид вводили в состав карандаша как пластификатор за счет его жидкой консистенции и способности проникать через биологические мембраны. Введение ПАВ в состав основы, обусловлено комплексом технологических свойств эмульгаторов: увеличение сродства жидких, твёрдых и вязких компонентов основы и лекарственных веществ; равномерное распределение лекарственных веществ в основе, тем самым обеспечивается равномерность дозирования и постоянный терапевтический эффект; улучшение высвобождения действующего вещества из лекарственной формы; повышение биодоступности лекарственных препаратов путём увеличения скорости и полноты всасывания.

Для обоснования оптимального состава стоматологического карандаша и оценки влияния комплекса фармацевтических факторов на намазываемость и антимикробную активность лекарственной формы, применяли метод математического планирования по частично-ортогональному греко-латинскому кубу второго порядка. Факторы, используемые в эксперименте, приведены в таблице1.

Карандаши готовили по следующей технологии: в выпарительной чашке сплавляли основообразующие компоненты в следующей последовательности: вначале расплавляли тугоплавкие вещества, то есть уплотнители, затем к ним добавляли пластификаторы, и в последнюю очередь ПАВ. Полученную массу перемешивали и сплавляли с НМПЭ. Содержание пластификаторов в композициях варьировало от 5 до 15%, содержание ПАВ - от 0 до 20%. Во все композиции после расплавления основы вводили 10% предварительно измельченного (не более 50 мкм) метро-иидазола. Массу перемешивали до однородности и в нее добавляли 5% экстракта прополиса. Смесь в полуохлажденном виде разливали в металлические формы объемом 3 г. Заполненные формы охлаждали в холодильной камере в течение 20-30 минут. Карандаши упаковывали в пластмассовые пеналы по типу твердых дезодорантов. Качество полученных 27 композиций карандашей оценивали по следую-

щим параметрам оптимизации: намазываемость, антимикробная активность, внешнему виду, а также адгезии к металлическим формам.

Таблица 1

Факторы и их уровни, изучаемые в эксперименте

Факторы Уровни факторов

А- вид уплотнителя А] - парафин А2 - воск желтый А3 - полиэтиленгликоль 4000 (ПЭГ 4000)

В- вид пластификатора В[ - вазелиновое масло В2 - полиэтиленгликоль 400 (ПЭГ 400) В3 - димексид

С- содержание пластификатора, % С,-5 С2- 10 Сз-15

Б - вид ПАВ Б1 - эмульгатор № 1 Бг-эмульгатор Т-2 Бз-твин -80 Б4 - пентол Б5 - эмульсионный воск Бб - высшие жирные спирты Б7 - стеарин косметический Б« - сорбитанолеат Бо-ОП 10

Е-содержание ПАВ, % Е, - 0;Е2 - 2; Ез - 3; Е4 - 5; Е5 - 8; Е6 - 10; Е7 - 12; Е„-15;Е9-20

На основании проведенного эксперимента, при оценке влияния вспомогательных веществ на формообразующие свойства карандаша, были составлены ряды предпочтительности по определению антимикробной активности и намазываемо-сти исследуемых композиций карандашей, и установлено, что первым в ряду предпочтительности среди уплотнителей находится парафин, среди пластификаторов -вазелиновое масло, среди ПАВ - пентол в концентрациях 10% в сочетании с 55% НМПЭ. Полученные карандаши представляют собой цилиндрические формы с заостренным концом, имеющие гладкую однородную поверхность.

Экспериментально установлено, что вид уплотнителя в основе оказывает большое влияние на структурно-механические свойства.

Нами изучены структурно-механические свойства разрабатываемых составов медицинских карандашей, влияние вспомогательных веществ и метронидазола, на такие параметры как вязкость, предел текучести и предельное напряжение сдвига

дисперсных систем. Исследование проводили на ротационном вискозиметре «Рео-тест -2», таблица 2.

Зависимость логарифма динамической вязкости от нагрузки (при увеличении нагрузки)

7 -6 5 4

3 -2 -1 -

Логарифм динамической вязкости

—Ф—Состав 9 —Я—Состав 4 —Состав 5 Состав 7 —Ж—Состав 1 —•—Состав 2 —I—Состав8 —-—Состав 6 —Состав 3 —— Состав 10

11111111111

I I I I I I I I I I I I I I I > I I I I I I I I I

5 25 40 60 80 100 130 150 180 210 240 270 300 Нагрузка

Рисунок 1

Таблица 2

Составы медицинских карандашей_

№ п/п Ингредиенты Состав карандаша, %

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 Парафин 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

2 Вазелиновое масло 10 10 10 10 10 10 10 10

3 Сорбитанолеат 15 15

4 Пентол 10 10 10 10 10 10

5 Твин-80 15 15

6 Димексид 15 15

7 НМПЭ 50 60 50 60 50 60 50 60 50 60

8 Метронидазол 10 10 10 10 10

В исследованиях по определению структурно-механических свойств медицинских карандашей, содержание МЗ (10%), парафина (10%) и НМПЭ (50-55%) были постоянными величинами, вазелиновое масло, димексид, сорбитанолеат, пентол, твин-80 являлись переменными величинами.

В результате проведенного эксперимента можно судить о том, что существенное влияние на упруго-пластичные свойства изучаемых композиций, оказывают вспомогательные вещества, введенные до 10%.

Как видно из рисунка1 при увеличении нагрузки выраженными упругими свойствами обладает состав № 9. Входящие в его состав пентол и димексид не оказывают существенного влияния на увеличение пластичности. Такие карандаши обладают хрупкостью, неудовлетворительной намазываемостью. При введении в состав карандаша вазелинового масла в сочетании с твином-80, пентолом или сорби-танолеатом, упруго-пластичные свойства значительно улучшаются.

Введение в состав карандаша вазелинового масла с твином-80, приводит к значительному увеличению вязкости, и, особенно это видно при уменьшении нагрузки. Так, у состава № 8 при снятии напряжения сдвига, вязкость резко падает, и состав практически приближается к ньютоновским жидкостям. Такой карандаш имеет мягкую консистенцию, высокую намазываемость, плохую формуемость.

Удовлетворительными свойствами обладают составы №3, содержащий парафин, вазелиновое масло, пентол, метронидазол, НМПЭ и № 6, содержащий парафин, вазелиновое масло, пентол, НМПЭ. Причем, введение метронидазола в некоторой степени уменьшает скорость возрастания напряжения сдвига при сохранении значительной способности к тиксотропии. Результаты исследований свидетельствуют о том, что материалы основы и лечебного карандаша являются малопрочными структурами, обладающими тиксотропностью, что обуславливает их оптимальную консистенцию и хорошую намазывающую способность, а также технологичность.

Введение МЗ и ЭП приводит к повышению вязкости исследуемых образцов, что обеспечивает карандашу оптимальную форму, намазываемость. Вышеперечисленное свидетельствует о том, что МЗ и ЭП оказывают стабилизирующее действие на материал основы и процессы структурообразования в системе, протекают активнее, чем в материале основы.

Создание лекарственной формы с антибактериальным препаратом подразумевает обеспечение высокой антимикробной активности лекарственного вещества. Исследование антибактериального действия лекарственной формы позволяет достаточно точно прогнозировать терапевтический эффект лекарства при лечении заболеваний, вызванных патогенными микроорганизмами.

Для определения оптимального количества метронидазола в стоматологическом карандаше изучали серию карандашей с различным содержанием лекарственного вещества: 0, 3, 5, 10, 15% от общей массы карандаша. Результаты исследований антимикробного действия стоматологических карандашей в зависимости от концешрации метронидазола представлены на рисунке 2. Как видно из рисунка, целесообразно для достижения терапевтического эффекта, использование метронидазола в стоматологических карандашах в количестве 10% , так как при уменьшении содержания лекарственного вещества до 5% антимикробная активность резко падает, а при увеличении концентрации до 15% повышается незначительно.

Подбор оптимальной концентрации ЭП в стоматологическом карандаше проводили на основании исследования антимикробной активности карандашей с различным содержанием ЭП (0, 2, 5, 10, 15, 20% по отношению к массе карандаша). Карандаши, содержащие 5, 8, 10, 15 и 20% ЭП вызывают гибель микроорганизмов в диаметре 22 мм, независимо от перечисленных концентраций ЭП, однако увеличение содержания ЭГ1 выше 8% приводит к потере однородности и расслоению карандаша. А из двух оставшихся концентраций 5 и 8% , проявляющих одинаковое антимикробное действие по экономическим затратам, для снижения себестоимости карандаша оптимальной концентрацией ЭП в карандаше является 5%.

Проведено сравнительное изучение биодоступности разработанных стоматологических карандашей с используемыми в стоматологии для лечения воспалительных заболеваний пародонта лекарственными формами метронидазола. Результаты исследований представлены в таблице 3. В результате проведенных экспериментов установлено, что стоматологический карандаш проявляет больший антимикробный эффект в отношении группы анаэробных бактерий, играющих важную роль в возникновении воспалительных заболеваний пародонта, по сравнению с гелем для десен «Метрогил-Дента».

Зависимость антимикробной активности стоматологического карандаша от концентрации метронидазола

Содержание метронидазола в карандаше, %

Рисунок 2

Таблица 3

Антимикробная активность лекарственных форм с метронидазолом

Л п/п Лекарственная форма Диаметр зон задержки роста анаэробных микроорганизмов, мм

1 Стоматологический карандаш 29,6594 ±0,5524

2 Мазь на вазелин-ланолиновой основе 8,6188 ±0,3485

3 Мазь на сплаве ПЭО 14,1837 ±0,6286

4 Гель "Метрогил-дента" 27,3123 ± 1,0617

Изучена смываемость стоматологического карандаша из ротовой полости, после использования стоматологического карандаша по разработанной нами методике.

Таблица 4

Смываемость стоматологического карандаша in vivo

Состав карандаша Содержание компонентов, %

1 2 3 4 5

Парафин 10 5 15 7 3

Вазелиновое масло 10 5 15 10 10

Пентол 10 10 10 10 10

Метронидазол 10 10 10 10 10

Экстракт прополиса 5 5 5 5 5

Низкомолекулярный по- 55 65 45 58 62

лиэтилен

Время полного смывания 12 8 2 9 5

карандаша, часы

Как видно из таблицы, время полного смывания карандаша состава №1 (выбранного нами на основание методов математического планирования) составляет 12 часов.

Оценку высвобождения метронидазола из стоматологического карандаша проводили в приборе "вращающаяся корзинка" методом диализа через полупроницаемую мембрану.

Высвобождение метронидазола из стоматологического карандаша происходит в течение 12 часов, причем уже к концу первого часа составляет 17,9%, достигая к 3 часу 35,2%, к 6 часу 52,1%, к 9 часу -62,3%, а к 12-69,2%.

При исследование геля «Метрогил-Денга» установлено, что к 1 часу выделяется 20,1%, а к 6-93,48 %, дальнейшего высвобождения метронидазола не установлено.

Высвобождение метронидазола из мазей на вазелиновой и на ланолин-вазелиновой основе происходит крайне медленно и составляет к 6 часу - 2,74% и 6,85 % соответственно.

Экспериментально доказано, что разработанный состав стоматологического карандаша обладает пролонгированным действием. Входящие в состав основы карандаша вещества, регулируют высвобождение метронидазола за счет наличия оп-

тималыгаго количества уплотнителя, пластификатора, ПАВ и низкомолекулярного полиэтилена, который составляет более половины основы. Можно предположить, что такое явление происходит за счет разветвленной структуры низкомолекулярного полиэтилена и содержания в ней кристаллической фазы (до 50%). Низкомолекулярный полиэтилен образует ячеистую структуру, в которой находятся метронидазол и экстракт прополиса. Наличие парафина и вазелинового масла придают упруго-пластичные свойства низкомолекулярному полиэтилену, и одновременно упрочняя «каркас» карандаша, замедляют высвобождение лекарственных веществ. Пентол проявляет солюбилизирующие свойства на лекарственные препараты и увеличивает сродство основы с увлажненной слизистой оболочкой. За счет наличия ПАВ в основе карандаша, и в частности пентола возможно нанесение равномерного мазка.

Изучение фармацевтической доступности экстракта прополиса из карандашей проводили методом диализа через полупроницаемую мембрану. Высвобождение флавоноидов происходит постепенно, начиная с 5% за первый час, достигая 15% к б часу, к 10 часу -25%, достигая 47% к 12 часу, что подтверждает предыдущие исследования о пролонгированном действии разработанного состава стоматологического карандаша.

Метронидазол успешно применяется во многих областях медицины, в том числе и дерматологии. Поэтому, перспективным является создание новой лекарственной формы метронидазола, в виде дерматологического карандаша.

Для выбора вида и оптимального количества компонентов основообразующей композиции использовали метод математического планирования эксперимента. Параметрами оптимизации эксперимента служили намазываемость карандашей, и антимикробная активность. В результате обработки экспериментальных данных, установлен оптимальный состав стоматологического и дерматологического карандаша, а также технологическая схема производства, таблица 5 и рисунок 3.

ВР. 1 Санитарная обработка производства

ТЕХНОЛОГИЧЕСКАЯ СХЕМА ПОЛУЧЕНИЯ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИХ КАРАНДАШЕЙ

ВР. 1.1 Подготовка оборудования и вспомогательных мате-

ТП.2 Подготовка сырья

ТП.2.1. Пдготовка компонентов основы

Потери

_и_

ТП. 2.3 Измельчение метрони-дазола

Л

Потери

П.3.5 Гомогенизация

УМО.7 Упаковка и маркировка карандашей

I)

Брак

Готовая продукция

Склад

Рисунок 3

И

и

Таблица 5

Составы масс медицинских карандашей, %

№ н /п Вспомогательные и лекарственные вещества Стоматологический карандаш Дерматологический карандаш

1 Парафин 10% 10%

Вазелиновое масло 10% 10%

Пентол 10 10% 10%

Метронидазол 10% 10%

Экстракт прополиса 5% -

НМПЭ до 100% до 100%

При определении намазываемое™ предлагаемого состава карандаша, установлено, что дерматологический карандаш имеет более низкую намазываемость, по сравнению со стоматологическим карандашом, что связано с различными областями применения лечебных карандашей. Дерматологический карандаш наносится на сухую поверхность кожи лица, или тела больного. Стоматологический карандаш имеет более мягкую консистенцию и более высокий показатель по намазываемости, так как он должен обеспечить ровный мазок, длительную адгезию на влажной слизистой оболочке полости рта. Различия в консистенции карандашей, а, следовательно, и в значениях по намазываемости, возникают за счет введения в стоматологический карандаш экстракта прополиса.

Оптимальное содержание метронидазола в дерматологическом карандаше ранее определено при разработке стоматологических карандашей, путем изучения антимикробной активности медицинских карандашей, содержащих метронидазол в различном процентном соотношении (от 0 до 15%). Установлено, что оптимальное содержание МЗ в карандаше составляет 10%.

Исследования биологической доступности in vitro дерматологических карандашей проводили методом диализа при температуре 34С в диализную среду в сравнении с мазями на различных основах, содержащими 10% метронидазола.

Установлено, что наиболее быстро метронидазол высвобождается из основ гидрофильного характера - натрий карбоксиметилцеллюлозы и сплава полиэтиле-ноксидов. Так уже к 3 часу метронидазол из мазей, приготовленных на этих основах,

высвобождается в количестве 78,12% и 81,45%, соответственно. Из мазей на вазелиновой, ланолино-вазелиновой и эмульсионных основах метронидазол высвобождается очень медленно, и к 12 часу составляет 12,30%, 14,94% и 40,43%, соответственно. Из дерматологических карандашей метронидазол высвобождается постепенно, и к 12 часу составляет 54,46%. Таким образом, разработанный состав дерматологического карандаша, является пролонгированной лекарственной формой, обеспечивая постоянное высвобождение лечебного компонента (МЗ), что имеет главенствующее значение в терапии дерматологических заболеваний.

При определении острой токсичности метронидазола и разработанных лекарственных форм, установлено, что ЬБ 50 метронидазола и дерматологического карандаша, с метронидазолом существенно не отличается, а у стоматологического карандаша даже выше. Следовательно, стоматологический карандаш менее токсичен, чем метронидазол, что видимо, объясняется антитоксическим эффектом экстракта прополиса, приводящему к снижению токсичности карандаша.

В патогенезе пародонтита важная роль принадлежит воспалительным процессам. Как показали наши исследования, разработанные составы лечебных карандашей, содержащих метронидазол применяемые в дозе 40мг/кг в пересчете на метронидазол, достоверно угнетают выраженность экссудативной фазы воспаления в сравнении с интактными животными (р< 0,05 -0,001), однако противовоспалительный эффект 2% мази диклофенака натрия был более значим. На пролиферативную фазу воспаления достоверно значимого влияния, изучаемые лекарственные формы не оказывают, в чем уступают препарату сравнения.

Изучено противовоспалительное действие стоматологического и дерматологического карандашей, содержащих метронидазол на модели ультрафиолетового ожога. Установлено, что дерматологический и стоматологический карандаши обладают противовоспалительным действием, о чем свидетельствует уменьшение толщины кожной складки и площади ультрафиолетового ожога (р< 0,001), а также день полного завершения ожога. Так, если в контрольной группе ультрафиолетовый ожог завершался к 12 дню, то в группе животных, получавших карандаши к 10 суткам.

На модели термического ожога выявлено, что стоматологический и дерматологический карандаши обладают ранозаживляющим действием, о чем свидетельст-

вует более раннее реэпителизация. При термических ожогах, заживление кожной рапы было достоверно более интенсивным в группах животных, получавших ежедневно аппликации 10% метилурациловой мази, 10% масляного раствора метрони-дазола и лечебных карандашей, содержащих 10% метронидазола в сравнении с контрольными и интактными животными (р< 0,05 -0,001). Полная реэпителизация отмечалась на 27 и 28 сутки, а в контроле лишь после 30 суток.

Оценка качества полученных медицинских карандашей, проводилась после приготовления, и затем каждые 3 месяца в течение срока хранения по следующим параметрам: намазываемость, высыхаемость, количественное содержание МЗ, количественное содержание флавоноидов, антимикробная активность. Определение количественного содержания МЗ и флавоноидных соединений проводили по разработанной нами методике. Метод определения метронидазола основан на предварительном растворении навески карандаша в гексане, с последующим титрованием хлорной кислотой в среде неводных растворителей. Флавоноидные и фенольные соединения определялись путем экстракции 95% этанолом из петролейного эфира, в котором растворялась навеска карандаша, дальнейшим фотоэлектроколориметриче-ским определением при длине волны 400 нм, светофильтр №3 с толщиной светопо-глощающего слоя 10 мм, % ошибки составляет 1,17%.

Экспериментально установлен срок хранения медицинских карандашей, содержащих МЗ который составляет 2 года.

Выводы:

1. На основании проведенных комплексных исследований при использовании математического метода планирования эксперимента, научно обоснован состав и технология стоматологических и дерматологических карандашей, содержащих в качестве основы 10% парафина, 10% вазелинового масла, 10% пентола от 55 до 60% низкомолекулярного полиэтилена, а в качестве лечебного комплекса 10% метронидазола и 5% экстракта прополиса, предназначенного для лечения воспалительных заболеваний пародонта, и 10% метронидазола, предназначенного для лечения дерматозов.

2. Изучены структурно-механические свойства медицинских карандашей. В результате исследований структурно-механических свойств карандашей выявлено что, материалы основы и лечебных карандашей являются малопрочными структура-

ми, обладающими тиксотропностью, что обуславливает их оптимальную консистенцию и хорошую намазывающую способность, а также технологичность

3. Изучены антимикробные, реологические свойства разработанных карандашей. Установлена высокая антимикробная активность в отношении основных возбудителей пародонтита и дерматозов.

4. Разработаны методики количественного определения метронидазола и флавоно-идных соединений в медицинских карандашах. Методика определения метронидазола основана на предварительном растворении навески карандаша в гексане, с последующим титрованием хлорной кислотой в среде неводных растворителей. Флавоноидные и фенольные соединения определялись путем экстракции 95% этанолом из петролейного эфира, в котором растворялась навеска карандаша, дальнейшим фотоэлектроколориметрическим определением при длине волны 400 нм, светофильтр №3 с толщиной светопоглощающего слоя 10 мм.

5. Предложен способ определения смываемости стоматологического карандаша со слизистой оболочки полости рта, основанный на определении присутствия метронидазола в слюне добровольцев в течение 12 часов после использования стоматологического карандаша, методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей хлороформ-диметилформамид (8:2), основанный на способности метронидазола в УФ-свете при длине волны 254 нм образовывать пятаа розового цвета.

6. Разработан способ оценки противовоспалительного действия медицинских карандашей, содержащих метронидазол, основанный на изучении влияния метронидазола и медицинских карандашей на экссудативно-пролиферативную фазу воспаления.

7. Установлена ранозаживляющая и противовоспалительная активность разработанных медицинских карандашей, отсутствие острой токсичности.

8. Исследование стабильности карандашей в зависимости от вида упаковки и условий хранения показало, что оптимальными являются пластмассовые пеналы, обеспечивающие стабильность в течение 2 лет.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Патент на изобретение № 2175865 от 20.11. 2001г. «Карандаш для лечения паро-донтита» / Лазарева Е.А., Лиходед В.А, Чемикосова Т.С., Тенякова Л.Л/.

2. Удостоверение на рационализаторское предложение № 2333 от 22.03.2001. «Способ оценки противовоспалительного действия мягких лекарственных форм» /Насыров Х.М., Лиходед В.А., Лазарева Е.А., Файзуллина З.А/.

3. Лиходед В.А., Лазарева Е.А., Насыров Х.М., Чемикосова Т.С., Хуснаризанова Р.Ф. Антимикробная активность стоматологического карандаша для лечения па-родонтита // Тез. докладов VIII росс. нац. конгресса «Человек и лекарство»,-Москва.-2-6 апр. -2001.-С.420-421.

4. Лиходед В.А., Лазарева Е.А., Тенякова Л.Л. Основообразующая композиция лечебного карандаша // Актуальные проблемы теории и практики фармации: Сб. науч. статей .- Барнаул.-2000.-с.104-107

5. Лазарева Е.А. Использование методов математического планирования эксперимента при разработке состава стоматологического карандаша //Молодые ученые медицины вступая в XXI век,- спец.выпуск Здравоохранение Башкортостана,-2000.-№2,- с.326-328.

6. Лазарева Е.А., Лиходед В.А Создание перспективной лекарственной формы в виде стоматологического карандаша для лечения пародонтита // Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики: материалы науч. конф., посвященной 35-летию фарм.факультета курского мед.университета. -Курск: КГМУ, 2001.-с.337-138.

7. Лазарева Е.А., Файзуллина З.А. Изучение острой токсичности и фармакологических свойств дерматологических и стоматологических карандашей // Вопросы теоретической и практической медицины. Материалы 66-Республ. конф. студ. и молодых ученых БГМУ. -Уфа: Здравоохранение Башкортостана, 2001. -с.83-84.

Глава I. Обзор литературы

1.1. Воспалительные заболевания пародонта. 13

1.2. Современные подходы к лечению и профилактике воспалительных заболеваний пародонта. Характеристика препаратов пролонгированного действия.16

1.3. Воспалительные дерматологические заболевания.23

1.4. Медицинские карандаши.29

Заключение.34

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании проведенных комплексных исследований при использовании математического метода планирования эксперимента, научно обоснован состав и технология стоматологических и дерматологических карандашей, содержащих в качестве основы 10% парафина, 10% вазелинового масла, 10% пентола от 55 до 60% низкомолекулярного полиэтилена, а в качестве лечебного комплекса 10% метронидазола и 5% экстракта прополиса, предназначенного для лечения воспалительных заболеваний пародонта, и 10% метронидазола, предназначенного для лечения дерматозов.

2. Разработаны методики количественного определения метронидазола и флавоноидных соединений в медицинских карандашах. Методика определения метронидазола основана на предварительном растворении навески карандаша в гексане, с последующим титрованием хлорной кислотой в среде неводных растворителей. Флавоноидные и фенольные соединения определялись путем экстракции 95% этанолом из петролейного эфира, в котором растворялась навеска карандаша, дальнейшим фотоэлектроколо-риметрическим определением при длине волны 400 нм, светофильтр №3 с толщиной светопоглощающего слоя 10 мм.

3. Предложен способ определения смываемости стоматологического карандаша со слизистой оболочки полости рта, основанный на определении присутствия метронидазола в слюне добровольцев в течение 12 часов после использования стоматологического карандаша, методом тонкослойной хроматографии в системе растворителей хлороформ-диметилформамид (8:2), основанный на способности метронидазола в УФ-свете при длине волны 254 нм образовывать пятна розового цвета.

4. Разработан способ оценки противовоспалительного действия медицинских карандашей, содержащих метронидазол, основанный на изучении влияния метроиидазола и медицинских карандашей на экссудативно-пролиферативную фазу воспаления.

5. Изучены антимикробные, реологические свойства разработанных карандашей. Установлена высокая антимикробная активность в отношении основных возбудителей пародонтита и дерматозов.

6. Изучены структурно-механические свойства медицинских карандашей. В результате исследований структурно-механических свойств карандашей выявлено что, материалы основы и лечебных карандашей являются малопрочными структурами, обладающими тиксотропностью, что обуславливает их оптимальную консистенцию и хорошую намазывающую способность, а также технологичность.

7. Установлена ранозаживляющая и противовоспалительная активность разработанных медицинских карандашей, отсутствие острой токсичности.

8. Исследование стабильности карандашей в зависимости от вида упаковки и условий хранения показало, что оптимальными являются пластмассовые пеналы, обеспечивающие стабильность в течение 2 лет.

Заключение

Из обзора литературы следует, что ВЗП и дерматозы (розацеа, пе-риоральный дерматит, атопический дерматит) являются широко распространенными заболеваниями, в основе возникновения которых лежит микробный фактор.

В настоящее время проблема создания новых пролонгированных препаратов широкого антимикробного спектра действия является актуальной. Агрессивность микробной среды в полости рта и на коже постоянно побуждает к совершенствованию средств защиты от нее, а также поиску и разработке новых антибактериальных препаратов и эффективных лекарственных форм. Среди их множества, существующего в настоящее время, предпочтение отдается производному имидазола - метронидазолу, и препаратам природного происхождения, каковым является прополис. При этом большое значение имеет вид лекарственной формы, позволяющей создавать высокую концентрацию в десневой жидкости пародон-тального кармана и на коже, и оказывать непосредственное влияние на штаммы, инициирующие патологический процесс, а также удобство и простота применения лекарственной формы больными. Существующие способы применения метронидазола и экстракта прополиса не обеспечивают полноценного лечебного эффекта препарата (взвеси для промывания пародонтального кармана и аппликаций, мази, гели и пасты). Поэтому основные усилия многих исследователей направлены на создание новых эффективных лекарственных форм с метронидазолом и экстрактом прополиса.

Нам представляется перспективным создание медицинских карандашей, содержащих метронидазол и экстракт прополиса для лечения стоматологических и дерматологических заболеваний, и позволит расширить ограниченный ассортимент медицинских карандашей, выпускаемых в настоящее время. Развитие химической промышленности позволяет использовать новые вспомогательные вещества в фармацевтической технологии, такие как НМПЭ. На основе сочетания НМПЭ с уплотнителями, пластификаторами и поверхностно-активными веществами с использованием методов математического планирования эксперимента возможно создание высокоэффективных медицинских карандашей.

Исходя из вышесказанного, мы сочли обоснованным проведение комплексных исследований по разработке составов и технологии медицинских карандашей, содержащих метронидазол и экстракт прополиса.

ГЛАВА II

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Материалы исследования.

При выполнении экспериментальной работы были использованы следующие лекарственные и вспомогательные вещества, соответствующие нормативной документации: метронидазол (ВФС 42-5905-96), спирт этиловый 96% (ФС 42-3072-94), низкомолекулярный полиэтилен (ТУ 605-1837-82) плотностью от 0,86 до 0,90 г/см3, парафин (ГФ IX, статья 365), полиэтиленгликоль 4000, воск желтый, вода очищенная (ФС 422619-89), вазелиновое масло (ВФС 42-2298-94), полиэтиленгликоль 400, димексид, пентол (ТУ 19-16-350-80), эмульсионный воск (ТУ 18-16-1276), твин 80 ( ТУ 6-14-938-79), сорбитанолеат, эмульгатор №1 - (ФС 421596-81), эмульгатор Т-2 (ТУ 18-17-05-76), высшие жирные спирты, стеарин косметический, ОП-Ю, экстракт прополиса спиртовый (ТУ 64-030711-91), прополис (ВФС 42-1084-81).

Метронидазол- 2-метил-5-нитроимидазолил-1-этанол (ВФС 422283-93). От белого с желтовато-зеленоватым оттенком до светловато-желтого с зеленоватым оттенком цвета кристаллический порошок со слабым запахом. Умеренно растворим в спирте 95%, мало растворим в воде и хлороформе. Температура плавления 160-165 °С. Обладает широким спектром действия в отношении простейших, трихомонад, лямблий, а также высокой активностью в отношении облигатных анаэробов (спор- и неспоробразующих) [107, 114].

2-Метил-5-иитроимидаэолнл-Ьэтяиол

С^зОз сн2 -сн2-он

14

Спиртовый экстракт прополиса - прозрачная жидкость от ярко желтого до красно-коричневого цвета с запахом, свойственным прополису (ТУ 64-0307-11 -91), Содержание экстрактивных веществ из прополиса 4-6 г/100мл, флавоноидов и других фенольных соединений в пересчете на сухой прополис не менее 25 мг%, содержание этилового спирта в экстракте прополиса - не менее 67%. Окисляемость перманганатом калия должна быть не более 22,0 сек., йодное число - не менее 35,0%. В состав спиртового экстракта прополиса входят эфирные масла, флавоноидные и другие фенольные соединения, провитамин «А», витамины группы «В», коричный спирт, аминокислоты, микроэлементы, ароматические кислоты, природные антибиотики и многие другие соединения нативного про-полиса[171, 194].

Механизм действия и показания к применению такие же, как и у нативного прополиса [69].

Низкомолекулярный полиэтилен (НМПЭ) - (ТУ 6-05-1837-82) молекулярной массы 1500-5000 представляет собой вязкую, воскообразную, жирную и липкую на ощупь массу, в толстом слое сероватого цвета, без вкуса и запаха. НМПЭ не растворим в воде, этаноле, хорошо растворим в неполярных органических растворителях, например в гексане, гептане и др. Температура плавления 65,0-89,0 °С, плотность от 0,86 до 0,90 г/см3, степень кристаллизации- 40-50% [13,14]. Низкомолекулярный полиэтилен представляет собой смесь полимерных молекул различной длины, для которой характерна надмолекулярная структура, состоящая, в свою очередь, из чередующихся аморфных и кристаллических областей [98].

В фармакологических исследованиях использовали 90 белых крыс линии Вистар обоего пола массой 180-200 г и 54 белых мышей массой 18-20 г, полученных из питомника «Рапполово» (г. Санкт-Петербург).

2.2. Методы исследования.

Реологические свойства карандашей изучали с помощью ротационного вискозиметра с коаксиальными цилиндрами "Реотест-2"(Германия).

Аналитическое оборудование включало: весы аналитические ВЛА-200-М, спектрофотометр СФ-46 и HEWLETT PACKARD 8452А, фото-электроколориметр КФК -2.

Идентификацию компонентов карандашей осуществляли методом ТСХ с использованием пластин марки "Силуфол" и "Сорбфил".

2.2.1 Определение физической совместимости жидких и плавких компонентов.

Смешиваемость жидких и плавких компонентов определяли путём смешивания их в соотношениях 1:10; 1:1; 10:1 после предварительного расплавления на водяной бане плавких компонентов, при температуре на 2-3 °С выше температуры плавления тугоплавкого компонента. Методика предложена Аркушей А.А., 1982 [9,10]. Полученные жидкие смеси визуально исследуют в течение одного месяца и считают совместимыми, если они полностью смешивались (остались гомогенными в жидком состоянии и не выделили жидкой фазы после охлаждения сплава) или несовместимыми, если они частично или полностью не смешивались.

2.2.2 Определение намазываемости основ.

Способность материала намазываться определяют по методике, предложенной Jonescus S в 1974 году [210]. Пробу основы массой 1 грамм помещали в центре нижней стеклянной пластины, сверху осторожно накладывали верхнюю пластину, на которую помещают груз массой 1 кг. Под влиянием груза пятно основы равномерно увеличивалось. Через некоторый промежуток времени (15 минут) измеряют диаметр расплывшегося пятна (мм), дающий характеристику намазываемости.

2.2.3 Определение высыхаемости медицинских карандашей и основы.

Изготовленные по технологической схеме медицинские карандаши, содержащие метронидазол и основы медицинских карандашей, выливают в металлические формы. Затем одну часть приготовленных карандашей и основ помещают в пластмассовые пеналы по типу твердых дезодорантов или губных помад, другую часть не упаковывают в пеналы. Карандаши хранят при температуре 18-20 ±2°С и влажности 45 % в течение 12 месяцев. Взвешивание проводят еженедельно в течение первых 4 недель, далее на 2, 3, 6, 12 месяц после приготовления образца. Убыль в весе выражают в процентах по отношению к первоначальному весу.

2.2.4 Определение плотности основы и медицинских карандашей.

Определение плотности основы и медицинских карандашей проводят по методике, описанной в ГФ XI изд., вып.1. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - М: Медицина, 1990, с.24[42,43]

2.2.5 Определение температуры плавления основы и медицинских карандашей.

Определение температуры плавления основы и медицинских карандашей проводят согласно методике, описанной в ГФ XI изд., вып.1. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. - М: Медицина, 1990, с. 16

2.2.6 Определение средней массы медицинских карандашей.

Определение средней массы карандашей. Содержащих метронидазол проводят по методике, описанной в статье «Суппозитории» ГФ XI изд., вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. -М: Медицина, 1990, с. 152.

2.2.7. Исследование антимикробиой активности In vitro стоматологического и дерматологического карандашей.

Определение антимикробной in vitro стоматологического и дерматологического карандашей с культурами Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis АТСС 6633, Pseudomones aereginosa NCTC 2134 проводят согласно требованиям ГФ XI издания выпуск 2 с.210 с соблюдением правил микробиологического анализа в боксе.

2.2.8. Определение подлинности метронидазола в медицинских карандашах.

Точную навеску карандаша около 0,5 г растворяют в 15 мл гексана.

А) К 1 мл полученного раствора прибавляют 0,01 г цинковой пыли. 1 мл воды очищенной, 0,25 г кислоты хлористоводородной и нагревают в течение 5 минут на водяной бане. Охлаждают на льду, прибавляют 0.5 мл раствора натрия нитрита и 1 мл раствора 1% раствора кислоты сульфаминовой. 0,5 мл полученного раствора прибавляют к смеси 0,5 мл щелочного раствора fi-нафтола и 2 мл раствора едкого натра; появляется оранжево-красное окрашивание.

Б) к 1 мл полученного раствора добавляют 5 мл смеси хлороформ - спирт метиловый (1:1) (испытуемый раствор). 0,01 мл испытуемого раствора наносят на линию старта пластинки Силуфол 254 размером 8x15 см.

Рядом наносят 0,01 мл раствора свидетеля*. Пластинку с нанесенными тробами тотчас же помещают в камеру со смесью хлороформ - ди-метилформамид (8:2) и хроматографируют восходящим методом. Когда фронт растворителя дойдет до конца пластинки, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до исчезновения запаха растворителя и просматривают в УФ свете при 254 нм.

На хроматограмме испытуемого препарата наблюдют пятно, значение Rf главного пятна из испытуемого раствора совпадает со значением пятна Rf стандартного раствора.

Примечание*: Приготовление раствора свидетеля:0,2 г метрони-дазола (точная навеска) растворяют в 5 мл смеси хлороформ - спирт метиловый (1:1). В мерную колбу вместимостью 50 мл вносят 0,25 мл полученного раствора и доводят объем раствора хлороформом до метки.

2.2.9. Количественное определение метронидазола в карандаше.

Нами разработана методика количественного определения метронидазола в медицинских карандашах (стоматологический, дерматологический). Предварительно проведены исследования по выбору растворителя для основы карандашей и метронидазола. В эксперименте изучено влияние различных растворителей на достоверность количественного определения метронидазола. В качестве растворителей используют: хлороформ, петролейный эфир, гексан, спирт этиловый - ледяная уксусная кислота (1:2, 1:5, 1:10), уайт-спирит. Установлено, что основа карандашей и метронидазол растворимы в перечисленный органических растворителях. При определении метронидазола в навеске карандаша, растворенной в указанных растворителях, установлено, что достоверные результаты количественного определения лекарственного препарата в гексане наиболее оптимальны. При статистической обработке результатов анализа наблюдается наименьший процент отклонения, который составляет 1,17%.

Точную навеску карандаша около 1,5 граммов помещают в круг-лодонную колбу, емкостью 250 см3, растворяют в 40 мл гексана, добавляют 20 мл ледяной уксусной кислоты и 20 мл уксусного ангидрида. Кипятят на водяной бане с обратным холодильником 5-10 минут, охлаждают, промывают холодильник 5 мл ледяной уксусной кислоты и титруют 0,1 М раствором кислоты хлорной до желто-зелёного окрашивания (индикатор - раствор кристаллического фиолетового, 0,05 мл). Параллельно проводят контрольный опыт в случае дерматологического карандаша с основой, в случае стоматологического карандаша с основой, содержащей дополнительно 5% экстракта прополиса. Количественное содержание метронидазола определяют по формуле:

V-Vk) х к х Т х р

С - -, где а

V-объём титранта пошедший на титрование навески карандаша, мл; VK - объём титранта пошедший на титрование в контрольном опыте, мл; К - поправочный коэффициент; Т - титр соответствия; Р - вес карандаша, г. а - навеска препарата, г.

1 мл 0,1 М раствора кислоты хлорной соответствует 0,01712 г метронидазола. Результаты статистической достоверности приведены в таблице 2.1