Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Разработка состава, технологии и стандартизация глазных мазей на основе сополимера стирола с малеиновым ангидридом

На правах рукописи

Кадырова Зульфия Разитовна

Разработка состава, технологии и стандартизация глазных мазей на основе сополимера стирола с малеиновым ангидридом

15.00.01 - технология лекарств и организация фармацевтического дела

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Москва - 2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО Башкирском государственном медицинском университете МЗ и социального развития РФ

Научный руководитель:

кандидат фармацевтических наук, доцент

Шикова Юлия Витальевна

Официальные оппоненты:

Доктор фармацевтических наук, профессор Истранов Леонид Прокофьевич

Доктор фармацевтических наук, профессор Астраханова Маргарита Михайловна

Ведущая организация:

Государственное учреждение научно-исследовательский институт Фармакологии РАМН имени В.В.Закусова.

Защита состоится «14 » февраля 2005 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета

Д 006.070.01 при Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН по адресу: г. Москва, ул. Грина,7.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВИЛАР РАСХН по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина,7.

Автореферат разослан: «_»__2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 006.070.01

к. с./х. н.

Кирцова М.В.

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Среди широкого ассортимента различных зекарственных средств, офтальмологические лекарственные препараты занимают особое место. Заболеваемость всеми видами глазных болезней составляет приблизительно 56% в крупных городах и около 49% в сельской местности. Ведущее место среди них занимают воспалительные инфекционные поражения глаз, в том числе офтальмогерпес, изъязвления роговицы. Возбудителями инфекционных поражений глаз могут служить многие микроорганизмы, а также некоторые вирусы. Наиболее распространенной лекарственной формой являются глазные капли. Но предьявляемым к ним требованиям глазные капли имеют много общего с иньекционными растворами. Основным недостатком глазных капель является их нестойкость при хранении и использовании, короткий период терапевтического действия. Для успешной химиотерапии необходимо выбрать не только эффективный препарат, но и рациональную лекарственную форму, длительно поддерживающую терапевтическую концентрацию в тканях глаза. Перспективным является поиск новых вспомогательных веществ обеспечивающих пролонгирование лекарств в виде глазных мазей или гелей.

Среди современных высокомолекулярных полимерных материалов, обладающих комплексом физико-химических, технологических и биологических характеристик, допускающих их использование в производстве лекарственных препаратов в качестве вспомогательных компонентов различного назначения (пролонгаторы, структурообразующие, пластификаторы, загустители и т д.) наше внимание привлек ССМА - сополимер стирола с малеиновым ангидридом. Он представляет собой белый, легкий, аморфный порошок, растворяющийся в воде с предварительным набуханием с образованием гелей в низких концентрациях (ТУ 6-010274010931-01). Ранее в Уфимском НИИ глазных болезней проведены экспериментальные исследования по изучению 1-2% водного геля ССМА в качестве средства для лечения герпетического кератита, который по своей эффективности превосходит известные препараты Ацккловир и Виролекс.

Мощным средством в борьбе с инфекционными поражениями глаз являются антибиотики. Однако многие из них в последние годы оказываются неэффективными вследствие появления большого количества резистентных к ним штаммов микроорганизмов. Одним из методов борьбы с растущей устойчивостью микроорганизмов к антибиотикам является поиск использования в офтальмологии современных препаратов обладающих комбинированным действием (прогивовирусным, антипаразитарным, иммуномоделирующим). В этом отношении заслуживают внимание метронидазол, который активен в отношении анаэробных бактерий и простейших в концентрации 0,75-1-2% геля, а также его способность подавлять размножение вируса простого герпеса и оксиметилурацил (ОМУ) - иммуномодулятор, обладающий широким спек-

тром действия: противовоспалительным и рано!аживля1

3

щит. За тклцшиц 11).'Ш РОС. \-Ь1ЩГ

отмечается

учащение и утяжеление офтальмогерпеса, повторные атаки этой инфекции глаз отмечены у 2060 % больных. Учитывая наличие иммунодефицита у таких больных наше внимание привлек препарат, стимулирующий метаболические процессы, а именно субстанция ОМУ - ФСП 420415-2776-02, № госрегистрации Р№001663/01-2002], который способен повышать эффективность антибиотикотерапии.

Актуальна для клинической медицины разработка геля для ультразвукового исследования (УЗИ). С этой целью применяют так называемые контактные среды (изотонический раствор натрия хлорида, вазелиновое масло, метилцеллюлоза в виде 1 -2% раствора и др.), удельное акустическое сопротивление, которых мало отличается от такового тканей глаза Поэтому проведение исследований по созданию и внедрению в практику здравоохранения новых лекарственных препаратов, акустических сред для УЗИ экономически доступных и эффективных вспомогательных веществ является перспективным.

Цель и задачи исследования. Научное обоснование и проведение комплексных исследований по разработке состава, технологии, изучению влияния на репаративную регенерацию роговицы геля, содержащего метронидазол, комплексного геля, в состав которого входит мет-ронидазол и оксиметилурацил, а также контактной среды для УЗ сканирования глаза на основе нового отечественного гелеобразователя сополимера стирола с малеиновым ангидридом для диагностических ультразвуковых систем, профилактики и лечения инфекционных и воспалительных поражений глаз.

В соответствии с целью исследования были поставлены следующие задачи:

1. Обосновать возможность использования ССМА в качестве вспомогательного вещества при разработке гелей для УЗИ и офтальмологии.

2. Изучить физико-химические и технологические свойства ССМА и установить возможность использования для получения мягких лекарственных форм.

3. Обосновать и разработать оптимальные составы, рациональную технологию, методы оценки качества геля на основе ССМА для офтальмологии.

4. Разработать составы и технологию получения гелей с метронидазолом и ОМУ для лечения инфекционных и воспалительных поражений глаз, исследовать показатели качества.

5. Изучить с помощью фармакологических тестов «in vivo» активность образцов разработанных препаратов и рекомендовать их для дальнейшего изучения с целью последующего внедрения в промышленное производство.

6. Разработать новые и модифицировать известные методики идентификации и количественного определения ряда компонентов изучаемых препаратов.

7. Установить показатели качества и нормы для стандартизации созданных препаратов в процессе хранения в естественных условиях.

8. Разработать проекты документация ФСП для офтальмологам: гель с метронидазолом; гель с метронидазолом и ОМУ; гель ССМА для акустической диагностической системы. Научная новизна.

1. На основании проведенного анализа современного состояния исследований по принципам лечения воспалительных заболеваний глаз и составов применяемых препаратов предложен в качестве основы для глазных гелей ССМА, обладающий противогерпетическим действием. По результатам физико-химических, биологических исследований доказана целесообразность применения ССМА в качестве гидрофильной основы для гелей, предназначенных для лечения воспалительных заболеваний роговицы глаз.

2. Теоретически обоснован и экспериментально разработан состав и технология получения геля на основе ССМА для офтальмологии. На модели травматической раны роговицы установлено ранозаживляющее действие геля ССМА и обосновано его применение для лечения воспалительных заболеваний глаз и стимулирования репаративных процессов.

3. В целях расширения ограниченного рынка отечественных контактных сред для УЗИ, разработан состав и технология получения геля для УЗИ глаза на основе ССМА.

4. На основании результатов физико-химических и химических исследований определена совместимость геля с метронидазолом и ОМУ, установлена их оптимальная концентрация для лечения воспалительных инфекционных поражений глаз. С использованием модифицированных методик спектрофотометрии и тонкослойной хроматографии определены биофармацевтические показатели разработанных составов гелей для офтальмологии. Проведены технологические, биофармацевтические и морфологические исследования, разработан состав и технология изготовления геля с метронидазолом и ОМУ, обладающего противовоспалительным, ранозажив-ляющим и антимикробным действием Определены условия и сроки хранения разработанных гелей.

Практическая значимость. На основании проведенных исследований разработаны и внедрены

- средство для лечения заболеваний 1лаз с метронидазолом в стандартный перечень лечебных мероприятий в лечении офтальмологических больных с инфекционными конъюнктивитами в Уфимском ННИ глазных болезней МЗ РФ. (акт о внедрении от 27.05.03.), в ГУ Всероссийского центра глазной и пластической хирургии МЗ РФ г. Уфы (акт о внедрении от 27.05.03.), патент.

- средство для лечения заболеваний глаз с метронидазолом и ОМУ в стандартный перечень лечебных мероприятий в лечении офтальмологических больных с инфекционными конъюнктивитами в Уфимском НИИ глазных болезней МЗ РФ (акт о внедрении от 27.05.03.), в ГУ Всероссийского центра глазной и пластической хирургии МЗ РФ г. Уфы (акт о внедрении от 27.05.03), заявка на изобретение.

- гель для УЗИ для лечения офтальмологических больных во Всероссийском центре глазной и пластической хирургии МЗ РФ г.Уфы, патент.

- проекты ФСП на «ССМА 1% гель для УЗИ в офтальмологии», «Метронидазол 0,5% гель для офтальмологии», « Гель четронидазола с оксиметилурацилом для офтальмологам». Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на научных конференциях студентов и молодых ученых БГМУ (Уфа 2001, 2002), на научной конференции ученых Республики Башкортостан «Научный прорыв-2002» (Уфа 2002), на научно-практической конференции «Медицина будущего» (Краснодар 2002), на конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука - 2003» (Уфа 2003) Разработанные составы глазных " I елей с метронидаюлом и ОМУ, акустический гель для УЗИ на основе ССМА экспонировался на межд) народной медицинской выставке (г. Уфа, 2003), на совместной секции Ученого совета ( ММА имени И.М.Сеченова и ВИЛАР (г. Москва, 2004).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 2 патента и 1 заявка на изобретение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ БГМУ по проблеме «Изыскание и изучение новых фармакологических средств» (номер Госрегистрации 01204011952) соответствует направлению проблемной комиссии по фармации и фармакологии. На защиту выносится: разработка состава, технологические исследования акустических сред для УЗИ, офтальмологических гелей с метронидазолом, с метронидазолом и ОМУ на основе ССМА и их стандартизация.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 стр. машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, собственных рс ¡ультатов и их обсуждения, выводов, списка литературы и приложениия. Работа иллюстрирована 22 табл. и 16 рис Библиографический указатель включает 232 источника, из них 70 иностранных авторов.

Содержание работы Объекты, материалы и методы исследования

В работе использованы: ССМА - белый, легкий, аморфный порошок, растворяющийся в воде с предварительным набуханием с образованием гелей в низких концентрациях (ТУ 6-010274010931-01); оксиметилурацил (ОМУ) - ФСП 42-0415-2776-02, № госрегистрации Р№001663/01 -2002]; метронидазол (ВФС 42-2283-93).

При выполнении работы были применены следующие методы: тонкослойная хроматография с использованием пластинок марки «Силуфол», УФ-спектрофотомегрия на приборе спектрофотометр СФ-46, СФ-54 и HEWLETT PACKARD 8452А. Аналитическое оборудование включало: весы аналитические ВЛА-200-М. Микроскопические исследования проводили с использованием микроскопа «Биолам МБИ - 15У». Структурно-механические параметры изучали на приборах «Реотест-2», «Brookfield» и на вискозиметре ВЗ-4 (ГОСТ 1532-81).

6

Основные результаты исследований 1. Разработка состава, технологии и биофармацевтические исследования геля ССМА в качестве основы для глазных лекарственных форм

Специфика создания глазного геля обусловлена анатомическими, физиологическими особенностями органа зрения. Слизистая оболочка глаз очень чувствительна, она резко реагирует на все раздражения, поэтому при разработке состава геля на основе ССМА использовались различные буферные растворы создающие рН в лекарственной форме идентичные слезной жидкости.

Оптимальную концентрацию ССМА для геля установили экспериментально. Качество приготовленных композиций оценивали визуально по оценке внешнего вида, а также по показателю преломления и динамической вязкости. Сравнительную оценку показателей преломления основы геля и слезной жидкости проводили рефрактометрически, а динамическую вязкость исследовали на приборе «Реотест-2» при температуре 34±2°С. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1

Составы гелевых основ и их сравнительная оценка___

№ Ингредиенты, г Показатели качеств формировавшихся гелей

п ССМА Вода очищенная Описание * Показатель преломления, п Динамическая вязкость рН

1 ОД 99,8 Слегка опалесцирующий, однородный, вязкий р-р 1,3332 5,02±0,26 7,4

2 0,5 99,5 —//— 1,3348 6,04±0,30 7,5

3 1,0 99,0 Слегка опалесцирующая, однородная, упруго-пластичная масса 1,3348 8,44*0,29 7,4

4 1,5 995 —//— 1,3353 19,88±0,42 7,4

5 2,0 98,0 Слегка опалесцирующая, однородная, упругая масса 1,3363 32,22±0Д4 7,5

Примечание: показатель преломления слезной жидкости п~1,3345.

Как видно из таблицы 1, все изучаемые составы по внешнему виду слегка опалесци-рующие вязкие жидкости или гели обладающие различной динамической вязкостью и значением рН от 7,4 до 7,5. Состав №3 - упруго-пластичная масса. Составы № 4 и 5 представляют собой более плотную, упругую массу. Экспериментальные образцы готовили по следующей методике: рассчитанное количество ССМА диспергировали в воде с помощью пропеллерной мешалки, вращающейся со скоростью 100 об/мин в течение 10-15 минут при температуре около 80°С и оставляли для набухания, до полного растворения. При этом в зависимости от концентрации ССМА при охлаждении в течение 1часа образуются: растворы, вязкие растворы, гели или плотные комкующиеся массы. На скорость растворения (гелеобразования) влияют- температура среды растворения, равномерность распределения порошка в среде растворения, и полнота его смачивания, время перемешивания и скорость перемешивания. Одним из требований к глазным мазям является соответствие рН лекарственной формы и рН слезной жидкости. Для

предо гаратения возможной дестабилизации рН и сдвига его значения в сторону кислой среды в процессе получения 1-е л ей необходимо стабилизировать гелевую основу ССМА буферными растворами, так как при повышенной температуре, хранении, введении в состав геля различных лекарственных веществ, возможно нежелательное изменение рН композиций.

Экспериментально исследованы образцы 1% геля ССМА с различными значениями рН, регулируемые с помощью буферных растворов в диапазоне от 2 до 11. Величину рН экспериментальных образцов гелей определяли потенциометрически сразу после приготовления и в процессе хранения в течение месяца при различных температурных режимах: при 20±2°С, 5±2°С, 34±2°С. Влияние значения рН на агрегативную устойчивость оценивали визуально по однородности геля и методом центрифугирования.

Установлено, что гели ССМА при значениях рН от 6 до 10 представляют гомогенные прозрачные системы, при этом отмечено, что структура гелей при значениях рН 2. 3, 4, 5 и 11 разрушается. При этом происходит выделение водной фазы и образуется осадок ССМА, нарушается однородность и структура системы. Результаты исследований позволяют утверждать, что гель, содержащий 1% ССМА представляет собой стабильную структуру в нейтральных средах, а в состав мазей на основе геля ССМА можно вводить лекарственные препараты, поддерживающие в растворе нейгральную или создающие слабо щелочную срсду от рН 6 -10 и в то же время нецелесообразно вводить лекарственные вещества, образующие в растворе кислую среду.

Тепловая стерилизация глазных лекарственных форм в стеклянной таре нередко приводит к разрушению лекарственных веществ, вследствие процессов гидролиза, окисления и т. д. Скорость разрушения препаратов зависит не только от температуры, но и в значительной степени от рН среды. Исходя из вышеизложенною, нами был выбран буферный раствор тетрабо-рата натрия, который не только обеспечивает агрегативную стабильность, но и обладает про-тивогерпетической активностью.

Среди множества различных вспомогательных веществ, с целью достижения пластичности и осмотический активности геля для глаз в качестве пластификатора в фармацевтической технологии целесообразно использовать глицерин. Экспериментально установлено, что оптимальная концентрация глицерина, входящая в состав офтальмологического геля, которая составляет У/о. Данный состав уже к первому часу поглощает до 23 % воды, что позволяет применение геля для глаз как в дневное, так и в ночное время (до нескольких часов). Осмотическую активность геля определяли в процессе хранения в течение 27 месяцев при температуре 20±2°С в стеклянных флаконах марки НС-1, герметично упакованных.

В результате исследований разработаны составы гелей ССМА для создания офтальмологических лекарственных форм, таблица 2.

Таблица 2

Составы гелей ССМА___ _

Ингредиенты, г Состав №1 Состав №2

ССМА 1,0 1,0

Натрия тетраборат 0,1 0,1

Глицерин 3,0 5,0

Вода очищенная 93,90 91,90

Для оценки влияния стерилизации на показатели качества гелей в используемых упаков-

»

ках провели исследования образцов до и после стерилизации. Полученные гели фасовали во флаконы из стекла НС-1 вместимостью 10 или 20 мл, 50 мл укупоривали резиновыми пробками ! ИР-119, обкатывали алюминиевыми колпачками и стерилизовали паром под давлением при

температуре 100°С 8 минут. Качество полученных гелей до и после стерилизации оценивали по следующим показателям: внешний вид, агрегативная устойчивость, значение рН, условная вязкость, стерильность. Результаты исследований представлены в таблице 3.

Таблица 3

Показатели качества гелей ССМА до и после стерилизации__

№ Внешний вид Агрегативная устойчивость Значение рн Условная вязкость, сек стерильность

До стерилизации

1 Однородный слегка опалесци- Отсутствие 7,4 43200 -

путшшТ УППУГО пластичный пяггпоения

После стерилизации

—//— 1 7,5 43150 стерильно

До стерилизации

Однородный слегка опалесци- —II— 7,4 21000 -

тчггий пластичный гель

После стерилизации

—ц— -7/- 7,5 20950 стерильно

Как видно из таблицы 3, гели до и после стерилизации представляют собой однородные, слегка опалесцирующие, агрегативно-устойчивые, упруго-пластичные массы и изменение величины рН незначительно, что свидетельствует о возможности использования гелей в офтальмологии.

С целью обеспечения безопасности лекарственных препаратов и эффективности, к вспомогательным веществам, используемым в производстве лекарственных препаратов, предъявляется ряд требований: они не должны быть токсичными, обладать раздражающим действием на кожу и слизистые оболочки, обладать аллергизирующим эффектом, что успешно подтверждено исследованиями этих показателей на базе Уфимского НИИ гигиены и профзаболеваний и ГУ Всероссийского центра глазной и пластической хирургии МЗ РФ.

Экспериментальные морфологические исследования показали, что на ранних стадиях заживления роговичной ткани, стимулируются процессы пролиферации кератобластов и происходит нарастание тканей в основной группе по сравнению с контрольной. Установлено, что 1%

гель, содержащей в составе ССМА, тетраборат натрия, глицерин и воду очищенную обладает репаративной активностью.

Процесс ультразвукового зондирования глазного яблока и глазницы осуществляется через прикрытые веки, кожная поверхность которых для обеспечения акустического контакта с зондом должна быть смазана контактной средой, пропускающей ультразвуковые волны, с помощью вазелинового масла или специального геля. Отечественная промышленность выпускает ограниченную номенклатуру и объем гелей для ультразвуковых исследований, в том числе и для офтальмологии.

Задачей наших исследований является создание диагностической системы в форме геля для УЗИ в офтальмологии. Экспериментально исследованы различные концентрации гелевых основ ССМА, содержащие тетраборат натрия, обеспечивающий проводимость УЗ сигналов В качестве пластификатора использован глицерин. Составы изучаемых композиций приведены в таблице 4.

Таблица 4

Составы гелей для УЗ сканирования в офтальмологии_

Ингредиенты, г Составы гелей

1 2 3 4 5 6 7

ССМА 1,0 2,0 1,0 1,0 1,0 1,0 0,5

Натрия тетраборат 0,1 0,16 0,05 0,3 0,16 0,16 0,16

Глицерин 5,0 5,0 5,0 5,0 1,0 10,0 10,0

Вода очищенная 93,9 92,84 93,95 93,7 97,84 88,84 89,34

Полученные гели помещали в стерильные флаконы емкостью 50,0 из стекла НС-1 для медицинских препаратов, закрывали резиновыми пробками и обкатывали алюминиевыми колпачками и стерилизовали в автоклаве при температуре 100°С 8 мин, согласно ГФ XI издания. Состав геля №1 при нанесении на кожу века обладает хорошей проводимостью для ультразвука. Получаемое изображение на мониторе качественное. Гель легко наносится на датчик малого диаметра (Й 18 мм), при этом не растекается, не обладает раздражающим действием и удобен в применении в офтальмологии. Состав геля №2 имеет густую консистенцию, при нанесении имеет толстый мазок, неудобен в применении датчика малого диаметра, хотя качество изображения удовлетворительное. Состав геля №3 представляет собой упруго-пластичную массу, создает плохую видимость, проводимость и нечеткость изображения, за счет малого содержания натрия тетраборнокислого. Состав геля №4 легко наносится на датчик малою диаметра, имеет хорошую видимость на мониторе, проводимость, четкость изображения, но имеет значения pH 9, что может вызвать раздражение на коже века пациента. Состав геля №5 имеет нормальную консистенцию и проводимость, но при нанесении на кожу века и датчик прибора имеет толстый мазок и плохое скольжение датчика. Состав геля №6 обеспечивает хорошую проводимость, но при нанесении на кожу века и датчик прибора имеет тонкий мазок и плохую видимость изображения. Состав геля №7 имеет жидкую консистенцию при нанесении на кожу века и датчик

прибора стекает, неудобен, на мониторе нечеткое изображение Из приведенных примеров видно, что оптимальным составом с точки зрения сохранения консистенции, удобства применения, эффективности диагностики УЗИ в офтальмологии - при нанесении на кожу века глаза является состав геля№1. Технологическая схема получения геля для УЗИ глаза представлена на рис.1. Клинические испытания показали, что звукопроводимость и качесгво изображения посылаемого ультразвуковым генератором прибора зависит от степени контакта датчика с проводящей системой Наиболее четкие изображения были получены при использовании геля состава:

Сополимер стирола с малеиновым ангидридом (ТУ 6-01 -0274010931-01) 1,0

Натрия тетраборат (ГОСТ 4199-76)------------------------------------------- 0,1

Глицерин (ФС 42-2202-84) ----------------------------------------------------------5,0

Воды очищенной (ФС 42-2619-97) -----------------------------------------------93,90

На разработанный препарат «ССМА 1% гель для УЗИ в оф!альмологии» получен патент на изобретение «Гель для ультразвуковых исследований (варианты)» №2225729 от 20.03.2004 г. Гель апробирован в клинике Всероссийского центра глазной и пластической хирургии МЗ РФ г.Уфы и получил положительные рекомендации для внедрения в диагностичекие ультразвуковые обследования в офтальмологической практике.

Изучение структурно-механических свойств геля на основе ССМА дает возможность получить более полные сведения о влиянии различных факторов (концентрация полимера, химическая природа входящих компонентов, межмолекулярные силы взаимодействия между ними и дисперсной средой, рН, температура, способ и продолжительность механического воздействия на систему, загущающую способность ССМА, и другие факторы) и представляет ин терес для дальнейшего совершенствования технологических процессов производства. Структурообразующие свойства геля изучали на приборе "ВгоокйеЫ" на базе НИИ пластмасс г. Москвы. Результаты исследований представлены на рисунке 2.

Гель на основе ССМА относится к структурированным вязким малопрочным структурам, что, по-видимому, можно объяснить высокомолекулярной природой гелей ССМА.

Реологические свойства геля определяется не только скоростью сдвига, но и продолжительностью сдвига. При графическом изображении этих процессов в координатах скорость сдвига-напряжение свига, восходящая кривая, характеризующая разрушение системы, отличается от нисходящей кривой, характеризующей восстановление системы, и объясняется сохранением остаточной деформации после сильного ослабления структуры под влиянием ранее приложенного напряжения. Характер объемного структурообразования в гелях ССМА позволяет прогнозировать точность и быстроту дозирования геля в тубы или во флаконы, равномерность распределения на оболочке глаза и мягкое скольжение ультразвукового датчика. Агрега-тивную устойчивость (отсутствие расслоения) гелей исследовали в процессе естественного хранения.

Технологическая схема

получения геля для УЗИ глаза

ВР.1.Санитарная обработка производства__

А.

ВР.2. Подготовка сырья

ТП. 3 Получение геля

ТП.4 Оценка качества геля | для УЗИ_

УМО.5. Упаковка и маркировка геля

Потери

На склад

ВР.1.1. Подготовка оборудования и вспомогательных материалов__

ВР.2.1 Приготовление буферного раствора

ВР. 2.2 Отвешивание ССМА

ТП.3.1 Диспергирование ССМА в рассчитанном количестве буферного раствора_

ТП.3.2. Набухание ССМА в буферном растворе

ТП.3.3 Перемешивание геля в буферном растворе___

| ТП. 3,4. Введение пластификатора

Т11.4.1 Определение однородности, вязкости, рН

УМО.5.1 Фасовка геля в стеклянные флаконы НС-1 емкостью 50,0

УМО.5.2 Стерилизация

УМ05.2 Маркировка

УМО 5.3 Упаковка флаконов в коробки

Рисунок 1

Зависимость напряжения сдвига геля ССМА от скорости сдвига

яр4? «сч-гз

06/1В/0

Рисунок 2

В ходе исследования проводили оценку качества гелей по 50,0 во флаконах НС-1 на 5 сериях в день изготовления, через 6, 12, 18, 24 и 27 месяцев хранения по следующим показателям: ор< анолептические свойства - прозрачность, однородность. В течение всего времени хранения характерных изменений вышеперечисленных показателей гелей не произошло.

2. Разработка составов, технологии и методов анализа лечебных гелей на основе ССМА для офтальмологии

Экспериментально проведены исследования по изучению влияния различных концентраций геля ССМА на процесс растворения метронидазола, которые были приготовлены в следующих концентрациях, %: 0,1; 0,2; 0,5; 0,7; 1,0; 1,5 в буферном растворе натрия тетрабората с рН 7,4 путем растворения при нагревании. После их охлаждения до комнатной температуры исследуемые растворы оставались прозрачными, выпадение кристаллов метронидазола в первый день не наблюдалось. На второй день в буферном растворе натрия тетрабората при комнатной температуре в растворе, содержащем 1,5% метронидазола выпали кристаллы. На третий день наблюдения выпали кристаллы в растворе, содержащем 1% метронидазола. Остальные концентрации метронидазола в буферном растворе оставались без изменения в течении трех недель (срок наблюдения).

К полученным буферным растворам, содержащих от 0,1% до 1,5% метронидазола добавили ССМА в концентрации от 0,2% до 3% при комнатной температуре с последующим перемешиванием и набуханием в течение одного часа. Результаты исследований представлены в таблице 5.

Таблица 5

Влияние концентраций ССМА в гелях на растворимость метронидазола

Компоненты гелей Содержание, г

1 2 3 4 5 6

ССМА 0,2 0,5 1,0 1,5 2,0 3,0

Метронидазол 0,1 0,2 0,5 0,7 1,0 1,5

Глицерин 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0

Буферный раствор натрия тетрабората с рН 7,4 96,7 96,7 96,7 96,7 96,7 96,7

Наличие кристаллов - - - - - +

Примечание: «+»- выпадение кристаллов; «-» - отсутствие кристаллов.

Из таблицы 5 видно, что гели на основе ССМА составов № 1, 2, 3, 4 стабильны, выпадение осадка метронидазола в виде кристаллов не наблюдалось. При увеличении концентрации ССМА от 2 до 3% (образец № 5) растворимость метронидазола увеличивается до 1%. Растворимость метронидазола в буферных растворах ССМА повышается с увеличением концентрации полимера, что связано, с солюбилизирующим действием полимера-носителя. При этом происходит взаимодействие с полимером, препятствующее кристаллизации метронидазола и удерживания его в растворенном состоянии - до 1%.

Гели № 1, 2 имели жидкую консистенцию, а образцы № 4, 5, 6 представляли собой плотные упругие массы. Образец № 3 представлял собой однородный мягкий пластичный гель. При нанесении на кожу равномерно распределялся на поверхностях.

Полученные в эксперименте результаты показывают, что с увеличением концентрации ССМА до 2% растворимость метронидазола увеличивается до 1%.

В процессе хранения проведены исследования для установления влияния температуры на стабильность геля метронидазола. Гели, содержащие 0,5 % метронидазола, помещенные во флаконы вместимостью 10 мл из стекла НС-1 под обкатку, простерилизованные при температуре 100°С - 8 мин, при хранении в условиях комнатной температуры 20±2°С, холодильной камеры 5±2°С, термостата 34±2°С стабильны в течение двух лет Образование кристаллов не наблюдается. С увеличением концентрации метронидазола свыше 0,5% в геле ССМА, гель мутнеет и в дальнейшем в нем обнаруживаются тонкие игольчатые кристаллы, в образцах хранившихся при комнатной температуре на пятый день, 1ак же в образцах, хранившихся в условиях холодильной камеры на второй день, и в термостате - на восьмой день. В дальнейших исследованиях по разработке геля нами использована концентрация метронидазола 0,5% и ССМА 1%, для применения в области офтальмологии.

На основании проведенных исследований по выбору состава композиций для получения водорастворимой, стабильной основы, отвечающей требованиям к глазным лекарственным формам и установления концентрации метронидазола в геле, предложен оптимальный состав препарата:

Метронидазол (ВФС 42-2283-93)-------------------------0,5

Натрия тетраборат (ГОСТ 4199-76)-----------------------0,018

Глицерин (ГОСТ 6824-96)-----------------------------------3,0

ССМА (ТУ 6-01-0274010931-01)--------------------------1,0

Вода очищенная (ФС 42-2619-97)---------------------95,48

1ехнологическая схема получения 0,5% геля метронидазола для офтальмологии представлена на рисунке 3.

Лекарственный препарат представляет собой однородный слегка опалесцирующий гель, рН - 7,4. показатель преломления п=1,3348, что обеспечивает отсутствие снижения остроты зрения на время введения геля за счет рефракции. Нормирование препарата по показателю преломления необходимо для предотвращения снижения остроты зрения на период нахождения геля на роговице (показатель преломления слезной жидкости составляет 1,3345).

Определение высвобождения метронидазола проводили методом диализа через полупроницаемую мембрану в сравнении с мазью на вазелиноланолиновой основе и геле карбокси-метилцеллюлозы при температуре 34±2°С через 5, 15, 30, 45 и 60 минут. Количественное содержание метронидазола в диализате определяли спектрофотометрически. Результаты исследования приведены в таблице 6. Высвобождение метронидазола из гелевой основы в сравнении с мазью на вазелиноланолиновой основе происходит более интенсивно в первые 15 минут, в дальнейшем процесс высвобождения метронидазола из испытуемых основ № 1 и 3 примерно одинаков в диапазоне 30 минут. Следовательно, глазная мазь метронидазола на гелевой основе не уступает основе КМЦ и уже в первые минуты оказывает эффективное действие, ч го немало-

важно для глазных лекарственных форм, т.е. процесс вымывания лекарственных веществ из конъюнктивального мешка происходит более интенсивно в течение первого часа.

Технологическая схема получения 0,5% геля метронидазола

ВР.1 .Санитарная производства

обработка

ВР 2. Подготовка сырья

ВР 1.1. Подготовка оборудования, лекарственных и вспо-ВР 2.1. Получение воды стерильной

ВР 2.2, Приготовление буферного раствора

ВР 2.3. Отвешивание лекарственных и вспомогательных

ВР 2.4. Отвешивание ССМА

ТП 4. Приготовление геля

ТП 3.1. Растворение натрия тетраборнокислого, метпонияазопя ппи темпепатупе 80°С__

ТП 3.2. Фильтрация буферного раствора метронидазола

ТП 3.3. Диспергирование ССМА в буферном растворе метронидазола при постоянном перемешивании___

ТП 3.4. Набухание и растворение ССМА в буферном рас-твопе метпонидазола_____

I'll 3.5. Гомогенизация геля с глицерином

ТП 5. Фасовка и укупорка ТП 6. Стерилизация_

1 ТП 5.1. Фасовка геля в стекл. флак. НС-10 емкостью 10,0 [¿ГП 6.1. Стерилизуют при температуре 100°С 8 минуг_

УМО-7.Упаковка и маркировка

УМО 7.1. Маркировка продукции

УМО 7.2. Упаковка флаконов в коробки

Рисунок 3

Таблица 6

№ п/п Изучаемые Количество высвободившеюся метронидазола,

составы Время, мин

мазей 5 15 30 45 60

1 Метронидазол 0,5 ССМА 1,0 Натрия тетраборат 0,018 Глицерин 3,0 Воды очищенной 95,48 10,80 ±0,19 11,93 ±0,39 14,59 ±0,49 15,98 ±0,52 15,56 ±0,23

2 Метронидазол 0,5 Вазелин 90,0 Ланолин 10.0 5,35 ±0,21 6,55 ±0,26 11,34 ±0,35 11,72 ±2,20 11,32 ±031

3 Метронидазол 0,5 Карбоксиметилцеллюлоза 4,0 Воды очищенной 95.5 8,73 ±0,23 11,42 ±0,25 13,35 ±0,71 13,99 ±0,36 13,45 ±0.13

Измерение реологических параметров: динамическую вязкость, предельное напряжение сдвига проводили на приборе «Реотест -2» с помощью цилиндрических измерительных устройств при температуре 34°С. Гель на основе ССМА, содержащий 0,5% метронидазола можно

отнести к структурированным вязким жидкостям, где возможно построение полной реологической кривой эффективной вязкости и течения с начальной и конечной ньютоновской вязкостью. Гель можно отнести к малопрочным (слабым) структурам, что характерно для неньютоновских жидкостей, ему характерно как разрушение структуры, так и восстановление.

В ходе исследования проводили оценку качества геля на 5 сериях: в день изготовления, через 6, 12, 18, 24 и 27 месяцев естес1венного хранения. Изучение стабильности экспериментальных серий препарата в стеклянных флаконах НС-1 показало, что при хранении его при комнатной температуре 20±2°С показало, что препарат сохраняет все свои свойства в течение 27 месяцев, что позволяет прогнозировать сроки годности не менее двух лет.

Проведены исследования влияния 0,5% геля метронидазола на основе 1% ССМА на эффективность заживления резаных ран роговицы у крыс. На основе проведенных морфологических исследований разработанный состав геля с метронидазолом обеспечивает ускорение процессов регенерации роговицы и способствует его дифференцировки.

В офтальмологии наиболее частый вид патологии - воспалительные заболевания роговицы (кератиты), являющиеся одной из основных причин снижения зрительных функций, сла-бовидения и слепоты. При остро протекающих инфекционных кератитах применяют антибактериальные, противовирусные, противовоспалительные, иммунокорригирующие препараты.

Ранее установлено, что ССМА в концентрации 1-2% обладает противовирусными действием. а разработанный на его основе состав геля на ранних стадиях заживления роговичной ткани животных стимулирует процессы пролиферации кератобластов.

Введение в состав геля метронидазола 0,5% ускоряет процесс регенерации роговицы животных и способствует его дифференцировки за счет высокой эффективности в отношении об-лигатных анаэробных бактерий. Кроме того, для уменьшения явлений воспалений часто в их составы дополнительно вводится противовоспалительные средства, в том числе кортикостеро-идные препараты в концентрациях от 0,3 до 2%. Учитывая побочные эффекты стероидных препаратов перспективным в качестве противовоспалительного средства использовать комбинацию метронидазола с ОМУ для обеспечения необходимых терапевтических эффектов при лечении кератитов. Во Всероссийском центре глазной и пластической хирургии МЗ РФ г. Уфы под руководством проф. Нигматуллина Р.Т. в опытах на животных была установлена концентрация ОМУ 0,1% как отдельно, так и совместно с метронидазолом для обеспечения ранозаживляю-щего действия.

Для разработки состава и технологии получения комбинированного препарата для офтальмологии были приготовлены образцы гелей с различными вариантами содержания метронидазола, ОМУ. Составы изучаемых гелевых композиций приведены в таблице 7.

Учитывая плохую растворимость ОМУ в воде нами были проведены исследования влияние температуры на растворимость ОМУ в используемой концентрации (0,1%) в воде и в

растворе буфера натрия тетраборнокислою. Установлено, что ОМУ легко растворяется в кипящей воде, и в буферном растворе.

Таблица 7

Ингредиенты, г Составы гелей

1 2 3 4 5

Метронидазол 1,0 0,5 0,5 0,5 0,5

ОМУ 0,2 0,1 0,1 0,1 0,1

Натрия тетраборат 0,018 0,018 0,018 0,018 0,018

Глицерин 3,0 3,0 3,0 3,0 3,0

ССМА 1,0 2,5 1,0 0,5 1,0

Вода очищенная 94,78 93,88 95,38 95,88 95,38

Приготовление изучаемых образцов гелей № 1,2,4,5 производилось в асептических условиях. В химическом стакане при температуре (100±5)°С в воде очищенной стерильной растворяли рассчитанное количество ОМУ. В полученный раствор вносили натрия тетраборно-кислый и метронидазол. После растворения и фильтрации через мембранные фильтры диаметром пор 45 мкм вносили порошок ССМА и диспергировали пропеллерной мешалкой со скоростью 100 об/мин смесь до получения однородной дисперсии и оставляли для набухания при комнатной температуре до полного охлаждения геля, после чего вводили глицерин и гомогенизировали до получения однородной упруго-пластичной массы. Состав геля №3 готовили в асептических условиях: в воде очищенной стерильной при комнатной температуре (20±2°С) растворяли натрий тетраборнокислый. К полученному раствору добавили рассчитанные количества ССМА и глицерина, перемешивали и оставляли для набухания в течение 60 минут. Метронидазол и ОМУ водили в состав геля, предварительно измельченными и просеянными через сито № 38 суспензионным способом. Полученный гель состава №1 представляет собой упруго-пластичную массу, но при хранении в условиях комнатной темперагуры через несколько дней, гель становится мутным и в нем образуются белые хлопья, микроскопия которых подтверждает наличие кристаллов метронидазола и ОМУ, что недопустимо в глазной лекарственной форме. Повышенное содержание метронидазола не стабилизируется ССМА, а ОМУ свыше 0,1% малорастворим.

Гель состава №2 слегка опалесцирукмций, выпадение кристаллов метронидазола при хранении не наблюдается, однако имеет густую и вязкую консистенцию, отмечается неудобство при нанесении на конъюнктиву, мазок неравномерный, дискомфорт, отмечено снижение остроты зрения за счет рефракции. Гель состава №3 приготовлен без нагревания на водяной бане при комнатной температуре. Полученный гель мутный, белого цвета. Отмечены явления дискомфорта, снижение остроты зрения за счет рефракции. Гель состава №4 имеет жидкую консистенцию, что объясняется низким содержанием ССМА, быстро смывается слезной жидкостью. Гель состава №5 представляет собой слегка опалеспирующую, однородную, упруго-пластичную массу, рН геля 7,4, показатель преломления п = 1,3348, что обеспечивает отсутст-

вие снижения остроты зрения на время введения геля за счет рефракции. Полученный гель легко наносится на конъюнктиву глаза с образованием тонкого равномерного сплошного мазка, надежно удерживается на слизистой поверхности.

В результате исследований разработки состава комплексного геля для офтальмологии

установлено, что оптимальная концентрация метронидазола в 1% геле ССМА составляет 0,5%,

а ОМУ 0,1%. Состав комплексного геля с метронидазолом и ОМУ-

Метронидазол (ВФС 42-2283-93)-------------------------0,5

Оксиметилурацил (ФСП 42-0415-2776-02)--------------0,1

Натрия тетраборат (ГОСТ 4199-76)--------------------0,018

Глицерин (ГОСТ 6824-96)----------------------------------3,0

ССМА (ТУ 6-01-0274010931-01)---------------------1,0

Вода очищенная (ФС 42-2619-97)-----------------------95,38

Фактором, влияющим на время высвобождения лекарственных веществ из лекарственной

формы, является состав мазевых основ и их консистенция. Фармацевтическую доступность ОМУ и метронидазола из мазевых основ- вазелиноланолиновой, карбоксиметилцеллюлозной и гелевой состава № 5, табл. 7 определяли методом "in vitro" ТСХ на пластинах марки «Силуфол» по разработанной нами методике. Критерием оценки эксперимента являлись не традиционные значения Rf (с полным прохождением фронта растворителя от линии старта до линии финиша), а высота пробега пятен исследуемых составов через одинаковое время извлечения пластин из хроматографической камеры Система растворителей для проведения исследований была подобрана экспериментально таким образом, чтобы была возможность идентифицировать одновременно ОМУ и метронидазол из изучаемых основ - хлороформ-диметилформамид (8:2) Время извлечения исследуемых пластин из камеры составило через 20 минут динамики хрома-тографирования. Хроматографирование проводили восходящим методом при температуре 18±2°С. По истечении времени пластины извлекались из камеры и высушивались на воздухе. Для определения величины пробега ОМУ и метронидазола изучаемых мазевых основ просматривали в УФ-свете, таблица 8.

Таблица 8

Фармацевтическая доступность ОМУ и метронидазола in vitro методом ТСХ в системе

Определяемые лекарственные вещества Высота пробега пятен (мм) мазей содер 0.1% ОМУ и 0.5% метпонилазол; жащих

Вазелин-ланолиновая основа 4% КМЦ 1% ССМА

ОМУ 25 79 84

метронидазол 10 93 88

Наибольшим высвобождением ОМУ и метронидазола из указанных основ является состав №5, табл. 7 Определение интенсивности высвобождения ОМУ методом диализа через полупроницаемую мембрану из мазевых основ представлены в таблице 9. В первые 5 минут лучший результат отмечен у г елевой основы ССМА, которая показала высокие значения до 30 минуты Гель КМЦ 4% до 30 минуты показал более низкое высвобождение ОМУ, но к 45 минуте

достиг максимального значения. Таким образом, по результатам высвобождения ОМУ, гель 1%

ССМА приоритетен в отношении 4% геля КМЦ и вазелин-ланолиновой основы.

Таблица 9

___Динамика высвобождения ОМУ из различных основ в опытах "in vitro"_

№ Изучаемые Количество высвободившегося ОМУ, %

п/ составы Время, мин

мазей 5 15 30 45 60

1 1%ССМА 21,31±0,6 28,19±0,34 35,11±0,35 44,63±0,48 44 56±0,12

2 4% гель КМЦ 17,90±0,4 20,50±0,70 31,30±0,46 50,06±0,49 50,67±0,23

3 Вазелин ланолин (9 1) 5,40±0Д1 7,17±0,22 7,17±0,34 7,62±0,27 7,45±0,51

Изучены фармакокинетические свойства разработанного геля содержащего 0,5%

мегронидазола и 0,1% ОМУ на основе 1% ССМА в сравнении с мазью на традиционной глазной основе вазелин-ланолиновой 0,5% метронидазола и 0,1% ОМУ. Изучена кинетика распределения метронидазола и ОМУ в слезной жидкости глаза подопытных животных кроликов породы шиншилла, массой 3-4 кг, методом тонкослойной хроматографии в тонком слое сорбента. Составы изучаемых композиций и время смываемости геля и мази слезной жидкостью приведены в таблице 10.

Таблица 10

Смываемость геля и мази слезной жидкостью_

Ингредиенты Содержание, г

1 2

Метронидазол 0,5 0,5

ОМУ 0,1 0,1

Натрия тетраборат 0,018

Глицерин 3,0

ССМА 1,0

Вазелин-ланолин (9:1) 100,0

Вода очищенная 95,38

Время полного смывания, мин 60 15

В результате проведенного эксперимента установлено, что полное смывание слезной

жидкостью лекарственных веществ после нанесения геля содержащего, метронидазол и ОМУ мази на вазелиноланолиновой основе на слизистую оболочку глаза животных происходит через 60 и 15 минут соответственно.

На основании полученных результатов можно предположить что 1% гелевая основа ССМА оказывает пролонгирующее действие, высвобождение метронидазола и ОМУ происходит постепенно, тем самым улучшается терапевтический эффект комбинированного геля. На разработанный состав комбинированного геля получено положительное решение о выдаче патента «Средство для лечения заболеваний глаз с метронидазолом и оксиметилурацилом».

Устойчивость геля исследовали в процессе естественного хранения. В ходе исследования проведена оценка качества гелей в день изготовления, через 6, 12, 18, 24 и 27 месяцев хранения по следующим показателям: агрегативная устойчивость, однородность по образованию кристаллов метронидазола, внешний вид, значение рН водного извлечения, качественное и количе-

ственное содержание метронидазола и ОМУ, стерильность, динамическая вязкость - при комнатной температуре 20+2°С показало, что препарат сохраняет все свои свойства в течение 27 месяцев, что позволяет прогнозировать сроки годности не менее двух лег.

Общие выводы

1. На основании результатов комплексных исследований показана возможность и перспективность применения ССМА в качестве гидрофильной основы в производстве лечебных мазей и геля для акустической диагностической системы при ультразвуковых исследованиях в офтальмолог ии.

2. Исследованиями физико-химических, техно тогических и биологических свойств, определены оптимальные композиции гелей ССМА для офтальмологических препаратов. Показано, что для использования их в качестве основ глашых мазей концентрация ССМА в геле должна составлять 1%, значение рН от 7,4 до 9,0, содержание глицерина 3-5%.

3. Разработано оптимальное технологическое получение гелей ССМА, для использования в качестве основ в производстве глазных мазей и гелей, предназначенных для использования в акустических диагностических системах при УЗИ в качестве проводника УЗ волн, обеспечивающих получение качественной диагностической информации.

4. В результате проведенных исследований разработаны составы и технологии получения новых препаратов для лечения инфекционных и воспалительных заболеваний глаз: гель с метро-нидазолом и комплексный препарат гель с метронидазолом и ОМУ, изучены показатели характеризующие качество новых препаратов.

5. В эксперименте изучены высвобождение метронидазола и ОМУ из созданных лекарственных препаратов, установлены их специфическая активность, отсутствие общетоксического действия на организм и местнораздражающего эффекта на кожу и слизистую оболочку глаза.

6. Для оценки качества новых препаратов с метронидазолом и ОМУ в форме гелей на основе ССМА разработаны современные методики определения подлинности и количественного содержания активных компонеггтов, которые включены в проекты ФСП.

7. Установлены показатели качества и нормы для стандартизации созданных препаратов-«ССМА 1% гель для УЗИ в офтальмологии», «Метронидазол 0,5% гель для офтальмологии», « Гель метронидазола с оксиметалурацилом для офтальмологии». Разработаны проекты ФСП на три новых препарата.

8. На основании изучения стабильности созданных препаратов установлены сроки их годности - 2 года (при температуре 20°С).

Список работ, опубликованных по теме диссертации. 1. Шикова Ю.В., Лазарев С.Л., Кадырова З.Р. К вопросу создания диагностических средств // Сборник материалов научно-практической конференции «медицина будущего» -Краснодар-Сочи,2002,- СА 39.

2. Шикова Ю.В , Плечева Д.В., Лиходед В.А., Пдечев В.В., Алехин Е.К., Нигматуллин Р.Т., Кадырова З.Р., Кадыров Р.З , Шиков А.Н. Средство для лечения заболеваний глаз с метронида-золом и с оксиметилурацилом //Заявка на изобретение №2003109909 РФ от 11.04 03- 10с.

3. Шикова Ю.В., Кадырова З.Р. Разработка состава геля для офтальмологии //Материалы Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Медицинская наука -2003», посвященной Году Спорта и Здорового Образа Жизни, Дню Медицинского работника. -Уфа, 2003.-С. 111.

4. Лиходед В.А., Кадырова З.Р, Кадыров Р.З, Шикова Ю.В. Перспективность использования сополимера стирола с мапеиновым ангидридом в качестве глазной мазевой основы, содержащей метронидазол // Башкирский химический журнал -Уфа. -2003.-Т. 10. -№3.-С.131-135.

5. Лиходед В.А., Кадырова З.Р, Кадыров Р.З, Нигматуллин Р.Т.,Шикова Ю.В. Сравнительное изучение влияния геля на основе сополимера стирола с малеиновым ангидридом, содержащего метронидазол и оксиметилурацил на репаративную регенерацию роговицы //Сборник научных трудов «Научный прорыв-2003», посвященного объявленному в Республике Башкортостан Году Спорта и Здорового образа жизни, Дню Республики. -Уфа, 2003. -С. 192-195.

6. Шикова Ю.В., Голубь A.A., Кадырова З.Р. Микробиопогические исследования стоматологического геля в процессе хранения //Сборник научных трудов «Научный прорыв-2003», посвященного обьявленному в Республике Башкортостан Году Спорта и Здорового образа жизни, Дню Республики. -Уфа, 2003. -С.192-195.

7. Шикова Ю.В., Шаульский Ю.М , Гайлюнас И.А , Лиходед В.А., Зарудий Ф.А., Шиков А Н., Лазарев С.А., Чемикосова Т.С., Кадыров Р.З., Кадырова З.Р., Маляренко А.Б. Гель для ультразвуковых исследований //Патент РФ №2225729, от 20.03.04.-10с.

8. Лиходед В.А., Кадыров Р.З., Кадырова З.Р , Шикова Ю.В., Нигматуллин Р.Т. Средство для лечения заболеваний глаз с метронидазолом //Патент РФ № 2235536, от 10.09.04.-10с.

22

РНБ Русский фонд

2005-4 46952

Подписано в печать 15.12 2004 г Ф А5 Бум офс Печ ризогр Тираж 100 экз

Научно-исследовательский и учебно-методический Центр БМТ ВИЛАР, ' — -123056, Москва, ул Красина, 2 1