Фармакологические свойства и токсикологическая характеристика комплексного растительного препарата селекартен

Плетнев, Владимир Владимирович

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармакологические свойства и токсикологическая характеристика комплексного растительного препарата селекартен

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Плетнев, Владимир Владимирович Москва 2013 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.03.06

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакологические свойства и токсикологическая характеристика комплексного растительного препарата селекартен

На правах рукописи

'имХ

ПЛЕТНЕВ Владимир Владимирович

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО ПРЕПАРАТА "СЕЛЕКАРТЕН"

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

з 1 янв т

Москва - 2013

005048942

Работа выполнена в ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава РФ

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор АРЗАМАСЦЕВ Евгений Вениаминович Официальные оппоненты:

КИНЗИРСКИЙ Александр Сергеевич, доктор медицинских наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ, заведующий лабораторией фармакологии Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Институт физиологически активных веществ» РАН

МОРОЗОВА Татьяна Евгеньевна, доктор медицинских наук, профессор, заведующая кафедрой клинической фармакологии и фармакотерапии ФППОВ ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И. М. Сеченова» Минздрава РФ

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО «Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова» Минздрава РФ

Диссертационного совета Д 208.040.13 при ГБОУ ВПО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченева» Минздрава РФ (119991, Москва, ул. М. Трубецкая, д. 8, стр. 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М. Сеченева Минздрава РФ (119991, Москва, Нахимовский проспект, 49).

Автореферат разослан » уА. А ух 2013 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 208.040.13

Доктор медицинских наук, АРХИПОВ Владимир Владимирович_

Защита диссертации состоится

на заседании

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Характерной чертой конца XX и начала XXI века является существенный рост острых и хронических инфекционных заболеваний бактериальной, грибковой, протозойной и вирусной природы. Возвращаются заболевания, которые были широко распространены в XIX столетии и почти исчезли в XX веке, такие как, туберкулез, малярия, дифтерия и другие. Появились новые вирусные заболевания, типичным примером которых является, ВИЧ-инфекция. Наблюдается рост инфекционных заболеваний различной этиологии, возбудителями которых служат условно-патогенные или оппортунистические микробы, обладающие атипичными биологическими свойствами и множественной устойчивостью к антибиотикам. Возникновение этих заболеваний связано также со снижением иммунореактивности населения. На фоне ослабления функций иммунной системы применение даже высокоэффективных антибиотиков последнего поколения не всегда дает хороший клинический эффект.

Несмотря на сравнительно большой спектр используемых в клинической практике при лечении внутренних и инфекционных заболеваний индукторов интерферонов и препаратов, обладающих иммунотропным действием (амиксин, кагоцел, рибомунил, тактивин, тимактид, миелопид, альфа-глутамил-триптофан, пидотимод, стемокин, интерлейкин-1бета, интерлейкин-2, интерферон альфа, кипферон, интерферон альфа-2, интерферон бета-1а, аффинолейкин и т.д.), поиск лекарственных средств, обладающих одновременно иммунотропным, антимикробным и противовирусным действием, остается актуальной проблемой.

В последние годы пристальное внимание исследователей привлекает изучение роли микроэлементов и витаминов в функционировании иммунной системы. Установлено, что витамины А, С, В12, ß-каротин, фолиевая кислота, рибофлавин, а также микроэлементы селен, цинк и железо обладают иммуномодулирующими свойствами и их недостаточность приводит к ослаблению иммунитета и повышению инфекционной заболеваемости [Bhaskaram Р., 2002; Chandra R.K., 2002].

Многие из этих веществ обладают антиоксидантными свойствами, что очень важно при лечении ряда таких тяжелых заболеваний человека, как атеросклероз, злокачественные новообразования, аутоиммунные заболевания, а также для профилактики преждевременного старения. К веществам с выраженными иммуномодулирующими и антиоксидантными свойствами относится микроэлемент селен и его производные. Селеносодержащие вещества повышают иммунологическую реактивность, следствием чего является снижение инфекционной заболеваемости [Huang К., Yang А., 2002; Langkamp-Henken В., Bender B.S., Gardner Е.М., 2004].

При дефиците селена в организме и сниженной иммунореактивности слабопатогенный вирус Коксаки приобретает высокую вирулентность и приводит к серьезным нарушениям в работе сердечно-сосудистой системы; вирус гриппа вызывает более тяжелые повреждения легочной ткани; у ВИЧ-инфицированных людей начинается быстрое прогрессирование заболевания [Rayman M.Р., 2002]. Регулярное потребление пищевых продуктов с высоким содержанием селена замедляет старение организма и снижает риск развития злокачественных новообразований [Langkamp-Henken В., Bender В.S., Gardner Е.М., 2004; Wayland M., Gilchrist H.G., Marchant T., 2002; Whanger P.D., 2004].

В настоящее время активно разрабатываются лекарственные средства и биологически активные добавки, содержащие селен - незаменимый микроэлемент, обладающий широким спектром биологической активности и целым рядом фармакологических свойств, в том числе высокой антиоксидантной активностью [Dolph L. Hatfield, Maria J., Berry and Vadim N. Gladyshev, 2006; Gladyshev V. N„ 2001; Tappel A., Caldwell K„ 1966]. При этом принципиально важным остается создание новых комплексных лекарственных препаратов, усиливающих положительные эффекты селена и снижающих его нежелательное побочное действие, связанное с проявлением токсичности [Манаков A.M., 1968].

В связи с этим, актуальным является изучение нового комплексного растительного препарата - селекартен (CK), содержащего селен. В экспериментах на кроликах с острой ишемией сетчатки, вызванной лазерной коагуляцией было показано, что CK обладает антиоксидантным действием, ангио-, нейро- и ретинопротекторным свойствами. Под влиянием CK наблюдается усиление компенсаторных механизмов, направленных на восстановление кровообращения в поврежденных тканях при ишемии и дистрофии сетчатки [Швецова Н.Е., 2008].

Вместе с тем, экспериментальное изучение иммунотропных, антимикробных и противовирусных свойств CK, а также его безопасность подробно не изучались, а выявленные эффекты препарата свидетельствует о перспективности его применения в иммунологии, онкологии, реаниматологии, при лечении ряда внутренних, инфекционных и других заболеваний.

Цели н задачи исследования. Целями настоящей работы являются исследование в эксперименте фармакологических свойств и токсичности препарата селекартен для обоснования его клинического изучения и последующего медицинского применения.

Для достижения этих целей были поставлены следующие задачи:

1. Изучить спектр иммунотропного действия препарата селекартен.

2. Исследовать антимикробные свойства селекартена против ряда возбудителей заболеваний человека - Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Escherichia coli.

3. Исследовать противовирусную активность селекартена в отношении вирусов гриппа А и В, герпеса простого, гепатита С, иммунодефицита человека.

4. Провести доклиническое токсикологическое изучение препарата селекартен.

Научная новизна. Впервые изучено иммунотропное действие селекартена. Установлено, что СК повышает устойчивость мышей к смертельной стафилококковой инфекции, стимулирует бактерицидную активность клеток перитонеального экссудата мышей, гуморальный и клеточный иммунные ответы. СК обладает антиоксидантными свойствами и под его влиянием наблюдается подавление зимозаниндуцированной хемилюминесценции лейкоцитов периферической крови и спленоцитов мышей, подавление люминол- и люцигенинзависимых спонтанных и зимозаниндуцированных хемилюминесценций лейкоцитов человека. При совместной инкубации СК с мононуклеарными клетками периферической крови человека наблюдается повышение клеточной гибели, подавление пролиферации лимфоцитов и повышение продукции ФНО-а мононуклеарными клетками.

При изучении антимикробной активности селекартена впервые установлено, что препарат обладает ингибирующим действием на Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Escherichia coli.

Впервые также установлено, что селекартен обладает противовирусным действием в отношении вирусов гриппа А/Н5, А/НЗ и В. Препарат оказывает защитное действие при экспериментальной гриппозной пневмонии у мышей, вызванной вирусом гриппа А/Н5. Впервые выявлена противовирусная активность СК при действии на вирусы простого герпеса 1-го типа, гепатита С и иммунодефицита человека.

При доклиническом токсикологическом изучении селекартена, установлено, что СК является малотоксичным препаратом и хорошо переносится при длительном назначении, не обладает мутагенностью, не оказывает аллергизирующего действия и иммунотоксичности, проявляет

эмбриотоксичность, в связи, с чем беременность следует считать противопоказанием к назначению СК.

Практическая значимость работы. В результате проведенных исследований обоснована перспективность клинического изучения селекартена в иммунологии, онкологии, реаниматологии, при лечении ряда внутренних и инфекционных заболеваний, в качестве лекарственного средства системного действия, обладающего иммуномодулирующим, антимикробными и противовирусными свойствами. Определены оптимальные дозы для назначения селекартена и доказана возможность его длительного применения в виде внутримышечных инъекций.

Полученные данные свидетельствуют о перспективности применения использованного подхода для создания новых эффективных комплексных растительных препаратов на основе фармакопейных растений с добавлением биологически активных компонентов растительной или другой природы.

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены и доложены на XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2012 г.), на межлабораторном семинаре НИИ экспериментальной кардиологии ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс» Минздрава РФ (Протокол апробации №3 от 27 сентября 2012 г.), на заседании кафедры клинической фармакологии и пропедевтики внутренних болезней лечебного факультета ГБОУ ВПО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Протокол апробации №8 от 15 ноября 2012 г.).

Личный вклад автора.

Лично разработан комплексный растительный препарат селекартен, что подтверждается патентом РФ на изобретение № 2294209 от 27.02.2007 «Иммуномодулирующий препарат». Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследований, проведении анализа и обобщения полученных результатов. Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от экспериментальных исследований оригинального комплексного растительного препарата селекартен до обсуждения и формулировки результатов в научных публикациях и докладах.

Полученные данные свидетельствуют о возможности рекомендовать разработанный комплексный растительный препарат селекартен для клинических испытаний и применения использованного подхода для создания новых эффективных комплексных растительных препаратов для медицины.

Научные публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ. Из них 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ, изданы 2 монографии, а также получен 1 патент РФ.

Положения, выносимые на защиту:

Селекартен является оригинальным комплексным растительным препаратом, обладающим иммуномодулирующим действием.

Препарат проявляет антимикробные свойства против ряда возбудителей заболеваний человека - Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Escherichia coli.

Селекартен повышает выживаемость животных, при заражении летальной дозой Staphylococcus pyogenes, и оказывает защитное действие при вирусной пневмонии.

Препарат проявляет противовирусную активность в отношении вирусов гриппа А и В, герпеса простого, гепатита С, иммунодефицита человека.

Селекартен является малотоксичным препаратом при однократном парентеральном введении лабораторным животным и хорошо переносится при длительном назначении крысам Wistar и собакам, не оказывает повреждающего действия на основные органы и системы организма подопытных животных, не проявляет местнораздражающего действия.

Селекартен не обладает мутагенностью и ДНК-повреждающим действием. Не оказывает аллергизирующего и иммунотоксического действия.

При назначении беременным крысам селекартен проявляет эмбриотоксичность, в связи с чем беременность является противопоказанием к назначению препарата.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 178 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 5 глав экспериментальных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, научно-практических рекомендаций, списка литературы. Библиография включает 288 литературных источников, из которых 143 отечественных и 145 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 1 рисунком и 75 таблицами.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты проведены на 417 мышах-гибридах F1(CBAxC57B16), 128 мышах линии BALB/c, 70 белых беспородных мышах, 263 крысах Wistar, 30 пестрых морских свинках и 8 беспородных собаках.

Для проведения исследований использовали комплексный растительный препарат селекартен, полученный на основе спиртового экстракта донника лекарственного - Melilotus officinalis L., семейство бобовые -Fabaceae, трава которого содержит: кумарин, кумаровую кислоту, дикумарол, мелилотин, мелилотовую кислоту, гликозид мелилотозид, производные пурина, жироподобные вещества, эфирное масло, витамин Р, флавоноиды и хлорофилл. Спиртовой экстракт фильтруют в соответствии с НД. Полученный отфильтрованный жидкий экстракт содержит: кумарин,

дигидрокумарин, хлорофилл, флавоноиды и минимальные количества, перечисленных выше веществ.

К полученному экстракту добавляют селенит натрия, Р-каротин, фосфолипиды сои, перемешивают в течение регламентированного в НД времени. И вновь фильтруют посредством мембранной ультрафильтрации (размер пор 0,2 мкм), разливают в асептических условиях в стеклянные флаконы или ампулы. Проектом ФСП предусмотрена регламентация следующих компонентов в 1 мл препарата: натрия селенита 18,40 мкг (в пересчете на селен 8,402 мкг), фосфолипидов 0,310 мг, р-каротина 5,210 мкг, 0,9 мл хлорофилла и флавоноиды.

В исследованиях испытываемые дозы (концентрации) селекартена расчитывали исходя из того, что в 1 мл препарата содержится 450 мкг активной субстанции.

Исследование иммунотропного действия селекартена.

Влияние СК на гуморальный иммунный ответ оценивали по накоплению АОК в селезенках мышей на 4-е сутки после иммунизации по методу Каннингейма. Показателем клеточного иммунного ответа служила реакция ГЗТ, величину которой определяли индексу ГЗТ.

Исследование влияния СК на устойчивость животных к стафилококковой инфекции проведено на мышах-гибридах F|(CBAxC57BI6), которых заражали летальной дозой (10ш клеток/мышь) Staphylococcus pyogenes.

При изучении влияния СК на макрофагапьную активность клеток перитонеального экссудата мышей-гибридов Fi(CBAxC57B16) использовали Staphylococcus aureus меченный флюоресцеина изотиоцианатом. Исследование влияния СК на внутриклеточную бактерицидность проведено с помощью проточного цитофлуориметра FACSCalibur (США).

Влияние СК на спонтанную, индуцированную зимозаном (Sigma), а также люминолзависимую и люцигенинзависимую хемилюминесценцию лейкоцитов оценивали на хемилюминометрах «Lum-5773» (Россия) и LUCY 1 (Австрия).

Влияние СК на жизнеспособность мононуклеаров периферической крови изучали с помощью проточного цитофлуориметра FACSCalibur (США).

Влияние СК на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови оценивали по включению радиоактивной метки.

Влияние СК на продукцию ФНО-а мононуклеарами периферической крови оценивали методом твердофазного иммуноферментного анализа.

Изучение антимикробного действия СК.

Исследование антимикробных свойств СК проведено на представителях 4 видов микроорганизмов: Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus и Escherichia coli. Ингибирующее действие СК

оценивали на суспензиях указанных микроорганизмов стандартной мутности, в которые добавляли СК в различных концентрациях с последующим инкубированием в термостате, пересевом на чашки Петри с селективными средами и учетом выросших колоний.

Изучение противовирусного действия селекартена.

Влияние СК на вирусы гриппа А и В.

Для проведения данных исследований использовали эпидемические вирусы гриппа человека А/Н1Ш, А/НЗЫ2 и В, а также штаммы вирусов Л/1 ^N2, А/Н5ЫЗ. Противовирусную активность СК учитывали по снижению инфекционного титра вируса в культуре клеток МДСК и снижению уровня подавления оптической плотности в тест-системе на основе ИФА.

Оценка вирулицидного действия СК проведена на интактных вирусах эпидемических штаммов вируса гриппа А, В и А/Н5.

Куриные эмбрионы инфицировали вирусом гриппа А/Н5. После инкубации определяли наличие вируса в РГА.

При изучении противовирусной активности СК на модели гриппозной пневмонии у мышей, подопытных животных заражали вирусом гриппа А/утка/Алтай/1285/91(Н5№), выделенным от диких птиц, при интраназальном введении. Эффективность противовирусного действия СК оценивали по сравнительной летальности и средней продолжительности жизни мышей, получавших препарат и контрольной группы.

Влияние СК на вирус простого герпеса (ВПГ).

В исследованиях использовали клетки почек зеленой мартышки Уего-Е6 с добавлением эмбриональной сыворотки телят — ЭТС и диплоидные фибробласты эмбриональной легочной ткани человека МЯС-5.

Тестирование проведено на штамме вируса герпеса простого тип 1 штамм Ь2, а также на 3 вариантах вируса с лекарственной устойчивостью к ацикловиру, фосфономуравьиной кислоте и к их комбинации.

Оценку противовирусного действия СК проводили по ингибированию развития вирусиндуцированного патологического процесса.

Влияние СК на вирус гепатита С (ВГС).

При проведении исследований были использованы высоко чувствительные к патогенному действию ВГС культуры перевиваемых клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ), а также патогенный штамм ВГС, выделенный из сыворотки крови больной хроническим гепатитом С, который относится к генотипу 1Ь инфекции. В качестве контролей служили инфицированные и нормальные неинфицированные культуры клеток СПЭВ. Вирулицидное действие СК оценивали по проценту ВГС инфицированных культур клеток, погибших в результате вирусной инфекции, и по остаточной инфекционной активности вируса, сохранившейся в результате воздействия СК.

Исследование противовирусной активности CK в отношении ВИЧ.

Исследования проведены на перевиваемых лимфобластных клетках человека МТ-4. В исследовании использован штамм вируса ВИЧ-1 BRlJ. Степень цитодеструкции оценивали под микроскопом. Методом ИФА проводили определение антигена вируса в культурапьной жидкости. При исследовании вирулицидного действия CK на ВИЧ в культуре клеток учет результатов проводили с помощью световой микроскопии.

Токсикологические исследования.

Исследования проведены в соответствии современными требованиями Минздрава России к безопасности новых лекарственных препаратов (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М, 2005).

Изучение токсичности CK при однократном введении лабораторным животным.

Определение параметров токсичности CK при однократном парантеральном введении мышам линии BALB/c и крысам Wistar проведено с использованием пробит-анализа по Литчфилду и Уилкоксону.

Изучение токсичности CK в условиях хронических экспериментов на крысах Wistar (3 месяца) и собаках (1 месяц).

На протяжении эксперимента отмечали общее состояние и поведение животных. Оценку функционального состояния сердечно-сосудистой системы у собак (ЭКГ-исследования во II стандартном отведении) проводили с помощью прибора «Биограф» (США). Подсчет форменных элементов крови животных производили на автоматическом счетчике крови «Пикоскель» (Венгрия). Биохимические показатели и активность ферментов определяли на биохимическом полуавтоматическом анализаторе ФП-901 «Labsystems» (Финляндия).

После окончания хронических экспериментов проведена эвтаназия для проведения патоморфологического исследования внутренних органов и тканей животных.

Изучение мутагенности CK.

Применен чашечный метод учета мутаций, предложенный Ames et al (1972, 1984) с использованием индикаторных микроорганизмов ауксотрофных по гистидину Salmonella typhimurium ТА98, ТА100, ТА1537. О наличии мутагенного действия CK судили по индукции обратных мутаций от ауксотрофности по гистидину к прототрофности.

Исследование доминантных летальных мутаций проведено на мышах-гибридах Fi(CBAxCs7B16) после внутримышечного введения CK в дозе 0,7 мл/кг (100-кратная суточная доза для человека).

Исследование цитогенетической активности CK методом учета хромосомных аберраций проводили на клетках костного мозга мышей F|(CBAxC57B16), подвергавшихся воздействию препарата в дозах 0,7 мл/кг

однократно h 0,07 мл/кг ежедневно, на протяжении 4 дней. Метафазы анализировали на наличие в них хромосомных аберраций по рекомендации ВОЗ.

Изучение влияния СК на систему репарации ДНК в SOS-хромотесте проведено на приборе «Биоскрин» («Лабсистемс», Финдляндия).

Исследование эмбриотоксичности и тератогенности СК.

После внутримышечного введения препарата в дозе 0,21 мл/кг беременным крысам линии Wistar с 1 по 19 день гестации, определяли показатели предимплантационной и постимплатационной гибели. Определяли массу плодов, проводили анализ их внешних аномалий и пороков развития. Изучали развитие костного скелета по Доусону. Исследовали внутренние органы на микроанатомических срезах по Вильсону-Дыбану.

Изучение влияния СК на репродуктивную функцию крыс.

Исследования проведены на половозрелых самках и самцах крыс Wistar после внутримышечного введения СК в дозе 0,21 мл/кг (30-кратная высшая суточная доза для человека).

При этом определяли показатели предимплантационной и постимплатационной гибели, а также индекс плодовитости и индекс беременности. При осмотре плодов регистрировали патологические изменения, на 21 день вычисляли процент выживаемости, отмечали массу тела и кранио-каудапьный размер крысят.

Исследование аллергизирующих свойств СК.

При изучении анафилактогенной активности животных сенсибилизировали 5-кратным с интервалом в 1 день внутримышечным введением СК, разведенным 1:10 физиологическим раствором. Разрешающие дозы СК вводили внутрибрюшинно морским свинкам на 14 и 21 дни после последней сенсибилизации.

При изучении реакции гиперчувствительности замедленного типа морским свинкам подопытных групп на выстриженный участок кожи спины наносили СК. Реакцию кожи оценивали визуально по шкале кожных проб Суворова C.B.

Исследование влияния СК на массу и клеточность подколенного лимфоузла проведено на мышах-гибридах Fi(CBAxC57B16), которым в подушечки задних лап вводили СК или стерильный физиологический раствор (контроль). Через 7 дней у мышей определяли массу и клеточность подколенных лимфоузлов и вычисляли относительный индекс.

Статистическая обработка данных всех экспериментов проведена на компьютере ASUS А6000 Notebook PC с использованием программы Excel для Windows ХР. Все результаты представлены в виде значений средних величин ± стандартных отклонений. Полученные в ходе экспериментов данные распределялись по нормальному закону, поэтому для оценки достоверности различий между контролем и опытом применяли критерий «t»

Стьюдента и вычисляли коэффициент достоверности. Различия средних показателей считалось достоверным, если величина коэффициента достоверности соответствовала уровню значимости Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Исследование иммунотропного действия селекартена.

Проведенные исследования показали, что при различных схемах введения селекартен в диапазоне испытанных доз 10-100 мкг/кг стимулирует гуморальный иммунный ответ, регистрируемый по образованию АОК в селезенке иммунизированных эритроцитами барана мышей. В диапазоне указанных доз селекартен также стимулирует клеточный иммунитет, который наблюдался по усилению развития у мышей реакции гиперчувствительности замедленного типа. Следует отметить, что стимуляция селекартеном гуморального и клеточного иммунитета проявляет отчетливую дозовую зависимость. Результаты экспериментов представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1. Влияние селекартена на показатели гуморального иммунного ответа у мышей. _

Группы животных Доза препарата, мкг/кг Количество АОК на селезенку Количество кариоцитов в селезенке, хЮ8 Количество АОК на 106 спленоцитов

1 - контроль Ю'кл/мышь 6000±1672 1,2±0,26 50±13,5

2-СК 1 5650±788 1,48±0,53 38,17±5,34

3-СК 10 13000±1138* 1,28±0,3 101,56±8,9*

4 - СК 100 11000±1068* 1,18±0,43 93,22±8,3*

* - здесь и во всех последующих таблицах обозначает статистически достоверные различия с контролем при Р<0,05. Таблица 2. Влияние селекартена на показатели клеточного иммунного ответа у мышей.

Группы животных Доза препарата, мкг/кг Толщина опытной лапки (мм) Толщина контрольной лапки (мм) Индекс ГЗТ

1 — контроль 0 3,3±0,3 2,2±0,23 1,5

2-СК 1 3,3±0,3 2,2±0,22 1,5

3-СК 10 3,8±0,3 2,3±0,23 1,68*

4-СК 100 4,0±0,4 2,0±0,2 2*

При прос )илактическом подкожном введении за 24 часа до заражения

мышей летальной дозой Staphylococcus pyogenes селекартен предотвращает развитие смертельной стафилококковой инфекции у животных. В оптимальной дозе 1 мкг/кг СК повышает выживаемость мышей до 75 % при 84 % гибели в контроле. Результаты эксперимента представлены в таблице 3.

Таблица 3. Показатели устойчивости мышей-гибридов F^CBAxCsyBlö) к стафилококковой инфекции. ____

Группы Доза Количество % выживших Продол- Кратность

животных препарата, погибших мышеи жительность увеличения

мкг/кг мышеи жизни, продолжи-

сутки тельности

жизни

1 - контроль - 10 16,0 1,4±1,1 -

2-CK 1 3 74,9 6,9±0,7 4,9

3-СК 10 4 66,6 4,8±1,2 3,4

4-CK 100 6 50 3,2±1,5 2,3

В дозах 1 и 10 мкг/кг селекартен повышает, а в дозе 100 мкг/кг снижает фагоцитарную активность перитонеальных клеток мышей. При исследовании влияния селекартена в опытах in vivo на функциональную активность фагоцитарных клеток селезенки и периферической крови мышей было установлено, что препарат в дозах 10 и 100 мкг/кг подавляет образование перекиси водорода, регистрируемой с помощью индуцируемой люминолзависимой хемилюминесценции.

В опытах in vitro наиболее выраженное ингибирующее действие на образование перекиси водорода и супероксидного аниона CK проявляет в концентрации 100 мкг/мл. Указанные эффекты были зарегистрированы с помощью спонтанной люминолзависимой и зимозаниндуцируемой видов хемилюминесценции. Это свидетельствует о том, что CK проявляет антиоксидантную активность.

В экспериментах in vitro CK в концентрации 1 мкг/мл умеренно повышает пролиферацию лимфоцитов периферической крови человека, в концентрациях 1 и 10 мкг/мл повышает продукцию ФНО-а мононуклеарными клетками человека. В более высокой концентрации — 100 мкг/мл под влиянием CK наблюдается обратная реакция и отмечается подавление пролиферативной активности лимфоцитов, а также угнетение продукции этого цитокина.

2. Изучение антимикробного действия селекартена.

При изучении антимикробного действия установлено, что в разведении 1:5 CK полностью угнетает рост Pseudomonas aeruginosa (РА). В разведениях 1:10 и 1:15 CK частично ингибирует; в разведении 1:20 CK не влияет на рост РА.

CK в испытанных разведениях от 1:5 до 1:20 полностью подавляет рост золотистого стафилококка.

CK в разведении 1:5 полностью ингибирует рост Acinetobacter calcoaceticus. В больших разведениях CK не проявляет антимикробного действия в отношении Acinetobacter calcoaceticus.

CK в испытанных разведениях 1:5-1:20 ингибирует рост Escherichia coli.

3. Изучение противовирусного действия селекартена.

3.1. Исследование действия селекартена на вирусы гриппа Л и В.

На первом этапе исследования противовирусной активности СК было установлено, что цитотоксическая концентрация препарата для вирусов гриппа А и В в культуре перевиваемых клеток почки спаниеля (МДСК) составляет 120 мкг/мл.

СК в низкой концентрации 1,5 мкг/мл обладает противовирусной активностью в культуре клеток МДСК в отношении вируса гриппа человека А (А/Капифорния/7/04(НЗ№)) при внесении препарата за 2 ч до инфицирования клеток.

СК в концентрациях 30 и 48 мкг/мл проявляет противовирусную активность в культуре клеток МДСК в отношении вируса гриппа человека А (А/Калифорния/7/04(НЗЫ2)) при внесении препарата одновременно с инфицированием клеток и при добавлении препарата в культуру клеток через 30 мин после их инфицирования.

СК в концентрации 60 мкг/мл обладает противовирусной активностью в культуре клеток МДСК в отношении вируса гриппа человека В (В/Гонконг/330/01), причем СК более эффективен при его внесении за 2 часа до инфицирования клеток.

Показано также, что СК в концентрации 80 мкг/мл ингибирует репликацию вирусов гриппа А/Н5 (А/утка/Приморье/2633/01(Н5№), А/утка/Приморье/2621/01 (Н5И2) и А/утка/Алтай/1285/91(Н5>В)) в культуре клеток МДСК, снижая инфекционный титр вируса на 2,0-3,0 1§ ТЦИД50/Ш.

При этом 50 % ингибирующая концентрация (ИК50) СК для данных вирусов гриппа соответственно составляет 12,0 14,1, 17,5 мкг/мл соответственно. В то время как для стандартного лабораторного штамма вируса гриппа А/АюЬ1/68(НЗ№) ИК50 СК установлена на уровне 9,8 мкг/мл.

Противовирусное действие СК в концентрациях 15, 30 и 60 мкг/мл на вирусы гриппа А/(Н5№) и А/(Н5Ы2) в культуре клеток МДСК проявляется при внесении препарата за 2 и 0,5 ч до инфицирования, одновременно с инфицированием и через 0,5 ч после инфицирования. Наибольший противовирусный эффект регистрируется при внесении СК за 2 часа до инфицирования и снижается в зависимости от уменьшения времени контакта препарата с клетками МДСК.

Эксперименты на куриных эмбрионах, зараженных вирусом гриппа А/(Н5ЫЗ), подтвердили выраженное противовирусное действие селекартена. Препарат в концентрации 120 мкг/мл оказывает существенное влияние на репликацию данного штамма вируса гриппа и проявляет вирулицидное действие.

Инфекционный титр вируса при одновременном введении препарата в концентрации 120 мкг/мл и вируса в куриные эмбрионы под влиянием СК снижается на 3,5 ЭИД50/0,1 мл.

При других схемах применения СК в концентрации 100 мкг/мл отмечалось снижение инфекционного титра вируса гриппа А/(Н5№) в куриных эмбрионах на 4,0-6,25 ^ ЭИД50/0,1 мл. При увеличении концентрации СК до 120 мкг/мл отмечалось более выраженное снижение инфекционного титра вируса гриппа А/(Н5№) в куриных эмбрионах на 6,25 \В ЭИД50Д),1 мл.

Установлено также, что СК в концентрации 120 мкг/мл оказывает вирулицидное действие в отношении вирусов гриппа А/(НЗЫ2) и В/Гонконг/330/01 при инкубировании в течение 1 ч и 24 ч в культуре клеток МДСК. Инкубирование в течение 1 ч сопровождается снижением титра вируса на 4,5 и 5,2 ^ соответственно, в то время как после 24 часового инкубирования ВГ А инактивируется полностью, а вирус гриппа В инактивируется на 4,5

В экспериментах на мышах при профилактической схеме введения селекартена в дозах 1,6, 16,6 и 33 мкг/кг за 72, 48, 24, 1 час до инфицирования препарат оказывает выраженное защитное действие при экспериментальной пневмонии, вызванной вирусом гриппа А/Н5. В условиях опыта в испытанных дозах СК увеличивал выживаемость инфицированных мышей до 60-100 %. Результаты эксперимента представлены в таблице 4.

Таблица 4. Профилактическое действие СК и на модели гриппозной пневмонии мышей, вызванной вирусом гриппа птиц А/Н5._

Группы животных Дозы препарата, мкг/кг Количество животных Выживаемость, % Средняя продолжительность жизни, дни (М+т)

1 - контроль - 10 30 6,3±1,1

2 - СК 1,6 10 60 11,8±1,5

3-СК 16,6 10 100 14

4 - СК 33,3 10 90 13±0,7

При лечебной схеме применения СК в дозах 16,6 и 33 мкг/кг при однократном пероральном назначении через 24, 48, 72 часа после инфицирования мышей вирусом гриппа А/Н5 для моделирования гриппозной пневмонии у мышей выживаемость животных в среднем составляла 60 % при 100 % гибели в контроле. Следует отметить, что при назначении СК с лечебной целью в испытанных дозах 16,6 и 33 мкг/кг у выживших после гриппозной пневмонии мышей в легких отмечались лишь единичные мелкоочаговые пораженные участки. Результаты эксперимента представлены в таблице 5.

Таблица 5. Лечебное действие СК на модели гриппозной пневмонии мышей, вызванной вирусом гриппа птиц А/Н5.___

Группа животных Дозы препарата, мкг/кг Количество животных Выживаемость, % Средняя продолжительность жизни, дни (М+т)

1 - контроль - 10 30 6,3±1,1

2 - СК 16,6 10 60 11,1±1,1

3-СК 33,3 10 60 11,1±1,2

3.2. Исследование действия селекартена на вирус простого герпеса.

При изучении действия СК на вирус простого герпеса-1 установлено,

что величине 50 % цитотоксической дозы (ЦЦ50) селекартена для культуры клеток Vero соответствует разведение препарата 1:80. Последующие разведения СК практически не оказывали влияния на вирус при визуальной оценке состояния клеточного монослоя. Чувствительность вируса к селекартену в культуре клеток MRC-5 оказалась выше. Видимые под микроскопом изменения клеточного монослоя выявлялись при использовании препарата в разведениях 1:320-1:640. Нибольшее из разведений 1:640 оказалось для вируса максимально переносимым.

При изучении прямого противогерпетического эффекта селекартена установлено, что максимальное подавление вирусного ЦПЭ (ИД95) достигается в разведениях вплоть до 1:800-1:1024. Средне-эффективное противовирусное действие (ИД5о) СК сохранялось при разведении препарата 1:1600.

Установлено также, что под влиянием СК снижается инфекционный титр вируса в разведениях, не обладающих цитотоксическим эффектом. При использовании СК в разведении 1:640 величина инфекционного титра составляет 3,85±0,15 lg ТЦЦ50/мл, в контроле - 8,77±0,20 lg ТЦД50/мл. Снижение инфекционного титра на 4,92 lg ТЦЦ50/мл говорит о выраженной способности СК ингибировать репликацию вируса герпеса.

Это свидетельствует о том, что СК обладает способностью непосредственно инактивировать внеклеточный вирус герпеса простого, то есть препарат обладает выраженным вирулицидным действием. При контакте внеклеточного вируса с СК в разведениях от 1:200 до 1:1600 в течение 15, 30 и 60 минут наблюдается выраженное вирулицидное действие на вирус простого герпеса-1 - чувствительный (АЦВ-S) и резистентный (АЦВ-R) к ацикловиру.

3.3. Исследование действия селекартена на вирус гепатита С.

При изучении противовирусного действия СК в отношении вируса гепатита С в предварительных экспериментах установлено, что препарат обладает умеренной токсичностью на культуру клеток почек эмбриона свиньи (СПЭВ) и ЦД50 соответствует разведению СК 1:50.

Внесенный в культуру СПЭВ за 24 часа до ее инфецирования вирусом гепатита С селекартен в разведениях 1:50 и 1:100 защищает 100 % инфицированных клеток от цитопатогенного действия вируса при 100 % гибели клеток в необработанных препаратом инфицированных клеток. В этих условиях продукция вируса инфицированными клетками снижается на 6,1 и 4,1 ^соответственно.

СК в разведении 1:50 защищает 100 % клеток при внесении сразу же после их заражения вирусом гепатита С при 100 % гибели в контроле. При этом продукция вируса снижается на 3,0

СК в разведении 1:25 защищает 85 % клеток при внесении через 24 ч после заражения клеток при 100 % гибели в контроле и снижает продукцию инфекционного вируса на 3,3 Результаты экспериментов представлены в таблицах 6 и 7.

Таблица 6. Жизнеспособность инфицированных культур клеток СПЭВ в условиях обработки селекартеном.__

Препарат Время обработки культур клеток Выживаемость ВГС инфицированных клеток (в %) при воздействии СК в разведениях:

1:25 1:50 1:100 1:200 1:400

СК За 24 ч до заражения клеток н.и. 100 100 100 90

Контроль - 0 0 0 0 0

СК В момент заражения клеток н.и. 100 25 25 5

Контроль - 0 0 0 0 0

СК Через 24 ч после заражения клеток 85 15 15 15 10

Контроль - 0 0 0 0 0

Примечание: н.и. — не исследовали.

Таблица 7. Противовирусный эффект нетоксических доз СК, выявленного в условиях инфекции культур клеток СПЭВ, зараженных ВГС._

Препарат Время обработки культур клеток Титр ВГС в среде инфицированных клеток (в ^ ТЦЦ50/МЛ) при воздействии СК в разведениях:

1:25 1:50 1:100 1:200 1:400

СК За 24 ч до заражения клеток н.и. 3,0 5,0 8,0 8,5

Контроль - 9,1 9,1 9,1 9,1 9,1

СК В момент заражения клеток н.и. 6,0 8,5 8,0 9,0

Контроль - 9,0 9,0 9,0 9,0 9,0

СК Через 24 ч после заражения клеток 6,0 8,0 9,0 8,0 8,0

Контроль - 9,3 9,3 9,3 9,3 9,3

Примечание: н.и. - не исследовали.

СК в разведении 1:200 полностью инактивирует активность данного вируса через 45 минут. Результаты экспериментов представлены в таблицах 8 и 9.

Таблица 8. Вирусиндуцированная гибель культур клеток СПЭВ (в %), зараженных ВГС после экспозиции в СК разных концентраций. (5-е сутки после заражения)._

Препарат Разведения Время экспозиции вируса в СК, мин

15 30 45

СК 1:50 0 0 0

1:100 0 0 0

1:200 50 25 0

Контроль 0 100 100 100

Таблица 9. Способность продуцировать вирус клетками, зараженными ВГС после экспозиции в СК.___

Препарат Разведения Время экспозиции вируса в СК, мин

15 30 45

СК 1:50 0* 0* 0*

1:100 0* 0* 0*

1:200 2,5* 1,0* 0*

Контроль вируса 0 5,7* 5,0* 5,3*

Примечание: * - титры ВГС в ^ ТЩЫмл в пробах среды культур клеток СПЭВ, зараженных вирусом гепатита С после экспозиции СК.

3.4. Исследование действия селекартена на вирус иммунодефицита человека.

В результате проведенных исследований установлено, что СК в дипазоне испытанных разведений 1:10-1:100 оказывает выраженное цитотоксическое действие на зараженные вирусом лимфобластные Т-клетки в культуре, вызывая их гибель. Эффект заметно снижается начиная с разведений 1:200. 50 %-ингибирующая концентрация (ИК50) препарата составляет 1:280.

СК в разведениях 1:200, 1:400, 1:800 и 1:1600 обладает противовирусным действием при всех схемах его введения: профилактической - за 24 ч до инфицирования, при одновременном введении СК и вируса, а также при внесении СК в культуру клеток через 24 ч после их заражения.

При профилактическом введении СК снижение уровня антигена вируса в культуральной жидкости более выражено и 90 %-эффективная концентрация соответствует разведению препарата 1:400 при его внесении за 24 часа до инфицирования клеток и при одновременном внесении с вирусом иммунодефицита человека. При внесении препарата после инфицирования клеток 50 %-ингибирующая концентрация СК соответствует его разведению 1:280.

Результаты исследования противовирусного действия СК в отношении вируса иммунодефицита человека представлены в таблицах 10 и 11.

Таблица 10. Исследование противовирусной активности СК на модели лимфобластных клеток человека МТ-4, инфиированных ВИЧ-1.__

Условия опыта Жизнеспособность Количество клеток X ЦПЭ/синцитии, (+)

клеток, % 103/мл

Внесение СК за 24 ч до инфицирования клеток

Контроль клеток 95 1500 0

Контроль вируса 28 <300 4,0

СК 1:200 65 699 0

Внесение СК одновременно с инфицированием клеток

Контроль клеток 95 1500 0

Контроль вируса 33 <300 4,0

СК 1:200 67 733 0

Внесение СК через 24 ч после инфицирования клеток

Контроль клеток 95 1500 0

Контроль вируса 21 <300 4,0

СК 1:200 67 699 0

Таблица 11. Исследование противовирусной активности СК на модели лимфобластных клеток человека МТ-4, инфиированных ВИЧ-1.__

Условия опыта Жизнеспособ- Количество ЦПЭ/син- ИФА,

ность клеток, % клеток х 103/мл цитии, (+) (снижение уровня антигена), %

Внесение СК за 24 ч до инфицирования клеток

Контроль клеток 91 2600 0 -

Контроль вируса 39 833 4,0 -

СК 1:400 56 1339 1,0 85,4

СК 1:800 53 1199 1,5 42,2

СК 1:1600 51 2000 1,5 29,2

Внесение СК одновременно с инфицированием клеток

Контроль клеток 91 2600 0 -

Контроль вируса 35 533 4,0 -

СК 1:400 59 2000 1,5 93,9

СК 1:800 51 1166 1,5 37,6

СК 1:1600 58 2366 2,0 20,4

Внесение СК через 24 ч после инфицирования клеток

Контроль клеток 91 2600 0 -

Контроль вируса 31 <300 4,0 -

СК 1:400 45 1066 3,0 67,5

СК 1:800 40 900 3,0 21,2

СК 1:1600 34 599 4,0 8,3

Экспозиция исходного раствора СК с ВИЧ в течение 60 минут приводит к снижению инфекционного титра вируса на 5,0 ТЦД50, что соответствует инактивации вируса на 99,999 %. При 24-часовой экспозиции СК в разведениях 1:200, 1:400 и 1:800 с вирусом снижается инфекционный титр вируса на 7,0 ^ ТЦД50. Результаты эксперимента представлены в таблице 12.

Таблица 12. Исследование вирулицидной активности СК (контакт препарата с внеклеточным, а затем инфицирование клеток).__

Препарат Разведение Степень ингибирования, к^ю ТЦЦ50

15-минутный контакт

СК 1:200 0

1:400 0

1:800 0

1:1600 0

1:3200 0

60-минутный контакт

СК 1:200 5,0

1:400 1,0

1:800 1,0

24-часовой контакт

СК 1:200 7,0

1:400 7,0

1:800 7,0

4. Токсикологические исследования.

4.1. Изучение токсичности СК при однократном введении лабораторным животным.

При доклиническом токсикологическом изучении установлено, что при однократном внутримышечном введении мышам линии ВАЬВ/с и крысам \Vistar селекартен является малотоксичным препаратом. Показатели ЛД50 СК при разведении 1:5 физиологическим раствором составляют 51-66 мл/кг.

При этом не выявлено существенных видовых и половых различий в чувствительности указанных видов животных к токсическому действию препарата.

4.2. Изучение токсичности СК в условиях 3-месячного хронического эксперимента на крысах.

При изучении токсичности СК при 3-месячном хроническом эксперименте, установлено, что ежедневное внутримышечное введение СК крысам \Vistar в дозах 0,07 и 0,21 мл/кг (10- и 30-кратные высшие суточные терапевтические дозы, рекомендуемые для человека) в разведении 1:10 стерильным физиологическим раствором не влияет на общее состояние и поведение крыс, а также на гематологические и биохимические показатели. Полученные данные свидетельствуют о хорошей переносимости СК и об отсутствии его повреждающего действия (по данным биохимических тестов) на функциональное состояние важнейших органов и систем организма подопытных животных при длительном внутримышечном введении СК в испытанных дозах 0,07 и 0,21 мл/кг.

Длительное введение СК в дозах 0,07 и 0,21 мл/кг в разведении 1:10 физиологическим раствором в условиях 3-месячного хронического эксперимента в мышцы бедра животных не оказывало местно-раздражающего действия. При макро- и микроскопическом исследованиях внутренних органов и тканей крыс, получавших препарат в испытанных дозах 0,07 и 0,21 мл/кг, не выявлено токсических повреждений.

4.3. Исследование токсичности СК в условиях 1-месячного хронического эксперимента на собаках.

При изучении токсичности СК при 1-месячном хроническом эксперименте, установлено, что внутримышечное введение собакам СК ежедневно в дозе 0,07 мл/кг (10-кратная высшая суточная доза для человека) в разведении 1:10 стерильным физиологическим раствором не влияло на общее состояние и поведение животных, не изменяло функционального состояния важнейших органов и систем организма животных. Длительное введение СК в дозе 0,07 мл/кг в разведении 1:10 в мышцы бедра животных не оказывало местно-раздражающего действия. При макро- и микроскопическом исследованиях внутренних органов и тканей подопытных животных не выявлено изменений, связанных с токсическим действием препарата.

4.4. Изучение мутагенности СК.

При исследовании мутагенности СК устаановлено, что при изучении мутагенности СК на микроорганизмах в тесте Эймса препарат в испытанных концентрациях 0,1-1000 мкг/чашку и его метаболиты, образовавшиеся под влиянием микросомальной фракции не обладают мутагенным действием.

Изучение влияния СК на индукцию доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей показало, что уровень постимлантационных потерь животных, подвергавшихся воздействию препарата, однократно, внутримышечно, в дозе 0,7 мл/кг, равной 100-кратной высшей суточной терапевтической для человека (0,007 мл/кг), не превышает показателей у контрольных животных.

Исследование цитогенетической активности СК методом учета хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей показало, что статистически достоверных различий в уровне хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей, подвергавшихся воздействию препарата в испытанных дозах, по сравнению с контролем не установлено. По примененному тесту учета хромосомных аберраций в клетках костного мозга млекопитающих СК не обладает мутагенной активностью.

При изучении влияния СК на систему репарации ДНК в ЗОБ-хромотесте установлено, что препарат ни в одной из исследованных концентраций в диапазоне от 0,01 до 5 мг/мл не вызывал активацию репарации ДНК у Е. соП РС237, то есть не обладает ДНК-повреждающим

действием. СК не обладает мутагенным действием, а также не является потенциальным канцерогеном.

4.5. Исследование эмбриотоксических и тератогенных свойств СК.

При внутримышечном введении беременным крысам СК (в разведении

физиологическим раствором 1:5) в дозе 0,21 мл/кг (30-кратная высшая суточная доза для человека) с 1 по 19 день гестации наблюдалось достоверное по сравнению с контролем замедление прибавки массы тела, уменьшение количество живых плодов, мест имплантации, желтых тел и массы тела эмбрионов, увеличение показателей предимплатационной гибели, задержка оссификации скелета плодов и уменьшение количества родившихся крысят. В связи с этим беременность следует считать противопоказанием для назначения препарата.

4.6. Изучение влияния СК на репродуктивную функцию крыс.

Внутримышечное введение СК в дозе 0,21 мл/кг в разведении 1:10

физиологическим раствором, что составило 30-ти кратную максимальную суточную терапевтическую дозу, рекомендованную для человека, не влияло на половую активность животных и на репродуктивные показатели, а также на постнатальное развитие крысят. Не выявлено влияния СК в исследуемой дозе на репродуктивную функцию здоровых половозрелых крыс.

4.7. Исследование аллергизирующих свойств СК.

Исследование анафилактогенной активности СК показало, что препарат в испытанных дозах при внутримышечном введении морским свинкам не вызывает анафилактического шока.

Как показали результаты проведенных исследований, реакция гиперчувствительности замедленного типа в испытанных дозах СК у морских свинок была отрицательна.

При оценке влияния СК на массу и клеточность подколенных лимфоузлов мышей установлено, что препарат не обладает аллергизирующими свойствами.

Полученные данные при исследовании иммунотропного действия селекартена на гуморальный и клеточный иммунитет свидетельствуют о иммуностимулирующем действии препарата и об отсутствии у него иммунотоксичности.

ВЫВОДЫ

1. Комплексный растительный препарат селекартен обладает иммуномодулирующими свойствами, в диапазоне испытанных доз 10-100 мкг/кг стимулирует гуморальный и клеточный иммунитет, повышает фагоцитарную активность, пролиферацию лимфоцитов и продукцию ФНО-а мононуклеарными клетками человека.

2. В экспериментах in vitro селекартен в разведениях 1:5-1:20 ингибирует рост Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa и Acinetobacter calcoaceticus.

При профилактическом введении в дозе 1 мкг/кг за 24 часа до заражения мышей летальной дозой Staphylococcus pyogenes селекартен повышает выживаемость животных до 75 % при 84 % гибели в контроле.

3. Селекартен при различных схемах введения (до, во время и после заражения клеточных культур) проявляет выраженную противовирусную активность в отношении патогенных для человека и животных вирусов: гриппа А и В, вирусов птиц А/Н5, вирус простого герпеса-1 (включая его чувствительный и резистентный к ацикловиру штаммы), вирусы гепатита С и иммунодефицита человека.

4. В опытах in vitro эффективные цитотоксические концентрации и разведения селекартена зависят от вида вируса и составляют 80-120 мкг/мл для вирусов гриппа А и В, 1:800-1:1024 для вируса простого герпеса-1, 1:501:100 для вируса гепатита С и 1:200-1:800 для вируса иммунодефицита человека-1. В испытанных в дозах 1,6, 16,6 и 33 мкг/кг селекартен при вирусной пневмонии увеличивает выживаемость мышей до 60-100 % при 100% гибели в контроле.

5. Селекартен является малотоксичным препаратом при однократном парентеральном введении лабораторным животным и хорошо переносится при длительном внутримышечном введении крысам Wistar (3 месяца) и собакам (1 месяц), не оказывает повреждающего действия на основные органы и системы организма подопытных животных и не проявляет местнораздражающего действия.

Селекартен не обладает мутагенностью и ДНК-повреждающим действием, не является потенциальным канцерогеном. В испытанных дозах и схемах введения препарат не проявляет аллергизирующих и иммунотоксических свойств.

При назначении беременным крысам селекартен обладает эмбриотоксичностью, в связи с чем беременность является противопоказанием к назначению препарата.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Результаты проведенных экспериментальных исследований комплексного растительного препарата селекартен, показавшие его выраженное иммуностимулирующее действие на гуморальный и клеточный иммунитет, антимикробные и противовирусные эффекты на ряд возбудителей заболеваний человека и животных, свидетельствуют о важности и целесообразности проведения клинических испытаний препарата при некоторых бактериальных и вирусных инфекциях, а также для коррекции патологических нарушений в системе иммунитета.

2. Полученные данные свидетельствуют о перспективности применения использованного подхода для создания новых эффективных комплексных

растительных препаратов на основе фармакопейных растений с добавлением биологически активных компонентов растительной или другой природы.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Гундорова P.A., Иванов А.Н., Плетнев В.В. Медикаментозная терапия сосудистых заболеваний глаза. (Монография).// - М.: Книжный дом «ЛИБРОКОМ», 2009. - 200 с.

2. Плетнев В.В., Пинегин Б.В., Мастернак Т.Б., Елкина С.И., Никонова М.Ф., Харченко Т.Ю. Изучение иммуномодулирующего действия селекартена.// Российский биотерапевтический журнал. - 2012. - Т. 11, № 1.-е. 53-59.

3. Плетнев В.В. Фармакологическая активность комплексного растительного препарата селекартен. (Монография).// - М.: «ЛЕНАНД», 2012. -258 с.

4. Плетнев В.В., Рязанцев И.А., Дудина Н.В. Иммуномодулирующий препарат. (Патент РФ на изобретение).// - 27.02.2007. - № 2294209.

5. Носик Д.Н., Плетнев В.В., Калнина Л.Б., Кисилева И.А. Исследование влияния селекартена на вирус иммунодефицита человека.// Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012 - с. 544.

6. Пинегин Б.В., Плетнев В.В., Мастернак Т.Б., Никонова М.Ф. Влияние селекартена на гуморальный и клеточный иммунитет у мышей.// Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012. - с. 553.

7. Плетнев В.В., Галегов Г.А., Андронова В.Л. Изучение действия селекартена на вирус герпеса простого.// Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012.-с. 554.

8. Плетнев В.В., Дерябин П.Г. Исследование противовирусной активности селекартена в отношении вируса гепатита С.// Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012. - с. 554.

9. Хорошилова-Маслова И.П., Плетнев В.В., Иванов А.Н. Антимикробное действие селекартена на Pseudomonas Aeruginosa.// Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012. - с. 594.

10. Ямникова С.С., Плетнев В.В., Федякина И.Т., Ломакина Н.Ф., Бурцева Е.И., Шевченко Е.С. Противовирусная активность селекартена на модели гриппозной пневмонии мышей.// Сборник материалов XIX Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2012.-е. 603.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АОК антителобразующие клетки

мдск перевиваемые клетки почки спаниеля

мнк мононуклеарные клетки

ТЦД50 50 %-тканевая цитопатическая доза

ЦПД цитопатическое действие

ЦПЭ цитопатический эффект

Подписано в печать 17.01.2013 г. Заказ № 26 Тираж 100 шт. Отпечатано в типографии «АллА-принт» г. Москва, Лубянский пр-д., д. 21, стр. 5 www.allaprint.ru

Оглавление диссертации Плетнев, Владимир Владимирович :: 2013 :: Москва

Введение.

ГЛАВА I. Обзор литературы. Фармакологические свойства и биологическое действие препарата селекартен и его компонентов.

1.1. Селен.

1.2. fl-каротин.

1.3. Фосфолипиды.

1.4. Хлорофилл.

ГЛАВА II. Материалы и методы исследований.

ГЛАВА III. Исследование иммунотропного действия селекартена.

3.1. Влияние селекартена на гуморальный и клеточный иммунитет.

3.2. Влияние селекартена на устойчивость мышей к стафилококковой инфекции.

3.3. Влияние селекартена на бактерицидную активность клеток перитонеального экссудата.

3.4. Влияние селекартена на хемилюминесценцию и количество лейкоцитов периферической крови и спленоцитов.

3.5. Влияние селекартена на люминолзависимую и люцигенинзависимую хемилюминесценцию лейкоцитов.

3.6. Влияние селекартена на жизнеспособность мононуклеаров периферической крови.

3.7. Влияние селекартена на пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови.

3.8. Влияние селекартена на продукцию ФНО-а мононуклеарами периферической крови.

ГЛАВА IV. Изучение антимикробного действия селекартена.

4.1. Pseudomonas aeruginosa.

4.2. Staphylococcus aureus.

4.3. Acinetobacter calcoaceticus.

4.4. Escherichia coli.

ГЛАВА V. Изучение противовирусного действия селекартена.

5.1. Исследование действия селекартена на вирусы гриппа А и В.

5.1.1. Изучение цитотоксического действия СК на вирусы гриппа А и В.

5.1.2. Изучение действия СК на эпидемические вирусы гриппа

А человека в культуре клеток МДСК.

5.1.3. Изучение действия СК на эпидемические вирусы гриппа

В человека в культуре клеток МДСК.

5.1.4. Изучение действия СК на вирусы гриппа птиц А/Н5 в культуре клеток МДСК.

5.1.5. Исследование влияния СКна репликацию вирусов гриппа птиц А/Н5 в куриных эмбрионах.

5.1.6. Изучение вирулицидного действия СК на вирусы гриппа человека А и В в культуре клеток МДСК.

5.1.7. Изучение вирулицидного действия СК на вирусы гриппа птиц А/Н5 в куриных эмбрионах.

5.1.8. Изучение лечебно-профилактического действия СК на модели гриппозной пневмонии мышей, вызванной вирусом гриппа птиц А/Н5.

5.2. Исследование действия селекартена на вирус простого герпеса.

5.2.1. Изучение цитотоксического действия СК на вирус герпеса простого в культуре клеток.

5.2.2. Изучение действия СК на эталонный ВПГ типа I и на вирус с лекарственной устойчивостью в культуре клеток.

5.2.3. Изучение вирулицидного действия СКна вирус простого герпеса-1 - чувствительный (АЦВ-S) и резистентный (АЦВ-R) к ацикловиру.

5.3. Исследование действия селекартена на вирус гепатита С.

5.3.1. Изучение цитотоксического действия СК на вирус гепатита С.

5.3.2. Изучение действия СКна вирус гепатита С.

5.3.3. Изучение вирулицидного действия СК на вирус гепатита С.

5.4. Исследование действия селекартена на вирус иммунодефицита человека.

5.4.1. Изучение цитотоксического действия СК на лимфобластоидных клетках человека, зараженных ВИЧ.

5.4.2. Изучение действия СК на ВИЧ.

5.4.3. Изучение вирулицидного действия СК в отношении

ГЛАВА VI. Исследование общетоксического действия селекартена.

6.1. Изучение токсичности СК при однократном введении лабораторным животным.

6.2. Изучение токсичности СК в условиях 3-месячного хронического эксперимента на крысах.

6.3. Исследование токсичности СК в условиях 1-месячного хронического эксперимента на собаках.

ГЛАВА VII. Исследование специфических видов токсичности селекартена.

7.1. Изучение мутагенности СК.

7.1.1. Изучение мутагенности СК на микроорганизмах в тесте Эймса.

7.1.2. Изучение влияния СК на индукцию доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей.

7.1.3. Исследование цитогенетической активности СК методом учета хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей.

7.1.4. Изучение влияния СК на систему репарации ДНК в SOS-хромотесте.

7.2. Исследование эмбриотоксических и тератогенных свойств

7.3. Изучение влияния СК на репродуктивную функцию крыс.

7.4. Исследование аллергизирующих свойств СК.

7.4.1. Исследование анафилактогенной активности СК.

7.4.2. Реакция ГЗТ на морских свинках.

7.4.3. Исследование влияния СК на массу и клеточностъ подколенного лимфоузла у мышей.

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Плетнев, Владимир Владимирович, автореферат

В последние годы пристальное внимание исследователей привлекает изучение роли микроэлементов и витаминов в функционировании иммунной системы. Установлено, что витамины А, С, В12, (3-каротин, фолиевая кислота, рибофлавин, а также микроэлементы селен, цинк и железо обладают иммуномодулирующими свойствами и их недостаточность приводит к ослаблению иммунитета и повышению инфекционной заболеваемости [157, 169].

При дефиците селена в организме и сниженной иммунореактивности слабопатогенный вирус Коксаки приобретает высокую вирулентность и приводит к серьезным нарушениям в работе сердечно-сосудистой системы; вирус гриппа вызывает более тяжелые повреждения легочной ткани; у ВИЧ-инфицированных людей начинается быстрое прогрессирование заболевания [246]. Регулярное потребление пищевых продуктов с высоким содержанием селена замедляет старение организма и снижает риск развития злокачественных новообразований [178, 276, 277].

В настоящее время активно разрабатываются лекарственные средства и биологически активные добавки, содержащие селен - незаменимый микроэлемент, обладающий широким спектром биологической активности и целым рядом фармакологических свойств, в том числе высокой антиоксидантной активностью [177, 186, 265]. При этом принципиально важным остается создание новых комплексных лекарственных препаратов, усиливающих положительные эффекты селена и снижающих его нежелательное побочное действие, связанное с проявлением токсичности [83].

Учитывая выше сказанное, актуальным является изучение нового комплексного растительного препарата - селекартен (СК), содержащего селен. В экспериментах на кроликах с острой ишемией сетчатки, вызванной лазерной коагуляцией было показано, что СК обладает антиоксидантным действием, ангио-, нейро- и ретинопротекторным свойствами [Швецова Н.Е., 2008]. Под влиянием СК наблюдается усиление компенсаторных механизмов, направленных на восстановление кровообращения в поврежденных тканях при ишемии и дистрофии сетчатки [138].

Вместе с тем, экспериментальное изучение иммунотропных, антимикробных и противовирусных свойств СК, а также его безопасность подробно не изучались, а выявленные эффекты препарата свидетельствует о перспективности его применения в иммунологии, онкологии, реаниматологии, при лечении ряда внутренних, инфекционных и других заболеваний.

Цель и задачи исследования

Целями исследования являются исследования в эксперименте фармакологических свойств и токсичности препарата селекартен для обоснования его клинического изучения и последующего медицинского применения.

Для достижения указанных целей были поставлены следующие задачи:

1. Изучить спектр иммунотропного действия препарата селекартен.

3. Изучить противовирусную активность селекартена в отношении вирусов гриппа А и В, герпеса простого, гепатита С, иммунодефицита человека.

4. Провести доклиническое токсикологическое исследование препарата селекартен.

Научная новизна исследования

1. Впервые изучено иммунотропное действие селекартена. Установлено, что СК повышает устойчивость мышей к смертельной стафилококковой инфекции, стимулирует бактерицидную активность клеток перитонеального экссудата мышей, гуморальный тимусзависимый и клеточный иммунные ответы. Под влиянием СК наблюдается подавление зимозаниндуцированной хемилюминесценции лейкоцитов периферической крови и спленоцитов мышей, подавление люминол- и люцигенинзависимых спонтанных и зимозаниндуцированных хемилюминесценций лейкоцитов человека. Установлено, что при совместной инкубации СК с мононуклеарными клетками периферической крови наблюдается повышение клеточной гибели, подавление пролиферации лимфоцитов периферической крови человека и повышение продукции ФНО-а мононуклеарными клетками периферической крови человека.

2. При изучении антимикробной активности селекартена in vitro впервые установлено, что препарат обладает ингибирующим действием на Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Acinetobacter calcoaceticus, Escherichia coli.

3. Впервые также установлено, что селекартен обладает противовирусным и вирулицидным действием в отношении вирусов гриппа А/Н5, А/НЗ и В. Показано, что препарат оказывает защитное действие при экспериментальной гриппозной пневмонии у мышей, вызванной вирусом гриппа А/Н5. Впервые выявлена противовирусная и вирулицидная активность СК при действии на вирусы простого герпеса 1-го типа, гепатита С и иммунодефицита человека-1.

4. При доклиническом токсикологическом изучении селекартена, установлено, что СК является малотоксичным препаратом и хорошо переносится при длительном назначении, не обладает мутагенностью, не оказывает аллергизирующего действия и иммунотоксичности, проявляет эмбриотоксичность, в связи, с чем беременность следует считать противопоказанием к назначению СК.

Практическая значимость научной работы

В результате проведенных исследований обоснована перспективность клинического изучения селекартена в иммунологии, онкологии, реаниматологии, при лечении ряда внутренних и инфекционных заболеваний, в качестве лекарственного средства системного действия, обладающего иммуномодулирующим, антимикробным и противовирусным свойствами. Определены оптимальные дозы для назначения селекартена и доказана возможность его длительного применения в виде внутримышечных инъекций.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакологические свойства и токсикологическая характеристика комплексного растительного препарата селекартен"

Выводы

1. Комплексный растительный препарат селекартен обладает иммуномодулирующими свойствами, в диапазоне испытанных доз 10-100 мкг/кг стимулирует гуморальный и клеточный иммунитет, повышает фагоцитарную активность, пролиферацию лимфацитов и продукцию ФНО-а мононуклеарными клетками человека.

При профилактическом введении в дозе 1 мкг/кг за 24 часа до заражения мышей летальной дозой Staphylococcus pyogenes селекартен повышает их выживаемость до 75 % при 84 % гибели в контроле.

3. Селекартен при различных схемах введения (до, во время и после заражения клеточных культур) проявляет выраженную противовирусную активность в отношении патогенных для человека и животных вирусов: гриппа групп А и В, вирусов гриппа птиц А/Н5, вируса простого герпеса-1 (включая его чувствительный и резистентный к ацикловиру штаммы), вирусов гепатита С и иммунодефицита человека-1.

Заключение

Проведено экспериментальное изучение фармакологических свойств и токсичности оригинального комплексного растительного препарата -селекартен, полученного на основе донника лекарственного (Melilotus officinalis L., семейства бобовых - Fabaceae) с добавлением биологически активных веществ: селена, Р-каротина и фосфолипидов (Патент РФ № 2294209 от 27.02.2007).

Программа исследований селекартена предусматривала:

• изучение иммунотропного действия препарата, включающее оценку его влияния на гуморальный и клеточный иммунитет, на устойчивость животных к инфекции, на фагоцитарную активность клеток перитонеального экссудата, на функциональное состояние лейкоцитов и моноцитов периферической крови, а также спленоцитов;

• изучение антимикробного действия селекартена на 4 вида микроорганизмов, наиболее часто вызывающих различные заболевания у человека - синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa), золотистый стафилококк (Staphylococcus aureus), ацинетобактер (Acinetobacter calcoaceticus) и кишечная палочка (Escherichia coli);

• исследование противовирусного действия селекартена на вирусы гриппа А и В человека, на вирусы гриппа птиц А/Н5, оценка лечебно-профилактического действия препарата при гриппозной пневмонии животных, а также изучение противовирусного действия препарата на штаммы вируса простого герпеса чувствительного и резистентного к ацикловиру, исследование противовирусного действия селекартена на вирус гепатита С и вирус иммунодефицита человека (ВИЧ);

• изучение общетоксического действия селекартена, включающее изучение его токсичности при однократном введении лабораторным животным, исследование токсичности в условиях хронических экспериментов при назначении в течение 3 месяцев крысам Wistar и 1 месяца собакам;

• исследование специфических видов токсичности препарата в соответствии с современными требованиями к безопасности новых лекарственных препаратов (Национальный стандарт РФ ГОСТ Р 52379-2005):

- изучение мутагенных свойств и прогноз канцерогенности селекартена (тест Эймса, учет хромосомных аберраций в клетках костного мозга и доминантных летальных мутаций в зародышевых клетках мышей, влияние на систему репарации ДНК в SOS-хромотесте);

- исследование эмбриотоксических и тератогенных свойств селекартена;

- изучение влияния препарата на репродуктивную функцию;

- исследование аллергизирующих свойств селекартена.

В опытах in vitro наиболее выраженное ингибирующее действие на образование перекиси водорода и супероксидного аниона СК проявляет в концентрации 100 мкг/мл. Указанные эффекты были зарегистрированы с помощью спонтанной люминолзависимой и зимозаниндуцируемой видов хемилюминесценции. Это свидетельствует о том, что СК проявляет антиоксидантную активность.

В экспериментах in vitro СК в концентрации 1 мкг/мл умеренно повышает пролиферацию лимфоцитов периферической крови человека, в концентрациях 1 и 10 мкг/мл повышает продукцию ФНО-а мононуклеарными клетками человека. В более высокой концентрации - 100 мкг/мл под влиянием СК наблюдается обратная реакция и отмечается подавление пролиферативной активности лимфоцитов, а также угнетение продукции этого цитокина.

При профилактическом подкожном введении за 24 часа до заражения мышей летальной дозой Staphylococcus pyogenes селекартен предотвращает развитие смертельной стафилококковой инфекции у животных. В оптимальной дозе 1 мкг/кг СК повышает выживаемость мышей до 75 % при 84 % гибели в контроле.

Полученные результаты послужили основанием для проверки антимикробного действия СК на другие виды патогенных микроорганизмов.

При изучении антимикробного действия установлено, что селекартен в разведениях 1:5, 1:10, 1:15, 1:20 физиологическим раствором полностью подавляет рост Staphylococcus aureus и Escherichia coli, а в разведении 1:5 полностью ингибирует рост Pseudomonas aeruginosa и Acinetobacter calcoaceticus.

В связи с выраженными иммуностимулирующими свойствами селекартена большой практический интерес представляло исследование его противовирусного действия на возбудителей различных вирусных заболеваний человека и животных.

СК в низкой концентрации 1,5 мкг/мл обладает противовирусной активностью в культуре клеток МДСК в отношении вируса гриппа человека А (А/Калифорния/7/04(НЗК2)) при внесении препарата за 2 ч до инфицирования клеток.

СК в концентрациях 30 и 48 мкг/мл проявляет противовирусную активность в культуре клеток МДСК в отношении вируса гриппа человека А (А/Калифорния/7/04(НЗШ)) при внесении препарата одновременно с инфицированием клеток и при добавлении препарата в культуру клеток через 30 мин после их инфицирования.

Показано также, что СК в концентрации 80 мкг/мл ингибирует репликацию вирусов гриппа А/Н5 (А/утка/Приморье/2633/01(Н5№), А/утка/Приморье/2621/01 (Н5Ы2) и А/утка/Алтай/1285/91(Н5Ю)) в культуре клеток МДСК, снижая инфекционный титр вируса на 2,0-3,0 ^ ТЦИД5о/мл

При этом 50 % ингибирующая концентрация (ИК5о) СК для данных вирусов гриппа соответственно составляет 12,0 14,1, 17,5 мкг/мл соответственно. В то время как для стандартного лабораторного штамма вируса гриппа АМлсЫ/68(НЗН2) ИК5о СК установлена на уровне 9,8 мкг/мл.

Эксперименты на куриных эмбрионах, зараженных вирусом гриппа А/(Н5Ш), подтвердили выраженное противовирусное действие селекартена. Препарат в концентрации 120 мкг/мл оказывает существенное влияние на репликацию данного штамма вируса гриппа и проявляет вирулицидное действие.

Инфекционный титр вируса при одновременном введении препарата в концентрации 120 мкг/мл и вируса в куриные эмбрионы под влиянием СК снижается на 3,5 ^ ЭИД50/ОД мл.

При других схемах применения СК в концентрации 100 мкг/мл отмечалось снижение инфекционного титра вируса гриппа А/(Н5№) в куриных эмбрионах на 4,0-6,25 ^ ЭИД50/ОД мл. При увеличении концентрации СК до 120 мкг/мл отмечалось более выраженное снижение инфекционного титра вируса гриппа А/(Н5№) в куриных эмбрионах на 6,25 ЭИД50/0,1 мл.

Установлено также, что СК в концентрации 120 мкг/мл оказывает вирулицидное действие в отношении вирусов гриппа А/(НЗЫ2) и В/Гонконг/330/01 при инкубировании в течение 1 ч и 24 ч в культуре клеток МДСК. Инкубирование в течение 1 ч сопровождается снижением титра вируса на 4,5 ^ и 5,2 ^ соответственно, в то время как после 24 часового инкубирования ВГ А инактивируется полностью, а вирус гриппа В инактивируется на 4,5

При изучении действия СК на вирус простого герпеса-1 установлено, что величине 50 % цитотоксической дозы (ЦД50) селекартена для культуры клеток Vero соответствует разведение препарата 1:80. Последующие разведения СК практически не оказывали влияния на вирус при визуальной оценке состояния клеточного монослоя. Чувствительность вируса к селекартену в культуре клеток MRC-5 оказалась выше. Видимые под микроскопом изменения клеточного монослоя выявлялись при использовании препарата в разведениях 1:320-1:640. Нибольшее из разведений 1:640 оказалось для вируса максимально переносимым.

При изучении прямого противогерпетического эффекта селекартена установлено, что максимальное подавление вирусного ЦПЭ (ИД95) достигается в разведениях вплоть до 1:800-1:1024. Средне-эффективное противовирусное действие (ИД50) СК сохранялось при разведении препарата 1:1600.

Установлено также, что под влиянием СК снижается инфекционный титр вируса в разведениях, не обладающих цитотоксическим эффектом. При использовании СК в разведении 1:640 величина инфекционного титра составляет 3,85±0,15 ТЦД50/мл, в контроле - 8,77±0,20 ^ ТЦД50/мл. Снижение инфекционного титра на 4,92 ^ Т1Щ50/мл говорит о выраженной способности СК ингибировать репликацию вируса герпеса.

Это свидетельствует о том, что СК обладает способностью непосредственно инактивировать внеклеточный вирус герпеса простого, то есть препарат обладает выраженным вирулицидным действием. При контакте внеклеточного вируса с СК в разведениях от 1:200 до 1:1600 в течение 15, 30 и 60 минут наблюдается выраженное вирулицидное действие на вирус простого герпеса-1 - чувствительный (АЦВ-8) и резистентный (АЦВ-Я) к ацикловиру.

Внесенный в культуру СПЭВ за 24 часа до ее инфецирования вирусом гепатита С селекартен в разведениях 1:50 и 1:100 защищает 100 % инфицированных клеток от цитопатогенного действия вируса при 100 % гибели клеток в необработанных препаратом инфицированных клеткок. В этих условиях продукция вируса инфицированными клетками снижается на 6,1 и 4,1 ^ соответственно.

СК в разведении 1:25 защищает 85 % клеток при внесении через 24 ч после заражения клеток при 100 % гибели в контроле и снижает продукцию инфекционного вируса на 3,3

Установлено также, что СК обладает выраженными вирулицидными свойствами. СК в разведениях 1:50 и 1:100 полностью инактивирует активность вируса гепатита С в течение 15-, 30- и 45-минутной экспозиции. СК в разведении 1:200 полностью инактивирует активность данного вируса через 45 минут.

Большой практический интерес представляло изучение противовирусного действия СК в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). В результате проведенных исследований установлено, что СК в дипазоне испытанных разведений 1:10-1:100 оказывает выраженное цитотоксическое действие на зараженные вирусом лимфобластные Т-клетки в культуре, вызывая их гибель. Эффект заметно снижается начиная с разведений 1:200. 50 %-ингибирующая концентрация (ИК50) препарата составляет 1:280.

СК в разведениях 1:200, 1:400, 1:800 и 1:1600 обладает противовирусным действием при всех схемах его введения: профилактической — за 24 ч до инфицирования, при одновременном введении СК и вируса, а также при внесении СК в культуру клеток через 24 ч после их заражения.

Экспозиция исходного раствора СК с ВИЧ в течение 60 минут приводит к снижению инфекционного титра вируса на 5,0 lg ТЦЦ50, что соответствует инактивации вируса на 99,999 %. При 24-часовой экспозиции СК в разведениях 1:200, 1:400 и 1:800 с вирусом снижается инфекционный титр вируса на 7,0 lg ТЦД50.

Таким образом в результате проведенных исследований установлено, что селекартен обладает противовирусным действием в экспериментах in vitro и in vivo в отношении изученных патогенных для человека и животных вирусов. Эффективность противовирусного действия СК зависит от способа его применения (профилактически до заражения или с лечебной целью), концентрации и длительности экспозиции.

При доклиническом токсикологическом изучении установлено, что при однократном внутримышечном введении мышам линии BALB/c и крысам Wistar селекартен является малотоксичным препаратом. Показатели ЛД50 СК при разведении 1:5 физиологическим раствором составляют 51-66 мл/кг.

При изучении токсичности СК при 3-месячном внутримышечном введении крысам в дозах 0,07 и 0,21 мл/кг (10- и 30-кратные высшие суточные дозы для человека) и при 1-месячном внутримышечном введении собакам в дозе 0,07 мл/кг (10-кратная высшая суточная доза для человека) не установлено повреждающего действия препарата на основные органы и системы организма подопытных животных. При патогистологическом исследовании внутренних органов животных и мест введения СК, проведенном после окончания хронических экспериментов, не выявлено патологических изменений и местнораздражающего действия, связанных с токсичностью препарата.

При исследовании мутагенности CK была изучена способность препарата вызывать генные мутации у индикаторных штаммов бактерий в тесте Эймса, вызывать хромосомные аберрации в клетках костного мозга млекопитающих, влиять на количество доминантных леталей в зародышевых клетках мышей и оказывать ДНК-повреждающие действия SOS в хромотесте. При этом установлено, что ни сам препарат, ни его метаболиты в диапазоне испытанных концентраций (от 0,1 до 1000 мкг/чашку Петри) не обладают мутагенными свойствами в тесте Эймса на индикаторных штаммах Salmonella typhimurium ТА 98, ТА 100 и ТА 1537 в условиях метаболической активации фракцией S9 печени крысы.

Селекартен в испытанных дозах 0,07 и 0,7 мл/кг не вызывает хромосомных аберраций в клетках костного мозга и доминантных летальных мутаций у мышей-гибридов Fi(CBAxC57B16). CK в диапазоне испытанных концентраций 5, 2,5, 1,25, 0,6, 0,3, 0,15, 0,07, 0,04, 0,02, 0,01 мг/мл не оказывает ДНК-повреждающего действия в SOS-хромотесте. Следовательно, результаты проведенных исследований свидетельствуют, что CK не обладает мутагенными свойствами и не является потенциальным канцерогеном.

При внутримышечном введении беременным крысам CK (в разведении физиологическим раствором 1:5) в дозе 0,21 мл/кг (30-кратная высшая суточная доза для человека) с 1 по 19 день беременности наблюдалось достоверное по сравнению с контролем замедление прибавки массы тела, уменьшение количество живых плодов, мест имплантации, желтых тел и массы тела эмбрионов, увеличение показателей предимплатационной гибели, задержка оссификации скелета плодов и уменьшение количества родившихся крысят. В связи с этим беременность следует считать противопоказанием для назначения препарата.

При ежедневном внутримышечном введении селекартена в дозе 0,21 мл/кг (при разведении физиологическим раствором 1:5) крысам-самцам

Vistar в течение 10 недель и крысам-самкам в течение 2 недель не установлено влияния препарата на репродуктивную функцию животных.

Селекартен в диапазоне испытанных доз и схемах сенсибилизации не обладает анафилактической активностью, не проявляет аллергизирующего действия в реакции гиперчувствительности замедленного типа у морских свинок и в реакции подколенного лимфоузла у мышей.

Данные, полученные при изучении иммунотропных свойств селекартена свидетельствуют о выраженном стимулирующем действии препарата на гуморальный и клеточный иммунитет.

Подводя итоги экспериментального изучения оригинального комплексного растительного препарата «Селекартен», можно отметить, что он обладает выраженным иммуностимулирующим действием на гуморальный и клеточный иммунитет, проявляет антимикробные и противовирусные свойства.

Селекартен характеризуется низкой токсичностью при однократном введении лабораторным животным, хорошей переносимостью при длительном (внутримышечном 3-месячном введении крысам \Vistar и 1-месячном введении собакам), отсутствием токсического повреждения внутренних органов и местнораздражающего действия.

Препарат не обладает мутагенностью и не является потенциальным канцерогеном.

Селекартен при назначении беременным крысам (с 1 по 19 день гистации) проявляет эмбриотоксичность и вызывает аномалии развития у плодов, в связи с чем препарат противопоказан при беременности.

Селекартен в испытанных дозах и схемах введения не обладает аллергизирующим свойствами и иммунотоксичностью.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2013 года, Плетнев, Владимир Владимирович

1. Абаджян, М.М. Эффективность применения тиосульфата натрия и эссенциале и коррекция метаболизма фосфолипидов при острой пневмонии: (Клинико-экспериментальное исследование). Автореферат дис. . кандидата медицинских наук. Ереван, 1990 - С. 24.

2. Абакумова Г.З., Новицкий Г.К., Легонькова Л.Ф. К вопросу о роли перекисного окисления липидов в патогенезе вирусного гепатита// Вопрос, мед. химии. 1988 - Т. XXXIV, вып. 6 - С. 30-32.

3. Абдуллаев Г.Б., Гаджиева H.A., Гасанов Г.Г., Джафаров А.И., Перелыгин В.В. Селен и зрение. Баку: ЭЛМ, 1972 - С. 13-36.

4. Абдуллаев Г.М., Зейналлы Э.М., Сафаров Ю.И. Об изменениях концентрации селена при заболеваниях гепатобилиарной системы// Врач, дело. 1978 - №11 - С. 35-37.

5. Авцин А.П., Жаворонков A.A., Рош М.А., Строчкова Л.С. Микроэлементозы человека. М.: Медицина, 1991 - С. 496.

6. Айламазян, Е. К. Антиоксиданты в комплексной терапии позднего токсикоза беременности и связанной с этим хронической гипоксии плода/ Айламазян Е.К.// Акушерство и гинекол. 1991 №3 - С. 30-34.

7. Акулов К.В., Шумилов К.В. Влияние микроэлементов на развитие иммунологических реакций у морских свинок при бруцеллезе. М. Ветеренария, март 1967 - С. 44-3, 38-40.

8. Алешко С.Ф. Влияние селена на некоторые биохимические процессы в организме животных: автореф. дис. канд. биол. наук Витебск, 1967 - С. 19.

9. Андронова В.Л., Скоробогатый М.В., Манасова Е.В. и др.// Биоорганическая химия, 2003 №3 - С. 290-295.

10. Атлавин A.B. Эффективность действия селена на метаболизм микроэлементов и активность некоторых ферментов у цыплят/ Атлавин A.B., Апсите М.Р., Свилане А.Б.// Усвоение пищевых веществ в организме животных. Рига: Зинатне, 1977 - С. 25-33.

11. Балуда В.П., Деянов Н.И., Балуда М.В. и соавт./ Профилактика тромбозов. Саратов, 1992 - С. 176.

12. Беляков В.Д., Дегтярев А.А, Иванников Ю.Г. Качество и эффективность противоэпидемических мероприятий. Л., 1981 - С. 130-131.

13. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. М.: Медицина, 2004 - С. 194.

14. Берлинсон М.Я. О влиянии хлорофиллина натрия на периферическую кровь у детей.// Автореферат дис. кандидата медицинских наук. Ленинград, 1971.

15. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов (молекулярные механизмы, пути предупреждения и лечения). М.: Медицина, 1989 - С. 368.

16. Биохимия человека, том № 1./ Р. Марри., Д. Греннер., П. Мейес., В. Рудольф. М.: «МИР», 1993 - С. 204.

17. Болдырев H.A., Змызгова A.B., Козлов A.B., Азизова O.A. Влияние гипербарической оксигенации на состояние перекисного окисления липидов и антиоксидантную систему сыворотки крови при вирусном гепатите В// Советская медиц. 1989 - №4 - С. 93-95.

18. Болдырев H.A., Козлов A.B., Змызгова A.B. и др. Причины интенсификации перекисного окисления липидов в сыворотке крови у больных вирусным гепатитом В// Бюллет. экспер. биологии и мед. 1990 - Т. X, №9 - С. 297-298;

19. Бородин Е.А. Теоретическое обоснование использования ненасыщенных фосфолипидов для восстановления структуры и функции повреждённых биологических мембран /Бородин Е.А., Арчаков А.И., Лопухин Ю.М.// Вестник АМН СССР. 1985 - №3 - С. 84-90.

20. Букин Ю.В. Молекулярно-биологические основы и перспективы витаминной профилактики рака// Вопросы онкологии. 1986 - Т. 32, №11 -С. 35-47.

21. Букин Ю.В. Бета-каротин фактор здоровья. М., 1995 - С. 27.

22. Букин Ю.В. Влияние бета-каротина на динамику активности орнитин-декарбоксилазы в атрофической слизистой оболочке и в ткани полипов желудка// Букин Ю.В., Заридзе Д.Г., Драудин-Крыленко В.А. и др.// Вопр. мед. химии. 1992 - №38 - С. 33-36.

23. Бурлакова Е .Б. Биохимия липидов и их роль в обмене веществ. -М.: Наука, 1981 С. 23-24.

24. Буюклинская О.В. Влияние бета-каротина на продукцию интер-лейкина-2 и митогениндуцированную пролиферацию Т-лимфоцитов/ Буюклинская О.В., Коростелев С.А., Потапова A.A. и др.// Вопр. мед. химии. -1992-№38-С. 29-31.

25. Венгеровский А.И., Батурина Н.О., Чучалин B.C., Саратиков A.C. Роль перекисного окисления липидов в механизме пролиферации фибрознойткани печени при экспериментальном хроническом гепатите// Патол. физиол. и эксперим. терапия. 1996 - №2 - С. 37-39.

26. Венцлавская Т.А., Стажадзе Л.Л., Коржова В.В. Противоаритмическая активность нового селенопроизводного препарата// Фармакол. и токсикол. 1984 - T. XLVII, №2 - С. 38-41.

27. Виноградов Л.Ф., Харлицкая Е.В., Мирзоян Ж.А. Антиоксидантная активность убихинона-9 и его комбинаций с витамином Е и селенитом натрия при токсическом поражении печени// Фармакол. и токсикол. 1989 - T. LII, № 1-С. 53-56.

28. Виноградов Л.Ф., Мирзоян Ж.А. Регуляция антиоксидантами изменений экскреторной функции печени при токсическом гепатите// Эксперим. и клин, фармакол. 1993 - Т. 56, №5 - С. 50-52.

29. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биомембранах. M.: Наука, 1972 - С. 272.

30. Владимиров Ю.А. Роль нарушений свойств липидного слоя мембран в развитии патологических процессов// Патол. физиология и эксперим. терапия. 1989 - №4 - С. 7-19.

31. Галегов Г.А., Шобухов В.М., Леонтьева H.A., Ясько М.В.// Биоорганическая химия. 1997 - №1 - С. 906-909.

32. Георгиевский В.И. Минеральное питание животных/ Георгиевский В.И., Анненков Б.Н., Самохин В.Т. М.: Колос, 1979 - С. 471.

33. Гепатоцит: Функционально-метаболические свойства// Под ред. Лукьяновой Л.Д. М.: Наука, 1985 - С. 271.

34. Грацианский H.A. Нестабильная стенокардия острый коронарный синдром. Некоторые новые факты о патогенезе и их значение для лечения. -Кардиология, 1996 - 11: 4-16.

35. Губский Ю.И. Регуляция перекисного окисления липидов в биологических мембранах// Биохимия животных и человека. 1978 - Вып.2. - С. 72-84.

36. Губский Ю.И. Коррекция химического поражения печени// Киев.: «Здоров'я», 1989-С. 168.

37. Данилов Л.Н., Лебедева Е.С. Заключение об использовании композиции фитолон при повреждении легких, вызванных интратрахеальным воздействием токсических агентов.// ВНИИ Пульмонологии. Москва, 1992.

38. Добродеева Л.К. Лечебные препараты водорослевого происхождения. Архангельск, 1997 - С. 19.

39. Дорогокупля А.Г. О влиянии каротина на развитие индуцированных опухолей/ Дорогокупля А. Г., Троицкая Е.Г., Адильгиреева О.Х. и др.// Здравоохр. Казахстана, 1978 - Т. 10 - С. 32-34.

40. Дунин И.М. Экологические аспекты использования селена в молочном скотоводстве/ Дунин И.М., Лебенгарц Я.З.// С.-х. биология: реф. журнал. 1997-№6-С. 71-81.

41. Дюкарев В.В. Кормовые добавки в рационах животных: теория и практика/ Дюкарев В.В., Юпочковский А.Г., Дюкар И.В. М.: Агропромиздат, 1985. - С. 279.

42. Ермаков В.В. Биологическое значение селена/ Ермаков В.В., Ковальский В.В. М.: Наука, 1974 - С. 325.

43. Жданов В.М., Гайдамович С .Я. Общая и частная вирусология. М. - Медицина, 1982 - С. 520.

44. Журавлев А.И. Биоантиокислители в животном организме// Тр. МОИП. Биоантиокислители. -М.: Наука, 1975 Т. 52 - С. 15-29.

45. Закилов А. Н. Корреляционные связи псрекисного окисления ли-пидов, антиоксидантной защиты и микрореологических нарушений в развитии ИБС/ Закилов А.Н.// Терапевтический архив. 1996 - №9 - С. 37-40.

46. Зернов В.Г. Каротинемия// БМЭ. 1979 - Т. 10 - С. 178.

47. Зозуля Ю.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита при патологии головного мозга./ Зозуля Ю.А., Барабой В.А., Сутковой Д.А.// М.: "Знание-М", 2000 С. 344.

48. Золотов Ю.А., Озерова В.М. Сера и селен микроэлементы против рака. - СПб.: ИГ «Весь», 2005 - С. 128.

49. Зубов Л.А. Использование препаратов из морских водорослей для профилактики и лечения патологических состояний.// Экология человека. -1998-№3-С. 27.

50. Зяббаров А.Г. Клиническое проявление у телят недостаточности селена и меры профилактики/ Зяббаров А.Г., Большаков А.Д.// Ветеринария. -2002 -№7 с. 36-37.

51. Иванов В.Н., Никитина Л.П., Анакина Л.В., Соловьева Н.В. Биоселен эффективное средство в лечении сердечно-сосудистых заболеваний// Морской мед. журн. - 1997 - Том. 4 - №1 - С. 39-43.

52. Казиахмедов В.А. Метаболизм селена при тяжелой черепно-мозговой травме у детей: Дис. . д-ра биол. наук. Санкт-Петербург, 2007 -С. 143.

53. Кактурский Л.В., Строчкова Л.С., Истомин А.А. Гипоселенозы// Архив патол. 1990 - Т. 52, №12 - С. 3-8.

54. Кальницкий Б.Д. Минеральные вещества в кормлении животных. -Л.: Агропромиздат, 1985 С. 207.

55. Карнаухов В.Н. Биологические функции каротиноидов: М., Наука, 1988-С. 240.

56. Касумов С.Н. Основы применения селена в кормлении сельскохозяйственной птицы. М.: ВНИИТЭИСХ, 1981 - С. 61.

57. Климов А.Н., Никульчева Н.Г. Липиды, липопротеиды и атеросклероз. Питер Пресс, СПб, 1995 С. 304.

58. Козлов Ю.П. Структурно-функциональные аспекты ПОЛ в биологических мембранах// В кн.: Липиды: структура, биосинтез, превращения и функции. М.: Наука, 1977 - С. 80-93.

59. Козлова О.В., Ревин В.В., Федин М.Н. Анализ фосфолипидов в спинном мозге кроликов при экспериментальном аллергическом энцефаломиелите. Медицинская газета Здоровье Украины, № 92, апрель 2004.

60. Кононский А.И. Биохимия животных. Киев: Высшая школа, 1980 -С. 432.

61. Конторщикова К.Н., Солопаева И.М., Перетягин С.П. Влияние озона на состояние печени при экспериментальном хроническом гепатите// Бюллет. Эксперим. Биологии и медицин. 1996 - Т. 122, №8 - С. 238-240.

62. Крепе Е.М. Липиды клеточных мембран.: Наука, 1981 С. 339.

63. Крикун Б.Л. Эффективность использования морских водорослей в медицине.// Эффективность использования морских водорослей в медицине -Сборник тезисов докладов на конференции. Архангельск, 1995 С. 22.

64. Кудинова С.П. Разработка технологии получения и фармако-токсикологические исследования бета-каротина: Дис. . д-ра биол. наук. -Краснодар, 2003 С. 346.

65. Кудрин А.Н., Коган А.Х., Королев В.В. и др. Свободнорадикальное окисление липидов в патогенезе инфаркта миокарда и лечебно-профилактическая роль антиоксидантов селенита натрия и его комбинации с витамином Е// Кардиология. - 1978 - №2, С. 115-118.

66. Кудрин А.Н., Краснюк И.И., Ефременко O.A. Определение селена в крови и органах крыс при экспериментальном инфаркте миокарда кинетическим методом// Фармация. 1985 - №1 - С. 25-29.

67. Кудрин A.B. Микроэлементы в онкологии/ Кудрин A.B., Скальный A.B.// Микроэлементы в медицине. 2001 - №2 - С. 31-39.

68. Кудрявцева Л.А. Селен в кормлении животных и предупреждение его недостаточности// Сел. хоз-во за рубежом. 1974 - №1 - С. 14-16.

69. Кузнецов, Г.П. Клиническое значение селенодефецита у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями самарского региона и его коррекции препаратом «Селена»/ Кузнецов Г.П., Лебедев П.Л.// Эксперим. и клинич. фармакология. 1995 - Т. 58 - №5 - С. 26-28.

70. Кузнецов С. Соединения микроэлементов в кормлении птицы/ Кузнецов С., Кузнецов А.// Птицеводство. 2001 - №2 - С. 29-34.

71. Кунц Е., Гундерман К.Ж., Шнайдер Е. «Эссенциальные» фосфолипиды в гепатологии.// Терапевтич. арх. 1994 - 66(2) - С. 66-72.

72. Лебедев Н.И. Использование микродобавок для повышения продуктивности жвачных животных. Л.: Агропромиздат, 1990 - С. 96.

73. Лебедев П.А. Селенодефицит у больных с сердечно-сосудистыми заболеваниями и его коррекция препаратом «Селена»// Патол. физиолог, и эксперим. терапия. 1996 - №3 - С. 5-7.

74. Левшин Б.И. Изменение активности изоферментов лактатдегидрогеназы сыворотки крови у крыс при фармакотерапии токсического гепатита препаратами селена и тиазолидина// Фармакол. и токсикол. 1972 - Т. XXXV - №2 - С. 195-198.

75. Левшин Б.И., Кудрин А.Н. Влияние селенита натрия, селенофенов 5 и 6, натриевой соли 4-тиазолидинкарбоновой кислоты, витамина Вц и гидрокортизона на антитоксическую функцию печени// Фармакол. и токсикол. 1973 - Т. XXXVI - №3 - С. 327-329.

76. Логинов A.C., Матюшин Б.Н. Роль реакций перекисного окисления липидов при болезнях печени// Цирроз печени (клиника, диагностика, лечение) (сборник науч. трудов) под ред. акад. А.С.Логинова. Москва, 1990 -С. 5-9.

77. Лопухин Ю.М., Арчаков А.Н., Коган Э.М. и др. Холестериноз. М.: Медицина, 1983 - С. 42-90.

78. Макаренко Е.В., Козловский И.В. Антиоксидантная система эритроцитов при хронических заболеваниях печени// Тер.архив. 1989 - Т. 61 - №9 - С. 115-118.

79. Мамедов Э.Ш., Курбанов С.Б., Мишиев Р.Д., Шахтахтинский Т.Н. Гетероциклические физиологически активные селеноорганические соединения// Материалы третьей научной конференции «Селен в биологии». -1981-С. 178-180.

80. Манаков А.М. Клиническая картина при остром и хроническом отравлении селеном //Труды института экспериментальной медицины. -Свердловск, 1968-С. 103.

81. Марков Х.М. Простагландины// Усп. физиол. наук. 1970 - Т. 1 -№4-С. 98-125.

82. Матюшин Б.Н., Ткачев В.Д. Определение пероксидации липидов в биоптате печени (методика и клиническое значение)// Цирроз печени (клиника, диагностика, лечение) (сборник науч. трудов) под ред. акад. Логинова A.C. Москва, 1990 - С. 9-13.

83. Методические рекомендации «Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам», МУК 4.2.1890-04. Утверждены и введены в действие Главным государственным санитарным врачом РФ Онищенко Г.Г. 04.03.2004.

84. Методы испытаний дезинфекционных средств для оценки их безопасности и эффективности, без номера, Утв. МЗ РФ, М., 1998.

85. МЗ РСФСР Приказ №720 от 31.07.78 «Об улучшении медицинской помощи больным с гнойными хирургическими заболеваниями и усилении мероприятий по борьбе с внутрибольничной инфекцией», Москва, 1978.

86. МЗ РСФСР «Определение D-потенциально патогенных бактерий -возбудителей внутрибольничных инфекций», Методические рекомендации (с правом переиздания местными органами здравоохранения), Москва, 1986.

87. МЗ СССР Приказ №535, Москва, «Об унификации микробиологических (бактериологических) методов исследования, применяемых в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений».

88. Муравьева Д.А. Фармакогнозия (учебник). М.: «Медицина», 1991 -С. 560.

89. Мухачева С.Ю., Руднов В.А., Галян C.JL, Кадочникова Т.Ю. Эффективность селена и альфа-токоферола в терапии больных с абдоминальным сепсисом// Инфекции в хирургии. М.: Изд. холдинг «Медиа Медика», 2007 - Т. 05, N1.

90. Некрасова В.Б. Эффективность использования морских водорослей в медицине.// Эффективность использования морских водорослей в медицине Сборник тезисов докладов на конференции. Архангельск, 1995 - С. 16.

91. Николаев C.B., Кудрин А.Н., Кактурский Л.В. Лечебно-профилактическое влияние селенита натрия на течение экспериментального инфаркта миокарда// Фармакол. и токсикол. 1976 - №5 - С. 571-574.

92. Носик Д.Н., Калнина Л.Б., Злобин А.Ю. и др.// Характеристика штаммов вируса иммунодефицита человека, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц на территории СССР// Вопр. вирусологии, 1992 №1 -С. 24-47.

93. Носик Д.Н., Носик H.H. ВИЧ-инфекция: профессиональный риск и экстренная профилактика. М. - Издательство НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН, 2004, С. 55.

94. Нохатский A.C., Дрынов И.С., Сергиев В.П. Синдром приобренного иммунодефицита. М., ВИНИТИ, 1987 С. 180.

95. Огнивенко В.М., Марокко И.Н. Обмен липидов. М.: Изд. МГМСУ, 2006-С. 18-19.

96. Олейник А.Н. Влияние антиоксидантов на перекисное окисление липидов при комбинированном поражении печени// Фармакол. и токсикол. -1983 T. XLVI, №3 - С. 102-105.

97. Определение бактерий бактерий Берджи, Т. №1, 2, -Издательство «Мир», - 1997, под редакцией Хуолта Дж., Грича Н., Смита П. и др. - 9 издание; перевод с английского под редакцией акад. РАН Заварзина Г.А.

98. Орджоникидзе З.Г. Значение микроэлементов для достижения высоких спортивных результатов и сохранения здоровья спортсменов/ Орджоникидзе З.Г., Громова O.A., Скальный A.B.// Микроэлементы в медицине. 2001 - №2 - С. 40-45.

99. Орлов В.Н., Шпектор A.B. О классификации желудочковых нарушений ритма у больных ишемической болезнью сердца (по данным 24-часового мониторирования ЭКГ)// Кардиология. 1988 - №7 - С. 95-97.

100. Перцовских А.И., Кононова Н.С. Сочетанное действие селена и гальванического тока при экспериментальном атеросклерозе// Вопр. курортолог, физиотер. и лечебной физическ. культур. 1989 - №4 - С.54-56.

101. Плесцитый К.Д. Онкогенез и витамин А// Вопросы онкологии. -1978-Т. 24-С. 85-92.

102. Плесцитый К.Д., Лидак М.Ю. Витамины и синтетические ретиноиды в иммунологии и онкологии: Рига. Зинантие, 1984.

103. Поздаев O.K. «Медицинская микробиология» под ред. акад. РАМН Покровского В.И. «Серия XXI век». Учебник для ВУЗов, издательство Дом ГЭОТАР-МЕД. Москва, 2002.

104. Полищук Н. Эссенциальные фосфолипиды в терапии заболеваний печени. Медицинская газета Здоровье Украины, № 92, апрель 2004.

105. Ребров В.Г., Громова O.A. Витамины и микроэлементы. М.: «АЛЕВ-В», 2003-С. 514.

106. Романова Е.Б., Хаблиева Э.М., Хоменко И.Ю. и др. Оксидантно-антиоксидантная система при вирусном гепатите В// Клин. лаб. Диагностика. -1994-№4-С. 52-53.

107. Рубис A.B. Фармакодинамика хлорофилла: Автореф. дис. . канд.мед.наук, Владивосток, 1977-С. 18.

108. Рубис A.B., Пасичник В.Г., Мещёрская К.А., Ковалёва H.H. Хлорофилл как незаменимый фактор зоокультуры// Первое всесоюзное совещание по проблемам зоокультуры. Тезисы докладов. Часть вторая. Москва, 1986 С. 236-238.

109. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ/ Под общей редакцией член-корреспондента РАМН, профессора Хабриева Р.У. 2-изд. перераб. и доп. -М.: ОАО «Мздательство «Медицина», 2005 - С. 832.

110. Саатов Т.О. Укр. биохим. жур. 1981 - 53(2) - С. 44-51.

111. Савина M.Д. Изучение антиаритмической активности производных фузариновой кислоты и селенорганических соединений, производных гидразина и селенкарбазона: Автореф. дис. канд.мед.наук. Купавна, 1987.

112. Савина М.Д., Кудрин А.Н. Перспектива поиска антиаритмических средств с противоишемическим эффектом среди селеносодержащих веществ// Фармация. 1992 - T. XLI - №1 - С. 39-46.

113. Селен в организме человека./ Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко С.А., Голубкина H.A., Кушлинский Н.Е., Соколов Я.А. М., Издательство РАМН, 2002 - С. 219.

114. Сергеев JI.B. Иммунофармакология и механизм действия неспецифических противоопухолевых иммуномодуляторов: Дис. . докт. мед.наук. М., 1986 - С. 265-275.

115. Сергеев Ю.В., Борисова C.B., Шубина С.И., Ушаков Г.Н., Денисов JI.E. Современные подходы к профилактике рака кожи. Кремлевская медицина, 2000 2: С. 48-51.

116. Скала JI.3., Сидоренко C.B., Нехорошева А.Г., Резван С.П., Карп

117. B.П. «Практические аспекты современной клинической микробиологии». -М.: ТОО Лабинформ, 1997.

118. Скакун Н.П., Даник Л.М. Применение препарата селена при лечении экспериментальной дистрофии печени// Врач. дело. 1975 - №7 - С. 34-36.

119. Скакун Н.П., Высоцкий И.Ю. Гепатозащитный эффект токоферола ацетата и селенсодержащих препаратов при поражении печени тетрациклиновыми антибиотиками// Антибиотики. 1984 - T. XXIX - №31. C. 223-226.

120. Скакун Н.П. Клиническая фармакология и эффективность эссенциале при заболеваниях печени// Эксперим. и клин, фармакол. 1993 -№1 - С. 69-75.

121. Скальный A.B., Рудаков И.А. Биоэлементы в медицине. М.: Издательский дом «ОНИКС 21 век»: Мир, 2004 - С. 3.

122. Скальный A.B., Рудаков И.А. Биоэлементы в медицине. М.: Издательский дом «ОНИКС 21 век»: Мир, 2004 - С. 119.

123. Славянская Т. А., Сипиашвили Р.И. Стратегия и тактика комплексной иммунореабилитации с иммунопатологическими состояниями// Int. J. of Immunorehabilitation. 1999 - №11 - P. 5-12.

124. Сторожок Н.М. Исследование совместного антиоксидантного действия Р-каротина и витамина А с а-токоферолом /Н.М. Сторожок, И.В. Кутузова// Хим-фарм. журнал. 1995 - №12 - С. 37-41.

125. Тагдиси Дж. Г. Микроэлементы и нейрогуморальная регуляция. Баку, 1980-С. 126.

126. Томмэ М.Ф. Потребность свиней в макро- и микроэлементах/ Томмэ М.Ф., Филипович Э.Г.// Животноводство. 1975 - №12 - С. 36-38.

127. Томских Ю.И. Распределение селена-75 в организме кур в онтогенезе и при селеновом токсикозе : автореф. дис.канд. биол. наук. -Казань, 1987-С. 22.

128. Тутельян В.А., Спиричев В.Б., Суханов Б.П., Кудашева В.А., Микронутриенты в питании здорового и больного человека. М. «Колос», 2002.

129. Хамуш Ю.А., Полькина С.И., Некрасов A.A. и др. Лекарственная повязка для открытых ран на основе криопреципитата крахмала с хлорофиллсодержащим бактериостатическим препаратом (МПХ). Санкт-Петербург, 1995. Деп. ГЦМНБ.

130. Цалс И.И. Определение селена в тканях и органах кур/ Цалс И.И., Пеликс Э.Э. // Ветеринария. 1973 - №8 - С. 109-111.

131. Чаяло П.П., Соловьев A.B., Ена Я.М., Сорока В.Р., Ермолин Г.А., Падалка М.Н., Чоботько Г.М., Шехтер И.Е. Содержание церулоплазмина, фибронектина и селена в крови больных острым инфарктом миокарда// Врачебное дело. 1992 - Т. 996 - №3 - С. 15-17.

132. Чернышева Л.Ф., Елисеева C.B. Устраненние действия гистамина на сердце антигистаминными препаратами из класса селенофена// Фармакол. И токсикол. 1966 - №6 - С. 679-681.

133. Чернышева Л.Ф., Кудрин А.Н. Новые высокоактивные антигистаминные органические препараты селена// Фармация. 1971 - №4 -С. 57-63.

134. Шалаев C.B. Тромбоциты при физической нагрузке и индуцированной ишемии миокарда// Кард. 1995 - №1 - С. 9-11.

135. Швецова Н.Е. Изучение воздействия препарата селекартен на сетчатку: экспериментальное исследование: Дис. .канд. мед. наук. Москва, 2008-С. 204.

136. Шувалова Е.П., Антонова Т.В., Барановская В.Б. Значение систем антиоксидантной защиты крови в адаптации к инфекционному процессу при вирусном гепатите В.// Тер архив. 1991 - Т. 63 - №11 - С. 47-49.

137. Шумилов К.В. Влияние микроэлементов на течение бруцеллезной инфекции М., Ветеренария, январь 1967 - С. 44-1, 34-36.

138. Якушкина Н.И., Бахтенко Е.Ю. Физиология растений. М.: Гуманитар, изд. центр ВЛАДОС, 2005 - С. 140.

139. Якушкина Н.И., Бахтенко Е.Ю. Физиология растений. М.: Гуманитар, изд. центр ВЛАДОС, 2005 - С. 132.

140. Якушкина Н.И., Бахтенко Е.Ю. Физиология растений. М.: Гуманитар, изд. центр ВЛАДОС, 2005 - С. 132-135.

141. Aaseth J., Thomassen Y., Alexander J., et al. Decreased serum selenium in alcoholic cirrhosis// N. Engl. J. Med. Clin. 1980 - Vol. 303 - P. 944-945.

142. Aaseth J., Alexander J., Thomassen Y., et al. Serum selenium levels in liver diseases// Clin. Biochem. 1982 - Vol. 15, N6 - P. 281-283.

143. Alexander M., et al. Oral beta-carotene can increase the number of OKT4 + cells in human blood /Alexander M., Newmark H., Miller R.G.// Immunol. -1985-Let 9-P. 221-224.

144. Allen C.M., Hockin L.J., Paine A.J. The control of glutathione and cytochrome P-450 concentrations of primary cultures of rat hepatocytes// Biochem. Pharmacol. 1981 - Vol. 30, N19 - P. 2739-2742.

145. Alving C. R. Immunologic aspects of liposomes: presentation and processing of liposomal protein and phospholipid antigens. Biochimica et biophysica acta 1992; 1113(3-4): 307-22.

146. Anthony Ware J., Coller B.S. (1995) "Platelet morphology, biochemistry, and function", In: Beutler, E., Lichtman, M.A., Coller, B.S. and Kipps, T.J., eds, Williams Hematology, 5th Ed. (McGraw Hilllnc.), 1995 P. 1161-1201.

147. Arthur J.R. The role of selenium in thyroid hormone metabolism and effects of selenium deficiency on thyroid hormone and iodine metabolism/ Arthur J.R., Nikol F., Beckett G.J.// Biological trace element research. 1992 - N33 - P. 37-42.

148. Auzepy Ph., Blondeau M., Richard Ch., et al.// Acta cardiol. (Brux.). -1987-Vol. 42, N3-P. 161-166.

149. Avanzini P., et al. Serum selenium concentrations in patients with newly diagnosed lymphoid malignancies. Haematologica. 1995 Nov-Dec.

150. Barre-Sinoussi F., Cherman J.C., Rey P., et al. Isolation of a N-lymphotropic retrovirus from a patient at a rist for acquired immune deficiency syndrome (AIDS)// Science. 1983 - Vol. 220 - P. 868-871.

151. Benavides J.T., Mojica R.F.S. Selenosis occurencia de selenio en rocas, svelos y plantas. Intoxication por en animals y en humanos. Bogota: Publication IT-3, Institute Geografico de Colombia, 1959.

152. Bendich A. The safety of beta-carotene// Nutritione and Cancer. 1988 -11(4)-P. 207-214.

153. Bendich A., Olson J. A. Biological actions of carotenoids in mammals. -1988// FASEB J.

154. Bhaskaram P. Micronutrient malnutrition, infection and immunity: an overview. Nutr Rev. 2002. 60 (5 Pt 2): P. 40-5.

155. Boone W.T. Colorectal cancer-chemoprevention/ Boone W.T.// J Miss State Med Assoc. 1998.

156. Buljevac M., et al. Serum selenium concentration in patients with liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Acta Med Croatica, 1996.

157. Burk R.F., Early D.S., Hill K.E., et al. Liver and kidney necrosis in selenium-deficient rats depleted of glutathione. Lab Invest, 1995 Jun.

158. Caffrey P.B., Frenkel G.D. Selenium compounds prevent the induction of resistence by cisplatin in human ovarian tumor xenografts in vivo. Cancer Chemoth prarmakol 2000 46: 74-8.

159. Campos-Barros A., Meinhold H., Walzog B., Behne D. Effects of selenium and iodine deficiency on thyroid hormone concentrations in the central nervous system of the rat. Eur J Endocrinol 1997 Mar.

160. Cantor A.H. The effect of selenium in the hen's diet on egg production, hatchability, performance of progeny and selenium concentration in eggs/ Cantor A.H., Scott M.L.// Poultry Sci. 1974 - Vol. 63 - P. 1870-1880.

161. Caroline S. Broome, Francis Mc Ardle, Janet A.M. Kyle, et al. An increase in selenium intake improves immune function and poliovirus handling in adults with marginal selenium status. 2004; 80: 154-62.

162. Carpenter C.C.J., Fischl M.A., Hammer S.M., et al. Antiretroviral therapy for HIV infection in 1997. JAMA. 1997 - Vol. 227 - P. 1962-1969.

163. Casaril M., Stanzial A.M., Gabrielli G.B., et al. Serum selenium in liver cirrhosis: correlation with markers of fibrosis// Clin. Chim. Acta. 1989 - Vol. 182 -P. 221-228.

164. Cerhata D., Madaric A., Ginter E. Antioxidant status in vegetarians and nonvegetarians in Bratislava. 1998 - N10 - P. 1913-1920.

165. Chandra R.K. Nutrition and the immune system from birth to old age. Eur J Clin Nutr. 2002 56 Suppl 3: P. 73-6.

166. Constans J., Delmas-Beauvieux M.C., Sergeant C., et al. One-year antioxidant supplementation with beta-carotene or selenium for patients infected with human immunodeficiency virus: a pilot study. Clin Infect Dis. 1996; 23: 654-6.

167. Contempre B., Le Moine O., Dumont J.E., Denef J-F. & Many M.C. Selenium deficiency and thyroid fibrosis. A key role for macrophages and TGF-a. Mol. Cell. Enyzmol. 1996; 124: 7-15.

168. Coursin D., et al. Pulmonary effect of short term selenium deficiency. Thorax, 1996 May.

169. Crary E.J., McCarty M.F. Potential clinical applications for high-dose nutritional antioxidants. Med Hypotheses, 1984 Jan, 13-1, 77-98.

170. De Clercq E., Descamps J., Verheist G., et al.// J. Infect. Dis., 1980 -Vol. 141-P. 563-573.

171. Doelman C.J., Bast A. Oxygen radicals in lung pathology. Free Radic Biol Med, 1990; 9:5, 381-400.

172. Dolph L. Hatfield, Maria J., Berry and Vadim N. Gladyshev (Eds) Selenium, Second Edition. Its Molecular Biology and Role in Human Health. -Springer US, 2006.

173. Duchateau J. Immunosenescence and the lung. Rev Mai Respir. 2003. 20 (5 Pt 1): 735-41.

174. Duthie Gerry G. Antioxidant vitamins, free radicals and coronary heart disease// Brit. Food J. 1990. - 92, N8 - P. 32-36.

175. Effects on Cell Membranes and Transport of Cholesterol/Ed. by Archakov A. I., Gundermann R.J. Bingen-Rein: wbn-Verlag, 1989 - P. 15-24.

176. Flatt A., Pearce N., Thomson C.D., Sears M.R., Robinson M.F., Beasley R.: Reduced selenium in asthmatic subjects in New Zealand. Thorax, 1990 Feb; 45:2, 95-9.

177. Flohe L. (1997): Selenium in peroxide metabolism. Med.Klin. 92, 5-7.

178. Fox J.M. In: Phosphatidylcholine. Peeters (Ed.). Berlin: Springer, 1976;3.7.

179. Gallegos A., Berggren M., Gasdaska J.R., Powis G. Mechanisms of the regulation of thioredoxin reductase activity in cancer cells by the chemopreventive agent selenium. Jpn J Cancer Res, 1985; 76: 374-377.

180. Ge K., Xue A., Bac J., Wang S.// Virchowa Arch. Abt. A. 1983 - Bd 401,N1-P. 1-15.

181. Gladyshev V. N. Selenium in biology and human health: controversies and perspectives//In Selenium: its molecular biology and role in human health/ Hatfield D.L., et all. Kluwer Academic Publishers, Norwell, Mass, 2001 - P. 313317.

182. Gramm HJ., Kopf A., Bratter P. The necessity of selenium substitution in total parenteral nutrition and artificial alimentation. J Trace Elem Med Biol, 1995 Mar.

183. Green Y., Diplock A.T., Bunvan Y., et al.// Nature. 1961 - Vol. 190, N4773-P. 318-325.

184. Greene L.S. Asthma and oxidant stress: nutritional, environmental, and genetic risk factors. J Am Coll Nutr, 1995 Aug, 14:4, 317-24.

185. Gruber F.O.// Labor. Aktuell Boehringer Mannheim GmbH. 1988 -N5-P. 8-10.

186. Guarini P., Stanzial A.M., Olivieri O., et al. Erythrocyte membrane lipids and selenium in post-viral and alcoholic cirrhosis// Clin. Chim. Acta. 1998 -Vol. 270-P. 139-150.

187. Guide for Care and use of laboratory animals, U.S. Department of Health and Human services, National Institute of Health Publication, 23-93, revised (1985).

188. Hansen J.C., Deguchi Y. Selenium and fertility in animals and man. Acta Vet Scand, 1996; 37: 1: 19-30.

189. Hasselmark L., et al. Selenium supplementation in intrinsic asthma. Allergy, 1993; 48(1), 3036.

190. Hawkes, W. C. & Hornbostel L. Effects of dietary selenium on mood in healthy men living in a metabolic research unit. Biological Psychiatry, 1996; 39, 121-128.

191. Hennekens C. H. Current knowledge and future directions for research on antioxidant vitamins in prevention of cancer, cardiovascular and eye diseases// Pure and Appl. Chtm. 1997. Vol. 69, N10 - P. 2141-2144.

192. Hogan. J. S. Effect of selenium source on selenium status. Journal of dairy science, 1998; 81(8): 2151-8.

193. Holy A., De Clercq E., Votryba I.// Phosphonylmethyl Ethers of Nucleosides and their Acyclic Analogues/ Ed. J.C. Martin. Washington, 1989, P. 50-71.

194. Huang K., Yang A. Inhibitory effect of selenium on Cryptosporidium parvum infection in vitro and in vivo. Biol Trace Elem Res. 2002; 90: 261-72.

195. Hughes K. & Ong C.N. Vitamins, selenium, iron, and coronary heart disease risk in Indians, Malays and Chinese in Singapore. J. Epidemiology and Community Health. 1998; 52: 181-185.

196. James D. Brooks, E. Jeffrey Metter, Daniel W. Chan et al. Plasma selenium level before diagnosis and the risk of prostate cancer development. The journal of urology®. 2001 Dec; 166: 2034-8.

197. Janz C., Wigand R.// Arch. Virol., Vol. 73 P. 135-143.

198. Jao S.W., et al. Effect of selenium on 1,2-dimethilhydrazine-induced intestinal cancer in rats. Dis Colon Rectum, 1996 Jun.

199. Kadrabovc J., Mad'aric A., Kovacikovc Z., Podivensky F., Ginter E., Gazdek F. Selenium status is decreased in patients with intrinsic asthma. Biol Trace Elem Res, 1996 Jun; 52:3, 241-8.

200. Kambayashi H., Yamashita M., Odake Y., Takada K., Funasaka Y., Ichihashi M. Epidermal changes caused by chronic low-dose UV irradiation induce wrinkle formation in hairless mouse. J Dermatol Sei. 2001, 27 Suppl 1: 19-25.

201. Kardinaal A.F., et al; Association between toenail selenium and risk of acute myocardial infarction in European men. 1997 - Vol. 51, N4 - P. 391-393.

202. Kasseroller R. Natriumselenit in der therapie des chronischen lymphodems. Der Allgemeinarzt 1995; 17: 1396-404.

203. Kauf E., Dawczynski H., Jahreis G., et al. Sodium selenite therapy and thyroid-hormone status in cystic fibrosis and congenital hypothyroidism. Biol Trace Elem Res, 1994; 40: 247-253.

204. Kiremidjian-Schumacher L. & Roy, M. Selenium and immune function. Z. Ernahrungswiss. 1998; 37: 50-56.

205. Klimov A.N., Gurevich V.S., Nikiforova A.A., et al. Antioxidative activity of high density lipoproteins in vivo// Atherosclerosis. 1993 - Vol. 100, N1 - P. 1318.

206. Koehrle J. The trace element selenium and the thyroid gland // Biochimie. 1999. - Vol. 81 (5) - P. 527-533.

207. Koenig J.S., et al. Antioxidant status in patients on chronic hemodialysis therapy: impact of parenteral selenium supplementation. Wien Klin Wochenschr, 1997 Jan-P. 17, 162.

208. Kralik A., et al; Influence of zinc and selenium deficiency on parameters relating to thyroid hormone metabolism. Horm Metab Res, 1996 May -P. 164.

209. Krinski N.I. Carotenoids and Cancer in Animal Models// J. Nutr. 1989 -119-P. 123-126.

210. Krinski N.I. The biological properties of carotenoids: (Pap) 10th Int. Sump. Carotenoids, Trondheim // Pure and Appl. Chem. 1994 - Vol. 66, N5 - P. 1003-1010.

211. Krinski N.I. The antioxidant and biological properties of the carotenoids// Ann. NY Acad Sei. 1998 - 854 - P. 443-447.

212. Kukreja R. Effect of selenium deficiency and its supplementation on DTH response, antibody forming cells and antibody titre/ Kukreja R., Khan A.// Indian J. Exp. Biol. 1998 - Vol. 36, N2 - P. 203-5, 219.

213. Lanfear J., Fleming J., Wu L., et al. The selenium metabolite selenodiglutathion induces p53 and apoptosis: relevance to the chemopreventive effects of selenium? Cancinogenecis, 1994; 15: 1387-92.

214. Langkamp-Henken B., Bender B.S., Gardner E.M., et al. Nutritional formula enhanced immune function and reduced days of symptoms of upper respiratory tract infection in seniors. J Am Geriatr Soc. 2004; 52: 3-12.

215. Lvov D.K., Yamnikova S.S., Fedyarina I.T., Lomakina N.F., et al. Evolution of H4, H5 viruses in natural ecosystems in Northern Eurasia (20002002).

216. Makropoulos W., et al. Selenium deficiency and thyroid function in acute renal failure. Ren Fail, 1997 Jan P. 173.

217. Maksimovic Z. Selenium research in Serbia, Yugoslavia/ Z. Maksimovic, I. Djlijic// J.Environ.Pathol.Toxicol Oncol, 1998, 0731-8898, Vol. 17, N3-155.

218. Mathews-Roth M.M. Antitumor activity of beta-carotene, canthaxanthin and phutoene// Onkology. 1982 - 39. - P. 33-37.

219. Mayer H. Retinoids, a new class of compounds with prophylactic and therapeutic activities in oncology and dermatology/ Mayer H., Bollag W., Hanni R., Ruegg R.//Experientia. 1978 - Vol. 34, N9 - P. 1105-1246.

220. Miettinen T.A., Alfthan G., Huttunen J.K., et al. Serum selenium concentration related to myocardial infarction and fatty acid content of serum lipids// Br. Med. J. 1983 - Vol. 287 - P. 517-519.

221. Mihailovic B., Avramovic D.M., et al. Blood and plasma selenium levels and GSH-Px activities in patients with arterial hypertension and chronic heart disease.// J. Environ. Pathol. Toxicol. Oncol. 1998 - N17 - P. 3-4.

222. Miller K.// N.Z.J. Sci. 1971 - Vol. 14, N2 - P. 354-363.

223. Misso N.I., Powers K.A., Gillon R.L., et.al. Reduce platelet glutathione peroxidase activity and serum selenium concentration in atopic asthmatic patients.// Clin. Exp. Allergy. 1996 - V. 26 - P. 838-847.

224. Mitchell J.H., et al; Selenoenzyme expression in thyroid and liver of second generation selenium- and iodine-deficient rats. J Mol Endocrinol, 1996 Jun 178.

225. Mueche R., Micke O., Berndt-Skorka R., et al. Einsatz von Natriumselenit in der radioonkologie klinische Phase-III-Studie bei der postoperativen RT gynaekologiscger Tumoren Stand 12/2004. Strahlenther Onkol 2005; 17(1): 181.

226. Nan Bai-Song, Li Chun-Sheng, Chen Li-hua// Chin. Med. J. 1986. -Vol. 99,N12-P. 948-949.

227. Neve J., Fontaine J., Peretz A., Famaey J.P. Changes in zinc, copper and selenium status during adjuvant-inducted arthritis in rat. Agent Actions, 1988 Aug, 25: 1-2, 146-55.

228. Nowosad Romunald et al. Oznaczanie Zawartosci selenu we krwi budla mlecznego z terenow Dolnego Sleska.// Med. wet. 1976 - Vol. 32, N11 - P. 675677.

229. Oh S.H., et al. Evalution of chemopreventive effect of dietary selenium-rich egg on moese skin tumor induced by 2'-(4-nitrophinoxy)oxirane and 12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate. Carcinogenesis, 1995 Dec.

230. Oliveri O., et al. Low selenium status in the elderly influences thyroid hormones. Clin Sci (Colch), 1995 Dec.

231. Olsson U., Lundgren B., Segura-Aguilar., Messing-Eriksson A., Andersson K., Becedas L., Pierre J.W. Effects of selenium deficiency on xenobiotic-metabolizing and other enzymes in rat liver// Int. J. Vit. Nutr. Res, 1993 -Vol. 63-P. 31-37.

232. Oryszczyn M.P., Godin J., Frette C., et al. Decrease in Selenium Status in Relation to Coal Dust Exposure. American journal of industrial medicine, Sep 1996, Vol. 30, N3 P. 281-284.

233. Owen J.S., Bruckdorfer K.R., Day R.S., Mcintyre N. Decreased erythrocyte membrane fluidity and altered lipid composition in human liver disease// J. Lipid. Res. 1982 - Vol. 23 - P. 124-132.

234. Pakdman A. Symptomatic treatment of brain tumor patients with sodium selenite, oxygen, and other supportive measures. Biological trace element research. 1998; 62: 1-6.

235. Peretz A., Neve J., Vertongen F., Famaey JP., Molle L. Selenium status in relation to clinical variables and corticosteroid treatment in rheumatoid arthritis. J Rheumatol, 1987 Dec, 14-6, 1104-7.

236. Peto R., et al. Can dietary beta-carotene materially reduce human cancer rates?/ Peto R., Doll R., Buckley J.D., et al.// Nature. 1981 - Vol. 290 - P. 201208.

237. Piet A., van den Brandt, Maurice P.A. Zeegers, Peter Bode, R. Alexandra Goldbohm. Toenail Selenium Levels and the Subsequent Risk of Prostate Cancer: A Prospective Cohort Study. Cancer Epidemiology, Btomarkers & Prevention. September 2003; 12: 866-71.

238. Popovici D.// Rev. roum. Med. Ser. Endocr. 1987 - Vol. 25, N3 - P. 191-196.

239. Rafferty T.S., McKenzie R., et al. Differential Expression of Selenoproteins by Human Skin Cells and Protection by Selenium from UVB Induced Cell Death. 1998 J Biochem 332: 231-36.

240. Rannem T., et al. The metabolism of 75Se. selenite in patients with short bowel syndrome. JPEN J Parenter Enteral Nutr, 1996 Nov-Dec.

241. Rayman M.P. The argument for increasing selenium intake. Proc Nutr Soc.-2002; 61: 203-15.

242. Riegger Ch.B. Beta-carotene und Krebspriivention// Vitamine, Min-eralst., Spurenelem. 1990 - Vol. 5, N3 - P. 95-102.

243. Saito Y., Hashimoto T., Sasaki M., Hanaoka S., Sugai K. Effect of selenium deficiency on cardiac function of individuals with severe disabilities under long-term tube feeding// Dev.Med.Child Neurol. 1998 - Vol. 40, N11 - P. 743-748.

244. Salonen J.T., Salonen R., Penttilla I., et al. Serum fatty acids, apolipoproteins, selenium and vitamins antioxidants and the risk of death from coronary artery disease// Am. J. Cardiol. 1985 - Vol. 56 - P. 226-231.

245. Salonen J.T., Huttunen J.K.// Ann. Clin. Res. 1986 - Vol. 18, N1 - P.30.35.

246. Salonen J., Salonen R., Seppanen K., et al.// Atherosclerosis. 1988 -Vol. 70, N1-2-P. 155-160.

247. Sarisky R.T., Nguyen T.T., Duffy K.E., et al./ Difference in incidence of spontaneous mutations between herpes simplex virus types I and 2.// Antimicrob. Agents and chemother, 2000 Vol. 44, N6 - P. 1524-1529.

248. Schoene N.W., Morris V.C., Levander O.A.// Fed. Proc. 1984 - Vol. 43, N3-P. 477.

249. Schjetlein R., Sletnes K.E., Wislff F. A quantitative, semi-automated and computer-assisted test for lupus anticoagulant. Thromb Res, 1993; 69: 239250.

250. Schwarz K. Selenium as an integral part of Factor 3 against dietary necrotic liver generation/ K. Schwarz, C.M. Folltz// J. Am. Chem. Soc. 1958 -Vol. 79 - P. 3292.

251. Scott R., MacPherson A., Yates R.W., Hussain B., Dixon J. The effect of oral selenium supplementation on human sperm motility. Br. J. Urol, 1998; 82:1:76-80.

252. Shamovski I.L., Varovskaya I.Y. Computer molecular simulation of tocopherol two phospholipid complexes// J.Chin Phys. 1991 - Vol. 88 - P. 26752680.

253. Shamovski I. L., Varovskaya I.Y., Khrapova N.G., et al. Influence of fatti acid composition on the structure and stability of fatti acid complexes with vitamin E.// J. Molec. Struct. 1992 - Vol. 253 - P. 149-159.

254. Shaw R., Woodman K., Crane J., et al. Risk factors for asthma symptoms in Kawerau children. N Z Med J. 1994; 107: 387-91.

255. Shedlofsky S.I., Bonkowsky H.L., Sinclair P.R., et.al. Iron loading of cultured hepatocytes: Effect of iron on 5-aminolaevulinate synthase is independent of lipid peroxidation// Biochem.J. 1983 - Vol. 212, N2 - P. 321-330.

256. Singh Vishwan. Roles of antioxidant vitamins and beta-carotene in chronic disease prevention: (Pap) 85 th AOCS Annu. Meet, and Expo, Atlanta Ga, May 8-12, 1994// Int. News. Fats, Oils and Relat Mater. 1994 V. 5, N4 - P. 487.

257. Stoffel W. Structural and functional aspects of phospholipids molecules In: Phosphotidyl choline: Effects on cell membranes and transport of cholesterol. Wbn. Press, Bingen/Rhine, 1989 P. 15-24.

258. Stone J. Reduced selenium status of patients with asthma/ J. Stone, L.J. Hinks, R. Beasley et al.// Clin Sci (Lond). 1989 - Vol. 77, N5 - P. 495-500.

259. Tappel A., Caldwell K. Acceleration of sulfhydryl oxidations by selenocystine// Abstracts of 1st Internat. Symp. (Oregon State University). 1966 -P. 345.

260. Tara M. Vogt, Regina G. Ziegler, Barry I. Graubard, et al. Serum selenium and risk of prostate cancer in U.S. blacks and whites. Int J Cancer, 2003; 103: 664-70.

261. Terada A. et al. Selenium administration to a ten-year-old patient receiving long-term total parenteral nutrition (TPN)-changes in selenium concentration in the blood and hair. J Trace Elem Med Biol, 1996 Apr P. 215.

262. Thiele B., Ghyczy M., Lunow C., et al.: Influence of phospholipid liposomes (PLL) on UVB-induced erythema formation. Arch Dermatol Res, 1993; 285(7): 428-431.

263. Thomson C.D., et al. An evaluation of urinary measures of iodine and selenium status. J Trace Elem Med Biol, 1996 Dec.

264. Thruluvath P.J., Triger D.R. Selenium in chronic liver disease// J.Hepatol. 1992 - Vol. 14 - P. 176-182.

265. To Y., et al. Selenium deficiency associated with cardiac dysfunction in three patients with chronic respiratory failure. Nippon Kyobu Shikkan Gakkai Zasshi, 1996 Dec.

266. Toufektsian M.C., Boucher F., Pucheu S., Tanguy S., Ribiuot C., Sanou D., Tresallet N., de Leiris J. Effects of selenium deficiency on the response of cardiac tissue to ischemia and reperfusion// Toxicology. 20Ô0 - Vol. 148, N.2-3 -P. 125-132.

267. Vitoux D., et al. Selenium, glutathione peroxidase, peroxides and platelet functions. Ann Biol Clin, Paris, 1996.

268. Wassal S.R., Wang L., McCabe R.C., Ehringer W.D., Stillwell W. Deuterium NMRstudy of the interaction of alpha-tocopherol with a phospholipid model membrane. Biochemistry, 1986; 25: 319-326.

269. Wassal S.R., Yang R.C., Wand L., Pholps T.M. Magnetic Resonanse studies of the Structural Role of vitamin E in Phospholipid Model Membranes// Bull. Magnetic Resonanse. 1990 - Vol. 12, N1 - P. 127-134.

270. Wayland M., Gilchrist H.G., Marchant T., et al. Immune function, stress response, and body condition in arctic-breeding common eiders in relation to cadmium, mercury, and selenium concentrations. Environ Res, 2002; 90 P. 47-60.

271. Whanger P.D. Selenium and its relationship to cancer: an update dagger. Br J Nutr. 2004; 91:11-29.

272. WHO Manual on animal influenza. Diagnosis and surveillance, Sapporo, Japan, 2004.

273. Wilke B.C. Trace elements balance in treated phenylketonuria children. Consequences of selenium deficiency on lipid peroxidation/ Wilke B.C., Vidailhet M., Richard M.J., et al.// Arch Latinoam Nutr. 1993 - Vol. 43, N2 - P. 119-22.

274. Winnefeld K., et al. Selenium in serum and whole blood in patients with surgical interventions. Biol Trace Elem Res, 1995 Nov P. 230.

275. Wu A.S.H. Specific effect of selenium deficiency on rat sperm/ Wu A.S.H., Oldfield J.E., et al.// Biol. Reprod. 1979 - Vol. 20 - P. 793.

276. Ya-Jun Hu, Yan Chen, Yong-Qiang Zhang, et al. The protective role of selenium on the toxicity of cisplatin-contained chemotherapy regimen in cancer patients. Biological trace element research, 1997; 56: P. 331-40.

277. Yagi M., et al. Four cases of selenium deficiency in postoperative long-term enteral nutrition. Nutrition, 1996 Jan.

278. Yamamoto Y. Role of active oxygen species and antioxidants in photoaging. Journal of dermatologycal science. 2001; 27(1), P. 1-4.

279. Yang F., Lin Z., Li S., et al.// Acta biol. Exp. Sinica. 1987 - Vol. 20, N4-P. 473-485.

280. Yu S., Zhu Y., Li W. Protective role of selenium against hepatitis B virus and primary liver cancer in Qidong. Biol Trace Elem Res, 1997.

281. Yu Ming-Whei, Horng Ing-Sheng, Hsu Kuang-Hung, et al. Plasma selenium levels and risk of hepatocellular carcinoma among men with chronic hepatitis virus infection// Am. J. of Epidemiol. 1999 - Vol. 150, N4 - P. 367-374.

282. Zazzo J.F., Chalas J., Lafont A., et al. Is nonobstructive cardiomyopathy in AIDS a selenium deficiency-related disease? J Parenter Enteral Nutr, 1988 Vol. 12-P. 537-538.

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакологические свойства и токсикологическая характеристика комплексного растительного препарата селекартен

Оглавление диссертации Плетнев, Владимир Владимирович :: 2013 :: Москва

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Плетнев, Владимир Владимирович, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2013 года, Плетнев, Владимир Владимирович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций