Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Фармакологическая кардиоцитопротекция в условиях гиперадреналинемии и гипоксии

На правах рукописи УДК:616.127-001-003.219:615

0030ВТ540

МАХМУДОВ ВЛАДИСЛАВ РАФИКОВИЧ

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ КАРДИОЦИТОПРОТЕКЦИЯ В УСЛОВИЯХ ГИПЕРАДРЕНАЛИНЕМИИ И ГИПОКСИИ (экспериментальное исследование)

14.00.06 - "Кардиология"

14.00.25 - "Фармакология, клиническая фармакология"

АВТОРЕФЕРАТ диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2006

003067540

Работа выполнена в Институте биологии и природопользования ФГОУ ВПО «Астраханский государственный технический университет» Министерства образования РФ и ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматолоГический университет» Росздрава

Научные руководители:

Доктор медицинских наук, профессор Балуда Михаил Викторович Доктор медицинских наук, профессор Ушаков Алексей Александрович

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук Евсиков Евгений Михайлович Доктор медицинских наук, профессор Муляр Александр Георгиевич

Ведущая организация:

Московский областной научно-исследовательский клинический институт Им. Н.Ф. Владимирского

Защита диссертации состоится ¡А/СошР 2007 года в часов на заседании диссертационного Совета Д208.041.(П при ГОУ ВПО «Московский государственный медико-стоматологический университет» Росздрава (127473, Москва, ул. Делегатская д. 20/1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медико-стоматологического университета (127206, Москва, ул. Ву-четича, д. 10а).

Ученый секретарь диссертационного Совета, профессор

Балуда М.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность.

Фундаментальными исследованиями в области молекулярной кардиологии, повреждения миокарда оценивается как метаболический феномен, основанный на возникновении биоэнергетической гипоксии из-за снижения аэробного синтеза макроэргических сое дине mill Недостаток полноценного энергетического обеспечения клеток миокарда уменьшает работу энергетически зависимых ионных каналов, а компенсаторное усиление анаэробного синтеза макроэргических соединений приводит к избытку образования свободных радикалов и перекисных соединений, повреждающих мембраны клеток с образованием в них дополнительных патологических транспортных каналов (Dispersyn G. D , 2001; Gibbs С L , 2001, Гацура С В , 2004; Телкова И. Л , 2004)

Снижение работы АТФ- зависимых ио1шых каналов и возникновение в мембране дополнительных патологических каналов приводит к нарушению баланса основных ионов (К+- Na+, Са2+- Mg2+) как внутри, так и вне клеток миокарда, что проявляется в изменении биоэлектрических потенциалов, генерируемых мышцей сердца с отклонением сегмента ST на ЭКГ и формированием в миокарде эктопических аритмогенных очагов (Hejjel L, 2000, Smith G А, 2001, Кушаковский MC 2004) Адаптивная реакция миокарда на развитие повреждения в кардиомиоцитах, выражается вначале в виде кратковременного гиперкинетического функционирование клеток и их структур за счет увеличения выброса катехоламинов Далее которое модифицируется на гипокинетическое функционирование по принципу развития феномена «минимизации» работы Однако при преобладании влияния адреналина над норадреналином в сердечной мышце способствует развитию феномена гормоно- нейромедиатороной диссоциации катехоламинов. Этот феномен характеризуется потенцированием развития повреждения (Grund F., 2001, Ishiguro Y , 2001).

В последнее десятилетие в лечении кардиопатологии с целью кардиоцито-протекции практически всегда вместе с антиангинальными JIC назначаются

средства биометаболического механизма действия на организм Основной механизм их фармакологического действия направлен на усиление синтеза макро-эргических соединений в условиях развития энергетического дефицита (Diaz Р , 2001; Шилов А М, 2004; Сусеков А В.; 2004) Однако до сих пор нет однозначного ответа о целесообразности и эффективности их применения в условиях развития повреждения клеток миокарда

Все вышеизложенное явилось основанием, для проведения поиска и анализа применения лекарственных препаратов биометаболического механизма действия в условиях экспериментального повреждения миокарда вызванного гипоксией и адреналином

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Оптимизация и патогенетическое обоснование выбора фармакологической кардиоцитопротекции в условиях повреждения миокарда вызванного воздействием на организм гипоксией и адреналином.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1 Оценить критерии повреждения миокарда при воздействии на организм гипоксии и адреналина

2.Охарактеризовать кардиоцитопротективную эффективность применения милдроната и карнитина в условиях экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией

3 Оценить эффективность применения актовегина в условиях экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией

4 Изучить кардиопротективную эффективность использования рибоксина, кокарбоксилазы и цито- мак в условиях экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией

5 Дать характеристику кардиопротективной эффективности использования препарата солей магния магне Вб в условиях экспериментального повреждения миокарда

6 Провести сравнительный анализ влияния лекарственных средств на общую оксидазную активность сыворотки крови

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Установлено, что фармакологические средства, улучшающие биометаболические и энергетические процессы в клетках, обладают различной степенью кардиоцитопротективной эффективностью в условиях воздействия на организм адреналина и гипоксией.

Показано, что наибольшей степенью кардиоцитопротективной эффективностью в условиях гипоксии и гиперадреналинемии обладали милдронат и маг-не Вб На фоне их применения в условиях моделируемого повреждения не наблюдалось изменения конечной части желудочкового комплекса и возникновения аритмии сердца

Доказано, что применение актовегина, рибоксина, цито-мака и кокарбок-силазы не обладает эффективной кардиоцитопротекцией при воздействии на организм гипоксией и адреналином.

Установлено, что лекарственные средства, обладающие биометаболическим механизмом действия на организм, снижают величину общей оксидазной активности в сыворотке крови in vitro

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ

На основашш изучения влияния различных фармакологических средств, действующих на биометаболические и энергетические процессы в кардиомио-цитах проведена оптимизация путей фармакологической кардиоцитопротекции в условиях повреждения миокарда вызванного воздействием на организм адреналином и гипоксией

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ

Материалы диссертационной работы используются в лекционных курсах и на практических занятиях на кафедре фарм химии Астраханского государст-

венного университета, на кафедре медико-биологических дисциплин института биологии и природопользования Астраханского государственного университета и кафедре фармакологии Астраханского государственной медицинской академии при рассмотрении вопросов патогенеза развития повреждений миокарда и их лекарственной терапии

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ ВЫНОСИМЫ!'. НА ЗАЩИТУ

1 Фармакологические средства, улучшающие биометаболические и энергетические процессы в клетках, обладают различной степенью кардиоцитопро-тективной эффективностью в условиях воздействия на организм адреналином и гипоксией.

2. Высокой степенью кардиоцитопротективной эффективностью в условиях воздействия на организм адреналином и гипоксией обладали милдронат и магне В6. На фоне их применения на ЭКГ мониторе в условиях моделируемого повреждения не наблюдалось изменения конечной части желудочкового комплекса и возникновения нарушений ритма сердца.

3 Применение актовегина, рибоксина, цито-мака и кокарбоксилазы не оказывало кардиоцитопротективный эффект в условиях воздействия на организм гипоксией и адреналином

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на научной конференции «Эколого-биолошческие проблемы бассейна каспийского моря» (Астрахань, 2005), «Лекарство и здоровье человека» (Астрахань, 2006), Международной научной конференции «Свободные радикалы, антиок-сиданты и старение» (Астрахань, 2006)

КОЛИЧЕСТВО ПУБЛИКАЦИЙ.

По теме диссертации опубликовано 4 работы, в том числе 2 - в изданиях рекомендуемых в перечне ВАК РФ

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ.

Диссертация объемом 153 машинописных страниц состоит из введения, обзора литературы, главы - объем, материалы и методы исследования, главы результаты собственных исследований и их обсуждения, 4 выводов, 3 практических рекомендаций, списка литературы, включающего 241 источников, из них 129 иностранных авторов Диссертация содержит 23 таблицы, 76 рисунка фрагментов ЭКГ- мониторного наблюдения за работой сердца в условиях повреждения, 2 диаграммы

ОБЪЕМ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

В работе проведено 5 серий экспериментов на 195 беспородных крысах-самцах На период эксперимента крыс содержали в стандартных условиях вивария/

Количественная характеристика проведенного экспериментального исследования по сериям представлена в таблицах 1

Таблица 1. Оценка влияния фармакологических средств на миокард.

Серия экспериментального исследования Количество животных

Моделирование повреждения миокарда адреналином и гипоксией 40

Цито-Мак (Cytochrome С) 10 мг/кг Heinrich Масг (Германия) 20

Актовегин (Actovegm) 20 мг/кг Nicomed (Австрия) 20

Милдранат (Mildronate) 50 мг/кг Gnndex (Латвия) 25

Магне Вб (Magne В6) 25 мг/кг Sanofi (Франция) 20

Левокарнитин (Levocarnitine) 50 мг/кг Витамины НПО (Россия) 25

Кокарбоксилаза (Cocarboxylase) 21 мг/кг Уфавита (Россия) 20

Инозин (Riboxin) 20 мг/кг Новосибхимфарм (Россия) 25

Итого в данной серии была проведена работа на крысах-саМцах. 195

Оценка влияния лекарственных средств метаболического механизма действия на общую оксидазную активность сыворотки крови 175

Моделирование повреждения миокарда воздействием, на организм адреналином и гипоксией.

Крысу наркотизировали внутрибрюшшшым введением 20% раствора гек-сенала из расчета 50 мг/кг Далее крысе подкожно вводили 0,15 мл 0,1% раствора адреналина гидрохлорида и помещали в специальную камеру емкостью ,2,1 л, где с помощью аппарата Камовского создавалась гипоксическая среда, соответствующая высоте 11000 м «Подъем» проводился со скоростью 150-200 м/с От момента введения в наркоз, а также в период «подъема» и в течение 10 мин на высоте 11000 м и 5 мин после компрессии у крыс велось непрерывное ЭКГ - мониторное наблюдете ЭКГ - мониторное наблюдение и запись ЭКГ велось со скоростью 50 мм/сек при усилении 2 mV на аппарате Mmgograf 82, Simens Elema Sweden. Полученные результаты вносились в протокол исследования с оформлением дневника ЭКГ- мониторного наблюдения и расшифрованы стандартным методом оценки результатов ЭКГ исследования

Кардиоцитопротекция экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией.

На модели повреждения миокарда вызванною адреналином и гипоксией была проведена оценка влияния цито-мака, актовегина, милдраната, магне В6, левокарнитина, кокарбоксилазы, инозина на показатели ЭКГ- мониторного наблюдения Крысу наркотизировали внутрибрюшинным введением 20% раствора гексенала из расчета 50 мг/кг. Далее крысе внутрибрюшгашо вводили исследуемый лекарственный препарат в эффективной разовой дозе ED50 для крыс (Батрак ГЕ, Кудрин АН, 1979, Колла В Э., Сыропятов Б Я, 1998, Гуськова Т А ,2001) Циго-Мак (Cytochrome С) 10 мг/кг Heinrich Масг (Германия), Акто-вегин (Actovegin) 20 мг/кг Nicomed (Австрия), Милдранат (Mildronate) 50 мг/кг Grindex (Латвия), Магне В6 (Magne В6) 25 мг/кг Sanofi (Франция), Левокарни-тин (Levocamitme) 50 мг/кг Витамины (Россия), Кокарбоксилаза (Cocarboxylase) 21 мг/кг Уфавита (Россия), Инозин (Riboxin) 20 мг/кг Новосиб-химфарм (Россия) Через 10-15 мин крысе подкожно вводили 0,15 мл 0,1% рас-

твора адреналина гидрохлорида и далее помещали в специальную камеру емкостью 2,1 л, где с помощью аппарата Камовского создавалась гипоксическая среда, соответствующая высоте 11000 м «Подъем» проводился со скоростью 150-200 м/с От момента введения в наркоз, а также в период «подъема» и в течение 10 мин на высоте 11000 м и 5 мин после компрессии у крыс велось непрерывное ЭКГ - мониторное наблюдение Мониторное наблюдете и запись ЭКГ велось со скоростью 50 мм/сек, при усилении 2 mV на аппарате Mingograf 82, Simens Elema Sweden Полученные результаты вносились в протокол исследования с оформлением дневника ЭКГ- мониторного наблюдения и расшифрованы стандартным методом оценки результатов ЭКГ исследования

Результаты на всех этапах исследования вносились в протокол с оформлением дневника ЭКГ- мониторного наблюдения и расшифрованы стандартным методом оценки результатов ЭКГ исследования. В каждой серии эксперимента у животных оценивали дополнительно внешний вид, общее состояние, заболеваемость и летальность в течение двух недель

Оценка влияния лекарственных средств метаболического механизма действия на общую оксидазную активность сыворотки крови in vitro.

Величину общей ферментативной активности оксидаз сыворотки крови, экстрактов тканей сердца, мозга, почки, легких, печени и оценку действия лекарственных препаратов метаболического механизма действия на ферментативную активность оксидаз сыворотки крови определяли спектрофотометриче-ским методом (Васильева Е С ,2000)

Оборудование и реактивы Спектофотометр СФ 46 с кюветами 10 мм Гомогенизатор или фарфоровая чашка со ступкой Пипетки-дозаторы. Концентрат фосфатно-солевого буфера с твином (ФСБ-Т) флаконы по 28 мл, таблетки ОФД СО по 2 мг, контрольный раствор пероксидазы хрена изготовитель НПО «Диагностические системы», г Нижний Новгород

Ход определения Гомогенаты тканей готовили на фосфатно-солевом буфере Для этого 1 фл ФСБ-Т доводили до 700 мл Далее брали навеску 100 мг

исследуемой ткани, добавляли 1 мл ФСБ-Т и гомогенизировали Центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин брали для изучения надосадочную жидкость или сыворотку крови К 500 мкл исследуемого гомогената или сыворотки добавляли 3 мл ФСБ-Т, 250 мкл. стандартно приготовленного ОФД и вносили в пробирку в качестве реагента останавливающего ферментативную реакцию (стоп-реагент) 1 мл 5 М HCl Еще раз центрифугировали при 5000 об/мин в течение 10 мин Спектрофотомерию проводили при указанных длинах волн и оценивали результаты. Опытные пробы сравнивали с контрольными

Статистическую обработку проводили на персональном компьютере Intel Pentium III по статистическим шкетам в программе "Microsoft Exel 2000 ХР", Statgraphics Данные представляли в виде средней и ее стандартного отклонения (М+/-ш) Достоверность различия показателей оценивали с помощью парного t- критерия Стыодента

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Моделирование повреждения миокарда воздействием на организм адреналином и гипоксией.

Известно, что увеличение концентрации адреналина в сердечной мышце способствует развитию феномена гормоно- нейромедиатороной диссоциации катехоламинов в миокарде Этот феномен характеризуется потенцированием повреждения сердца «в дополнение» к действию «первичного» фактора повреждения, за счет развития трех основных эффектов Во-первых, адреналин усиливает транспорт Са"+ из межклеточного пространства в клетки миокарда с активизацией Са2+ -зависимых фосфолипаз и АТФаз Во-вторых, вызываемая адреналином активация клеточного метаболизма характеризуется низкой «энергопродукцией» В-третьих, адреналин усиливает повреждение мембран и ферментов кардиомиощггов в связи со значительной активацией процессов пере-кисного окисления липидов

При воздействии на организм острой гипоксии на фоне парентерального введения адреналина у крыс-самцов на ЭКГ- мониторе с 3 мин наблюдалось достоверное (р<0,05) снижение сегмента 8Т на 2 мм и ниже исходной величины. На 3 мин после прекращения воздействия факторами повреждения величина сегмента БТ практически возвращается к исходной величине (Диаграмма 1)

Диаграмма: 1.

Динамика параметров ЭКГ- мониторного наблюдения при воздействии на организм адреналином и гипоксии

Примечание Ряд 1. Характеризует данные ЭКГ - мониторного наблюдения после введения в наркоз Ряд 2 Характеризует данные ЭКГ - мониторного наблюдения на 3 мин при воздействии на организм острой гипоксии на фоне введения адреналина Ряд 3 Характеризует данные на 5 мин. после прекращения воздействия на гипоксией

Известно, что одним из важных оцениваемых критериев по ЭКГ является сегмент БТ (Орлов В Н, 2000) Учитывая, что у больных со стенокардией напряжения изменения на ЭКГ чаще проявляется в виде снижения сегмента БТ (Алмазов В А., 1999), можно считать данную модель, как вполне приемлемую для оценки эффективности действия лекарственных препаратов на сердце

и

Обоснование выбора лекарственных препаратов для фармакологической коррекции экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией.

На данном этапе исследования сначала была разработана схема, обосновывающая выбор лекарственных препаратов (Таблица 2) В основу для разработки схемы были положены современные взгляды на клеточные и молекулярные механизмы кардиопатологии

Таблица 2.

Обоснование выбора лекарственных препаратов для исследования

Принцип Механизм действия Лекарственный препарат

1 Уменьшение степени нарушений энергообеспечения кардиоцигов и возможное замещение энергии АТФ и КФ кар-диомиоцитов. Антигипоксанты и Антиоксиданты Цито-Мак

Милдронат

2 Усиливающие энерго-продукцшо Вещества усиливающие синтез энергии Рибоксин

Катализаторы окислительного фосфори-лирования Кокарбоксилаза

3 Уменьшение степени дисбаланса ионов и жидкости в миокарде Соли магния Магне В6

4 Активация процессов репарации и компенсации в сердце Препараты с анаболическим действием Актовегин

Витамины и препараты являющиеся ко-ферментами витаминов. Левокарнитин

На основании данной схемы, на модели экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией, была проведена оценка кар-диоцитопротективной эффективности применения 7 лекарственных препаратов

из различных фармакологических групп влияющих биоэнергетические процессы в клетках миокарда. Для стандартизации оценки результатам ЭКГ- мони-торнош наблюдения влияния лекарственных препаратов на сердце был разработан алгоритм включающий 8 наиболее информативных показателей Это интервалы PQ, QT, RR, величина зубцов Rh Т, сегмента ST, изменения частота сердечных сокращений (ЧСС), возникновение нарушений ритма и проводимости

Оценка кардиоцитопротективной эффективности применения изучаемых JIC в условиях воздействия на организм адреналином и гипоксией.

Применение Цито-Мак в терапии экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией, характеризовалось возникновением на ЭКГ- мониторе в условиях повреждения расширением интервала PQ, снижением величины зубца R, подъемом сегмента ST. Применение левокарни-тина и актовегина в терапии экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией проявлялось, рядом схожих признаков возникновением на ЭКГ- мониторе в условиях повреждения' снижением величины зубца R, подъемом сегмента ST, возникновением желудочковой экстрасисто-лии, мерцательной аритмией и AV блокады III степени Применение кокарбок-силазы в терапии экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией, проявлялось возникновением на ЭКГ- мониторе в условиях повреждения расширением интервала PQ, QT, снижением величины зубца R, подъемом сегмента ST, возникновением желудочковой экстрасисто-лии Применение милдроната в терапии экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией характеризовалось, возникновением на ЭКГ- мониторе в условиях повреждения расширением интервала PQ ( Таблица 3)

Таблица 3

Кардиоцитопротекция милдронатом, левокарнитином, магаеВб, _актовегином, кокарбоксилазой, цито-маком_

Условия воздействия. Продолжительность интервалов (мм/сек) Величина зубцов (мм) Сегмент (мм).

Р<5 от № И Т 8Т+10

Группа контроля исходные параметры/ 0,05+/-0,02 0,08+/-0,001 0,15+/-0,01 9,6+/-0,7 5,4+/-0,9 11,7+/-0,5

Группа контроля в условиях повреждения 0,03+/-0,001 0,08+/-0,01 0,24+/-0,01 12,3+/-0,01 3,8+/-0,1 8,9+/-0,2

Цито-Мак 10 мг/кг исходные параметры 0,04+/-0,01 0,05+/-0,01* 0,17+/-0,01 12,0+/-0,9 3,0+/-0,6** 12,5+/-0,7

Цито-Мак 10 мг/кг в условиях повреждения 0,08+/-0,01** 0,06+/-0,01 0,14+/-0,01 9,7+/-1,0** 1,0+/-0,6** 17,5+/-0,8**

Левокарнитин 50 мг/кг исходные параметры 0,04+/-0,01 0,06+/-0,02 0,26+/-0,02 8,0+/-0,7 2,0+/-0,5* 15,0+/-0,8

Левокарнитин 50 мг/кг в условиях повреждения. 0,04+/-0,02 0,07+/-0,01 0,2+/-0,09 5,7+/-036** 1,3+/-0,4** 19,0+/-0,6**

Актовегин 20 мг/кг исходные параметры 0,04+/-0,02 0,04+/-0,01 0,3+/-0,01 9 0+/-0,6 1,2+/-0,4** 14,0+/-0,8

Актовегин 20 мг/кг в условиях повреждения 0,04+/-0,01 0,08+/-0,03 0,45+/-0,2 5,5+/-0,7** 1,0+/-0,01** 18,7+/-0,7**

Кокарбоксилаза 20 мг/кг исходные параметры 0,04+/-0,01 0,08+/-0,001 0,36+/-0,01* 7,0+/-1,2* 2,0+/-0,4* 10,0+/-0,6

Кокарбоксилаза 20 мг/кг в условиях повреждения 0,07+/-0,006** 0,11+/-0,01** 0,29+/-0,02** 5,6+/-0,8** 2,6+/-0,7 16,6+/-0,6**

Магне В6 25 мг/кг исходные параметры 0,06+/-0,01 0,1+/-0,02 0,26+-/-0,02 10,0+/-0,7 2,0+/-0,6** 13,0+/-0,7

Магне В6 25 мг/кг в условиях повреждения 0,06+/-0,01** 0,1+/-0,01 0,2+/-0,01 9,5+/-0,6** 1,6+/-0,7** 15,0+/-0,7**

Милдронат 50 мг/кг исходные параметры 0,04+/-0,001 0,08+/-0,01 0,3+/-0,04 12,0+/-0,8 4,0+/-0,6 13,0+/-0,3

Милдронат 50 мг/кг в условиях повреждения 0,07+/-0,01** 0,08+/-0,01 0,33+/-0,05 11,8+/-0,75 3,0+/-0,4 12,6+/-0,2

Примечание Звездочки - указывают на достоверность различий (р<0 05) * -между группой контролем и введением изучаемого лекарственного средства, * * - между параметрами экспериментального повреждения миокарда на фоне применения лекарственного средства и параметрами экспериментального повреждения миокарда без введения лекарственного средства

Обсуждение результатов.

Милдронат (триметилгидразиния пропионата дигидрат) синтетический аналог гамма-бутиробетаина, ингибирует гамма- бутиробетаингидрокси-

дазу, снижает биосинтез карнитина и транспорт длинноцепочечных жирных кислот через оболочки клеток, препятствует накоплению в клетках активированных форм неокисленных жирных кислот - производных ацилкарнитина и ацилкофермента А. В условиях ишемии восстанавливает равновесие процессов доставки кислорода и его потребления в клетках, предупреждает нарушение транспорта АТФ, одновременно с этим активирует гликолиз, который протекает без дополнительного потребления кислорода. В результате снижения концентрации карнитина усиленно синтезируется гамма-бутиробетаин, обладающий вазодилатирующими свойствами В случае острого ишемического повреждения миокарда замедляет образование некротической зоны и укорачивает реабилитационный период (Диаграмма 2)

Левокарнитин (ЬеуосагпШпе) - О, Ь - N(3 - карбокси - 2 - гидроксипро-пил) - триметиламмония хлорид Относится к средствам для коррекции метаболических процессов, оказывает анаболическое, антигипоксическое и активирует жировой обмен Карнитин - природное вещество, родственное витаминам группы В Является кофактором метаболических процессов, обеспечивающих поддержание активности КоА. Способствует проникновению через мембраны митохондрий и расщеплению длинноцепочных жирных кислот (пальмитиновой и др.) с образованием ацетил-КоА (необходим для обеспечения активности пи-руваткарбоксилазы в процессе глюконеогенеза, образования кетоновых тел, синтеза холина и его эфиров, окислительного фосфорилирования и образования АТФ). Мобилизует жир (наличие 3 лабильных метальных групп) из жировых депо. Конкурентно вытесняя глюкозу, включает жирнокислотный метаболический шунт, активность которого не лимитирована кислородом (в отличие от аэробного гликолиза) Активизирует анаэробный гликолиз, обладает антиги-поксическими свойствами, стимулирует и ускоряет репаративные процессы Повышает порог резистентности к физической нагрузке, уменьшает степень лактат-ацидоза и восстанавливает работоспособность после длительных физических нагрузок

Таким образом, применение милдроиата иягибитора образования карпити-н<1 нежели самого карнитина обладало эффективной кардиоцитопротекцией я условиях воздействия на организм адреналином и гипоксией (Диаграмма 2 и 3),

Диаграмма: 2.

Кардиоцитопротекция милдроиатом в дозе 50 мг/кг.

Примечание к диаграмме 2: Ряд 1 Группа контроля. Ряд 2. Введение исследуемого ЛС. Ряд 3, 13 условиях воздействия гипоксией на фоне введения адреналина. Ряд 4 Восстановительный период,

Диа1рамма: 3. КардиоцитопротекIШ левокарннтнном в дозе 50 мг/кг.

Примечание к диаграмме 3: Ряд 1- Группа контроля. Ряд 2 Введение ис еле длимого ЛС. Ряд 3. В условиях воздействия гипоксией на фоне введения адреналина. Ряд 4, Восстановительный период.

Актовегин (Actovegin):- активатор обмена веществ в тканяхСодержиг широкий спектр естественных низкомолекулярных веществ - гликолипиды, нук-леозиды, нуклеотиды, аминокислоты, олигопехггиды, незаменимые микроэлементы, электролиты, промежуточные продукты углеводного и жирового обмена Повышает потребление кислорода клетками тканей, особенно в условиях гипоксии, нормализует процессы метаболизма, улучшает транспорт глюкозы, стимулирует синтез АТФ, ускоряет регенерацию обратимо поврежденных клеток и тканей Стимулирует ангиогенез, способствует реваскуляризации ишеми-зированных тканей и созданию условий, благоприятных для синтеза коллагена и роста свежей грануляционной ткатт, ускоряет реэпителизацию и закрытие раны Обладает также мембраностабилизирующим и цитопротективным эффектом

Цито-Мак (Cytochrome Q, относится к метаболическим средствам, оказывает аптигипоксическое, трофическое действие, стимулирует процессы регенерации Цигопротективное средство Является катализатором клеточного дыхания, стимулирует окислительные реакции и активизирует тем самьм обменные процессы в тканях, уменьшает гипоксию тканей при различных патологических состояниях Эффект наступает через несколько минут после в/в введения и продолжается несколько часов Является катализатором клеточного дыхания, стимулирует окислительные реакции и активирует тем самым обменные процессы в тканях, уменьшает гипоксию тканей при различных патологических состояниях. Fe, содержащееся в простетической группе цитохрома С, способно обратимо переходить из окисленной в восстановленную форму

Рибоксин (Inosirt) - 9-6eTa-D- рибофуранозилгипоксантина, предшественник АТФ, оказывает ангигипоксическое, метаболическое и антиаритмическое действие Повышает энергетический баланс миокарда, улучшает коронарное кровообращение, предотвращает последствия интраоперационной ишемии почек Принимает непосредственное участие в обмене глюкозы и способствует

активизации обмена в условиях гипоксии и при отсутствии АТФ Активирует метаболизм пировиноградной кислоты для обеспечения нормального процесса тканевого дыхания, а также способствует активированию ксантин-дегидрогеназы Стимулирует синтез нуклеотидов, усиливает активность некоторых ферментов цикла Кребса Проникая в клетки, повышает энергетический уровень, оказывает положительное действие на процессы обмена в миокарде, увеличивает силу сокращений сердца и способствует более полному расслаблению миокарда в диастоле

Кокарбоксилаза (Cocarboxylase) - 3 - [(4 - амино - 2 - метил - 5 - пирими-диншг) метил] - 4 - метил - 5 - (4, б, 6 - тригидрокси - 3, 5 - диокса - 4, 6 - ди-фосфагекс - 1 - ил) тиазолий хлорид Р, Р' - диоксида - Кофермент, образующийся в организме из тиамина Оказывает метаболическое действие, активирует тканевой обмен В организме фосфорилируется с образованием moho-, ди- и трифосфорных эфиров, кокарбоксилаза входит в состав ферментов, катализирующих карбоксилирование и декарбоксилирование кетокислот, пировиноградной кислоты, способствует образованию ацетил-коферемента А, что определяет ее участие в углеводном обмене Участие в пентозном цикле опосредованно способствует синтезу нуклеиновых кислот, белков и липидов Улучшает усвоение глюкозы, трофику нервной ткани, способствует нормализации функций ССС

Таким образом, применение средств являющихся регуляторами энергетического обмена (РЭО) с активацией аэробного пути образования энергии является не целесообразным

Магне В6. Ионы Mg2+ способны конкурентно связываться вместо ионов Са2+ Они регулируют обменные процессы, межнейрональную передачу и мышечную возбудимость, препятствует поступлению C'a24 через пресинаптиче-скую мембрану, снижает количество ацетилхолина в периферической нервной системе, расслабляет гладкую мускулатуру Антиаритмическое действие - Mg2+ снижает возбудимость кардиомиоцитов, восстанавливает ионное равновесие, стабилизирует клеточные мембраны, нарушает ток Na+, медленный входящий

ток Са2+ и односторонний ток К+ Кардиопротекторный эффект обусловлен расширением коронарных артерий, снижением ОПСС и агрегации тромбоцитов Поступая в клетки ионы, включаются в процессы метаболизма и способствуют терапевтическому эффекту препарата Поступая в клетки ионы, включаются в процессы метаболизма и способствуют терапевтическому эффекту препарата

Таким образом применение препарата ионов магния Manie Вб в условиях воздействия на организм адреналином и гипоксией обладает эффективной кар-диоцитопротекцией

Оценка влияния лекарственных средств метаболического механизма действия на общую оксидазную активность сыворотки крови in vitro.

Достаточно хорошо известно, что ферментные системы, обладающие свойством оксидаз, катализируют окислительно- восстановительные реакции, в которых окислителем служит молекулярный 02* Цитохромоксидаза участвует в реакциях направленных на образование энергии макроэргов, пероксидаза, ката-лаза, церулоплазмин, супероксиддесмутаза участвуют в детоксикации перекисей, синклетного кислорода и других активных форм кислорода, образующихся как в условиях физиологического состояния организма, так и при многих патологических его состояниях Количество генерируемых радикалов в органах и системах имеет различное количество и располагается в порядке убывания в следующей последовательности сердце—»почки—»печень—»мозг—»легкие.

При изучении общей ферментативной активность оксидаз в сыворотки крови и экстрактах тканей мозга, сердца, легких, печени, почки крыс-самцов было установлено, что величина оксидазной активности была наиболее высока в мозге и легком, в сердце, печени и в сыворотке крови величина оксидазной активности практически была одинаковой (Диаграмма 4)

Диафамма 4.

Величина оксида зной активность сыворотки крови и экстрактов тхансЦ

Заключение. При изучении влияния фармакологических средств метаболического механизма действия на величину оксида-шой активности in vitro и ры-воротке крови было установлено, что лекарственные средства метаболического механизма действия на организм снижают величину общей ферментативной активности оксидаз в сыворотке крови. Вероятно, это может оказать некоторое отрицательное влияние на развитие приспособительных; реакций организма к действию повреждающих факторов.

Таблица 4.

Кардиоцитопротсктинная эффективность магнеВб, актовегана, мил дрова та, рибоксина

Показатели результатов 'ЭКГ- мониторинге» наблюдения n условиях повреждении миокарда вызванного гипоксией и адреналином. Контроль ii-40. Маше 46 25 mi7кг п=20. Лк MH1Í'-Г1Ш го мг/кг 11=25. MHJ Щ- рш 1.1; 50 мг/кг п=25. ]*nílOK4l- и 20 Ml /la н=25.

Параметр А, (характеризует изменение конечной част ЭКГ комплекса - сегмента ST и зубца Т).

0- отсутствие изменения ST-T.

]- подъем или снижение зубца Т ■

2- подъем (эле ватт я) сегмента ST. . . _+

3- снижение (депрессия) сегмента ST - -

Параметр В, (характеризует возникновение нарушении сердечного ритма

0- отсутствие нарушений ритма, • 1

1- редкая :жсграсисго;шя. -

2- экстраспстолня частая (более 1 в мин) или политопкая или группойая или ранняя типа R на Т ■

Я- пароксизмальная мерцательная арит мия. парокензмальиая еуправен-фикулярная или желудочковая т&хи-1 кард ин

I lupa метр С. (характеризует возннкноненне нарушен! lit сердечной проводимости).

0- отсутствие нарушений проводимости.

\ SA или AV блокада 1 степени +

2- SA или AV блокада II степени -

Я- SA или AV блокада 111 степени.

Итого критерии ПО КЛАССОМ, Аз, Вл, с» Л„ В„ С; Л,, в„ с, с, А,. В,, С,

Степень эффективности. ПЬТСОК.1Я средняя кыожнн средний

Таблица 5

Кардиоцитопротективная эффективность левокарнитина, цито-Мака, кокарбоксилазы, аскорбиновой кислоты

Показатели результатов ЭКГ- мо-ниторного наблюдения в условиях повренедения миокарда вызванного гипоксией и адреналином. Контроль п=40. Кокар-боксила- за 20 мг/кг п=20. Аскорбиновая кислота 50 мг/кг п=25. Лево-карни- ТГ.11 50 мг/кг и=25. Цито-Мак 10 мг/кг п=20..

Параметр А. (характеризует изменение конечной части ЭКГ комплекса - сегмента 8Г и зуб- ЦаТ).

0- отсутствие изменения ЭТ-Т. - - - - -

1- подъем или снижение зубца Т - - - - -

2- подъем (элевация) сегмента Й'Г - + - + +

3- снижение (депрессия) сегмента БТ + - + - -

Параметр В, (характеризует возникновение нарушений сердечного ритма).

0- отсутствие нарушений ритма. - - + - +

1- редкая экстрасистолия - - - - -

2- экстрасистолия частая (более 1 в мин) или политопная или групповая или ранняя типа И на Т. +

3- пароксизмальная мерцательная аритмия, пароксизмальная суправен-трикулярная или желудочковая тахикардия + +

Параметр С. (характеризует возникновение нарушений сердечной проводимости).

0- отсутствие нарушений проводимости ■ - - - -

1- SA или AV блокада I степени - + + - +

2- SA или AV блокада II степени - - - - -

3- SA или AV блокада III степени + - - + -

Птого критерии по классам. аьв,, с, а2, в2, с2 Aj, Во, Cj А2, В5, с, а 2, Во, с,

Степень эффективности. - средняя низкая средняя средняя

выводы

1. Фармакологические средства, улучшающие биометаболические и энергетические процессы в клетках, обладают различной степенью кардиоцитопро-тективной эффективностью в условиях воздействия на организм адреналина и гипоксией

2. Наибольшей степенью кардиоцитопротективной эффективностью в условиях воздействия на организм адреналином и гипоксией обладали милдронат и магне Вб На фоне их применения в условиях моделируемого повреждения не наблюдалось изменения конечной части желудочкового комплекса и возникновения нарушений ритма сердца

3 Применение актовепша, левокарнитина, инозит, циго-мака и кокарбок-силазы не оказывало кардиоцитопротективный эффект в условиях воздействия на организм адреналина и гипоксией

4. Лекарственные средства, обладающие биометаболическим механизмом действия на организм, снижают величину общей оксидазной активности в сыворотке крови

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 С целью кардиоцитопротекции в условиях развития гипоксически- ише-мических повреждений миокарда рекомендуется применять милдронат и магне В6.

2. Не рекомендуется использовать в условиях развития гипоксически-ишемических повреждений миокарда актовегин, рибоксин, цито-мак и кокар-боксилазу

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Фармакологическая коррекция биоэнергетической гипоксии миокар-да//Фармация.-2006.-№ 5.- С.33-35 - (Махмудов В.Р., Епинетов М.А., Шимановский Н.Л.).

2. Оценка влияния сероводородсодержащих газовых смесей на миокард под контролем ЭКГ-мониторного наблюдения //Вестник новых медицинских технологий.-2006.-Т.ХШ, № 2.- С.42-43 (Махмудов В.Р., Епинетов М. А., Шимановский Н.Л.)-

3. Оценка кардиопротективной эффективности лекарственных средств в условиях острого экспериментального повреждения миокарда//Кардиолог.-2006,-№ 8,- С.57-60 (Балуда М.В.., Епинетов М.А-1 Махмудов В.Р.).

4. Кардиоцитопротекция анти- и прооксидантами//В сб. Свободные радикалы, антиоксиданты и старение.- Астрахань, 2006.- С. (Епинетов М.А., Махмудов В.Р., Шимановский Н.Л.).

Тип ООО КПЦ «ПолиграфКом», ул Набережная 1 Мая, 101, тел 39-16-94,39-24,60 Тир. НОэкз

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Фундаментальными иселедоааки *ми л Области молекулярной кардиологии, повреждения миокарда оценивается как метаболический феномен, основанный на возникновении биоэнергетической гипоксии из-за снижении аэробного синтеза макроэргических соединений [62, 103, 201» 211].

Недостаток полноценного энергетического обеспечения клеток миокарда уменыгает работу энергетически зависимых ионных каналов, а компенсаторное усиление анаэробного синтеза макро-эргичеекмх соединений приводит к избытку образования свободных радикалов и перекисных соединений, повреждающих иеиораны клеток С образованней а них дополнительных патологических транспортных каналов [58, 63, 67, 205, 207

Снижение работы АТФ- зависимых ионных каналов и возникновение в мембране дополнительных патологических каналов приводит к нарушение баланса основных ионов КаЧ Со1*- Мд:'! как онутри, так и вне клеток миокарда, что проявляется ■ ив-ненении биоэлектрических потенциалов, генерируемых ныкией сердца с отклонением сегмента 5Т на ЭКГ и формированием в миокарде эктопических аритмогенных очагов |1, 51, 82, 215, 2373.

Интракардмальнач адаптивная реакции сердив на развитие повреиленкя о кардиомиоиитах, выражается в виде кратковрененно го гнперкннетнческого функционирование клеток и их структур, далее которое модифицируется на гипокинетическое функционирование по принципу развития феномена «минимизации» энергетических «трат. Однако при преобладании влияния адреналина над норадроиолинок в сердечной мышце способствует развитию феномена гормона- нейромбдкатороной диссомидиии катсхо-ламинол [ГКДК|. Этот феномен характеризуется потенцированием развития повреждения [13, 5В, 68, 102, 1ВВ, 224].

В клинической кардиологии появились термины «оглуаоннь.»;» миокард (etunnlng myocardium], «уснувший» или «спящий» миокард 4hi.becnac.ing myoeardium), хак проявления нарусения сократительной функции левого желудочка в участках с возобновлении кровоснабжением в результате митохоидриальной энергетической дисфункции кардиоыиоцитов (121, 129, 161, 171, 182, 213]. Даже современные способ« кардиохирургнческих подходов в лечении ишемической фермы кардиопатологни не позволяет полностью восстановить сократительную способность миокарда из-за нарушенных Омометаболкчсских процессов в митохондриях [42, 12?, 145, 196, 214]. Это требует нового подхода к поиску Фармакологических средств, способствующих улучшению восстанавливаемости миокарда после прекращения действия повреждающих Факторов [26, ЭЬ, 59, 65, 61, 108, 210].

Установлено, что причинами дисметаСолических повреждений сердца являются; действие на организм длительного и чрезнернего стресса; истонаолнх физических и умственных нагрузок; неблагоприятных факторов среды обитания; гигиенически вредных производственных факторов; воздействие различных техногенных Факторов; необоснованный прием лекарственных средств и лр-[25, 40, 54, 69, 73, 113, 124]*

Рассматривая патогенетические механизмы развития повреждения миокарда с позиции дезорганизации энергообеспечения, предусматривает применение в фармакотерапии повреждения миокарда препаратыj которые способны оптимизировать процессы дезорганизации энергетического обеспечения я кардномноинтех в условиях развития биоэнергетической гипоксии миокарда [10, 41, 84, 96, 105, 112J. В последнее десятилетие в лечении ССЗ стали достаточно аироко применять так называете фармакологические средства, регуляторы энергетического обмена (РЭО) или кардиоиитопротекторы |14, 59, 89, 93, 99, 111]. Их основной механизм фармакологического действия направлен в первую очередь на изменение биометабоднческих процессов в кардисмиоии-твх, выражаиоийся в изменении синтеза макроэргическнх соединений в условиях развития биоэнергетической гипоксии миокарда [32, 92, 134, 141, 146, 151). Однако до сих пор нет однозначного ответа о целесообразности их назначения и степени ферма -котерапевтической э®фехтивности в условиях развития биоэнергетической гипохеим миокарда.

Все вывензложенное пеклось основанием, для проведения поиске и анализа применения лекарственных препаратов бноиета-Оолнческого механизма действия в условиях экспериментального повреждения миокарда вызванного гипоксией и адреналином. цьль нестсяовАния*

Оптимизация и патогенетическое обоснование выбора фармакологической карлиоиитопротекции в условиях повреждения миокарда вызванного воздействием на организм гипоксией и адреналином.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯг 1. Оценить критерии повреждения ыиокардд при аоэдейе-пшн гипоксии и адреналина.

2.Охарактеризовать кардиоиитопротективиув эффективность применения ммлдроната и карннтина в условиях экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией.

3. Оценить эффективность применения актовегина в условиях экспериментального повреждения киекарда вызванного адреналином и гипоксией.

Изучить каряхопротективну» эффективность использования риООксине* кокарОоксилазы и иито- мак в условиях экелвркнен-талького повреждения миокарда.

5. Дать характеристику кардиопротективной эффективности использования препарата солей нагнил иагне В6 в условиях экспериментального повреждения миокарда.

6, Провести сравнительный анализ влияния лекарственных средств, на oömyns оксидвзную активность сыворотки крови.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Установлено, что фармакологические средства, улучшаюаие Оиометаболические и энергетические Процессы В клетках, обладают различной степенью кардиоиитопротвктивной эффективностью ■ условиях воздействия на организм адреналине и гипоксией.

Показано, что наибольшей степенью кардиоиитопротектнвной эффективности в условиях гипоксии и сиперадренолинемии обладали ынлдронат и иагне Вб. На фоне их применения в условиях моделируемого повреждения не наблюдалось изменения конечной части желудочкового комплехса и возникновения аритмии сердца.

Доказано, что Применение оКТоввгина, рибоксине, цит etwa к Э и кокврОоксклази не обладает эффективной карлиоиитопро-текиией в условиях гипоксии и гипораярсналинекии.

Установлено, что лекарственные средства, обладавшие бко-метаСолнчисккн механизмам действия снижают величину обшей ок-сидвзной активности в сыворотке крови.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РАБОТЫ На основании изучения влияния различных фармакологических средств, действующих на ОиометаОолические и энергетические процессы в кардиомиоаитах проведена оптимизация путей фармакологической кардиоиитопротекиии в условиях повреждения миокарда вызванного воздействием на организм адреналином и гипоксией.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ Материалы диссертационной раОоты используются в лекционных курсах и на практических занятиях на кафедре Фарм. химии Астраханского государственного университета, на кафедре мелн-ко-Сиологнческих дисциплин института ©иологии и природопользования Астраханского государственного университета и кафедре фармакологии Астраханского государственной медицинской академии при рассмотрении вопросов патогенеза развития повреждений миокарда и их лекарственной терапии.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Фармакологические средства, улучшавшие Оиометабсличе-ские и энергетические процессы в клетках миокарда, обладает различной степень«» КардиоцИТйЛротвКТИвИОЙ ЗффективНОСТь.о в условиях воздействия на организм адреиалика и гипоксией.

2- Наибольшей степень» хДрдиоцитопротоктипнай зффектив-ностыо обладает МИЯДрОнат и ыагне Вб. На фоне их применения в условиях моделируемого повреждения не неблвдадось изменения конечной части желудочкового комплекса и возникновения нарушений ритма Сердца.

3. применение актовегкна, рибоксина, цНТО-мака и Кокар-боксидазы не оказывало кардиоцитопротективный эффект в условиях воздействия на организм гипоксией и аяронвлкном.

ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

11Î.1- Признаки повреждения миокарда при воздействии на организм адреналином и гипоксией Дли моделирования повреждения миокарда Било использовано введение раствора адреналина на фоне воздействия на организм острой гипоОарической гипоксией. При данном способе моделирования экспериментального повреждения миокарда вызванного адреналином и гипоксией у крыс-самцов на ЭКГ- мониторе с 3 мин наблюдалось достоверное (р<0,051 снижение сегмента ST на 2 мм и ниже исходной величины (исходные параметры 11,7 ±0,5 мм, в условиях повреждения 8,9 t 0,2 им) (Таблица 3). На 3 мин после прекращения воздействия факторами повреждения величина еегшента ST 411,3 i 0,7 мы| практически возвращается и исходной величине ¡11,7 t 0,5 мм} (см. Приложение; Таблица 16).

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ:

1, С цолъю кардиацитопрОтекции п условиях развития гипок снчески- ивемических повреждений миокарда рекомендуется при менять мклдронат и магме 96.

2. Не рекомендуется испольэоввть в условиях развития ги поксически-ияемическкх повреждений миокарда актоаегик» ркОок сии, иито-мак н кокарбоксклаэу.

Il и If I! iíü с л s i í-: h ч i;! t Ù к 1st ,í Stil p« Si ■>!■( Ь НШ i ttï Я Iii Л я ^ Î s "i

LS S С } " ; и; Я ' г « : i; : ча я vs si! s îiî S; .5 ¡3 ¥S o . o o t t ■ ¿i Set .5 Я VS »< t î 5 ,s s s. с к s e s • .г J s ■3 t Jti я [i S s s J * O » • 4 „S

S с R 5 ü ; "2 г eii я ¡i| С 3 « a я

Mtirii Г» ( íf Hij! i. pij, I! líll il .1 II Iii íhliil

1 à Ii, h! lié e s iï t* î ¡1 iü ! II! I if. hi! tí № Щ 111 s - "ï « îiî fj; ; ; ;

- SÏS : 1 V с b \rl i;: £ ■Ü m -•a -•i : - , ; : ■i iiî s ; 4 * sí:- sä К Я -ï fe £ » : ; í. Z S

2 t m S siî « i ° ' a s к •2 а • ш : Я -i -J

I w iiï S e j ■ ¿ t. » ; "2 шик * Ii t Й f fb |!j!i ; •Is! llfíill ■Hi, ililil il II lllii 1Ш hub

Il*

M ГРГ- * t j¡

II k Ii i У Sfi : t P IIÜI s lî: ; m с Hi с ¿ I и: : 'il Й SiS г H' я Hî я „' и: я ¿il я л я ¿i. 3-i Я V я ï-i.8 ** в » * г =¿: я E;¡ Я V л "Г г : з^г ¿ • « Eiï Я А i * ¿i! я o'-w Я А s b\ я S^i US - - - я * i Sü Й = a Я А г m ; H? : N

Hiiiij t t as i Ь i ÎSif i! ¡1 iill lii'iií Il hilf hlitli

Кзрдиоиитопротвкция инозином {Rlboxinl в лозе 20 »г/кг В условиях повреждения миокарда лпрвнллиНйн и гипоксией.

ТаОлкиа 30»

W ÚM gi

ОТ.*». «.ТО. »r».

IJK5.MI i [H£D,Oi|S. p^L»

Its || 11 i s г ií Se & 0 fe i. 1 N' s ¡¡ \l U i í! Il É s Sil i d ;; ; - ^ i; H v ! t ■í'. = ■ хЗ a ; s * j

H 5

3 я -iS !

Й ■ s S 5 • à , ¿ ? s<sr t Я = • ¿ ? ¡i- я „í ■

J i * i« i'- " и iï Í.5 Я ••

3 53 il я S*!- î i Я S ; Я . htiU i ií Iii f t ¡jÍ, m hUflS il ! î ¡ i !ül hi ar an

I If il «i и Iii ш И \i И iL •¿и i i \ M i î и p' i^ к Um il

J IÏÎ ! I i

J. : í -4Z- J

S •Ï a ; s Ы ; *î s

Й A я v s

- - a ; ;;; s я ь а я ¿ ■, ; ÏÎÏ ; -s

1 t a" * à ; ï« s Ü3 ;

5 в = ♦ ri ; ;

6 ; tîî 1 Я »S

S S'a' ; si; J ? * ¿ з^а о - a s г !*î :

Mili t fi * i NI il l! h:,, mil iiihfîiMS lllülllniliil