Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Экспериментальный отек легких и его фармакопрофилактика антигипоксантами

. Г3 од

О з ФЕЗ 1037

На правах рукописи

КРОПОТОВ Александр Валентинович

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЙ ОТЕК ЛЕГКИХ И ЕГО ФАРМАКОПРОФИЛАКТИКА АНТИГИПОКСАНТАМИ

14.00.16 — патологическая физиология 14.00.25 — фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Санкт-Петербург 1997

Работа выполнена на кафедре фармакологии и клинической фармакологии Владивостокского государственного медицинского университета.

Научные консультанты: заслуженный деятель науки РФ, доктор

медицинских наук, профессор П. П. Денисенко

доктор медицинских наук О. Ю. Урюпов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, старший

научный сотрудник А. В. Соломенников доктор медицинских наук, профессор В. Ю. Шанин

доктор медицинских наук, профессор Е. Е. Лесиовская

Ведущая организация — Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И. П. Павлова.

Защита состоится «. ли 0 2- _ 1997 г. в «_» час.

на заседании диссертационного совета Д 074.16.02 при Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования (193015, г. Санкт-Петербург, ул. Салтыкова-Щедрина, д. 41). С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке академии.

Автореферат разослан « "^Л» ^I__ 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук, старший научный

сотрудник А. И. Тюкавин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Отек легких - неспецифическая реакция на различные патогенетические факторы и чрезвычайные раздражители, характеризующаяся пропотеванием жидкой части крови из легочных капилляров в интерстициальное и воздухосодержащее пространства легких, клинически проявляющаяся тяжелой дыхательной недостаточностью (Лазарис Я. А., Серебровская И.А., 1962; Попов В.Г., Тополянс-кийВ.Д.. 1975: Staub N.. 1978; Сметнев A.C. и др., 1982). Ряд сходных состояний при тяжелых заболеваниях и критических ситуациях именуется синдромом шокового легкого, респираторным дистресс-синдромом у взрослых и проч. (Blank В.. Wiehert Р.. 1983; Зайковс-кий Ю.Я.. Ивченко В.Н., 1987).

Несмотря на прогресс в изучении различных звеньев патогенеза отёка легких, летальность при современных методах терапии данного состояния составляет 20-50%, а в осложненных случаях доходит до 90% (Путов Н. В. и др., 1987; ТельЛ.З., Лысенков С. П.. 1989). Традиционные, в ряде случаев патогенетически обоснованш э способы фармакотерапии отёка легких (оксигенация, пеногасители, вазодилятаторы различного механизма действия, диуретики, компоненты сурфактанта и другие средства) кардинально не решают задачу предупреждения или успешного лечения легочной гипергидратации. Прежде всего это относится к проблеме токсического отека легких, как из-за отсутствия эффективных средств его терапии, так и в связи с участившимся числом химических аварий на территории РФ и других стран, потенциальной опасности огромного количества токсических веществ, в частности оксидов азота, используемых в военных целях и промышленности (Зверев М. И., Анестиади М.Я., 1981; Larcan А. et al., 1988; Варении С.А. и др.. 1992; Новиков B.C.. Смирнов B.C., 1994; Тиунов JI.rt. и др., 1994).

Независимо от причин, приводящих к эдемогенным процессам в легких, важным звеном танатогенеза, требующим неотложной фармакотерапии. является нарастающая по мере развития отека легких гипоксия и активация пероксидации липидов (Денисенко П.П., 1986; Рябов Г.А. и др.. 1991; Тиунов Л.А. и др.. 1991; Колчинская А.З., 1994). Попытка усилить диффузию кислорода в лёгких путем гипербарической ок-зигенации не находит однозначного одобрения из-за инициации в аль-зеоло-капиллярных мембранах перекисного окисления липидов (ПОЛ) с деструктивными последствиями для легочной ткани и сурфактанта (No-

he H. et al.. 1981: Астапенко В.П.,' Лотовин А.П.. 1987; Шугалей В.С и др., 1991; Jaraleson D., 1991; Девятое А.Л., 1994). Вместе с тем. в литературе практически отсутствуют сведения о перспективности применения при отеке легких сравнительно новой фармакологической группы веществ, проявляющей на тканевом уровне антигипоксантную активность (Виноградов В.М., Урюпов О.Ю.. 1985; Лукьянова Л. Д.. 1989, 1991; Смирнов A.B. и др., 1992; Виноградов В.М., Смирнов A.B., 1994). Теоретически можно предположить, что антигипоксак-ты, оптимизируя дыхательный метаболизм клеток, могут оказать защитное действие при отёке легких, независимо от причин , его возникновения. В плане патогенеза остается недостаточно изученной связь между динамикой отека лёгких с состоянием легочных липидов и процессами ПОЛ в них. -существенно влияющих на мембранную проницаемость, сур-фактантную систему легких и рецепторную чувствительность клеток. Отсутствуют сведения о мембранотропной активности антигипоксантов. в том числе перспективной группы новых соединений этого типа, имеющей триазинопндольную структуру. Не изучена эффективность комбинированного применения антигипоксантов с некоторыми средствами, повышающими неспецифическую резистентность организма - глюкокортикоида-ми и адаптогенами.

Таким образом, проблема поиска новых путей фармакопрофилактики и лечения отека легких является весьма актуальной .

Целью настоящей работы было изучение фармакологической активности нового класса антигипоксантов и экспериментальное обоснование применения антигипоксантов и других средств для профилактики и лечения острого отека легких.

Основные задачи исследования:

1. Изучить связь спектра легочных липидов и показателей переписного окисления липидов с динамикой острого отёка легких различного генеза.

2. Определить антигипоксантную активность новых соединений триззиноиндольной структуры.

3. На моделях острого отёка легких различной этиологии провести отбор эффективных средств из веществ триазиноиндольной структурь и некоторых других химических соединений, обладающих антигипоксант-ными и антиоксидантными свойствами.

4. Исследовать мембранотропные влияния антигипоксантов в модельных системах in vitro, на липидный спектр легких и процессы пе-рекисного окисления липидов при остром отеке легких.

5. Установить.связь химической структуры нового класса антиги-поксантов - веществ триазиноиндольной структуры с их антигипоксант-ной активностью и фармакотерапевтической эффективностью при экпери-ментальном отеке лёгких.

6. Изучить защитное действие комбинации ряда антигипоксантов с адаптогенами и некоторыми другими фармакологическими средствами при различных по механизму воспроизведения формах отека лёгких.

Научная новизна: Впервые показана связь между спектром легочных нейтральных липидов. фосфолипидов. жирных кислот и показателей ПОЛ с процессами эдематозных изменений при адреналиновом и токсическом отеках легких.

С помощью корреляционного анализа выявлены наиболее значимые изменения биохимических параметров в патогенезе острого отёка легких различной этиологии: диацилглицеридов, триацилглицеридов, свободных жирных кислот, холестерина, лизофракции фосфолипидов - фос-фатидилхолина и фосфатидилэтаноламина, диеновых конъюгатов. оснований Шиффа, малонового диальдегида, восстановлрчного глутатиона. а-токоферола. позволяющие оценивать тяжесть патологического состояния и эффективность проводимой фармакотерапии острого отека легких.

Впервые доказана антигипоксантная активность ряда новых соединений триазиноиндольной структуры, установлена зависимость фармакологической активности от их химического строения.

Установлена высокая эффективность ряда соединений триазиноиндольной и других структур для коррекции острого гидродинамического и токсического, вызванного оксидами азота, отеков легких. Изучена зависимость профилактической эффективности отдельных антигипоксантов от их липидотропного действия.

Впервые показана связь химического строения в ряду триазиноин-дольных соединений с защитным действием при остром отеке лёгких. В частности, замена в ряду веществ триазиноиндольной структуры с {Ьаминозтильной группировкой N. Н-диэтиламинной группы на Н,11-диме-тильную или дополнительное введение в положение 8 бензольного кольца метальной группы, а также замещение в триазиноиндольном кольце этильного радикала на пропильный, обеспечивают соединению высокую защитную эффективность. Предложены перспективные направления синтеза препаратов этого ряда для целей фармакопрофилактики острого отека легких.

Впервые обнаружена профилактическая эффективность адаптогена -кидкого экстракта элеутерококка при острых отеках легких различного

генеза. Выявлена аддитивная способность элеутерококка и некоторых антигипоксантов повышать резистентность животных к эдемагенным воздействиям при моделировании острого отёка легких.

Получены экспериментальные данные для теоретического оОоснова-ния принципов фармакопрофилактики острого отёка легких у лиц. подверженных риску воздействия на них техногенных или иных факторов, могущих привести к отёку лёгких. /

Практическое значение работы:

1. Полученные экспериментальные результаты позволили выделить в качестве одного из важнейших патогенетических звеньев различных Форм острого отёка легких деструктивные изменения в их липидном спектре, коррекция которых имеет практическое значение при фармакотерапии.

2. Патохимические изменения липидов легких имеют обратимый характер. поддающийся фармакологической коррекции, что позволяет дать практические рекомендации по применению ряда средств антигипоксант-ного и адаптогенного действия для целей профилактики отека легких.

3. Соединения триазиноиндольной структуры (т-483, т-539. Т-539А, Т-546 и др.) обладают антигипоксантными свойствами, повышают выживаемость животных при остром отеке легких, что позволяет рекомендовать их для дальнейшего доклинического изучения.

4. На основании обнаруженных закономерностей связи химического строения триазиноиндольных соединений с биологической активностью предложены новые направления для синтеза более эффективных биологически активных веществ.

5. Профилактическая эффективность комбинации адаптогена элеутерококка с внедренным в лечебную практику натрия оксибутиратом или с находящимся на стадии клинических испытаний амтизолом позволяет рекомендовать указанные лекарственные сочетания для клинической апробации.

По материалам диссертации разработаны и внедрены 3 рационализаторские предложения и 3 заявки на изобретения:

Основные положения, выносимые на защиту: •

1. Развитие острого адреналинового и токсического, вызванной: оксидами азота, отёков лёгких сопровождается однонаправленными биохимическими изменениями липидов лёгочной ткани в виде увеличения диацилглицеридов. неэтерифицировакных ямрных кислот. лизофракциР фосфолипияов. снижения уровней триацилглицеридов, холестерина и основных фосфолипидов. Указанные изменения, наряду с выявленным»

признаками усиления пероксидации,;. квалифицируются как факторы повреждения.

2. Монопрофилактика . острого отека легких антигипоксантами (натрия оксибутират, амтизол., триазиноиндольные соединения Т-539. Т-546). адаптогеном элеутерококком или их комбинацией повышают резистентность животных к адреналину или оксидам азота, проявляющуюся в уменьшении эдематозных изменений легочной ткани и увеличении выживаемости животных. ; '

3. В механизмах защиты респираторной системы животных от эде-могенных воздействий больших доз адреналина или оксидов азота антигипоксантами важную роль играет их мембранопротективное действие, обусловленное нормализацией в лёгких показателей уровней липидов и кинетики ПОЛ.

Апробация работы. Результаты диссертационного исследования доложены и обсуждены на: VI Всесоюзном съезде фармакологов (Ташкент.

1988); Международном симпозиуме: Роль бронхиального и легочного кровообращения в обмене жидкости и белка в легком (Ленинград.

1989); Всесоюзном симпозиуме: Реконструкция, стабилизация и репарация биологических мембран (Благовещенск, 1989); Всесоюзной конференции: Оценка фармакологической активности химических соединений (Москва, 1989): Региональной конференции: Неспецифические заболевания органов дыхания у рабочих промышленных предприятий и населения Приморского края (Владивосток, 1990); Пленуме проблемной комиссии "Фармакологическая, коррекция гицоксических состояний" Научного совета по фармакологии и фармации при Президиуме АМН СССР (Волгоград.

1990). III научно-практической конференции: Сурфактантная и анти-сурфактантная системы легких (Ялта, 1991); Всесоюзной конференции: Вопросы экспериментальной и клинической пульмонологии (Самара.

1991); II Всесоюзной конференции: Фармакологическая коррекция ги-поксических состояний (Гродно, 1991); Пленуме Сибирского объединения фармакологов (Томск, 1991). IV научной конференции: Сурфактантная система лёгких в норме и патологии (Ялта. 1992); Международной конференции: Нейрофармакология на рубеже тысячелетий (С.-Петербург,

1992); III Национальном конгрессе по проблеме патологии органов дыхания (С.-Петербург, 1992); Конференции: Антигипоксаиты и актопро-текторы: итоги и перспективы (С.-Петербург, 1994); Юбилейной конференции: Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов (Томск. 1994); XII Всемирном конгрессе фармакологов (Монреаль. 1994); II Международном симпозиуме Японо-Российского ме-

дицинского фонда (Владивосток. 1994). Заседании Приморского отделения Всероссийского научного физиологического общества им. И.П.Павлова (Владивосток, 1994). Проблемной комиссии Владивостокского государственного медицинского института "Болезни органов дыхания и парагонимоз" (Владивосток, 1994, 1995); XVIII Тихоокеанском конгрессе (КНР, Беинг, 1995); III Международном симпозиуме Японо-Российского медицинского фонда (Осака. 1995).

В процессе выполнения диссертации автором получено: 2 авторских свидетельства на изобретения, одно положительное решение на заявку на изобретение и три удостоверения на'рационализаторские предложения.

Личное участие автора в выполнении работы. Автор настоящей диссертации- был инициатором, а также исполнителем основной части работы и руководителем совместных научных исследований. Часть биохимических исследований выполнена совместно с аспирантом 0. В.Весе-ловым и д.б.н. Н.Ф.Кушнеровой. Антигипоксантные свойства триазшо-индольных со динений были исследованы совместно с д.м.н. 0. Ю. Урюпо-вым. Гистологические исследования выполнены совместно с к.м.н . доцентом С.Г.Мельником. Математическое моделирование было осуществлено при консультативной помощи проф. В.М.Колдаева.

Публикации: По теме диссертации имеется 36 научных публикаций.

Структура и объем диссертации:

Диссертация объемом 231 страница машинописного текста состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования. 4 глав с изложением полученных результатов и их обсуждением, общего заключения, выводов, указателя литературы, содержащего 627 источников, включающего 398 отечественных и 229 иностранных публикаций. Работа иллюстрирована 19 таблицами, 37 рисунками и содержит 29 таблиц в приложении.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты были выполнены на 4180 беспородных лабораторных мышах-самцах массой 18-24 г и 554 белых беспороднах крысах-самцах массой 180-200 г. полученных из питомника лабораторных животных ст. Столбовое Московской области.

Модели экстремальных состояний.

Антигнлоксантние свойства триазиноиндольных соединений исследовали на модели гипобарической гипоксии,, которая считается наибо-

лее адекватным методом оценки антигипоксантной активности веществ (Бобков О.Г. , и др.. 1984: Пастушенков Л.В., 1989). В барокамере имитировали для мышей условия "подъема" на высоту 12000 м под контролем авиационного высотомера со скоростью ЮООм/мин с "площадкой" (плато) в 2 мин на "высоте" 5000 м (Бурбело А.Т.. 1991). Ряд соединений был изучен еще на 5 моделях гипоксий: 1) гипоксической гипоксии. создаваемой путем помещения мышей в эксикатор, содержащий 96% азота (модель "удушения"): 2) гемической гипоксии, вызываемой пропусканием через эксикатор с экспериментальными животными газовой смеси, содержащей 15 мг/л угарного газа (Урюпов О.Ю. и др.. 1984): 3) гемической гипоксии, вызываемой внутрибрюшинным введением нитрита натрия в дозе 200 мг/кг (Бобков Ю.Г. и др.. 1984); 4) гистоток-сическую гипоксию воспроизводили внутримышечным введением цианида калия в дозе 8 мг/кг массы мыши (Колчинская А.3..1979); 5) гипоксию. развивающуюся в остром периоде сверхвысокочастотного (СВЧ) электромагнитного излучения, моделировали на специальной установке, разработанной на кафедре биофизики ВГМУ, характеристики которой и условия эксперимента изложены в работе В.М.Колдаева (1987).

Острый отек легкие воспроизводили двумя способами: 1) гидродинамический - внутрибрюшинным введением подопытным животным адреналина гидрохлорида в дозе 15 мг/кг (Коган А.Х. и др., 1982): 2) токсический. отек легких моделировали в затравочной камере путем ингаляционного воздействия на респираторную систему экспериментальных животных оксидов азота в концентрации 4,3 мг/л и экспозиции in мин для мышей и 6 мин для крыс. Дозы ксенобиотиков и экспозиции были установлены опытным путем и соответствовали ЛД85. Для количественной оценки выраженности отёка лёгких и эффективности фармакопрофи-лактических воздействий определяли гравиметрические показатели: легочный коэффициент (ЛК) (Staub N. .1974) и сухой остаток (СО) (Жан-гелова М.Б., 1987). Указанные индексы объективно отражают состояние баланса жидкости в легких при их отеке (Сериков В.Б., 1986). Кроме того, фиксировали выживаемость мышей (ВМ) за сутки (в %) и вычисляли для изучаемых веществ коэффициент защиты (КЗ) по формуле, предложенной О.Ю.Урюповым (1991). Успешность моделирования отёка легких и результаты лечения контролировали гистологическими исследованиями легких.

Мембранопротективные свойства изучаемых веществ исследовали In vitro, используя следующие методики. Резистентность эритроцитов, позволяющую оценить интегральный показатель мембранной проницаемое-

з

ти (Зорина 0.M., Брачинска,я Ф.И., 1989), определяли методом кислотных эритрограмм (Гительзон И.И., Терсков И.А.. 1967), осмотическую стойкость эритроцитов исследовали по методу Н.В.Василевской (1955). Влияние антигипоксангов на динамику ПОЛ изучали на митохондриальных мембранах печени крыс, как это описано в работе Е.М.Крепса и др. (1987).

Биохимические показатели m situ определяли в динамике в легких и крови крыс после их забоя при адреналиновом отеке на 10 и 20 мин. а при токсическом, вызванном оксидами азота, на 60 и 120 мин от момента воздействия токсиканта. Экстракцию липидов из сыворотки крови и ткани легких осуществляли по методу J.Folcti et al. (195?) или Е.Blight. W.Dyer (1959). Приготовление силикагеля и пластинок для микротонкослойной хроматографии проводили, как описано у V.Sve-tachev, V.Vaskovsky (1972). Нейтральные липиды разделяли методом одномерной хроматографии в системе растворителей: гексан-диэтиловый эфир-ледяная уксусная кислота (90:10:1 об/об). Липиды на хроиатог-раммах обнаруживали в парах иода. Идентификацию пятен липидов осуществляли с помощью стандартных препаратов. Количественное содзриа-ние холестерина (ХС). свободных жирных кислот (СИК), триацилглице-ридов (ТАГ), диацилглицеридов (ДАГ), проводили бихроматным методом, разработанным J.S.Amenta (1964).

Для двумерной хроматографии фосфолипидных фракций применяли системы растворителей, описанные G. Rouser et al. (1967). Для определения суммарной фракции фосфолипидов использовали молибденовый реактив, приготовленный по методу V.Vaskovsky et al. (1975) и реагент на основе малахитового зеленого (Vaskovsky V.. Latlshev H.. 1975). Для идентификации холиносодержащих фракций фосфолипидов использовали реактив Драгендорфа. приготовленный по методу Wagner H. et al. (1961). Для идентификации фосфолипидных фракций использовались очищенные свидетели, любезно предоставленные кафедрой физико-химической биологии ДВГУ. а также специфические обнаружители. Липиды. содержащие аминогруппу, обнаруживали 5% раствором нингидри-на в ацетоне (Rouser G. et al., 1967). Фосфолипида. содержащие гид-роксильные группы, обнаруживали реактивом Шиффа (Кейто М.. 1975). После хроматографического разделения и идентификации липидов спект-рофотомэтрически измеряли их оптическую плотность при длине волны 350 км для нейтральных- и 815 им для фосфолипидов, результаты выражали соответственно в ж к общим нейтральным или общим фосфолипидам.

Состав жирных кислот анализировали методом газо-жидкостной

хроматографии на хроматографах "SiUrnadzu" (Япония) и "Хром" (ЧССР). Приготовление метиловых эфиров жирных кислот проводили по методу S.Gaskell, C.Brooks (1977) в модификации II. Ф. Кушнеровой и др. (1987). Идентификацию жирных кислот осуществляли по R. Ackman (1966) и G.Jamieson (1975). Содержание каждой кислоты выражали в относительных процентах и рассчитывали по Г. Берчфилл., Э.Сторрс (1964).

Показатели ПОЛ определяли в метакольных липидных экстрактах, полученных из крови и легочного гомогената по Е.Blight, W.Dyer (1959). Диеновые коньюгаты (ДК) измеряли спектрофотометрически (Стальная И.Д., 1977), основания Шиффа (ОШ) спектрофлуометрически, как это рекомендовано A.Tappel (1975). Содержание ДК и ОШ выражали в относительных единицах (ОЕ) оптической плотности на 1 мл объема крови, концентрацию в легких в нмоль/мг фосфолипидов. Водорастворимый показатель ПОЛ - малоновый диальдегид (МДА) определяли по методике обнаружения ТБК-активных продуктов (Владимиров Ю.А., Арча-ков А.И.. 1972). Содержание МДА в сыворотке крови выражали в ОЕ на 1 мл. а в легких в нмоль на 1 мг фосфолипидов. Антиокислительную активность оценивали по уровню а-токоферола и восстановленного глу-татиона (Г-SH). Токоферол в липидных экстрактах крови и легкого определяли на спектрофлуориметре при волне возбуждения 295 нм и спектре поглощения 320 нм, концентрацию выражали в мкг/мл или в мкг/мг фосфолипидов. Восстановленный Г-SH в крови и легком определяли по методике M.S.Moron et al. (1979).,. концентрацию выражали в мкг соответственно на'условные еттницы гемоглобина и мг белка.

В скрининговых исследованиях было изучено 35 веществ различной химической структуры, объединенных общим для всех соединений свойством - проявлять■антигипоксантную активность. В опытах на мышах, у которых моделировали гидродинамический или токсический острые оте..и легких, были- исследованы: препарат П-8 (этиловый эфир 4-карбоксифе-ниламида малоновой кислоты), синтезированный в ЛХФИ доцентом В. А. Печенюком; серия пиримидиновых оснований тиобарбитуровой кислоты (лабораторные шифры - ТБ-4, ТБ-6. ТБ-83, ТБ-94, ТБ-100, ТБ-108), синтезированных в физико-химическом институте им. А.В.Богатского АН УССР под руководством академика С. А. Андронати; диме^осфон (димети-ловый эфир 1,1-диметил-З-оксобутилфосфоновой кислоты), синтезированный в институте органической и физической химии им. А.Е.Арбузова Казанского филиала АН СССР под руководством академика Б.А.Арбузова и ведущего научного сотрудника А.О.Вузеля: амтизол (лабораторный шифр Р-98), представляющий собой циклическое производное гутимина

- Ю с-

(3,5-диамино-1-тиа-2.4, диазол): комплексный препарат имидазола и цинка (лабораторный шифр ЛСГ-532): производное 2-меркаптобензимида-зола - зтомерзол; серия из 23 соединений триазиноиндольной структуры (лабораторные ши^ры Т-396, Т-401. Т-407. Т-411, Т-425, Т-428, Т-451. Т-466, Т-468. Т-475, Т-483. Т-512. Т-513, Т-533, Т-535. Т-539. Т-539А, Т-541. Т-542, Т-54'4, Т-545, Т-546, Т-565). синтезированных в Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова старшим научным сотрудником А.Б.Томчиным; антикальциевые соединения - финоптин. ЭДТА. тетрациклин; адаптоген растительного происхождения - жидкий экстракт электерококка, полученный из корней и корневищ элеутерококка колючего Eleutherococcus senticosus- Maxim, сем. Аралиевые Araliaceae. В качестве образца для сравнения использовали производное ГОМК - натрия оксибутират, обладающий наркозным. . ноотропным и антигипоксантным действием, рекомендованный в качестве средства для лечения отека легких (Машковский М.Д., 1993).

Исследуемые соединения вводили экспериментальным животным внутрибрюшинко за 30 мин до моделирования острого отека легких в оптимальных антигипоксантных дозах, установленных экспериментально или на основе данных литературы. Вещества растворяли в воде для инъекций. Для плохо растворимых в воде соединений жидкую лекарственную форму получали добавлением "твина-80". Контрольным животным вводили изообьемные количества растворителя.

Для математической обработки результатов применяли методы вариационной статистики с использованием критерия Стьюдента и корре-. лционный анализ (Лакин Г.Ф., 1985). Для оценки значимости отдельных биохимических показателей в патогенезе отека легких была разработана специальная программа на языке BASIC, которую реализовали на ЭВМ IBM PC/XT. Программа включала составление матрицы дифференцированных откликов, вычисление коэффициентов корреляции и нахождение баллов, соответствующих максимальному коэффициенту корреляции, что служило оценочной характеристикой значимости того или иного показателя в патогенезе острого отека легких.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В качестве моделей для изучения антиэдемогенных свойств анти-гилоксантов были выбраны экспериментальный адреналиновый и токсический (оксиды азота) отёки лёгких.

Известно, что гиперкатехолемия является непременным компонен-

- И -

том стресса и играет исключительную роль в повышении гидродинамического давления в сосудах, кровоснабжающих лёгкие, в том числе при кардиогенном шоке и других ситуациях, приводящих к гидродинамичес-ому отёку лёгких (Лазарис Я.А.. Серебровская И.А., 1963; Гончарова В. А.. Сыромятникова Н. В.. 1977; Зильбер А.П., 1981: 1984; Дворецкий Д. П., Ткаченко Б. И.. 1987; Барабой В. А. и др.. 1992; Goldman G. et al..1992; Battle M.. Wilcox W.. 1993; Joshl R., Mannl A., 1993; Murphy J.. 1993).

Широкое применение нитросоединений в производстве красителей, удобрений, взрывчатых веществ, окислителей как компонента ракетных топлив. способность нитросоединений при определенных условиях превращаться в оксиды азота, гигантский выброс последних в атмосферу промышленными предприятиями и автомобильным транспортом, огромная токсикологическая опасность для здоровья и жизни людей стали причиной использования нами оксидов азота для моделирования острого токсического отека лёгких (Гембицкий Е.В. и др., 1974; Зверев М.И., Анестиади М.Я., 1981; ОпольН. И.. Добрянская к. В., 1986; Тиунов Л. А. и др.. 1991: 1994; Cohen С. étal., 1964; Waze G., 1988).

Поиск оптимальной дозы токсикантов для формирования острого отёка лёгких был подчинен двум основным критериям: 1) модель должна быть легко воспроизводимой и обладать надежной повторяемостью; 2) быть', достаточно "жесткой", чтобы на ней можно было проводить скрининговый отбор потенциальных противоотёчных средств, в том числе по тесту "выживаемость мышей" (ВМ). В экспериментальной токсикологии этим требованиям обычно удовлетворяют дозы ксенобиотиков, вызывающих.у животных 85% летальность - ЛД85 (Голиков С.Н. и др., 1986). Зависимость между дозой адреналина гидрохлорида или экспозицией оксидов азота, ВМ и гравиметрическими показателями, отражающими выраженность лёгочной гипергидратации представлена на рис. 1 и 2.

В экспериментах для моделирования гидродинамического отека легких была установлена доза адреналина гидрохлорида 15 мг/кг массы тела внутрибршинно, при которой ВМ составила 15%, ЛК 2,18 +0,37 и СО 12,89 ¿1.32, в то время как у интактных животных при 100% выживаемости, весовые показатели лёгочной гидратации ЛК и СО составляли соответственно 0,92 ± 0,06 и 22,32 + 0,41 (Р<0,001).

При токсическом отеке легких (концентрация оксидов азота во вдыхаемом воздухе 4.3 мг/л) для получения 15% выживаемости (ЛК 2,13 + 0,29; СО 11.66 + 0,59) была необходима экспозиция 10 мин. Развитие адреналинового и токсического отеков лёгких сопровождалось бес-

покойством экспериментальных животных, одышкой, цианозом мордочки, иногда выделением пенистой мокроты, судорогами в терминальной фаз« процесса. Условия описанных экспериментов и выраженность эдемоген-ных последствий соответствуют литературным данным (Коган А.Х. i др.. 1982; Бурбелло А.Т., 1991). После введения адреналина гибел! мышей наступала, в основном, в интервале 20-60 мин: в опытах с токсическим отеком легких - спустя 2-6 часов после извлечения мышей и: затравочной камеры, поэтому определение биохимических показателег состояния липидного спектра и ПОЛ осуществляли после забоя кивотны) на 10 и 20 мин при гидродинамическом и на 60 и 120 мин при токсическом отеках лёгких.

Биохимические изменения в легочных липидах при остром отеке легких Опыты по изучению липидного спектра легких и ПОЛ при остро! отеке были выполнены на 120 крысах-самцах при условиях моделирования адреналинового или токсического отеков лёгких, изложенных выше, Сведения об изменениях в составе нейтральных- и фосфолипидо1 легких в результате экспериментов представлены в табл. 1.

Как видно из указанной таблицы, при остром адреналиновом отёк< по сравнению с интактными животными наблюдались значительные количественные изменения в спектре нейтральных липидов, особенно выраженные на 20 мин эксперимента. Уровень в лёгких ДАГ на 10 и 20 мм достоверно увеличивался на 18,6 и 38,1%, соответственно этому, снижались концентрации ТАГ на 7.5 и 17,2%. К 20 мин развития гидродинамического отека легких также наблюдалось достоверное снижена уровней ХС на 23,8%, при этом регистрировалось увеличение в 2.1 раза СЖК (р<0,05).

При токсическом отёке легких изменения в спектре нейтральны: липидов носили еще более выраженный характер: через 60 и 120 ми после прекращения вдыхания оксидов азота уровень ДАГ увеличивался j лёгких соответственно на 61,9 и 66.0%, а ТАГ снижались на 29,3 i 30,5% (Р<0,001). При зто.,1 содержание ХС падало соответственно н. 27,7 и 46,5%, а уровень СЖК увеличивался в 2,5 раза.

Таким образом, в спектре нейтральных липидов выявлялись струк турные изменения, свидетельствующие об активации липолитически процессов в лёгких, характерных для гипоксических состояний (Сыро мятникова Н.В. и др.. 1987: Литвинко Н.В., Кисель М. А., 1991).

Как известно, при острой гипоксии наблюдается снижение синтез фосфолипидов (Hernán М. eí, al., 1968: Farldy Е., 1969; Genck L. e

(СО) жхшгоцго^э § ? ?

8 2

fààkàèièàààb (Wî) «эеттастижяд

(XV) АКЭНЁнффсС* !¡01tb0»V

и &

(00) коиио асяХэ § ? §

Я

(Ш) В'Шпуг «юивстижяз

(ХУ) ааийнффо» утенышу

Таблица 1

Состав фосфолиьидов и основных нейтральных липидов легких у интактных крыс и при остром адреналиновом' и токсическом отеках лёгких в разные периоды времени (В' % от суммы всех нейтральных или фосфолипидов)

Фракции Адреналиновый Токсический

нейтральных Интактные отек лёгких отек легких

липидов и животные

фосфолипидов 10 мин .20 мин 60 мин 120 мин

ДАГ 9,7+0,81 11,5+0,18* 13,4+0,53' 15,7+0,43* 16,1+0,36'

ТАГ 17,4+0,83 16,1+0,52 14,4+0,80* 12,3+0,44* 12,1+0,38*

ХС . 3,2+1,00 21.7+0,91 15,4+0,72* 14,6+0.85* 10,8+0,78'

ЗХС 16,1±0,60 15,8+0,84 10,8+1,20* 14,3+0.90 12,6_0.58'

СКК 6.5+0,35 7,2+0,20 13,6+0,81* 16,6+1,50* 16,4+1,25'

ЛФХ 4.3+0,21 4,7+0.12 5.6+0,30* 5,7+0.18* 5,6+0,26'

ЛФЭ 2,8+0.11 5.9+0,24* 4.9+0,27' 6,3+0,42* 8,8±0,63'

ФХ 39,5+0.89 35,2+0.32* 36,6+0.90* 31,6+0,75* 31,1±0,64'

ФЭА 18.3+0,33 16.5+0.42* 16,6+0,41* 16,1+0,51* 16,2±0,60'

СМ 10,8+0.71 12.6+0,74 11,0+0,87 11.6+0,30 10,1+0,74

ФИ 4.5+0,31 4,2+0,70 4,6+0.41 5,4+0,39 4,7+0,42

ФГ 5,2+0.27 5,1+0,19 5,4+0.22 4,8+0,77 6,1+0,27

ДФГ 3,9+0.14 3,8+0,32 3,4±0,31 3.7+0,48 3.7±0,50

ФС 6,1+0,52 7,0+0,90 6,4+0,36 8,4+0,90 7,3+0.64

ФК 4.6+0,30 5,0+0,27 5,5+0,42 6,4+0,30* 6.6+0,42'

Примечание: * - различие статистически достоверно по сравнегаи с ннтактными животными (Р<0,05).

Сокращения: ДАГ - диацилглицериды; ТАГ - триацилглицериды; ХС холестерин: эхе - эфиры холестерина; СЖК - свободные жирные кисло ты: ЛФХ - лизофосфатидилхолин; ЛФЭ - л^зофосфатидилэтаноламин; ФХ фосфатидилхолин; ФЭА - фосфатидилэтаноламин; СМ - сфингомиелин; Ф - Фосфатидилинозитол; ФГ - фосфатидилглицерин; ДФГ - дифосфатидилг лшерш: ФС - фосфатидилсерин: ФК - фосфатидная кислота.

al., 1972). В наших экспериментах при обеих формах отёка легких обнаруживалось снижение суммарных фосфолипидов (в % по отношению к общим липидам): при адреналиновом на 10 и 20 мин соответственно на 6,3+0.41 и 14,7 + 1.22%; при токсическом - на 60 и 120 мин на 16.7 ¿1,21 и 18,9 i 2,6% (Р<0,05). Отмечались также динамические изменения в количественном составе фосфолипидов. Так при адреналиновом отбке легких на 20 мин увеличивалась концентрация лизофосфа-тидилхолина (ЛФХ) на 30,2%, а на 10 и 20 мин соответственно в 2,1 и 1,7 раза отмечался рост лизофосфатидилэтаноламина (ЛФЭ). При этом незначительно, но статистически достоверно, снижались уровни фосфа-тидилхолина (ФХ) и фосфатидилэтаноламина (ФЭА). При токсическом отёке лёгких на 60 и 120 мин после затравки в атмосфере, содержащей оксиды азота, в лёгких наблюдалось увеличение лизофракций фосфолипидов: ЛФХ соответственно на 32,6 и 30,2%. а ЛФЭ в 2,2 и 3,1 раза (Р<0,001). Одновременно определялось снижение основных классов фосфолипидов - ФХ и ФЭА на 20,0 и 12,0% в разные временные периоды и увеличение на 39,0 и 43,5% концентрации фосфатидной кислоты (ФК).

Таким образом, наблюдался рост лизофосфолипвдов и метаболитов глицерофосфолипидов и снижение ФХ и ФЭА, при которых, как известно, происходит подавление окислительно-восстановительных процессов и разрушение биологических мембран (Вельтищев Ю.Е. и др.. 1987; Грибанов В. А.. 1991).

При адреналиновом отёке легких в те временные периоды, когда изучался жирнокислотный,состав липидов легких, в его спектре происходили незначительные изменения: на 10 мин индекс некасыщенности снижался с 1,271 до 0,998, а еще через 10 мин был практически идентичен показателю у интактных животных, составляя 1,222. Снижение индекса ненасыщенности происходило за счет относительного увеличения концентраций насыщенных пальмитиновой (на 17,0%) и октодекано-вой (на 23%) жирных кислот, а также снижения ненасыщенных жирных кислот: олеиновой, эйкозопентаеновой и докозогексаеновой, что вероятно, на определенных этапах отека легких носит приспособительный характер, так как известно, что с повышением содержания ненасыщенных жирных кислот текучесть и проницаемость липидного бислоя возрастают (Антонов В.Ф., 1982; Grazlanl Y., Llvne А., 1963). При токсическом отеке легких, в отличие от адреналинового, на 60 и 120 мин после воздействия на респираторную систему оксидов азота, индекс ненасыщенности имел тенденцию к увеличению преимущественно за счет роста линолевой жирной кислоты и составил соответственно 1.338 и

1,369, что в сочетании со ^снижением уровней фосфолипидов и холестерина, существенно влияющих на микровязкость мембран (Бородин Е.А. и др., 1981; КагаваЯ., 1985), свидетельствует о повышении альвео-ло-капиллярной проницаемости.

Динамика ПОЛ при остром отёке легких

Перекисное окисление липидов, • имея цепной, свободнорадикальный характер и, отличаясь многокомпонентной системой регуляции, может быть рассмотрено как в рамках нормального реагирования, сопровождающегося развитием полноценной адаптации, так и в патофизиологическом аспекте в качестве одного из этапов формирования, мембранной деструкции или развития непосредственно предшествующего ей состояния дизадаптации (Казначеев В.П., 1980; Бурлакова Е.Б.. Храпова Н.Г., 1985; Куликов В.Ю. и др., 1988; Владимиров Ю.А. и др., 1991). Стационарность процесса ПОЛ является одним из механизмов обновления фосфолипидов мембран, основой поддержания их структуры и- функции (Бурлакова Е.Б., Храпова Н.Г., 1985)..однако интенсификация пере-кисного окисления в мембранных липидах, нарушение соотношения между его продуктами с эндогенными антноксидантами . вызывает изменения свойств мембраносвязанных ферментов, рецепторной функции клетки и. следовательно, извращает ответ клетки или органа, в частности легкого, на воздействие внешних факторов (Бурлакова Е.Б. и др.. 1982; Сыромятникова Н.В. и др., 1987).

Сведения литературы о роли процессов ПОЛ в патогенезе отека легких немногочисленны и достаточно противоречивы: большинство считает инициацию ПОЛ и снижение антиокислительной активности одним из ведущих механизмов при развитии эдематозных реакций в легких (Соколовская ГЛ., 1974; Бурбелло А.Т., 1991; Кропотов A.B. и др., 1991; Тиунов Л.А. и др., 1991; 1994; Баринов В.А. и др., 1994), а использование антиоксидантов для коррекции этого синдрома патогенетически оправданным. Другие (Михайлов В.П. и др., 1992) полагают, что подавление процесса ПОЛ в легких при эдемогенных воздействиях, может увеличивать отек легких. Учитывая тесную функциональную связь ли-пидного спектра легочных мембран при экстремальных состояниях с процессами перекисного окисления в них, а также дискуссионный характер оценки роли пероксидации липидов в патогенезе отека легких, било предпринято изучение ряда показателей, отражающих состояние ПОЛ при остром отеке легких различного генеза.

На Ю мин от момента введения крысам адреналина в крови наблюдается тенденция в сторону снижения уровней ДК и ИДА, а на.20 мин

эти показатели достоверно снижались соответственно на 17.6 и 30,2%. Концентрации оснований Шиффа не претерпевали изменений. В легких в различные временные периоды уровень ДК был соответственно на 16,0 и 46,8% ниже, чем в контроле, однако МДА был увеличен соответственно на 33,1 и 90,3% (Р<0,05). При этом в крови наблюдалась тенденция к некоторому снижению показателей а-токоферола. а к 20 мин регистрировалось достоверное снижение Г-SH на 20,0%. В легких отмечалось снижение а-токоферола соответственно на 26.5 и 36.7%, а концентрация Г-SH после небольшого подъема на 10 мин, в дальнейшем приходила к норме.

При токсическом отеке лёгких в крови в различные периоды времени было выявлено накопление продуктов пероксидации: ДК на 22,5 и 34,8%, рост МДА в 2,5 и 2.1 раза. ОШ через 120 мин после затравки животных в атмосфере, содержащей оксиды азота, увеличились на 46.0% (Р<0,05). Однако в легких наблюдалось снижение уровней продуктов ПОЛ: ДК на 54,0 и 51.6%, МДА на 21,4 и 55,0%. Но параллельно этому отмечалось снижение в легких и а-токоферола. концентрация которого на 120 мин эксперимента была на 31,1% ниже, чем в контроле, а также Г-SH, снижение уровня которого составило в разное время 41.9 и 60.6% (Р<0. 05).

Таким образом, на начальных этапах острого адреналинового отека лёгких обнаружены биохимические признаки частичного ингибирова-ния ПОЛ на фоне снижения показателей антиокислительной защиты (некоторых классов липидов, Г-SH, а-токоферола). имеющие место при срочной адаптации к стрессорным воздействиям, когда свободноради-кальные процессы в тканях лёгких на фоне воздействия экзогенного адреналина оставались низкими (Фархутдинов P.P. и др., 1994). Зарегистрированное при адреналиновом отёке легких снижение индекса ке-насыщенности, вероятно, носит приспособительный характер, так как хорошо известно защитное действие ненасыщенных жирных кислот при гиперкатехолемии (Коган А.X. и др.. 1982).

Обнаруженные нами изменения липидов при остром адреналиновом отеке легких укладываются в ранее описанную при стрессе или гипоксии картину липидной триады в мембранах клеток (Коган А.X. и др.. 1979; МеерсонФ. 3.. Белкина Л. М., 1986). включающую активацию пере-кисного окисления липидов, липаз, фосфолипаз и возникающее при этом повреждение липйдного бислоя мембран.

Следующий временной этап стрессорной реакции - деструктивная фаза дизадаптащш, маркерами которой выступает накопление продуктов

пероксидации в крови и, тканях (Каган В.Е. и др.. 1979; Меер-сонФ. 3., 1986), отражен в литературе на примере некоторых форм отека легких (Михайлов В.П. и др., 1992).

При остром ток-ическом отеке легких признаки интенсификации ПОЛ в крови были значительно более выражены, нежели при адреналиновом отеке. Вероятно, это связано с иными временными периодами от момента воздействия на крыс токсиканта до момента определения биохимических показателей пероксидации липидов (60 и 120 мин), а также с проокислительными свойствами оксидов азота, с помощью которых моделировали отек легких (Соколовская Т.М., ' 1974; Соколовский В.В.. 1984; Шмелева Л.Т., 1984; Бурбелло А.Т.,1992; Тиунов и др., 1994; Cohen et al., 1964). Из литературы известна высокая устойчивость ткани легких к накоплению продуктов ПОЛ при гипоксии (Шафран и др., 1979; Могильницкая Л.В. и др., 1993), что подтверждают обнаруженные в ходе эксперимента низкие значения ДК или ТБК-активных продуктов в легочной ткани при адреналиновом и токсическом отёке. Однако значительные увеличения в крови первичных и вторичных продуктов ПОЛ, достоверное снижение к концу эксперимента с токсическим отеком в крови и легких Г-SH, а-токоферола, легочного холестерина и основных классов фосфолипидов свидетельствуют о сдвигах в динамике ПОЛ и антиокислительной системе в сторону патологии.

Таким образом, анализ изучения липидного спектра легких у крыс с острым гидродинамическим и токсическим отёками легких свидетельствовал об универсальности биохимических сдвигов, наблюдаемых в различных органах животных при экстремальных состояниях - стрессе, гипоксии, отеке мозга и др. (Каган В.Е. и др., 1979; 1981; Галенок В. А., ДчккерВ.Е., 1985; Самвелян В. М., и др., 1988; Абаджян М.М., 1990; Хватова Е.М. и др., 1991). В липидном составе легочной ткани при экспериментальном адреналиновом или, вызванном оксидами азота; токсическом отеках легких возникали однонаправленные изменения, характерные для реакций повреждения: увеличение доли ДАГ, СЖ, лизоф-ракций фосфолипидов. снижение ТАГ, ХС, ФХ, ФЭА, изменялись также величины коэффициентов, характеризующих микровязкость мембран.

Профилактическая эффективность антигипоксантов при остром отеке легких . В условиях гипоксии, нарастающей по мере развития отека легких. представлялось логичным апробировать группу препаратов, повышающих на тканевом уровне, резистентность организма к недостатку кислорода. Поскольку систематических исследований этого класса сое-

динений при отёке легких не проводилось, для скрининга было использовано 35 химических веществ различной структуры. Некоторые из препаратов - натрия оксибутират. финоптин были успешно изучены при гидродинамическом отёке в эксперименте и клинике (Машковский М.Д., 1993; Delz 0. et al., 1992; Beckum. D.. 1993; Karck M., Haverlch A.. 1993; SaJkov.D.. et al.. 1993). Другие (амтизол, ЛСГ-532. ряд пиримидиновых оснований тиобарбитуровой кислоты, димефосфон, это-мерзол. экстракт элеутерококка) оказывали положительное действие, предотвращая развитие гипоксии при экстремальных ситуациях в эксперименте: отёке мозга, инфаркте миокарда, холодовом стрессе, геми-ческой гипоксии, вызванной нитритным отравлением и проч. (Урю-пов О.Ю., Сумина Э.Н., 1984; 1985; Абрамченко В. В. и др., 1986; До-ровских В.А.. 1987; Румянцева Х.Н. и др., 1991; Урюпов О.Ю. и др., 1991; Денисенко П.П. и др., 1991; 1994; Александрович Е.В., 1993; Галушкина Л.Р.. Морозов Ю.В., 1993; Нефедоз В.П. и др., 1994; Смирнов A.B. и др., 1994). Третьи (23 соединения триазиноиндольной структуры) мало изучены и при остром отеке легких до нас никем не исследовались. Скрининг, проведенный на моделях острого адреналинового и токсического, вызванного оксидами азота, отеках легких должен был дать ответ на принципиальный вопрос: предотвращают ли анти-гипоксанты эдемогенные процессы в лёгких и увеличивают ли выживаемость мышей при данной патологии.

Опыты, выполненные на "жестких" моделях острого отека легких показали, что 80% изученных нетриазиноиндольных соединений с анти-гипоксантными свойствами оказывали положительное действие, увеличивая выживаемость мышей, и, практически все соединения, удлиняли в 2 и более раза "время до наступления гибели животных. При развитии "молниеносной" формы адреналинового отёка, по-видимому, решающа роль играет гидродинамическое давление в сосудах легких, подтверждением чего является наивысшая эффективность при данной патологии антикальциевого препарата финоптина (ВМ 90%), но который, как и другие антикальциевые препараты (ЭДТА, тетрациклин) не защищал при токсическом отёке легких. Испытанные на двух моделях отека легких димефосфон и этомерзол были абсолютно не эффективны. Однако, если условия моделирования были менее экстремальными, например, при гидродинамическом отёке легких, вызываемом адреналином в дозе 7.5 или 3,75 мг/кг, димефосфон достоверно уменьшал лёгочную гипергидратацию (Кропотов A.B. и др., 1989). Этомерзолу, относящемуся к актопротек-торам и реализующему свои фармакологические эффекты путем усиления

б

синтеза РНК и белков, в том числе энергопродуцирукмцих или антиокислительных ферментов (Бобков Ю.Г. и др., 1984; Смирнов Д.В., 1994; Кашина Е.А., 1995), по-видимому, для проявления позитивных свойств требуется достаточ :ое количество времени, которое отсутствует при молниеносных формах отёка легких, обсуждаемых в настоящей работе.

Производные пиримидина и тиобарбитуровой кислоты, несмотря на достоверное снижение ЛК при гидродинамическом отеке легких, только удлиняют в 2-4 раза время жизни животных, практически не изменяя суточную ВМ, а при токсическом отеке позитивные эффекты были получены лишь у соединений ТБ-94, ТБ-100 и ТБ-108. По аналогии с механизмом действия актопротекторов, возникает предположение, что для реализации терапевтических возможностей этой группы препаратов необходимы или более благоприятный патологический фон, либо достаточное время. Подтверждению этого предположения могут служить данные о высокой защитной эффективности курсового введения соединения ТБ-6 (изотиобарбамин) при хронических воздействиях на легкие Холодовым фактором (Доровских В.А.. 1987) или при развитии пневмоний нейро-дистрофического генеза (Кропотова И.В., Кропотов А. В., 1989).

Из группы нетриазиноиндольных антигипоксантов наиболее перспективными препаратами следует считать натрия оксибутират (КЗ 1,27-1,11), амтизол (КЗ 1,27-1,29) и производное малоновой кислоты П-8 (КЗ 1,30-1,20), которые не только существенно увеличивают выживаемость мышей при различных формах острого отека, но и нормализуют гравиметрические показатели, характеризующие эдематозные процессы в легких.

Из испытанных 23 соединений триазиноиндольной структуры, увеличивали ВМ (К3>1,0) при адреналиновом отёке легких 80% препаратов (табл. 2), а при токсическом - 100% (табл. 3). У подавляющего большинства этих веществ при гидродинамическом отеке легких обнаружена 'способность достоверно изменять или формировать благоприятные тенденции к нормализации ЛК и СО, но лишь немногие соединения при токсическом отеке легких достоьерно улучшают показатели, характеризующие выраженность легочной гидратации. С применением корреляционного анализа был прослежен характер связи в ряду соединений триазиноиндольной структуры по показателю КЗ, полученному при моделировании гипоксии в барокамере с аналогичным коэффициентом при других экстремальных состояниях, сопровождающихся гипоксией: адреналиновом и токсическом отеках, СВЧ-поражении. Были прокоррелированы также КЗ при отеке легких с показателями лёгочной гидратации.-'

Таблица 2

Выживаемость мышей (ВМ), коэффициент защиты (КЗ), показатели легочной гидратации - легочный коэффициент (ЛК). сухой остаток (СО) у интактных животных, при остром адреналиновом отеке легких и его коррекции антигипоксантами триазиноиндольной структуры

Препарат Доза мг/кг Кол-во выполн. опытов ВМ (%) КЗ (отн. ед.) Ж (отн.ед.) СО (отн. ед.)

Интактные мыши - 20 100 - 0, 92+0,06 22,32+0,41

Адреналин

(контроль I) 15 72 15 - 2, 13+0.25* 13,06+1.00'

адреналин + твин 80

(контроль II) 15 60 10 - г, 18+0, 32* 12,90+0,77*

Т-396 100 20 50 1,30 1, 39+0, 33 16.14+1,00*"

Т-401- 12.5 20 10 1,00 1. 62+0,14 15,30+0.93

Т-407 12.5 20 0 0,87 1,73+0,13 15,69+1,12

Т—411 12,5 28 15 1.00 2,13±0,25 16,06+2, 07

Т-425 100 20 30 1.18 1, 83+0,43 15,10+2,10

Т-428 25 20 30 1.18 2, 1510,34 14,10±1,42

Т-451 25 20 50 1.30 1,7^+0,17 17,24±0,95"

Т-466 - 50 24 25 1.14 1, 72+0.06 16,82+0, 74*"

Т-468 12.5 20. . 10 0.95 1.55+0,06 15.20+0, 70

Т-475 12,5 24 33 1.15 1.77+0,38 15,30+1,42

Т-483 12.5 20 50 1,30 1. 66+0.41 20.00+0,73**'

Т-512 ' 50 20 50 1,30 2 00+0.55 15.90+1.25

Т-513 50 20 50 1,30 1,95+0,30 15.90+1.33

Т-533 12,5 20 15 1,05 2 00+0.62 14.20+1.83

Т-535 12; 5 20 60 1,51 2 13+0.37 14.42+1,82

Т-539 12,5 20 60 . 1,51 1,64+0,15 17,90+0,49"*

Т-539А 12.5 . 20 60 1,39 1,42+0, 09 16,95+0.68* *

25 20 30 1,13 1,71+0,25 15,88+0,53* *

Т-541 12.5 20 30 1,18 2,22+0, 36 16,70+1,83

Т-542 12.5 20 50 1,30 1,83+0,48 15, 57+2,10

Т-544 12.5 го 70 1,54 1 87+0, 71 12, 52+0,40

Т-545 12.5 20 60 1,51 1, 91+0,76 15. 37+1,10

Т-546 6.25 20 30 1.18 1,62+0,20 14,14+0. 82

12.5 36 72.5 1,63 1,45+0,24 17,46+1,00"'

Т-565 ■ 6,25 20 30 1,18 1.62+0. 17,76+1,03*"

12.5 40. 50 . 1,30 1,84+0,14 16.62+0.64*"

25 20 50 1,30 1,69+0,10 16,66+0,65*"

Примечание:;' - различие статистически достоверно по сравнению с интактными животными (РС0.05); ** - различие статистически достоверно по сравнению с контролем I (Р<0,05); *" - различие статистически достоверно по сравнению с контролем II (Р<0,05).

Таблица 3

Выживаемость мышей (ВМ). коэффициент защиты {КЗ), показатели легочной гидратации - легочный коэффициент (ЛК), сухой остаток (СО) у интактных животных, при остром токсическом отеке легких и его коррекции антигипоксак гами триазиноиндольной структуры

Препарат Лоза мг/кг Кол-во выполн опытов

Интактные мыши - 20

Оксиды азота

(контроль I) - 120

Оксиды азота + твин

80 (контроль II) - 60

Т-396 100 20

Т-401 12.5 40.

Т-407 12.5 20

Т-411 12.5 40

Т-425 100 20

Т-428 25 20

Т-451 25 20

Т-466 50 20

Т-468 12.5 40

Т-475 12.5 20

Т-483 12.5 20

Т-512 50 20

Т-513 50 20

Т-533 12.5 20

Т-535 12.5 20

Т-539 12.5 20

Т-539А 6.25 20

ВМ (X)

.КЗ

(отн.ед.)

ЛК

(отн.ед.)

СО

(отн.ед.)

Т-541 Т-542

Т-544 Т- 545 Г-546

Т-565

12.5 40 25 20 12.5 20 6,25 20

12.5 25 12.5 12.5

40 20 20 20

6.25 20

12.5 25 12.5 25

60 20 20 20

100 16,6

5 30 20 30 30 30 20 .30. 70 20 30 70 30 30 20 20 60 ' 30 60 50 20 70 55 70 70 50 50 55 60 20 40

1

29 14 65 48 65

1.65 1,48 1.43 1,48 1.65 1,14 1,33

0.92+0.06 22,32+0,41 2.05+0.14* 12,32+0,24*

1,24 1.14 1,24 1.14 1.24 1.14 1.11 1.65 1.03 11 1.65 1,24 1.24 1.14 1.14 1.65 1.11 1.37

2.11+0.08' 1.82+0.28 2.20+0,10 1.43+0,24" 1.66+0.19"* 1.82+0.23 1.90+0.43 1.76+0,32 1.47±0,13"* 1,68±0,10" 1,28+0,12" 1.66+0.16"* 1,92+0,36 1.96+0,48 1.84+0,17 1,82+0,26 1,86+0,31 2,49+0,29 1,91+0.10 2,42+0,42 1,91+0,16 2,30±0,13 1.80+0,12 2,30+0,13 1,87+0,71 1,90+0,27 2.09+0,14 1,56+0.13*" 1,66+0,11'" 1,90+0,17 1,66+0,09*"

13.15+0,54*

13.85+0,94

12.12+0,57

15.69+1.12

14.14+0,64

13.96+0,72

13.45+0.56

14.20+0.65

13.89+0.83

12.12+0 43

16.54+0,72

14.28+0.51

13.50+0.54

13.14+0,47

13,79+0.43

15.26+0.59"*

15.05+0.69"*

11.13+0.40

13.57+0.30

10.20+0.96

13.57+0.30

10.05+0.32

12,50+0.59

10,05+0.96

12,52+0.50

12,90+0.86

12.92+0,54

16.23+1,12'"

14,35+0.52

12,63+0.72

12.37+0.28

Примечание: * - различие статистически достоверно по сравнению с интактными животными (Р<0,05); " - различие статистически достоверно по сравнению с контролем, I (Р<0,05); "* .-различие статистически достоверно по сравнению с контролем II (Р<0,05). .

В результате корреляционного анализа было установлено отсутствие достоверной связи между КЗ при использовании триазиноиндольных соединений для защиты мышей от "высотной" гипоксии в барокамере с этим показателем, полученным при фармакопрофилактике адреналинового или токсического отёков легких (табл. 4). При сравнении КЗ рядов "барркамера-адреналиновый отек лёгких" только шесть препаратов имели противоположное действие (Т-401; Т-407, Т-411; Т-468; Т-483; Т-533; ) и их исключение обеспечивало достоверность КК (+0.70). Сравнение КЗ рядов "барокамера-токсический отёк легких" установило разделение испытанных триазиноиндольных препаратов поровну: на имеющих однонаправленное и противоположное по знаку действие. Таким образом, ряд препаратов, оказывающих слабый защитный эффект при ги-поксической гипоксии, моделируемой, в барокамере, оказывает более выраженное протективное действие при остром отёке лёгких и наоборот. Отсюда следует вывод о том, что реализация защитных эффектов антигипоксантов при гипоксиях различного генеза имеет свои особенности. которые, по-видимому, определяются фармакодинамическим спектром конкретного препарата, помогающим или препятствующим достижению протективного действия при той или иной модели экстремального состояния. Вместе с тем. при корреляции рядов КЗ при адреналиновом или токсическом отёках легких и их коррекции с помощью триазиноиндольных соединений, установлено однонаправленное защитное действие изучаемых соединений, при котором КК для всего ряда препаратов составил +0.54 (Р<0,05). Однако не было обнаружено высокой корреляционной связи между КЗ при отёках лёгких различного генеза и ЛК и СО. Это свидетельствует о том, что триазиноиндольные соединения оказывают в ряде случаев защитное действие даже на фоне высокой легочной гидратации, что может быть объяснено их антигипоксантными эффектами на тканевом уровне.. -

Применяя прием попарного исключения коррелят, . удалось для небольших рядов соединений получить высоко достоверные результаты КК. Так. например, при адреналиновом отеке легких при корреляции в ряду животных, получавших натрия оксибутират, амтизол, ЛСГ-532 и финоп-тин. КК между показателями КЗ и ЛК = -0,95 (Р<0,05). Или. если при токсическом отеке легких исключить из ряда триазиноиндольных соединений пары коррелят, соответствующих препаратам Т-466, Т-401, Т-483 и Т-546, то у оставшихся пар соединений КК между КЗ и ЛК составил +0,5 (Р<0.05)^ который указывает, что выживаемость животных может быть достаточно высокой при фармакопрофилактике для данной группы

Таблица 4

Коэффициенты защиты (в отн. ед.) для различных веществ триази-ноиндольной структуры при пониженном давлении атмосферного воздуха в барокамере и при адреналиновом и токсическом отеках легких

Коэффициент защиты

Вещество

Барокамера Адреналиновый отек Токсический отйк

Т-396 1.55 1:30 1.24

Т-401 1.73 1,00 1.14

Т-407 1.50 0,87 1.24

Т-411 1.55 1.00 1.14

Т-425 1,40 1.18 1,24

Т-428 1,57 1,18 1.14

Т-451 1.50 1,30 1.11

Т-466 •1,39 1.14 1.65

Т-468 1,38 0,95 1.03

Т-475 1,67 1,15 1.11

Т-483 1,00 1,30 1.65

Т-512 1.17 1.30 1.24

Т-513 1,40 1.30 1.24

Т-533 1, 33 . 1.05 1.14

Т-535 1,20 , 1,51 1,14

Т-539 1,67 1.51 1.65

Т—541 1,64 1.18 1.14

Т-542 ■1,40 1.30 1,65 ,

Т-544 1,50 . 1.54 1.65

Т-545 1,39 1,51 1,48

Т-546 1,70 ч1.63 1.48

соединений даже при наличии в легких большого количества отечной жидкости.

Сравнение коррелят КЗ. полученных с использованием антигипок-сантов при остром адрена. иновом и токсическом отеках легких, с аналогичным показателем, установленным на других моделях гипоксий (СВЧ-облучение и др.),, чаще всего выявляет слабую отрицательную

корреляционную зависимость. Это свидетельствует об особенностях механизмов развития гипоксической гипоксии при различных патологических состояниях, определяющих протективную эффективность изученных соединений.

Связь химического строения с действием в ряду триазиноиндольных соединений Достаточная длина ряда препаратов триазиноиндольной структуры, изученного при "высотной гипоксии" в барокамере и при остром отеке легких различного генеза. позволяет установить связь между химическим' строением отдельных соединений и их защитным действием.

Из 23 соединений триазиноиндольной структуры, изученных нами при остром адреналиновом и токсическом, вызванном диоксидом азота, отеках легких, по ряду химических особенностей можно выделить четыре группы препаратов.

Наиболее широко в ряду представлены вещества триазиноиндольной структуры с р-аминоэтилтиольной группировкой (Т-407, Т-411, Т-451, Т-483, Т-512, Т-535, Т-541, Т-542, Т-544). Интересно, что в этой серии соединений имеются препараты 1.2,4-триазино[5,6-Ы-индоло (например Т-407, Т-451) и 1,2,4-триазино[6,5-Ь]-индоло (Т-411, Т-453), которые, для \ лаконичности мы будем называть соответственно триазино- и изотриазиноиндольными препаратами. На примере соединений Т-407 и Т-411. которые имеют соответственно триазино- и изотри-азиноиндольную структуру с р-Я. И-диэтиламино этилтиольным раджа-лом, видно, что препарата мало отличаются по своей эффективности при отеке легких. .Однако если N.И-диэтиламинную группировку заменить на N.И-дИметиламинную, то эффективность соединения повышается. При наличии группировки. Н(СН3)2, переход от триазиноиндольной структуры к изотриазиноиндольной. как это видно на примере соединений Т-541 и Т-483, повышает КЗ при токсическом, отеке легких с 1,11 до 1,65. Создается впечатление, что введение группы СН3 в положении 8 бензольного кольца индола повышает ВМ при адреналиновом отеке легких. Так у соединений Т-407 и Т-451 отсутствует метальная группа в положении 8 и на их фоне КЗ при адреналиновом отеке легких равняется соответственно 0,87 и 1.30. Введение группы СН3, как это видно на примере соединений Т-512 и Т-535, увеличивает КЗ соответственно до 1,30 и 1,51. Отдельный интерес представляют истинные основания, в частности, "соединение Т-544, которое являясь р-аминоэтилтиольной триазиноиндольной структурой, лишенной радикалов, оказывает высокое защитное действие как при адреналиновом (КЗ 1,54), так и при токси-

ческом отёке лёгких (КЗ 1.65). Присоединение к азоту индольного кольца метилкарбоксамидной группировки, как это видно при сравнении структур соединений Т-407 и Т-541, незначительно повышает КЗ при адреналиновом отёке легких с 0,87 до 1.18 и снижает при токсическом с 1,24 до 1,14. Однако в соответствии с вышесказанным, замена

H.И-диэтиламинной группы на N. Н-даметиламинну» в сочетании с присоединением к азоту индольного кольца метилкарбоксамидной группировки (соединение Т-542) повышает КЗ при адреналиновом отеке ' легких до

I.30, а при токсическом до 1,65. Таким образом, введение метилкарбоксамидной и диметиламинной группировок обеспечивают соединению универсальную эффективность как при адреналиновом, так и токсическом отеках легких.

Исходя из анализа химической структуры и фармакологической активности изученных соединений, представляется перспективным синтез и дальнейшее изучение структур триазино- и изотриазиноиндольного ряда, которые бы содержали следующие группировки: а) в триазиноин-дольном кольце (Ндаетиламинотиольную группировку или незамещённое основание, то есть р-аминоэтилтиольную группировку; б) одновременное введение в индольное кольцо к атому азота в положении 5 метилкарбоксамидной группировки; в) введение метальной группировки - репера в положение 8 бензольного кольца индола. : .

Вторая группа соединений отличается наличием в триазиноиндоль-ном кольце вместо р-аминоэтильной ч-аминопропильной структуры (Т-533, Т-539). Увеличение цепи на одно звено, (этильный радикал замещён на пропильный) усиливает ВМ как в барокамере, так и при отеках легких различной этиологии. На примере сравнения химических структур и эффективности препаратов Т-451 и Т-539 видно, что ука- • занные изменения в цепи увеличивают при адреналиновом отеке легких КЗ с 1,30 до 1,61, а при токсическом с 1,11 до 1,65. Однако повышения эффекта не наблюдается, ■ если, в качестве аминогруппы в соединении представлен пиперидин, как это наблюдается в случае соединения . Т-533. Перспективные направления синтеза препаратов триазинои;.доль-ного и изотриазиноиндольного ряда с р-аминоэтилтиольной и у-аминоп-ропилсульфидной группировками представлены на рис. 3.

К третьей группе препаратов относятся вещества, у которых в триазиноиндольное кольцо введены радикалы тиоуксусной кислоты (Б-СНгСООН) и ее производных (соединения Т-425, . Т-466. Т-545. Т-546). Из этих препаратов, имеющих в своей структуре амидные или сложноэфирные группировки, наибольший интерес представляет строение

соединения Т-546. которое будучи пиперидидом триазиноиндолуксусной кислоты, обладает универсальной и высокой защитной активностью, как при гипоксии в барокамере (КЗ 1.70), так и при адреналиновом и токсическом отеках легких, где КЗ соответственно равнялся 1,63 и 1.48. Перспективные направления синтеза препаратов триазиноиндольного и изотриазиноиндольного ряда с радикалами меркаптоуксусной кислоты и ее производных представлены на рис. 4.

К четвертой группе триазиноиндольных соединений, так называемых морфолинов, следует отнести препараты Т-428. Т-468, Т-475 и Т-513. В целом морфолиновая серия представляется малоперспективной, так как у всех исследованных соединений этого ряда была обнаружена низкая защитная эффективность и при адреналиновом, и при токсическом отеках легких. Однако у этих соединений прослеживается, замеченная ранее, закономерность в виде усиления защитного действия препарата после внесения в положение 8 бензольного кольца индола метальной группы. Анализ выживаемостей животных с острым отеком лёгких после введения им соединения Т-468. в котором отсутствует группа СН3, в сравнении с соединением Т-513, в котором эта группировка присутствует, показывает возрастание КЗ при адреналиновом отеке с 0,95 до 1,30, а при токсическом с 1,03 до 1.24, что подтверждает реперное значение метальной группы в положении 8 у обсуждаемых соединений. Присутствие группировки -ЗСН2СН2М в изотриазоин-дольной структуре несколько увеличивает выживаемость, как это видно в случаях применения соединения Т-475 в сравнении с Т-428.

Препараты Т-396 и'т-565. которые обладают умеренной защитной активностью при отёках лёгких различного генеза, по химическому строению отличаются от рядов триазиноиндольных соединений, свойства которых обсуждены выше. В связи с отсутствием достаточных сравнительных данных, судить о перспективах химической модификации данных веществ с целью повышения их фармакологической активности пока не представляется возможным.

Комбинированная ФэрмзкопроФилактика острого отёка легких

Определённый интерес представляет экспериментальная проверка гипотезы о возможности аддитивного защитного действия при комбинированной фармакопрофилактике острого отёка лёгких антигипоксантами в сочетании с препаратами, которые по литературным данным оказывали протективное действие при этом синдроме. Применительно к токсическому отёку легких, вызванному оксидами азота, были исследованы виа-луровая и аскорбиновая кислоты, оказывающие по данным литературы

- Яй -

чч^ n 6 п/5 4

-К;

3

J

сн.согш.

'N1

(-1ЧМе,)

СИ,СОМ!

Б Б

Возможные варианты замещения: в положении 3: а) и: =-БСНр^Ш,

б) IV = -8СИ2СН2СН2Ме1 в положении 8: К"=-СН, В положении 5 : К"' - -СНгСОШ,

а

•И' -г* сн,сорш

ва^со-гш,

(-Шс,)

Возможные варианты замещетш : в положении 3 : а) 1Г = -Б-СН^ОШс,

б) Я' =-5-С!11СОЫН, в) одновременное введение в положение Е репера СН, и металкарбоксамида в положение 5

Рис. 3. Перспективные направления синтеза препаратов ряда 1,2,4-триазино (5,6-Ы - индола для фармакотерапии острого отека легких - А) с р - аминоэшлтн-ольной н у-амлнопропилсульфидной группировками Б) с радикалом меркап-тоуксусной кислоты ее производными.

А

-яси/п^и,

-ЗСН.СИ.СН.РШ,

Б Б

Возможные варианты замещения: в положении 2: а) К.' = -БСН/луш, б) Я' =« -БСИ СИ СП^ В положении 8 : я" =-СН, б положении 5 : К'" = -СИ СОКИ,

"Г

-ЯСТГрЭ-М!, (-NN16,) N

СИ.СОМс,

Возможные варианты замещения: п положении 3: а) И' = -8-СН,С(ЖМе;

б) Я' =-8-СИ:СОМИ, в) одновременное введение п положение 8 репера СН, н метнлкарбоксамила в положение 5

Рио. 4. Перспективные напрапления синтеза препаратов ряда 1,2,<1-тр1Шино [б,5-Ь] - индола для фармакотерапии острого отека легких - А) с р - аминоэтилтч-ольной и у-аминопрспилсулъфндной группировками Б) с радикалом меркагт-тоуксусиоП кислоты ее производными.

удовлетворительное лечебное действие при этом и других патологических состояниях (Зверев М.Н.. Анестиади М.Я.. 1981; Александровский Ю. А. и др.. 1991; Бурбелло А.Т.. 1991). Указанные соединения вводили как самостоятельно, так и в сочетании с одним из антигипок-сантов (ГОМК. амтизол. Т-539 и Т-546). Было установлено, что виалу-ровая и аскорбиновая кислоты препятствуют гибели мышей с токсическим отеком (КЗ соответственно 1.27 и 1,18), но только виалуровая кислота при этом достоверно нормализует параметры легочной гидратации. Комбинированная терапия с использованием указанных препаратов в сочетании с антигипоксантами не выявила заметных преимуществ перед монотерапией острого токсического отека легких, проводимой каким-либо антигипоксантом.

В плане профилактики острого отека легких теоретически ■ представляется перспективным сочетанное использование адаптогенов (элеутерококк) и антигипоксантов. Трехнедельное пероральное введение мышам деалкоголизированного жидкого экстракта элеутерококка оказывает защитное действие при адреналиновом и токсическом острых отеках легких (КЗ соответственно 1,17 и 1.21). Литература, посвященная регулирующим эффектам элеутерококка, насчитывает более тысячи наименований. отметим только, что при курсовом применении этого препарата, в условиях стресса он активирует синтез РНК и ряда ферментов энергетического и пластического обмена (Дардымов И.В., Хасина Э.И., 1993) и эти свойства позволяют отнести его к группе актопротекто-ров. А наличие у экстракта также антигипоксантных и антиперекисных эффектов (Галотин В.Г. и др., 1986; Пастушенков Л.В., Лесиов-ская Е.Е., 1991; Галушкина Л.Р.. Морозов Ю.В., 1993) объясняют-получение аддитивных результатов при его комбинированном ' использовании с антигипоксантами у животных с острым отеком легких. Сочетания элеутерококка с натрия оксибутиратом. амтизолом, Т-539 или Т-546 при адреналиновом отеке легких (т^бл. 5) существенно увеличивают по сравнению с контролем не только КЗ, но и достоверно нормализуют ЛК и СО. Наилучшие результаты на этой модели были получень: при комбинации элеутерококка с амтизолом. Аддитивный эффект по тесту ВМ был получен и на модели острого токсического отёка легких, когда животным. длительно получавшим элеутерококк, за 30 мин до моделирования патологии вводили один из антигипоксантов: натрия оксибутират, амтизол, Т-539 или Т-546 (табл. 6). При этом показатели эдематозных явлений в легких при сочетании элеутерококка с натрия оксибутиратом или амтизолом значительно нормализовывались, однако в комбинации с

Таблица 5

Выживаемость мышей (ВМ). коэффициент защиты (КЗ), легочный коэффициент (ЛК), сухой остаток (СО) у интактных животных и мышей с острым адреналиновым отеком легких под влиянием элеутерококка и его сочетаний с натрия оксибутиратом, амтизолом, соединениями Т-539 или Т-546

Группа животных, препарат ВМ (в %) КЗ (отн. ед.) ЛК (отн.ед.) СО (отн. ед.)

Интактные 100 - 0,92 + 0,12 22,93 ± 1,89

Адреналин (контроль I) . 20 2,13 + 0,25* 12,80 ± 1,15*

Адреналин (контроль + ТВИН 80 II) 15 2.20 ± 0,21* 12,72 ± 0,86*

Адреналин рококк + элеуте- 40 , 1.17 1.66 + 0,24 15.33 ± 0,80

Адреналин + элеутерококк + ГОМК 50 •1.25 1,53 ± 0,13** 17.48 + 1.12"

Адреналин + элеутерококк + амтизол 70 , 1,42 1,23 ± 0,06" 19.25 ± 1,26"

Адреналин + элеутерококк + Т-539 60 1,33 1,42 ± 0.09*' 18,07 ± 1,32"

Адреналин + твин 80 + элеутерококк + Т-546 70 1,57 1,46 ± 0,19"' 17,94 + 1,44*"

Примечание: * - различие статистически достоверно по сравнению с интактными животными (Р<0,05); " - различие статистически достоверно по сравнению с контролем I (Р<0,05): *" - различие статистически достоверно по сравнению с контролем II (Р<0,05).

Таблица 6

Выживаемость мышей (ВМ). коэффициент^защиты (КЗ), лёгочный коэффициент (ЛК). сухой остаток (СО) у интактных животных и мышей с острым токсическим отёком лёгких, вызванным оксидами азота, под влиянием элеутерококка и его сочетаний с натрия оксибутиратом, ам-тизолом, соединениями Т-539 или Т-546

Группа животных, препарат ВМ (в X) КЗ (отн. ед.) ЛК (отн.ед.) СО (ОТН. ед.)

Интактные 100 - .. 0,92 ± 0,12 22,93 + 1.89

Оксиды азота (контроль I) 16 - 2,05 + 0,14* 12.32 + 0,54*

Оксиды азота + твин 80 (контроль II) 10 2,17 + 0,17* 12,05 + 0,76*

Оксиды азота + элеутерококк 40 1,21 1,89 ± 0,17 15,82 ± 0,65"

Оксиды азота + элеутерококк + ГОМК 60 1.38 1,41 + 0,13" 18,19 + 1,42"

Оксиды азота + элеутерококк + амтизол 80 1.55 1.48 + 0.15" 18,02 ± 0/83"

Оксиды азота + элеутерококк + Т-539 70 1.46 1.91 + 0.14 14,18 + О.Эб1

Оксиды азота + твин 80 + элеутерококк + Т-546 80 1,64 1,56 + 0,13" * 18.34 + 0,95"'

Примечание: • - различие статистически достоверно по сравнению с интактными животными (Р<0,05); " - различие статистически достоверно по сравнению с контролем I (Р<0. 05); ••• - различие статистически достоверно по сравнению с контролем II (Р<0,05).

Т-539 и Т-546 практически не отличались от тех, которые были получены на данной модели при монопрофилактике отёка лёгких указанными триазиноиндольными соединениями. Принимая во внимание крайне низкую токсичность элеутерококка, его широкое использование в валеологи-ческой практике в качестве средства, повышающего неспецифическую сопротивляемость организма, представляется перспективной фармакоса-нация элеутерококком лиц из групп риска развития острого отёка легких.

Предпосылкой для проверки эффективности комбинированной терапии острого отёка легких антигипоксантами с глюкокортикоидами послужило установление при этом состоянии деструктивных изменений в липидном спектре лёгких, причиной которых на определённом этапе патологии могло быть усиление фосфолипазной активности и процессов пероксидации. Следует отметить, что на "жёстких" моделях, как адреналинового, так и токсического отеков лёгких, парентеральное введение преднизолона в широком диапазоне доз (0,5; 5; 50 мг/кг) не выявило повышения КЗ или достоверных сдвигов в динамике эдематозных процессов в лёгких по сравнению с. контролем. На более "мягких" моделях монопрофилактика преднизолоном давала крайне слабый позитивный эффект при адреналиновом и отсутствие терапевтического эффекта при токсическом отеках легких. Однако сочетанное введение преднизолона с антигипоксантами, особенно с амтизолом при адреналиновом отёке лёгких и с натрия оксибутиратом при токсическом, следует расценивать как аддитивное. Заслуживает внимание и то обстоятельство, что в комбинации с преднизолоном антигипоксанты существенно уменьшают показатели лёгочной гидратации. Таким образом, глюкокортикоид-ные гормоны, широко рекомендуемые для коррекции эдематозных процессов в легких (Зайковский О.Я.. Ивченко В.Н.. 1987; Лютов В. В. и др., 1992). при их сочетании с натрия оксибутиратом. уже использующимся в практике для лечения отёка легких, или амтизолом вследствие их аддитивного защитного действия имеют хорошую клиническую перспективу.

Отсутствие достоверной корреляции между КЗ, полученными при гипоксии в барокамере и при отеках легких различного генеза под влиянием соединений триазиноиндольного ряда, позволило предположить присутствие в защитных механизмах антигипоксантов эффектов мембра-нотропной направленности. "Хаотропные" изменения в липидном спектре и снижение уровней факторов антиокислительной защиты в легких, обнаруженные на высоте развития острого отёка, косвенно указывают на

возможность усиления мембранной проницаемости. Упорядочение структурных компонентов легочных мембран и процессов ПОЛ в них могло внести позитивный вклад в механизмы защитных эффектов антигипоксан-тов.

Мембранопротективные.эффекты антигипоксантов

углубленному изучению мембранотропных свойств в модельных опытах на эритроцитах и митохондриях, а липотропных в экспериментах на животных с гидродинамическим и токсическим отеками были подвергнуты четыре соединения: натрия оксибутират, амтизол, Т-539 (растворимый в воде) и Т-546. Два первых препарата уже широко используются в клинике при различных гипоксических состояниях, а защищенные патентами триазиноиндольные соединения Т-539 и Т-546 представляют интерес в перспективном плане из-за своей низкой токсичности (Ш50 соответственно 560 мг/кг и 4500 мг/кг) и высокой эффективности при различных формах экспериментального отека легких.

На экспериментальной модели кислотной и осмотической резистентности эритроцитов удалось установить, что все четыре тестируемых соединения проявляют положительную мембранотропную активность, повышают устойчивость эритроцитов к повреждающему действию гемоли-тиков. Аналогичный результат был получен на митохондриальной модели неферментативного инициирования ПОЛ, когда предварительное внесение в суспензию митохондрий антигипоксантов предотвращало накопление в ней МДА. За исключением, амтизола,. сходные результаты для натрия ок-сибутирата и триазиноиндольных соединений были обнаружены при моделировании и ферментативного ПОЛ в митохондриях.

На,организменном уровне профилактическое введение антигипоксантов до индукции у крыс адреналинового или токсического, отёков легких приводило к рёзультатам, которые с биохимических позиций можно трактовать как мембраностабилизирующие. Однако эффекты различных препаратов (оксибутират натрия, амтизол, Т-539, Т-546) во времени и при различных типах отека легких имели ряд особенностей. Общим свойством всех четырех соединений, независимо■.от этиологии эдемогенного процесса в легких, была способность на высоте развития патологии снижать уровни лизоформ.фосфолипидов и увеличивать долю суммарных фосфолипидов в общих липидах лёгких. Как известно, снижение суммарных фосфолипидов и рост в их составе лизоформ связаны с высокой активностью фосфолипазы Аг и усилением ПОЛ, имеющих место при отеках лёгких или мозга (Самвелян В.М. и др.. 1988), а увеличение концентрации СЖК является прямым доказательством активации

мембранных фосфолипаз и повреждения (Ерин А.Н. и др.. 1986; Долгих В.Т.. 1991; Николаев А.Н. и др.. 1989). Установлена также связь между временем обнаружения морфологических изменений в легких с повышением лизофракций фосфолипидов и снижением уровней ФХ и ФЭА (До-ровских В.А.. 1987). Кроме того, существенное влияние на микровязкость мембран, а следовательно их проницаемость, оказывает холестерин (Бородин Е. А. и др.; 1981; Лопухин Ю.М. и др.. 1983; Demel R., Dekruyff В., 1976; Phillips М.. 1976), снижение уровня которого зарегистрировано нами при обоих типах изучаемых отеков легких (Кропо-тов А. В. и др., 1994). Антигипоксанты на высоте патологии снижали в липидном спектре концентрацию СЖК и увеличивали уровень общего холестерина.

Установлена синхронность изменения содержания фосфолипидов с антирадикальной направленностью (Паневская Г.Н. и др.. 1978; Ушка-лова В. Н.. Сторожок Н.М.. 1984; Егоров К. Е.. 1996). в частности, усиление ПОЛ можно связать с ослаблением ингибирующей эффективности ФХ при уменьшении его концентрации (Аристархова С.А. и др., 1979; Дудник Л.Б. и др.. 1980). В наших экспериментах с применением анти-гипоксантов отмечен достоверный рост ФЭА при адреналиновом и ФЭА и ФХ при токсическом отеке легких у крыс, что свидетельствует о наличии антирадикального резерва в легких животных, которым вводили антигипоксанты.

Весьма затруднительна оценка функциональных последствий изменений под влиянием антигипоксантов фосфолипидных фракций, представленных в минорных количествах. Это связано с большими дисперсиями полученных показателей, характерных для метода микротонкослойной хроматографии, особенно при работе с материалом, полученным у нелинейных животных. Особый интерес вызывает уровень карди'олипина (ДФГ). содержащего до 90% ненасыщенных жирных кислот и снижение которого при активации ПОЛ согласуется с низкой устойчивостью к гипоксии. уменьшением активности цитохромов а,+а3. сукциндегидрогена-зы, НАД-Нгоксидазы в митохондриях (Дудник Л.Б. и др.. 1980; Долгих В.Т., 1991). Достоверное увеличение ДФГ по сравнению с контролем обнаружено лишь под воздействием Т-539 при адреналиновом и Т-546 при токсическом отеке легких. Уровень ФИ. участвующего в активном транспорте ионов, обеспечении синтеза из арахидоновой кислоты эйкозаноидов (Попова В.А. и др., 1988). снижали натрия оксибути-рат и Т-546 при адреналиновом и натрия оксибутират и триазиноиндолы при токсическом отеке легких. Концентрацию ФС, влияющего на На*-за-

висимое фосфорилирование и К*-зависимое дефосфорилирование. достоверно снижал при адреналиновом отёке легких натрия оксибутират. но увеличивали триазиноиндольные соединения. А при токсическом отёке в различные временные периоды концентрацию ФС повышал амтизол. Некоторые изменения, наблюдаемые у иктактных животных под влиянием изученных нами антигипоксантов. трактуют как доказательство усиления метаболической активности лёгких (Веселков 0.В., 1995).

Адаптивные реакции антиокислительных систем в ответ на воздействие окислителей проявляются в мобилизации жирорастворимых ан-тиоксидантов и повышении их уровня в легких (Sevanlan А. et al., 1982). Главное место в механизмах антирадикальной резистентности отводится а-токоферолу. фосфолипидам и холестерину (Мелконян М.М. и др., 1989). Выше было показано нормализующее влияние ряда антигипоксантов на уровни холестерина и фосфолипидов. сниженных при остром отеке легких различного генеза. Антиокислительная активность а-токоферола зависит от его концентрации и по некоторым данным (Ушкалова В.Н.. Сторожок Н.М., 1984) не превышает 10% от антиокислительной активности липидов, но в сочетании с фосфолипидами обеспечивает существенную антирадикальную защиту липидов мембран. В обсуждаемых экспериментах, независимо от формы острого отека легких и времени биохимического тестирования, все изучегчые антигипоксанты повышали в легких содержание а-токоферола, которое было достоверно ниже у контрольных животных. В крови крыс с токсическим отеком легких аналогичные эффекты обнаружены на фоне натрия оксибутирата и амтизола, хотя тенденции к нормализации уровня а-токоферола проявляли и триазиноиндольные соединения. При адреналиновом отеке лёгких антигипоксанты не оказывали влияние на содержание а-токоферола в крови. •

Повреждение биомембран легких может происходить за счет образования перекисных группировок в жирнокислотных цепях фосфолипидов, в частности ДК, а также путем накопления МДА, маркером взаимодействия которого с протеинами выступают ОШ. При остром отёке леггих мы не обнаружили нарастания ДК в легких, напротив, отмечали достоверное снижение их уровня, а концентрация МДА возрастала лишь при адреналиновом отёке, снижаясь при токсическом. В литературе имеются сведения об органной специфичности антиокислительной защиты (Бобырев В.Н. и др., 1989), высокая активность которой на начальных этапах острого отека легких, по-видимому, обеспечивает низкий уровень продуктов пероксидации в легких. Однако снижение на высоте развития

патологии ХС, фосфолипидов, а-токоферола и Г-БН в органе, а-токофе-рола и Г-БН в крови, рост в крови при токсическом отеке легких продуктов радикальных процессов свидетельствуют о начинающемся срыве адаптивных резервов. При гиперадреналинемии увеличение стабильности мембран - их резистентности к ПОЛ. может зависеть от уменьшения в составе фосфолипидов полиненасыщенных жирных кислот, являющихся субстратом ПОЛ (Меерсон Ф.3. и др., 1981). что подтверждается защитным действием полиненасыщенных жирных кислот, вводимых извне крысам с острым адреналиновым отеком легких (Коган А.X. и др., 1982). В аналогичных условиях опыта в жирнокислотном спектре легких у крыс, которым вводили значительные дозы адреналина, нами было установлено снижение индекса ненасыщенности. Определенную роль в повышении резистентности животных могла играть мобилизация а-токоферола в плазму (Голиков П.П. и др., 1987), уровень которого в крови при адреналиновом отёке лёгких достоверно не снижался. Под влиянием антигипоксантов при адреналиновом отёке легких регистрировали достоверное снижение уровня МДА в легких, однако в крови он либо возрастал (натрия оксибутираг, амтизол), либо был близок к показателям физиологической нормы (триазиноиндольные соединения). При этом отмечались увеличения: индекса ненасыщенности, уровней ХС, фосфолипидов, тенденции к увеличению концентраций а-токоферола и Г-БН, которые свидетельствуют об изменениях под влиянием изучаемых препаратов приоритетов в механизмах антиокислительной защиты. В случае токсического отёка легких на высоте развития патологии все исследуемые антипшоксанты снижали в крови МДА. а в легких вызывали разнонаправленные изменения его уровня, который никогда не превышал физиологических показателей. • При этом индекс ненасыщенности лёгочных жирных кислот снижался, вероятно, вследствие их включения в антиокислительные реакции. На фоне натрия оксибутирата и амтизола в крови достоверно увеличивались концентрации а-токоферола и Г-БН. Триазиноиндольные соединения, существенно не влияя на уровни а-токоферола, снижали при этом Г~БН, что позволяет предположить значительную роль глутатионпероксидазных механизмов в системе антиперекисной защиты при токсическом отёке лёгких.

Оценивая в целом защитные эффекты антигипоксантов при осмотическом и кислотном гемолизе эритроцитов, в штохондриальной системе инициированного ПОЛ, их нормализующее влияние на спектр нейтральных- и фосфолипидов лёгких,' регулирующие воздействия на процессы ПОЛ при остром отёке легких различного генеза, можно предположить.

что в механизмах повышения резистентности при экстремальной патологии у изученных соединений значительное место принадлежит мембра-нотропным влияниям. Учитывая высокую положительную корреляционную связь между фосфолипидами легких и легочного лаважа. служащего для лабораторной оценки состояния сурфактантной системы (Палагина М. В.. 1988; Таганович А.Д.. 1994) нельзя исключить в механизмах антиэде-могенной активности антигипоксантов их нормализующего влияния на поверхностно-активные вещества легких.

При фармакологической регуляции сложных метаболических процессов трудно определить ведущие звенья, на которые воздействует исследуемое соединение. В связи с проводимой фармаксчрофилактикой острого отёка легких для выявления наиболее значимых показателей в патогенезе. был применен математический подход. Согласно методике, корреляционный анализ всех изучаемых биохимических и функциональных показателей (дифференциальных откликов) при развитии патологии и ее коррекции антигипоксантами (натрия оксибутират, амтизол, Т-539. Т-546), выраженных в процентах по сравнению с интактными животными, позволил придать оценочным характеристикам математическую, строгость. После вычисления при гидродинамическом или токсическом отеках легких коэффициентов корреляции (КК) между всеми показателями, в том числе ВМ, последним устанавливали баллы, соответствующий максимальным КК, которые служили количественной характеристикой значимости того или иного показателя в патогенезе. Показатель, получивший при этом наибольший балл, очевидно, играет ведущую роль среди исследованных величин в развитии отека легких.

Усредненная суммарная оценка в крови и в легком на той и •"'Другой моделях указывает на то, что из показателей ПОЛ наиболее, значимы в патогенезе отека изменения ДК. ОШ и МДА, а наименее значимо, изменение токоферола, т.е. эти показатели по убыванию значимости можно расположить в ряд: ч

ДК > ОШ > МДА > Глютатион > Токоферол

По суммарной усредненной оценке на обеих моделях нейтральные липиды по убыванию значимости в патогенезе отёка легкого можно расположить в ряд:

ДАГ > СЯК > ХС > ТАГ > ЭХС

Суммарная усредненная оценка показывает, что фосфолипиды и их отношения по убыванию степени значимости в патогенезе отёка легкого

можно расположить в ряд:

ЛФЭ > ФЭА > СМ > ФГ > ЛФХ > ФХ > ФС > ДФГ > да > ФГ

Жирные кислота по степени убывания значимости их изменений в патогенезе отека легкого по суммарной усредненной оценке можно расположить в ряд:

18:2 > 16:0 > 16:1 > 18:0 ) 20:6 > 18:3 ) 20:4 > 20:5 >18:1 > 14:0

Из результатов исследования следует также, что в развитии патогенеза острого отека легкого большую роль играет индекс ненасыщенности.

Таким образом, на основании оценочных баллов, вычисленных при коррекции гидродинамического и токсического отеков легких антигипоксантами (ГОМК, амтизол, Т-539, Т-546), удалось установить значимость ряда биохимических показателей в патогенезе отёка. Их уровень может служить количественным ориентиром оценки тяжести патологии и успешности проводимой фармакотерапии. Данная методика может быть использована в экспериментальной патологической физиологии и фармакологии, а антигипоксанты заслуживают внимание как перспективные средства для профилактики и лечения острого отека легких.

ВЫВОДЫ

1. При остром экспериментальном адреналиновом или токсическом, вызванном оксидами азота, отеках легких в липидном спектре легочной ткани происходят однонаправленные изменения, а именно, увеличение лизофракций фосфолипидов, диацилглицеридов, свободных жирных кислот, снижение уровней триацилглицеридов, холестерина, эфиров холестерина, суммарных фосфолипидов и их основных фракций - фосфатидил-холина и фосфатидилэтаноламина.

2. При остром экспериментальном отёке легких изменяется состояние антиокислительной системы и перекисного окисления липидов: в виде снижения уровней а-токоферола. восстановленного глутатиона, нарастания вторичных продуктов пероксидации в легких при адреналиновом и первичных и вторичных продуктов ПОЛ в крови при токсическом отеке легких.

3. Соединения триазиноиндольной структуры оказывают выраженное защитное действие при гипобарической гипоксии.

4. Большинство соединений триазиноиндольного ряда, а также ан-тигипоксанты иного химического строения (натрия оксибутират. амти-зол. П-8, ТБ-108, элеутерококк) повышают выживаемость животных с острым "адреналиновым или токсическим отеками легких.

5. При коррекции адреналинового и токсического отеков легких антигипоксантами отсутствует достоверная корреляционная связь между выживаемостью животных и показателями, отражающими степень эдема-тозной реакции в легких, что указывает на возможность реализации защитного действия изученных соединений на системном уровне.

6. Отсутствует положительная корреляционная связь при сравнении защитных эффектов, полученных в ряду триазиноиндольных соединений на модели гипоксической гипоксии в "барокамере" и при острых отеках легких, что свидетельствует о своеобразии механизмов развития и коррекции гипоксических состояний у сравниваемых патологий. Однако при коррекции этими же соединениями гидродинамического и токсического отеков легких регистрируется достоверная положительная корреляционная связь между их коэффициентами защиты, что. по-видимому. указывает на наличие патогенетического сходства различных Форм отека легких.

7. Сочетанное назначение элеутерококка с натрия оксибутиратом, амтизолом, Т-539 или Т-546 оказывает аддитивное действие, увеличивая выживаемость животных и снижая показатели легочной гидратации при остром адреналиновом и токсическом отеках легких.

7. Препараты антигипоксантного действия (натрия оксибутират, амтизол, триазиноиндольные соединения Т-539, Т-546) оказывают при остром отеке легких различного генеза нормализущее влияние на ' ли-пидный спектр легких и процессы перекисного окисления липидов.

9. Замена в ряду веществ триазиноиндольной структуры с р-ами-нозтильной группировкой N. И-диэтиламинной группы на N. И-диметиль-ную шш дополнительное введение в.положение 8 бензольного кольца метальной группы, а также замещение в триазиноиндольном кольце этильного радикала на пропильный, обеспечивают соединению визокую защитную эффективность при адреналиновом и токсическом, вызванном оксидами азота, отеках легких. У соединений с введенным в триазино-индольное кольцо радикалом тиоуксусной кислоты или ее производных, наибольшим защитным действием при гипоксии в барокамере и при остром отёке легких обладают пиперидн триазиноиндолуксусной кислоты.

10. На основании изучения связи между химическим строением и Фармакологической активностью разработаны перспективные направления

синтеза препаратов триазино- и изотриазинового ряда с ß-аминозтиль-ной и Y-аминопропилсульфидной группировками, а также с радикалами меркаптоуксусной кислоты и её производными для фармакотерапии острого отека легких.

11. Рекомендовать для клинической апробации в качестве профилактического и лечебного средства при отеках легких различного ге-неза комбинации элеутерококка с натрия оксибутиратом и элеутерококка с амтизолом.

• ' список работ. Опубликованных по теме диссертации

1. The effect of eleutherococcus on survlval and lmmunlty of mlcrowave-lrradlated mlce //New data on Eleutherococcus: Procee-dlngs of the Second International Simposium on Eleuterococcus. - M., 1984. Vladlvostok: Far East Sei. Center. USSR, 1986.- P. 222-228. (Co-authors: V.M.Koldayev).

2. Коррекция острых эффектов микроволнового облучения веществами антигипоксантного действия в эксперименте //Медико-социальные проблемы "Человек-океан": Тез. докл. научно-практической конф.. посвящ. 30-летию ВГМИ (1958-1988).- Владивосток. 1988.- С.301-302 (Соавторы: В.М.Колдаев, о.ю. Урюпов, А.Б.Томчин).

3. Пути фармакологической коррекции биоэффектов микроволнового облучения в эксперименте //Фармакология и научно-технический прогресс: Тез. докл. VI Всесоюзного съезда фармакологов,- Ташкент. 25-27 октября. 1988.- СЛ99-200 (Соавторы: В.М.Колдаев).

4. Мембраностабилизирующие свойства димефосфона при остром ад-реналовом'отеке легких у крыс. Влияние на реакции перекисного окисления липидов и липидный состав ткани мозга //Медицинские аспекты клеточных мембран.- Благовещенск. 1989.- СЛ12-118 (Соавторы: 0.В.Веселков. Н.Ф.Кушнерова. Д.Ю.Степанов).

5. Антигипоксанты в терапии экспериментального отека легких //Роль бронхиального и лёгочного кровообращения в обмене жидкости и белка в лёгком: Тез. докл. международн. симпозиума.- Ленинград. 17-19 июля. 1989.- С.47-48 (Соавторы: В.Н.Бутаков, Г.Н.Бездетко).

6. Фармакологическая коррекция производными пиримидина нейро-дистрофического процесса в легких у крыс //Роль бронхиального и легочного кровообращения в обмене жидкости и белка в легком: Тез. докл. международн. симпозиума.- Ленинград. 17-19 июля. 1989.-С. 48-49 (Соавторы Й.В.Кропотова).

7. Neurodystrophlc pulmonary process In rats farmacologlc cor-rectlon wlth pyrlmldlne-derlvatlve //Role of bronchial clrculatlon and pulmonary clrculatlon In lung liquid and protein exchange: Proc. of XXXI JUPS Congress. Satelllte Symposium, 1989, Leningrad. -P.41 (Co-authors: I. V.Kropotova).

8. Antyhypoxante In therapy of experlmental pulmonary edema //Role of bronchial clrculatlon and pulmonary clrculatlon In lung liquid and protein exchange: Proc. of XXXI JUPS Congress! Satelllte Symposium, 1989. Leningrad.- P.41-42 ( Co-authors: V.N.Butakov. G. N.Besdetko).

9. Мембраностабилизирущее действие димефосфона при остром адреналиновом отеке легких у крыс //Реконструция, стабилизация и репарация биологических мембран: Тез. симпозиальных докл. и стенд, сообщ. Всесоюзного симпозиума.- Благовещенск, 1989.- С.150 (Соавторы: 0. В. Веселков, Н.В.Кушнерова).

10. Оптимизация фармакотерапии острого отёка лёгких антигипок-сантными средствами //Оценка фармакологической активности химических соединений, принципы и подходы: Тез. докл. Всесоюзн. науч. КОНф. - М., ноябрь. 1989.- 4.2. - С. 170.

11. Оценка профилактической эффективности антигипоксантов при остром отеке легких в эксперименте //Неспецифлческие заболевания органов дыхания у рабочих промышленных предприятий и населения Приморского края: Сб. науч. трудов.- Владивосток, 1990.- С.53-57 (Соавторы: В.Н.Бутаков, Т.Н.Седых).

12. Новый подход в профилактике острого отека легких //Пульмонологическая помощь детям: Сб. науч. трудов под ред. проф. А.В.Гор-диец и А.И.Ицкозйч. - Владивосток: Из-во Дальневосточн. . ун-та,

1990.- С. 63-65. ..".'■•'

13. Фармакологическая профилактика острого токсического отека легких антигипоксантами //Матера Пленума Сибирского объединения фармакологов, поев. 100-летию кафедры фармакологии Томского мед. ин-та.- Томск, 1991.- С. 24-28 (Соавторы: В. П. Челомин)

14. Состояние легочных липидов при адреналовом отеке легких и его коррекции натрия оксибутиратом //Сурфактантная и антисурфак-тантная системы легких: Тез. докл. III научно-практич. конф.- Ялта,

1991,- С.59-60 (Соавторы: О.В.Веселков. Д.Ю.Степанов).

15. Влияние антигипоксантов на перекисное окисление липидов . при токсическом отеке легких //Фармакологическая коррекция гипокси-ческих состояний: Матер. II Всесоюзн. конф,-Гродно, 1991.-Ч.З.-

- 43 -

С. 432-433 (Соавторы: В.П.Челомин. И. В.Кропотова).

16. К механизму противоотечного действия натрия оксибутирата //Вопросы экспериментальной и клинической пульмонологии: Матер. Всесоюзн. конф. (октябрь 1991).- Самара. 1991,- С. 133-134 (Соавторы: Д.Ю.Степанов).

. 17. 3-(2-диметиламиноэтилтио)-1.2.4-триазино(5,6-Ь] индолил-5-ацетамид. защищающий от острого токсического отёка легких. Авторское свидетельство N 1674533 от 1.05.91. (Соавторы: А.Б.Томчин,

B.Н.Бутаков, 0. Ю. Урюпов и др.).

18. Пиперидид (1,2,4-триазино[5,6-Ь] индожл-3-тио) уксусной кислоты, обладающий противогипоксической активностью и защищающий от острого ' токсического отека легких. Авторское свидетельство N 1681504 от 1.06.91 (Соавторы: Т.Л.Жуков, Т.А.Кузнецова. А.Б.Томчин и др.).

19. 1.2,4-тиадизол-3,5 дисукцинаминовая кислота, защищающая от острого токсического отека лёгких. Заявка на изобретение N 4932694 от 12.02.91. Положительное решение от 11.09.91. (Соавторы: те же).

20. Влияние оксибутирата натрия на состояние легочных липидов при интоксикации окислами азота //Матер, иеждународн. конф. "Нейро-фармакология на рубеже двух тысячелетий", поев. 100-летию со дня рождения акад! АНН СССР С. В. Аничкова. - С-Петербург. 1992.- Ч. I. -

C.105 (Соавторы; О.В.Веселков).

21. Состояние легочных липидов при остром токсическом отеке легких и его коррекции антигипоксантами //Сурфактантная система легких в норме и патологии: Тез. IV научно-практич. конф. - Ялта, 1992.- С. 19-20 (Соавторы: О.В.Веселков).

22. Влияние антигипоксантов на состав легочных липидов при остром отеке легких //III национальный конгресс по болезням органов дыхания. - С-Петербург, 1992.- Пульмонология. Приложение N 4, 1992.-Публ.. 483 (Соавторы: 0.В.Веселков. И.В.Кропотова)..

23. Защитные эффекты амтизола при остром экспериментальном отёке легких //Антигипоксанты и актопротекторы: итоги и перспективы: Российская научная конф.. С-Петербург, 1-3 марта 1994. Материалы конф. - Вып. 1.- СПб. 1994,- С. 54.

24. Перспективы применения антигипоксантов для профилактики острого отека легких //Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. - Т. 7 (материалы юбилейной конф.). Под ред. акад. РАМН Е.Д.Гольдберга. - Томск. 1994,- С.96-97.

25. Фармакологическая коррекция острого отека легких //Сб. на-

уч. тр. ученых-медиков.- Владивосток. 1994.- Ч.I.- С.87-99. (Соавторы: О. В. Веселков, В.Н.Бутаков).

26. К механизму защитного действия антигипоксантов при остром отеке легких //Механизмы развития патологических процессов. Материалы объединенного пленума патофизиологов и фармакологов Сибири и Дальнего Востока, - Кемерово, 1994.- С. 14-17 (Соавторы: 0. В. Веселков).

27. Профилактика токсического отёка лёгких сочетанием антигипоксантов и элеутерококка //Механизмы развития патологических про1 цессов. Материалы объединенного пленума патофизиологов и фармакологов Сибири и Дальнего Востока.- Кемерово. 1994.- С.52-55 (Соавторы: В.Н.Бутаков). • л

28. Роль мембранотропных эффектов антигипоксантов в реализации эдематозных реакций //Успехи физиологических наук.- 1994.- Т.25. N 3.- С.60. (Соавторы: 0.В.Веселков. В.П.Челомин. В.Н.Бутаков).

28. Новые подходы коррекции адреналинового отека легких //Успехи физиологических наук,- 1994.- Т.25, N 4.- С. ИЗ. (Соавторы: Ю.С.Хотамченко, Д.Ю.Степанов. С.К.Круглов).

30. The effect of the preparations with sympathomlmentcactlvl-ty on the lipid peroxidation of mitochondrial membranes //The Il-nd International symposium of Japan-Russia medical exchage foundation and the near region. September 19-21, 1994. Vladivostok, Russia. -P. 61. (Co-authors: V. P.Chelomln. M. V. Zakhartsev).

31. The using of antlhypoxants. as a prospective drugs for correction of acute oedema of the lungs. Abstracts XIIth International Congress of Pharmacology //Can. J. Physiol. Pharmacol.- Vol.72 (suppl.l), 1994.- P.496. (Co-authors: V.P.Chelomln).

32. Pharmacological preventive of acute lung edema Induced ,by adrenallc and nitrogen oxydes In mice //Collection of abstracts, XVIII Paslflc Science Congress (June 5 - June 12. 1995, Beiding. China). Sessions 11. Public Health and Medical Sciences.- 1995.-P. 540. (Co-authors: Yu.S.Khotlmchenko).

33. Pharmacological prophilaxis of the hydrodynamic lung edema by the combination of antlhypoxants and prednlzolone or extract of Eleuterococcus sentlcosus //The third Intern, simp, of the Japan-Russia medical exchange foundation and the Japan-Russia medical collaborative organization on the methods and processes of Japan-Russia medical exchange.- Osaka. Japan, June 22-23, 1995.-P.22. (Co-authors: Yu.S.Khotlmchenko).

34. Биохимические изменения при остром отеке легких и его кор-юкции антигипоксантами триазиноиндольной структуры //Фундаментальна исследования как основа создания лекарственных средств: Сб. ■ез. 1-го Съезда Росс, научн. об-ва фармакологов. - Волгоград, 9-13 жтября, 1995.-М.': Б. И.. 1995.-С. 212. (Соавторы: В.Н.Ьутаков. I. В.'Веселков и др.).

35. Изменения липидном спектре легких при интоксикации окси-1ами азота или адреналином //Гигиена.и санитария.- 1995.- N 6.-

3-5. (Соавторы: Ю. А. Рахманин, Н.Ф.Кушнерова, 0. В. Веселков).

36. Перспективы химического синтеза препаратов триазиноиндоль-юй структуры для лечения острого отека легких //Здоровье населения 1альнего Востока. Сб. тр. региональной ассамблеи.- Владивосток: 1з-во "Уссури", 1996,- С.266. (Соавторы: Томчин А.Б., Урюпов О.Ю., Зутаков В.Н.).

Зак. № 2-п. Формат 60x84/1/16. Печать офсетная. Усл. п.л. 2.75. Тираж 100 экз. Подписано в печать 19.01.97г. Отпечатано в типографии ОАО "Дальприбор"