Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая активность солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот

Савохина Марина Владимировна ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СОЛЕЙ ЗАМЕЩЕННЫХ АКРИДИНИЛ-9-ТИОУКСУСНЫХ КИСЛОТ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Купавна-2005

Работа выполнена в Национальном фармацевтическом университете, г. Харьков.

Научный руководитель: - академик АНТК Украины, заслуженный деятель науки и техники Украины, доктор фармацевтических наук, профессор Б.А. САМУРА

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор И.В.Березовская

доктор медицинских наук, профессор В.А.Макаров

Ведущее учреждение: Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита диссертации состоится "_26 " апреля 2005 г. в 10.30 часов на заседании диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ, Московская обл., п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ: Московская обл., п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

Автореферат разослан « 24 » марта 2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук,

профессор Л.В.Корольченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Важной проблемой современной экспериментальной фармакологии является создание более эффективных и менее безопасных лекарственных препаратов для лечения воспалительных заболеваний, являющихся наиболее частым осложнением многих болезней. При проведении фармакотерапии воспалительного процесса ведущее место занимают нестероидные противовоспалительные лекарственные средства [Белоусов Ю.Б. и др., 1997; Бертрам Г.К. 1998; Машковский М.Д., 2000; Насонов Е.Л., 2003].

Однако, фармакотерапия воспалительных реакций нестероидными противовоспалительными препаратами сопровождается рядом нежелательных побочных эффектов (гастриты, желудочно-кишечные кровотечения, нефротокси-ческое и гепатотоксическое действие, аллергические реакции и др.), что ограничивает их использование в клинической практике [Дзяк Г.В.,1997; Горячев Д.В. и др., 2003; Насонов Е.Л., 2003].

В связи с этим не утрачивает актуальность задача создания и внедрения в практическую медицину новых лекарственных препаратов, которые обладали бы высокой противовоспалительной активностью при минимальной выраженности побочных эффектов [Викторов А.П., 1997; Вышковский Г.Л. 2004; Елагин Р.И., 2003; Oborilova A., Mayer J., Pospisil Z., Koristek Z., 2002].

В качестве источника потенциальных лекарств синтетического происхождения широкую известность имеют производные акридина. В последние годы уделяется внимание дальнейшему проведению целенаправленного синтеза новых биологически активных веществ в ряду замещенных акридина [Мартыновский А.А., 2001].

Выше изложенное послужило основанием для изучения фармакологической активности 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Национального фармацевтического университета (№ Государственной регистрации 01.01.0003124, шифр темы ВН 10.07.0030.02).

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является поиск потенциального противовоспалительного препарата среди солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие экспериментальные задачи:

1. Провести компьютерный прогноз видов фармакологической активности новых синтезированных солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

2. На основании компьютерного прогноза выполнить фармакологический скрининг 55-и новых солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот на адекватных унифицированных экспериментальных моделях.

3. Среди изученных солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот отобрать наиболее активные вещества для доклинического изучения.

4. Провести изучение специфической фармакологической активности наиболее активного соединения, обладающего противовоспалительной, анальгети-

ческой и диуретической активностью в соответствии с требованиями МЗ РФ и Украины.

Научная новизна. Впервые проведен компьютерный прогноз возможных видов фармакологической активности 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот. Сопоставительный анализ результатов компьютерного прогноза и исследований по изучению зависимости фармакологической активности от химической структуры позволил выявить субстанции, обладающие выраженной противовоспалительной и анальгетической активностями.

Установленные закономерности зависимости структура-активность солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот явилось основанием для проведения синтеза веществ с заданной фармакологической активностью.

Сравнительный анализ результатов фармакологического скрининга позволил отобрать для доклинического изучения пиперидиновую соль 4-метокси-6-метилакридинил-9-тиоуксусной кислоты (условное название «Метакрукс»), обладающую выраженным противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим и диуретическим действием. Экспериментально доказана перспективность проведения первой фазы клинических испытаний в качестве противовоспалительного препарата нестероидной структуры. Изучена специфическая активность и острая токсичность новой субстанции метакрукса.

Практическая значимость работы. Полученные результаты анализа зависимости структура-активность 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот используются при проведении научно-исследовательских работ на кафедрах фармакотерапии, фармакологии, биохимии и микробиологии Национального фармацевтического университета и кафедрах фармакологии, неорганической и органической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Результаты изучения специфической фармакологической активности ме-такрукса составили основу документов, необходимых для получения разрешения на проведение клинических испытаний метакрукса как потенциального препарата, эффективного при воспалительных заболеваниях различного генеза.

Апробация работы. Диссертационная работа доложена на совместном заседании кафедр фармакотерапии, фармакологии, биологии, микробиологии, физиологии, биохимии, патологической физиологии, лабораторной диагностики, качества, стандартизации и сертификации лекарств Национального фармацевтического университета. Отдельные фрагменты работы были представлены на научных конференциях, международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств, Белгород (2003), XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», указанных в списке опубликованных работ по теме диссертации.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения

полученных результатов компьютерного прогноза и экспериментальных исследований изучения зависимости фармакологической активности от химической структуры синтетических солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 109 отечественных и 121 иностранных источников. Работа иллюстрирована 39 таблицами и 32 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 1120 животных, в том числе 520 нелинейных белых мышах, 590 белых нелинейных крысах, 10 кроликах породы Шиншилла.

В соответствии с поставленными задачами в качестве объекта исследования взяты 55-и солей в ряду замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот (структура 1-У), впервые синтезированные на кафедре неорганической химии Запорожского государственного медицинского университета под руководством доктора фармацевтических наук, профессора Мартыновского А.А.

Первичный фармакологический скрининг проведен согласно методическим рекомендациям «Простой и специальный скрининг новых химических веществ» [Ф.П. Тринус, 1985, СВ. Нижний, 1985, Н.А.Лопаткин,1995] и «Элементы экспериментальной фармакологии» [Л.Н.Сернов, В.В.Гацура, 2000].

Первичная оценка фармакологической активности и острой токсичности солей замещенных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот проведена на белых мышах. Вещества вводили внутрибрюшинно в виде 3-5% водной суспензии, стабилизированной твином-80. Расчет ЛД50 проводили по методу Кёрбера [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000]. Исследование фармакологической активности изучаемых соединений проведено в опытах на белых крысах в дозе 0,05

Исследование нейротропной активности изучено по тесту взаимодействия с барбитуратами и аналептиками. Медикаментозный сон вызывали внутри-брюшинным введением субнаркотических доз этаминал-натрия (30 мг/кг). Судороги воспроизводили при подкожном введении коразола (80 мг/кг), кордиамина (300 мг/кг) и камфоры (1,2 г/кг) [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000].

Изучение нейролептической активности проведено на модели агрессивности поведения животных и вращающемся стержне [Раевский К.С., 1976].

Анальгетическую активность определяли на белых крысах с использованием модели «уксусных корчей». Корчи вызывали внутрибрюшинным введением 0,75% водного раствора уксусной кислоты [Ф.П. Тринус, 1985].

Противовоспалительную активность изучено на модели острого асептического отека, вызванного субплантарным введением в заднюю лапку крысы 0,1 мл 1% раствора каррагенина [Ф.П. Тринус, 1985].

Адъювантную болезнь вызывали субплантарным введением адъюванта Фрейнда (ПАФ), который является взвесью убитой при 100°С вакцины БЦЖ в вазелиновом масле [А.С. Саратиков, А.И. Венгеровский, Т.П. Прищеп, 1983].

Химическая структура солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот

Изучение диуретической активности проведено по методу Е.Б.Берхина. Креатинин в моче определяли по методу Фолина, а электролиты - методом пламенной фотометрии [Е.Б.Берхин, 1977].

Исследование антимикробной активности проведено на коллекции индикаторных штаммов микроорганизмов. Определение минимальной подавляющей концентрации (МПК) проводили методом двойных серийных разведений в жидкой питательной среде [Д. Панчини, Ф. Паренти, 1985].

Радиоиммунологическое определение простагландинов ПГЕ] проводили согласно инструкции на реагентах фирмы «Clinical Assay» (США). Экстракцию ПГЕ| из сыворотки проводили по методу [B.MJaffe et al., 1973].

Калликреин и калликреиноген в сыворотке крови определяли на фоне воспаления, вызванного субплантарным введением 1 мл 1% раствора каррагенина [Т.С. Пасхина, А.В. Кринская, 1974].

Все полученные экспериментальные данные обработаны общепринятыми методами вариационной статистики. Вычисления выполнены на персональном компьютере IBM-AT/PC с использованием программного обеспечения Windows-98, электронных таблиц Excel и пакета математической обработки Mathcad-5,0.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

На этапе скрининговых фармакологических исследований для оптимизации поиска высокоэффективных веществ проведен компьютерный прогноз вероятного спектра биологической активности солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

Полученные результаты явились основанием для проведения фармакологического скрининга 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

Острая токсичность калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (со-ед. 1-10) находится в интервале от 104 мг/кг до 445 мг/кг. Наиболее токсичным оказалось соединение 8, ЛД50 которого равно 104 мг/кг. Замена атома хлора (соед.8) на 2-метоксильный (соед.9) и 4-метоксильный (соед.10) заместители приводит к уменьшению острой токсичности. Введение катионной компоненты оказывает существенное влияние на понижение острой токсичности.

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 11-22) средняя смертельная доза была в пределах от 85 мг/кг до 448 мг/кг. Наиболее токсичным (ЛД50= 85 мг/кг), оказалось соединение 16, которое содержит во 2-м положении молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот атом водорода и в 6-м -нитрогруппу. Замена нитрогруппы (соед.16) на атом водорода (соед.11-15, 17, 18) приводит к снижению их токсичности.

Большинство замещенных пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33) относятся к малотоксичным веществам, ЛД50 их находится в диапазоне от 72 мг/кг до 368 мг/кг. Наименее токсичным оказалось соединение 29, = 368 мг/кг. Перемещение атома хлора с 4-го положения во 2-е (соед.25, 31) или его замена 2-метоксильный (соед.23), 2-этоксильный (соед.24), 4-метоксильный (соед.28) заместители и атом хлора (соед.25, 26) приводит к повышению токсичности. Наиболее токсичным оказалось соединение 27, содержащее во 2-м положении атом водорода и в 6-м - нитрогруппу.

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) наименее токсичным было соединение 41, которое содержит атом хлора в 4-м положении акридинового кольца. Замена атома хлора (соед.41) на 2-

этоксильный (соед.36, 42), 2-метоксильный (соед.35, 44) радикалы способствует повышению острой токсичности этих веществ.

Наименее токсичным среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.46-55) оказалось соединение 54, ЛД50 равна 342мг/кг, содержащее во 2-м положении молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот ме-токсильный радикал. Замена 2-метоксильного (соед.54) радикала на 2-этоксиль-ный (соед.47, 52), 4-метоксильный (соед.55) заместители способствует повышению острой токсичности этих веществ. Наиболее токсичным (ЛД50 = 86 мг/кг) было соединение 51, которое содержит 4-метоксильный заместитель.

В соответствии с классификацией К.К.Сидорова (1973), из 55-и соединений 52 относятся к малотоксичным и 3 являются умеренно токсичными веществами.

Исследование нейротропной активности показало, что среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.1-10) многие вещества проявили синергизм к депримирующему действию барбитуратов, увеличивая продолжительность наркотического сна на 23,7 - 54,8% (р<0,05). Выраженный агонисти-ческий эффект был выявлен у соединения 1, которое увеличивало продолжительность этаминал-натриевого сна у крыс на 54,8% (р<0,05). Замена атома водорода (соед.1) в молекуле акридинил-9-тиоуксусных кислот на атом хлора (со-ед.4-6, 8) приводит к снижению пролонгирующего действия барбитуратов.

Антагонизм к действию барбитуратов проявили соединения 2, 3, 7 и 10, которые уменьшали продолжительность наркотического сна на 22,9-32,4% (р<0,05). Наибольший пробуждающий эффект оказало соединение 3, содержащее во 2-м положении акридинового кольца оксиэтильный радикал. Данное соединение уменьшило продолжительность сна на 32,4% (р<0,05). Введение в 2-е положение акридинового кольца вместо этоксильного (соед.З) радикала 2-метоксильного (соед.2) или 4-метоксильного (соед.10) заместителей приводит к уменьшению аналептических свойств данных веществ.

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.11-22) выраженный депримирующий эффект проявило соединение 14, содержащее во 2-м положении акридинового кольца атом хлора, которое увеличивало продолжительность этаминал-натриевого сна у крыс на 34% (р<0,05). Перемещение атома хлора со 2-го (соед.14) в 3-е положение (соед.15) акридинового кольца приводит к увеличению наркотического сна на 56,1% (р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома хлора на 2-метокси- (соед.12) и 2-этокси- (соед.13) группы приводит к проявлению антагонизма к снотворному действию этаминал-натрия. Выраженный аналептический эффект оказало соединение 22, которое уменьшало продолжительность сна на 26,5% (р<0,05).

Перемещение атома хлора с 3-го положения в 4-ое приводит к усилению депримирующего действия этаминал-натрия. Так, под действием соединения 18, в дозе 4,4 мг/кг, наблюдали увеличение продолжительности барбитурового сна у крыс на 84,7% (р<0,01). Замена в 6-м положении акридинового кольца

атома водорода (соед.18) на нитрогруппу (соед.20) приводит к уменьшению продолжительности этаминал-натриевого сна на 23,4% (р<0,05).

Большинство пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (со-ед.23-33) потенцируют действие барбитуратов. Наибольший депримирующий эффект проявило соединение 31, которое увеличило продолжительность наркотического сна на 123,6% (р<0,01). Перемещение в акридиновом кольце атома хлора со 2-го положения в 4-е положение и замена в 6-м положении нитрогруп-пы (соед.31) на атом водорода (соед.29) приводит к уменьшению депримирую-щего эффекта.

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45), выраженный депримирующий эффект оказало соединение 37, которое увеличивало продолжительность барбитурового сна на 69,7% (р<0,05). Перемещение атома хлора со 2-го (соед.37) положения акридинового кольца в 3-е (со-ед.38) и 4-е (соед.41) приводит к уменьшению депримирующего эффекта. Антагонизм к действию барбитуратов проявили соединения 36, 40, 42 и 45 содержащие во 2-м положении 4-метоксигруппу, которые уменьшали длительность этаминал-натриевого сна в среднем на 20,6-30% (р<0,05).

Наибольший синергизм к действию барбитуратов среди диэтиламиноэта-нольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.46-55) оказало соединение 48, которое потенцировало действие этаминал-натрия на 118,1% (р<0,05). Перемещение атома хлора со 2-го положения акридинового кольца (соед.48) в 3-е (соед.49) приводит к уменьшению депримирующего эффекта на 51,3% (р<0,05). Замена атома водорода в 6-м положении акридинового фрагмента (со-ед.48) на нитрогруппу (соед.53) приводит к уменьшению депримирующей активности в 2,7 раза. Антагонизм к действию барбитуратов проявили соединения 47 и 55, которые уменьшали длительность сна на 18,8 и 20,2% соответственно.

Наибольшим депримирующим действием обладает соединение 31, которое превосходит аминазин, а аналептические свойства соединения 3 сопоставимы с действием кофеин-бензоата натрия.

Изучение противосудорожного действия показало, что среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) соединения 4-6, 8 и 9 проявили слабый защитный эффект. Противосудорожное действие оказало соединение 1, которое удлиняло латентный период наступления первых судорожных реакций на 35,8-76,8% (р<0,05), а также уменьшало количество погибших животных. Введение в 6-е положение нитрогруппы (соед.7) вместо атома водорода (соед.З) приводит к утрате противосудорожной активности.

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.П-22) противосудорожный эффект оказывали соединения 18 и 20, содержащие во 2-м и 4-м положениях акридинового кольца атом хлора, которые увеличивали латентный период наступления первых судорожных реакций на 40,8-59,9% (р<0,05) при взаимодействии с коразолом, на 50,8-60,5,4% (р<0,05) при взаимодействии с кордиамином и при взаимодействии с камфорой - на 20,4-25,7% (р<0,05), а также уменьшали тяжесть течения судорожных реакций.

В ряду пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33) наиболее выраженное противосудорожное действие проявило соединение 31. Под его влиянием отмечалось удлинение латентного периода наступления первых судорожных реакций на 28,9% (р<0,05) при взаимодействии с коразо-лом, на 82,3% (р<0,01) при взаимодействии с кордиамином и при взаимодействии камфорой - на 73,7% (р<0,01), а продолжительность судорожных реакций уменьшалась на 33,0%, 51,5% и 65,0% (р<0,05), соответственно, в опытах с ко-разолом, кордиамином и камфорой. Все опытные животные выжили.

Среди диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) противосудорожную активность проявили соединения 37, 38 и 43, которые увеличивали продолжительность латентного периода наступления судорог на 22,5% - 34,5% (р<0,05) при взаимодействии с коразолом, на 46,7% и 57,3% при взаимодействии с кордиамином и на 36,2% и 48,7% (р<0,05) при взаимодействии с камфорой, соответственно. Длительность судорог уменьшилась на 18,7% и 26,8 (р<0,05) при взаимодействии с коразолом, на 36,1% и 42,8% (р<0,05) при взаимодействии с кордиамином и на 33,8% и 45,4% (р<0,05) при взаимодействии с камфорой, соответственно. Замена в акридиновом кольце атома хлора (соед.37,38 и 43) на метоксильный (соед.35) и этоксильный (соед.36) радикалы приводит к утрате противосудорожной активности.

В ряду диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.46-55) выраженную противосудорожную активность проявила диэтила-миноэтанольная соль акридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.48), которая предупреждала наступление судорожных реакций при взаимодействии с кора-золом, кордиамином и камфорой. Все опытные животные выжили.

Таким образом, по противосудорожной активности соединение 48 не уступает действию мидокалма и фенобарбитала.

Изучение влияния на порог эмоциональных реакций у животных показало, что среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.З и 7) вызывали снижение порога писка на 17,6% и 18,5% (р<0,05) и уменьшение порога агрессивности на 23,6% и 24,5% (р<0,05), соответственно.

Депримирующие свойства проявили пиперидиновая соль 2-хлор-6-нитро-акридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.31) и 2-хлоракридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.48), которые вызывали повышение порога писка на 58,3% и 60,7% (р<0,05), а порог агрессивности увеличивали на 33,8% (р<0,05) и 33,7% (р<0,05), соответственно. Повышение порога агрессивности, вызываемое соединением 48, сопоставимо с действием аминазина.

Изучение нейролептического действия показало, что соединения 18 и 48 уменьшают время пребывания мышей на вращающемся стержне на 41,5% (р<0,05) и 45,1% (р<0,05), соответственно. Активность этих веществ сопоставима с действием аминазина. Соединения 3 и 7 проявили психостимулирующее действие, увеличивая продолжительность пребывания мышей на вращающемся стержне на 58,5% (р<0,05) и 54,9% (р<0,05), соответственно. Нейролептический эффект соединения 48 сопоставим с действием аминазина.

Исследование анальгетической активности калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.1-10) показало, что соединение 6 вызывало уменьшение количества уксусных корчей на 34% (р<0,05).

В ряду морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.11-22), наибольший анальгетический эффект оказывает соединение 18, которое в уменьшает количество уксусных корчей на 37,5% (р<0,05). Перемещение атома хлора с 4-го положения акридинового кольца (соед.18) во 2-е (соед.14) и 3-е (соед.15) приводит к уменьшению анальгетической активности (рис.1).

Рис. 1. Анальгетическая активность солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот, анальгина и диклофенака на модели "уксусных корчей" Примечание: *,**,-достоверность результатов при р<0,05 и р<0,01, соответственно,

Выраженный анальгетический эффект проявили пиперидиновые соли ак-ридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Наибольший анальгетический эффект был выявлен у соединения 28, которое уменьшало рефлекторную возбудимость на 50,1% (р<0,01). Перемещение в акридиновом кольце метоксигруппы с 4-го положения (соед.28) во 2-е (соед.23) или замена в 6-м положении атома водорода на нитрогруппу приводит к снижению анальгетических свойств.

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) выраженное анальгетическое действие оказывают соединения 34, 37, 38 и 43, которые уменьшают количество уксусных корчей у крыс на 27,8-43,5% (р<0,05). Наибольший анальгетический эффект оказало соединение 34, которое вызывало снижение порога болевой чувствительности у крыс на 43,5% (р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома водорода (со-

ед.34) на атом хлора (соед.37) или перемещение его в 3-е положение (соед.38) способствуют уменьшению анальгетических свойств исследованных веществ.

Среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.46-55) анальгетический эффект проявило соединение 48, которое вызывало снижение порога болевой чувствительности на 42,1% (р<0,05). Перемещение со 2-го положения акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 3-е (соед.49) или 4-е (соед.50) положения приводит к уменьшению анальгетических свойств. Введение во 2-е положение акридинового кольца метоксильного (соед.46), этоксильного (соед.47) заместителей и в 7-е - нитрогруппы приводит к утрате анальгетической активности.

Таким образом, по обезболивающему эффекту соединение 28, сопоставимо с действием анальгина и диклофенака-натрия.

На модели «горячей пластинки» среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.1-10) выраженное анальгетическое действие выявлено у соединения 6, которое снижало рефлекторную реакцию на тепловой раздражитель на 26,5% (р<0,05). Соединение 6 содержит атом хлора в 4-м положении акридинового кольца.

В ряду морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.И-22), наибольший анальгетический эффект оказывает соединение 18, которое через 90 минут снижало у животных рефлекторную реакцию ноцицепторов на тепловой раздражитель на 33,9% (р<0,05). Перемещение атома хлора с 4-го положения акридинового кольца (соед.18) во 2-е (соед.14) приводит к уменьшению анальгетической активности.

Более выраженный анальгетический эффект проявило большинство пипе-ридиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Так, соединения 23, 25-29 и 31 через 90 минут у крыс уменьшали ответную реакцию ноци-цепторов на тепловой раздражитель на 25,9-54,1% (р<0,05). Наибольший анальгетический эффект оказало соединение 28, которое уменьшало ответную реакцию на тепловой раздражитель на 54,1% (р<0,01).

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) выраженное анальгетическое действие оказывает соединение 34, которое в вызывало снижение порога болевой чувствительности ноцицепторов на 37,3% (р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома водорода (со-ед.34) на атом хлора (соед.37) или перемещение его в 3-е положение (соед.38) способствуют уменьшению анальгетических свойств.

Среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55), соединения 48, 49, 50 и 53 уменьшали ответную реакцию на тепловой раздражитель на 23,9-32,8% (р<0,05). Отчетливый анальгетический эффект оказало соединение 48, которое вызывало снижение порога болевой чувствительности ноцицепторов на 32,8% (р<0,05). Перемещение со 2-го положения акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 4-е (соед.50) положение приводит к уменьшению анальгетических свойств.

Исследование противовоспалительных свойств изучаемых соединений проведено на модели каррагенинового отека лапок у крыс. Среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) выраженный противовоспалительный эффект был выявлен у соединения 6, которое вызывало уменьшение развития экспериментального отека на 35,8% (р<0,05). Перемещение атома хлора (соед 6) с 4-го положения акридинового кольца в 3-е (соед.5) или во 2-е (соед.4) приводит к уменьшению антиэкссудативной активности (рис.2).

Рис. 2. Противовоспалительная активность солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот, анальгина и диклофенака-натрия на модели каррагени-нового отека

Примечание *,**,-достоверность результатов при р<0,05 и р<0,01, соответственно, по сравнению с контрольной группой

Более выраженный противовоспалительный эффект проявило большинство пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Наибольший антиэкссудативный эффект оказало соединение 28, которое уменьшало развитие отека вызванного флогогенным агентом на 50,8% (р<0,01). Перемещение в акридиновом кольце метоксигруппы с 4-го положения (соед.28) во 2-е положение (соед.23) или замена в 6-м положении метального радикала на нитрогруппу (соед.31) приводит к снижению антиэкссудативных свойств.

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) выраженное антиэкссудативное действие оказывают соединения 34,37,38 и

43, которые уменьшают развитие экссудативной реакции при каолиновом отеке на 32,6-43,2% (р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома хлора (соед.43) на атом водорода (соед.45), метоксигруппу (соед.37) или перемещение атома хлора в 3-е положение (соед.38) способствуют уменьшению ан-тиэкссудативных свойств. Введение во 2-е положение акридинового кольца ме-токсильного (соед.35), этоксильного (соед.36) заместителей приводит к утрате противовоспалительной активности.

Умеренную антиэкссудативную активность проявили диэтиламиноэта-нольные соли акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55). Выраженный ан-тиэкссудативный эффект оказало соединение 48, которое вызывало снижение отека лапок у крыс на 42,4% (р<0,05). Перемещение со 2-го положения акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 3-е (соед.49) или 4-е положение (соед.50) приводит к уменьшению противовоспалительных свойств. Введение во 2-е положение акридинового кольца метоксильного (соед.46), этоксильного (соед.47) радикалов и в 7-е - нитрогруппы приводит к утрате антиэкссудативных свойств. В ряду солей акридинил-9-тиоуксуных кислот величина противовоспалительного эффекта зависит как от природы заместителя в акридиновом кольце, так и катионной компоненты.

Изучение диуретической активности калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) показало, что соединения 1, 4-7 и 10 увеличивают диурез за 4 часа на 46,6 - 118,3% (р<0,01). Наибольший диуретический эффект оказывает соединение 4, которое увеличивает диурез за 4 часа на 118,3% (р<0,01). Перемещение атома хлора со 2-го положения (соед.4) в 3-е (соед.5) или 4-е положение (соед.6) акридинового кольца приводит к снижению диуретической активности с 118,3% до 69,8%. Замена во 2-м положении атома хлора (соед.4) на метокси - (соед.2) и этокси- (соед.З) групп приводит к утрате диуретической активности.

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 11-22) диуретический эффект вызывает соединение 18, которое увеличивает диурез на 96,2% (р<0,01)и по диуретической активности превосходит гипотиазид 27,2% . Перемещение атома хлора с 4-го положения акридинового кольца (соед. 18) во 2-е (соед. 14, 20) и 3-е положение (соед. 15) приводит к уменьшению диуретической активности. Введение во 2-е положение метокси- (соед. 12) и этокси-(соед.13) групп вместо атома хлора (соед. 14) приводит к проявлению антидиуретической активности.

Умеренную диуретическую активность проявили большинство пипериди-новых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Выраженный диуретический эффект оказывало соединение 31, которое вызывало увеличение диуреза на 69% (р<0,05). Замена в акридиновом кольце атома хлора на 2-этоксильный (соед.ЗО), 4-метоксильный (соед.ЗЗ) заместители приводит к снижению диуретической активности.

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 3445) соединение 43 увеличивает диурез на 86,3% (р<0,01). Введение в акридино-

вое кольцо вместо атома хлора (соед.43) 2-метоксильного (соед.44), 4-метоксильного (соед.45) радикалов, а в 7-е положение нитрогруппы приводит к утрате диуретической активности.

Среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55) соединение 48 способствовало увеличению диуреза за 4 часа на 95,2% (р<0,01). Перемещение со 2-го положения акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 3-е (соед.49) и 4-е положение (соед.50) приводит к снижению диуретической активности.

Таким образом, соединение 18 по диуретической активности превосходит гипотиазид, но уступает фуросемиду.

Исследование антибактериальной и фунгистатической активности калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) показало, что акриди-нил-9-тиоуксусная кислота обладает умеренной бактериостатической активностью. Наиболее выраженную антибактериальную активность проявило соединение 9, которое при МПК 125-250 мкг/мл подавляло рост золотистого стафилококка, кишечной палочки и брюшного тифа, дрожжеподобного грибка.

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.11-22) наибольший антимикробный эффект оказывает соединение 14, которое при минимальной подавляющей концентрации 62,5-125 мкг/мл подавляет рост золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, дизентерийной палочки, антракоида, вульгарного протея.

Среди пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33) выраженный антимикробный эффект оказывает соединение 25, содержащее во втором положении акридинового кольца атом хлора. Перемещение атома хлора со 2-го положения (соед. 15) акридинового фрагмента в 3-е (соед.26) и 4-е положение (соед.29) приводит к уменьшению антимикробной активности.

В ряду замещенных диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) антимикробная активность соединений 37 и 38, находится в пределах 62,5-250 мкг/кг. Перемещение атома хлора со 2-го -(соед.37) и 3-го положения (соед.38) в 4-е положение молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот приводит к уменьшению антимикробной активности.

Умеренную антимикробную активность проявили диэтиламиноэтанольные соли акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55). Соединение 48, содержащее во 2-м положении атом хлора, подавляет рост большинства штаммов. Перемещение атома хлора со 2-го -(соед.48) и 3-го положений (соед.49) в 4-е положение (соед.50) молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот приводит к уменьшению антимикробной активности.

Сопоставление результатов фармакологического скрининга выполненного на лабораторных животных и исследуемых штаммах микроорганизмов с данными компьютерного прогноза показало совпадение по большинству исследованных видов фармакологической активности: противовоспалительной, анальгетической, антиконвульсивной, нейролептической, аналептической, диуретической и антимикробной.

Однако, в процессе сопоставительного анализа по противовоспалительной активности выявлены соответствия не по всем прогнозируемым соединениям. Отклонения компьютерного прогноза от данных эксперимента свидетельствует о новизне синтезированных веществ в ряду акридинил-9-тиоуксус-ной кислоты, аналоги которых отсутствовали в банке данных, в связи с чем они могут быть приоритетными, а химическая структура и фармакологическая активность пополнили банк данных новыми дескрипторными центрами.

На основании проведенного фармакологического скрининга для доклинического изучения отобрано соединение 28 [пиперидиновая соль 4-метокси-6-метилакридинил-9-тиоуксусной кислоты, условное название «Метакрукс»], которое проявило противовоспалительную, анальгетическую и диуретическую активность. Углубленное изучение данного вещества на моделях каррагенино-вого (табл.1), каолинового, декстранового отеков показало, что метакрукс оказывает дозозависимый антиэкссудативный эффект.

Таблица 1.

Антиэкссудативная активность метакрукса, диклофенак-натрия и ацетилсали-

циловой кислоты на модели каррагенинового отека (п=7)

Препараты Доза мг/кг Исходный объем лапки, мл Угнетение от Ч«| ека лапки, мл рез

1 час 2 часа 3 часа 4 часа

Метакрукс 2,5 1,41±0,08 1,25±0,11 1,14±0,07 1,10±0,06 1,07±0,07

5,0 1,29±0,06 0,98±0,08' 0,91±0,09 0,86±0,08 0,76*0,06

7,5 1,37±0,10 0,91±0,09г 0,77±0,10* 0,72±0,07' 0,62±0,09

10,0 М8±0,09 0,96±0,07* 0,82±0,08* 0,78±0,09* 0,75±0,08

12,5 1,40±0,07 1,12±0,0б 0,91±0,06 0,87±0,10 0,78±0,11

Диклофенак-натрия 8,0 1,44±0,09 1,01±0,04 0,90±0,11 0,84±0,05 0,74±0,012

Ацетилсалициловая кислота 100,0 139±0,07 1,08±0,08 0,94±0,06* 0,86±0,07* 0,76±0,13

Примечание: «*» -р<0,05 по отношению к исходному объему лапки

На основании полученных данных была рассчитана эффективная терапевтическая доза, которая составила 8,5 мг/кг.

Антиэкссудативная активность метакрукса в дозе 8,5 мг/кг сопоставима с действием диклофенак-натрия и превышает таковую ацетилсалициловой кислоты. По широте терапевтического действия метакрукс превосходит ацетилсалициловую кислоту в 2,82 раза и диклофенак натрия в 2,67 раза.

Метакрукс при внутрижелудочном введении в дозе 8,5 мг/кг угнетает развитие каолинового отека (рис.3). Так, через 4 часа после введения каолина на 48,3% (р<0,01), диклофенак-натрия угнетает развитие каолинового отека на 44,1% (р<0,05), а ацетилсалициловая кислота- на 38,6% (р<0,05).

На модели формалинового отека максимальное ингибирование воспалительного процесса под действием метакрукса в дозе 8,5 мг/кг (47,8%; р<0,05) наблюдали через 4 часа после введения флогогенного агента.

На модели гистаминового отека метакрукс оказывал выраженное антиэкс-судативное действие на 2-м часу наблюдения. Ингибирующий эффект метакрукса превышал эффект диклофенак-натрия на 8,1% (р<0,05) и на 13,1% (р<0,05) ацетилсалициловую кислоту. Таким образом, метакрукс обладает ан-тиэкссудативным действием, не уступает по активности диклофенак-натрию и превосходит эффект ацетилсалициловой кислоты.

Анальгетическую активность метакрукса изучено на модели уксусных корчей. Наибольший анальгетический эффект (44,3%; р<0,01) наблюдали в дозе 8,5 мг/кг. Диклофенак-натрий (8 мг/кг) уменьшал количество уксусных корчей у крыс на 41,9% (р<0,01), а анальгин (50 мг/кг) - на 40,4% (р<0,01).

Рис. 3. Антиэкссудативная активность метакрукса, диклофенак-натрия и ацетилсалициловой кислоты на модели каолинового отека.

Примечание доверительный интервал при р=0,05

На модели «горячей пластинки» метакрукс в дозе 8,5 мг/кг вызывает повышение порога болевой чувствительности на термический раздражитель в среднем на 57,1%. Диклофенак-натрия и анальгин вызывают увеличение болевого порога на 45,5 и 42,8%, соответственно.

У крыс с молочной лихорадкой метакрукс при внутрижелудочном введении в дозе 8,5 мг/кг вызывает снижение температуры тела. Жаропонижающее действие его особенно отчетливо проявлялось через 4 часа и составило 2,1°С. Препарат сравнения диклофенак-натрия через 4 часа вызывал снижение температуры тела на 1,1 °С (рис.4).

На модели пирогеналовой лихорадки метакрукс в дозе 8,5 мг/кг вызывал максимальное снижение температуры на 1,9° С через 3 часа после введения. Полученные результаты свидетельствуют, что метакрукс оказывает значительное жаропонижающее действие.

Температура тела °С

Рис.4. Влияние диклофенак-натрия и метакрукса на температуру тела белых крыс с молочной лихорадкой Примечание: "*" - достоверность различий по отношению к контролю (р<0,05).

Исследование влияния метакрукса на динамику воспаления лапы у крыс, вызванного субплантарным введением адъюванта Фрейнда (ПАФ) показало, что максимальный отек пораженной лапки наблюдали на 5-е и 15-е сутки после введения ПАФ. Животные были менее подвижными, суставы их стали синюшными, отечными. У животных, получавших метакрукс, все эти явления были менее выражены (табл.2). Объем лапки у крыс после введения ПАФ, леченных метакруксом (8,5 мг/кг) через 7 суток уменьшился на 42,3% (р<0,05), на 14-е сутки - на 53,4% (р<0,05) - на 28-е сутки - на 58,1% (р<0,05).

Таблица 2

Антиэкссудативная активность метакрукса и диклофенак-натрия на модели адъювантной болезни (п=7)

Препараты Исходный Объем лапки (М±т) мл, через

объем лапки (М±ш)мл 7 суток 14 суток 28 суток

Опытная 1,44±0,08 1,20±0,09* 0,98±0,05* 0,88±0,08*

(2-я группа) 100,0 83,3 68,1 61,1

Метакрукс 1,48±0,07 0,85±0,06 * 0,69±0,07* 0,62±0,07*

в дозе 8,5 мг/кг 100,0 57,4 46,6 41,9

(3-я группа)

Диклофенак-натрия в дозе 8 мг/кг 1,50±0,05 100,0 0,94±0,07* 62,7 0,86±0,08* 59,7 0,73±0,06* 48,7

(4-я группа)

Примечание: «*» -р<0,05 по отношению к исходному о&ьему лапки.

На регистрируемых этапах наблюдения у животных опытной группы наблюдались грубые изменения гематологических показателей. Установлены существенные изменения лабораторных показателей крови, которые свидетельствуют о наличии воспалительного процесса.

Кроме того установлено, что на 14-й день опыта скорость оседания эритроцитов у животных с пораженной лапой увеличилась в 1,83 раза и на 28 день опыта - в 3,17 раза, также наблюдали значительный рост количества сегмен-тоядерных нейтрофилов и незначительное увеличение количества эозинофилов, что свидетельствует о наличии системного воспалительного процесса.

Время свертывания крови в контроле составило 72,6 ± 3,25 секунды. На 14-е и 28-е сутки наблюдалось укорочение времени свертывания крови в 1,36 и 1,49 раза, соответственно. Лечебное применение метакрукса привело к снижению процессов свертывания крови. Так на 14-й день время свертывания крови увеличилось на 34,6% (р<0,05), а на 28-й - на 56,1% (р<0,05).

Антипролиферативную активность изучали на модели "paper disk" у белых крыс. Метакрукс вводили внутрижелудочно в дозе 8,5 мг/кг. Установлено, что метакрукс достоверно подавляет образование грануляционно-фиброзной ткани на 40,9% (р<0,05) и превосходит диклофенак-натрия на 29,4%.

Учитывая патогенетическую роль ПГЕ| в развитии реакций воспалительного процесса, было изучено влияние метакрукса на уровень с помощью радиоиммунологического метода.

Метакрукс вводили внутрижелудочно однократно в дозе которая

равна 8,5 мг/кг. Установлено, что содержание простагландинов в контрольной группе составило 7,24±0,28 нмоль/л, а уровень простагландинов в плазме крови крыс с каррагениновым отеком достоверно повышался на 55,7%. Метакрукс проявил выраженное, угнетающее влияние на образование снижая его

содержание в плазме крови на 27,1% (р<0,05) по сравнению с интактными животными (табл.3). Под действием диклофенака-натрия количество ПГЕ] в плазме крови уменьшилось на 18,6% (р<0,05), а под влиянием ацетилсалициловой кислоты содержание снизилось на 26 % (р<0,05).

Исследование влияния метакрукса в дозе 8,5 мг/кг на активность каллик-реин-кининовой системы показало, что в отличие от ацетилсалициловой кислоты метакрукс предотвращает расходование компонентов этой системы. Уменьшение скорости реакции превращения калликреиногена в калликреин является фактором, уменьшающим образование медиатора воспаления брадикинина.

Установлено, что метакрукс в дозах 5, 7,5 и 10 мг/кг увеличивает мочеотделение за 2 часа на 29,6%, 68,3% и 51,4 (р<0,05), а за 4 часа - на 31,3%, 103,1% и 78,6% (р<0,05). На основании полученных данных была рассчитана эффективная терапевтическая доза, которая равна 8,5 мг/кг массы тела.

Метакрукс при однократном введении повышает суточное потребление воды на 32,9% (р<0,05), усиливает клубочковую фильтрацию почек на 20,9% (р<0,05) и повышает спонтанный диурез 104,4% (р<0,01), а также увеличивает экскрецию натрия на 49,3% (р<0,05), калия - на 5,2% (р>0,05).

Таблица 3.

Влияние метакрукса, диклофенак-натрия и ацетилсалициловой кислоты на содержание в плазме крови крыс с каррагениновым отекам (п=10)

Условия опыта Доза, мг/кг Содержание ПГЕ1 в плазме крови

нмоль/л % к контролю

Контроль (интактные) - 7,24±0,28 100

Каррагениновый отек (опыт) - 11,27±0,23' 155,7

Метакрукс 8,5 5,28±0,18*+ 72,9

Диклофенак-натрия 8,0 5,89±0,19*+ 81,4

Ацетилсалициловая кислота 100,0 5,36±0,24*+ 74,0

Примечание. - р<0,01 по отношению к контролю; + - р <0,01 по отношению к опыту.

Преимуществом метакрукса является то, что он выводит из организма калий меньше по сравнению с гипотиазидом и фуросемидом. Ежедневное введение метакрукса в течение 14 дней не вызвало у крыс изменений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

Изучено влияние метакрукса на слизистую желудка и кишечника в условиях моделирования язв желудочно-кишечного тракта у крыс, вызванных этиловым спиртом. В отличие от салициловой кислоты, которая потенцирует ульце-рогенное действие этилового спирта метакрукс не вызывает такого эффекта.

Установлено, что метакрукс не оказывает местнораздражающего действия на слизистую конъюнктивы глаз у кроликов породы Шиншилла.

Таким образом метакрукс обладает выраженным противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим и диуретическим действием. Его противовоспалительный эффект, по-видимому связан с ингибированием биосинтеза простагландинов ПГЕ] и активности калликреин-кининовой системы.

ВЫВОДЫ

1. В ряду исследованных 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот методом предварительного компьютерного анализа и скрининговых фармакологических исследований выявлены органические соединения, обладающие противовоспалительной, анальгетической, диуретической, депри-мирующей, антиконвульсивной и антимикробной активностями, а также установлены элементы зависимости «структура-активность» для этих видов фармакологического действия.

2. Соединение 48 (диэтиламиноэтанольная соль 2-хлоракридинил-9-тиоуксус-ной кислоты), обладает выраженным депримирующим действием, увеличи-

вает продолжительность действия этаминал-натрия на 118,1%, противосудо-рожный эффект не уступает активности мидокалма, а нейролептические свойства сопоставимы с аминазином.

3. Соединение 4 (калиевая соль 2-хлоракридинил-9-тиоуксусной кислоты) превосходит по диуретическому эффекту гипотиазид и уступает активности фу-росемида.

4. Соединение 14 (морфолиновая соль 2-хлоракридинил-9-тиоуксуной кислоты) оказывает антимикробный эффект при МПД 62,5-125 мкг/мл подавляет рост золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, дизентерийной палочки, антракоида, вульгарного протея.

5. Соединение 28 (пиперидиновая соль 4-метокси-6-метилакридинил-9-тиоук-сусной кислоты; условное название «Метакрукс»), обладает выраженным противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим, натрийуре-тическим действием, а также улучшает фильтрационную функцию почек. По выраженности этих эффектов метакрукс не уступает препаратам сравнения диклофенак-натрию и ацетилсалициловой кислоте.

6. Метакрукс уменьшает уровень простагландинов в плазме крови у крыс и ингибирует активность калликреин-кининовой системы.

7. Метакрукс не оказывает ульцерогенного и раздражающего действия и относится к практически нетоксичным веществам.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

Полученные результаты зависимости фармакологической активности от структуры и некоторых физико-химических свойств солей замещенных акриди-нил-9-тиоуксусных кислот используются при проведении научно-исследовательских работ и в учебном процессе на кафедрах фармакотерапии, фармакологии, микробиологии и биохимии Национального фармацевтического университета и кафедрах фармакологии, органической, неорганической и токсикологической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Результаты изучения специфической фармакологической активности метак-рукса будут включены в нормативно-техническую документацию на новое фармакологическое вещество, обладающее противовоспалительным, анальгетическим и диуретическим действием с целью представления в Министерства здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Первичная фармакологическая оценка калиевых и аммониевых солей акри-динил-9-тиоуксусных кислот // Лекарства-человеку. Т. 17, № 1.-Харьков, 2002.-С.119-121.

2. Противовоспалительная активность пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот // Лекарства-человеку. Т. 17, № 1.-Харьков, 2002.-С.121-123.

3. Исследование анальгетической активности диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот // Лекарства-человеку. - Т. 17, № 2.-Харь-ков, 2003.-С. 125-127 (Соавтор Самура Б. А.).

4. Изучение противосудорожной активности аммониевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот // Тез. докл. науч. конф. молодых ученых. -Харьков: Изд-во НФаУ, 2003.- С.30-32 (Соавтор Бражко А.А.).

5. Антипсихотическая активность морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот // Лекарства-человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств. - Белгород, 2003.-С.98-100 (Соавтор Мартыновский А. А.).

6. Влияние калиевых и аммониевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот на функцию почек // Лекарства-человеку. Междунар. сб. науч. трудов по созданию и апробации новых лекарственных средств. - Белгород, 2003.-С.104-106 (Соавтор Мостипака Л.А.).

7. Нейротропная активность аммониевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот // Лекарства-человеку. - Т. 18, № 2. - Харьков, 2004.-С. 109-111 (Соавтор Панасенко А. И.).

8. Изучение анальгетической активности морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот на модели термической болевой реакции // Лекарства-человеку. Материалы Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием. - Харьков, 2004.-С.145-146 (Соавтор Тарасяви-чюс Э.Л.).

9. Антибактериальная и фунгицидная активность калиевых и диэтиламмоние-вых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот // Лекарства-человеку. Материалы Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием. - Харьков, 2004.-С.167-169 (Соавтор Царев В.Н.).

Ю.Влияние метакрукса на течение экспериментального перитонита // Тез. докл. науч. конф. молодых ученых. - Харьков: Изд-во НФаУ, 2004.- С. 118-119.

11 .Изучение антиэкссудативного действия замещенных акридинил-9-тиоуксус-ных кислот // Лекарства-человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств. Материалы Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием. - Харьков, 2005.-С.65-67.

12.Противосудорожная активность органических солей акридинил-9-тиоуксус-ных кислот // Лекарства-человеку. Современные проблемы создания, исследования и апробации лекарственных средств. Материалы Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием. - Харьков, 2005.-С.67-68 (Соавторы Мостипака Л.А., Шварп Н.В.).

П.Савохина М.В., Фармакологическая активность пиперидиновых солей акри-динил-9-тиоуксусных кислот // Лекарства-человеку. Современные проблемы

создания, исследования и апробации лекарственных средств. Материалы Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием. - Харьков, 2005.-С.69-70 (Соавтор Шварп Н.В.).

14.Исследование противоспалительной активности пиперидиновых солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот / XII Российский конгресс «Человек и лекарство», 18-22 апр.2005 г: Тез.докл.- С.703 (Соавтор Самура Б.А.).

15.Исследование антиконвульсивной активности калиевых солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот / XII Российский конгресс «Человек и лекарство», 18-22 апр. 2005 г.: Тез. докл.- С. 704 (Соавтор Самура Б.А.).

3 Г, ?

7 Ч

Ь

i

г 2 MAP ж-

/

1451

Актуальность проблемы. Важной проблемой современной экспериментальной фармакологии является создание более эффективных и менее безопасных лекарственных препаратов для лечения воспалительных заболеваний, являющихся наиболее частым осложнением многих болезней. При проведении фармакотерапии воспалительного процесса ведущее место занимают нестероидные противовоспалительные лекарственные средства [14,15,51,61].

Однако, фармакотерапия воспалительных реакций нестероидными противовоспалительными препаратами сопровождается рядом нежелательных побочных эффектов (гастриты, желудочно-кишечные кровотечения, нефро-токсическое и гепатотоксическое действие, аллергические реакции и др.), что ограничивает их использование в клинической практике [28,32,59].

В связи с этим не утрачивает актуальность задача создания и внедрения в практическую медицину новых лекарственных препаратов, которые обладали бы высокой противовоспалительной активностью при минимальной выраженности побочных эффектов [20,34,81,205].

В качестве источника потенциальных лекарств синтетического происхождения широкую известность имеют производные акридина. В последние годы уделяется внимание дальнейшему проведению целенаправленного синтеза новых биологически активных веществ в ряду замещенных акридина [461.

Выше изложенное послужило основанием для изучения фармакологической активности 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот [47].

Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Национального фармацевтического университета (№ Государственной регистрации 01.01.0003124, шифр темы ВН 10.07.0030.02).

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования является поиск потенциального противовоспалительного препарата среди солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие экспериментальные задачи:

1. Провести компьютерный прогноз видов фармакологической активности новых синтезированных солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

2. На основании компьютерного прогноза выполнить фармакологический скрининг 55-и новых солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот на адекватных, унифицированных экспериментальных моделях.

3. Среди изученных солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот отобрать наиболее активные вещества для доклинического изучения.

4. Провести изучение специфической фармакологической активности наиболее активного соединения, обладающего противовоспалительной, анальгети-ческой и диуретической активностью в соответствии с требованиями МЗ РФ и Украины.

Научная новизна. Впервые проведен компьютерный прогноз возможных видов фармакологической активности 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот. Сопоставительный анализ результатов компьютерного прогноза и исследований по изучению зависимости фармакологической активности от химической структуры позволил выявить субстанции, обладающие выраженной противовоспалительной и анальгетической активностями.

Установленные закономерности зависимости структура-активность солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот явилось основанием для проведения синтеза веществ с заданной фармакологической активностью.

Сравнительный анализ результатов фармакологического скрининга позволил отобрать для доклинического изучения пиперидиновую соль 4-метокси-6-метилакридинил-9-тиоуксусной кислоты (условное название «Метакрукс»), обладающую выраженным противовоспалительным, анальгетиче-ским, жаропонижающим и диуретическим действием. Экспериментально доказана перспективность проведения первой фазы клинических испытаний в качестве противовоспалительного препарата нестероидной структуры. Изучена специфическая активность и острая токсичность новой субстанции метак-рукса.

Практическая значимость работы. Полученные результаты анализа зависимости структура-активность 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот используются при проведении научно-исследовательских работ на кафедрах фармакотерапии, фармакологии, биохимии и микробиологии Национального фармацевтического университета и кафедрах фармакологии, неорганической и органической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Результаты изучения специфической фармакологической активности ме-такрукса составили основу документов, необходимых для получения разрешения на проведение клинических испытаний метакрукса как потенциального препарата, эффективного при воспалительных заболеваниях различного гене-за.

Апробация работы. Диссертационная работа доложена на совместном заседании кафедр фармакотерапии, фармакологии, биологии, микробиологии, физиологии, биохимии, патологической физиологии, лабораторной диагностики, качества, стандартизации и сертификации лекарств Национального фармацевтического университета. Отдельные фрагменты работы были представлены на научных конференциях, международной научно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарственных средств, Белгород (2003), XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство», указанных в списке опубликованных работ по теме диссертации.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 155 страницах и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов компьютерного прогноза и экспериментальных исследований изучения зависимости фармакологической активности от химической структуры синтетических солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы, включающего 109 отечественных и 121 иностранных источников. Работа иллюстрирована 39 таблицами и 32 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. В ряду исследованных 55-и солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот методом предварительного компьютерного анализа и скрининговых фармакологических исследований выявлены органические соединения, обладающие противовоспалительной, анальгетической, диуретической, депри-мирующей, антиконвульсивной и антимикробной активностями, а также установлены элементы зависимости «структура-активность» для этих видов фармакологического действия.

2. Соединение 48 (диэтиламиноэтанольная соль 2-хлоракридинил-9-тиоуксус-ной кислоты), обладает выраженным депримирующим действием, увеличивает продолжительность действия этаминал-натрия на 118,1%, противосудо-рожный эффект не уступает активности мидокалма, а нейролептические свойства сопоставимы с аминазином.

3. Диуретический эффект соединения 4 (калиевая соль 2-хлоракридинил-9-тиоуксусной кислоты) превосходит по диуретическому эффекту гипотиазид но уступает активности фуросемида.

4. Соединение 14 (морфолиновая соль 2-хлоракридинил-9-тиоуксуной кислоты) при МПК 31,25 мкг/мл подавляет рост золотистого стафилококка, палочки брюшного тифа и дизентерийной палочки. При МПК 62,5 мкг/мл -подавляло рост кишечной палочки и спор антракоида. Антимикробные свойства сопоставимы с фарингосептом и ампициллином.

5. Соединение 28 (пиперидиновая соль 4-метокси-6-метилакридинил-9-тиоук-сусной кислоты; условное название «Метакрукс»), обладает выраженным противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим, натрийуре-тическим действием, а также улучшает фильтрационную функцию почек. По выраженности этих эффектов метакрукс не уступает препаратам сравнения диклофенак-натрию и ацетилсалициловой кислоте.

6. Метакрукс уменьшает уровень простагландинов ПГЕ-i в плазме крови у крыс и ингибирует активность калликреин-кининовой системы.

7. Метакрукс не оказывает ульцерогенного и раздражающего действия и относится к малотоксичным веществам.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ Полученные результаты зависимости фармакологической активности от структуры и некоторых физико-химических свойств солей замещенных акри-динил-9-тиоуксусных кислот используются при проведении научно-исследовательских работ и в учебном процессе на кафедрах фармакотерапии, фармакологии, микробиологии и биохимии Национального фармацевтического университета и кафедрах фармакологии, органической, неорганической и токсикологической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Результаты изучения специфической фармакологической активности метакрукса будут включены в нормативно-техническую документацию на новое фармакологическое вещество, обладающее противовоспалительным, анальге-тическим и диуретическим действием с целью представления в Министерства здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На этапе скрининговых фармакологических исследований для оптимизации поиска высокоэффективных веществ проведен компьютерный прогноз вероятного спектра биологической активности солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

Полученные результаты явились основанием для проведения фармакологического скрининга 55 солей замещенных акридинил-9-тиоуксусных кислот.

Острая токсичность калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) находится в интервале от 104 мг/кг до 445 мг/кг. Наиболее токсичным оказалось соединение 8, ЛД50 которого равно 104 мг/кг. Замена атома хлора (соед.8) на 2-метоксильный (соед.9) и 4-метоксильный (соед. 10) заместители приводит к уменьшению острой токсичности. Введение катионной компоненты оказывает существенное влияние на понижение острой токсичности.

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 11-22) средняя смертельная доза была в пределах от 85 мг/кг до 448 мг/кг. Наиболее токсичным (ЛД50 = 85 мг/кг), оказалось соединение 16, которое содержит во 2-м положении молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот атом водорода и в 6-м -нитрогруппу. Замена нитрогруппы (соед. 16) на атом водорода (соед. 11-15, 17, 18) приводит к снижению их токсичности [84].

Большинство замещенных пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33) относятся к малотоксичным веществам, ЛД50 их находится в диапазоне от 72 мг/кг до 368 мг/кг. Наименее токсичным оказалось соединение 29, ЛД5о = 368 мг/кг. Перемещение атома хлора с 4-го положения во 2-е (соед.25, 31) или его замена 2-метоксильный (соед.23), 2-этоксильный (соед.24), 4-метоксильный (соед.28) заместители и атом хлора (соед.25, 26) приводит к повышению токсичности. Наиболее токсичным (ЛД50Г=72 мг/кг) оказалось соединение 27, содержащее во 2-м положении атом водорода и в 6-м - нитрогруппу.

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) наименее токсичным было соединение 41, которое содержит атом хлора в 4-ом положении акридинового кольца. Замена атома хлора (соед.41) на 2этоксильный (соед.36, 42), 2-метоксильный (соед.35, 44) радикалы способствует повышению острой токсичности этих веществ.

Наименее токсичным среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.46-55) оказалось соединение 54, ЛД50 равна 342мг/кг, содержащее во 2-м положении молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот ме-токсильный радикал. Замена 2-метоксильного (соед.54) радикала на 2-этоксиль-ный (соед.47, 52), 4-метоксильный (соед.55) заместители способствует повышению острой токсичности этих веществ. Наиболее токсичным (ЛД50 = 86 мг/кг) было соединение 51, которое содержит 4-метоксильный заместитель.

В соответствии с классификацией К.К. Сидорова [94], из 55 соединений 52 относятся к малотоксичным и 3 являются умеренно токсичными веществами.

Исследование нейротропной активности показало, что среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) многие вещества проявили синергизм к депримирующему действию барбитуратов, увеличивая продолжительность наркотического сна на 23,7 - 54,8% (р<0,05). Выраженный агонисти-ческий эффект был выявлен у соединения 1, которое увеличивало продолжительность этаминал-натриевого сна у крыс на 54,8% (р<0,05). Замена атома водорода (соед.1) в молекуле акридинил-9-тиоуксусных кислот на атом хлора (со-ед.4-6, 8) приводит к снижению пролонгирующего действия барбитуратов.

Антагонизм к действию барбитуратов проявили соединения 2, 3, 7 и 10, которые уменьшали продолжительность наркотического сна на 22,9-32,4%) (р<0,05). Наибольший пробуждающий эффект оказало соединение 3, содержащее во 2-м положении акридинового кольца оксиэтильный радикал. Данное соединение уменьшило продолжительность сна на 32,4% (р<0,05). Введение в 2-е положение акридинового кольца вместо этоксильного (соед.З) радикала 2-метоксильного (соед.2) или 4-метоксильного (соед. 10) заместителей приводит к уменьшению аналептических свойств данных веществ.

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.11-22) выраженный депримирующий эффект проявило соединение 14, содержащее во 2-м положении акридинового кольца атом хлора, которое увеличивало продолжительность этаминал-натриевого сна у крыс на 34% (р<0,05). Перемещение атома хлора со 2-го (соед. 14) в 3-е положение (соед. 15) акридинового кольца приводит к увеличению наркотического сна на 56,1% (р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома хлора на 2-метокси (соед.12) и 2-этокси (соед.13) группы приводит к проявлению антагонизма к снотворному действию этаминал-натрия. Выраженный аналептический эффект оказало соединение 22, которое уменьшало продолжительность сна на 26,5% (р<0,05).

Перемещение атома хлора с 3-го положения в 4-ое приводит к усилению депримирующего действия этаминал-натрия. Так, под действием соединения 18, в дозе 4,4 мг/кг, наблюдали увеличение продолжительности барбитурового сна у крыс на 84,7% (р<0,01). Замена в 6-м положении акридинового кольца атома водорода (соед. 18) на нитрогруппу (соед.20) приводит к уменьшению продолжительности этаминал-натриевого сна на 23,4% (р<0,05).

Большинство пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (со-ед.23-33) потенцируют действие барбитуратов. Наибольший депримирующий эффект проявило соединение 31, которое увеличило продолжительность наркотического сна на 123,6%) (р<0,01). Перемещение в акридиновом кольце атома хлора со 2-го положения в 4-е положение и замена в 6-м положении нитрогруп-пы (соед.31) на атом водорода (соед.29) приводит к уменьшению депримирующего эффекта [70].

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45), выраженный депримирующий эффект оказало соединение 37, которое увеличивало продолжительность барбитурового сна на 69,7%) (р<0,05). Перемещение атома хлора со 2-го (соед.37) положения акридинового кольца в 3-е (соед.38) и 4-е (соед.41) приводит к уменьшению депримирующего эффекта. Антагонизм к действию барбитуратов проявили соединения 36, 40, 42 и 45 содержащие во 2-м положении 4-метоксигруппу, которые уменьшали длительность этаминал-натриевого сна в среднем на 20,6-30% (р<0,05).

Наибольший синергизм к действию барбитуратов среди диэтиламиноэта-нольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.46-55) оказало соединение 48, которое потенцировало действие этаминал-натрия на 118,1% (р<0,05). Перемещение атома хлора со 2-го положения акридинового кольца (соед.48) в 3-е (соед.49) приводит к уменьшению депримирующего эффекта на 51,3% (р<0,05). Замена атома водорода в 6-м положении акридинового фрагмента (соед.48) на нитрогруппу (соед.53) приводит к уменьшению депримирующей активности в 2,7 раза. Антагонизм к действию барбитуратов проявили соединения 47 и 55, которые уменьшали длительность сна на 18,8 и 20,2% соответственно.

Наибольшим депримирующим действием обладает соединение 31, которое превосходит аминазин, а аналептические свойства соединения 3 сопоставимы с действием кофеин-бензоата натрия.

Изучение противосудорожного действия показало, что среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) соединения 4-6, 8 и 9 проявили слабый защитный эффект. Противосудорожное действие оказало соединение 1, которое удлиняло латентный период наступления первых судорожных реакций на 35,8-76,8% (р<0,05), а также уменьшало количество погибших животных. Введение в 6-е положение нитрогруппы (соед.7) вместо атома водорода (соед.З) приводит к утрате противосудорожной активности [18].

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.11-22) противосудорожный эффект оказывали соединения 18 и 20 содержащие, во 2-м и 4-м положениях акридинового кольца атом хлора, которые увеличивали латентный период наступления первых судорожных реакций на 40,8-59,9% (р<0,05) при взаимодействии с коразолом, на 50,8-60,5,4% (р<0,05) при взаимодействии с кордиамином и при взаимодействии с камфорой - на 20,4-25,7% (р<0,05), а также уменьшали тяжесть течения судорожных реакций [18].

В ряду пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33) наиболее выраженное противосудорожное действие проявило соединение 31. Под его влиянием отмечалось удлинение латентного периода наступления первых судорожных реакций на 28,9% (р<0,05), при взаимодействии с коразолом, на 82,3% (р<0,01) при взаимодействии с кордиамином и при взаимодействии камфорой - на 73,7% (р<0,01), а продолжительность судорожных реакций уменьшалась на 33,0%, 51,5% и 65,0% (р<0,05), соответственно, в опытах с коразолом, кордиамином и камфорой. Все опытные животные выжили.

Среди диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) противосудорожную активность проявили соединения 37, 38 и 43, которые увеличивали продолжительность латентного периода наступления судорог на 22,5% - 34,5% (р<0,05) при взаимодействии с коразолом, на 46,7% и 57,3% при взаимодействии с кордиамином и на 36,2% и 48,7% (р<0,05) при взаимодействии с камфорой, соответственно. Длительность судорог уменьшилась на 18,7%) и 26,8 (р<0,05) при взаимодействии с коразолом, на 36,1% и 42,8% (р<0,05) при взаимодействии с кордиамином и на 33,8%) и 45,4% (р<0,05) при взаимодействии с камфорой, соответственно. Замена в акридиновом кольце атома хлора (соед.37,38 и 43) на метоксильный (соед.35) и этоксильный (соед.36) радикалы приводит к утрате противосудорожной активности [87].

В ряду диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.46-55) выраженную противосудорожную активность проявила диэтила-миноэтанольная соль акридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.48), которая предупреждала наступление судорожных реакций при взаимодействии с коразолом, кордиамином и камфорой. Все опытные животные выжили.

Таким образом, по противосудорожной активности соединение 48 не уступает действию мидокалма и фенобарбитала.

Изучение влияния на порог эмоциональных реакций у животных показало, что среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.З и 7) вызывали снижение порога писка на 17,6% и 18,5% (р<0,05) и уменьшение порога агрессивности на 23,6% и 24,5% (р<0,05), соответственно [48].

Депримирующие свойства проявили пиперидиновая соль 2-хлор-6-нитро-акридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.31) и 2-хлоракридинил-9-тиоуксусной кислоты (соед.48), которые вызывали повышение порога писка на 58,3%) и 60,7%) (р<0,05), а порог агрессивности увеличивали на 33,8% (р<0,05) и 33,7% (р<0,05), соответственно. Повышение порога агрессивности, вызываемое соединением 48, сопоставимо с действием аминазина.

Изучение нейролептического действия показало, что соединения 18 и 48 уменьшают время пребывания мышей на вращающемся стержне на 41,5% (р<0,05) и 45,1% (р<0,05), соответственно. Активность этих веществ сопоставима с действием аминазина. Соединения 3 и 7 проявили психостимулирующее действие, увеличивая продолжительность пребывания мышей на вращающемся стержне на 58,5% (р<0,05) и 54,9% (р<0,05), соответственно. Нейролептический эффект соединения 48 сопоставим с действием аминазина.

Исследование анальгетической активности калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) показало, что соединение 6 вызывало уменьшение количества уксусных корчей на 34% (р<0,05).

В ряду морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1122), наибольший анальгетический эффект оказывает соединение 18, которое в дозе 4,4 мг/кг уменьшает количество уксусных корчей на 37,5% (р<0,05). Перемещение атома хлора с 4-го положения акридинового кольца (соед. 18) во 2-е (соед.14) и 3-е (соед. 15) приводит к уменьшению анальгетической активности.

Более выраженный анальгетический эффект проявили пиперидиновые соли акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Наибольший анальгетический эффект был выявлен у соединения 28, которое уменьшало рефлекторную возбудимость на 50,1% (р<0,01). Перемещение в акридиновом кольце метокси-группы с 4-го положения (соед.28) во 2-е (соед.23) или замена в 6-м положении атома водорода на нитрогруппу приводит к снижению анальгетических свойств данных веществ [88].

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) выраженное анальгетическое действие оказывают соединения 34, 37, 38 и 43, которые уменьшают количество уксусных корчей у крыс на 27,8-43,5% (р<0,05). Наибольший анальгетический эффект оказало соединение 34, которое вызывало снижение порога болевой чувствительности у крыс на 43,5%) (р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома водорода (со-ед.34) на атом хлора (соед.37) или перемещение его в 3-е положение (соед.38) способствуют уменьшению анальгетических свойств исследованных веществ.

Среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.46-55) выраженный анальгетический эффект проявило соединение 48, которое вызывало снижение порога болевой чувствительности на 42,1% (р<0,05). Перемещение со 2-го положения акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 3-е (соед.49) или 4-е (соед.50) положения приводит к уменьшению анальгетических свойств. Введение во 2-е положение акридинового кольца метоксильного (соед.46), этоксильного (соед.47) заместителей и в 7-е — нитрогруппы приводит к утрате анальгетической активности.

Таким образом, по обезболивающему эффекту соединение 28, сопоставимо с действием анальгина и диклофенака-натрия.

На модели «горячей пластинки» среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) выраженное анальгетическое действие выявлено у соединения 6, которое снижало рефлекторную реакцию на тепловой раздражитель на 26,5% (р<0,05). Соединение 6 содержит атом хлора в 4-м положении акридинового кольца.

В ряду морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1122), наибольший анальгетический эффект оказывает соединение 18, которое через 90 минут снижало у животных рефлекторную реакцию ноцицепторов на тепловой раздражитель на 33,9% (р<0,05). Перемещение атома хлора с 4-го положения акридинового кольца (соед. 18) во 2-е (соед.14) приводит к уменьшению анальгетической активности.

Более выраженный анальгетический эффект проявило большинство пипе-ридиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Так, соединения 23, 25-29 и 31 через 90 минут у крыс уменьшали ответную реакцию ноцицепторов на тепловой раздражитель на 25,9-54,1% (р<0,05). Наибольший анальгетический эффект оказало соединение 28, которое уменьшало ответную реакцию на тепловой раздражитель на 54,1% (р<0,01).

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) выраженное анальгетическое действие оказывает соединение 34, которое в вызывало снижение порога болевой чувствительности ноцицепторов на 37,3% р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома водорода (со-ед.34) на атом хлора (соед.37) или перемещение его в 3-е положение (соед.38) способствуют уменьшению анальгетических свойств [96].

Среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55), соединения 48, 49, 50 и 53 уменьшали ответную реакцию на тепловой раздражитель на 23,9-32,8% (р<0,05). Выраженный анальгетический эффект оказало соединение 48, которое вызывало снижение порога болевой чувствительности ноцицепторов на 32,8% (р<0,05). Перемещение со 2-го положения акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 4-е (соед.50) положение приводит к уменьшению анальгетических свойств.

Исследование противовоспалительных свойств проведено на модели кар-рагенинового отека лапок у крыс. Среди калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 1-10) выраженный противовоспалительный эффект был выявлен у соединения 6, которое вызывало уменьшение развития экспериментального отека на 35,8% (р<0,05). Перемещение атома хлора (соед.6) с 4-го положения акридинового кольца в 3-е (соед.5) или во 2-е (соед.4) приводит к уменьшению антиэкссудативной активности [85].

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.11-22), наибольший противовоспалительный эффект оказывает соединение 18, которое уменьшает развитие экспериментального отека лапок у крыс на 41,7% (р<0,05) [83]. Перемещение атома хлора с 4-го положения акридинового кольца (соед. 18) во 2-е (соед. 14, 20) и 3-е (соед. 15) приводит к уменьшению противовоспалительного эффекта. Введение во 2-е положение 2-метокси- (соед. 12) и 2-этокси- (соед. 13) групп вместо атома хлора (соед. 14) приводит к утрате противовоспалительной активности.

Более выраженный противовоспалительный эффект проявило большинство пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Наибольший антиэкссудативный эффект оказало соединение 28, которое уменьшало развитие отека вызванного флогогенным агентом на 50,8%) (р<0,01). Перемещение в акридиновом кольце метоксигруппы с 4-го положения (соед.28) во

2-е положение (соед.23) или замена в 6-м положении метального радикала на нитрогруппу (соед.31) приводит к снижению антиэкссудативных свойств [86].

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) выраженное антиэкссудативное действие оказывают соединения 34, 37, 38 и 43, которые уменьшают развитие экссудативной реакции при каолиновом отеке на 32,6-43,2% (р<0,05). Замена во 2-м положении акридинового кольца атома хлора (соед.43) на атом водорода (соед.45), метоксигруппу (соед.37) или перемещение атома хлора в 3-е положение (соед.38) способствуют уменьшению антиэкссудативных свойств. Введение во 2-е положение акридинового кольца ме-токсильного (соед.35), этоксильного (соед.36) заместителей приводит к утрате противовоспалительной активности.

Умеренную антиэкссудативную активность проявили диэтиламиноэта-нольные соли акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55). Выраженный ан-тиэкссудативный эффект оказало соединение 48, которое вызывало снижение отека лапок у крыс на 42,4% (р<0,05). Перемещение со 2-го положения акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 3-е (соед.49) или 4-е положение (соед.50) приводит к уменьшению противовоспалительных свойств. Введение во 2-е положение акридинового кольца метоксильного (соед.46), этоксильного (соед.47) радикалов и в 7-е - нитрогруппы приводит к утрате антиэкссудативных свойств. В ряду солей акридинил-9-тиоуксуных кислот величина противовоспалительного эффекта зависит как от природы заместителя в акридиновом кольце, так и катионной компоненты.

Изучение диуретической активности калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.1-10) показало, что соединения 1, 4-7 и 10 увеличивают диурез за 4 часа на 46,6 - 118,3%) (р<0,01). Наибольший диуретический эффект оказывает соединение 4, которое увеличивает диурез за 4 часа на 118,3%) (р<0,01). Перемещение атома хлора со 2-го положения (соед.4) в 3-е (соед.5) или 4-е положение (соед.6) акридинового кольца приводит к снижению диуретической активности с 118,3% до 69,8%. Замена во 2-м положении атома хлора (соед.4) на метокси- (соед.2) и этокси- (соед.З) групп приводит к утрате диуретической активности [55].

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 11-22) диуретический эффект вызывает соединение 18, которое увеличивает диурез на 96,2% (р<0,01)и по диуретической активности превосходит гипотиазид 27,2% . Перемещение атома хлора с 4-го положения акридинового кольца (соед. 18) во 2-е (соед.14, 20) и 3-е положение (соед. 15) приводит к уменьшению диуретической активности. Введение во 2-е положение метокси- (соед.12) и этокси-(соед.13) групп вместо атома хлора (соед.14) приводит к проявлению антидиуретической активности.

Умеренную диуретическую активность проявили большинство пипериди-новых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33). Выраженный диуретический эффект оказывало соединение 31, которое вызывало увеличение диуреза на 69% (р<0,05). Замена в акридиновом кольце атома хлора на 2-этоксильный (соед.ЗО), 4-метоксильный (соед.ЗЗ) заместители приводит к снижению диуретической активности.

В ряду диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 3445) соединение 43 увеличивает диурез на 86,3% (р<0,01). Введение в акридиновое кольцо вместо атома хлора (соед.43) 2-метоксильного (соед.44), 4-метоксильного (соед.45) радикалов, а в 7-е положение нитрогруппы приводит к утрате диуретической активности.

Среди диэтиламиноэтанольных солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55) соединение 48 увеличению диуреза за 4 часа на 95,2% (р<0,01). Перемещение со 2-го положения способствовало акридинового кольца атома хлора (соед.48) в 3-е (соед.49) и 4-е положение (соед.50) приводит к снижению диуретической активности.

Таким образом, соединение 18 по диуретической активности превосходит гипотиазид, но уступает фуросемиду.

Изучение бактериальной и фунгистатической активности калиевых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.1-10) показало, что акридинил-9-тиоуксусная кислота обладает умеренной бактериостатической активностью. Наиболее выраженную антибактериальную активность проявило соединение 9, которое при МПК 125-250 мкг/мл подавляло рост золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа и дрожжеподобного грибка [105].

Среди морфолиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.11-22) наибольший антимикробный эффект оказывает соединение 14, которое при минимальной подавляющей концентрации 62,5-125 мкг/мл подавляет рост золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, дизентерийной палочки, антракоида, вульгарного протея.

Среди пиперидиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.23-33) выраженный антимикробный эффект оказывает соединение 25, содержащее во втором положении акридинового кольца атом хлора. Перемещение атома хлора со 2-го положения (соед. 15) акридинового фрагмента в 3-е (соед.26) и 4-е положение (соед.29) приводит к уменьшению антимикробной активности.

В ряду замещенных диэтиламиновых солей акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед.34-45) антимикробная активность соединений 37 и 38, находится в пределах 62,5-250 мкг/кг. Перемещение атома хлора со 2-го -(соед.37) и 3-го положения (соед.З 8) в 4-е положение молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот приводит к уменьшению антимикробной активности [73, 74].

Умеренную антимикробную активность проявили диэтиламиноэтанольные соли акридинил-9-тиоуксусных кислот (соед. 46-55). Соединение 48, содержащее во 2-м положении атом хлора, подавляет рост большинства штаммов. Перемещение атома хлора со 2-го -(соед.48) и 3-го положений (соед.49) в 4-е положение (соед.50) молекулы акридинил-9-тиоуксусных кислот приводит к уменьшению антимикробной активности.

Сопоставление результатов фармакологического скрининга выполненного на лабораторных животных и исследуемых штаммах микроорганизмов с данными компьютерного прогноза показало совпадение по большинству исследованных видов фармакологической активности: противовоспалительной, анальгетической, антиконвульсивной, нейролептической, аналептической, диуретической и антимикробной.

Однако, в процессе сопоставительного анализа по противовоспалительной активности выявлены соответствия не по всем прогнозируемым соединениям. Отклонения компьютерного прогноза от данных эксперимента свидетельствует о новизне синтезированных веществ в ряду акридинил-9-тиоуксус-ной кислоты, аналоги которых отсутствовали в банке данных, в связи с чем они могут быть приоритетными, а химическая структура и фармакологическая активность пополнили банк данных новыми дескрипторными центрами.

На основании проведенного фармакологического скрининга для доклинического изучения отобрано соединение 28 [пиперидиновая соль 4-метокси-6-метилзамещенных акридинил-9-тиоуксусной кислоты, условное название «Метакрукс»], которое проявило противовоспалительную, анальгетическую и диуретическую активность. Углубленное изучение метакрукса на моделях карраге-нинового, каолинового, декстранового отеков показало, что он оказывает дозо-зависимый антиэкссудативный эффект. На основании полученных данных была рассчитана эффективная терапевтическая доза, которая составила 8,5 мг/кг.

Антиэкссудативная активность метакрукса в дозе 8,5 мг/кг сопоставима с действием диклофенак-натрия и превышает таковую ацетилсалициловой кислоты. По широте терапевтического действия метакрукс превосходит ацетилсалициловую кислоту в 2,82 раза и диклофенак натрия в 2,67 раза.

Метакрукс при внутрижелудочном введении угнетает развитие каолинового отека. Так, через 4 часа после введения каолина на 48,3% (р<0,01), диклофенак-натрия угнетает развитие каолинового отека на 44,1% (р<0,05), а ацетилсалициловая кислота - на 38,6% (р<0,05). В момент максимального развития отека (через 4 часа) различия в антиэкссудативном действии диклофенак-натрия и метакрукса также были достоверны. Метакрукс на модели каолинового отека превосходит антиэкссудативный эффект диклофенак-натрия и ацетилсалициловой кислоты. На модели формалинового отека максимальное ингибирование воспалительного процесса (47,8%; р<0,05) под действием метакрукса наблюдали через 4 часа после введения флогогенного агента.

На модели гистаминового отека метакрукс оказывал выраженное антиэкс-судативное действие на 2-м часу наблюдения. Ингибирующий эффект метакрукса превышал эффект диклофенак-натрия на 8,1% (р<0,05) и на 13,1% (р<0,05) ацетилсалициловую кислоту. Таким образом, метакрукс обладает ан-тиэкссудативным действием, не уступает по активности диклофенак-натрию и превосходит эффект ацетилсалициловой кислоты.

Анальгетическую активность метакрукса изучено на модели уксусных корчей. Наибольший анальгетический эффект (44,3%; р<0,01) наблюдали в дозе 8,5 мг/кг. Диклофенак-натрий (8 мг/кг) уменьшал количество уксусных корчей у крыс на 41,9% (р<0,01), а анальгин (50 мг/кг) - на 40,4% (р<0,01).

На модели «горячей пластинки» метакрукс в дозе 8,5 мг/кг вызывает повышение порога болевой чувствительности на термический раздражитель в среднем на 57,1%. Диклофенак-натрия и анальгин вызывают увеличение болевого порога на 45,5 и 42,8%, соответственно.

У крыс с молочной лихорадкой метакрукс при внутрижелудочном введении в дозе 8,5 мг/кг вызывает снижение температуры тела. Жаропонижающее действие его особенно отчетливо проявлялось через 4 часа и составило 2,1°С. Препарат сравнения диклофенак-натрия через 4 часа вызывал снижение температуры тела на 1,1°С.

На модели пирогеналовой лихорадки метакрукс в дозе 8,5 мг/кг вызывал максимальное снижение температуры на 1,9°С через 3 часа после введения. Полученные результаты свидетельствуют, что метакрукс оказывает значительное жаропрнижающее действие

Исследование влияния метакрукса на динамику воспаления лапы у крыс, вызванного субплантарным введением адъюванта Фрейнда (ПАФ) показало, что максимальный отек пораженной лапки наблюдали на 5-е и 15-е сутки после введения ПАФ. Животные были менее подвижными, суставы их стали синюшными, отечными. У животных, получавших метакрукс, все эти явления были менее выражены. Объем лапки у крыс после введения ПАФ, леченных метак-руксом (8,5 мг/кг) через 7 суток уменьшился на 42,3% (р<0,05), на 14-е сутки -на 53,4% (р<0,05) - на 28-е сутки - на 58,1% (р<0,05).

На регистрируемых этапах наблюдения у животных опытной группы наблюдались грубые изменения гематологических показателей. Установлены существенные изменения лабораторных показателей крови, которые свидетельствуют о наличии воспалительного процесса.

Кроме того установлено, что на 14-й день опыта скорость оседания эритроцитов у животных с пораженной лапой увеличилась в 1,83 раза и на 28 день опыта — в 3,17 раза, также наблюдали значительный рост количества сегмен-тоядерных нейтрофилов и незначительное увеличение количества эозинофилов, что свидетельствует о наличии системного воспалительного процесса в организме животных.

Время свертывания крови в контроле составило 72,6 ± 3,25 секунды. На 14-е и 28-е сутки наблюдалось укорочение времени свертывания крови в 1,36 и 1,49 раза, соответственно. Применение метакрукса сопровождалось выраженным влиянием на свертывающую систему крови. Так на 14-й день время свертывания крови увеличилось на 34,6% (р<0,05), а на 28-й - на 56,1% (р<0,05).

Антипролиферативную активность изучали на модели "paper disk" у белых крыс. Метакрукс вводили внутрижелудочно в дозе 8,5 мг/кг. Установлено, что метакрукс достоверно подавляет образование грануляционно-фиброзной ткани на 40,9%) (р<0,05) и превосходит диклофенак-натрия на 29,4%.

Учитывая патогенетическую роль ПГЕ1 в развитии реакций воспалительного процесса, было изучено влияние метакрукса на уровень ПГЕ1 с помощью радиоиммунологического метода.

Метакрукс вводили внутрижелудочно однократно в дозе ЕД50, которая равна 8,5 мг/кг. Установлено, что содержание простагландинов в контрольной группе составило 7,24±0,28 нмоль/л, а уровень простагландинов в плазме крови крыс с каррагениновым отеком достоверно повышался на 55,1%. Метакрукс проявил выраженное, угнетающее влияние на образование ПГЕЬ снижая его содержание в плазме крови на 27,1% (р<0,05) по сравнению с интактными животными. Под действием диклофенака-натрия количество ПГЕ1 в плазме крови уменьшилось на 18,6% (р<0,05), а под влиянием ацетилсалициловой кислоты содержание ПГЕ] снизилось на 26 % (р<0,05).

Исследование влияния метакрукса в дозе 8,5 мг/кг на активность каллик-реин-кининовой системы показало, что в отличие от ацетилсалициловой кислоты метакрукс предотвращает расходование компонентов этой системы. Уменьшение скорости реакции превращения калликреиногена в калликреин является фактором, уменьшающим образование медиатора воспаления брадикинина.

Установлено, что метакрукс в дозах 5, 7,5 и 10 мг/кг увеличивает мочеотделение за 2 часа на 29,6%, 68,3% и 51,4 (р<0,05), а за 4 часа - на 31,3%, 103,1% и 78,6%) (р<0,05). На основании полученных данных была рассчитана эффективная терапевтическая доза, которая равна 8,5 мг/кг массы тела.

Метакрукс при однократном введении повышает суточное потребление воды на 32,9% (р<0,05), усиливает клубочковую фильтрацию почек на 20,9% (р<0,05) и повышает спонтанный диурез 104,4% (р<0,01), а также увеличивает экскрецию натрия на 49,3% (р<0,05), калия - на 5,2% (р>0,05).

Преимуществом метакрукса является то, что он выводит из организма калий меньше по сравнению с гипотиазидом и фуросемидом. Ежедневное введение метакрукса в течение 14 дней не вызывало у крыс изменений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

Изучено влияние метакрукса на слизистую желудка и кишечника в условиях моделирования язв желудочно-кишечного тракта у крыс, вызванных этиловым спиртом. В отличие от салициловой кислоты, которая потенцирует ульце-рогенное действие этилового спирта метакрукс не вызывает такого эффекта.

Установлено, что метакрукс не вызывает местнораздражающего действия на слизистую конъюнктивы глаз у кроликов породы Шиншилла.

Таким образом метакрукс обладает выраженным противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим и диуретическим действием. Его противовоспалительный эффект, по-видимому связан с ингибированием биосинтеза простагландинов ПГЕ1 и активности калликреин-кининовой системы.