Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая активность производных 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантина

РГБ ОД

2.9 <»>£0 2002

На правах рукописи

Дроздова Елена Алексеевна

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ПРОЮВОДНЫХ 7-ЗАМЕЩЕННЬ1Х-8-ГИДРАЗИНО-3-МЕТИЖСАНТИНА

14.00.25 — фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Купавна - 2002

Работа выполнена в Национальной фармацевтической академии Украины, г. Харьков, и во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ, Московская обл.

Научный руководитель:

Научный консультант:

академик АНТК Украины, заслуженный деятель науки и техники Украины, доктор фармацевтических наук, профессор Б.А. САМУРА

доктор биологических наук В.А. ТРАПКОВ

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

В.А. КОВАЛЕВА

доктор медицинских наук, профессор В.А. МАКАРОВ

Ведущее учреждение: Курский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится " 26 " февраля 2002 г. в 10.30 часов на заседании диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ, Московская обл., п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ: Московская обл., п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

Автореферат разослан «Л^* » января 2002г.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор биологических наук, профессор Л.В. Корольченко

РД %п /3, О

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Важной проблемой современной фармакологиче-л науки является создание новых, более эффективных лекарственных препара-для регуляции воспалительного процесса различного генеза.

В настоящее время в клинике применяется большое количество нестероид: противовоспалительных лекарственных средств (НПВС) [Клименко H.A., 7; Крылов Ю.Ф., 2000; Машковский М.Д., 2000], которые, обладая высоким апевтическим эффектом, могут оказывать нежелательное побочное действие, ограничивает их клиническое использование [Амосова K.M., 1997; Дзяк Г.В., '7; Коваленко В.М., Голиков Ю.Ж. 1997; Дядик О.И., Ларина Т.Ф., Галаева Э., 1998]. В связи с этим расширение арсенала отечественных безопасных ВС является актуальной проблемой современной фармакологической науки.

Известно, что пуриновые нуклеотиды участвуют во многих физиологических щессах. В настоящее время в Запорожском государственном медицинском {верситете проводится целенаправленный синтез химических соединений в ря-производных ксантина с целью создания и разработки новых потенциальных этивовоспалительных лекарственных средств [Кандыбей К.И., 1997; Приймен-Б.А., 1999; Романенко Н.И., 1999]. Вышеизложенное послужило основанием я изучения фармакологической активности 48 синтезированных 7-замещенных-'Идразино-З-метилксантинов.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-следовательских работ Национальной фармацевтической академии Украины и порожского государственного медицинского университета (номер государст-нной регистрации 02.93.0002479, шифр темы ВН 10.08.0036.97), а также целей программы создания противовоспалительных лекарственных препаратов.

Цель исследования. Целью настоящего исследования является исследование фмакологической активности новых 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксан-[нов, а также разработка и создание на основании фармакологического скрининга ¡следуемых производных потенциального противовоспалительного препарата.

Задачи исследования. Для достижения поставленной цели необходимо бь решить следующие задачи:

1. Провести анализ вероятностного прогноза возможного спектра фармаколо ческой активности 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов с помош комплекса программ "ОРАКУЛ".

2. Провести фармакологический скрининг 48 новых 7-замещенных-8-гидрази 3-метилксантина на выявление нейротропной, противосудорожной, проти воспалительной, анальгетической, диуретической и антимикробной активное

3. Выявить и отобрать наиболее активное соединение, обладающее противов палительной и анальгетической активностями для проведения углубленн фармакологического изучения.

4. Изучить специфическую фармакологическую активность и оценить ульце генное и местнораздражающее действие отобранного потенциального лека{ венного средства.

Научная новизна исследований. Впервые проведен компьютерный прог возможных видов фармакологической активности 48 7-замещенных-8-гидразн 3-метилксантинов с помощью комплекса программ "ОРАКУЛ". Изучена зав* мость фармакологической активности от химической структуры 7-замещенны: гидразино-3-метилксантинов. Выявлены активные соединения, обладающие раженной противовоспалительной, анальгетической, депримирующей и диур< ческой активностями. Результаты углубленного фармакологического скриш позволили отобрать для доклинического изучения соединение 27, проявляю выраженные противовоспалительные и анальгетические свойства. Провед: изучение специфической фармакологической активности, а также ульцерогеш действия и местнораздражающих свойств субстанции нового фармакологичеа вещества бутаксан.

Практическая значимость работы. Отобраны перспективные вещества, ладающие противовоспалительной, анальгетической и диуретической акти

ш, превосходящими таковые лекарственных препаратов, применяемых в ме-инской практике.

Проведено экспериментальное изучение специфической активности бутакса-эбладающего выраженным противовоспалительным и анальгетическим дейст-VI без раздражающего и ульцерогенного эффекта, что дает основание для даль-тих исследований по разработке и созданию нового потенциального противо-аалптелъиого препарата нестероидной структуры.

Полученные результаты изучения специфической бутаксана будут использо-ы при подготовке материалов на новое лекарственное средство с целью пред-шения в Министерства Здравоохранения Российской Федерации и Украины и получения разрешения на проведение клинических испытаний.

Результаты фармакологического скрининга новых химических соединений ци 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов используются в учебном цессе на кафедрах фармакологии, фармакотерапии с фармакокинетикой, био-[ии, микробиологии Национальной фармацевтической академии Украины и едрах фармакологии, органической и неорганической химии Запорожского го-арственного медицинского университета.

Апробация работы. Отдельные фрагменты работы были представлены на IX чно-практической конференции по созданию и апробации новых лекарствен-с средств (Минск, 1999) и V национальном съезде фармацевтов Украины рьков, 1999). Результаты диссертационной работы докладывались на совмест-1 заседании кафедр фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, па-огической физиологии, микробиологии, биохимии, фармацевтического анали-I фармакогнозии Национальной фармацевтической академии Украины (прото-[ № 6 от 7 сентября 2001 г).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Объем и стру!стура диссертации. Диссертационная работа изложена на 156 аницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описа-I материалов и методов исследования, результатов собственных исследований,

заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 41 таблицей и 25 рисунками. Указатель литературы включает 140 отечественных и 122 иностранных источника.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Эксперименты выполнены на 1490 лабораторных животных (710 беспородных, мышей, 760 беспородных крыс, 20 кроликов породы шиншилла). В соответствии с поставленными задачами нами изучены 48 7-замещенных-8-гидразино-3-метияксантинов (структура 1, II, III и IV), впервые синтезированных на кафедре органической химик Запорожского государственного медицинского университета под руководством доктора фармацевтических наук, профессора H.H. Романенко.

7-К-8-гидразино-3-метилксантины 7-К-8-ацилгидразино-3-метилксантины

о о

—N—R НГГ >|-N—R

«ЦАиЛ-м+ин-с-н

-R Q

NH-NH—С-К

О *

СН3 СН3

Структура I (соединения 1-22) Структура П (соединения 23-36)

7 -R-8 -м етилацилги др азин о -З-метилксанлшш. 7-бутил-й-ащшгидразино-3-

метилксавггин (соед.27)

о

HfT^I-N-R О Htr^T-—N—СН2СН2СН2СНз

о f( h <r Y H- NHÏJH—с—H

СНз CHj 6

Структура Ш (соединения 37-48) Структура IV (бутаксан)

Первичный фармакологический скрининг этих веществ проводился согласно методическим рекомендациям «Простой и специальный скрининг новых химических веществ» [Ф.П. Тринус, 1985, C.B. Нижний, 1985, Н.А. Лопаткин, 1995} и «Элементы экспериментальной фармакологии» [ЛИ Сернов, В .В. Гацура, 2000].

Изучение острой токсичности 7-замаденньк-8-ги.дразино-3-метилксантинов у мышей осуществлялось путем внутрибрюшинного введения веществ в дозах от 100 до 2000 ¡чг/кг в виде 3-5% водной суспензии3 стабилизированной твином-80. и расчета величины ЛД50 по метод}- Кёрбера [М.Л. Беленький, 1963].

Исследование фармакологической активности изучаемых соединений вы-юлнялось в опытах на беспородных крысах в дозе 0,01 ЛД50.

Нейротропная активность изучалась по тесту взаимодействия с барбитуратами 1 аналептиками. Медикаментозный сон вызывали внутрибрюшинным введением :убнаркотических доз этаминал-натрия (30 мг/кг), а клонико-тонические судороги юспроизводили подкожным введением коразола (80 мг/кг), кордиамина (300 мг/кг) \ камфоры (1,2 г/кг) [К.С. Раевский, 1976]. Нейролептическую активность изучали га модели «вращающегося стержня» у мышей [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000]. Эценку возможного транквилизирующего действия проводили по методике изменения порогов эмоционального реагирования при электроболевом раздражении у фыс. Изучаемые вещества вводили внутрижелудочно за 30 минут до нанесения злектрических стимулов (0,5 мс, 20 Гц, 60 В) [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000].

Анальгетическую активность химических соединений определяли у крыс с использованием модели уксусных корчей, индуцированных внутрибрюшинным зведением 0,75% водного раствора уксусной кислоты, и на модели горя чей пластинки. Противовоспалительную активность изучали на модели острого асептического отека у крыс, вызванного субплантарным введением в заднюю лапку 0,1 мл 10% водной суспензии каолина. Антиэкссудативную активность оценивали на моделях каррагенинового, гистаминового, декстранового и формалинового отеков у крыс [Ф.П. Тринус, 1985].

Изучение диуретической активности у крыс проведено по методу Е.Б. Берхина [1977].

Участие адреналовой системы в противовоспалительном эффекте исследуемого вещества у крыс изучалось по методу, предложенному Ф.П. Тринус [1985].

Изучение влияния бутаксана на течение хронического воспаления проведено на модели адъювантого артрита [А.С. Саратиков, Л.К. Венгеровский, Т.П. Прищеп, 1983].

Жаропонижающую активность бутаксана изучали на моделях пирогеналовой и молочной лихорадок у крыс [Ф.П. Тринус, 1985].

Исследование антимикробной активности проведено на коллекции индикаторных штаммов микроорганизмов. Определение минимальной подавляющей

концентрации проводили методом двойных серийных разведений в жидкой пит тельной среде [Д. Панчини, Ф. Паренти, 1985].

Радиоиммунологическое определение простагландина Е] (ПГЕ[) в сыворот крови проводили с использованием реагентов фирмы «Clinical Assay» (CIIL/ экстрагируя ПГЕ] по методу, описанному B.M.Jaffe et al. [1973].

Уровни калликреина и калликреиногена в сыворотке крови крыс определяли фоне воспаления, вызванного субплантарным введением 0,1 мл 1% раствора кар{ генина [D. Winter et al., 1962], по методу Т.С. Пасхиной, А.В. Кринской [1974].

Антиоксидантные свойства бутаксана изучали на модели индуцированно железо-аскорбат-зависимого перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран м тохондрий печени крыс, которые выделяли одновременно с микросомами мет дом дифференциального центрифугирования по методу Комата в модификащ В.В.Лемешко [1986]. Концентрацию малонового диальдегида оценивали спектр фотометрически по реакции с тиобарбитуровой кислотой [К.Г.Карагуян, 1978].

Изучение ульцерогенного действия бутаксана проводили по методу, предл женному Е. Marazzi-Umberti [1961]. Оценку местнораздражающих свойств соед нений выполняли по методу, описанному В.В. Гацурой [1974].

Полученные результаты обрабатывали общепринятыми методами вариан онной статистики с применением t-критерия Стьюдента и F-критерия Фише [Л.Н. Сернов, В.В. Гацура, 2000].

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

На первом этапе исследований осуществлено компьютерное прогнозиро! ние возможных видов фармакологической активности 48 7-замещенных-8-гид{ зино-3-метилксантинов. В процессе проведения фармакологического скринш была установлена зависимость фармакологической активности от химическ структуры изучаемых веществ.

□ Анальгетическая □ Противовоспалительная □ Диуретическая

□ Аналептическая □ Нейролептическая □ Антидепрессантная

О Кардяотоническая □ Антиконвульсивная □Вазодилататорная

□ Транквилизирующая □ Антибактериальная □ Антигрнбковая

О Антнпротозоидная О Спазмолитическая □Антиоксидантная

□ Короиарорасшнряющая □ Бронхорасширяющая О Антиагрегантная

□ Антпбластомная

Рис. 1 Компьютерный прогноз фармакологической активности 7-замещенных-Е-гидразино-З-метилксантинов.

Оценка острой токсичности изученных химических соединений показала, что величины ЛД5о 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантина находились в интервале от 204,5 до 1375 мг/кг. Наиболее токсичным оказалось соединение 11 (ЛД30 = 204,5 мг/кг). Замена метилбензильного радикала (соед. 11) на 3-хлорбутиленовый (соед. 9), бензильный (соед. 10), этильный (соед. 23), пропильный (соед. 25) и изопропильный (соед. 26) приводила к снижению этого параметра острой токсичности. Наименее токсичным было соединение 24 (ЛДзо = 1375 мг/кг), содержавшее в 7-ом положении гидроксиэтильный радикал.

В соответствии с классификацией К.К. Сидорова [1973], 42 из 48 изученных соединений относились к малотоксичным веществам, а 6 соединений являлись практически нетоксичными веществами.

При изучении влияния 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов (соед. 1-22) на действие этаминал-натрия было установлено, что наиболее высокий де-

примирующий эффект (110,4%; р<0.05) проявляло соединение 14. Замена хлорбензильного радикала (соед. 14) на м-бромбензильный радикал (соед. 15) гидроксипропилбромфениловый эфир (соед. 21) и 2-гидроксипропилбензилоБ эфир (соед. 19) приводило к снижению снотворного действия барбитурат Соединения 2,4, 5, 6 и 7 уменьшали продолжительность наркотического барбу рового сна на 15,3-49,6%. Максимальное действие (49,6%, р<0,01) оказывало с динение 4, содержащее в 7-ом положении ксантинового бицикла изобутилы радикал.

Среди 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 23-36) вь женным депримирующим эффектом (58,7%, р<0,05) обладало соединение 24. мена гидроксиэтильного заместителя (соед. 24) на бензильный, этилфенилы: изопропенильный или З-хлор-Р-бутиленовый радикалы (соед. 32, 33, 34 и 35 с( ветственно) приводило к уменьшению продолжительности барбитурового сн; 43,4-58,7% (р<0,05). Пробуждающее действие было выявлено у соединения которое уменьшало продолжительность наркотического сна на 30,2% (р<0,05)

Все 7-замещенные-8-метилацилгидразино-3-метилксантины (соед. 37-48) тенцировали действие барбитуратов. Наиболее выраженный депримирующий фект (107,6%; р<0,01) проявило соединение 48. Замена в 7-ом положении мол лы 3-метилксантина п-бромфенил-2-гидроксипропилового эфира (соед, 48 гептильный (соед. 42), бензильный (соед. 43) и гексильный (соед. 41) замести приводит к уменьшению депримирующего действия этих веществ.

Депримирукицая активность соединения 14 превосходила действие амина: а аналептические свойства соединения 4 были сопоставимы с эффектом кофеине

Результаты изучения противосудорожной активности показали, что срсу замещенных-8-гидразино-З-метилксантинов (соед. 1-22) выраженное протш дорожное действие проявило соединение 14, которое обеспечивало полную з ту от развития судорог и предотвращало гибель животных. Замена в 7-ом г жении м-хлорбензильного радикала (соед. 14) на 3-хлорбутиленовый и бен:

ный заместители (соед. 9 и 10 соответственно) приводило к уменьшению антиконвульсивной активности этих соединений.

В раду 7-замещенных-8-адилгидразино-3-метшпссантинов (соед. 23-36) и 7-заме-щенньк-8-метилацш1П1дразино-3-метш1ксшгганов (соед. 37-48) протявосудорожное действие проявили соединения 24 и 48. Противосудорожное действие соединения 14 было сопоставимо с аналогичной активностью мидокалмаи фенобарбитала.

При исследовании психотропной активности в тесте влияния исследуемых веществ на агрессивность поведения животных, было обнаружено, что соединение 14 вызывало повышение порога писка на 46,3% (р<0,05) и порога агрессивности на 27,3% (р<0,05). Соединение 7, содержавшее в 7-ом положении ксантиново-го бицикла гептильный заместитель, снижало порог писка на 38,8% (р<0,05) и порог агрессивности на 35,1% (р<0,05).

Кроме того, соединение 14 уменьшало время пребывания мышей на вращающемся стержне на 51,4% (р<0,01). Нейролептические свойства этого вещества были сопоставимы с действием аминазина. Соединение 7 вызывало увеличение времени пребывания мышей на вращающемся стержне на 50% (р<0,05), проявляя психостимулирующее действие, превышавшее активность кофеина на 14,8% (р<0,01).

Среди 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов (соед. 1-22) выраженное анальгетическое действие оказывали соединения 9-11,17, 22, которые уменьшали количество корчей на 21,6-38,2%. Наиболее высокий анальгетический эффект (38,2%, р<0,05) проявило соединение 22. Замена гидроксипропилнафтилового радикала (соед. 22) на бензиловый, метилбензиловый и 2-гидроксипропиловый заместители (соед. 10,11 и 17 соответственно) приводило к снижению анальгетиче-ской активности.

Введение в структуру ксантинового бицикла гексильного, 3-хлорбутилено-вого, бензильного или 2,3-гидроксипропильного радикалов (соед. 6, 9, 10 и 17 соответственно) приводило к утрате анальгетических свойств.

Анальгетическое действие (8,9-53,0%) проявляли большинство 7-замещен-ных-8-ацилгидразино-З-метилксантинов (соед. 23-36). Наиболее сильным аналь-

гетическим эффектом обладало соединение 27 (53%, р<0,01). Введение в 7-ое г ложение вместо бутильного радикала (соед. 27) этильного, пентильного или ге тильного радикалов (соед. 23, 28 и 30 соответственно) приводило к ослаблен! аналъгетических свойств.

60

40 -

20 -

* 1

Т

Т

т

X

— — Г» Г4

Щ Г —

Соединения в с!

Рис. 2. Анальгетическая активность 7-замещенных-8-тдразино-3-метилксантин< анальгина и диклофенака на модели уксусных корчей у крыс (п = 7).

Примечание:* и ** - р < 0.05 и р <0,01 соответственно по отношению к контролю.

В ряду 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 37-4 выраженное анальгетическое действие (25,5-35,6%) проявили соединения 44, 2 43, 45, 41 и 46. Замена этилфенильного радикала (соед. 44) на изопропильнь: гексильный или бензильный радикалы (соед. 39, 41 и 43 соответствен^ способствовало уменьшению анальгетических свойств.

На модели «горячей пластинки» выраженное анальгетическое действие 01< зало соединение 27, уменьшавшее рефлекторную реакцию на 62% (р<0,01).

Среди 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов (соед.1-22) наибольший 1Тивовоспалительный эффект был выявлен у соединения 22, которое вызывало ¡ньшение развития отека на 40,5% (р<0,05). Замена 2-гидроксипропилнафтило-

0 радикала (соед.22) на бензильный или метилбензильный заместители (со-10 и соед.30 соответственно) приводило к уменьшению противовоспалитель-

1 активности.

Наличие в 7-ом положении молекулы 8-ацилгидразино-З-метилксантина бу-[ьного радикала (соед. 27) способствует проявлению наибольшей противовоспа--ельной активности (55%, р<0,01). Введение в 7-ое положение 3-метилксантина лор-Р-бутиленового (соед.35), пентильного (соед.28) и этильного (соед.23) ра-салов сопровождалось уменьшением противовоспалительных свойств (рис.2).

Присутствие в 7-ом положении 8-метилацилгидразино-З-метилксантинов (со-37-48) изопропильного (соед.39), бензильного (соед.43), фенилизопропильного (со-45), этилфенильного (соед.44) и гексильного (соед.41) заместителей приводило к гныпению противовоспалительных свойств с 39,6% до 26,6% (р<0,05).

Установлено, что 7-замещенные-8-гидразино-3-метилксантины (соед. 1-22) вывали влияние на функцию почек. Наиболее высоким диуретическим дейст-зм обладало соединение 22, которое увеличивало диурез за 4 часа на 91% '0,01). Замена гидроксипропилнафтильного радикала (соед. 22) на метилбен-1ьный или фенилэтильный радикалы (соед. 11 и 12) приводило к снижению уретической активности. Кроме того, выраженный антидиуретический эффект оявиляли соединения 7, 10, 16 и 21, которые уменьшали диурез у крыс на 28,8,4% (р<0,05).

В ряду 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 23-36) наи-лыний диуретический эффект (159,1%; р<0,05) оказало соединение 35, которое евосходило действие гипотиазида на 96,4%. Замена З-хлор-Р-бутиленового радива (соед. 35) на этильный, гидроксиэтильный или пропильный радикалы (соед. 23, и 25 соответственно) сопровождалось уменьшением диуретической активности.

^противовоспалительная активность, %

60

40 -

20 -

1

1

X

X

X

X

I

I * 1

Т *

-1-, у К

Сосднпспня

Рис. 3. Противовоспалительная активность производных 7-замещенных-8-] зино-З-метилксантинов, анальгина и диклофенака у крыс (п=7)

Примечание:* и ** - р < 0,05 и р <0,01 соответственно по отношению к контр

Большинство 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксантинов 37-48) вызывали увеличение диуреза. Соединение 46 увеличивало мочеотд! на 113,6 % (р < 0,05). Введение в 7-ое положение молекулы 8-метилац разино-З-метилксантина вместо гидроксиэтильного радикала (соед. 46) э-пильного, изопропильного и пропильного заместителей (соед. 44,39 и 36 сс ственно) приводило к снижению диуретической активности.

Изучение бактериостатического и фунгистатического действия показа большинство 7-замещенных-8-гидразино-3-метш1ксантинов (соед. 1-22) 01 ют умеренное антимикробное действие. Наибольший эффект проявили сс ния 20 и 22, которые подавляли рост спор антракоида (МПК = 62,5 мкг/мл)

Среди 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 23-36) наи-шыний антимикробный эффект оказывали соединения 29 и 31, которые эффек-шно ингибировали рост золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки зюшного тифа, дизентерийной палочки, антракоида, вульгарного протея, возбу-:теля трихофитии и аспергиллы (МПК = 125-250 мкг/мл).

В ряду производных 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксанти-)в (соед. 37-48) также выявлены соединения, которые обладают умеренной ан-1бактериальной и противогрибковой активностью, задерживая рост бактерий и >ибов (МПК = 125-250 мкг/кг). Наиболее активными были соединения 42 и 45, гачения МПК для которых варьировали в диапазоне 62,5-250 мкг/мл.

На основании проведенного фармакологического скрининга для доклиниче-сого изучения отобрано соединение 27 (7-бушл-8-ацилгидразино-3-метилксантин; /таксан), обладающее анальгетическим и противовоспалительным действием.

Анальгетический эффект бутаксана на модели уксусных корчей был изучен в эзах 9 мг/кг, 18 мг/кг, 27 мг/кг и 35 мг/кг. Максимальный анальгетический эф-ект (49,4%, р<0,05) бутаксана наблюдали в дозе 27,0 мг/кг (табл. 1). Эффектив-ая доза (ЭД50) для бутаксана, рассчитанная на модели уксусных корчей по Б.М. Лтабскому [1980], составляет 24 мг/кг. На модели термической болевой реакции утаксан вызывал повышение порога болевой чувствительности ноцицепторов; яальгетическая активность бутаксана на этой модели была сопоставима с аналойным действием диклофенака и анальгина (рис.4).

Антиэкссудативное действие бутаксана изучали на модели острого асептиче-кого воспаления лапки крыс, вызванного субплантарным введением каррагени-а. Установлено, что через 4 часа антиэкссудативная активность бутаксана была опоставима с таковой диклофенака. Бутаксан через . 1-2 часа после введения гис-амина крысам угнетал развитие экспериментального отека на 46,9% (р<0,05), ревосходя при этом действие анальгина на 12,6% (р<0,05).

Бутаксан подавлял развитие формалинового отека на 32,7 % (р<0,05), что в ,1 раза превосходило аналогичное действие диклофенака. На декстрановой мо-

дели отека максимальный ингибирующий эффект бутаксана наблюдался 1

часа после введения и составлял 46,6% (р<0,05), превосходя на 10,2% :

диклофенака и на 11,4% (р<0,05) действие анальгина.

Таблица 1. Анальгетическая активность бутаксана, анальгина и диклофе* модели уксусных корчей у крыс (п=10).

Изучаемые Доза, Количество Анальгетичес!

препараты мг/кг корчей за 30 минут активность, 1

Контроль - 62,5 ± 2,3 -

Бутаксан 4,5 58,1±2,5 7,1

Бутаксан 9,0 49,1 ±2,3 21,4

Бутаксан 18,0 43,3 ± 2,2* 30,7

Бутаксан 27,0 ^ 31,6 ±2,1" 49,4

Бутаксан 35,0 45,4 ± 1,7* 27,4

Диклофенак 8,0 34,3 ±2,2" 45,2

Анальгин 50,0 35,1 ±2,1* 43,8

• •*

Примечание: и - р < 0,05 и р <0,01 соответственно по отношению к контро.]

^атентный период, с

8-

6-

*

т

*

X.

*

т

т

4 -

2-

0 ---,---,---,--1-

Контроль Бутаксан Диклофенак Анальгин

Рис. 4. Анальгетическая активность бутаксана (24 мг/кг), диклофенака (8 м анальгина (50 мг/кг) на модели термической болевой реакции у мышей (п=/ Примечание: * и ** - р < 0,05 и р <0,01 по отношению к контролю.

Бутаксан оказывал высокое антиэкссудативное действие на модели экслери-тального перитонита у крыс. Количество дегранулированных тканевых базофи-i у крыс, леченных бутаксаном, было на 20,7% (р<0,05) меньше, чем в опытной тше (нитрат серебра), и на 10,2% (р<0,05) меньше по сравнению с диклофенаком.

Таким образом, бутаксан оказывал противовоспалительное действие на мо-:и экспериментального перитонита, превосходя по эффективности диклофенак. явленное уменьшение дегрануляции тучных клеток у животных при воздейст-[ бутаксаном позволяет предположить наличие у него мембраностабилизи-эщих свойств.

Антипролиферативная активность бутаксана изучена на модели «paper disk», рыс, леченных бутаксаном и диклофенаком, масса влажной гранулемы была ьше, чем у контрольной группы, на 31,8% (р<0,05) и 28,5% (р<0,05) соответ-;нно. Снижение массы сухой гранулемы под воздействием бутаксана состави-(8,7 мг, что было на 28,2% (р<0,05) меньше, чем в контрольной группе. Следо-:льно, в отношении антипролиферативной активности действие бутаксана бы-опоставимо с действием диклофенака.

В качестве модели коллагеноза использовали адъювантный артрит. Экспери-гальный синдром вызывали введением адъгованта Фрейнда. У животных тной группы в период манифестации адъювантного артрита (14-28 день) на-дались признаки интоксикации: прирост массы тела на 28-е сутки был в 1,4 меньше, чем у животных контрольной группы (р<0,05). Установлено сниже-аппетита и потребление корма у крыс с адъювантным артритом. Увеличение метра хвоста на фоне действия бутаксана было на 14-е сутки 0,6±0,03 мм и 3,04 мм на 28-е сутки опыта, что было в 5,8-7,9 раза (р<0,01) меньше анало-ых показателей нелеченых крыс; кроме того, бутаксан вызывал также ъшение интенсивности воспалительной реакции и объема пораженной лапки г. 2).

Индукция адъювантного артрита у крыс приводила к существенным измене-лабораторных показателей крови, которые свидетельствовали о наличии вое-

палительного процесса. Скорость оседания эритроцитов с экспериментальной логией возрастала по сравнению с исходными значениями на 6,1 ±0,09 м; (р<0,05). В контрольной группе наблюдался выраженный лейкоцитоз: общее I чество лейкоцитов возросло на 14-е сутки на (3,9+ 0,08) • 109 л'1, на 28-е сутки (16,0 ± 0,11) • 109 л'1 (р<0,05). Анализ лейкоцитарной формулы контрольной гр; в динамике эксперимента выявил снижение количества сегментоядерных не! филов и незначительное увеличение количества эозинофилов, что указывало н личие воспалительного процесса в организме животных с адъювантным артрит Таблица 2. Антиэкссудативная активность бутаксана и диклофенака на мо

Препараты Исходный объем воспаленной лапки, мл Прирост объема лапки (мл) через ...

7 суток 14 суток 28 суток

Нелеченные животные 1,52 100% 1,41 ±0,09 92,7% 1,34 ±0,08 88,1% 1,26 ±0,С 82,9%

Бутаксан (24 мг/кг) 1,64 100% 0,76 ±0,05* 46,3% 0,52 ± 0,07* 31,7% 0,42 ± 0,0( 25,6%

Диклофенак (8 мг/кг) 1,59 100% 0,78±0,04* 49,0% 0,56±0,07* 35,2% 0,44 ±о,о: 27,6%

Примечание: * - р < 0,05 по отношению к контролю.

При лечении адъювантного артрита бутаксаном через 14 дней после введ количество сегментоядерных нейтрофилов увеличилось на 34,8% (р<0,05), сс жание лимфоцитов снизилось на 33,1% (р<0,05) по сравнению с контролем., лофенак вызвал увеличение количества сегментоядерных нейтрофилов на 2< (р<0,05), а содержание лимфоцитов при этом снизилось на 27% (р<0,05).

Спустя 28 дней после курсового лечения бутаксаном количество сегмея дерных нейтрофилов увеличилось на 35,2% (р<0,05), содержание лимфоц снизилось на 15,2% (р<0,05) по сравнению с контролем. Под влиянием дикл нака количество сегментоядерных нейтрофилов увеличилось на 33% (р<0,0 содержание лимфоцитов снизилось на 23,1% (р<0,05). Таким образом, при л нии адъювантного артрита терапевтическая эффективность бутаксана реализ лась за счет роста сегментоядерных нейтрофилов, снижения количества лимф тов и была сопоставима с действием диклофенака.

Применение бутаксана привело к увеличению показателей свертывания крови. На 14-ый день время свертывания крови увеличилось на 15,9 ±0.12 с, а на 28-ой день - на 18,1 ± 0,14 с. Препарат сравнения диклофенак увеличивал время свертывания крови на 14-е сутки на 12,0 ±0,09 с, а ка 28-е сутки-на 13,3 ±0,11 с. Таким образом, на модели адъювантной болезни бугзксан проявлял выраженную противовоспалительную активность, нормализовал скорость оседания эритроцитов, вызывал рост сегментоядерных нейтрофидов и оказывал антиагрегантное действие.

Бутаксан не оказывал влияния на температуру тела у интактных животных. На модели пирогеналовой лихорадки бутаксан вызывал снижение температуры (на 2,1±0,02°С, р<0,05), а после введения днклофенака жаропонижающий эффект был меньшим (1,1±0,01°С, р<0,05). На модели молочной лихорадки у крыс бутаксан вызывал снижение температуры тела у крыс на 1,4±0,02сС (р<0,05), а диклофенак - на 0,9±0,01°С (р<0,05). Таким образом, в опытах на крысах с хшрогенало-вой и молочной лихорадками бутаксан оказался эффективнее в сравнении с дик-лофенаком.

Учитывая патогенетическую роль простагландинов (ПГ) в развитии воспалительного процесса, s опытах ка крысах было изучено влияние бутаксана на уровень i Ubi с помощью радаогоймунологического метода. Бутаксан оказывал выраженное угнетающее действие на уровень IIFEi у крыс с каррагешшовым отеком, снижая его содержание в плазме крови на 41.3% (р<0,05) по сравнению с ин-тактными животными (табл. 3). Диклофенак также проявяял ингибнрующее действие, уменьшая количество ПНЕ; в плазме на 37,9% (р<0,05).

Исследование влияния бутаксана на активность калликреин-кининовой системы показ&яо, что у крыс с харрагеяиновым отеком, получавших бутаксан, уровень калликреиногева повышался ка 15,5% (р<0,05), а содержание калликреина уменьшалось на 46,3% (р<0,0!) по сравнению с опытной группой.

При изучении актиоксидантных свойств бутаксана на модели индуцированного ПОЛ мембран митохондрий печени крыс, было установлено, что добавление

бутаксана к гомогенату приводило к значительному иншбированию аскорбатза-висимого ПОЛ. Бутаксан в концентрации 25 мкМ (7,0 мг/л) снижал накопление МДА при всех способах индукции ПОЛ на 79-84% (р<0,01) по сравнению с контролем. При Ре2+-аскорбатзависимом ПОЛ диклофенак снижал накопление МДА только в концентрациях 500мкМ (159,1 мг/л) и 800 мкМ (254,5 мг/л) на [44,9% (р<0,01) и 65,6% (р<0,001) соответственно]. Ингибирование Ре2+-аскорбат-зависимого ПОЛ диклофенаком на 50% наблюдалось при концентрации 578 мкМ (183,9 мг/л), т.е. эффективная концентрация бутаксана в 9 раз ниже таковой дик-лофенака. Таким образом, бутаксан обладает антиоксидантными свойствами.

Таблица 3. Влияние бутаксана и диклофенака на содержание ПГЕ] в плазме крови крыс с экспериментальным каррагениновым отеком (п=10).

Условия опыта Доза, мг/кг Содержание ПГЕ| в плазме крови

нмоль/л %

Контроль /интактные/ - 8,38±0,18 100

Каррагениновый отек - 12,34±0,27* 147,3

Бутаксан 24,0 5,20±0,22*+ 62,1

Диклофенак 8,0 4,92±0,17*+ 58,7

Примечание. * - р < 0,05 по отношению к контролю;+ - р < 0,01 по отношению к группе крыс с

каррагениновым отеком.

При исследовании роли адреналовой системы в механизме противовоспалительного действия бутаксана установлено, что динамика антиэкссудативного эффекта бутаксана у адреналэктомированных животных не отличается от таковой ) неоперированных крыс. Полученные результаты позволяют исключить возможность реализации противовоспалительного действия бутаксана за счет его влия ния на кору надпочечников у животных.

При исследовании влияния бутаксана на слизистую оболочку желудочно кишечного тракта у крыс было установлено, что ежедневное введение бутаксана 1 дозах 12 мг/кг, 24 мг/кг и 50 мг/кг в течение 14 дней не вызывает изменений ели зистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

Кроме того, было изучено возможное повреждающее действие бутаксана ] диклофенака на слизистую желудочно-кишечного тракта у крыс, предварительн

давших в течение 24 часов. Бутаксан в дозе 10 мг/кг не вызывал повреждения шстой и симптомов, предшествующих деструкции. Ульцерогенное действие 1ксана проявлялось только при введении в дозах 100 и 500 мг/кг: повреждения зистой наблюдались у 20% и 40% животных соответственно. Индекс изъязв-\т составил в дозе 100 мг/кг был равен 0,04 ± 0,01, а в дозе 500 мг/кг - 0,16 ± что было в 58 раз и в 23,7 раза меньше, чем при введении аналогичных доз гилсалициловой кислоты.

Действие внутрижелудочного введения бутаксана на слизистую оболочку удка и кишечника крыс изучалось также в условиях экспериментальных язв, ванных 96% этиловым спиртом. Индекс изъязвления у животных контрольной тпы составлял 2,4±0,11. Бутаксан в дозе 10 и 100 мг/кг не вызывал достовер-: различий в степени изъязвления (индекс 2,1±0,11 и 2,2±0,13) по отношению к трольной группе, в то время как ацетилсалициловая кислота в дозе 10 и 100 сг значительно потенцировала ульцерогенное действие этилового спирта. При исследовании местнораздражающего действия бутаксана у кроликов ус-овлено отсутствие изменений слизистой конъюнктивы глаз и диаметра зрачка ез 6 часов и на вторые сутки после нанесения 1% или 3% раствора бутаксана ;лизистую конъюнктиву глаза. Следовательно, бутаксан не обладает местно-цражающим действием. Оценка острой токсичности бутаксана у мышей показала, что величина ЛД50 внутрибрюшинном введении составляла 890 мг/кг, при подкожном введении — мг/кг, при пероральном введении - 1260 мг/кг. Значения ЛД50 для бутаксана у [с при внутрибрюшинном, подкожном и пероральном путях введения были рав-960 мг/кг, 1075 мг/кг и 1285 мг/кг соответственно.

При оценке общего токсического действия бутаксана у крыс, которым внутри-гудочно вводили это вещество в дозах 24, 100 и 300 мг/кг/сут в течение трех меев, были установлены хорошая переносимость и отсутствие выраженных измени общего состоянии и поведения животных. Существенных различий развития

и прибавки в массе тела между крысами опытных групп и крыс контрольной груг не наблюдалось.

Таким образом, проведенный комплекс исследований позволяет сделать вы о том, что бутаксан обладает выраженным противовоспалительным, анальгеп ским, жаропонижающим, антиоксидантньш, мембраностабилизирующим и ант! регантным действием, ингабирует активность калликреин-кининовой системь биосинтез простагландинов Е).

Преимуществами нового фармакологического средства — бутаксана по сраЕ нию с имеющимися нестероидньши противовоспалительными лекарственнь средствами является наличие совокупности фармакологических свойств, позвол щих оказывать значительное влияние на течение воспалительных процессов, п держивать барьерные функции мембран и снижать агрегацию тромбоцитов, при сутствии местнораздражающего и ульцерогенного действия.

Наличие совокупности фармакологических свойств, высокая эффективно лечения воспалительных заболеваний, широта терапевтического действия поз ляет включить полученные результаты в состав нормативно-технической до ментации на новое фармакологическое средство для представления в Минист ства здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разре] ния на проведение клинических испытаний при лечении воспалительных забо ваний различного генеза.

ВЫВОДЫ

1. Среди 48 исследованных 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов пу предварительного компьютерного анализа и скрининговых фармакологичеа исследований выявлены химические соединения, обладающие анальгети ской, противовоспалительной, диуретической, антиконвульсивной и депри; рующей активностями, и установлены элементы зависимости структу активность для этих видов фармакологического действия.

2. Соединение 14 (7-замещенный-8-гидразино-3-метилксантин) обладает вь; женным депримирующим действием, значительно увеличивая продолжите

¡отворного действия этаминал-натрия у крыс, и проявляет существен-иконвульсивную активность при индуцированных судорогах у крыс, тмую с действием мидокалма и фенобарбитала.

ние 35 (7-замещенный-8-ацилгидразино-3-метилксантин) оказывает шое диуретическое действие у крыс, которое превосходит аналогичное г гипотиазида и сопоставимо с эффектом фуросемида. :ние 27 (7-замещенный-8-ацилгидразино-3-метилксантин; бутаксан), ет выраженное анальгетическое действие на модели индуцированных й кислотой корчей и в тесте горячей пластинки у крыс и существенное воспалительное действие на моделях индуцированного каолином, кар-ом, гистамином, декстраном или формалином отека лапки и модели ;ского адъювантного артрита у крыс; противовоспалительное действие на не опосредовано корой надпочечников.

н проявляет значительную жаропонижающую активность на моделях 1аловой и молочной лихорадки у крыс, более эффективно предотвращая :ние температуры тела, чем диклофенак, и оказывает высокое антиэкс-ное действие на модели вызванного нитратом серебра перитонита у «еньшая количество дегранулированных тканевых базофилов. н обладает способностью ингибировать синтез простагландинов и ак-:ь калликреин-кининовой системы у крыс с каррагениновым воспалени-нетать индуцированное перекисное окисление липидов мембран мито-й печени крыс in vitro.

ih не оказывает существенного ульцерогенного действия в желудочно-юм тракте крыс или местнораздражающего действия на слизистую конъ-;у глаза кроликов.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ

ченные результаты зависимости фармакологической активности от хи-структуры 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов используются дении научно-исследовательских работ и в учебном процессе на кафед-

pax фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, биохимии и микробш логии Национальной фармацевтической академии Украины и кафедр фармакол< гии, органической и неорганической химии Запорожского государственного mi дицинского университета.

Результаты доклинического изучения специфической активности, местнора дражающих и ульцерогенных свойств бутаксана будут включены в нормативш техническую документацию на новое лекарственное средство с целью представ ления в Министерство здравоохранения Российской Федерации и Украины и да получения разрешения на проведение клинических испытаний.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Взаимодействие 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов с этамз нал-натрием // Междун.сб.науч.трудов IX начн.-практ.конф. по созданию и anpo6¡ ции новых лекарственных средств 13-14 января Минск, 1999, Т. IX.- С. 180-181.

2. Диуретическая активность 7-замещенных-8-гидразино-3-метиксантина// M¡ териалы V национального съезда фармацевтов Украины.-Харьков, 1999,-С.182-184.

3. Исследование нейротропной активности 7-замещенных-8-гидразино-; метиксантинов//Лекарства-человеку 1999.-T.il, № 3 С. 187-190.

4. Взаимодействие 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метиксантинов с ан; лептиками//Лекарства-человеку 2000.-Т.12, № 1 С. 178-179.

5. Анальгетическая и антиэкссудативная активность производных ксантш // Лекарства-человеку 2000.-Т.13, №1.-С. 24-25.

6. Диуретическая активность некоторых производных З-метил-7-R-í ацилгидразиноксантинов //Лекарства-человеку 2001.-Т.14, № 1.-С. 120-121.

7. Противовоспалительная активность производных 3-метил-7-11-8-ацилги; разиноксантинов//Лекарства-человеку 2001.-Т. 14, № 1.-С. 122-123.

8. Анальгетическая и противовоспалительная активность дизамещенны производных ксантина // Лекарства-человеку 2001 .-Т. 14, № 1 .-С. 98-102.

9. Влияние замещенных гидразиноксантинов на эмоциональные реакции Лекарства-человеку 2001.-Т. 15, № 1-2.-С. 120-121.

10. Исследование безопасности бутаксана // Лекарства-человеку 2001.-Т. 1: № 1-2.-С. 184-187.

Актуальность проблемы.

Важной проблемой современной фармакологической науки является создание новых, более эффективных лекарственных препаратов для регуляции воспалительного процесса различного генеза.

В настоящее время в практическом здравоохранении применяется большое количество нестероидных противовоспалительных лекарственных средств (НПВС) [11, 46,62, 66], которые наряду с высоким эффектом, могут оказывать нежелательное побочное действие, что ограничивает их клиническое использование [19, 40, 41, 42, 52], в связи с этим, расширение арсенала отечественных безопасных НПВС является актуальной проблемой современной фармакологической науки.

Известно, что пуриновые нуклеотиды участвуют во многих физиологических процессах. В настоящее время в Запорожском государственном медицинском университете проводится целенаправленный синтез химических соединений в ряду производных ксантина, с целью создания и разработки новых потенциальных противовоспалительных лекарственных средств [100,125,126].

Вышеизложенное послужило основанием для изучения фармакологической активности 48-ми впервые синтезированных веществ среди 7-замещенных-8-гидразино-З-метилксантина.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Национальной фармацевтической академии Украины и Запорожского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 02.93.0002479, шифр темы ВН 10.08.0036.97), а также целевой программы создания высокоэффективных противовоспалительных лекарственных препаратов.

Цель исследования.

Целью настоящего исследования является исследование фармакологической активности новых производных 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксанти-на, а также разработка и создание на основании результатов фармакологического скрининга исследуемых производных потенциального противовоспалительного препарата.

Задачи исследования.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Провести анализ вероятностного прогноза возможного спектра фармакологической активности производных 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантина с помощью комплекса программ "ОРАКУЛ".

2. Провести фармакологический скрининг 48-ми новых производных 7-заме-щенных-8-гидразино-З-метилксантина на выявление нейротропной, противосу-дорожной, противовоспалительной, анальгетической, диуретической и антимикробной актиьности.

3. Выявить и отобрать наиболее активное соединение, обладающее противовоспалительной и анальгетической активностями для проведения углубленного фармакологического изучения.

4. Изучить специфическую фармакологическую активность, ульцерогенное и местнораздражающее действие отобранного потенциального лекарственного средства.

Научная новизна исследований.

Впервые проведен компьютерный прогноз возможных видов фармакологической активности 48-ми производных 7-замещенных-8-гидразино-3-метил-ксантина с помощью комплекса программ "ОРАКУЛ". Изучена зависимость фармакологической активности от химической структуры 7-замещенных-8-гид-разино-3-метилксантина. Выявлены активные соединения, обладающие выраженной противовоспалительной, анальгетической, депримирующей и диуретической активностями. Результаты углубленного фармакологического скрининга позволили отобрать для доклинического изучения соединение 27, проявляющее выраженные противовоспалительные и анальгетические свойства. Проведено изучение специфической фармакологической активности, а также ульцероген-ного действия и местнораздражающих свойств субстанции нового фармакологического вещества бутаксан.

Практическая значимость работы.

Отобраны перспективные вещества, обладающие противовоспалительной, депримирующей, противосудорожной, анальгетической и диуретической активностями, превосходящими таковые лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике.

Проведено экспериментальное изучение фармакологической активности бутаксана, обладающего выраженным противовоспалительным и анальгетичес-ким действием без раздражающего и ульцерогенного эффекта, что дает основание для дальнейших исследований по разработке и созданию нового потенциального противовоспалительного препарата нестероидной структуры.

Полученные результаты изучения специфической бутаксана будут использованы при подготовке материалов на новое лекарственное средство с целью представления в Министерства Здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний.

Результаты фармакологического скрининга новых химических соединений среди 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантина используются в учебном процессе на кафедрах фармакологии, фармакотерапии с фармакокинетикой, биохимии и микробиологии Национальной фармацевтической академии Украины и кафедрах фармакологии, органической и неорганической химии Запорожского государственного медицинского университета.

Апробация работы.

Отдельные фрагменты работы были представлены на научных конференциях: IX научно-практическая конференция по созданию и апробации новых лекарственных средств (Минск, 1999); V национальный съезд фармацевтов Украины (Харьков, 1999). Диссертационная работа доложена на совместном заседании кафедр фармакотерапии с фармакокинетикой, фармакологии, патологической физиологии, микробиологии, биохимии, фармацевтического анализа и фармакогнозии Национальной фармацевтической академии Украины (протокол № 6 от 7 сентября 2001 г).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 156 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций, содержит 41 таблицу и 25 рисунков. Библиографический список литературы, содержит 262 наименования, в том числе 140 отечественных и 122 зарубежных авторов.

ВЫВОДЫ

1. Среди 48 исследованных 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов путем предварительного компьютерного анализа и скрининговых фармакологических исследований выявлены химические соединения, обладающие анальгетической, противовоспалительной, диуретической, антиконвульсивной и депримирующей активностями, и установлены элементы зависимости структура-активность для этих видов фармакологического действия.

2. Соединение 14 (7-замещенный-8-гидразино-3-метилксантин) обладает выраженным депримирующим действием, значительно увеличивая продолжительность снотворного действия этаминал-натрия у крыс, и проявляет существенную антиконвульсивную активность при индуцированных судорогах у крыс, сопоставимую с действием мидокалма и фенобарбитала.

3. Соединение 35 (7-замещенный-8-ацилгидразино-3-метилксантин) оказывает выраженное диуретическое действие у крыс, которое превосходит аналогичное действие гипотиазида и сопоставимо с эффектом фуросемида.

4. Соединение 27 (7-замещенный-8-ацилгидразино-3-метилксантин; бутаксан), оказывает выраженное анальгетическое действие на модели индуцированных уксусной кислотой корчей и в тесте горячей пластинки у крыс и существенное противовоспалительное действие на моделях индуцированного каолином, каррагенином, гистамином, декстраном или формалином отека лапки и модели хронического адъювантного артрита у крыс; противовоспалительное действие бутаксана не опосредовано корой надпочечников.

5. Бутаксан проявляет значительную жаропонижающую активность на моделях пирогеналовой и молочной лихорадки у крыс, более эффективно предотвращая повышение температуры тела, чем диклофенак, и оказывает высокое анти-экссудативное действие на модели вызванного нитратом серебра перитонита у крыс, уменьшая количество дегранулированных тканевых базофилов.

6. Бутаксан обладает способностью ингибировать синтез простагландинов и активность калликреин-кининовой системы у крыс с каррагениновым воспалением и угнетать индуцированное перекисное окисление липидов мембран митохондрий печени крыс in vitro.

7. Бутаксан не оказывает существенного ульцерогенного действия в желудочно-кишечном тракте крыс или местнораздражающего действия на слизистую конъюнктиву глаза кроликов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На первом этапе проведенных исследований осуществлено компьютерное прогнозирование возможных видов фармакологической активности 48-ми производных замещенных-8-гидразино-З-метилксантина. В процессе проведения фармакологического скрининга была установлена зависимость фармакологической активности от химической структуры изучаемых веществ.

Установлено, что острая токсичность (лд50) 7-замещенных-8-гидразино-3-мегилксантинов (соед. 1-22) находится в интервале от 204,5 до 750 мг/кг. Наиболее токсичным было соединение 11, лд50 которого равно 204,5 мг/кг. Замена метилильного (соед. 11), радикала на бензильный (соед. 10), м-хлорбен-зильный (соед. 14) и 3-хлорбутиленовый (соед. 9) приводит к снижению острой токсичности. Среди изученных 7-замещенных 8-ацилгидразино-З-метилксанти-на (соед. 23-36) лд50 находиться в диапазоне от 225 мг/кг до 1375 мг/кг. Наиболее токсичными были соединения, содержащие в 7-м положении молекулы 3-метилксантина нонильный (соед. 31), гептильный (соед. 30), 2-гидрокси-пропиловый эфир нитробензола (соед. 36) и З-хлор-Р-бутиленовый (соед. 35) радикалы. В данном ряду наименее токсичным было вещество, содержащее в 7-м положении гидроксиэтильный (соед. 24), радикал, лд50 которого равна 1375 мг/кг, а замена его на этильный (соед. 23), пропильный (соед. 25), изопропиль-ный (соед. 26) и бензильный (соед, 32) заместители способствует увеличению острой токсичности.

Острая токсичность 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксан— тинов (соед. 37-48), была в пределах от 275 до 1342 мг/кг. Наиболее токсичным было соединение 42, имеющее в 7-м положении гептильный заместитель; ЛД50 этого соединения равна 275 мг/кг. Замена гептильного радикала на гексильный (соед. 41), фенилизопропильный (соед. 45) и изобутильный (соед. 40) приводит к уменьшению острой токсичности. Замена указанных радикалов на этильный (соед. 37) я гидроксиэтильный (соед.46) приводит к получению практически нетоксичных веществ.

Таким образом, по классификации К.К. Сидорова [123] из 48-ми соединений 42 относятся к малотоксичным и 6 являются практически нетоксичными веществами.

При исследовании взаимодействия производных 7-замещенных-8-гидра-зино-3-метилксантина (соед. 1-22) с этаминап-натрием установлено, что большинство веществ увеличивают продолжительность барбитурового сна на 8,8 -110,4%. Наибольший депримирующий эффект (110,4%; р < 0,05). был выявлен у соединения 14. Замена м-хлорбензильного (соед. 14) радикала на м-бромбен-зильный (соед. 15), 2- гидроксипропилбромфениловый эфир (соед. 21), 2-гид-роксипропилбензиловый эфир (соед. 19) и 2-гидроксипропилфениловый эфир (соед. 18) приводят снижению пролонгирующего действия барбитуратов.

Антагонизм к действию барбитуратов проявили соединения 2,4, 5, 6 и 7, которые уменьшали продолжительность наркотического сна на 15,3-49,6%. Наибольший психостимулирующий эффект (49,6 %, р < 0,01) оказало соединение 4, содержащее в 7-м положении ксантинового бицикла изобутильный радикал, а замена его на гептильный (соед. 7), гексильный (соед. 6) и пропильный (соед. 2) заместители приводит к уменьшению аналептических свойств.

Среди 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 23-36) выраженный депримирующий эффект (58,7 %, р<0,05) оказывало соединение 24. Замена гидроксиэтильного (соед. 24) заместителя на бензильный (соед. 32), этилфенильный (соед. 33), 3-хлор-|3-бутиленовый (соед. 35) и изопропенильный (соед. 34) радикалы приводит к уменьшению продолжительности наркотического сна на 43,4-58,7% (р<0,05). Пробуждающее действие было выявлено у соединений 25,26 и 2, которые уменьшали продолжительность наркотического сна на 5,7-30,2 %.

Все 7-замещенные-8-метилацилгидразино-3-метилксантина (соед. 37-48) потенцируют действие барбитуратов. Наибольший депримирующий эффект (107,6%; р<0,01) проявило соединение 48. Замена в 7-м положении молекулы 3-метилксантина п-бромфенил-2-гидроксипропилового эфира (соед. 48) на гептильный (соед. 42), бензильный (соед. 43) и гексильный (соед. 41) заместители приводит к уменьшению депримирующего действия этих веществ.

Сопоставление нейротропной активности показало, что депримирующая активность соединений 14, 48, 15 и 21 превосходит действие аминазина, а ана-лептические свойства соединений 4 и 7 сопоставимы с эффектом кофеина.

Результаты изучения противосудорожной активности показали, что среди 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов (соед. 1-22) выраженное противосудорожное действие проявило соединение 14, которое оказывало полную защиту от судорог и предотвращало гибель животных. Замена в 7-м положении м-хлорбензильного (соед. 14) радикала на 3-хлорбутиленовый (соед. 9) и бензильный (соед. 10) заместители приводит к уменьшению антиконвульсивной активности.

В ряду 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-мегилксантинов (соед. 23-36) противосудорожное действие проявило только соединение 24. Потенцирование аналептиков оказывали соединения 25,26 и 29, которые стимулировали судороги с четкой фазой тонической экстензии и гибель крыс наступала в 40-80% случаев.

Среди 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 3748) противосудорожное действие оказывало соединение 48, содержащее в 7-м положении молекулы 3-метилксантина п-бромфенил-2-гидроксипропиловый эфир.

Таким образом, соединение 14 обладает противосудорожным действием и по активности сопоставимо с мидокалмом и фенобарбиталом.

При исследовании влияния 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов на агрессивность поведения животных установлено, что наиболее активным оказалось соединение 14, которое вызывало повышение порога писка на 46,3 % (р<0,05) и порога агрессивности - на 27,3 % (р<0,05). Вещества, имеющие в 7-м положении ксантинового бицикла гексильный (соед. 6), гептильный (соед. 7) и гексильный (соед. 29) заместители, снижает порог писка и агрессивности у животных. Так, соединение 7 снижало порог писка на 38,8 % (р<0,05) и порог агрессивности на 35,1%(р<0,05).

Соединение 14 уменьшает время пребывания мышей на вращающемся стержне на 51,4 % (р<0,01). Нейролептические свойства этого вещества сопоставима с действием аминазина. Соединение 7 вызывало увеличение времени пребывания мышей на вращапщшся стержне на 50 % (р<0,05), проявляя психостимулирующее действие и превосходит активность кофеина на 14,8 % (р<0,01).

Среди 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов (соед. 1-22) аналь-гетическое действие оказывают соединения 9-11, 17, 22, которые уменьшают количество корчей на 21,6-38,2 %. Наибольший анальгетический эффект (38,2%, р<0,05) проявило соединение 22. Замена гидроксипропилнафтилового (соед.22) радикала на 2-гидроксипропилоЕый (соед. 17), бензиловый (соед. 10) и метилбензиловый (соед. 11) заместители приводит к уменьшению анальгетической активности.

Введение в структуру ксантинового бицикла гексильного (соед. 6), 3-хлорбутиленового (соед. 9), бензильного (соед. 10) и 2,3-гидроксипропильного (соед. 17) приводит к утрате анальгетических свойств у данных веществ.

Анальгетический эффект (8,9-53,0 %) проявили большинство 7-замещен-иых-8-ацилгидразино-З-метилксантинов (соед. 23-36). Наибольший анальгетический эффект (53%, р<0,01) оказало соединение 27. Введение в 7-е положение пентильного (соед. 28), гептильного (соед. 30), этильного (саед. 23) и гексильного (соед. 29) вместо бутилового (соед. 27), приводит к снижению анальгетических свойств.

В ряду 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксантинов (соед 3748) выраженное анапьгетическое действие (25,5-35,6 %) оказали соединения 44, 39, 43, 45, 41 и 46. Замена этилфенильного (соед. 44) радикала на изопропиль-ный (соед. 39), бензильный (соед. 43) и гексильный (соед. 41) способствуют уменьшению анальгетических свойств.

На модели «горячей пластинки» выраженное анальгетическое действие оказало соед. 27, уменьшая рефлекторную реакцию на 62 % (р<0,01).

Среди 7-замещенных-8-гидразино-3-мегилксантинов (соед. 1-22) противовоспалительными свойствами обладают соединения 1, 3, 8-13, 16-19 и 22, которые снижают развитие экссудативной реакции на 5,6-32,6 %. Наибольший противовоспалительный эффект был выявлен у соединения 22, которое вызывало уменьшение развития экспериментального отека на 40,5 % (р<0,05). Замена 2-гидроксипропилнафтилового (соед. 22) радикала на бензильный (соед. 10), метилбензильный (соед. 30) и фенилэтильный (соед. 12) заместители приводит к уменьшению противовоспалительной активности с 40,5 % до 23,5 %.

Производные 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 23-36) снижают развитие экссудативной реакции на 9,7-55 %. Наличие в 7-м положении молекулы 8-ацилгидразино-З-метилксантина бутильного (соед. 27) радикала способствует проявлению наибольшей противовоспалительной активности (55 %, р<0,01). Введение в 7-е положение 3-мегилксантина З-хлор-Р-бу-тиленового (соед. 35), пентильного (соед. 28), этильного (соед. 23) и изопро-пильного (соед. 26) радикалов способствует уменьшению противовоспалительных свойств.

Наличие в 7-м положении молекулы 8-метилацилгидразино-З-метилксан-тина (соед.37-48) изопропильного (соед. 39), бензильиого (соед. 43), фенилизо-пропильного (соед. 45), этилфенильного (соед. 44) и гексильного (соед. 41) заместителей приводит к уменьшению противовоспалительных свойств с 39,6 % до 26,6 %.

Таким образом, соединение 27 по противовоспалительной активности превосходит на 5,6 % действие диклофенака.

Установлено, что 7-замещенные-8-гидразино-3-метилксантинов (соед. 122) оказывают выраженное влияние на выделительную функцию почек. Наибольший диуретический эффект оказывает соединение 22, которое увеличивает диурез за 4 часа на 91 % (р<0,01). Замена гидроксипропилнафтильного (соед.

22) радикала на фенилэтильный (соед. 12) и метилбензильный (соед. 11) приводит к снижению диуретической активности с 91 % до 32,8 %. Антидиуретический эффект проявили соединения 7,10,16 и 21, которые уменьшили диурез у крыс на 28,8-36,4 %.

В ряду 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 23-36) наибольший диуретический эффект (159,1%; р<0,05) оказало соединение 35 и превосходит гипотиазид на 96,4%. Замена 3-хлор-р-бутиленового (соед. 35) радикала на гидроксиэтильный (соед. 24), этильный (соед. 23) и пропильный (соед. 25) приводит к снижению диуретической активности.

Большинство 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 37-48) вызывали увеличение диуреза на 65,3-113,6 %. Наибольший диуретический эффект (113,6%; р < 0,05) оказывало соединение 46. Введение в 7-е положение молекулы 8-метилацилгидразино-З-метилксантина вместо гидрок-сиэтильного (соед. 46) радикала, этилфенильного (соед. 44), изопропильного (соед. 39) и пропильного (соед. 36) заместителей приводит к снижению диуретической активности. Антидиуретический эффект был выявлен у соединений 47 и 48, которые угнетали выделение мочи на 22,3 % и 35,7 % соответственно.

Изучение бактериостатического и фунгистатического действия показало, что большинство 7-замещенных-8-гидразино-3-метилксантинов (соед. 1-22) оказывают умеренное антимикробное действие. Наибольший эффект проявили соединения 20 и 22, которые при МПК 62,5 мкг/мл подавляют рост спор ан-тракоида.

Среди 7-замещенных-8-ацилгидразино-3-метилксантинов (соед. 23-36) наибольший антимикробный эффект проявили соединения 29 и 31 которые при МПК 15-250 мкг/мл подавляют рост золотистого стафилококка, кишечной палочки, палочки брюшного тифа, дизентерийной палочки, антракоида, вульгарного протея, возбудителя трихофитии и аспергиллы.

В ряду производных 7-замещенных-8-метилацилгидразино-3-метилксан-тинов (соед. 37-48) также выявлены соединения, которые обладают умеренной антибактериальной и противогрибковой активностью, задерживая рост бактерий и грибов в МПК 125-250 мкг/кг. Наиболее активными были соединения 42 и 45, МПК которых находится в пределах 62,5-250 мкг/мл.

Таким образом, максимальный эффект из всех 48-ми исследованных веществ давали соединения 20 и 22, однако они уступают препаратам сравнения. На спектр и силу антибактериальной и фунгистатической активности значимо влияет модификация заместителей в молекуле 7-замещенных 8-гидразино-З-метилксантинов.

Проведенный фармакологический скрининг 48 производных 7-замещен-ных-8-гидразино-З-метилксантина позволил отобрать для доклинического изучения соединение 27: 7-бутил-8-ацилгидразино-3-метилксантин (условное название - бутаксан), обладающий анальгегическим и противовоспалительным действием.

На модели уксусных корчей установлен дозозависимый анальгетический эффект бутаксана. Максимальный анальгетический эффект (49,4%, р<0,05) бутаксана наблюдали в дозе 27,0 мг/кг. Эффективная доза (ЕД50), рассчитанная на модели уксусных корчей по Б.М. Штабскому [65] для бутаксана, составляет 24 мг/кг.

На модели термической болевой реакции бутаксан вызывал повышение порога болевой чувствительности ноцицепторов и превосходил анальгетичес-кую активность диклофенака на 11,8% и анальгина - на 9,4%.

Антиэкссудативное действие бутаксана изучали на модели острого асептического воспаления лапки крыс, вызванного субплантарным введением кар-рагенина. Установлено, что через 4 часа антиэкссудативная активность бутаксана была сопоставима с таковой диклофенака, что указывает на вероятный общий механизм действия: ингибирование активности калликреин-кининовой системы и биосинтеза простагландинов.

Бутаксан через 1-2 часа после введения угнетал развитие экспериментального ) отека на 46,9% (р<0,05), вызванного субплантарным введением гистамина, превосходил действие диклофенака и анальгина соответственно на 4,8% и 12,6%.

Подавлял развитие формалинового отека бутаксан на 32,7% (р < 0,05), что в 3,1 раза превосходит таковое действие диклофенака. На декстрановой модели максимальный ингибирующий эффект бутаксана наблюдался через 2 часа после введения и составил 46,6% (р < 0,05), что на 10,2% превосходило таковое действие диклофенака и на 11,4% - анальгина.

Высокая противовоспалительная активность бутаксана на различных моделях отеков (каррагениновом, гистаминовом, формалиновом и декстрано-вом) по терапевтическому индексу превосходила диклофенак.

Бутаксан оказывал высокое антиэкссудативное действие на модели экспериментального перитонита. Бутаксан уменьшал проницаемость сосудов брюшной полости, дегрануляцию тучных клеток, количество внутрибрюшинной жидкости. В перитонеальной жидкости отсутствовали признаки диапедеза эритроцитов - экссудат имел бледно-розовый, опалесцирующий оттенок. Количество дегранулированных тканевых базофилов у крыс, леченных бутаксаном, было на 21,1% (р < 0,05), меньше, чем в опытной группе.

Диклофенак вызывал снижение количества внутрибрюшинной жидкости на 28,8 % (р < 0,05), по сравнению с животными опытной группы и на 6,8% меньше по сравнению с бутаксаном. Количество дегранулированных тканевых базофилов у крыс, леченных бутаксаном, было на 20,7% меньше, чем в опытной группе и на 10,2% меньше по сравнению с диклофенаком.

Таким образом, бутаксан оказывал противовоспалительное действие на модели экспериментального перитонита и по эффективности превосходил диклофенак. Уменьшение дегрануляции тучных клеток у животных при воздействии бутаксаном позволяет предположить наличие у него мембраностабилизи-рующих свойств.

Антипролиферативная активность бутаксана изучена на модели «paper disk». Бутаксан угнетал образование грануляционно-фиброзной ткани вокруг имплантированного под кожу рулончика хроматографической бумаги. У крыс, леченных бутаксаном и диклофенаком, масса влажной гранулемы была меньше, чем у контрольной группы, на 31,8 % (р<0,05) и 28,5% (р<0,05) соответственно. Снижение массы сухой гранулемы под воздействием бутаксана составило 38,7 мг, что на 28,2% (р<0,05) меньше, чем в контрольной группе и на 5,4% эффективнее диклофенака.

Таким образом, по антипролиферативной активности бутаксан сопоставим с с диклофенаком.

В качестве модели коллагеноза использовали адъювантную болезнь. Экспериментальный синдром вызывали введением адъюванта Фрейнда. У животных опытной группы в период манифестации адьювантной болезни (14-28 день) наблюдались признаки интоксикации. Прирост массы тела на 28 сутки был в 1,4 раза меньше (р<0,05), чем у животных контрольной группы. Установлено снижение аппетита и потребление корма у крыс с адьювантной болезнью.

У животных, получавших бутаксан в дозе 24 мг/кг, достоверно изменял развитие воспалительного процесса в пораженной лапке у крыс. Так, прирост объема лапки на 7 сутки составил 46,3% (р < 0,05), на 14 сутки -31,7 и на 28 сутки - 25,6% (р < 0,05), что в 3,4 раза меньше, чем у животных опытной группы. Бутаксан предотвращал появление вторичных явлений экссудации, не наблюдались признаки артрита передних и контрлатеральной задней лапок. Прирост периметра хвоста на фоне действия бутаксана был на 14-е сутки 0,6 мм и 0,7 мм на 28 сутки опыта, что в 5,8- 7,9 раза (р< 0,001), меньше, чем у не леченных крыс, а также вызывал уменьшение интенсивности поражения суставов и объема пораженной лапки.

Фармакотерапевтический эффект бутаксана реализовался положительной динамикой антиэкссудативного эффекта. В момент максимального развития отека бутаксан вызывал ингибирование воспалительной реакции.

Диклофенак в дозе 8 мг/кг достоверно уменьшал воспалительную реакцию в пораженной лапке, однако по антиэкссудативному эффекту уступал бута-ксану.

Объем лапки у крыс с адъювантной болезнью, леченных диклофенаком, через 7 суток уменьшился на 49 % (р<0,05), через 14 суток - на 35,2% (р<0,05), и через 28 суток - на 27,6% (р<0,05), что в раза больше, чем у крыс, леченных бутаксаном. Прирост периметра хвоста на 14-е и 28-е сутки составил 0,5 мм и 0,9 мм, что в 1,9-3,2 раза меньше, чем у крыс контрольной группы. Следовательно, диклофенак, в дозе 8 мг/кг оказывал противовоспалительное действие, которое сопоставимо с бутаксаном.

Фармакотерапевтический эффект бутаксана реализовался положительной динамикой антиэкссудативного эффекта. В момент максимального развития отека бутаксан вызывал ингибирование воспалительной реакции.

Важным показателем, является скорость оседания эритроцитов (СОЭ). При воспалении изменяются гемостатические и реологические свойства крови, происходит активация калликреин-кининовой системы, а также увеличивается содержание фибрина, что приводит к уменьшению времени свертывания крови.

У крыс с адъювантной болезнью установлены существенные изменения лабораторных показателей крови, которые свидетельствуют о наличии воспалительного процесса. Скорость оседания эритроцитов с экспериментальной патологией, возросла по сравнению с исходными значениями на 6,1 (р<0,05) мм/час. В контрольной группе наблюдался выраженный лейкоцитоз: общее количество лейкоцитов возросло на 14-е сутки на 3,9-10' и, на 28-е сутки - на 16-Ю9 л.

Анализ лейкоцитарной формулы в динамике эксперимента контрольной группы показал значительный рост количества сегментоядерных нейтрофилов и незначительное увеличение количества эозинофилов, что свидетельствует о наличии аутоиммунного воспалительного процесса в организме животных с адъювантной болезнью. При лечении адъювантного артрита бутаксаном через 14 дней после введения количество сегментоядерных нейтрофилов увеличилось на 34,8% (р<0,05), содержание лимфоцитов снизилось на 33,1% (р<0,05) по сравнению с контролем. Диклофенак вызвал увеличение количества сегментоя-дерных нейтрофилов на 28,7% (р<0,05), а содержание лимфоцитов снизилось на 27% (р<0,05).

Спустя 28 дней после курсового лечения бутаксаном количество сегмен-тоядерных нейтрофилов увеличилось на 35,2% (р<0,05), содержание лимфоцитов снизилось на 15,2% (р<0,05) по сравнению с контролем. Под влиянием диклофенака количество сегментоядерных нейтрофилов увеличилось на 33 % (р<0,05), а содержание лимфоцитов снизилось на 23,1% (р<0,05).

Таким образом, при лечении адъювантной болезни терапевтическая эффективность бутаксана реализовалась за счет роста сегментоядерных нейтрофилов, снижения количества лимфоцитов и была сопоставима с действием диклофенака.

Лечебное применение бутаксана привело к уменьшению показателей свертывания крови. На 14-й день время свертывания крови увеличилось на 15,9 секунды, на 28-й день - на 18,1 секунды. Препарат сравнения диклофенак увеличивал время свертывания крови на 14-е сутки на 12 секунд и на 28-е сутки - на 13,3 секунд.

Таким образом, на модели адъювантной болезни установлено, что бутаксан проявлял выраженную противовоспалительную активность, нормализовал скорость оседания эритроцитов, вызывал значительный рост сегментоядерных нейтрофилов и оказывал антиагрегантное действие.

Исследование влияния бутаксана на температуру тела интактных белых крыс провели в дозах 12; 24 и 36 мг/кг. Установлено, что бутаксан в изучаемых дозах не оказывает существенного влияния на температуру тела у интактных животных. На модели пирогеналовой лихорадки бутаксан вызывал снижение температуры (на 2,1°С), а после введения диклофенака жаропонижающий эффект был меньшим. Бутаксан на модели молочной лихорадки у крыс вызывал уменьшение температуры тела у крыс на 1,4°С, а диклофенак - на 0,9 "С.

Таким образом, в опытах на белых крысах с пирогеналовой и молочной лихорадками бутаксан оказался эффективнее в сравнении с диклофенаком.

Учитывая патогенетическую роль простагландинов (ПГ) в развитии воспалительного процесса, в опытах на крысах было изучено влияние бутаксана на уровень ПГЕ| с помощью радиоиммунологического метода. Проведенные исследования показали, что содержание ПГЕ, в контрольной группе составила 8,38 нмоль/л, а уровень lilt] в плазме крови крыс с каррагениновым отеком достоверно повышался на 47,3% (р < 0,05). Под действием бутаксана наблюдали выраженное угнетающее действие на уровень ПГЕ| снижение содержания в плазме на 41,3% (р<0,05) по сравнению с интактными животными. Диклофенак также оказал ингибирующее действие, уменьшая количество ПГЕ, в плазме на 37,9% (р<0,05)

Влияние бутаксана на активность калликреин-кининовой системы определяли по реакции образования бензоиларгинина в результате гидролиза этилового эфира N-бензоиларгинина. Экспериментальные исследования показали, что у крыс с каррагениновым отеком уровень калликреиногена и калликреина повышался на 21,3% (р < 0,05) и 24,2% (р < 0,05) соответственно. Под действием бутаксана содержание калликреиногена увеличилось на 9,3%, а калликреина было на 53,1% (р < 0,01) меньше, чем у крыс опытной группы.

У крыс с каррагениновым отеком, получавших бутаксан, уровень калликреиногена повышался на 15,5% (р < 0,05), а содержание калликреина уменьшалось на 46,3% (р < 0,01) по сравнению с опытной группой.

Аналогичная закономерность влияния диклофенака на медиаторы кини-новой системы обнаружена в опытах на крысах с каррагениновым отеком. Так, под действием диклофенака, содержание калликреиногена увеличилось на 10,5%, а калликреина уменьшилось на 51,5% (р < 0,01). У крыс с каррагениновым отеком, получавших диклофенак, содержание калликреиногена увеличилось на 16,8%, а калликреина уменьшилось на 41,7%.

Таким образом, бутаксан ингибирует процесс калликреиногенеза и предотвращает расходование компонентов калликреин-кининовой системы.

Изучение антиоксидантных свойств бутаксана проведено на модели индуцированного перекисного окисления липидов (ПОЛ) мембран митохондрий печени крыс. Установлено, что добавление бутаксана приводило к значительному ингибированию НАДФН*Те2+-аскорбат- и Ре2+-АДФ-аскорбатзависимого ПОЛ. В концентрации 25 мкМ (7,0 мг/л) бутаксан снижал накопление МДА при всех способах инкубации ПОЛ на 79-84% (р<0,01) по сравнению с контролем.

Диклофенак только в концентрациях 500мкМ (159 мг/л) и 800 мкМ (254 мг/л) снижал накопление МДА при Ре2+-аскорбатзависимом ПОЛ на 44,9% (р<0,01) и 65,6% (р<0,001) соответственно. Ингибирование на 50% Fe2+-acKop-батзависимого ПОЛ диклофенаком было при концентрации 578 мкМ (184 мг/л).

Полученные данные свидетельствуют, что бутаксан проявляет антиок-сидантное действие, превосходящее действие диклофенака при неферментативном ПОЛ.

Анализ представленных данных показывает, что бутаксан в концентрации 50 мкМ и 75 мкМ, в среде инкубации, вызывал ингибирование Ре2+-аскорбатза-висимого ПОЛ на 59,1% (р<0,01) и 24,8 % (р<0,05) соответственно. Инги-бирующее действие диклофенака на ПОЛ наблюдалось лишь в концентрациях 500 [мкМ и <!00 мкМ, что составило 55,6% (р<0,05) и 42,1% (р<0,05) соответственно. Следует учесть, что диклофенак оказывает влияние на свободно-радикальное окисление липидов лишь в концентрациях диапазона токсических доз, тогда как эффективная концентрация бутаксана в 9 раз ниже таковых диклофенака.

Таким образом, бутаксан обладает выраженными антиоксидантными свойствами, поскольку активация ПОЛ индуцирует каскадные окислительные реакции арахидоновой кислоты по циклооксигеназному и липооксигеназному пути.

При исследовании роли адреналовой системы в механизме противовоспалительного действия бутаксана установлено, что динамика антиэкссудативного эффекта бутаксана у адреналэктомированных животных не отличается от таковой при введении не оперированным крысам. Полученные результаты позволяют исключить возможность реализации противовоспалительного действия бутаксана за счет влияния на кору надпочечников у животных.

Ульцерогенное действие нестероидных противовоспалительных средств является одним из частых осложнений лекарственной терапии. В связи с этим нами до исследовано влияние бутаксана на слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки у лабораторных животных.

Ежедневное введение бутаксана в дозе ЕД50 в течение 14 дней не вызывает у крыс изменений слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.

Изучено повреждающее действие бутаксана и диклофенака на слизистую желудочно-кишечного тракта в опытах на крысах, предварительно голодавших в течение 24 часов. Установлено, что бутаксан оказывает в 2-2,5 раза менее выраженное ульцерогенное действие, чем диклофенак и аспирин.

При внутрижелудочном введении изучено влияние бутаксана на слизистую желудка и кишечника в условиях экспериментальных язв у крыс, вызванных этиловым спиртом. Полученные результаты показывают, что индекс изъязвления у животных контрольной группы составил 3,5. Бутаксан не вызывает достоверных различий в степени изъязвления по отношению к контрольной группе, в то время как аспирин значительно потенцирует ульцерогенное действие этилового спирта.

Исследование местнораздражающего действия бутаксана проведено на кроликах. После нанесения 1% и 3% растворов бутаксана, через 6 часов и на вторые сутки у кроликов не было изменений слизистой конъюнктивы глаз и диаметра зрачка. Следовательно, бутаксан не обладает местнораздражающим действием.

Установлено, что лд50 бутаксана при внутрибрюшинном введении составляет 890 мг/кг, при подкожном введении - 990 мг/кг, а при пероральном

1260 мг/кг. лд50 на крысах при внугрибрюшинном пути введения бутаксана равно 960 мг/кг, при подкожном - 1075 мг/кг и при пероральном - 1285 мг/кг.

При изучении переносимости бутаксана при 3-х-месячном введении установлено, что крысы хорошо переносят бутаксан, выраженных изменений в общем состоянии и поведении животных не выявлено. Крысы нормально развивались и прибавляли в массе как в опытных, так и в контрольной группах.

Таким образом, бутаксан обладает выраженным противовоспалительным, анальгетическим, жаропонижающим, атиоксидантным, мембраностабилизи-рующим и антиагрегантным действием за счет ингибирования активности кал-ликреин-кининовой системы и биосинтеза простагландинов Е|.

Преимуществами нового фармакологического средства - бутаксана по сравнению с имеющимися нестероидными противовоспалительными средствами является его лучшая переносимость, отсутствие ульцерогенного и местно-раздражающих свойств, наличие совокупности фармакологических свойств, позволяющих оказывать значительное влияние на деструктивно-дистрофические процессы, поддерживать барьерные функции мембран и агрегатного состояния крови, при минимальных побочных эффектах и малой токсичности.

Наличие совокупности фармакотогических свойств, высокая эффективность лечения воспалительных заболеваний, широта терапевтического действия позволяет включить результаты исследований фармакологической активности бутаксан в нормативно-техническую документацию на новое фармакологическое средство для представления в Министерства здравоохранения Российской Федерации и Украины для получения разрешения на проведение клинических испытаний при лечении воспалительных заболеваний различного генеза.