Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая активность магниевых солей некоторых органических кислот

На правах рукописи

КРАВЧЕНКО МАРИЯ СЕРГЕЕВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МАГНИЕВЫХ СОЛЕЙ НЕКОТОРЫХ ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ

14 00 25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК - 2008

003177833

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Волгоградским государственный медицинский университет Росздрава»

Научный руководитель Член-корреспондент РАМН, заслуженный де-

ятель пауки РФ, доктор медицинских наук, профессор Спасов Александр Алексеевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Тюренков Иван Николаевич

кандидат фармацевтических наук Лысенко Татьяна Александровна

Ведущая ор! анизацин: ГОУ ВПО «Московская медицинская

академия им И М Сеченова Росздрава»

Защита диссертации состоится « 12 » февраля 2008 г в 09 00 часов па заседании диссертационного совета Д 208 069 01 по зашигам диссерхаций при ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава» по адресу 357533, г Пятигорск, пр Калинина, 11

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Росздрава» Автореферат разослан «_» января 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор " ' ЕВ Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Среди патологии элементного статуса у населения России очень важное значение имеет недостаточность магния (Бабен-ко ГА , 1971, Чекман И С и др , 1982, Тутельяп В А, 1999, 2001, Оберлис Д ,

2002, Спасов А А , 2000; Петров В И , Спасов А А и др , 2003, Скальный А В , 2004) Ионы магния участвуют во многих физиологических процессах - регуляция сердечно-сосудистого тонуса, обмена холестерина, воспалительных реакций, в нервной и мышечной возбудимости и др (Чекман И С и др, 1982, БигксЬ1, 1988, Спасов АА, 2000, Биг1асЬ1, 2001, 8ее1щМ5, Б^аш^А,

2003, Оиг1асЬ I., 2007) Значимость магния для организма определяет необходимость поддержания его гомеостаза

Российские препараты на фармацевтическом рынке представлены только магния оксидом, лекарственным препаратом аспаркам (калия, магния аспараги-нат) и раствором магния сульфата, обладающим рядом побочных эффектов, в том числе способностью вызывать гипохлоремический алкалоз (8ее1^ М Б , 2003) Тогда как, например, в США - 12-ю лекарственными препаратами (магния хлоридом, магния цитратом, магния глюцептатом, магния глюконатом и тд) Эффективность лекарственных препаратов магния существенно различается, а в литературных источниках часто содержатся достаточно противоречивые сведения об их биодоступности (О'АшеПо А , И'Опо^ю С а!, 1993) В 1964 г в Приволжской низменности были открыты уникальные по запасам и качеству сырья залежи минерала бишофит (Гу^СЬ 6НЮ), с содержанием его в породе от 88 до 99% В 2000 году в Волгоградском государственном медицинском университете (ВолГМУ) была разработана инициативная комплексная программа "Российский магний", в соответствии с которой было проведено комплексное изучение фармакологических свойств минерала бишофит Учитывая большой положительный опыт применения препаратов магния и бишофита при различных заболеваниях, представляется целесообразным создание новых магнийсо-держащих препаратов на основе минерала бишофит, обладающих более оптимальными показателями фармакокинетики и фармакодииамики На наш взгляд

перспективным направлением решения данной задачи является получение магниевых солей органических кислот Однако для широкого внедрения таких солей в практику необходимо их фармакологическое исследование, и, прежде всего, изучение биодостунности Таким образом, изучение фармакологических свойств магниевых солей органических кислот является актуальной проблемой для фармации и медицины

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертациончая работа выполнена в рамках инициативной комплексной про1раммы "Российский маший" ВолГМУ, а также в соответствии с научным планом НИР ВолГМУ (номер государственной регистрации 01 20 02 15607) Тема работы утверждена на заседании Ученого Совета университета (протокол №9 от 31 10 2003 г)

Цель исследования. Сравнительное изучение биодостунности магниевых солей органических кислог, полученных в результат глубокой переработки минерала бишофит, исследование их фармакологической активности и механизма действия

Задачи исследования.

1 Изучить зависимость биодоступности магниевых солей от структуры аниона органической кислоты (Ь-, Г)Ь- и Б-аспарагинага, Ь-, БЬ-глута-мата, БЬ-пирогтутамата, глицината, лактата, сукципата, таурииата, цитрата) при пероральном введении на моделях алиментарной гипомагнези-емии и фуросемидпой интоксикации

2 Оценить влияние витамина В6 на биодоступность органических солей магния на моделях гипомагнезиемий

3 Исследовать влияние солей магния на гемобиологический статус животных в условиях алиментарного дефицита магния

4 Изучить противовоспалительную активность солей магния в условиях алиментарной гипомагнезиемии

5 Провести исследование антиноцицсптивного действия солей магния

6. Изучить влияние солей магния на течение экспериментального уролити-аза на моделях гипероксалурии у крыс

7 Исследовать атиаритмическую активность магния Ь-аспарагината, в сравнении с его Б- и БЬ-стереоизомерами

8 Определить острую токсичность органических солей магния Научная новизна. Впервые проведепо сравнительное изучение фармакологической активности магниевых солей органических кислот при пероралыгом введении Установлено, что на биодоступность солей магния влияет строение аниона органической кислоты и его стереоструктура При этом показана более высокая активность магниевой соли Ь-стерсоизомера аспарагиновой кислоты, по сравнению с БЬ и Б-стереоизомерами и другими изучаемыми солями магния Изучено влияние витамина В6 на биодоступность магниевых солей и доказано, что наибольшей биодоступностыо обладает магния Ь-аснарагинат при совместном применении с витамином Вб Впервые проведено изучение фармакологических свойств магния Ь-аспара1 ината и его комбинации с витамином Вв в норме и при патологии установлено благоприятное влияние изучаемых солей на гемобиоло! ические показатели и протекание иммупо-воспалителыгой реакции у магпийдефицитных животных, показано, что комбинация магния Ь-аспарагината с витамином Вб обладает выраженной антиноцицептивной активностью, выявлено корригирующее действие солей магния на течение экспериментального уролитиаза (в условиях алиментарного дефицита магния и интоксикации этилепгликолем), установлено, что магния Ь-аспарагинат обладает более сильным антиаритмическим действием, по сравнению с ОЬ- и О-стереоизоме-рами Впервые изучена острая токсичность магния Ь-аспарагината и его комбинации с витамином Вб при пероралыгом введении, при этом показано, что исследуемые соли являются малотоксичными и безопасными

Научно-практическая значимость работы. Данные, полученные при изучении фармакологической активности магниевых солей стереоизомеров аспарагиновой и глутаминовой кислот, существенно расширили представления о стереоселективности лекарственных препаратов Выявлены результаты, позво-

ляющие обосновать перспективность создания на основе комбинации магния Ь-аспарагината с витамином Вб лекарственной формы для пероралыюго применения, в качестве средства коррекции дефицита магния и ассоциированных с ним патологий

Реализация результатов исследования. Оригинальные экспериментальные модели формирования уролитиаза в условиях алиментарного дефицита магния и интоксикации этиленгликолем применяются в НИИ Фармакологии ВолГМУ и лабораторией морфологии и иммуиогистохимии Волгоградского научного центра РАМН при проведении научных экспериментов (информационное письмо «Моделирование уролитиаза в условиях алиментарного дефицита магния и интоксикации этилепгликолем») Результаты работы включены в лекционный материал для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтическою факультетов, слушателей факультета усовершенствования врачей и провизоров на кафедрах фармакологии, общей химии, биофармации ФУВ ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского и Ростовского государственных медицинских университетов (информационное письмо «Сравнительная фармакологическая активность магниевых солеи некоторых органических кислот») Основные положения, выносимые на защиту.

1 Результаты сравнительного изучения влияния магниевых солен органических кислот на величину компенсации дефицита магния в организме животных при пероралыюм введении в условиях ачиментарной гипомагне-зиемии и фуросемндной интоксикации

2 Результаты исследования влияния витамина В6 па скорость компенсации дефицита магния в организме на моделях гипомагнезиемий

3 Влияние магния Ь-аспарагината и его комбинации с витамином Вб на ге-мобиологический статус животных в условиях алиментарной гипомагне-зиемии

4 Результаты изучения противовоспалительной активности магния Ь-аспа-рагината и его комбинации с витамином В6 у животных в условиях алиментарного дефицита магния

5 Влияние магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб на порог болевой чувствительности машийдефицитных животных

6 Результаты исследования влияния магния L-аспарагипата и его комбинации с витамином Вб на течение кальцийоксалатного уролитиаза на моделях гипероксалурии у крыс

7 Результаты изучения аптиаритмическои активности магния L-аспарагината, в сравнении с его D- и DL-стереоизомерами, на моделях аконита новой и хлоридкальциевой аритмий

8 Результаты исследования острой токсичности магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб при пероралыюм введении Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и

обсуждались на 62-й, 63-й и 64-й итоговых научных конференциях студентов и молодых ученых ВолГМУ, Волгоград, 2004-2006 гг, IX, XI Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, Волгоград 20042006гг, 1-ом съезде Российского общества медицинской элементологии «РО-СМЭМ», Москва, 9-10 декабря 2004, 11-ой Международной научно-практической конференции «БИОЭЛЕМЕНТЫ», Оренбург, 2007, Ill-ем съезде фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению», Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007, 11th International Magnesium Symposium & Joint Meeting of the Japanese Society for Magnesium Research, Shima Kanko Hotel, Kashikoji-ma, Japan, October 23-26, 2006

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 работ Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 206 страницах текста компьютерного набора, иллюстрирована 20 рисунками, содержит 21 таблицу и 1 приложение Состоит из "Введения", "Обзора литературы" (глава I), и 4-х глав собственных исследований (главы II-V), обсуждения результатов (глава VI), выводов и списка литературы, включающего 79 отечественных и 159 зарубежных источников

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Исследования были выполнены па 874 половозрелых нелинейных белых крысах-самцах массой 170-260 г, 225 белых неимбредных мышах-самцах и 105 мышей-самок, массой 22-24 г, содержащихся в условиях вивария ВолГМУ на стандартной диете лабораторных животных (ГОСТ Р 50258-92) с соблюдением Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных (1997), а также правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ 3 51000 3-96 и 51000 4-96)

В работе проведено сравнительное изучение фармакологической активности органических солей магния магния L-аспарагината (ЗАО "Биоамид", г Саратов) и магния L-аспарагината в комбинации с витамином Be (пиридоксин производства «F Hoffman La Roche A G », Германия), магния DL- и D-аспараги-ната (ЗАО "Биоамид", г Саратов), магния L-, DL-глутамата, магния DL-пи-роглутамата, магния глицината, магния лактата, магния сукцината, магния тау-рината, магния цитрата (Химико-тсхнологическая лаборатория НИИ фармакологии ВолГМУ) и магния L-аспарагината в таблетированной форме (Пятигорская Государственная Фармацевт ическая академия)1 В качестве препаратов сравнения использовали Mai не Вб® (магния лактат с витамином В6) - фирмы Sanofi-Aventis (Франция), аспаркам® (калия, магния DL-аспарагинат) - фирмы Фармак (Украина), магнерог® (магния оротат) - фирмы Worwag Pharma (Германия)

Уровень магния в плазме и эритроцитах животных определяли по цветной реакции с титановым желтым («Sigma», США) с измерением на спектрофотометре СФ-46 (JIOMO, Россия) Во всех сериях экспериментов исследуемые соли и лекарственные препараты магния вводились пероралыю через зонд при установлении гипомагнезиемии средней тяжести (С (магния) <1,4 ммоль/л (эритро-

1 - Все соли были получены в результате глубокой очистки и переработки природного минерала бишофит (Mg-С1 хбНгО) с использованием технологии разработанной в НИИ фармакологии ВолГМУ (г Волгоград) и ЗАО "БИОАМИД" (г Саратов) Выражаем признательность зав каф фармацевтической и токсикотогической химии ВолГМУ д х н проф А А Озерову, ген директору ЗАО "БИОАМИД" к х н С П Воронину и к х н М К Сино-лицкочу, а также Пятигорской Государственной Фармацевтической академии

8

циты) и < 0,7 ммоль/л (плазма)) из расчета 50 мг магния на кг массы тела животного Витамин Вб добавлялся из расчета - 1 часть пиридоксина к 10 частям магния Для моделирования алиментарной гипамагнезиемии использовали специальную магнийдефицитную диету фирмы «ICN Biomedicals Inc » (Aurora, Ohio, США) с пониженным содержанием магния (Bien J G, 1980) Фуросемид-ную интоксикацию вызывали раствором фуросемида (30 мг/кг, 1% раствор, «Полифарм», г Челябинск) при внутрибрюшинном введении в течение двух недель На модели алиментарной гипомагнезиемии у животных изучали гемобио-логаческие изменения (Bien J G, 1980), системную воспалительную реакцию (Bussière FI, Tndon A et al, 2003) и экспериментальную фибромиалгию (Ве-gon S et al, 2002, Alloui A et al, 2003)

При исследовании гемобиологического статуса животных определяли вязкость цельной крови и бедной тромбоцитами плазмы на анализаторе крови реологическом АКР-2 (Россия), величину гематокрита и количество тромбоцитов крови (Баркаган 3 С , Балуда В П , 1980) Вязкость взвеси эритроцитов оценивали методом вискозиметрии при стандартизированном гематокрите 45% Индекс агрегации эритроцитов рассчитывали как отношение вязкости крови при скорости сдвига 10 с1 к вязкости крови при 200 с1 (Dintenfass L , 1989) Влияпие веществ на агрегацию тромбоцитов m vitro исследовали на двухка-нальном лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов (модель 220 LA) научно-производственной фирмы "Биола" (Россия) по методу Bom G (1962) в модификации Габбасова 3 А (1989) В качестве индукторов агрегации использовали АДФ (5,0 и 0,5 мкмоль) и коллаген (50 мг/кг) Хронометрически, на гемокоагу-лометре «SOLAR» (Белоруссия) с помощью наборов реактивов производства «Технология - стандарт» (Россия), были определены показатели коагулограм-мы. тромбиповое, протромбшювое, активированное парциальное тромбопла-стиновое время и время образования нитей фибрина (Баркаган 3 С, Мо-мот А П , 1999) Для оценки тяжести системной воспалительной реакции и фи-бромиалгии определяли лейкоцитарную формулу, измеряли общее количество лейкоцитов крови, выраженность гиперемии ушных раковин крыс по четырех

бальной системе (BussiereFI и соавт, 2002), а также величину порога болевой чувствительности животных с использованием механического анатьгезиметра (тест Randall L О , Sehtto J , 1957)

Экспериментальный уролитиаз моделировали в условиях алиментарной гипомагнезиемии, а также путем добавления в питьевую воду этиленгликоля (0,75% р-р) и аммония хлорида (2% р-р) (J Fan, 1995) Количество кристаллов оксалата в моче животных подсчитывали при помощи микроскопа «Биолам ЛОМО» (г Санкг-Петербур1) Уровень оксалатов в моче определяли титримет-рически по методу Сиворииовского ГА (1969), неорганических фосфатов — по реакции образования окрашенного комплекса с молибдатом аммония, кальция -с о крезолфталеином, креатиннна по реакции Яффе с использованием стандартных диа1 ностических наборов фирмы «Витал-диагност икум» (г Санкт-Петер-6ypi) Изучение антиаритмической активности магния L-, D- и DL-аспараги-нага было выполнено на моделях аритмий при внутривенном введении в соответствии с "Руководством по доклиническому изучению новых фармакологических веществ" (Каверина Н В , Бердяев С Ю , 2000) Аритмия с механизмом ранней постдеполяризации вызывали введением аконитина (50 мкг/кг, «Sigma», США), с механизмом задержанной иостдеполяризации - хлорида кальция (250 мг/кг, ОАО «Дальхимфарм», г Хабаровск) Эффективность препаратов оценивали по их способности предупреждать возникновение аритмии и фибрилляций, удлинять время латентного периода и время выживания животных в эксперименте, изменять продолжительность и выраженность аритмии Изучение острой токсичности солей магния проводили при внутрибрюшинном и перо-ральном введении в соответствии с требованиями и инструкциями Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития (под ред Хабриева РУ, 2005) При расчете ЛД™ использовали классический метод Литч-филда и Вилкоксона (Беленький М Л, 1963)

Статистическую обработку полученных результатов проводили с использованием параметрических и непарамегрических методов анализа при по-

мощи программы Statistica 6,0 (Гланц С , 1998) и программного обеспечения Microsoft Excell 1998

Результаты экспериментов и их обсуждение

Сравнительное изучение скорости компенсации дефицита магния на моделях гипомагнезисмий

К концу 8 недели магпийдефицитной диеты у животпых наблюдалось достоверное снижение уровня магния в среднем на 57% в эритроцитах и на 47% в плазме, потускнение шерстного покрова, гиперемия открытых участков тела (ушных раковин, хвоста и лап), статистически значимое уменьшение массы тела в среднем на 30%

Исследуемые соли магния при введении приводили к компенсированию магниевого дефицита Наиболее значимым с диагностической точки зрения является содержание магния в эритроцитах

К 6 дню введения солей в группу лидера по компенсации дефицита магния в эритроцитах входили животные, получавшие магния L-аспарагинат (величина компенсации дефицита - 84,87+4,92%) Отличия от группы лидера по уровню магния в эритроцитах были достоверными для групп магния Ь-глутама-та, магния цитрата, магния лакташ, магния сукципата и магнерота® (рисунок 1) Алиментарный дефицит является главной причиной первичного магниевого дефицита (Dorup 1, 1993) Другой, не менее важной причиной гипомагнезиемии, является терапия некоторыми лекарственными препаратами, такими как сердечные гликозиды и диуретики (Abraham AS et al, 1988) Фуросемид, являясь «петлевым диуретиком», уменьшает рсабсорбцию Са2+ и Mg2+ в толстом сегменте восходящей части петли Генли, что приводит к снижению их концентрации в плазме и эритроцитах (QuammeGA, 1981, Abraham AS et al, 1999) Так ко второй неделе введения раствора фуросемида содержание магния в эритроцитах крыс уменьшилось в среднем на 47% (р<0,05), а в плазме - в среднем на 60% (Р<0,05)

Исследуемые соли магния при пероралыюм введении изменяли равновесие между ренальными потерями магния и поступлением этого катиона извне, что приводило к восполнению его концентрации в плазме и эритроцитах животных В эритроцитах: к 11 дню введения солей у животных, получавших магния Ь-аспара1 инат, уровень компенсации дефицита магния составил 138,00±5,56% Животные, получавшие остальные соли, кроме машия Ь-глута-мата, по уровню эритроцитарного магния статистически достоверно отставали о г группы лидера (рисунок 2) Предполагают, что аспарагинат-ион является переносчиком ионов магния и способствует их проникновению во внутриклеточное пространство (№ерег Н А , В1итЬе^ег К J , 1961) Кроме того, согласно современным представлениям о стереоспецифичности, в организме человека более активно могут усваиваться и вовлекаться в биохимические процессы Ь-изомсры аминокислот (Б'АшеПо А е! а1, 1993) Так, по результатам исследования, в условиях фуросемидной интоксикации величина компенсации дефицита магния в группе магния БЬ-аспарагината была ниже на 40,49% (р<0,05), а в группе магния Б-аспарагината — на 26,38% (р<0,05), по сравнению с группой магния Ь-аспарагината

Существует мнение (Виг1асЬ .Г, 1988, 1994), что витамин В6 ускоряет проникновение магния внутрь клетки и является необходимым для его внутриклеточной кумуляции В настоящем эксперименте влияние витамина Вб па биодоступность органических солей магния (магния Ь-аспарагината и магния лакта-та) изучалось на моделях алиментарной гипомагнезиемии (рисунок 1) и фуросемидной интоксикации (рисунок 2)

На модели алиментарной гипомагнезиемии, рассчитанные методом регрессионного анализа сроки полной компенсации алиментарного дефицита магния в эритроцитах, для группы животных, получавших магния Ь-аспарагинат в комбинации с витамином Вб, соответствовали 5 суткам, магния Ь-аспарагинат и магния лактат с витамином Вб (магне Вб®) - 11 суткам, магния лактат — 26 суткам введения препаратов

Обозначения: по оси ординат - изменение процента компенсирования дефицита магния в эритроцитах животных (%); по оси абсцисс — исследуемые группы животных. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины; * — статистически значимое отклонение от интактной группы животных ** - статистически значимое отклонение от группы животных, получавших маг-нийдефицитную диету; * — достоверно от 1руппы животных, получавших магния Ь-аспарагинат в комбинации с витамином В6; 8 - статистически значимое откпонение от груганы животных, получавших магния Ь-аспарагинат, при р<0,05.

Рисунок 1 - Влияние солей магния (50 мг элементарного магния на кг массы животного) на величину компенсации дефицита магния в эритроцитах животных в условиях алиментарной гипомагнезиемии, %

11 день введения солей магния

Обозначения: по оси ординат - изменение процента компенсирования дефицита магния в зритропи-гах животных (%); по оси абсцисс — исследуемые 1руппы животных. Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины; * - статистически значимое отклонение от интактной группы животных; ** - статистически значимое отклонение от группы животных, получавших фуросемид в дозе 30 мг/кг; * - достоверно от группы животных, получавших магния Ь-аспарапшат в комбинации с витамином В6; 8 - статистически значимое отклонение от группы животных, получавших магния 1,-аспарагинат, нрир<0,05.

Рисунок 2 - Влияние солей магния (50 мг элементарного магния на кг массы животного) на величину компенсации дефицита магния в эритроцитах животных в условиях фуросемидной интоксикации, %

В условиях фуросемидной интоксикации сроки полной компенсации дефицита магния в эритроцитах для группы магния L-аспарагината в комбинации с витамином Вб наступали на 4-е сутки, а для групп магния L-аспарагината и магния лактата с витамином В6 (магне В6®) - на 5-е сутки введения препаратов

Таким образом, использование в качестве хелатирующего агента L-acna-рагиновой кислоты, а не ее рацемата, а также комбинирование с витамином Вб повышает скорость компенсации дефицита магния в организме

В результате сравнительной оценки скорости компенсации гипомагнезие-мии была показана наибольшая эффективность магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб Поэтому на следующих этапах исследования были изучены фармакологические свойства данных солей

Влияние магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб на ге-мобиологический статус животных в условиях алиментарной гипомагнезиемии В условиях алиментарной гипомагнезиемии у животных происходят статистически значимые изменения гемобиологических параметров увеличивается вязкость крови (рисунок 3), индекс агрегации и вязкость взвеси эритроцитов, возрастает АДФ- и коллаген-индуцированная агриация тромбоцитов (рисунок 4), повышается вязкость бедной тромбоцитами плазмы и уменьшается время образования нитей фибрина Данные изменения можно объяснить тем, что в условиях дефицита магния наблюдается повышение внутриклеточного содержания кальция, которое приводит к снижению деформабилыюсти эритроцитов и, тем самым, увеличению вязкости крови (Serebruany VL , 1996) При компенсации дефицита магния происходила нормализация гемобиологических параметров В проведенных исследованиях, магния L-аспарагинат и его комбинация с витамином Вб не только не уступали, но и в ряде случаев (влияние на вязкость крови и агрегацию тромбоцитов) превосходили по активности препарат сравнения магне Вб®, нормализуя гемобиологические нарушения у животных с дефицитом магния

сПз i2 а

ю р &р

6Л 4/0 2,0

Сл 0/)

200 50 10 Индекс

агрегации

0 Интактные Я Диета

О Мд L-аспарагинат+вит.Вб Ш мд ь-аспарагинат 0 мггне В 6

Соли магния

Рисунок 3 - Влияние органических солей магния (50 мг элементарного магния/кг) на вязкость крови (гематокрит 45% ) магнийдефицитных животных

Рисунок 4 - Влияние органических солей магния (50 мг элементарного магния/кг) на коллаген-индуцированную агрегацию тромбоцитов магнийдефицитных животных

Обозначения:рисунок 3 - по оси ординат - изменение величины вязкости крови {гематокрит 45% ),по оси абсцисс - скорость сдвига (сПз); рисунок 4. - по оси ординат - изменение степени агрегации (пл.ах),по оси абсцисс - исследуемые группы животных .Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. * - статистически значимое отклонение от иктактной группы животных; ** - статистически значимое отклонение от !руппы животных, получавших магнийдефицитную диету,-5 - достоверно от группы животных, получавших магния L-аспарагинат,-* - достоверно от группы животных,магне В6 Магния лактат с витамином В6),при р<0/)5.

Противовоспалительное действие и антинопицептивная активность магния L-аспарагинага и его комбинации с витамином Вб в условиях алиментарного дефицита магния

В патогенезе имчупо-воспалительных процессов очень важную роль играет дефицит магния (Durlach J , 1988) В данных исследованиях было установлено, что гипомагаезиемия приводит к появлению у животных симптомов системной иммунно-воспалителыюй реакции отмечается гиперемия открытых участков тела, увеличение количества лейкоцитов на 47% (р<0,05), в основном за счет сегментоядерных нейтрофилов (с 2,33±0,15 до 4,40±0,98 млн /мл) и эозинофилов (с 0,15±0,11 до 2,86±0,53 млн /мл), снижение коэффициента массы селезенки и соотношения магний/кальций сыворотки крови (р<0,05) По данным многих исследователей, наблюдаемая в условиях гипомагнезиемии имму-но-воспалительная реакция, связана с дегранушщией тучных клеток, высвобождением гистамииа и медиаторов воспаления, те протекает аналогично анафилактической реакции (Bois Р ct al, 1963, Kraeuter S L , Schwartz R , 1980) Исследуемые соли магния приводили к ликвидации иммуно-воспалительной реакции наблюдалось достоверное снижение общего количества лейкоцитов крови (устраняли эозинофилию и нейтрофилез), уменьшение интенсивности гиперемии ушных раковин животных, снижение коэффициента массы селезенки и повышение соотношения магний/кальций сыворотки крови В зависимости от скорости нормализации количества лейкоцитов в периферической крови соли магния можно расположить в следующем порядке магния L-аспарагинат > магния L-аспарагинат в комбинации с витамином Вб > магне Вб®

В литературе имеются данные о снижении порога болевой чувствительности в условиях дефицита магния, что может привести к гиперальгезии (А1-loui A et al, 2003) Это подтверждается и настоящим исследованием, в котором магнийдефицитное состояние у крыс сопровождалось понижением порога болевой чувствительности в среднем на 42% (р<0,05) В условиях гипомагнезиемии происходит увеличение количества медиаторов воспаления (Kraeuter S L, Schwartz R, 1980), обладающих ноцицептивной активностью, а также концен-

трации ионов кальция, тем самым возрастает активация ноцицепторов и уменьшается порог болевой чувствительности

При компенсации дефицита магния наблюдалось устранение гипсральге-зии На 13 день введения солей магния L-аспарагинат в комбинации с витамином Вб максимально, по сравнению с другими исследуемыми солями, восстанавливал порог болевой чувствительности на 126,03±5,05% Отличия от группы лидера были достоверны для большинства солей, кроме магния L-аспарагината и магне Вб® Механизм антиноцицептивного действия солей магния может быть связан с их противоспалительной активностью, а также участием в процессе медиации NMDA-рецепторов (Decollogne S , Tomas А et al, 1997)

Влияние магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб на формирование экспериментального уролитиаза у крыс

Одним из факторов, провоцирующих уролитиаз, является дефицит магния (Prien Е L , Gershoff S N , 1974) В условиях алиментарной гипомагнезиемии у животных отмечено статистически значимое, по сравнению с интактной группой, увеличение фосфатов и оксалатов кальция в моче, увеличение концентрации кальция в плазме крови (р<0,05), снижение суточной экскреции магния с мочой (р<0,05), повышение экскреции кальция, фосфатов и оксалатов (р<0,05), увеличение соотношения кальций/магний в 5 раз (р<0,05), повышение концентрации кальция и фосфора на 49% и 48% соответственно (р<0,05)

В условиях интоксикации зтиленгликолем у животных отмечалось повышение уровня оксалатов (с 61,23±4,15 до 135,34+5,67 мкмоль/л, р<0,05) и кристаллов оксалата кальция в моче (с 0 до 16±3, р<0,05), снижение pH мочи (с 7,27±0,11 до 5,89±0,13, р<0,05) и клиренса креатинина на 18%, увеличение фракционной экскреции магния на 39,9% Фракционная экскреция кальция повысилась на 40,77% (р<0,05) Соотношение оксалат/креатинин в группе, получавшей этиленгликоль, выросло более чем в 2,5 раза (р<0,05)

У животных, которым вводили исследуемые соли магния, уролитиаз протекал в более легкой форме, нежели в группах с экспериментальными патологиями В обоих случаях отмечалось статистически значимое снижение уровня ок-

салага в моче, уменьшение количества кристаллов оксалата кальция и повышение pH мочи (в условии интоксикации этиленгликолем) Также возрос клиренс креатинина, оптимизировались соотношения кальций/магний, оксалат/креати-нин, снизилась экскреция фосфатов с мочой Одним из механизмов снижения экскреции оксалата является уменьшение его всасывания в кишечнике (Dob-son D М , Fmalayson В , 1973) Магний уменьшает количество и размер сформировавшихся кристаллов (Prien Е L , Gershoff S N , 1974), повышает pH мочи и экскрецию цитрата, а также способствует образованию магния оксалата, обладающего большей растворимостью, нежели оксалат кальция (Khan S R , She-vockPN et al, 1993)

Хотя достоверных отличий между солями выявлено не было, эффективность магния L-аспарагнната, в гом числе и в комбинации с витамином Bf„ по компенсации экспериментальных патологий оказалась сопоставимой с таковой препарата сравнения магне Вб® Кроме того, сам витамин Be обладает доказанной эффективностью в лечении и профилактике уролитиаза (Curhan G С , Wil-lettWC et al, 1999)

Антиаритмическая активность стереоизомеров магния аспарагината Магний обладает множеством клинических эффектов, позволяющих использовать его в качестве лекарственного средства при сердечно-сосудистых заболеваниях, сочетает в себе качества антиаритмичсских препаратов, относящихся к I и IV классам (мембраиостабнлизирующие и антагонисты кальция) (Верткин А Л , Городецкий В В , 1997, Спасов А А, 2000) На модели аконити-новой аритмии было установлено, что вероятность возникновения фибрилляций снижалась у животных, получавших магния L-аспарагинат в дозе 250 мг/кг, а у крыс, получавших магния DL-аспарагинат, только в дозе 300 мг/кг В дозе 250 мг/кг время до начала нарушений ритма в группе крыс, получавших магния L-аспарагинаг, было достоверно выше, по сравнению с контрольной группой в 3,41 раза, а, по сравнению с магния DL-аспарагииатом и магния D-acnapa-гинатом - в 1,41 и 2,22 раза соответственно В дозе 150 мг/кг продолжительность жизни крыс, получавших магния L- и DL-аспарагинат, значительно пре-

вышала группу крыс, получавшую Б-форму, в 2,8 и 2,7 раз соответственно По величине ЭД50 наибольшую противоаритмическуго активность проявили магния Ь- и БЬ-аспарагинат (116,89 и 141,26 мг/кг соответственно), в меньшей степени - магния Б-аспарагинат (258,96 мг/кг)

На модели хлоридкальциевой аритмии магния Ь-аспарагинат статистически достоверно предотвращал фибрилляцию желудочков в 66,67%, в то время как магния ОЬ-аспарагинат - в 46,67% (р<0,05) При применении магния Б-ас-парагината возникновение фибрилляций наблюдалось в 100% случаев Магния Ь-аспарагинат увеличивал время до начала развития аритмии, по сравнению с контролем на 45,10%, а, по сравнению с магния БЬ- и Б-аспарагинатом -на 18,55% и 26,25% соответственно Магния Ь-аспарагинат достоверно способствовал выживанию животных в 50% случаев, магния БЬ-аспарагипат - только в 33,33%, магния О-аспарагинат - в 0%

Таким образом, на моделях аконитпновой и хлоридкальциевой аритмий Ь-стереоизомер магния аспарагината оказался наиболее эффективным, по сравнению с БЬ- и Б-стереоизомерами Благоприятное действие магния аспарагината на течение экспериментальных аритмий зависит также и от самой аспарагипо-вой кислоты (Янушкевичус И , Забела П В , 1976, Романова И С , 2002) Изучение острой токсичности солсй матьия

По величине ЛДТО [мг/кг] в условиях внугрибрюшинного введения (в эксперименте на самцах) исследуемые соли можно расположить в следующем порядке магния Ь-аспарагинат [1468,58] > магния БЬ-пирощутамат [1175,39] > магния цитрат [1080,14] > магния лактат [937,60] > магния тауринат [905,40] > магния сукцинат [905,40] > магния БЬ-аспарагинат [816,02] При этом все изучаемые соли магния можно отнести к разряду умеренно токсичных соединении (Саноцкий И В , Уланова И П , 1975)

В условиях пероральною введения менее токсичным оказался магния Ь-аспарагинат Величина ЛД50 при однократном пероральном введении исследуемых солей (магния Ь-аспарагината и его комбинации с витамином Вб) была выше 1,5 г/кг, что позволяет, в соответствии с классификацией токсичности ве-

ществ (Саноцкий И В , Уланова И П , 1975), отнести их к классу малотоксичных препаратов

Таким образом, наиболее активными и эффективными соединениями на моделях гипомагнезиемий являлись магния Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином Вб При изучении фармакологической активности установлено, что магния Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином В6 устраняют гемобиоло-гические нарушения и иммуно-воспалительную реакцию, восстанавливают порог болеьой чувствительности у крыс с дефицитом магния, а также благоприятно влияют на течение экспериментального уролитиаза На моделях аритмий Ь-стереоизомер магния аспарагината оказался наиболее эффективным, по сравнению с БЬ- и О-стсрсоизомсрами По величине ЛД50 магния Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином В6 относятся к массу малотоксичных препаратов (Саноцкий И В , Уланова И П , 1975)

ВЫВОДЫ

1 В зависимости от величины полной компенсации алиментарного дефицита магния в эритроцитах исследуемые соли и лекарственные препараты можно ранжировать в следующем порядке магния Ь-аспарагинат > магния таури-нат > магния Ь-аспарагинат, таб > магния БЬ-аспарагинат > аснаркам® (калия, магния БЬ-аспарагинат) > магния ПЬ-глутамат > магния ОЬ-пироглута-мат > магния глицинат > магния О-аспарагинат > магния цитрат > магния Ь-глутамат > магаерот® (мат ния оротат) > магния лактат > магния сукцинат

2 Витамин Вб увеличивает биодоступность магниевых солей При этом комбинация магпия Ь-аспарагината с витамином В6 но скорости компенсации дефицита магния превосходит препарат сравнения магне В6® (магния лактат в комбинации с витамином Вб)

3 Магпия Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином Вб нормализуют гемо-биологические нарушения у крыс с дефицитом магния

4 Магния Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином В6, а также маше В6® приводят к устранению иммуно-воспалительной реакции, развивающейся у магнийдефицитных животных

5 При исследовании аптиноцицептивной активности магния Ь-аспарагинат в комбинации с витамином Вб более быстро, по сравнению с другими исследуемыми солями, восстанавливает порог болевой чувствительности магний-дефицитных животных

6 В условиях алиментарной гипомагнезиемии и интоксикации этиленглико-лем соли магния благоприятно влияют па течение кальцийоксалатного уро-литиаза При этом прослеживается тенденция большей эффективности магния Ь-аспарагината в комбинации с витамином Вб

7 На моделях аконитиновой и хлоридкальциевой аритмий Ь-стереоизомер магния аспарагината оказался наиболее эффективным, по сравнению с 01.-и Б-стереоизомерами

8 По уровню острой токсичности при пероралыюм введении магния Ь-аспа-рагинат и его комбинация с витамином Вб относятся к классу малотоксичных препаратов

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1 Сравнительное изучение фармакологической активности некоторых органических солей магния на модели алиментарной гипомагнезимии // Материалы 1-го съезда Российского общества медицинской элементологии «РОСМЭМ», Москва,9-10декабря 2004 Микроэлементы в медицине -М,2004 - Том5, Вып 4 -С 74-76 (соавт Порошин А В , Иежица И Н , Спасов А А , Озеров А А , Павлова И Ю )

2 Оценка порога болевой чувствительности у магнийдефицигиых крыс на фопе введения коммерческих магнийсодержащих препаратов и оригинальных солей магния // Материалы 63-ой открытой итоговой научной конференции студентов и молодых ученых ВолГМУ, посвященной 70-летаю ВолГМУ (с международным участием) «Актуальные проблемы экспериментальной и

клиническом медицины» -Волгоград, 2005 -С 96-98 (соавт Порошин А В , Иежица И Н , Павлова И Ю )

3 Изучение фармакологической активности коммерческих магнийсодержащих препаратов и оригинальных солей магния у крыс на модели алиментарной гипомагнезимии // Сб тез Докладов к международной научно-практической конференции с международным участием Одесского государственного медицинского университета «Вчеш майбутнього» -Одесса, 2005 -С 44

4 Сравнительное изучение фармакологической активности коммерческих магнийсодержащих препаратов и солей магния у крыс на модели алиментарной гипомагнезимии // Сб мат XIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» -М , 2006 -С 23 (соавт Иежица И Н , Спасов А А, Озеров А А , Павлова И Ю)

5 Препараты магния в терапии хронической боли // Лекарственный вестник -Волгоград, 2006 - №6(22), Т 3 -С 76-77 (соавт РыбакВА, Порошин А В , Иежица И Н )

6 Сравнительная противовоспалительная активность некоторых органических и неорганических солей магния в условиях алиментарного магниевого дефицита // Материалы 64-ой открытой итоговой научной конференции студентов и молодых ученых ВолГМУ «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» -Волгоград, 2006 -С 142-143 (соавт Харитоно-ваМВ)

7 Влияние органических солей магния на гемореологические свойства крови магнийдефицитных животных // Тез докл XI Региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области -Волгоград, 2006 —С 1415 (соавт Харитонова М В , Стуковина А Ю , Науменко Л В )

8 Сравнительное изучение фармакологической активности органических и неорганических солей магния в условиях экспериментального уролитиаза при алиментарном дефиците магния // Тез докл XI Региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области -Волгоград, 2006 -С 20-21 (соавт Харитонова М В , Лебедева С В )

9 Сравнительное изучение острой ток'сичиости органических солей магния // Материалы П-ой Международной научно-практической конференции «БИОЭЛЕМЕНТЫ» -Оренбург, 2007 - Т 2, Вып 8 -С 2-4 (соавт Спасов А А, Бугаева Л И , Иежица И Н , Лебедева С А , Озеров А А)

10 Влияние магния L-аспарагииата и его комбинации с витамином В 6 на процессы агрегации тромбоцитов животных в условиях машийдефицитпои диеты // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН -Волгоград, 2007 -№2 - С 3-6 (соавт Иежица И Н , Спасов А А , Харитонова М В , Стукови-на А Ю , Науменко Л В )

11 Влияние органических и неорганических солей магния па гемореологиче-ский статус животных в условиях алиментарной гипомагниемии // Гематология и трансфузиология - М , 2007 - Т 52, № 5 -С 38-44 (соавт Спасов А А , Иежица И Н , Харитонова М В , Стуковина А Ю , Науменко Л В)

12 Изучение противовоспалительной активности некоторых органических и неорганических солей магния в условиях машийдефицитпои диеты // Вопросы питания -М , 2007 - Т 76, № 5 -С 68-73 (соавт Спасов А А , Иежица И Н , Харитонова М В )

13 Comparative effects of treatment with magnesium aspartate, magnesium chloride and their combinations with pyndoxine hydrochloride on crystalluria in magnesium-deficient rats with hyperoxalunc urolithiasis // Abstracts of the 11th International Magnesium Symposium & Joint Meeting of the Japanese Society for Magnesium Research Shima Kanko Hotel, Kashikojima, Japan, October 23-26, 2006 Journal of Japanese society for magnesium research — 2006 — Vol 25, № 2 — P70(124) (co-authors Iezhitsa IN , Spasov A A , Khantonova M V)

14 Comparative study of magnesium salts' bioavailability in rats fed with magnesium-deficient diet // Abstracts of the 11th International Magnesium Symposium & Joint Meeting of the Japanese Society for Magnesium Research Shima Kanko Hotel, Kashikojima, Japan, October 23-26, 2006 Journal of Japanese society for magnesium research - 2006 - Vol 25. №2 -P 99(153) (co-authors Iezhitsa IN, Spasov A A , Kharitonova M V, Ozerov A A , Pavlova I Yu )

ч

КРАВЧЕНКО МАРИЯ СЕРГЕЕВНА

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ МАГНИЕВЫХ СОЛЕЙ НЕКОТОРЫХ ОРГАНИЧЕСКИХ КИСЛОТ

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать 27 12 2007 г Бумага офсетная 60x84/16 Уст печ л 1 0 Тираж 140 экз Заказ № 45236

Волгоградский государственный медицинский университет 400/31, Волгоград Па Павших борцов 1

Актуальность проблемы. Среди патологии элементного статуса у населения России очень важное значение имеет недостаточность магния (Бабенко Г.А., 1971; ЧекманИ.С. и др., 1982; Тутельян В.А., 1999, 2001; ОберлисД., 2002; Спасов A.A., 2000; Петров В.И., Спасов A.A. и др., 2003; Скальный A.B.-, 2004). Ионы магния участвуют во многих физиологических процессах - регуляция сердечно-сосудистого тонуса, обмена холестерина, воспалительных реакций, в нервной и мышечной- возбудимости и др. (ЧекманИ.С. и др., 1982; Durlach J., 1988; Спасов A.A., 2000; Durlach J., 2001; Seelig M.S., RosanoffA., 2003; Durlach J., 2007). Значимость магния, для организма определяет необходимость поддержания его гомеостаза.

Российские препараты на фармацевтическом рынке представлены только магния оксидом, лекарственным препаратом* аспаркам (калия, магния аспарагинат) и раствором- магния сульфата, обладающим рядом побочных эффектов, в том числе способностью вызывать гипохлоремический алкалоз (Seelig M.S., 2003). Тогда как, например, в США - 12-ю лекарственными препаратами (магния хлоридом, магния цитратом, магния глюцептатом, магния глюконатом и т.д.). Эффективность лекарственных препаратов магния существенно различается, а в литературных источниках часто содержатся достаточно противоречивые сведения об их биодоступности (D'Aniello А., D'Onofrio G. et al., 1993). В 1964 г. в Приволжской низменности были1 открыты уникальные^ по* запасам и качеству сырья залежи минерала- бишофит (MgCl2'6H20), с содержанием его в породе от 88' до 99%. В 2000* году в Волгоградском государственном медицинском университете (ВолГМУ) была разработана инициативная комплексная программа "Российский магний", в соответствии ^с которой было проведено комплексное изучение фармакологических свойств минерала бишофит. Учитывая большой положительный опыт применения препаратов магния и бишофита при различных заболеваниях, представляется целесообразным создание новых магнийсодержащих препаратов на основе минерала бишофит, обладающих более оптимальными показателями фармакокинетики и фармакодинамики. На наш взгляд, перспективным направлением решения данной задачи является получение магниевых солей органических кислот. Однако для широкого внедрения таких солей в практику необходимо их фармакологическое исследование, и, прежде всего, изучение биодоступности. Таким образом, изучение фармакологических свойств магниевых солей органических кислот является актуальной проблемой для фармации и медицины.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в рамках инициативной комплексной программы "Российский магний" ВолГМУ, а также в соответствии с научным планом НИР ВолГМУ (номер государственной регистрации 01.20.02 15607). Тема работы утверждена на заседании Ученого Совета университета (протокол №9 от 31.10.2003 г.). '"

Цель исследования. Сравнительное изучение биодоступности магниевых солей органических кислот, полученных в результате глубокой переработки минерала бишофит, исследование их фармакологической активности и механизма действия.

Задачи исследования.

1. Изучить зависимость биодоступности магниевых солей от структуры аниона органической кислоты (Ь-, ОЬ- и Б-аспарагината; Ь-, БЬ-глутамата, ОЬ-пироглутамата, глицината, лактата, сукцината, таурината, цитрата) при? пероральном введении^ на моделях алиментарной гипомагнезиемии и фуросемидной интоксикации.

2. Оценить влияние витамина Вб на биодоступность органических солей магния на моделях гипомагнезиемий.

3. Исследовать влияние солей магния на гемобиологический статус животных в условиях алиментарного дефицита магния.

4. Изучить противовоспалительную активность солей магния в условиях алиментарной гипомагнезиемии.

5. Провести исследование антиноцицептивного действия солей магния.

6. Изучить влияние солей магния на течение экспериментального уролитиаза на моделях гипероксалурии у крыс.

7. Исследовать антиаритмическую активность магния Ь-аспарагината, в сравнении с его Б- и ВЬ-стереоизомерами.

8. Определить острую токсичность органических солей магния.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное изучение фармакологической активности магниевых солей органических кислот при пероральном введении. Установлено, что на биодоступность солей магния влияет строение аниона органической кислоты и его стереоструктура. При этом показана более высокая активность магниевой соли Ь-стереоизомера аспарагиновой кислоты, по сравнению с БЬ и Б-стереоизомерами- и другими изучаемыми солями магния. Изучено влияние витамина Вб на биодоступность магниевых солей и доказано, что наибольшей биодоступностью обладает магния>Ь-аспарагинат при совместном применении с витамином-В6. Впервые проведено изучение» фармакологических свойств магния Ь-аспарагината' и его комбинации с витамином Вб в норме и при патологии: установлено благоприятное влияние изучаемых солей на гемобиологические показатели и протекание иммуно-воспалительной реакции у магнийдефицитных- животных; показано, что1- комбинация магния Ь-аспарагината с витамином Вб обладает выраженной* антиноцицептивной активностью; выявлено корригирующее действие солей магния* на течение экспериментального уролитиаза (в условиях алиментарного дефицита магния и интоксикации- этиленгликолем); установлено, что магния Ь-аспарагинат обладает более сильным антиаритмическим действием, по сравнению с БЬ- и Б-стереоизомерами. Впервые изучена острая токсичность магния Ь-аспарагината и его комбинации с витамином Вб при пероральном введении, при этом показано, что исследуемые соли являются малотоксичными и безопасными.

Научно-практическая; значимость работы. Данные, полученные при изучении фармакологической активности магниевых солей стереоизомеров аспарагиновой и глутаминовой кислот, существенно расширили представления о стереоселективности лекарственных препаратов. Выявлены результаты, позволяющие обосновать перспективность создания на основе комбинации магния Ь-аспарагината с витамином Вб лекарственной формы для перорального применения,, в качестве средства коррекции дефицита магния и ассоциированных с ним патологий.

Реализация результатов исследования. Оригинальные экспериментальные модели формирования уролитиаза в- условиях алиментарного дефицита магния и интоксикации этиленгликолем применяются в НИИ' Фармакологии ВолГМУ и лабораторией морфологии и иммуногистохимии Волгоградского научного/ центра РАМН при проведении научных экспериментов (информационное письмо «Моделирование уролитиаза в условиях алиментарного дефицита хмагния и интоксикации этиленгликолем»); Результаты работы включены в лекционный^ материал для студентовшечебного, педиатрического, фармацевтического-; факультетов,, слушателей- факультета усовершенствования врачей: и провизоров на кафедрах фармакологии, общей хихмии, биофармации ФУВ ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского и Ростовского государственных медицинских университетов (информационное письмо' «Сравнительная, фармакологическая активность магниевых солей некоторых органических кислот»). .

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Результаты, сравнительного- изучения? влияния; магниевых солей органических кислот на величину компенсации дефицита? магния в. организме животных при пероральном введении в условиях алиментарной гипомагнезиемии и фуросемидной!интоксикации.

2. Результаты исследования; влияния витаминаВ6 на скорость компенсации дефицита магния в организме на моделях гипомагнезиемий.

3. Влияние магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб на гемобиологический- статус животных в условиях алиментарной гипомагнезиемии.

4. Результаты изучения противовоспалительной активности магния L-аспарагината и его комбинации с витамином В6 у животных в условиях алиментарного дефицита магния.

5. Влияние магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб на порог болевой чувствительности магнийдефицитных животных.

6. Результаты исследования влияния магния L-аспарагината и его комбинации с витамином В6 на течение- кальцийоксалатного уролитиаза на моделях гипероксалурии у крыс.

7. Результаты изучения антиаритмической активности магния L-аспарагината, в сравнении с его D- и DL-стереоизомерами, на моделях аконитиновой и хлоридкальциевой аритмий.

8. Результаты исследования острой токсичности магния L-аспарагината и его комбинации с витамином Вб при пероральном введении.

Апробация работы. Основные материалы диссертации-докладывались и обсуждались на 62-й, 63-й и 64-й итоговых научных конференциях студентов и молодых учёных ВолГМУ, Волгоград, 2004-2006 гг.; IX, XI. Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, Волгоград 2004-2006 гг.; 1-ом съезде Российского общества медицинской элементологии «РОСМЭМ», Москва, 9-10 декабря 2004; П-ой Международной^ научно-практической конференции «БИОЭЛЕМЕНТЫ», Оренбург,.2007; Ш-ем съезде фармакологов России. «Фармакология - практическому здравоохранению», Санкт-Петербург, 23-27 сентября 2007; 1 Ith International Magnesium Symposium & Joint Meeting of the Japanese Society for Magnesium Research, Shima Kanko Hotel, Kashikojima, Japan, October 23-26, 2006.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 206 страницах текста компьютерного набора, иллюстрирована 20 рисунками, содержит 21 таблицу и 1 приложение. Состоит из "Введения", "Обзора литературы" (глава I), и 4-х глав собственных исследований (главы П-У), обсуждения результатов (глава VI), выводов и списка литературы, включающего 79 отечественных и 159 зарубежных источников.

выводы

1. В зависимости от величины полной компенсации алиментарного дефицита магния в эритроцитах исследуемые соли и лекарственные препараты можно ранжировать в следующем порядке: магния Ь-аспарагинат > магния тауринат > магния Ь-аспарагинат, таб. > магния БЬ-аспарагинат > аспаркам® (калия, магния БЬ-аспарагинат) > магния БЬ-глутамат > магния БЬ-пироглутамат > магния глицинат > магния Б-аспарагинат > магния цитрат > магния Ь-глутамат > магнерот® (магния оротат) > магния лактат > магния сукцинат.

2. Витамин Вб увеличивает биодоступность магниевых солей. При этом комбинация магния Ь-аспарагината с витамином В6 по скорости компенсации дефицита магния превосходит препарат сравнения магне Вб® (магния лактат в комбинации с витамином Вб).

3. Магния Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином Вб нормализуют гемобиологические нарушения у крыс с дефицитом магния.

4. Магния-Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином Вб, а также магне Вб® приводят к устранению иммуно-воспалительной реакции, развивающейся у магнийдефицитных животных.

5. При исследовании антиноцицептивной активности магния Ь-аспарагинат в комбинации с витамином Вб более быстро, по сравнению с другими исследуемыми солями, восстанавливает порог болевой чувствительности магнийдефицитных животных.

6. В условиях алиментарной гипомагнезиемии и интоксикации этиленгликолем соли магния благоприятно влияют на течение кальцийоксалатного уролитиаза. При этом прослеживается тенденция большей эффективности магния Ь-аспарагината в комбинации с витамином Вб.

7. На моделях аконитиновой и хлоридкальциевой аритмий Ь-стереоизомер магния аспарагината оказался наиболее эффективным, по сравнению с ОЬ- и О-стереоизомерами.

8. По уровню острой токсичности при пероральном введении магния Ь-аспарагинат и его комбинация с витамином В6 относятся к классу малотоксичных препаратов.

5.3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В ходе проведенных токсикологических исследований на мышах была выявлена характерная для магниевых солей клиника отравления и отсутствие явно выраженной негативной реакции со стороны животных на однократное внутрибрюшинное и пероральное их введение. Исходя из данных острого отравления исследуемыми веществами и реабилитации физического состояния, можно сделать вывод, что в условиях внутрибрюшинного и перорального введения исследуемые соли магния показали себя как относительно безопасные соединения.