Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности стереоизомеров калий магниевых солей аспарагиновой кислоты

Направахрукописи

СОЛОВЬЕВА НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СТЕРЕОИЗОМЕРОВ КАЛИЙ МАГНИЕВЫХ СОЛЕЙ АСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТЫ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

ПЯТИГОРСК-2004

Работа выполнена в Государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования Волгоградском государственном медицинском университете Министерства Здравоохранения и социального развития РФ

Научный руководитель: Член-корреспондент РАМН, Заслуженный

деятель науки Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор Спасов Александр Алексеевич

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор

Батурин Владимир Александрович Кандидат фармацевтических наук Давыдов Владимир Сергеевич

Ведущая организация: ГУ НИИ фармакологии РАМН (г. Москва)

Защита диссертации состоится « 8 » декабря 2004 г. в 09.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.069.01 по защитам диссертаций при Государственном общеобразовательном учреждении высшего профессионального образования Пятигорской государственной фармацевтической академии Министерства Здравоохранения и социального развития РФ по адресу: 357533, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской государственной фармацевтической академии. Автореферат разослан << 3""» ноября 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор фармацевтических наук, профессор

Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последнее время одним из перспективных направлений современной медицины является выявление и оценка отклонений в обмене макро- и микроэлементов, а также их коррекция (Бабенко ГА., 1971; АвцынА.П. и др., 1991; Агаджанян Н.А. и др., 1998; Скальный А.В., 1999, 2004; Спасов А.А., 2000, 2003; Кудрин А.В. и др., 2000; Оберлис Д., 2002; Беликов В.Г., 2003; Петров В.И. и др. 2003). Макроэлементозы и микроэлементозы представляют в современной России проблему национального масштаба. В целом около 2/3 взрослых и 3/4 детей в России могут быть отнесены в группы риска по гипоэлементозам, т.е дефициту от одного до нескольких важнейших макро- и микроэлементов одновременно (Скальный А.В., 2000). Одним из наиболее встречающихся и опасных нарушений ионного гомеостаза является нарушение гомеостаза магния и калия (Ryan M.P., 1993; Darupl., 1994; Спасов А. А., 2000).

Общеизвестно, что клиническая гипомагнезиемия может возникать как вместе с гипокалиемией, так и осложнять уже существующий дефицит калия. Гипомагнезиемия, сопровождающаяся магний-зависимой или магний-независимой гипокалиемией, довольно часто сопутствует таким заболеваниям, как хронический алкоголизм (Holzbach E., 1994; Elisaf M. et al., 2002), сердечнососудистые заболевания (Tveskov С. et al., 1992), сахарный диабет (особенно II типа) (Sjogren A. et al., 1988), наследственные заболевания почек (синдромы Барттера и Гителмана) (Warnock D.G.,2002; Hansen K.W., Mosekilde L. 2003), тяжелая форма диареи и рвоты (Derup I., 1994). Доказано, что терапия некоторыми лекарственными препаратами (дистальные и петлевые диуретики (Greenberg А., 2000), сердечные гликозиды (Martin B.J. et al., 1988; Young I.S. et al., 1991), амфотерицин В, гентамицин (KesP., Reiner Z., 1990), цисплатин (La-jer H., Daugaard G., 1999) также приводит к гипомагнезиемии и гипокалиемии.

Лекарственные препараты на основе калиевых и магниевых солей аспара-гиновой кислоты (аспаркам, панангин, паматон и кардилан) нашли широкое применение в медицинской практике (Клыков Н.В., Полякова Л.А., 1974; HolubP. et al., 1974; ХаджайЯ.И., Кистень Н.А., 1981; Трифонов С.А., Сапожков А.В. 1982; Аксельрод Л.Б. и др., 1985; Ггтж.пп A.A.. ?0ГП- Иежипя И.Н..

2003). Применяемые в настоящее время

1 ¿^Jô

is магния

аспарагината получены из аспарагиновой кислоты, синтезированной химическим путем, и поэтому представляют собой рацемическую смесь L- и D-стереоизомеров. Вместе с тем известно, что в организме человека более активно усваиваются и вовлекаются в биохимические процессы L-изомеры аминокислот, а судьба попадающего в организм человека D-стереоизомера аспарагиновой кислоты не совсем ясна. Исходя из этого, существует предположение, что комплексы калия и магния с L-стереоизомерами аминокислот будут обладать более высокой биодоступностью, чем комплексы с D-стереоизомерами, и как следствие, быстрее устранять внутриклеточный дефицит этих катионов.

Учитывая вышесказанное, представляется целесообразным сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты и выявление наиболее фармакологически активного стереоизомера.

Цель исследования. Сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты, выявление наиболее фармакологически активного стереоизомера и экспериментальное обоснование для дальнейших клинических исследований.

Задачи исследования:

1. Изучить эффективность калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты в устранении дефицита магния и калия на моделях лекарственной интоксикации (дигоксиновой и фуросемидной) и алиментарной гипомагнезиемии.

2. Оценить кинетику экскреции аминного азота и магния с мочой после внутривенной нагрузки калий магниевыми солями L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты.

3. Провести сравнительное изучение фармакологических свойств калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты на моделях экспериментальных аритмий (хлоридкальциевой, строфантиновой и аконитиновой).

4. Исследовать влияние стереоизомеров калий магниевых солей аспа-рагиновой кислоты на длительность сохранения биоэлектрической активности сердца у мышей при асфиксии.

5. Изучить влияние стереоизомеров калий магниевых солей аспараги-новой кислоты на продолжительность жизни мышей в условиях острой гипоба-рической гипоксии и острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме.

6. Провести сравнительное изучение острой токсичности калий магниевых солей аспарагиновой кислоты.

7. Исследовать хроническую токсичность наиболее активной калий магниевой соли аспарагиновой кислоты.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности растворов калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты. Показано, что K,Mg L-аспарагинат по сравнению с DL- и D-стереоизомерами более эффективен в устранении алиментарного и лекарственного дефицитов магния и калия. Установлено, что K,Mg L-аспарагинат обладает более выраженной противоаритмической и противоги-поксической активностью по сравнению с другими стереоизомерами. Впервые изучена острая и хроническая токсичности раствора K,Mg L-аспарагината, и было показано, что исследуемый стереоизомер является нетоксичным и безопасным.

Научно-практическая значимость работы. Полученные результаты исследования определяют целесообразность создания нового лекарственного препарата для внутривенного введения (аспаркама-Ц) на основе L-аспарагиновой кислоты в качестве средства коррекции дефицита калия и магния. Данные, полученные при изучении фармакологических свойств стереоизомеров, существенно расширили представления о стереоселективности лекарственных препаратов.

Реализация результатов исследования. Экспериментальные результаты проведенного исследования в пакете с другими документами представлены в Фармакологический государственный комитет МЗ РФ для получения разрешения на клинические испытания новой инъекционной формы K,Mg Ц-аспарагината.

Оригинальные модели лекарственной (фуросемидной и дигоксиновой) и алиментарной гипомагнезиемии применяются лабораторией патологии Волгоградского научного центра РАМН при выполнении научных исследований для оценки новых магниевых препаратов. Результаты работы используются в лек-

ционном и практическом курсах для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтического факультетов, слушателей факультета усовершенствования врачей и провизоров на кафедрах фармакологии, клинической фармакологии и фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского государственного медицинского университета, Ростовского государственного медицинского университета, Кубанской медицинской академии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. K,Mg L-аспарагинат в виде инъекционной формы наиболее эффективен в устранении калий магниевых дефицитов различной этиологии по сравнению с K,Mg D- и DL-аспарагинатами.

2. K,Mg L-аспарагинат обладает большей противоаритмической активностью по сравнению с его D- и DL-стереоизомерами.

3. Инъекционный раствор K,Mg L-аспарагината не оказывает токсического действия в терапевтических дозах при длительном применении, а при однократном введении менее токсичен по сравнению с K,Mg DL-аспарагинатом.

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на 61-й и 62-й итоговых научных конференциях студентов и молодых учёных ВолГМУ, Волгоград, 2002, 2003 гг.; VII и VIII Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, Волгоград, 2002, 2003 гг.; X юбилейной межгородской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии», Санкт-Петербург, 2004; 8th International Symposium on Metal Ions in Biology and Medicine, Hungary, Budapest, May 18-23, 2004.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, иллюстрирована 11 рисунками, содержит 38 таблиц и 19 приложений. Состоит из введения, обзора литературы (глава I), описания материалов и методов исследования (глава II), экспериментальной части (главы III и IV), обсуждения результатов (глава V), выводов и списка литературы, включающего 54 отечественных и 107 зарубежных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследования были выполнены на 647 половозрелых нелинейных белых крысах-самцах, массой 170-260 г, 166 белых неиморедных мышах-самцах, массой 22-24 г, и 43 морских свинках, массой 550-720 г, содержащихся в условиях вивария на стандартной диете с соблюдением всех правил и Международных рекомендаций Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997).

В работе проведено сравнительное изучение стереоизомеров K,Mg аспа-рагината в виде инъекционного раствора: K,Mg L-аспарагината и K,Mg D-аспарагината (ЗАО "Биоамид", г. Саратов)*. В качестве препарата сравнения использовался K,Mg DL-аспарагинат (ОАО "Фармак", г. Киев). Состав и содержание активных компонентов изучаемых лекарственных препаратов представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Аббревиатура, форма, состав и характеристика изучаемых калий магниевых солей трех стереоизомеров аспарагиновой кислоты

Лекарственная форма Состав и содержание активных компонентов в 1 мл раствора Изготовитель

K,Mg L-аспарагинат - инъекционный раствор "Аспаркам-и', 10 мл Магния L-аспарагината безводного - 40,0 мг (3,37 мг магния), калия L-аспарагината безводного - 45,2 мг (10,33 мг калия) Изготовлен и разлит на ОАО "Биосинтез" (г. Пенза) по технологии ЗАО "Биоамид" (г. Саратов).

K,Mg D-аспарагинат - инъекционный раствор, 10 мл Магния D-аспарагината безводного - 40,0 мг (3,37 мг магния), калия D-аспарагината безводного - 45,2 мг (10,33 мг калия) Изготовлен и разлит в ЦЛ ОАО "Биосинтез" (г. Пенза), аналогично "Аспаркаму-и\

K,Mg DL-аспарагинат инъекционный раствор "Аспаркам", 5 мл(препарат сравнения) Магния DL-аспарагината безводного - 40,0 мг (3,37 мг магния), калия DL-аспарагината безводного-45,2 мг (10,33 мг калия) ОАО "Фармак" (г. Киев, Украина).

Выражаем признательность ген директору ЗАО "БИОАМИД" (г -Саратов), к х н СП Воронину и к х н М К Синолицкому за синтез и предоставление препаратов для проведения настоящей работы

На первом этапе исследования изучали эффективность стереоизомеров K,Mg аспарагината в устранении дефицита магния и калия на моделях лекарственной интоксикации (дигоксиновой и фуросемидной) и алиментарной гипо-магнезиемии. На следующем этапе оценивали кинетику экскреции аминного азота и магния с мочой после внутривенной нагрузки K,Mg L-, D- и DL-аспарагинатами. Третьим этапом стало сравнительное изучение калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты на моделях экспериментальных аритмий (хлоридкальциевой, строфантиновой и аконитиновой). На следующем этапе оценивали эффективность стереоизомеров K,Mg аспарагината при гипок-сических состояниях. На последнем этапе изучали острую и хроническую токсичности наиболее активной калий магниевой соли аспарагиновой кислоты.

Уровень магния в плазме, эритроцитах и моче определяли по цветной реакции с титановым желтым (Sigma, США) с измерением на спектрофотометре СФ-26 (ЛОМО, Россия) (Меньшиков В.В., 1987). Содержание калия (эритроциты и сердце) и магния (сердце) определяли методом атомно-абсорбционной спектрофотометрии (спектрофотометр СФ-115-М1, ЛОМО, Россия) согласно ГОСТ 26929-94, ГОСТ 30178-96.

На первом этапе исследования изучаемые лекарственные препараты вводили по следующей схеме: однократно в хвостовую вену при снижении концентрации магния в эритроцитах ниже 1,4 ммоль/л в дозе 1,17 мл/кг [100 мг/кг], а затем внутрибрюшинно в той же дозе в течение 7-ми дней. Забор крови у животных проводили через 3, 6, 24 часа после однократного введения препаратов и через 7 дней внутрибрюшинного введения.

Лекарственную гипомагнезиемию и гипокалиемию вызывали растворами дигоксина (0,25 мг/кг, 0,025% раствор; «Мосхимфармпрепараты» им. Н.А.Семашко, г. Москва) и фуросемида (30 мг/кг, 1% раствор; «Полифарм», г. Челябинск) при внутрибрюшинном введении в течение двух недель.

Для моделирования алиментарной гипомагнезиемии животные получали специальную магнийдефицитную диету фирмы ICN Biomedicals Inc. (Aurora, Ohio, США) с 3,5% содержанием полиминеральной смеси AIN-76, из которой был полностью исключен магний. Указанный состав диеты полностью соответствовал рекомендациям Специализированного Комитета США по Стандартам в

исследованиях питания (Ad Hoc Committee on Standrs for Nutrition Studies, 20 March, 1980).

Для оценки скорости экскреции алинного азота и магния стереоизомеры K,Mg аспарагината вводили однократно в хвостовую вену в дозе 1,17 мл/кг [100 мг/кг]. Забор образцов у животных проводили через 4, 8,12, 16,20 и 24 часа после инъекции с использованием метаболических камер (TechniPlast, Италия). Содержание аминного азота определяли колориметрически по интенсивности окрашивания с нингидриновым реактивом го методу Узбекова Г.А. в модификации Чулковой З.С. (Колб В.Г., 1976). Для количественного определения содержания аспарагиновой кислоты в моче использовали метод хроматографи-ческого разделения на бумаге по Боде - Гири (Алейникова Т.Л., Рубцова Г.В., 1988).

Антиаритмическое действие лекарственных препаратов изучали в соответствии с "Методическими указаниями по изучению антиаритмической активности фармакологических веществ" (Каверина Н.В. и др., 2000). Аритмия с механизмом ранней постдеполяризации моделировалась по общепринятой методике с помощью аконитина (50 мкг/кг, "Sigma", США) задержанной постдеполяризации - строфантина К (0,5 мг/кг, Галичфарм", г. Львов) и хлорида кальция (250 мг/кг, ОАО "Дальхимфарм", г. Хабаровск). Во всех сериях экспериментов электрокардиограмму регистрировали во 2-м стандартном отведении с помощью медицинского осциллоскопа ОС2-01 (Львовский завод радиоэлектронной медицинской аппаратуры) на самописце Н-338-8 (ПО «Краснодарский ЗИП»). Нарушения ритма контролировали по изменению зубцов электрокардиограммы. Эффективность препаратов оценивали по их способности предупреждать возникновение аритмии и фибрилляций, удлинять время латентного периода, удлинять время выживания животных в эксперименте. На модели ако-нитиновой аритмии для препаратов были рассчитаны ED50 и антиаритмический индекс (LD50/ED50), отражающий терапевтическую широту препарата.

Эффективность лекарственных препаратов при гипоксических состояниях изучали согласно "Методическим рекомендациям, одобренным Фармакологическим Комитетом МЗ РФ по изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксических средств" (Лукьянова Л.Д., 1990). Для оценки степени профилактического влияния K,Mg L-аспарагината

на длительность жизни мышей при асфиксии в сргвнении с DL-стереоизомером были проведены эксперименты согласно методике, используемой Затула Е.И. и др. (1989). Противогипоксическую активность изучали на моделях острой ги-побарической гипоксии и острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме.

Изучение острой и хронической токсичности K,Mg Ц-аспарагината проводили согласно "Методическим указаниям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ" (Арзамасцев Е.В. и др., 2000). При расчете ЛД50 использовали стандартный классический метод Литчфилда и Вилкок-сона (Беленький М.Л, 1963). При изучении хронической токсичности раствора для инъекций K,Mg Ц-аспарагината у животных исследовали поведенческую активность по показателям теста «открытое поле» (Буреш Я., Бурешова О., 1991), функциональную активность сердца по электрокардиограмме во 2-ом стандартном отведении. Активность микросомальных окислительных систем печени оценивали с помощью гексеналовой пробы (Гижларян М.С., 1976). Исследование выделительной функции печени оценивали с помощью пробы с нагрузкой бромсульфалеином (Хазанов А.М.,1968; Сандоре В.Ю. и др., 1976; Из-райлет Л.И. и др., 1976) и феноловым красным (Берхина Е.Б., Иванова Ю.И., 1972). В периферической крови подсчитывали количество эритроцитов и лейкоцитов в камере Горяева, измеряли уровень гемоглобина (цианметогемогло-биновый метод), рассчитывали цветовой показатель эритроцитов. Количество лейкоцитов подсчитывали по мазкам крови по методу Романовского (Кост ЕА., 1968). Для проведения биохимических исследований в плазме крови животных определяли содержание глюкозы ферментативным методом, общего белка - с помощью биуретовой реакции (Кост Е.А., 1975), трансаминаз - по методу Рай-тмана), мочевины - диацетилмоноксимным методом, креатинина - по цветной реакции Яффе. Для проведения патоморфологических исследований крыс де-каптировали, используя принципы эвтаназии Матюшина А.И. и др. (1987). После вскрытия проводили макро- и микроскопическое обследование внутренних органов.

Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью программы 81аИ$Ика 6,0 с использованием однофакторного дисперсного анализа и критерия 8сИейе, 1-критерия Стьюдента с поправкой Бонферрони.

Для оценки статистической значимости различия процентных долей использовали точный критерий Фишера (Гланц С, 1998).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Эффективность препаратов в устранении дефицитов магния и калия

В результате проведенных исследований на модели дигоксиновой интоксикации было показано, что при двухнедельном введении дигоксина содержание магния и калия в эритроцитах крыс уменьшалось в среднем на 36,7+1,4% и 57,6+10,1% соответственно относительно показателей интактных животных (р<0,05). Полученные данные соответствуют литературным, согласно которым в условно-терапевтических дозах сердечные гликозиды понижают канальцевую реабсорбцию Mg2+ (Маввгу 8.0., 1977), а длительное лечение препаратами дигиталиса, как правило, сопровождается умеренной гипомагнезиемией и гипока-лиемией, которая при токсических осложнениях становится постоянной и выраженной ^егир I., 1993).

Достаточно высокая эффективность K,Mg аспарагината при дигиталис-ной интоксикации, показанная Огеей1 К., КшррегеЯ. (1963), 2о1а-81ес2ек Е., МосИакЫ "" (1979), Doгup1. (1993), подтверждается наблюдениями. Через 3 часа после однократного введения растворов K,Mg L- и DL-аспарагината содержание магния в эритроцитах повышалось относительно уровня магния животных, получавших только дигоксин, в среднем на 23,7+1,5% и 7,4+2,3%, а при применении K,Mg D-аспарагината было ниже на 10,4+1,8%. При этом отличия K,Mg L- аспарагината от K,Mg DL- и D-асларагината были достоверны при р<0,05 (рис. 1). Через 24 часа после однократного введения K,Mg L-, D- и DL-аспарагинатов содержание магния в эритроцитах повышалось относительно базового уровня в среднем на 16,1 +7,5%; 7,3+4,3% и 10,2+5,9%, а содержание калия было выше относительно уровня калия животных, получавших только дигоксин, на 165,4+6,4%; 143,9+24,8% и 150,3+14,0% (р<0,05).

После курсового введения растворов K,Mg L-, D- и DL-аспарагината концентрация магния в эритроцитах увеличивалась относительно уровня магния животных, получавших только дигоксин, на 50,4+4,9%; 38,9+6,2% и 40,3+3,9% (р<0,05), что соответствовало полному восстановлению магния в эритроцитах (рис. 1).

В плазме не наблюдалось достоверных отличий в скорости восполнения уровня магния при применении стереоизомеров K,Mg аспарагината. Однако уровень магния в плазме не отражает его внутриклеточного содержания, поэтому диагностическую ценность в определении магниевого гомеостаза имеет снижение внутриэритроцитарного магния (Wang J.Z., 1987; Derup I., 1993).

20 10

0 1Ш -10 '

-20

-30 --40 -50 -60 --70

Исход

Рисунок 1 - Влияние калий магниевых солей L-, D- и DL-стереоизомеров аспа-рагиновой кислоты на изменение содержания магния в эритроцитах крыс при двухнедельной интоксикации дигоксином.

Обозначения: по оси ординат - изменение концентрации магния в эритроцитах в % относительно интактных животных (принимается за 0); по оси абсцисс - периодичность измерения (недели, часы). Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. Вертикальная стрелка - начало введения растворов K,Mg аспарагината. * - статистически значимое отклонение от интактных животных при р<0,05; ** - достоверны относительно дигоксина при р<0,05; достоверны относительно K,Mg D-аспарагината; *- достоверны относительно K,Mg DL-аспарагината при р<0,05

Терапия дигоксином приводит к изменению калиевого и магниевого электролитного баланса не только в плазме и эритроцитах (Ben-Aryeh H. et al., 1982; Henion W.A. et al., 1983), но и в миокарде (Dyckner T. et al., 1977). Так содержание калия в сердце у крыс, получавших дигоксин, снижалось на 31,6+8,7% по сравнению с показателями интактных животных (р<0,05). Через 24 часа после однократного введения K,Mg L-аспарагината содержание калия в сердце восстанавливалось до уровня интактных животных. В группах живот-

ных, получавших K,Mg DL-аспарагинат и K,Mg D-аспарагинат, содержание калия не изменялось и оставалось ниже уровня интактных крыс в среднем на 48,2±6,7% и 46,7±4,1% соответственно (р<0,05), а полное восстановление калия наблюдалось через неделю внутрибрюшинных инъекций.

Общеизвестно, что фуросемид является "петлевым диуретиком" и уменьшает реабсорбцию в толстом сегменте восходящей части пет-

ли Генли в результате воздействия на электронейтральный -ко-

транспорт через люминальную мембрану (Quamme G. А., 1981). Это приводит к повышению выведения указанных ионов из организма и снижению концентрации в плазме и эритроцитах (Abraham A.S., Meshulam Z. et al., 1988), что совпадает с результатами данных исследований. При введении раствора фуросемида в течение 2-х недель содержание магния в эритроцитах крыс уменьшалось на 41,0+1,1% (р<0,05), а в плазме - на 30,4±1,3% (р<0,05) относительно показателей интактных животных.

Применение K,Mg аспарагината изменяло равновесие между реналь-ными потерями К+ и Mg2+ и поступлением этих катионов извне, что приводило к восполнению их концентрации. Так через 24 часа после однократного введения растворов K,Mg L-, D- и DL-аспарагината содержание магния в эритроцитах повышалось относительно уровня магния животных, получавших только фуросемид, в среднем на 48,9±3,0%; 26,7±5,0% (р<0,05) и 19,4±6,0% соответственно. При этом была обнаружена статистически значимая разница между K,Mg L-аспарагинатом и его стереоизомерами в скорости восстановления магния через 6 и 24 часа после инъекции (рис.2).

После курсового введения препаратов наблюдалось полное восстановление уровня магния в эритроцитах и плазме. При этом, как и в серии экспериментов с дигоксином, в динамике восполнения магния в эритроцитах при введении изучаемых лекарственных препаратов можно проследить отчетливую тенденцию более быстрого восполнения магния при применении K.Mg L-аспарагината по сравнению с его D- и DL-стереоизомерам. В зависимости от скорости нивелирования гипомагнезиемии препараты можно расположить в следующем порядке: K,Mg L-аспарагинат > K,Mg DL-аспарагинат > K,Mg D-аспарагинат.

Рисунок 2 - Влияние калий магниевых солей Ь-, Б- и БЬ-стереоизомеров аспа-рагиновой кислоты на изменение содержания магния в эритроцитах крыс при двухнедельной интоксикации фуросемидом.

Обозначения по оси ординат - изменение концентрации магния в эритроцитах в % относительно интактных животных (принимается за 0), по оси абсцисс - периодичность измерения (недели, часы) Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины Вертикальная стрелка - начало введения растворов К,М аспарагината * - статистически значимое отклонение от интактных животных при р<0,05, ** -достоверны относительно фуросемида при р<0,05, достоверны относительно Б-аспарагината при р<0.05, достоверны относительно К,М БЬ-аспарагината при р<0,05

В данных исследованиях фуросемид не оказывал никакого влияния на содержание магния и калия в миокарде. Это согласуется с некоторыми литературными данными. Так в исследованиях Borchgrevink Р.С., Holten Т., Jynge P. (1987) было показано, что фуросемид в больших дозах в течение 4 недель введения приводит к снижению концентрации магния и калия в плазме, магния в костной ткани и калия в поперечно-полосатой скелетной мышце, но при этом не оказывает никакого влияния на содержание этих макроэлементов в миокарде (Borchgrevink Р.С., Holten Т., Jynge P., 1987).

Для моделирования алиментарного дефицита магния и калия была выбрана магнийдефицитная диета. Имеются данные, что у животных, получавших магнийдефицитную диету, наблюдается статистически значимое снижение калия в скелетных мышцах. DOrup I, Clausen Т. (1993) отмечают, что алиментарный дефицит магния у животных сопровождается калий дефицитным состояни-

ем. Даже в присутствии избыточного количества калия в магнийдефицитной диете у крыс наблюдалось снижение концентрации калия в тканях (Ryan M.P. et а!., 1973) Более того, восстановление калия в клетках напрямую связано с восстановлением магния (Whang R. et al., 1967).

В результате было установлено, что содержание животных на безмагниевой диете сопровождается изменением внешнего вида и ряда интегральных показателей. При анализе динамики массы животных, получавших диету, не содержащую магний, было показано статистически значимое снижение массы тела на 29,2±0,7% (р<0,05) по отношению к группе интактных животных. Полученные результаты совпадают с данными, согласно которым у животных, как дефицит калия, так и магния характеризуется задержкой прироста массы тела (Giugliano R., Millward D.J., 1984).

У крыс, находящихся на диете, к концу 9 недели наблюдалось снижение магния в эритроцитах на 45,4± 1,3% относительно интактных животных (р<0,05). Через 6 часов после однократного введения K,Mg L-, D- и DL-аспарагинатов уровень магния в эритроцитах повышался относительно содержания магния у животных, получавших только диету, в среднем на 39,6±2,2%, 15,9±3,0% и 22,5±4,7% соответственно (р<0,05) (рис. 3).

В плазме крови у животных, находящихся на безмагниевой диете, также наблюдалось достоверное снижение магния по сравнению с показателями ин-тактных животных (р<0,05). Концентрация магния в плазме после однократного введения (измерение через 24 часа) в группах, получавших растворы K,Mg L- ,D- и DL-аспарагината, отличалась от уровня магния у животных, получавших только диету, на 76,9±4,1%, 41,0±5,1% и 66,7±3,6% соответственно (р<0,05). При этом обнаруживались отличия между группами крыс, получавшими K,Mg L- и DL-аспарагинат, по сравнению с животными, получавшими K,Mg D-аспарагинат, на 25,5±2,9% и 18,2±3,0% соответственно (р<0,05). Полное восстановление уровня магния в эритроцитах и плазме наблюдалось после курсового введения препаратов. Таким образом, K,Mg L-аспарагинат способствовал более быстрой компенсации дефицита калия и магния.

■ интактные животные ■безмагниевая диета

2.5

В безмагниевая диета-К.Мд Ьаспарагинат □ безмагниевая диета-К,Мд БЬ-аспарагинат 13 безмагниевая диета-К.Мд О-аспарагинат

*

* ^ "

2

1.5

1

0,5

О

Исход 9 недель 9 недель 9 недель 9 недель 10 недель (3 часа) (6 часов) (24 часа) (1 неделя)

Рисунок 3 - Влияние калий магниевых солей L-, D- и DL-стереоизомеров аспа-рагиновой кислоты на изменение содержания магния в эритроцитах крыс при алиментарной гипомагнезиемии.

Обозначения: по оси ординат • изменение концентрации магния в эритроцитах (ммоль/л); по оси абсцисс - периодичность измерения (недели, часы). Вертикальные штрихи соответствуют стандартной ошибке средней величины. Вертикальная стрелка - начало введения растворов КМ аспарагината. * - статистически значимое отклонение от интактных животных при р<0,05; ** -достоверны относительно безмагниевой диеты при р<0,05, §- достоверны относительно КМ Б-аспарагииата при р<0,05; #- достоверны относительно КМ БЬ-аспарагината при р<0,05.

Изучение скорости экскреции аминного азота и магния с мочой

Доказано, что D-стереоизомеры аминокислот не физиологичны, а в организме более активно всасываются и включаются в метаболизм L-аминокислоты. Попадая в организм, D-аминокислоты метаболизируются в а-оксокислоты оксидазой D-аминокислот (DAO) или оксидазой D-аспарагиновой кислоты (Nagata Y, et э1., 1989; D'AnieUo A. et я1., 1993). В исследованиях gata Y. et в1. (1989) было показано, что DAO-дефицитные мыши выделяют почти в 13 раз больше D-аминокислот с мочой, чем нормальные мыши. Хотя большинство D-аминокислот окисляются DAO в печени, почках и других тканях, можно предположить, что часть D-аспарагиновой кислоты при внутривенной нагрузке препаратами минует эти энзиматические барьеры и выводится из организма в неизмененном виде. В исследованиях в качестве косвенного показателя выведения аспарагиновой кислоты использовалась скорость экскреции аминного азота с мочой. Было получено, что через 4 часа после внутривенной

нагрузки K,Mg L-аспарагината скорость экскреции с мочой аминного азота не отличалась от контрольных животных, а при введении D- и DL- стереоизомеров K,Mg аспарагината достоверно увеличивалась приблизительно в 20 раз в первые 4 часа. Для подтверждения того, что увеличение аминного азота происходит за счет выведения D-аспарагиновой кислоты в неизмененном виде, было проведено разделение аминокислот мочи методом распределительной восходящей хроматографии на бумаге. В результате было обнаружено, что после внутривенного введения K,Mg L-аспарагината содержание аспарагиновой кислоты в моче не отличалось от контроля. В то время как после введения K,Mg DL-аспарагината и K,Mg D-аспарагината наблюдалось статистически значимое увеличение аспарагиновой кислоты в моче приблизительно в 3 и 6 раз по отношению к контролю соответственно. Скорость экскреции с мочой магния при внутривенной нагрузке K,Mg L-аспарагината не отличалась от показателей контрольных животных, а при введении D- и DL- K,Mg аспарагинатов достоверно увеличивалась в первые 4 часа.

Изучение антиаритмической активности

Главную роль в развитии нарушений ритма сердца и его сократительной функции играет дисбаланс ионов К\ Na* Са:+ И Mg2' (Bigger J.T., 1987; Opie L.H., Clusin W.T., 1990; Литвицкий П.Ф. и др., 1994). По мнению Мешкова А.П. (1999), в клинической практике преобладают аритмии, обусловленные не критическим изменением плазменной концентрации , а локальными

электролитными сдвигами в мышце сердца.

На модели строфантиновой аритмии время до начала нарушения ритма у животных, получавших L- и DL-стереоизомеры K,Mg аспарагината, увеличилось в среднем на 57% и 30%, соответственно. Продолжительность жизни в группе животных, получавших K,Mg L-аспарагинат, статистически достоверно увеличилась в 3 раза по сравнению с контрольными животными. Продолжительность жизни в группах крыс, получавших DL- и D-стереоизомеры K,Mg аспарагината, была меньше, чем при использовании K,Mg L-аспарагината на 22,2% и 55,6% (р<0,05) соответственно (табл. 2).

Данные исследования согласуются с результатами, полученными ранее Хаджаем Я.И., Кистенем Н.А. (1981), которые показали эффективность K,Mg

аспарагината при предсердной экстрасистолии. Калий более эффективен при аритмиях, вызванных эктопической активностью, так как под его влиянием уменьшается скорость диастолической деполяризации. Магний в свою очередь обладает множеством свойств, позволяющих использовать его как антиаритмическое средство, в частности, он сочетает в себе качества антиаритмических препаратов, относящихся к I и IV классам (мембраностабилизирующее и антагонисты кальция) (Верткин А.Л., Городецкий В В., 1997; Спасов АА., 2000).

Таблица 2 - Антиаритмическая активность калий магниевых солей Ь-, Б- и БЬ-стереоизомеров аспарагиновой кислоты на модели строфантиновой интоксикации морских свинок (М±т)

Изучаемый препарат п Строфантиновые нарушения ритма

Начало нарушений ритма (мин) Продолжительность аритмии (мин) Продолжительность жизни животных от начала аритмии до смерти (мин)

Контрольные животные 14 2,23±0,1 15,11±1,99 15,11±1,99

К,Mg L-аспарагинат 11 3,5±0,52 20,28±4,92 46,5±6,69*,**

К,Mg DL-аспарагинат 11 2,99±0,33 17,77±2,58 36,14±6,31*

К,Mg D-аспарагинат 7 2,23±0,75 15,06±5,06 20,63±6,08

Обозначения: п - количество животных в эксперименте;* - различия статистически значимы относительно контрольных животных (р<0,05); ** - различия статистически значимы относительно К,М Б-аспарагината (р<0,05).

Противоаритмическое действие K,Mg аспарагинат оказывал и на модели хлоридкальциевой аритмии. Антиаритмический эффект K,Mg аспарагината, вероятно, обусловлен не только ликвидацией внеклеточного электролитного дисбаланса, но и антагонистическим взаимодействием ионов магния с ионами кальция (LassaraR., Scherlag BJ., 1988; СвятовИ.С, Шилов A.M., 1996). В результате исследования K,Mg L-аспарагинат предотвращал фибрилляцию желудочков в 42,86%, K,Mg DL-аспарагинат - в 30%, а K,Mg D-аспарагинат - только в 12,5% случаев. Кроме того, K,Mg L-аспарагинат достоверно увеличивал время до развития аритмии по сравнению с контрольными животными на 28,56%, а по сравнению с K,Mg DL- и -D аспарагинатами на 34,44% и 38,89% (р<0,05) соответственно.

При изучении влияния стереоизомеров K,Mg аспарагината на развитие аконитиновой аритмии было установлено, что вероятность возникновения фибрилляций снижалась у животных, получавших K,Mg Ь- и БЬ-аспарагинат в дозах 150 мг/кг и выше. У крыс, получавших K,Mg Ь-аспарагинат в дозе 150 мг/кг, статистически достоверно увеличивалось время до начала возникновения аритмии по сравнению с контрольными животными в 2,83 раз, а по сравнению с K,Mg БЬ- и Б-аспарагинатом - в 2,14 и 2,02 раза соответственно (р<0,05). Продолжительность жизни внутри групп крыс, получавших K,Mg Ь- и БЬ-аспарагинат, значительно превышала Б-форму. ЕБ50 K,Mg Ь- и БЬ-аспарагината меньше по сравнению с K,Mg Б-аспарагинатом в 3,4 и 3,1 раз соответственно (табл. 3).

Таблица 3 - Параметры острой токсичности (ЛД50), эффективная антиаритмическая доза (ЭД50) и антиаритмический индекс (ЛД50/ЭД50) калий магниевых солей Ь- ,БЬ- и Б- стереоизомеров аспарагиновой кислоты на модели аконити-новой аритмии

Изучаемый препарат ЛД5!1 (мг/кг, в/в) ЭД5о(лгг/кг) (ЛД5о/ЭД5о)

КМ§ Ь-аспарагинат 437,08 (396,18—483,084) 85,53 (69,61+105,08) 5,11

БЬ-аспарагинат 398,74 (374,88-423,44) 94,16 (70,96-424,96) 4,23

КМё Б-аспарагинат 351,88 (302,46-408,96) 291,94 (188,63-451,84) 1,21

Изучение противогипоксической эффективности препаратов

При изучении эффективности препаратов на длительность сохранения биоэлектрической активности сердца у мышей при асфиксии было установлено, что у животных, получавших K,Mg Ь- и БЬ-аспарагинат в дозе 50 мг/кг, наблюдалось увеличение продолжительности жизни по сравнению с контрольными животными соответственно на 61,6% и 29,03%, причем у животных, получавших K,Mg Ь-аспарагинат, продолжительность жизни статистически значимо увеличилась по сравнению с животными, получавшими БЬ- и Б-стереоизомеры. В дозе 100 мг/кг K,Mg Ь-аспарагинат статистически достоверно удлинял продолжительность жизни животных по сравнению с контрольными

животными на 40,79%, а с группами животных, получавших K,Mg БЬ-аспарагинат и K,Mg Б-аспарагинат, на 19,9% и 17,25% соответственно.

Изученные средства оказывали эффект на моделях острой гипобариче-ской гипоксии и острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме. При этом K,Mg Ь-аспарагинат в дозе 100- мг/кг удлинял продолжительность жизни мышей в среднем на 27% (р>0,05), а защитный эффект K,Mg БЬ-аспарагината в этой дозе составил лишь около 7% на модели острой гипобарической гипоксии. При увеличении дозы лекарственных препаратов их защитное действие усиливалось, причем в дозе 300 мг/кг K,Mg Ь-аспарагинат несколько уступал по активности K,Mg БЬ-аспарагинату. На модели острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме K,Mg Ь-аспарагинат в дозе 100 мг/кг недостоверно продлевал продолжительность жизни мышей на 12%, лишь незначительно уступая по эффективности БЬ-стереоизомеру. Полученные результаты согласуются с литературными данными, в которых K,Mg аспарагинат оказывал защитное влияние при гипоксических состояниях (Хаджай Я.И., Кистень Н.А., 1981).

Изучение острой и хронической токсичности

В соответствии с общепринятой классификацией токсичности веществ (Саноцкий И.В., Уланова И.П., 1975) растворы K,Mg Ь- и БЬ-аспарагината можно отнести к классу малотоксичных препаратов. Это согласуется с литературными данными, полученными ХаджаемЯ.И. и Кистенем Н.А. (1981), в которых был сделан вывод о малотоксичности аспаркама. Из представленных в таблице 3 величин ЛД50 видно, что среди изучаемых препаратов менее токсичным оказался K,Mg Ь-аспарагинат. Исходя из данных острого отравления исследуемыми веществами, реабилитации физического состояния и прибавки массы тела животных, оставшихся в живых после инъекций, можно предположить, что для клиники токсического действия K,Mg Ь-аспарагината характерно более быстрое ее развитие и последующее восстановление физической активности у животных по сравнению с животными, получавшими K,Mg БЬ-аспарагинат. Под действием данного препарата в реабилитационный (2-х недельный) период у животных наблюдалась также тенденция большего прироста массы тела.

Результаты исследования хронической токсичности показали, что K,Mg Ь-аспарагинат при внутривенном введении в течение одного месяца крысам в терапевтической дозе не оказывает существенного влияния на их общее состояние, поведение, функции сердца, печени, почек. Раствор K,Mg Ь-аспарагината не влияет на гематологические и биохимические показатели крови животных во все периоды измерений. Изменения, зафиксированные в отношении действия K,Mg Ь-аспарагината в указанной дозе на поведенческую активность и работу сердца крыс, были недостоверными и обратимыми.

Было показано, что раствор K,Mg Ь-аспарагината при внутривенном введении в течение одного месяца в токсической дозе не оказывает существенного влияния на гематологические и биохимические показатели. Раствор K,Mg Ь-аспарагината способствовал депривации двигательной активности, незначительному повышению экскреторной активности почек, со стороны электрокардиограммы наблюдались изменения, характерные для интоксикации солями магния. Вместе с тем тенденции перестройки работоспособности миокарда, установленные по электрокардиограммам крыс, не вызывали структурных изменений в его архитектонике. Выявленные у крыс изменения под действием раствора K,Mg Ь-аспарагината в токсической дозе были нивелированы через один месяц отмены введения, что позволило сделать заключение об отсутствии у препарата патологического влияния на поведение и работу сердца, а также и другие основные гомеостатические показатели животных. По результатам изучения хронической токсичности раствора K,Mg Ь-аспарагината, можно заключить, что исследуемая форма K,Mg Ь-аспарагината является нетоксичной и безопасной.

Таким образом, выявлено, что Ь-стереоизомер K,Mg аспарагината приводит к более быстрой компенсации дефицита магния и калия в организме при лекарственной интоксикации, а также к более быстрому восстановлению уровня магния при алиментарной гипомагнезиемии, по сравнению с его БЬ- и Б-стереоизомерами. При изучении скорости экскреции магния и аминного азота с мочой после однократной внутривенной нагрузки препаратами установлено, что после введения K,Mg Ь-аспарагината скорость экскреции аминного азота с мочой меньше, чем после введения Б- и БЬ- стереоизомеров K,Mg аспарагината. В серии экспериментов на моделях экспериментальных аритмий Ь-

стереоизомер K,Mg аспарагината также оказался наиболее эффективным по сравнению с DL- и D-стереоизомерами. K,Mg L-аспарагинат оказался наиболее эффективным на выбранных моделях острой гипобарической гипоксии и острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме и достоверно увеличивал продолжительность жизни животных при асфиксии по сравнению с K,Mg DL- и D-аспарагинатами. По результатам изучения острой и хронической токсичности K,Mg L-аспарагината в растворе было установлено, что исследуемая форма K,Mg L-аспарагината является нетоксичной и безопасной. Наибольшая эффективность K,Mg L-аспарагината в устранении дефицита магния и калия в организме по сравнению с другими стереоизомерами и отсутствие токсического воздействия позволяет рекомендовать проведение его испытаний в клинике.

ВЫВОДЫ

1. K,Mg L-аспарагинат приводит к более быстрой компенсации дефицита магния и калия в организме на моделях лекарственной интоксикации (ди-гоксиновой и фуросемидной) и восполнению магния в эритроцитах на модели алиментарной гипомагнезиемии по сравнению с DL- и D-стереоизомерами K,Mg аспарагината. В зависимости от скорости нивелирования гипомагнезиемии препараты можно расположить в следующем порядке: K,Mg L-аспарагинат > K,Mg DL-аспарагинат > K,Mg D-аспарагинат

2. После однократного внутривенного введения L-, D- и DL-стереоизомеров K,Mg аспарагината установлено, что при введении K,Mg L-аспарагината скорость экскреции суточного аминного азота и магния с мочой меньше, чем после введения D- и DL-стереоизомеров, при этом увеличение аминного азота в моче связано с увеличением экскреции аспарагиновой кислоты.

3. На моделях экспериментальных аритмий (хлоридкальциевой, стро-фантиновой и аконитиновой) раствор K,Mg L-аспарагината оказался наиболее эффективным по сравнению с его DL- и D-стереоизомерами по времени начала развития нарушений ритма, проценту возникновения фибрилляций, продолжительности жизни животных.

4. K,Mg L-аспарагинат оказывал более гыраженный эффект при изучении влияния препаратов на длительность биоэлектрической активности серд-

ца мышей, вызванных асфиксией, поскольку достоверно увеличивал продолжительность жизни животных по сравнению с БЬ- и Б-стереоизомерами.

5. K,Mg Ь-аспарагинат увеличивал продолжительность жизни животных на моделях острой гипобарической гипоксии и острой гипоксии с гипер-капнией в гермообъеме. При этом он был сравним по эффективности с БЬ-стереоизомером в дозе 300 мг/кг и превосходил его по активности в дозе 100 мг/кг на модели острой гипобарической гипоксии.

6. По уровню острой токсичности, согласно классификации токсичности веществ (Саноцкий И.В., Уланова П., 1975), K,Mg Ь-аспарагинат относится к классу малотоксичных препаратов. По показателям острой токсичности изучаемые препараты можно расположить в следующем порядке: K,Mg Б-аспарагинат > K,Mg БЬ-аспарагинат > K,Mg Ь-аспарагинат.

7. K,Mg Ь-аспарагинат в терапевтической дозе при внутривенном введении крысам не оказывает существенного влияния на их общее состояние, поведение, функции сердца, печени, почек. В токсической дозе K,Mg Ь-аспарагинат при курсовом введении способствовал депривации двигательной активности, незначительному повышению экскреторной активности почек, изменению электрокардиограммы. Препарат не оказывал существенного влияния на гематологические и биохимические показатели крови.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Изучение фармакологической активности Ь-, Б- и БЬ-стереоизомеров аспаркама у крыс на модели дигоксиновой гипомагнезимии // Тез. докл. VII Региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области. -Волгоград, 2002. -С. 29-31 (соавт. Иежица И.Н.).

2. Поиск и сравнительное изучение наиболее активных стереоизоме-ров калия магния аспарагината // Материалы международной научно-практической конференции «Биоресурсы. Биотехнологии. Инновации Юга России» -Ставрополь-Пятигорск, 2003. -Ч. 1. -С. 208-212 (соавт. Иежица И.Н., Спасов А.А., Петров В.И., Синолицкий М.К., Воронин СП.).

3. Влияние калий магниевых солей Ь-, БЬ- и Б- стереоизомеров аспа-рагиновой кислоты на длительность биоэлектрической активности сердца мышей, вызванной асфиксией // Материалы X юбилейной межвузовской конфе-

ренции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» -Санкт-Петербург, 2004. - С. 29-31.

4. Оценка противоаритмической активности инъекционной формы K,Mg L-аспартата в сравнении с его D- и DL-изомерами на модели строфанти-новой аритмии у морских свинок // Материалы X юбилейной межвузовской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» -Санкт-Петербург, 2004. -С. 157-159 (соавт. Шишиморов И.Н., ИежицаИ.Н., Гурова H. А.).

5. Оценка противоаритмической активности инъекционной формы препарата «Аспаркам-L» в сравнении с его D- и DL-стереоизомерами // Сб. тез. Докладов к научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины-2004». -Санкт-Петербург, 2004. -С. 45-47 (соавт. ИежицаИ.Н., Гурова Н.А., Шишиморов И.Н.).

6. Сравнительное изучение противоаритмической активности L-, D- и DL-стереоизомеров калия магния аспарагината // Тез. докл. «КАРДИОСТИМ-2004» Санкт-Петербург, 5-7 февраля 2004 года. Вестник аритмологии 2004, Том 35, Приложение А, с.114 (соавт. Спасов А.А., Иежица И.Н., Гурова Н.А).

7. Сравнительное изучение фармакологической активности калий магниевых солей трех стереоизомеров (L-, D- и DL-) аспарагиновой кислоты на модели алиментарной гипомагнезиемии // Материалы 62-ой открытой итоговой научной конференции студентов и молодых ученых ВолГМУ «Актуальные проблемы Экспериментальной и клинической медицины». -Волгоград, 2004. -С. 108. (соавт. Кравченко М.С.).

8. Comparative study ofthe potassium magnesium L-, D- and DL-aspartate stereoisomers efficacy in overcoming digoxin- and furosemide-induced hypokalemia and magnesium loss. Metal Ions in Biology and Medicine: vol. 8. Eds.: M.A. Cser, I. Sziklai Laszlo, J.-C. Etienne, Y. Maymard, J. Centeno, L. Khassanova, Ph. Collery. Paris: John Libbey Eurotext, 2004 pp. 355-359 (co-authors Iezhitsa I.N., Spa-sov A.A., Sinolitskii M.K., Voronin S.P., Stepanov A.V.).

СОЛОВЬЕВА НАТАЛЬЯ ВЛАДИМИРОВНА

СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СТЕРЕОИЗОМЕРОВ КАЛИЙ МАГНИЕВЫХ СОЛЕЙ АСПАРАГИНОВОЙ КИСЛОТЫ

АВТОРЕФЕРАТ

Подписано в печать 29.10.04. Формат 60x84/16. Бум. тип №1. Печать офсетная. Усл. печ.л. 1.0. Тираж 120. Заказ 104.

Волгоградский государственный медицинский университет 400131, Волгоград, Пл. Павших борцов, 1.

122 34 8

РНБ Русский фонд

2005-4 21589

Актуальность проблемы. В последнее время одним из перспективных направлений современной медицины является выявление и оценка отклонений в обмене макро- и микроэлементов, а также их коррекция (Бабенко Г.А., 1971; АвцынА.П. и др., 1991; Агаджанян Н.А. и др., 1998; Скальный А.В., 1999, 2004; Спасов А.А., 2000, 2003; Кудрин А.В. и др., 2000; Оберлис Д., 2002; Беликов В.Г., 2003; Петров В.И. и др. 2003). Макроэлементозы и микроэлементозы представляют в современной России проблему национального масштаба. В целом около 2/3 взрослых и 3/4 детей в России могут быть отнесены в группы риска по гипоэлементозам, т.е дефициту от одного до нескольких важнейших макро- и микроэлементов одновременно (Скальный А.В., 2000). Одним из наиболее встречающихся и опасных нарушений ионного гомеостаза является нарушение гомеостаза магния и калия (Ryan М.Р., 1993; D0rup I., 1994; Спасов А.А., 2000).

Общеизвестно, что клиническая гипомагнезиемия может возникать как вместе с гипокалиемией, так и осложнять уже существующий дефицит калия. Гипомагнезиемия, сопровождающаяся магний-зависимой или магний-независимой гипокалиемией, довольно часто сопутствует таким заболеваниям, как хронический алкоголизм (Holzbach Е., 1994; Elisaf М. et al., 2002), сердечнососудистые заболевания (Tveskov С. et al., 1992), сахарный диабет (особенно II типа) (Sjogren A. et al.,1988), наследственные заболевания почек (синдромы Барттера и Гителмана) (Warnock D.G.,2002; Hansen K.W., Mosekilde L. 2003), тяжелая форма диареи и рвоты (D0rup I., 1994). Доказано, что терапия некоторыми лекарственными препаратами (дистальные и петлевые диуретики (Greenberg А., 2000), сердечные гликозиды (Martin B.J. et al., 1988; Young I.S. et al.,1991), амфотерицин В, гентамицин (KesP., Reiner Z., 1990), цисплатин (La-jer H., Daugaard G., 1999) также приводит к гипомагнезиемии и гипокалиемии.

Лекарственные препараты на основе калиевых и магниевых солей аспара-гиновой кислоты (аспаркам, панангин, паматон и кардилан) нашли широкое применение в медицинской практике (Клыков Н.В., Полякова JI.А., 1974; HolubP. et al., 1974; ХаджайЯ.И., Кистень Н.А., 1981; Трифонов С.А., Сапожков А.В. 1982; Аксельрод Л.Б. и др., 1985; Спасов А.А., 2003; ИежицаИ.Н., 2003). Применяемые в настоящее время лекарственные препараты калия магния аспарагината получены из аспарагиновой кислоты, синтезированной химическим путем, и поэтому представляют собой рацемическую смесь L- и D-стереоизомеров. Вместе с тем известно, что в организме человека более активно усваиваются и вовлекаются в биохимические процессы L-изомеры аминокислот, а судьба попадающего в организм человека D-стереоизомера аспарагиновой кислоты не совсем ясна. Исходя из этого, существует предположение, что комплексы калия и магния с L-стереоизомерами аминокислот будут обладать более высокой биодоступностью, чем комплексы с D-стереоизомерами, и как следствие, быстрее устранять внутриклеточный дефицит этих катионов.

Учитывая вышесказанное, представляется целесообразным сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты и выявление наиболее фармакологически активного стереоизомера.

Цель исследования. Сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты, выявление наиболее фармакологически активного стереоизомера и экспериментальное обоснование для дальнейших клинических исследований.

Задачи исследования:

1. Изучить эффективность калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты в устранении дефицита магния и калия на моделях лекарственной интоксикации (дигоксиновой и фуросемидной) и алиментарной гипомагнезиемии.

2. Оценить кинетику экскреции аминного азота и магния с мочой после внутривенной нагрузки калий магниевыми солями L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты.

3. Провести сравнительное изучение фармакологических свойств калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты на моделях экспериментальных аритмий (хлоридкальциевой, строфантиновой и аконитиновой).

4. Исследовать влияние стереоизомеров калий магниевых солей аспа-рагиновой кислоты на длительность сохранения биоэлектрической активности сердца у мышей при асфиксии.

5. Изучить влияние стереоизомеров калий магниевых солей аспараги-новой кислоты на продолжительность жизни мышей в условиях острой гипоба-рической гипоксии и острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме.

6. Провести сравнительное изучение острой токсичности калий магниевых солей аспарагиновой кислоты.

7. Исследовать хроническую токсичность наиболее активной калий магниевой соли аспарагиновой кислоты.

Научная новизна. Впервые проведено сравнительное изучение фармакологической и токсикологической активности растворов калий магниевых солей L-, D- и DL-аспарагиновой кислоты. Показано, что K,Mg L-аспарагинат по сравнению с DL- и D-стереоизомерами более эффективен в устранении алиментарного и лекарственного дефицитов магния и калия. Установлено, что K,Mg L-аспарагинат обладает более выраженной противоаритмической и противоги-поксической активностью по сравнению с другими стереоизомерами. Впервые изучена острая и хроническая токсичности раствора K,Mg L-аспарагината, и было показано, что исследуемый стереоизомер является нетоксичным и безопасным.

Научно-практическая значимость работы. Полученные результаты исследования определяют целесообразность создания нового лекарственного препарата для внутривенного введения (аспаркама-L) на основе L-аспарагиновой кислоты в качестве средства коррекции дефицита калия и магния. Данные, полученные при изучении фармакологических свойств стереоизомеров, существенно расширили представления о стереоселективности лекарственных препаратов.

Реализация результатов исследования. Экспериментальные результаты проведенного исследования в пакете с другими документами представлены в Фармакологический государственный комитет МЗ РФ для получения разрешения на клинические испытания новой инъекционной формы K,Mg L-аспарагината.

Оригинальные модели лекарственной (фуросемидной и дигоксиновой) и алиментарной гипомагнезиемии применяются лабораторией патологии Волгоградского научного центра РАМЫ при выполнении научных исследований для оценки новых магниевых препаратов. Результаты работы используются в лекционном и практическом курсах для студентов лечебного, педиатрического, фармацевтического факультетов, слушателей факультета усовершенствования врачей и провизоров на кафедрах фармакологии, клинической фармакологии и фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ, на кафедрах фармакологии Саратовского государственного медицинского университета, Ростовского государственного медицинского университета, Кубанской медицинской академии.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. K,Mg L-аспарагинат б виде инъекционной формы наиболее эффективен в устранении калий магниевых дефицитов различной этиологии по сравнению с K,Mg D- и DL-аспарагинатами.

2. K,Mg L-аспарагинат обладает большей противоаритмической активностью по сравнению с его D- и DL-стереоизомерами.

3. Инъекционный раствор K,Mg L-аспарагината не оказывает токсического действия в терапевтических дозах при длительном применении, а при однократном введении менее токсичен по сравнению с K,Mg DL-аспарагинатом.

Апробация работы. Основные материалы диссертации докладывались и обсуждались на 61-й и 62-й итоговых научных конференциях студентов и молодых учёных ВолГМУ, Волгоград, 2002, 2003 гг.; VII и VIII Региональных конференциях молодых исследователей Волгоградской области, Волгоград, 2002, 2003 гг.; X юбилейной межгородской конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии», Санкт-Петербург, 2004; 8th International Symposium on Metal Ions in Biology and Medicine, Hungary, Budapest, May 18-23, 2004.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 162 страницах машинописного текста, иллюстрирована 11 рисунками, содержит 38 таблиц и 2 приложения. Состоит из введения, обзора литературы (глава I), описания материалов и методов исследования (глава II), экспериментальной части (главы III и IV), обсуждения результатов (глава V), выводов и списка литературы, включающего 54 отечественных и 107 зарубежных источников.

ВЫВОДЫ

1. K,Mg L-аспарагинат приводит к более быстрой компенсации дефицита магния и калия в организме на моделях лекарственной интоксикации (дигоксиновой и фуросемидной) и восполнению магния в эритроцитах на модели алиментарной гипомагнезиемии по сравнению с DL- и D-стереоизомерами K,Mg аспарагината. В зависимости от скорости нивелирования гипомагнезиемии препараты можно расположить в следующем порядке: K,Mg L-аспарагинат > K,Mg DL-аспарагинат > K,Mg D-аспарагинат

2. После однократного внутривенного введения L-, D- и DL-стереоизомеров K,Mg аспарагината установлено, что при введении K,Mg L-аспарагината скорость экскреции суточного аминного азота и магния с мочой меньше, чем после введения D- и DL-стереоизомеров, при этом увеличение аминного азота в моче связано с увеличением экскреции аспарагиновой кислоты.

3. На моделях экспериментальных аритмий (хлорид кальциевой, строфантиновой и аконитиновой) раствор K,Mg L-аспарагината оказался наиболее эффективным по сравнению с его DL- и D-стереоизомерами по времени начала развития нарушений ритма, проценту возникновения фибрилляций, продолжительности жизни животных.

4. K,Mg L-аспарагинат оказывал более выраженный эффект при изучении влияния препаратов на длительность биоэлектрической активности сердца мышей, вызванной асфиксией, поскольку достоверно увеличивал продолжительность жизни животных по сравнению с DL- и D-стереоизомерами.

5. K,Mg L-аспарагинат увеличивал продолжительность жизни животных на моделях острой гипобарической гипоксии и острой гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме. При этом он был сравним по эффективности с DL-стереоизомером в дозе 300 мг/кг и превосходил по его по активности в дозе 100 мг/кг на модели острой гипобарической гипоксии.

6. По уровню острой токсичности, согласно классификации токсичности веществ (Саноцкий И.В., Уланова П., 1975), K,Mg L-аспарагинат относится к классу малотоксичных препаратов. По показателям острой токсичности изучаемые препараты можно расположить в следующем порядке: K,Mg D-аспарагинат > K,Mg DL-аспарагинат > K,Mg L-аспарагинат.

7. K,Mg L-аспарагинат в терапевтической дозе при внутривенном введении крысам не оказывает существенного влияния на их общее состояние, поведение, функции сердца, печени, почек. В токсической дозе K,Mg L-аспарагинат при курсовом введении способствовал депривации двигательной активности, незначительному повышению экскреторной активности почек, изменению электрокардиограммы. Препарат не оказывал существенного влияния на гематологические и биохимические показатели крови.

Заключение

На основании проведенных исследований можно сделать вывод о том, что с учетом классификации токсичности веществ (Саноцкий И.В., Уланова П., 1975), исследованные растворы для инъекций - K,Mg L-аспарагинат и K,Mg DL-аспарагинат - относятся к классу малотоксичных препаратов. При этом K,Mg L-аспарагинат менее токсичен по сравнению с K,Mg DL-аспарагинатом. Исходя из данных острого отравления исследуемыми веществами, реабилитации физического состояния и прибавки массы тела животных, оставшихся в живых после инъекций, можно предположить, что для клиники токсического действия K,Mg L-аспарагината характерно более быстрое ее развитие и последующее восстановление физической активности у животных по сравнению с животными, получавшими K,Mg DL-аспарагинат. Кроме того, под действием данного препарата в реабилитационный (2-х недельный) период у животных наблюдалась тенденция большего прироста массы тела.

Характерными признаками отравления растворами K,Mg-аспарагината являлись угнетение двигательной активности, дыхания, седа-ция. В отличие от типичной для данных препаратов картины отравления, предшественниками отравления K,Mg L-аспарагинатом были признаки первоначального расстройства координации передвижения, а впоследствии — угнетение дыхания, адинамия, клонико-тонические судороги.

На вскрытии у животных, получавших препараты в токсических дозах, различий между исследуемыми группами установлено не было. По результатам гистологического обследования установлено, что меньшему воздействию веществ подверглись все отделы желудочно-кишечного тракта, тимус, гонады, головной мозг. Умеренное увеличение кровенаполнения зафиксировано в тканях почек, сердце, легких, селезенке. При этом кровенаполнение вен и межмышечных капилляров в сердце было умеренное и неравномерное, отек не выражен. В эндокарде не было обнаружено патологических изменений. В легких просматривался умеренный интерстициальный отек, бронхо-ассоциированная лимфоидная ткань осталась без изменений. Также не было выявлено грубых структурных изменений в печени, при этом фиксировалось полнокровие вен с запустевшими синусоидами. Практически не измененной оказалась структура тканей почек. Без существенных патологических изменений были ткани селезенки, надпочечников.

По результатам изучения хронической токсичности раствора для инъекций K,Mg L-аспарагината, проведенных в соответствии с "Методическими указаниями по изучению общетоксического действия фармакологических веществ" (Арзамасцев Е.В., 2000), можно заключить, что исследуемая форма K,Mg L-аспарагината является нетоксичной и безопасной.

Результаты опытов показали, что внутривенное введение данного препарата в течение одного месяца крысам в терапевтической дозе не оказывает существенного влияния на их общее состояние, поведение, функции сердца, печени, почек. Раствор K,Mg L-аспарагината не влияет на гематологические и биохимические показатели крови животных во все периоды измерений. Изменения, зафиксированные в отношении действия K,Mg L-аспарагината в указанной дозе на поведенческую активность и работу сердца крыс, были недостоверными и обратимыми.

Было показано, что внутривенное введение раствора K,Mg L-аспарагината в течение одного месяца крысам в дозе, превышающей терапевтическую в 10 раз, не оказывало существенного влияния на гематологические и биохимические показатели. Раствор K,Mg L-аспарагината способствовал депривации двигательной активности, незначительному повышению экскреторной активности почек, снижению электрофизиологической активности миокарда. Вместе с тем, установленные по электрокардиограммам крыс, тенденции перестройки работоспособности миокарда не вызывали структурных изменений в его архитектонике. Выявленные у крыс изменения под действием раствора K,Mg L-аспарагината в дозе 2 мл/кг (1/2,5 от ЛД50 ) были нивелированы через один месяц после отмены введения, что позволило сделать заключение об отсутствии у препарата патологического влияния на поведение и работу сердца, а также и другие основные гомеостатические показатели животных.

ГЛАВА 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

В настоящее время резко возрос интерес к углубленному изучению обмена макро- и микроэлементов в организме человека в норме и при патологических состояниях. Важная роль ионного гомеостаза в нормальном протекании физиологических процессов диктует необходимость тщательного изучения патогенеза сдвигов электролитного и водного обмена при различных патологических состояниях (Авцын А.П. и др., 1991; Агаджа-нян Н.А. и др., 1998; Спасов А.А., 2000). Поэтому на первом этапе нашей работы была изучена способность K,Mg аспарагинатов восстанавливать уровень калия и мания в организме при их дефиците на моделях лекарственной интокцикации. В результате проведенных исследований на модели дигоксиновой интоксикации было показано, что при двухнедельном введении раствора дигоксина содержание магния и калия в эритроцитах крыс уменьшалось в среднем на 36,7±1,4% и 57,6±10,1% соответственно (р<0,05) относительно показателей интактного контроля. Полученные данные согласуются с литературными, согласно которым в условно-терапевтических дозах сердечные гликозиды понижают канальцевую реаб-сорбцию Mg2+ (Massry S.G., 1977), а длительное лечение препаратами дигиталиса, как правило, сопровождается умеренной гипомагнезиемией и ги-покалиемией (Beller G.A. et al., 1970), которая при токсических осложнениях становится постоянной и выраженной (Iseri L.T. et al., 1975).

Достаточно высокая эффективность K,Mg аспарагината при диги-талисной интоксикации, показанная Greeff К., Knippers R. (1963), Янушке-вичусом И. и др. (1970), Zola-Sleczek Е., Mochalski W. (1979), D0rup I. (1993), подтверждается нашими наблюдениями. Через 24 часа после инъекции калий магниевых солей аспарагината (K,Mg L-аспарагината, K,Mg D-аспарагината и K,Mg DL-аспарагината) содержание магния в эритроцитах повышалось относительно базового уровня в среднем на 16,1±7,5%; 7,3±4,3% и 10,2±5,9%, а содержание калия восстанавливалось до контрольных показателей и было выше относительно содержания магния у животных, получавших дигоксин, на 165,4±6,4%; 143,9+24,8% и 150,3+14,0% (р<0,05). Через неделю внутрибрюшинных инъекций K,Mg L-аспарагината, K,Mg D-аспарагината и K,Mg DL-аспарагината концентрация магния в эритроцитах увеличивалась относительно уровня магния у животных, получавших только дигоксин, на 50,4±4,9%; 38,9+6,2% и 40,3±3,9% (р<0,05), что соответствовало полному восстановлению магния в эритроцитах. В плазме не наблюдалось достоверных отличий в скорости восполнения уровня магния при применении стереоизомеров K,Mg аспарагината. Однако уровень магния в плазме не отражает его внутриклеточного содержания (Янушкевичус И., ЗабелаП.В., 1976), поэтому диагностическую ценность в определении магниевого гомеостаза имеет снижение внутриэритроцитарного магния (Wessels F., Losse Н., 1979; Okumura К. et al., 1982; PedersenK.E. et al., 1983; van Boxtel С,J. et al., 1985; Wang J.Z., 1987; D0rup I., 1993).

Следует отметить, что введение L-, D- и DL-стереоизомеров K,Mg аспарагината в течение неделР! нивелировало гипомагнезиемию практически одинаково, тем не менее, в динамике восполнения магния в эритроцитах при внутривенном введении изучаемых препаратов можно проследить отчетливую тенденцию более быстрой внутриклеточной кумуляции магния при применении K,Mg L-аспарагината по сравнению с его D- и DL-стереоизомерами, а весь ряд стереоизомеров в зависимости от скорости нивелирования гипомагнезиемии можно расположить в следующем порядке: K,Mg L-аспарагинат > K,Mg DL-аспарагинат > K,Mg D-аспарагинат.

Таким образом, K,Mg L-аспарагинат способствовал более быстрой компенсации дефицита калия и магния. Это согласуется с теорией Hans A. Nieper, согласно которой L-аспарагиновая кислота способствует более быстрому проникновению калия и магния внутрь клетки и, как следствие, восстановлению дисбаланса этих катионов. Несмотря на то, что эта теория , раньше выглядела достаточно правдоподобной, по существу нет никаких опубликованных исследований, которые подтверждали или опровергали бы эту теорию с точки зрения доказательной медицины.

Терапия дигоксином приводит к изменению калиевого и магниевого электолитного баланса не только в плазме и эритроцитах (Ben-Aryeh Н. et al., 1982; Henion W.A. et al., 1983; Morgan D.B. et al., 1980), но и в миокарде (DycknerT. et al., 1977). Так содержание калия в сердце у крыс, получавших дигоксин, снижалось на 31,6±8,7% по сравнению с показателями ин-тактных животных (р<0,05). После однократного внутривенного введения K,Mg L-аспарагината (определение через 24 часа) содержание калия в сердце восстанавливалось до уровня интактных животных. В группах животных, получавших K,Mg DL-аспарагинат и K,Mg D-аспарагинат, содержание калия не изменялось и оставалось ниже контрольных показателей в среднем на 48,2±6,7% и 46,7±4,1% соответственно (р<0,05), а полное восстановление калия наблюдалось через неделю внутривенных инъекций.

Причины возникновения дефицита Mg~ и его значение в патогенезе интоксикации сердечными гликозидами окончательно не установлены. Одним из вероятных механизмом снижения содержания магния в эритроцитах можно считать способность сердечных гликозидов влиять на транс

2+ мембранные потоки Са~ и Mg и способность формировать комплексы с данными катионами биометаллов (дигоксин образует два комплекса с магнием в соотношении 1:1 и 1:2 со ступенчатыми константами равновесия 3,8x102 и 0,2x102), что приводит к усилению их экскреции почками. В работе ЧекманаИ.С., БударинаЛ.И. и др. (1983) с точки зрения бионеорганической химии были рассмотрены также индуцируемые сердечными гликозидами изменения содержания Са2+ и Mg2+ в тканях экспериментальных животных и показано, что снижение магния в ряде органах и тканях обусловлено конкурентными отношениями Са2+ и Mg2+ на уровне поверхностных сайтов мембраны и внутриклеточных депо (Polimeni Р.Е., Page Е., 1972). Конкурентные отношения между С а" и Mg" в механизмах действия сердечных гликозидов на биохимизм и биомеханику мышечного сокращения основываются на способности препаратов формировать координационные связи с обоими катионами и близости параметров констант устойчивости образовавшихся комплексов (Чекман И.С., Бударин Л.И. и др., 1983).

Снижение содержания калия и магния в эритроцитах связано также с блокадой сердечными гликозидами SH-группы Mg^-зависимой K+-Na+-АТФ-азы (так называемых "рецепторов" к сердечным гликозидам) и нарушением внутриклеточного транспорта этих катионов (Malini P.L., Strocchi Е. et al., 1984).

Следующим этапом сравнительного фармакологического изучения стереоизомеров K,Mg аспарагината было исследование препаратов на модели фуросемидной интоксикации. Общеизвестно, что фуросемид является "петлевым диуретиком" и уменьшает реабсорбцию Са" и Mg" в толстом сегменте восходящей части петли Генли в результате воздействия на электронейтральный №+-2СГ-К+-ко-транспорт через люминальную (базаль-ную) мембрану (Quamme G. А., 1981) (рис.11)

Люмен

Фуросемид Na*

PD -f8 mV

Na*

Клетка

-70 mV

Мдг* 0.25 mM

0.5 тМ

0.75 тМ

Кровь Пояснение к рнсунку: Реабсорбция магния происходит пассивно и с участием параклеточных (внеклеточных) транспортных механизмов. Блокада люминального входа СГ приводит к снижению клеточной активности СГ и уменьшению базолатеральной утечки этого аниона, что, в свою очередь, приводит к уменьшению люмен-позитивного напряжения (вольтажа) (Greger R., 1985). Известно, что люмен-позитивное напряжение обеспечивает движущую силу через клетку для 40-50 % от общего количества поглощенного натрия. На магний, двухвалентный катион, это напряжение может оказывать гораздо большее влияние, чем на моновалентные катионы, такие, как натрий и калий (по Quamme G. А., 1981).

Рисунок 11 - Влияние фуросемида на транспорт магния и калия в эпителии толстого восходящего сегмента петли Генли.

Na* Са2* Мд2* Г titvt

Это приводит к повышению выведения этих ионов из организма и снижению концентрации в плазме и эритроцитах (Abraham A.S., Meshulam Z. et al., 1988; Ryan M.P., Devane J. et al., 1984), что совпадает с результатами наших исследований. При внутривенном введении раствора фуросемида содержание магния в эритроцитах крыс при введении фуросе-мида через 2 недели уменьшалось на 41,0±1,1% (р<0,05), а в плазме - на 30,4±1,3% (р<0,05) относительно показателей интактного контроля.

Применение K,Mg L-аспарагината, K,Mg D-аспарагината и K,Mg DL-аспарагината изменяет равновесие между ренальными потерями К+ и Mg2+ и поступлением этих катионов извне, что приводит к восполнению их концентрации. Так через 24 часа после однократной внутривенной инъекции растворов калий магниевых солей L-, D- и DL- стереоизомеров аспарагиновой кислоты содержание магния в эритроцитах повышалось относительно уровня магния животных, получавших только фуросемид, в среднем на 48,9±3,0%; 26,7±5,0% (р<0,05) и 19,4±6,0% соответственно. Через неделю внутрибрюшинных инъекций L-, D- и DL-стереоизомеров K,Mg аспарагината наблюдалось полное восстановление уровня магния в эритроцитах и плазме. При этом, как и в серии экспериментов с дигоксином, в динамике восполнения магния в эритроцитах при введении изучаемых препаратов можно проследить отчетливую тенденцию более быстрого восполнения магния при применении K,Mg L-аспарагината по сравнению с его D- и DL-стереоизомерам. В зависимости от скорости нивелирования гипомагнезие-мии препараты можно расположить в следующем порядке: K,Mg L-аспарагинат > K,Mg DL-аспарагинат > K,Mg D-аспарагинат.

В наших исследованиях фуросемид не оказывал никакого влияния на содержание магния и калия в миокарде. Это согласуется с некоторыми литературными данными. Так в исследованиях Borchgrevink Р.С., Holten Т., Jynge P. (1987) было показано, что фуросемид в больших дозах в течение 4 недель введения приводит к снижению концентрации магния и калия в плазме, магния в костной ткани и калия в поперечно-полосатой скелетной мышце, но не оказывает никакого влияния на содержание этих макроэлементов в миокарде (Borchgrevink Р.С., Holten Т., Jynge Р., 1987).

При изучении влияния K,Mg аспарагинатов на восстановление содержания калия и магния в плазме и эритроцитах при алиментарном дефиците была выбрана магнийдефицитная диета. Имеются данные, что у животных, получавших магнийдефицитную диету, наблюдается статистически значимое снижение калия в скелетных мышцах. D0rup I., Clausen Т. (1993) отмечают, что алиментарный дефицит магния у животных сопровождается калий дефицитным состоянием. Даже в присутствии избыточного количества калия в магнийдефицитной диете у крыс наблюдалось снижение концентрации калия в тканях. Отмечено, что у магнийдефицитных крыс снижение внутриклеточного калия было более выражено, чем сопутствующее снижение магния (Ryan М.Р. et al., 1973). Более того, восстановление калия в клетках напрямую связано с восстановлением в них магния (Whang R. et al., 1967; Ryan M.P., Hingerty D., 1969).

Исследования на модели алиментарной гипомагнезиемии показали, что содержание животных на безмагниевой диете сопровождалось изменением внешнего вида и ряда интегральных показателей. При анализе динамики веса животных, получавших диету, не содержащую магний, было показано статистически значимое снижение массы тела на 29,2±0,7% (р<0,05) по отношению к группе интактных крыс. Полученные результаты совпадают с данными, согласно которым, у животных как дефицит калия, так и магния характеризуется снижением прироста массы тела, которая восстанавливается при введение этих макроэлементов в пищу. (Cannon P.R. et al., 1952; Hunt B.J. 1971; Giugliano R., Millwarcl D.J., 1984).

У крыс, находящихся на диете, к концу 9 недели наблюдалось снижение магния в эритроцитах на 45,4±1,3% относительно интактных животных (р<0,05). Через 6 часов после инъекции K,Mg L-,D- и DL-аспарагинатов уровень магния в эритроцитах повышался относительно содеожания магния контроля-диеты в среднем на 39,6+2,2%, 15,9+3,0% и 22,5+4,7% соответственно (р<0,05). Через сутки после инъекции K,Mg L-,D- и DL-аспарагинатов различия между животными, получавшими диету, и подопытными группами увеличивались до 67,4±2,3%, 52,9±2,8% и 60,6±2,6% соответственно (р<0,05). Следует отметить, что у крыс, получавших K,Mg L-аспарагинат, уровень магния был выше по сравнению с группой крыс, получавших K,Mg D-аспарагинат, на 9,5±1,5% (р<0,05), а от группы, получавшей K,Mg DL-аспарагинат, не отличался. Через неделю внутрибрюшинных инъекций препаратами было достигнуто полное восстановление магния в эритроцитах.

В плазме крови у животных, находящихся на безмагниевой диете, также наблюдалось достоверное снижение магния по сравнению с интакт-ным контролем (р<0,05). При определении содержания магния в плазме через 3 часа после однократной инъекции K,Mg L-,D- и DL-аспарагинатов было обнаружено статистически достоверное повышение магния по сравнению с показателями животных, получавших только диету, на 39,3±5,8%, 23,0±5,0% и 30,8±5,1% соответственно. Концентрация магния в плазме через сутки в подопытных группах, получавших растворы K,Mg L-,D- и DL-аспарагината, отличалась от уровня магния животных, получавших только диету, на 76,9±4,1%, 41,0+5,1% и 66,7±3,6% соответственно (р<0,05). При этом обнаруживались отличия между группами крыс, получавшими K,Mg L и DL-аспарагинат, по сравнению с животными, получавшими K,Mg D-аспарагинат, на 25,5±2,9% и 18,2+3,0% соответственно (р<0,05). Полное восстановление уровня магния в плазме наблюдалось через неделю внутрибрюшинных инъекций K,Mg L-,D- и DL-аспарагинатов и было выше относительно показателей животных, получавших только диету, в среднем на 100,0±3,5%, 64,8±6,0% и 78,7±5,8% соответственно.

Алиментарный дефицит является главной причиной первичного калий магниевого дефицита. Dorup I. (1993) в своих исследованиях одной из главных причин калий магниевого дефицита называет недоедание (и/или голодание), которое в странах третьего мира часто сопровождается диа-рейными состояниями инфекционного и не инфекционного характера и потреблением неполноценной пищи. Несбалансированное питание характеризуется снижением не только белкового и энергетического обменов, но также недостатком целого ряда нутриентов. Более того, сопутствующая диарея может способствовать потери этих нутриентов. Как недоедание, так и диарея предрасполагают к дефицитам не только калия и магния, но и цинка, а различные клинические исследования указывают на то, что эти дефициты очень часто могут сопровождать белковое и энергетическое голодание (Caddel J.L., GoddardD.R, 1967; Alleyne G.A.O., 1970; Nichols B.L. et al., 1978; Laditan A.A.O., Ette S.I., 1982).

Общеизвестно, что D-стереоизомеры аминокислот не физиологичны, а в организме всасываются и включаются в метаболизм только L-аминокислоты. Попадая в организм, D-аминокислоты метаболизируются в а-оксокислоты оксидазой D-аминокислот (DAO) или оксидазой D-аспарагиновой кислоты. Самая высокая активность DAO в почках, печени и мозге (Nagata Y. et al., 1989; D'Aniello A. et al., 1993). В исследованиях Nagata Y. et al. (1989) было показано, что DAO-дефицитные мыши выделяют почти в 13 раз больше D-аминокислот с мочой, чем нормальные мыши. Оксокислоты далее утилизируются в других биохимических процессах. Известно, что DAO и оксидаза D-аспарагиновой кислоты видоспеци-фичны и субстратспецифичны (D'Aniello A. et al., 1993). У молодых животных активность этих оксидаз значительно ниже, чем у взрослых животных, поэтому концентрация свободных D-аминокислот в тканях этих животных больше (D'Aniello A. et al., 1993). Более того, на этапе пренаталь-ного развития активность этих ферментов в 50-150 раз ниже, чем у взрослых. Таким образом, взрослые животные имеют низкие концентрации D-аминокислот. Хотя большинство D-аминокислот окисляются DAO в печени, почках и других тканях, можно предположить, что в наших исследованиях часть D-аспарагиновой кислоты, при внутривенной нагрузки препаратами, минует эти энзиматические барьеры и выводится из организма в неизмененном виде. В качестве косвенного показателя использовали скорость экскреции с мочой аминного азота. Как показали результаты, через 4 часа после внутривенной нагрузки K,Mg L-аспарагинатом скорость экскреции с мочой аминного азота не отличалась от контроля, а при введении D- и DL- стереоизомеров K,Mg аспарагината достоверно увеличивалась приблизительно в 20 раз в первые 4 часа. Чтобы подтвердить, что увеличение аминного азота может происходить за счет выведения D-аспарагиновой кислоты в неизмененном виде, было проведено разделение аминокислот мочи методом восходящей распределительной хроматографии на бумаге. В результате было обнаружено, что после внутривенного введения K,Mg L-аспарагината содержание аспарагиновой кислоты в моче не отличалось от контроля. Однако после введения K,Mg DL-аспарагината и K,Mg D-аспарагината наблюдалось статистически значимое увеличение аспарагиновой кислоты в моче приблизительно в 3 и 6 раз по отношению к контролю соответственно.

Общеизвестно, что многие расстройства сердечного ритма оказывают серьезное негативное влияние на качество жизни пациентов, имеют неблагоприятное прогностическое значение и поэтому требуют лечения. В ряде рандомизированных многоцентровых исследований (Coplen, CAST-I, CAST-II и др.) показано, что длительный прием антиаритмических препаратов, относящихся к I классу по классификации Vaughan Williams, может неблагоприятно влиять на жизненный прогноз (Дощицин В., 2001). В связи с этим использование традиционных антиаритмических средств, способных оказывать лишь «косметический эффект», представляется нецелесообразным, особенно с учетом их возможных побочных эффектов, в т.ч. кардиотоксического, а в ряде случаев и проаритмогенного действия (Белова Н.Р. и др., 2003).

В экспериментальных и клинических исследованиях доказана эффективность K,Mg аспарагината в купировании различных нарушений ритма сердца даже при нормальном уровне магния крови. Главную роль в развитии нарушений ритма сердца и его сократительной функции играет дисбаланс ионов К , Na Са~ и Mg2+ (Bigger J.T., 1987; OpieL.H., Clusin W.T., 1990; Литвицкий П.Ф. и др., 1994). По мнению Мешкова А.П. (1999), в клинической практике преобладают аритмии, обусловленные не критическим изменением плазменной концентрации К+ и Na+, а локальными электролитными сдвигами в мышце сердца. Несмотря на нозологическую неоднородность процессов, повреждающих миокард, они достаточно стереотипны и сводятся к уменьшению К+ и накоплению Na+ в клетках пораженной зоны. Основная роль в электролитической дестабилизации миокарда отводится дефициту Квнуф и в особенности падению градиента Квнугр/Квнекл- К настоящему времени установлено аритмогенное значение снижения внутриклеточного содержания Mg2+ и увеличения Са2+. Если к тому же учесть, что при недостатке К и Mg" антиаритмические средства менее эффективны, а насыщение ими потенцирует их действие, становится понятным, почему применение солей калия и магния приобретает смысл "базисной" терапии активных эктопических аритмий и считается почти обязательным компонентом лечебной терапии (Мешков А.П., 1999).

K,Mg аспарагинат не является истинным антиаритмиком, поэтому для оценки противоаритмического действия были использованы более «мягкие» критерии по сравнению с теми, которые предложены Кавериной Н.В. и др. в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению фармакологических веществ». Эффективность препаратов на изучаемых моделях аритмии оценивали по их способности предупреждать возникновение аритмии и фибрилляций, удлинять время латентного периода, изменять продолжительность и выраженность аритмии, удлинять время выживания животных в эксперименте. На модели аконитиновой аритмии для препаратов были рассчитаны ED50 и антиаритмический индекс (LD50/ED5o), отражающий терапевтическую широту препарата.

На модели строфантиновой аритмии время до начала нарушения ритма у животных, получавших L- и DL-стереоизомеры K,Mg аспарагината, увеличилось в среднем на 57% и 30% соответственно. Продолжительность жизни в группе животных, получавших K,Mg L-аспарагинат, статистически достоверно увеличилась в 3 раза по сравнению с контролем. Продолжительность жизни в экспериментальных группах, получавших DL- и D-стереоизомеры K,Mg аспарагината, была меньше, чем при использовании K,Mg L-аспарагината на 22,2% и 55,6% (р<0,05) соответственно. Полученные нами результаты совпадают с результатами исследований авторов, наблюдавших эффект при внутривенном введении K,Mg аспарагината при предсердной экстрасистолии (Лазебник Л.Б., 1971; Лаучевичус Л.З., 1972; Янушкевичус П., ЗабелаП.В., 1976; Жаров Е.И., 1979; ХаджайЯ.И., Кистень Н.А., 1981). Калий более эффективен при аритмиях, вызванных эктопической активностью, так как под его влиянием уменьшается скорость диастолической деполяризации. Следствием уменьшения скорости диастолической деполяризации является ускорение проводимости импульса, поэтому не исключено, что препараты калия могут снимать феномен повторного входа возбуждения. Благоприятное действие K,Mg аспарагината зависит также от входящих в его состав магния и аспарагиновой кислоты (Янушкевичус И., ЗабелаП.В., 1976; Романова И.С., 2002). Так в своей работе Романова И.С. (2002) доказала, что L-аспарагиновая кислота обладает большей антиаритмической активностью на модели ранних окклюзионных аритмий по сравнению с DL-аспарагиновой кислотой. Магний обладает множеством свойств, позволяющих использовать его как антиаритмическое средство, в частности он сочетает в себе качества антиаритмических препаратов, относящихся к I и IV классам (мембраностабилизирующее и антагонисты кальция) (Верткин А.Л., Городецкий В.В., 1997; Спасов А.А., 2000).

Антиаритмическая активность магния обусловлена, главным образом, элекрической стабилизацией мембраны. Предполагается, что это может достигаться благодаря следующим механизмам:

• Возвращение калия в клетку, вызванное или непосредственным действием на калиевые каналы, или реактивацией Ыа+,К+-АТФазы (Seller, 1991);

• Действие, подобное антагонисту кальция (IseryL.T., 1984; Levine, Coburn, 1984);

• Уменьшение супернормальной фазы возбудимости и повышение порога потенциала (Critelli et al., 1979);

• Вазодилатирующее антиишемическое действие;

• Метаболическое действие - восстановление концентрации магния при гипомагнезиемии (Санджорджи М., 1992).

Противоаритмическое действие K,Mg аспарагинат оказывал и на модели хлорид кальциевой аритмии. В контрольной группе крыс начало нарушений ритма наблюдалось на 6,43±0,48 секунде, при этом вначале возникала синусовая брадикардия с желудочковыми экстрасистолами на фоне атриовентрикулярной блокады, которые переходили в короткий залп желудочковой тахикардии и завершались в 100% случаев фибрилляцией желудочков и смертью. Такая же картина развития хлорид кальциевой аритмии описана в работе Хрусталевой Г.Н. (1978).

После введения K,Mg L-аспарагината время до начала возникновения нарушений ритма по сравнению с контрольной группой было увеличено в среднем на 40,0%, а с группами животных, получавших K,Mg DL-аспарагинат и K,Mg D-аспарагинат, соответственно на 52,5% и 63,6% (р<0,05). Исследуемые препараты предотвращали развитие фибрилляций желудочков, при этом K,Mg L-аспарагинат в 42,9%, K,Mg DL-аспарагинат - в 30%, a K,Mg D-аспарагинат - только в 12,5% случаев. Введение K,Mg L-аспарагината способствовало выживаемости животных в

57,14%, тогда как в группе животных, получавших K,Mg DL-аспарагинат, выживаемость составила только 25%.

В патогенезе аритмий доказано значение избытка Са2+ в саркоплазме кардиомиоцитов (Clusin W .J. et al., 1985; LassaraR., Scherlag В .J.,1988). Антиаритмический эффект K,Mg аспарагината, вероятно, обусловлен не только ликвидацией внеклеточного электролитного дисбаланса, но и антагонистическим действием ионов магния с ионами кальция (Святов И.С, Шилов A.M., 1996).

По литературным данным, при аконитиновой аритмии содержание калия существенно уменьшается в эритроцитах и достоверно увеличивается в сыворотке крови. Изменение же содержания натрия происходит следующим образом: наблюдается достоверное увеличение в эритроцитах и достоверное уменьшение в сыворотке крови (Сальманович B.C., Кошарский И.Л., 1966; Максимович Я.Б. и др., 1979).

При изучении влияния стереоизомеров K,Mg аспарагината на развитие аконитиновой аритмии было установлено, что вероятность возникновения фибрилляций снижалась у животных, получавших K,Mg L-и DL-аспарагинат в дозах 150 мг/кг и выше. У крыс, получавших K,Mg L-аспарагинат в дозе 150 мг/кг, статистически достоверно увеличивалось время до начала возникновения аритмии по сравнению с контролем в 2,83 раза, а по сравнению с K,Mg DL- и D-аспарагинатом - в 2,14 и 2,02 раза соответственно (р<0,05). Внутри подопытных групп продолжительность жизни крыс, получавших K,Mg L- и DL-аспарагинат, значительно превышала D-форму. ED5o K,Mg L- и DL-аспарагината меньше по сравнению с K,Mg D-аспарагинатом в 3,4 и 3,1 раз соответственно.

Учитывая вышеизложенное, можно сделать вывод о том, что наиболее эффективным веществом на трех моделях аритмии является K,Mg L-аспарагинат. Это еще раз подтверждает теорию Hans A. Nieper, согласно которой L-аспарагиновая кислота способствует более быстрому проникновения калия и магния внутрь клетки и, как следствие, восстановлению дисбаланса этих катионов.

Затула Е.И., Науменок Л.Г., Шевченко И.В. и др. в описании изобретения к авторскому свидетельству СССР №1635328 изучали влияние аспаркама на длительность сохранения биоэлектрической активности сердца у мышей при асфиксии. В результате было показано, что аспаркам увеличивает продолжительность жизни животных в эксперименте в отличие от контрольных животных. Нами были получены аналогичные результаты. В дозе 50 мг/кг в экспериментальных группах наблюдалось увеличение продолжительнссти жизни у животных, получавших K,Mg L-аспарагинат и K,Mg DL-аспарагинат, по сравнению с контрольной группой соответственно на 61,6% и 29,03%, причем у животных, получавших K,Mg L-аспарагинат, продолжительность жизни увеличилась по сравнению с животными, получавшими DL- и D-стереоизомеры (р<0,05). В дозе 100 мг/кг K,Mg L-аспарагинат статистически достоверно удлинял продолжительность жизни животных по сравнению с контрольной группой на 40,79%, а с группами животных, получавших K,Mg DL-аспарагинат и K,Mg D-аспарагинат, соответственно на 19,9% и 17,25%.

Защитное влияние K,Mg аспарагината при гипоксии, показанное ХаджаемЯ.И., Кистенем Н.А (1981), подтвердили наши исследования. Изученные средства оказывали действие на двух выбранных моделях — острой гипобарической гипоксии и острой гипоксии с гиперкапнией в гер-мообъеме. Затула Е.И., Науменок Л.Г., Шевченко И.В. и др. при изучении противогипоксических свойств аспаркама получили дозозависимый эффект препарата. Это было обнаружено и в нашем исследовании. На модели острой гипоксии K,Mg L-аспарагинат в дозе 100 мг/кг удлинял продолжительность жизни животных в среднем на 27% (р>0,05), а защитный эффект K,Mg DL-аспарагината в этой дозе составил лишь около 7%. При увеличении дозы препаратов их защитное действие усиливалось.

В 1958 году Laborit Н. и др. показали эффект K,Mg DL-аспарагината при индуцированной гиперкапнии у собак. В наших исследованиях на аналогичной модели в дозе 300 мг/кг L-форма K,Mg аспарагината действовала аналогично DL-стереоизомеру, достоверно увеличивая продолжительность жизни животных на 22%.

Таким образом, при изучении фармакологической активности трех стереоизомеров K,Mg аспарагината была показана наибольшая эффективность раствора K,Mg L-аспарагината на выбранных патологических моделях. Полученные результаты совпадают с литературными данными, согласно которым K,Mg аспарагинат восстанавливает дисбаланс калия и магния в организме при терапии сердечными гликозидами и диуретиками, оказывает профилактическое антиаритмическое действие (Лазебник Л.Б., 1971; Лаучевичус Л.З., 1972; Янушкевичу с И., ЗабелаП.В., 1976; Жаров Е.И., 1979; Хаджай Я.И., Кистень Н.А., 1981).

Для установления характера и выраженности повреждающего действия K,Mg L-аспарагината на организм экспериментальных животных и оценки его безопасности были проведены исследования острой и хронической токсичности согласно "Методическим указаниям по изучению общетоксического действия фармакологических веществ" (Арзамасцев Е.В. и др., 2000).

По результатам изучения острой токсичности можно сделать вывод о том, что с учетом классификации токсичности веществ (Саноцкий И.В., Уланова П., 1975) исследованные растворы для инъекций - K,Mg L-аспарагинат и K,Mg DL-аспарагинат относятся к классу малотоксичных препаратов. При этом K,Mg L-аспарагинат менее токсичен по сравнению с K,Mg DL-аспарагинатом. Исходя из данных острого отравления исследуемыми веществами, реабилитации физического состояния и прибавки массы тела животных, оставшихся в живых после инъекций, можно предположить, что для клиники токсического действия K,Mg L-аспарагината характерно быстрое ее развитие и последующее восстановление физической активности у животных по сравнению с K,Mg DLактивности у животных по сравнению с K,Mg DL-аспарагинатом. Кроме того, под действием данного препарата в реабилитационный (2-х недельный) период у животных наблюдалась тенденция большего прироста массы тела.

Согласно расчитанной ЛД50 среди изучаемых стереоизомеров менее токсичным оказался раствор K,Mg L-аспарагината. При этом токсичность K,Mg L-аспарагината оказалась на 11% ниже, чем у K,Mg DL-аспарагината. Это согласуется с литературными данными, полученными ХаджаемЯ.И. и Кистенем Н.А. (1981). Авторами исследования был сделан вывод о малотоксичности препарата, т.к. ЛД50 при внутрибрюшинном и внутрижелудочном введении составляла соответственно 3,02 (2,47-3,68) и 11,5 (9,30-14,14) г/кг.

Характерными признаками отравления растворами K,Mg-аспарагината являлось угнетение двигательной активности, дыхания, седация. В отличие от типичной для данных препаратов картины отравления, предшественниками отравления K,Mg L-аспарагинатом были признаки первоначального расстройств координации передвижения, а впоследствии - угнетения дыхания, адинамия, клонико-тонические судороги.

На вскрытии у животных, получавших исследуемые препараты в токсических дозах, различий между исследуемыми группами не было установлено. По результатам гистологического обследования установлено, что менее затрагиваемые веществами оказались все отделы желудочно-кишечного тракта, тимус, гонады, головной мозг. Умеренное увеличение кровенаполнения зафиксировано в тканях точек, сердце, легких, селезенке. При этом кровенаполнение вен и межмышечных капилляров в сердце было умеренное и неравномерное, отек не выражен. В эндокарде не было обнаружено патологических изменений. В легких просматривался умеренный интерстициальный отек, бронхо-ассоциированная лимфоидная ткань без изменений. Также не было выявлено грубых структурных изменений в печени, при этом фиксировалось полнокровие вен с запустевшими синусоидами. Практически не измененной была структура тканей почек, селезенки, надпочечников.

По результатам изучения хронической токсичности раствора для инъекций K,Mg L-аспарагината, можно сделать заключение, что исследуемая форма K,Mg L-аспарагината является нетоксичной и безопасной.

Результаты опытов показали, что данный препарат при внутривенном введении в течение одного месяца крысам в терапевтической дозе не оказывает существенного влияния на их общее состояние, поведение, функции сердца, печени, почек. Раствор K,Mg L-аспарагината не влияет на гематологические и биохимические показатели крови животных во все периоды измерений. Изменения, зафиксированные в отношении действия K,Mg L-аспарагината в указанной дозе на поведенческую активность и работу сердца крыс, были недостоверными и обратимыми.

Было показано, что раствор K,Mg L-аспарагината при внутривенном введении в течение одного месяца крысам в дозе, превышающей терапевтическую в 10 раз, не оказывал существенного влияния на гематологические и биохимические показатели. Раствор K,Mg L-аспарагината способствовал депривации двигательной активности, незначительному повышению экскреторной активности почек, снижению электрофизиологической активности миокарда. Вместе с тем установленные по электрокардиограммам крыс тенденции перестройки работоспособности миокарда не вызывали структурных изменений в его архитектонике. Выявленные у крыс изменения под действием раствора K,Mg L-аспарагината в дозе 2 мл/кг (1/2,5 от ЛД5о) были нивелированы через один месяц отмены введения, что позволило сделать заключение об отсутствии у препарата патологического влияния на поведение и работу сердца, а также и другие основные гомео-статические показатели животных. Полученные данные совпадают с результатами исследований ХаджаяЯ.И. и Кистеня Н.А. (1981) о малой токсичности препарата.

Таким образом, наиболее активным и эффективным стереоизомером показал себя K,Mg L-аспарагинат на модетях лекарственной (фуросемид-ной и дигоксиновой) интоксикации и модели алиментарной гипомагнезие-мии. При этом скорость экскреции аспарагиновой кислоты и магния была ниже после однократной внутривенной инъекции K,Mg L-аспарагината по сравнению с DL- и D-аспарагинатами. Раствор K,Mg L-аспарагината оказался более эффективным по сравнению с его стереоизомерами на моделях экспериментальных аритмий и при гипоксических состояниях. Полученные данные по острой токсичности согласно классификации токсичности веществ (Саноцкий И.В., Уланова П., 1975) позволяют отнести препарат к классу малотоксичных препаратов. При изучении хронической токсичности раствора K,Mg L-аспарагината при внутривенном введении в терапевтической дозе не было выявлено патологических изменений, что свидетельствует об отсутствии токсического эффекта.