Фармакокинетические и биофармацевтические подходы при создании и применении лекарственных средств

Литвин, Александр Алексеевич

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакокинетические и биофармацевтические подходы при создании и применении лекарственных средств

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Литвин, Александр Алексеевич Москва 2004 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 14.00.25

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакокинетические и биофармацевтические подходы при создании и применении лекарственных средств

На правахрукописи

ЛИТВИН АЛЕКСАНДР АЛЕКСЕЕВИЧ

ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИЕ И БИОФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПОДХОДЫ ПРИ СОЗДАНИИ И ПРИМЕНЕНИИ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте фармакологии им. В.В. Закусова РАМН

Научный консультант:

Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор В.П. Жердев

Официальные оппоненты:

Член-корреспондент РАМН,

доктор медицинских наук, профессор Ю.Б. Белоусов Заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Р.Д. Сейфулла

Доктор биологических наук Н.Н. Золотов

Ведущая организация:

Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита состоится «_»_2004 г. в_ч на заседании

диссертационного совета Д 001.024.01 в ГУ НИИ фармакологии им. В.В.

Закусова РАМН по адресу:

125315 Москва, ул. Балтийская, д. 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Ученой части ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН

Автореферат разослан «_»_2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Е.А. Вальдман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Изучение фармакокинетики является необходимым этапом в комплексе работ при создании новых лекарственных средств [Rowland М., Tozer T.N., 1996; Фирсов А.А., Жердев В.П., 2001] и связано это, прежде всего, с получением объективных характеристик всех процессов, которые происходят в организме животного (человека) с препаратом, начиная с всасывания из места введения, и заканчивая его выведением из организма. Однако большинство доклинических исследований фармакокинетики новых лекарственных препаратов носит комплементарный характер и завершается обычно построением фармакокинетической кривой и получением на ее основе набора фармакокинетических параметров.

Вместе с тем, комплексный подход при проведении доклинических фармакокинетических исследований любого нового лекарственного препарата должен включать в себя несколько этапов. Прежде всего, это 1) исследование фармакокинетики не только неизмененного действующего вещества, но и его различных продуктов превращения с установлением роли идентифицированных метаболитов в реализации эффекта препарата; 2) изучение кинетики изучаемого соединения и его метаболитов у различных видов животных при различных путях введения; 3) определение абсолютной биодоступности с учетом эффекта первого прохождения его через печень и образования при этом различных метаболитов; 4) биофармацевтическое изучение взаимосвязи препарата с различными вспомогательными веществами, используемыми для приготовления лекарственной формы [Rescigno A., 1992; Marzo A., 1999; Воронина Т.А., Середенин СБ., 2002; Сергиенко В.И., Джеллифф Р., Бондарева И.Б., 2003].

Полученные при этом данные позволяют объективно качественно и количественно оценить преимущества и недостатки того или иного пути введения создаваемого препарата и соответственно рекомендовать оптимальный способ введения, что приведет к увеличению/уменьшению концентраций лекарственного вещества и/или его активных метаболитов в месте действия и, следовательно, к изменению эффекта.

Такой комплексный подход, безусловно, способст: ия

лекарственной формы нового соединения с

различными вспомогательными веществами, оказывающими существенное влияние на биотрансформацию создаваемого препарата. Изучение закономерностей такого взаимодействия создает возможность для управления метаболизмом лекарственного препарата и соответственно его фармакологическим действием [Колыванов Г.Б., 1990, Отабекова С.Г., 1993; Levy R.H., Thummel К.Е., Trager W.F. et al., 2000].

Кроме того, изучение взаимосвязи между различными фармакокинетическими характеристиками изучаемого лекарственного вещества и проявлениями его фармакологического действия позволяют на фармакокинетическом уровне определить диапазон эффективных концентраций, обусловливающих желаемый эффект соединения и/или выявить фармакокинетические детерминанты, ответственные за действие препарата [Белоусов Ю.Б., Леонова М.В., 2002; Кукес В.Г., Фисенко В.П., 2000].

Доклиническое комплексное фармакокинетическое изучение новых лекарственных препаратов в значительной степени способствует обоснованному выбору оптимальной дозы при проведении 1 фазы клинических испытаний, а в будущем - после разрешения к медицинскому применению препарата -разработке оптимальных схем лечения под фармакокинетическим контролем К сожалению, такой комплексный подход при проведении фармакокинетиче-ских исследований от эксперимента к клинике, позволяющий в полном объеме оценить лекарственный препарат, его лекарственную форму и дать обоснованные рекомендации по его применению до конца не применяется. Таким образом, целью исследования является разработка методология фармакокинетических и биофармацевтических исследований в создании новых лекарственных средств, совершенствовании лекарственных форм и применении известных препаратов в медицинской практике. Задачи исследования:

1. Разработка методик количественного определения, как оригинальных отечественных, так и воспроизведенных препаратов и/или их метаболитов в биосредах на основе метода высокоэффективной жидкостной хроматографии.

2. Изучение фармакокинетики субстанции, инъекционной лекарственной формы брадизола и сопоставление полученных данных с его специфической активностью.

3. Изучение фармакокинетики трансдермальных терапевтических систем с феназепамом и цитизином, изготовленных по различным технологиям, с разным содержанием действующего вещества. Выбор оптимальной (с фарма-кокинетической точки зрения) трансдермальной терапевтической системы для дальнейших клинических испытаний.

4. Установление взаимосвязи между физико-химическими, биофармацевтическими и фармакокинетическими характеристиками производных 1,4-бензодиазепина (корреляция in vitro/in vivo).

5. Выбор оптимальной таблетированной лекарственной формы гидазепама на основании фармакокинетических и биофармацевтических исследований и передачи ее на изучение фармакологической активности.

6. Установление роли фармакокинетических параметров неизмененного 6-меркаптопурина, его внутриклеточных метаболитов (метилмеркаптопурино-вых и тиогуаниновых нуклеотидов) и активности тиопуринметилтрансферазы в реализации клинического действия препарата.

7. Разработка комплексного подхода к проведению фармакокинетических и биофармацевтических исследований в процессе создания нового лекарственного препарата,- оптимизации лекарственной формы и применения лекарственных средств в клинической практике, а также при оценке качества/эффективности воспроизведенных препаратов.

Научная новизна работы

• Проведено фармакокинетическое исследование нового антиаритмического препарата V класса, обладающего специфическим брадикардическим действием - брадизола. Обоснована целесообразность разработки парентеральной лекарственной формы.

• Показано, что брадикардический эффект, регистрируемый в экспериментах на наркотизированных кошках, тесно коррелирует с содержанием вещества в крови. Фармакокинетический контроль за концентрацией брадизола после инфузионного введения препарата дает возможность создавать управляемую брадикардию.

• Доказана возможность прогноза и коррекции действия феназепама и цитизина при использовании новой лекарственной формы препаратов - транс-дермальной терапевтической системы.

• Выявлена корреляционная зависимость между скоростью растворения гидазепама in vitro и скоростью всасывания in vivo. Найденная закономерность показывает, что константа скорости растворения гидазепама является одним из факторов, определяющим скорость всасывания препарата.

• Использованные в работе фармакокинетические и биофармацевтические подходы позволяют решать вопросы выбора оптимального состава и технологии приготовления лекарственной формы для препаратов, биотрансформация которых, главным образом, определяется процессами дезалкилирования.

• Установлена высокая степень корреляции между фармакокинетическими параметрами неизмененного 6-меркаптопурина и AUC) в плазме и эритроцитах крови и Css метилмеркаптопуриновых нуклеотидов (положительная корреляция) и С.* тиогуаннновых нуклеотидов (отрицательная корреляция) в эритроцитах крови детей с острым лимфобластным лейкозом. Между двумя последними группами внутриклеточных метаболитов выявлен высокий уровень отрицательной корреляции;

• Показано, что у детей с острым лимфобластным лейкозом с высокой активностью тиопуринметилтрансферазы в эритроцитах регистрируются значительные количества метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и низкие -тиогуаниновых нуклеотидов и, наоборот, низкая активность фермента сопровождается низкими показателями метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и высокими для тиогуаниновых нуклеотидов.

• Разработан комплексный подход, необходимый при создании и применении лекарственных средств. Данный подход дает возможность оптимизировать создание нового лекарственного средства, его лекарственную(ые) форму(ы) и применение в лечебной практике.

Практическая значимость работы

Фармакокинетические исследования показали, что биодоступность инъекционной лекарственной формы брадизола не отличается от таковой субстанции препарата. Полученные результаты позволили начать клинические испытания 1,5% раствора брадизола для инъекций.

фармакологическим исследованиям специфической активности с целью последующего внедрения в медицинскую практику.

Фармакокинетические исследования ТТС, содержащих феназепам (фена-перкутен), явились основанием для разрешения ФПС МЗ РФ проведения их клинических испытаний. 1-я фаза клинических испытаний успешно проведена. ТТС цилеркутена разрешена к медицинскому применению (Государственный Реестр лекарственных средств, Москва, 2001, Том 1, № 96/185/11).

Материалы по изучению биоэквивалентности лекарственных препаратов включены в «Методические рекомендации по проведению качественных клинических исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов. Москва (2001,2003).

Результаты корреляционного анализа, полученные в опытах in vitro и in vivo, использованы для разработки теста "Растворение" на таблетки гидазепа-ма.

Показано, что такие ФК параметры неизмененного 6-меркаптопурина, как и AUC могут рассматриваться в качестве прогностических критериев эффективности препарата при лечении острого лимфобластного лейкоза. В соответствии с этими данными можно корректировать дозировки 6-меркаптопурина у каждого конкретного больного, у которого показатели и AUC препарата в значительной степени отклоняются от средних показателей соответствующего параметра. Причем, большее предпочтение следует отдать показателю , а не AUC, так как для определения этого параметра не требуется большого количества забора проб крови у больного, тем более что выявлена высокая степень корреляции между этими фармакокинетическими параметрами. Показано также, что метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и активность тиопуринметилтрансферазы могут также рассматриваться в качестве детерминант эффективности терапии 6-меркаптопурином. Низкие показатели метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и активности фермента сопровождаются недостаточной эффективностью терапии 6-меркаптопурином, а высокие - проявлением цитотоксического действия препарата. Таким образом, определены основные ФК детерминанты (как для неизмененного 6МП, так и для его внутриклеточного метаболита - метилмеркаптопуриновых нуклеотидов) проявления терапевтического и побочного действия 6-меркаптопурина у детей с острым лимфобластным лейкозом, которые наряду

с активностью тиопуринметилтрансферазы могут играть важную роль в оптимизации применения препарата у больных детей. Апробация работы.

Основные результаты работы доложены на VI, VII, VIII, X Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1999, 2000, 2001, 2003 г.г.); Всероссийской научной конференции "От Materia medica к современным медицинским технологиям" (С.-Петербург, 1998 г.); Всероссийской научной конференции с международным участием "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии" (С.-Петербург, 1999 г.); Национальных днях лабораторной медицины России (Москва, 1999 г.); Международной научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск, 2000 г.); II съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003); Третьей международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2003). Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 40 печатных работ. Связь исследования с проблемным планом фармакологической науки

Диссертация выполнена в рамках Государственной научно-технической программы «Создание новых лекарственных препаратов методами химического и биологического синтеза» (направление 5; 1993-1997 г.г.); плановой темы научно-исследовательских работ ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова РАМН "Изучение молекулярных и клеточных механизмов эндо- и экзогенной регуляции функций ЦНС, создание нейрохимических основ для разработки новых оригинальных нейротропных средств. "(№ госрегистрации 01.960 00.80.94.), в рамках федеральной программы «Детская гематология/онкология» на 1996-2001 г.г. Объем и структура диссертации.

Диссертация содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы, 5 глав результатов собственных исследований и их обсуждение, заключение, выводы, библиографический указатель, включающий работы на русском (79) и иностранных языках (256), таблиц-68, рисунков-56. Диссертация изложена на 297 страницах машинописного текста.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Методы исследования

Хроматографический анализ

Для хроматографического анализа анализируемых ЛВ и их метаболитов в биоматериале (плазма крови, лизаты эритроцитов, моча, гомогенаты органов и тканей) использовали компьютеризированную хроматографическую систему Perkin Elmer Nelson Model 1020S, оснащенную изократической помпой Perkin Elmer (LC 235 или LC 250), UV-VIS детектором с переменной длиной волны (LC 290 или с диодной матрицей - LC 135) и компьютером с соответствующим пакетом программ для обсчета хроматограмм. Ввод проб осуществлялся с помощью инжектора ручного ввода "Rheodyne" (Model 7125), снабженного петлей объемом 20, 50,100 или 200 мкл. Необходимые условия хроматографи-ческого определения ЛВ и их основных метаболитов, которые использовались в работе, представлены в табл.1. Характеристики, разработанных методик указаны в табл. 2.

Метод экстракции и количественного определения основных метаболитов 6МП

Исследовались 3 группы нуклеотидных метаболитов 6МП - метилмеркап-топуриновые нуклеотиды (ММПН), тиогуаниновые нуклеотиды (ТГН) и метилтиогуаниновые нуклеотиды (МТГН).

Для исследования использовали отмытые эритроциты. Превращение ММПН, МТГН и ТГН в соответствующие нуклеозиды (6ММПР, 6МТГР и 6ТГР) осуществлялось с использованием щелочной фосфатазы ("Реанал", Венгрия), отщепляющей фосфатные группы от нуклеотидов.

Для проведения этой части исследования отмытые физраствором эритроциты крови больных лизировали добавлением 2-х кратного объема дистиллированной воды. К 425 мкл лизата эритроцитов добавляли 50 мкл 0,5 М трис-HCl буфера, рН 7,8 и 25 мкл щелочной фосфатазы, полученной из кишок цыплят ("Реанал") 0,1 Е/мкл. Смесь инкубировали в течение 4 часов при 37°С. Затем реакцию останавливали путем добавления 50 мкл 1,8М хлорной кислоты. Пробы центрифугировали при 12000 g в течение 10 минут при 4°С для удаления осажденных, высокомолекулярных соединений. Надосадочную жидкость замораживали при -20° С до выполнения

жидкость замораживали при -20°С до выполнения хроматографического анализа.

Методика определения активности фермента ТПМТ в эритроцитарном лизате

В стеклянные конические пробирки, предварительно помещенные в ледяную баню, добавляли по 100 мкл лизата эритроцитов больного и 20 мкл фосфатного буфера рН 7,5. Далее в две из приготовленных пробирок добавлялось по 10 мкл 6МП (120 мМ) и в одну - 10 мкл диметилсульфоксида (ДМСО) для контроля. Реакция запускалась добавлением 25 мкл смеси, содержащей 17,5 мкл (9 мМ дитиотрейтола; ДТТ), 2,5 мкл (3,2 мМ аллопуринола), 5,0 мкл С14-меченого SAM (S-аденилметионина).

После тщательного перемешивания смесь инкубировали в течение 1 час, периодически встряхивая, на водяной бане при 37°С. Реакцию останавливали, добавляя 2,5 мл 20% изоамилового спирта в течение 10 секунд и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 минут при комнатной температуре. После центрифугирования отбирали 1,5 мл надосадочной жидкости, добавляли 6 мл сцинтилляционной жидкости далее пробу помещали в сцинтилляцион-ный счетчик. Каждая проба обсчитывалась 1 мин. Параллельно был посчитан внешний контроль, включающий в себя 25 мкл смеси и 6 мл сцинтилляцион-ной жидкости. После получения результатов путем математических расчетов была получена активность ТПМТ.

Для расчета биофармацевтических характеристик анализируемых Л В использовали следующие методики: А) определение констант скорости растворения (К^а,) ЛВ; Б) определение констант скорости диффузии (Kd) ЛВ; В) определение липофильности ЛВ [Колыванов Г Б. и др, 1992, 1993]

Расчет ФК параметров и статистическая обработка

Метрологическую характеристику ВЭЖХ-анализа количественного определения ЛВ и их метаболитов проводили в соответствии с требованиями ГФ XI изд. (Выпуск 1, с.208). Расчет ФК параметров проводили с помощью программы "M-ind" [Агафонов А.А., Пиотровский В.К., 1988]. Статистическую обработку полученных данных производили с помощью программы "Statistica v.6.0".

Таблица 1

Условия хроматографического определения Л В и их основных метаболитов

Условия Хроматогра-фировання Определяемое ЛВ и его метаболшы

Брадизол Гмдазепам, дезалкил- гидазепам Феназепам, 3-окси-феназепам Цитизин ммгтн, ТЩМГГН Дипиридамол Амио-дарон

Колонка БЛаэогЬ С|8 3,0x250 мм; 6 мкм исЬгОБОгЬ ЯР|8 4,6x250 мм; 7 мкм ЗйавогЬСгв 4,6x250 мм; 13 мкм ЕСОПОв!'! С|8 4,6x250 мм; 5 мкм Диасорб С-16Т 4,6x250 мм; 8 мкм БПазогЬ С18 250x4,6 мм; 10 мкм Ыис1еозП Си 250x4,6 мм; 10 мкм

Подвижная фаза (ПФ) АсСЫ-глициновый буфер рН-3,6 (1:1) 0,02 М МОПС -1 н НС1-АсСЫ-метанол (40:1:22,5:2,5) АсСИ-глициновый буфер рН-2,2 (1:1) Метанол -0,085% Н3Р04-днэтиламин (150 100 0,1) 0,18 М КН2Р04 (рН-6,85)-метанол (1000:471) АсСИ-0,01М №Н2Р04 рН 7,0 (50:50) Метанол -25% Ш4ОН (99,0:1,0)

Скорость ПФ (мл/мин) 1.0 1,5 2,0 1,0 1,0 1,5 2.5

Детектирование (им) 295 232 232 300 290 - ММПН 320 -МТГН 342 - ТГН 285 242

Время удержания (мин) 5,5 4,0 - гидазепам 5,4 - дезалкил-гидачепам 4,5 - 3-окси- феназепам 5,7- феназепам 5,6 **2,55 - ТГН 7,10- МТГН 8,25- ММПН 6,4 6,0

Примечание: *АсСЫ - ацетоннтрнл, МОПС - морфолнногтропансульфоновая кислота ** Определение проводили по рибозидам соответствующих нуклеозидов. Хроматографирование проводили при комнатной температуре Перед хроматографированием ПФ дегазировали на ультразвуковой бане

Таблииа 2

Характеристик» методик хроматографического анализа

Изучаемые ЛВ Экстрагект % извлечения Предел обнаружения (нг/мл) Параметры калибровочной кривой (у=а+Ьх) Ошибка определения (%)

Бради-зол Диэтиловый эфир фосфатный буфер (рН — 7,0) 95,0± 2,1% 100 8=-0,49+5,32хС (г=0,9984) 0,5 м кг/мл -3,37 %

Гидазе-пам Диэтиловый эфир и 1Мборатный буфер (рН - 9,0) 75,9± 1,31% 45 ♦81/82 =-0,067 + 0,1292хС (1=0,9991) 0,5 мкг/мл -5,20%

Фена-зепам Диэтиловый эфир и 1М боратный буфер (рН - 9,0) 87,9± 2,6% 10 -0,02+7,48хС (г=0,9989) 0,025мкг/мл - 8,84%

Цити-зин Хлороформ и фосфатный буфер (рН - 8,0) 90,8± 3,2% 150 8= -0 54 +27,55хС (г=0.9972) 0,20 мкг/мл -13,34%

6-МП Осаждение белков - аце-тонитрил, экстракция -хлороформ 86,3± 4,2 % 5 Ь=6,92+0,25хС (г=0,9997) 0,10 мкг/мл -8,71%

ММПН 98,4± 1,8% 25 11=3,82+0,04хС (г=0,9969) 0,10 мкг/мл - 9,32%

МТПН 95,8 ± 3,6% 25 Ь=6,44 +0,18хС (1=0,9991) 0,10 мкг/мл -7,60%

ТГН 96,5± 2,3"о 10 11=6,44+0,18x0 (г=0,9991) 0,10 мкг/мл - 9,7%

Дипи-рида-мол Этилацетат, 0,1 \iNaOH 92,1± 2,0% 10 8=-1,62+1,25хС (г=0,9991) 0,10 мкг/мл - 10,5%

Амио-дарон Осаждение белков -ацетонитрил, 94,9± 1,6% 5 Б= 0.32+1040,ОхС (г = 0,9994) 0,05 мкг/мл - 10,64%,

Примечание: Б - площадь хроматографического пика;

Ь - высота площадь хроматографического пика;

* - определение проводили методом внешнего стандарта (диазепам)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Фармакокинетические подходы в разработке нового антиаритмического препарата V класса - брадизола, обладающего специфическим брадикарди-ческим действием

Проведено 3 серии экспериментов. В первой серии брадизол вводили внутривенно болюсом в дозе 6 мг/кг; во второй серии- внутривенно болюсом 2 мг/кг и далее инфузией 40 мкг/кг/мин в течение 60 мин; в третьей серии Л В вводили орально в дозах 20 мг/кг и 50 мг/кг.

Проведенные опиты показали, что брадизол, введенный внутривенно болюсом, вызывает значительную и длительную (до 2-3 час) брадикардию. Урежение сокращений сердца особенно выражено в течение 20 мин после введения и постепенно уменьшается. При этом артериальное давлепие изменяется незначительно.

При комбинированном внутривенном введении (болюс и последующая инфузия в течение 60 мин) брадикардия была выраженной и поддерживалась в течение 90 мин. При введении внутрь изучаемое вещество не влияло на гемодинамику. Дальнейшие исследования показали тесную корреляцию между фармакодинамикой и фармакокинетикой брадизола.

После внутривенного введения брадизол определялся в плазме крови животных в течение трех часов. Соответствующий усредненный фармакокине-тический профиль препарата представлен на рис. 1.

В табл. 3 представлены фармакокинетические параметры изучаемого ЛВ у кошек после внутривенного введения болюсом. Для брадизола характерно быстрое исчезновение из организма: MRT составило 63,89±6,44 мин; период полувыведения вещества из плазмы крови t1/2 - 52,85+7,60 мин. За 3 часа исследования концентрация (С) брадизола снижается в 30 раз (Со -3,999±0,327мкг/мл и С180 - 0.135±0,016 мкг/мл). Величина стационарного объема распределения (Vss) в несколько раз превышает реальный объем крови животных, что свидетельствует о способности соединения проникать в органы и ткани.

В то же время установлена высокая корреляционная зависимость между величинами концентраций брадизола и в плазме крови кошек и изменением частоты сердечных сокращений (-ДЧСС%) на протяжении всего эксперимента (г=0.9409; р=0.0005; рис. 2).

Полученные данные свидетельствуют о прямой зависимости между величиной урежений сердечных сокращений, вызываемого ЛВ, и его количеством в органе-мишени.

Таблица 3

Фармакокинетические параметры брадизола у кошек после однократного внутривенного введения препарата в дозе 6 мг/кг

№ /№ ПАРАМЕТРЫ

лис мкг/млхмин Со мкг/мл С1 л/мин kd мин'1 tl2 мин MRT мин V« л

1 85.98 3 741 0.070 0.0153 45.22 63.03 4.40

2 129.75 3 684 0.046 0.0174 39.92 53.43 2.47

3 128.16 3.156 0.047 0.0180 38.48 51.55 2 41

4 76 65 5.070 0.078 0 0147 47.28 63.09 4.94

5 126.75 4.341 0.044 0.0110 62.83 87.86 3.88

X 111.27 3.999 0.057 0.0150 52.85 63.89 3.62

S* 12.39 0.327 0.007 0.0010 7.60 6.44 0.51

Рис. 2. Зависимость между концентрациями брадизола в плазме крови кошек и изменениями частоты сердечных сокращений (ДЧСС%) после однократного внутривенного введения препарата

Так как величина tl/2 в среднем составляла менее 1 часа, можно полагать, что к концу эксперимента (3 час) содержание изучаемого ЛВ в плазме крови не превышает 12,5% от введенной дозы. Этого количества явно недостаточно для поддержания терапевтического эффекта. Поэтому представлялось интересным изучить кинетику брадизола при контролируемой скорости доставки препарата в системный кровоток с помощью инфузии после введения болюсом. Из рис. 1 (верхняя кривая) следует, что стационарные уровни концентраций брадизола (Css) наблюдаются с 5-й минуты в течение последующих 90 мин. При этом средние величины Css колеблются от 0,344 до 0,424 мкг/мл. Теоретические значения Css рассчитанные на основании данных внутривенного введения болюсом и представленные в табл. 7, составляют от 0,513 до 0,909 мкг/мл. Из данных табл. 4 следует, что концентрации препарата, определяющие вклад собственно инфузии (Cinf) в уровни С^, составляли в среднем 0,693+0,077 мкг/мл или 93,3%, так как эти параметры связаны соотношением: Cmf = константа скорости элиминации.

Полученные данные свидетельствуют о доминирующем вкладе инфузии в формирование стационарного профиля кинетики брадизола, а также в поддержание определенного терапевтического эффекта. При сопоставлении концентраций брадизола в плазме крови кошек после комбинированного введения (IV + INF) и изменений частоты сердечных сокращений выявлена высокая степень корреляции (г=0.9269; р=0.0001; рис. 3).

Таблица 4

Фармакокинетитеские параметры брадизола у кошек после комбинированного (однократное внутривенного введения препарата в дозе 2 мг/кг с последующей его инфузией со скоростью 40 мкг/мл/мин в течение 1 часа) п=5; х ± Б х

Рис 3. Зависимость между концентрациями брадизола в плазме крови и изменениями частоты сердечных сокращений (АЧСС%) после однократного комбинированного введения препарата

При таком способе введения изучаемого Л В величина MRT составила 97,5±6,3 мин (см. табл. 4). Таким образом, при комбинированном способе введения брадизол более длительно находится в организме и, следовательно, увеличивается продолжительность брадикардии.

После введения внутрь в дозе, в 10 раз большей, чем использовалась для внутривенного введения, брадизол в плазме крови животных не обнаруживал-

ся. Это свидетельствует о том, что соединение подвергается интенсивному прссистемному метаболизму. При введении внутрь у животных брадикардия не наблюдалась. Это может быть связано с тем, что образующиеся метаболиты не обладают выраженным кардиотропным действием.

На основании полученных данных можно сделать вывод, что содержание брадизола в плазме крови тесно коррелирует с его урежающим действием на частоту сердечных сокращений, т.е. величиной брадикардии. Для поддержания длительной управляемой брадикардии брадизол целесообразно применять, комбинируя внутривенное введение с последующей инфузией. При введении внутрь брадизол подвергается пресистемной биотрансформации, поэтому разработка лекарственной формы для орального приема представляется нецелесообразной.

Анализ коэффициентов распределения изучаемого соединения по органам и тканям показал, что брадизол хорошо распределяется по сильно васкуляри-зированным органам - селезенка и печень. В то же время содержание соединения в умеренно и слабо васкуляризированных органах (мышцы, сальник) -незначительно. Следует отметить, что в этих органах, наблюдается кумуляция препарата. Так, в сальнике через 5 мин коэффициент распределения составил 0,92, а через 20 мин -7,27, для мышц - 0,43 и 1,87, соответственно. В органе-мишени - сердце также отмечена выраженная кумуляция соединения СМ-345 в первые 20 мин после введения, за это время коэффициент распределения вырос в 4,86 раза (Табл. 5).

Таблица 5

Коэффициент распределения СМ-345 в органах и тканях крыс после однократного внутривенного введения препарата в различных временные интервалы (П=8)

Органы, ткани Коэффициент распределения

5 мин 10 мин 20 мин

Селезенка 9,01 30,79 42,25

Мышцы 0,43 1,33 1,87

Сальник 0,92 3,74 7,27

Печень 11,72 21,83 53,69

Почки 0,89 4,10 5,67

Сердце 0,59 1,86 2,87

Фармакокинетичсская оценка различных трансдермальных терапевтических систем с феназепамом и цитизином

(экспериментальное исследование на кроликах)

В результате целенаправленных комплексных исследований НТЦ "Лек-биотех" была создана новая лекарственная форма феназепама - ТТС фенанер-кутен, с применением которой появляется возможность длительного поддержания эффективных стабильных минимальных концентраций феназепама в плазме крови и при этом свести к минимуму побочные эффекты.

Новая ЛФ цитизина - ТТС циперкутен, обеспечивает поддержание стабильной концентрации ЛВ в плазме крови и, следовательно, уменьшение частоты введения ЛВ.

Поскольку одним из этапов внедрения препарата в медицинскую практику является изучение его фармакокинетики в эксперименте, нами было проведено фармакокинетическое исследование ТТС фенаперкутена и циперкутена в

эксперименте на кроликах .

Животным наносили фенаперкутен через 3 суток после обработки кожи (предполагалось, что по истечении этого времени, поврежденный эпидермис восстанавливается). Известно, что поврежденная кожа повышает чрескожное всасывание ЛВ. При повреждении кожного покрова скорость трансдермально-го переноса увеличивается. Феназепам относится к сильнодействующим препаратам, к тому же хорошо кумулируется в органах и тканях, а передозировка препарата может привести к негативным эффектам.

Для выяснения влияния состояния кожного покрова животных на скорость и степень проникновения феназепама из ТТС кроликам фенаперкутен наносили через 12 час после обработки кожи. Образцы крови отбирали в дискретные интервалы времени.

Для расчета скорости трансдермального переноса феназепама из ТТС на 4 кроликах изучена фармакокинетика феназепама после его внутривенного введения, поскольку при дальнейших вычислениях необходимо знать такие параметры, как

На рис. 4 и 5 представлены усредненные кинетические кривые феназепама в плазме крови животных после нанесения ТТС 0,5 в различные временные интервалы после обработки кожи (через 12 часов - группа I и через 3 суток -группа II) В таблице 6 приведены данные о стационарных концентрациях феназепама в плазме крови животных и величина скорости трансдермального переноса препарата из различных ТТС.

Как видно из этих таблиц и рисунков, феназепам быстрее всасывается из ТТС 0,5 (I группа - через 12 часов), чем из ТТС 0,5 (II группа - через 3 суток). При этом абсолютные значения концентраций препарата в плазме крови на протяжении первых 72 часов были в 3 - 4 раза выше в случае применения ТТС 0,5 (I) по сравнению с ТТС 0,5 (II). Так, после нанесения ТТС 0,5 (I) средние

' Препараты предоставлены д-ром хим. на>к, профессором А.Е Васильевым

уровни концентраций феназепама в стационарном состоянии на протяжении первых 72 часов составили 0,2734+0,0572 мкг/мл, а после ТТС 0,5 (II) -0,0632±0,0107 мкг/мл соответственно.

с: S

ж S

0,1-

0,01-

-h

S S S b О

1 ' l ■ ■ I ■» г ' I 1 /Л—'—l ' l ' I ■ I ■ l '

2 4 6 8 10 24 48 72 96 120 144

час

Рис. 6. Усредненная кинетика феназепама (x±SD) в плазме крови кроликов после нанесения TTC-0,3T (jpynna III)

Таблица 6

Стационарные концентрации (Cs,) феназепама в плазме крови кроликов и скорость трансдермального переноса (J) после нанесения TTC фенаперкугена

Животные

Параметры TTC 0,5 (группа 1) X ±S ï

1 2 3 4 5

с* мкг/мл 0.1639 0.4438 0.3776 0.1980 0.1835 0.2734 0.0572

-Ь-72 мкг/чх см2 1.78 4.90 2.91 1.57 1.35 2.50 0.66

TTC-0.5 (Il группа)

Css мкг/мл 0.0389 0.0645 0.0518 0.0584 0.1024 0.0632 0.0107

Î2-72 мкг/чх см2 0.40 0.50 0.77 1.00 1.14' 0.76 0.14

TTC-0.3Т (III группа)

Css мкг/мл 0,0401 0.0974 0.2393 0.3481 0.0610 0.1572 0.0589

Ja-T2 мкг/чх см2 0.65 1.45 4.20 7.31 0.84 2.89 1.27

Для расчета скорости трансдермального переноса использовали усредненные фармакокинетические параметры, полученные после внутривенного введения феназелама {3- 4,56 л и К«|р - 0,060 час"1). Как видно из таблицы 6 усредненное значение J ТТС 0,5 (I) составляет 2,50 и превышает аналогичный параметр ТТС 0,5 (II), который равен 0,76 мкг/млхсм2 в 3,3 раза. Максимальная концентрация феназепама регистрировалась через 48 час после нанесения ТТС 0,5- 0,3880 мкг/мл (I) и через 24 час после нанесения ТТС 0,5 (II) - 0,1061 мкг/мл. По средним значениям концентраций препарата в плазме крови животных была рассчитана AUC феназепама после нанесения ТТС. Данный параметр был получен с учетом введенной дозы (в пересчете на дозу внутривенного введения - 10 мг/кг).

Абсолютную биодоступность (Fa6c.) феназепама после нанесения фенапер-кутена рассчитывали, как отношение AUC после нанесения TTC к AUC после внутривенного введения препарата. фенаперкутена для животных группы I составила 17,70% и для группы II-3,71%.

После отмены ТТС 0,5 (I) концентрация феназепама линейно падала. В течение первых 24 часов после отмены ТТС 0.5 (II) отмечен почти двукратный "всплеск" концентрации препарата с последующим ее линейным снижением в течение 48 часов. Этот подъем концентрации можно объяснить тем, что после отмены ТТС 0,5 (II) кожу животных обрабатывали 70% раствором этанола, так как при обработке мыльным раствором не удалось полностью снять остатки ТТС. Вероятно, при последующей обработке кожи спиртом, феназепам частично растворяется и проникает через эпидермис кожи в системный кровоток. Различия в скорости и степени достижения постоянных уровней концентраций после нанесения ТТС 0,5 (I) и ТТС 0,5 (II) можно объяснить качеством кожного покрова животных, поскольку в первом случае ТТС наносили через 12 часов, когда эпидермис еще не восстановился после травмы, связанной с обработкой кожи, а в последнем случае ТТС наносили через 3 суток после обработки кожи. То есть в последнем случае, слой эпидермиса был, по-видимому, толще, что явилось дополнительным барьером для всасывания препарата.

При изучении всасывания феназепама из ТТС 0,3 Т отмечена сходная зависимость кинетики препарата, как при изучении ТТС 0,5 (И) (рис. 6). Препарат также медленно всасывается, достигая максимальных концентраций в среднем к 10 часам, удерживается на этом уровне в течение последующих 48 часов, а к 72 часам после аппликации снижается более чем в 2 раза. Через 24 часа после отмены ТТС 0,3 Т, как и в случае ТТС 0,5 (II), отмечен подъем уровня феназепама в плазме крови с последующим его линейным снижением. Следует отметить, что абсолютные значения концентраций феназепама в плазме крови были в среднем в 2 - 3 раза выше после нанесения ТТС 0,3 Т, чем после нанесения ТТС 0,5 (II), что можно объяснить различием в технологии получения ТТС, так как остальные условия проведения эксперимента были одинаковыми.

Расчет J феназепама из ТТС показал, что среднее значение скорости трансдермального переноса в 4 раза выше при нанесении ТТС О,ЗТ (III) по

сравнению с ТТС 0,5 (II) (2,89 и 0,76 мкг/млхсм2, соответственно) Fa^. данной прописи ТТС составила 10,3%, что в 3 раза превышает аналогичный параметр ТТС 0,5 (II).

Рассчитать концентрации феназепама в стационарном состоянии и скорость трансдермальпого переноса препарата после нанесения ТТС 0,3 (IV группа) не удалось, так как концентрации препарата в образцах плазмы крови определялись в основном в интервале времени 8-24 час.

Как показали проведенные исследования, для проведения клинических испытаний, наиболее перспективной с фармакокинетической точки зрения, является ТТС 0,3 Т, которая по основным показателям (скорость и степень всасывания) значительно превосходит ТТС 0,5 и ТТС 0,3. Необходимо отметить, что при применении ТТС большое значение имеет состояние кожного покрова. При повреждении кожи увеличиваются скорость трансдермального переноса и степень всасывания препарата, что может привести к нежелательным эффектам.

Динамика изменения концентрации цитизина в плазме крови кроликов после аппликации ТТС циперкутена представлена на рис. 7.

Из этих данных видно, что препарат быстро поступает в системный кровоток, так как через 0,5 час среднее значение концентраций препарата составляет уже 75% от среднего максимального значения концентраций. Максимальная концентрация цитизина в плазме крови определяется через 2 час и в среднем составляет 0,149 ± 0,046 мкг/мл.

Практически через 1 час после нанесения TTC устанавливается постоянный уровень концентраций (См), который сохраняется в течение 24 час. Необходимо отметить, что почти у всех кроликов регистрировались двухфаз-

ные стационарные уровни концентрации препарата: начальная фаза (фаза I -С55 0-24), терминальная фаза (фаза II -С5524-100).

Стационарные уровни концентраций цитизина на фазе I (С 0-24 - 0,125 ± 0,029 мкг/мл) в 2 раза выше, чем на фазе II (С 24-100 - 0,061 ±0,010 мкг/мл).

На основании полученных данных, величина скорости подачи препарата в кровь составила; для 10-24 - 9,80 ±2,54 мкг/см2х час, а для Ш-1ГО - 4,74+0,89 мкг/см^х час. Эти показатели указывают на то, что скорость поступления цитизина из ТТС в системный кровоток на фазе I также в 2 раза больше, чем на фазе П.

Таблица 7

Значения стационарных уровней концентрации (С88) цитизина в плазме крови кроликов и скорости его поступления в системный кровоток ( I ) после нанесения ТТС циперкутен

Параметры Животные х ± Sx

1 2 3 4 5

С SS (0-24) 0,051 0,093 0,103 0,164 0,216 0,125 ± 0,029

С se (24-100) 0,028 0,066 0,051 0,072 0,089 0,061 ±0,010

С ss <0-100) 0,040 0,078 0,078 0,119 0,155 0,094 ± 0,020

J(0-24) 4,09 6,71 7,43 12,28 18,47 9,80±2,84

J(24-!00) 2,24 4,76 3,68 5,39 7,61 4,74±0,89

J< О-КЮ) 3,20 5,62 5,62 8,91 13,25 7,32±1,74

По-видимому, первый участок стационарного уровня концентрации препарата лимитируется установившимся равновесием между скоростью поступления препарата из аппликатора и скоростью распределения его по органам и тканям. Наступление второй фазы стационарного уровня в большей степени связано с процессами поступления препарата в кровяное русло из депо - ткани и выведения из организма. Также весьма вероятно, что цитизин после нанесения ТТС накапливается в коже и/или подкожной жировой ткани и медленно проникает из жирового депо в системный кровоток, что способствует поддержанию стационарного уровня концентраций на терминальной фазе. Полученные доверительные интервалы значений концентрации препарата в крови на конечном отрезке фармакокинетической кривой у животных значительно ниже таковых на начальной фазе, что, по-видимому, объясняется вышеуказанными процессами (табл.4.8).

Модельно-независимым методом по средним значениям концентраций была рассчитана AUC цитизина после нанесения ТТС. Данный параметр был получен с учетом корректировки дозы (в пересчете на 2 мг/кг). Абсолютную биодоступность (F) цитизина после нанесения ТТС рассчитывали, как отношение AUC после нанесения ТТС к внутривенному введению препарата. F цитизина из ТТС составила 43,3%. Для "короткоживущих" ЛВ величина абсолютной и/или относительной биодоступности после нанесения ТТС по отноше-

нию к сублингвалыюму, пероральному и внутривенному введению составляла 30-40% [Сологова С.С, 1999].

После отмены ТТС некоторая часть ЛВ остается в ЛФ, в тоже время при расчете абсолютной биодоступности цитизина из ТТС предполагалось, что препарат полностью всосался. Поэтому реальная величина абсолютной биодоступности должна быть выше.

На чрескожное всасывание ЛВ оказывает существенное влияние целостность кожного покрова. При повреждении кожи скорость трансдермального переноса увеличивается. Подобное явление отмечено и в нашем исследовании. Так, например, кролику №5 циперкутен наносили сразу после сбривания шерсти, в отличие от других животных, когда аппликация ТТС осуществлялась через 24 час после обработки кожного покрова. Как видно из табл. 7 такие фармакокинетические параметры, как 1(0-24> -1(24-100) И С^^) у кролика №5 практически в 2 раза превосходят аналогичные усредненные значения. По-видимому, при обработке кожи животных, произошло ее повреждение, что и привело к увеличению скорости трансдермального переноса цитизина.

По результатам, проведенных, исследований можно сделать следующие выводы: ТТС циперкутена обеспечивает поступление цитизина в системный кровоток в течение 100 час, однако, при этом отмечаются значительные межин-дивидуалыше колебания концентраций ЛВ в плазме крови животных. В течение первых 24 час (I фаза) концентрации ЛВ в плазме крови в 2 раза выше, чем в последующие 3 суток (II фаза). Абсолютная биодоступность цитизина из ТТС составила 43,3%.

Биофармацевтическая оценка лекарственных веществ н их таблетированных лекарственных форм с обычным высвобождением

Взаимосвязь между биофармацевтическими свойствами и фармакокинетиче-скими параметрами производных 1.4-бензодиазепина

Рациональный поиск новых эффективных бензодиазепиновых препаратов основан на установлении взаимосвязей между физико-химическими (биофармацевтическими) свойствами соединений и фармакологической активностью, направлением и интенсивностью биотрансформации, фармакокинетическими параметрами [GreenЫatt D., 19851. Выявленные корреляции позволяют сделать выводы о скорости всасывания препаратов из ЖКТ, о времени достижения максимальной концентрации в крови, способности к длительной циркуляции в организме, кумуляции и скорости элиминации новых структур по данным анатиза ряда аналогичных соединений.

В связи с этим целью исследования явилось определение некоторых биофармацевтических характеристик (константа скорости растворения, константа скорости диффузии, константа липофильности) производных 1,4-бензодиазепина и сопоставление их с фармакокинетическими параметрами соответствующих соединений.

Выбранные для изучения структуры отличались друг от друга природой химических радикалов в ]М\ (1^= метил-, карбоксиметил-, гидразинокарбонил-), Сз (Кг =гидроксил-), С7 (Я4 =хлор-, бром-, нитро-) положениях бензодиазепино-вого цикла и в С2 (R3 =хлор-) положении фенильного кольца (всего 12 соединений).

Общая химическая структура бензодиазепиновых соединений

Дозозависимые ФК параметры пересчитывали эквимолярно, исходя из молекулярного веса самого низкомолекулярного соединения - дезметилдиазепама. С целью устранения влияния Сз-гидроксилирования на уменьшение биодоступности неизмененного соединения в случае дезметилдиазепама, феназепама и дезалкилгидазепама при корреляционном анализе использовали суммарную площадь под фармакокинетической кривой (AUC), состоящую из AUC неизмененного ЛВ и AUC метаболита. AUC гидазепама и циназепама рассчитывали по концентрациям их метаболитов - Сз-дезалкилгидазепама и Сз-оксифеназепама, соответственно.

Методом линейной регрессии изучена взаимосвязь между некоторыми физико-химическими свойствами исследуемых ЛВ и их метаболитов in vitro и соответствующими им фармакокииетическими параметрами in vivo, полученными на экспериментальных животных. В табл. 8 представлены результаты регрессионного анализа.

Таблица 8

Зависимость между биофармацевтическими свойствами in vitro и фармакокинетическими параметрами in vivo производных 1,4-бензодиазепина

Параметры Уравнение линейной регрессии г n P

in vitro in VIVO

Ka K, К, = -0,084 +38,139xKd 0,9600 12 <0,0001

K4I1SS AUC AUC = 12,922+341,127хКм1 0,9039 12 <0,0001

logK» v2 Vz = -104,567 + 47,076 x loeKtt 0,7043 9 0,0341

logic«.. MRT MRT = 3,683 + 2,616 x MRT 0,5286 9 0,1434

logKw Ti/2el T,/2ei = 3,686 + 1,390 x logKw 0,2007 9 0,6047

Из табл. 8 видно, что коэффициент корреляции, полученный при сопоставлении констант скорости диффузии изучаемых соединений in vitro и констант скорости поступления ЛВ (метаболита) в системный кровоток in vivo, позволяет предположить, что молекулы бензодиазепинов преимущественно всасываются из ЖКТ по механизму пассивной диффузии (r=0,9600). Установленная взаимосвязь имеет и практическое значение, т.к. по величине Kd in vitro можно оценить Ka без проведения эксперимента на животных. Важность оценки значения Ка очевидна, если учесть, что анксиолитический эффект бензодиазепинов обусловливается скоростью поступления ЛВ и/или метаболита в системный кровоток [Жердев В.П.. Воронина ТА, 1985].

На основании корреляции между Kd¡¡¡ и параметром, характеризующим как скорость, так и степень всасывания ЛВ - площадью под фармакокинетиче-ской кривой (AUC), можно судить о том, что скорость растворения бензодиа-зепинов является одним из факторов, определяющих их биодоступность (r=0,9039) [ Antal I., 2001, Schutz H., 1989].

Величины кинетических объемов распределения (Vz) бензодиазепиновых соединений увеличиваются с ростом их липофильности (r=0,7043). На основании установленной зависимости представляется возможным охарактеризовать по величине коэффициентов липофильности (полученных методом ВЭЖХ) способность к распределению в органах и тканях препаратов данного ряда, а также предсказать их способность к кумуляции при хроническом применении и проявление их побочных эффектов [Gibaldi M, 1991].

Следует отметить, что средние времена удерживания в организме (MRT) у животных и периоды полувыведения (Tißei) изучаемых соединений не коррелировали с соответствующими значениями logKw (r=0,5286 и 0,2007 соответственно).

Биофармацевтические подходы к оценке твердых ЛФ

Гидазепам с позиций биофармацевтической классификационной системы.

В 1995 г. Amidon G.L. et al., основываясь на растворимости и проницаемости ЛВ, предложили биофармацевтическую классификационную систему (Biopharmaceutical Classification System; BCS). Учитывая положения BCS, гидазепам можно отнести ко 2 классу ЛВ, поскольку исследования по изучению кинетики растворения субстанции гидазепама показали, что препарат в среде 0,1 и соляной кислоты (900 мл) в течение 60 мин растворяется на 98%. Однако по мере увеличения рН среды растворения (до нейтральной) процент растворения ЛВ падает в десятки раз (рис. 8) Более того, в опытах на животных показано, что максимально возможная биодоступность гидазепама (в пересчете на его активный метаболит - дезалкилгидазепам) составляет около 90% [Колыванов Г,Б. и др. 1992]. Иными словами, гидазепам является препаратом, который хорошо проникает через стенку кишечника.

100-J

■

2 3

<56

Рис. 8. Растворимость гидазепама при различных значениях рН среды растворения.

Всасывание ЛВ из твердой ЛФ после орального применения зависит от высвобождения ЛВ из ЛФ, растворения или солюбилизации ЛВ в физиологических условиях и проницаемости ЛВ через стенку ЖКТ. Вследствие критической природы первых двух стадий процесс растворения in vitro может быть полезным в предсказании действия ЛВ in vivo. Согласно BCS все ЛВ можно разделить на 4 класса:

класс: ЛВ с хорошей растворимостью и высокой проницаемостью; класс: ЛВ с плохой растворимостью и высокой проницаемостью; класс: ЛВ с хорошей растворимостью и низкой проницаемостью; класс: ЛВ с плохой растворимостью и низкой проницаемостью.

Эта классификация может использоваться в качестве основы для подбора условий теста «растворение» и стать основой для предсказания достоверности установления корреляции in vitro-in vivo.

Растворимость ЛВ определяется растворением самой высокой дозы препарата в ЛФ в буферном растворе в диапазоне рН между 1,0 и 8,0. ЛВ считается хорошо растворимым, когда объем раствора предназначенный для растворения ЛВ равен или меньше 250 мл. В то же время считается, что ЛВ обладает высокой проницаемостью, если его степень всасывания выше 90% при условии, что оно стабильно в ЖКТ.

Авторы BCS считают, что для препаратов 1 класса и для некоторых ЛВ 3 класса, растворение 85% ЛВ в среде 0,1 н раствора соляной кислоты в течение 15 мин может служить гарантией, что биодоступность препарата не ограничивается стадией растворения. В этих случаях стадией ограничивающей всасывание ЛВ является опустошение (эвакуация содержимого) желудка.

Среднее время, когда происходит эвакуация половины содержимого желудка (в условиях натощак), составляет около 15-20 мин. Учитывая это обстоятельство, можно сделать вывод, что препарат, растворившийся в течение 15 мин в среде 0,1 и раствора соляной кислоты на 85%, ведет себя подобно раствору, и, в общем, не должен иметь каких либо проблем с точки зрения биодоступности.

Для ЛВ 2 класса процесс растворения может служить стадией, ограничивающей всасывание, препарата и в этой ситуации исследователь может рассчитывать на установление корреляции.

Для ЛВ 3 класса проницаемость ЛВ играет роль стадии, контролирующей процесс всасывания. Для этой группы корреляция in vitro-in vivo возможна, в зависимости от относительных скоростей растворения и перехода ЛВ через стенку кишечника.

ЛВ, относящиеся к 4 классу, т.е. плохо растворимые и имеющие низкую проницаемость, представляют собой значительную проблему

Для того чтобы определить является ли фаза растворениы стадией, лимитирующей всасывание действующего вещества, нами изучена кинетика высвобождения/растворения гидазепама из таблеток кинетика, которых была изучена на животных.

Изучение кинетики растворения гидазепама из фармацевтически эквивалентных продуктов

Согласно определению Комитета по патентованным медицинским продуктам Европейского агентства по оценке медицинских продуктов «медицинские продукты считаются фармацевтически эквивалентными, если они содержат одно и тоже количество того же действующего вещества (веществ) в одних и тех же ЛФ, которые соответствуют одним и тем же или сравнимым стандартам [СРМР working party on efficacy of medicinal products. Draft released for bioconsultation on December 1998.].

Фармацевтическая эквивалентность совершенно необязательно подразумевает биоэквивалентность, поскольку различия во вспомогательных веществах (ВВ) и/или процессе производства могут привести к более быстрому или замедленному растворению и/или всасыванию действующего вещества.

В свете вышесказанного, таблетированные ЛФ гидазепама, изучение фар-макокинетики и биодоступности, которых проводилось на животных, можно отнести к фармацевтическим эквивалентам.

Исследование по изучению скорости растворения гидазепама из таблеток проводили методом "вращающейся корзинки" на приборе "Hcnson Research" (США) в среде растворения - 0,1 н раствор кислоты хлористоводородной (900 мл), вода очищенная (900 мл).

Согласно общей фармакопейной статье "Растворение" (ОФС 42-0003-00) испытания могут проводиться в различных средах растворения. Учитывая физико-химические свойства гидазепама, первоначально в качестве среды растворения нами использовался 0,1 н раствор соляной кислоты. Однако в кислой среде, процесс растворения гидазепама из всех изучаемых прописей

таблеток заканчивался в течение первых 15 мин. Иными словами, использование в качестве среды растворения 0,1 н раствора кислоты соляной говорит о том, что условия проведения данного испытания нельзя назвать оптимальными, поскольку какая-либо селективность теста «Растворение» полностью отсутствовала. Поэтому в качестве альтернативной среды растворения нами использовалась вода очищенная.

Для описания процесса высвобождения гидазепама из таблеток использовали уравнение кинетики первого порядка. В полулогарифмической системе координат, где по оси ординат откладывают натуральный логарифм нераство-рившегося из таблетки препарата, а по оси абсцисс - время, кривая растворения может быть аппроксимирована уравнением прямой линии, т.е. у = а х Ьх.

На рис.9 представлены линеаризованные профили растворения гидазепама из таблеток различного состава и технологии приготовления. Параметры линейной модели высвобождения гидазепама из таблеток представлены в табл. 9. Как видно из рис. 9 и табл. 9 используемая линейная модель удовлетворительно описывает процесс высвобождения гидазепама из таблеток различных прописей. Об этом свидетельствуют высокие значения коэффициентов корреляции линейной регрессии.

Таблица 9

Параметры линейной модели высвобождения (у = а\Ьх) гидазепама из таблеток различных прописей •

Параметры уравнения Т-1 Т-2 Т-3 Т-4

а 4,7593 4,3795 4,3834 4,2450

Ь -0,1330 -0,0830 -0,0538 -0,0307

г -0,9963 -0,9675 -0,9339 -0,9652

п 8 8 8

р 0,0003 0,0008 0,0007 0,0001

Примечание: коэффициент Ь в уравнении ■ линейной регрессии соответствует константе скорости растворения препарата.

с *

МИН

Рис. 9. Кинетика высвобождения гидазепама из фармацевтических эквивалентов, приготовленных по разным технологиям: Т-2, Т-3, Т-4 - таблетки, приготовленные на основе ТДС; Т1-таблетки гидазепама, выпускаемые промышленностью.

Препарат быстрее всего высвобождается из таблеток, выпускаемых промышленностью (Т-1; К&з, - 0,1330 мин'). Скорость высвобождения гидазепама из таблеток, приготовленных на основе ТДС, значительно ниже. Так, для таблеток прописи Т-2 скорость растворения препарата по отношению к прописи Т-1 была ниже в 1,7 раза, прописи Т-3 в 2,7 раза и прописи Т-4 в 4,4 раза соответственно. Самая высокая скорость растворения гидазепама из таблеток, приготовленных на основе ТДС характерна для таблеток Т-2.

Для выявления корреляции между данными растворения in vitro и фарма-кокинетическими параметрами in vivo используют как аналогичные, так и неаналогичные данные. К аналогичным параметрам относят, например, константу скорости растворения in vitro и константу скорости всасывания in vivo, среднее время растворения in vitro и среднее время всасывания in vivo. В качестве неаналогичных параметров рассматриваются, например, константа скорости растворения и площадь под фармакокинетической кривой, время, необходимое для растворения 50% препарата, и максимальная концентрация препарата в плазме/сыворотке крови. Как в том, так и в другом случае получены высокие значения коэффициентов корреляции.

Корреляция данных in vivo и in vitro

Для установления корреляции in vitro и in vivo использовали параметр аналогичный скорости всасывания гидазепама из таблеток различных прописей (определяемый отношением максимальной концентрации препарата в плазме крови (Сщцх) к площади под фармакокинетической кривой AUC^t)r о величина возрастала в ряду: Т-4 < Т-3 < Т-2 < Т-1 и колебалась в диапазоне от 0,156+0,013 для прописи Т-4 до 0,219+0,024 час"1 для прописи Т-1 соответственно. Максимальная величина AUCo-я гидазепама, характеризующая относительную биодоступность препарата, отмечена для таблеток прописи Т-2 - 13,72+2,10 мкг/млхчас. Значения AUCo-ц для остальных изучаемых прописей таблеток гидазепама незначительно отличались друг от друга и колебались от 3,98+0,75 до 4,51 +0,82 мкг/млхчас.

В нашем исследовании предпринята попытка выявить корреляционные зависимости между этими двумя типами коррелируемых параметров (рис. 10 а и б). Так для аналогичных данных (Kd,s<, - Cmax/AUCo-и) коэффициент корреляции составил 0,9928, для неаналогичных (Kd^AUCo-n) - 0,1608.

На первый взгляд полученные данные свидетельствуют о полном отсутствии какой либо связи между скоростью растворения и степенью биодоступности гидазепама из изучаемых прописей таблеток. В тоже время отсутствие непосредственной корреляции двух переменных не обязательно означает отрицание взаимосвязи между ними [Платонов А.Е., 2000].

На основании полученных результатов можно сделать вывод, что константа скорости растворения гидазепама является одним из факторов, определяющих скорость всасывания препарата, и эти данные могут быть использованы при разработке теста "растворение" на таблетки и другие твердые лекарственные формы гидазепама с неконтролируемым высвобождением действующего вещества. В то же время, следует еще раз подчеркнуть, что данные по растворению/высвобождению ЛВ из ЛФ in vitro ни в коем случае не подменяют исследования готового продукта in vivo.

Теоретические и практические основы проведения исследований биоэквивалентности лекарственных средств

Для проявления оптимального терапевтического действия активная часть лекарственного средства должна быть доставлена к месту действия в эффективной концентрации в течение желаемого периода времени. Для того чтобы осуществить надежное предсказание терапевтического эффекта следует должным образом охарактеризовать действие ЛФ, содержащую ЛВ.

В прошлом, отмечено несколько несчастных случаев, связанных с различиями в биодоступности (например, дигоксин, фенитоин, примидон) лекарственных средств, свидетельствующих в пользу необходимости проведения испытаний действия ЛФ в процессе доставки ЛВ в системный кровоток, следовательно, к месту действия [Rowland N., Tozer T.N., 1996]. Таким образом, биодоступность ЛВ и лекарственного средства должна быть известна и воспроизводима. Главным образом это относится к случаю, когда один препарат, содержащий одно определенное ЛВ, используется вместо препарата инноватора. В этом случае в клинических условиях воспроизведенный препарат должен показать такой же терапевтический эффект. В общем, это достаточно объемное исследование для оценки клинических испытаний.

Сравнение терапевтического действия двух лекарственных средств, содержащих одно и тоже ЛВ, является необходимым методом оценки возможности альтернативного выбора между продуктом инноватора и любым воспроизведенным (генерическим) ЛП. Полагают, что у одного и того же испытуемого существенно подобный концентрационный профиль ЛВ приведет к существенно подобным концентрациям ЛВ в месте действия и, следовательно, к существенно подобному эффекту, при этом для установления эквивалентности, т.е. биоэквивалентности (БЭ), могут быть использованы фармакокинетические (ФК) данные вместо терапевтических результатов.

Исследование БЭ воспроизведенных ЛП проводили согласно приведенной схеме. Так, например, на добровольцах проведено исследование БЭ дипирида-мола, выпускаемого в виде таблеток Веро-дипиридамола (Тест) и Курантил 25 (Референс). На рис. 11 представлены усредненные ФК профили дипиридамола в плазме крови добровольцев.

Схема проведения исследования биоэквивалентности лекарственных препаратов

КРИТЕРИИ ВКЛЮЧЕНИЯ

число

ИСПЫТУЕМЫХ

_IV? 18

ijj g | .f й I

ИЗУЧЕНИЕ БИОЭКВИВАЛЕНТНОСТИ

AUАЛ ИЗ Л В I1MLT1U ЕГО МЕТАБОЛИТА (ОВ) И КИОЖИДКОСТИ

точность,

ВОСПРОИЗВОДИМОСТЬ, ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТЬ, СТОИМОСТЬ

ВАЛИДАЦИЯ МЕТОДА

РАСЧЕТ ФК ПАРАМЕТРОВ (AUC, Ста*» tniex* C„,„/AUC и др.)

СТАТИСТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ

КРИТЕРИИ ПРИЕМЛЕМОСТИ БИОЭКВИВАЛЕИТНОСТИ

ОЦЕНКА БИОЭКВИ ВАЛЕНТНОСТИ

(ДАШЕТ)

1.6 "I

1,2

с; 2

о °'8

0,4

0,0

■ \\

- Тест

- -•— Референс

1 1 I

2 4

—г-10

Час

Рис. 11. Усредненные фармакокинетические профили дипиридамола в плазме крови добровольцев после однократного приема 100 мг таблеток Веро-дипиридамола (Тест) и 100 мг таблеток Курантил 25 (Референс) п=18; х^БЭ

Таблица 10

90% доверительные интервалы фармакокинетических параметров, характеризующих биоэквивалентность исследуемых препаратов

Параметры Левая фаница Среднее значение Правая граница

лис 0,847 0,926 0,982

Стах 0,882 0,978 1,084

Стах/АиС 0,965 1,072 1,190

Дисперсионный анализ (АМОУА) индивидуальных отношений фармако-кицетических параметров - АиС, Ст^/АиС и дипиридамола показал, что степень относительной биологической доступности (Г %) таблеток веро-

дипиридамола по отношению к таблеткам Курантила 25 составила в среднем 92,6 % (90% доверительный интервал для In AUC - 84,7 - 98,2%). Рассчитанный доверительный интервал не выходит за установленные рамки (Табл. 10). То же можно сказать и о параметре, характеризующем скорость всасывания ЛВ (Сшах/AUC) и величине максимальной концентрации в плазме крови. На основании полученных данных, учитывая «Методические рекомендации по проведению качественных клинических исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов», сравниваемые препараты являются биоэквивалентными.

Фармакокинетика внутриклеточных метаболитов 6 МП

Во-первых, необходимо подчеркнуть, что ферментный метод, используемый в нашем исследовании для количественного определения метилированных и неметилированных внутриклеточных метаболитов 6МП, являлся более специфичным, чем наиболее часто используемый для этой цели химический метод [L. Lennard and Singleton, 1992], так как при этом определялись только пулы соответствующих нуклеотидов. При использовании более жесткого химического метода, разрушающего различные метаболиты до соответствующих оснований, которые затем хроматографически определяются, не представляется возможным количественно отдифференцировать и оценить вклад различных групп внутриклеточных нуклеотидных метаболитов 6МП, которые могут играть и, по-видимому, играют главенствующую роль в проявлении терапевтической активности 6МП [S. Giverhaug et al., 1997; L. Lennard et al., 1995].

Так как в нашем исследовании в виде свободной формы метилмеркапто-пуринрибозид, тиогуанинрибозид и метилтиогуанинрибозид в эритроцитах крови детей с ОЛЛ не определялись, можно утверждать, что исследуемые метаболиты существуют главным образом в виде соответствующих рибонук-леотидов (ТГН, МТГН и ММПН). При этом не удалось зарегистрировать даже в следовых количествах неметилированные меркаптопуриновые нуклеотиды по соответствующему нуклеозиду.

Наиболее важным результатом настоящего исследования являются данные, указывающие на отсутствие изменений в концентрации изучаемых внутриклеточных нуклеотидов в лизатах эритроцитов до и после перорального приема 6МП. То есть в процессе хронического приема препарата устанавливаются постоянные уровни концентраций внутриклеточных нуклеотидных метаболитов, имеющие определенное значение для каждого индивидуального пациента. Эти данные кардинальным образом отличаются от ФК неизмененного 6МП в плазме и эритроцитах крови больных, где можно проследить кинетику препарата, зарегистрировать С^, измерить AUC и другие ФК параметры (табл.11).

Вместе с тем, обнаружена высокая степень корреляции между ФК параметрами неизмененного 6МП и уровнем ТГН и ММПН (табл.12), чю указывает на важную прогностическую значимость результатов ФК неизмененного препа-

рата, несмотря на то, что 6МП является пролекарством и сам не оказывает терапевтического эффекта.

Таблица 11

Фармакокинетические параметры 6МП в плазме крови и

его внутриклеточных метаболитов в эритроцитах крови_

Неизмененный 6МП Метаболиты

№/№ Сщак 1щах АиСо-зч1с С5ЧТГН Сй ММПН

больные (нг/мл) (час) (нг/млхч) (час) (нг/мл) * (нг/мл) *

1. 102.4 1.0 206.4 1.76 153.6+10.74 2344±87.51

2. 108.2 2.0 192.0 3.08 174.4±13.05 1931±193.4

3. 190.4 2.0 379.4 1.92 53.08±4.15 41951105.1

4. 120.6 2.0 232.6 3.82 106 6±8.02 3123185.13

5. 76.4 1.0 138.8 2.13 223.4±12.93 830.8130.33

6. 216.4 2.0 - - 55.6216.48 42481107.1

7. 106.6 1.0 214.8 1.58 146.2+11.69 25761119 3

8. 160.2 2.0 317.9 1.08 62.96±8.14 39691127.4

9. 180.6 2.0 288.3 0.94 78.08±11.24 35541189.3

10. 126.4 1.0 237.8 1.71 92.84±10.90 3186170.04

11. 144.2 1.0 316.8 2.65 64.54±8.25 38381142.3

12. 126.2 1.0 231.6 1.39 102.6±9.55 3145164.61

13. 110.6 1.0 226 4 2.42 121.4+17.09 2883+156.1

14. 50.4 2.0 - - 246.0±13 60 399.6112.49

15. 112.6 1.0 203.0 1.34 145.8±10.23 22401115.8

16. 112.3 2.0 226.1 1.17 101.7±10.21 3071158.37

17. 42.6 2.0 73.3 0.95 257.0±13.40 380 8+13.63

18. 80.4 1.0 155.2 1.90 207.0±9.78 887.2+15.63

Примечание: * - средние концентрации метаболитов и соответствующие им стандартные отклонения, рассчитаны по данным до приема и через 0,5, 1,0, 2,0 и 3,0 часа после приема 6МП.

Таблица 12

Корреляционные зависимости между фармакокинетическими параметрами неизмененного 6МП и его внутриклеточных метаболитов

Коррелируемые параметры Уравнения линейной регрессии

У X

с, тгн С^бМП у = 291.24- 1.31 х (г=-0.9109; п=18; Р<0.05)

с„ тгн Аис 6МП у = 305.48 - 0.77 х (г= -0.9439; п=1б; Р<0.05)

С, ТГН ся ммпн у = 5144.47- 19.14 х (г = -0.9941; п=18; Р<0 05)

си ммпн Сшах6МП у = -470.04 + 25.49х (1=0.9171; п=18; Р<0.05)

си ммпн лис 6МП у = -691.47+14.61 х (г= 0.9463; л=16;Р<0.05)

При сопоставлении данных по С^ внутриклеточных метаболитов 6МП с клинической эффективностью препарата было обнаружено, что у 4 больных были самые низкие показатели С ММТН и именно у этих больных были выявлены рецидивы. При этом уровни ТГН у них были наиболее высокими. Кроме того, у четырех больных отмечалась выраженная нейтропения и именно у этих детей регистрировались наиболее высокие уровни ММПН и низкие ТГН.

До сих пор по литературным данным считается, что главными метаболитами 6МП по механизму действия являются ТГН. Однако наши результаты указывают на то, что существенную роль в проявлении эффекта и цитотокси-ческого действия 6МП играют ММПН. У тех больных, у которых регистрировались самые низкие уровни ММПН, эффективность 6МП была минимальной, а самые высокие показатели ММПН сопровождались цитотоксическим действием препарата.

Логически, с позиций ТГН, эти клинические данные обсудить не представляется возможным. Известно, что механизм действия ТГН связан с возможностью этих метаболитов встраиваться в РНК и ДНК и губить при этом клетку, не давая ей возможности дальше делиться. В то же время имеются данные, что меркаптопуриновые нуклеотиды (в частности, тиоинозинмонофосфат) являются ингибиторами синтеза пуриновых оснований dc novo. He исключено, что ММПН могут оказывать свой цитотоксический. эффект именно по этому механизму действия. Учитывая тот факт, что концентрации ММПН в клетках крови в значительной степени выше, чем других нуклеотидов, может быть эта группа внутриклеточных метаболитов играет более существенную роль в эффективности 6МП. Наши результаты подтверждают это предположение.

И, наконец, наибольший интерес представляет установленная обратная корреляция между ММПН и ТГН (рис. 12).

Сбз ММПН (нг/100 мкп эритроцитов) 5000 г

4000

2000

3000

1000

100

150

200

250

Сээ ТГН (нг/100 мкп эритроцитов)

Рис. 12 Корреляционная зависимость между Си ТГН и С^ ММПН в эршроцитах крови детей с ОЛЛ

Чем более высокие концентрации ММПН определяются в эритроцитах крови больных детей с ОЛЛ, тем меньшие уровни ТГН при этом регистрируются. Вероятно, это связано с активностью фермента ТПМТ, ответственного за процесс метилирования метаболитов 6МП. То есть, чем выше активность этого фермента, тем больше, по-видимому, образуется при этом ММПН и соответственно меньше ТГН.

Влияние тиопуринметилтрансферазы на образование основных внутриклеточных метаболитов 6 меркаптопурина

Установлен существенный разброс в ТПМТ активности у 18 детей с ОЛЛ. Однако в наших результатах не было ни одного больного, у которого бы не определялась активность ТПМТ, что по данным литературы встречается крайне редко - приблизительно в одном случае из 300 наблюдений. Вместе с тем у трех больных детей с ОЛЛ была отмечена низкая активность фермента, составляющая менее 10 ед/мл эритроцитов (табл. 13). Именно у этих больных наблюдалась самая низкая концентрация ММПН (менее 1000 нг/100 мкл эритроцитов) и самая высокая концентрация ТГН (более 200 нг/100 мкл эритроцитов). При проведении корреляционного анализа по всей выборке больных была впервые установлена высокая степень корреляции между активностью ТПМТ и содержанием ММНП и обратная корреляция - с содержанием ТГН (табл. 13). Таких тесных корреляций между этими величинами

ранее выявлено не было. Установленные корреляции являются крайне важными; так как дают возможность по активности ТПМТ прогнозировать содержание главных внутриклеточных метаболитов 6МП, играющих, ведущую роль в проявлении основного и побочного эффектов препарата. В мировой практике основное внимание при изучении активности ТПМТ направлено на выявление дефицитных больных, у которых не выявляется активность ТПМТ и которые чаще всего погибают от токсических проявлений действия 6МП, что согласно нашим данным может быть связано с образованием больших количеств ТГН.

Таблица 13

Концентрации ТГН и ММПН (нг/100 мкл эритроцитов) и ТПМТ активность (ед/ мл эритроцитов) у детей с ОЛЛ

№№ наблюдений ТГН ММПН ТПМТ

1 2 3 4

13 153,6 2344 15,48

14 174,4 1931 11,96

15 53,08 4195 34,70

16 106,6 3123 18,00

17 223,4 830,8 10,73

18 55,62 4248 28,96

19 146,2 2576 15,97

20 62,96 3969 26,85

21 78,08 6554 35,82

22 92,84 3186 18,29

23 65,54 3838 20,66

24 102,6 3145 17,77

25 121,4 2883 16,74

26 245,0 399,6 6,72

27 145,8 2240 12,91

28 101,7 3071 16,44

29 257,0 877,2 9,27

30 207,0 877,2 9,27

Таким образом, на примере создания нового лекарственного средства, новых лекарственных форм известных препаратов, разработки рациональных подходов к оптимизации лекарственных форм и применения лекарственных препаратов в клинике предлагается комплексный (фармакокинетический и биофармацевтический) исследовательский подход, включающий все необходимые этапы, начиная с изучения способов введения анализируемого соединения, биотрансформации исходного соединения и роли продуктов его превращения, проницаемости препарата через гистогематические барьеры, влияния вспомогательных веществ на фармакокинетику действующего вещества и заканчивая изучением взаимосвязи между фармакокииетическими параметрами лекарственного вещества и/или его метаболита(ов) и различными проявлениями его(их) действия.

ВЫВОДЫ

1. Разработаны высокочувствительные ВЭЖХ-методики анализа брадизола, феназелама, гидазелама, цитизина, 6-меркаптопурина и их метаболитов, позволяющие проводить их количественное определение в биоматериале (плазма крови, моча, гомогенаты органов, тканей, лизаты эритроцитов).

2. Фармакокинетические исследования доказали перспективность разработки инъекционной лекарственной формы брадизола перед энтеральной формой, из-за выраженного эффекта «первого прохождения через печень».

3. Результаты фармакокинетических исследований, проведенных на животных, свидетельствуют о принципиальной возможности прогнозировать и, соответственно, корректировать действие феназепама и цитизина, используя новую лекарственную форму препаратов - трансдермальную терапевтическую систему.

vivo позволяют прогнозировать фармакокинетические характеристики новых соединений этой группы на основании данных, полученных in vitro.

5. Константа скорости растворения гидазепама является одним из факторов, определяющих скорость всасывания препарата, и эти данные могут быть использованы при разработке теста "растворение" на таблетки и другие твердые лекарственные формы гидазепама с неконтролируемым высвобождением действующего вещества.

6. Обнаружена положительная корреляция между Спт. и AUC неизмененного 6-меркаптопурина как в плазме, так и эритроцитах крови детей с острым лимфобластным лейкозом, а также между этими параметрами и Css метилмер-каптопуриновых (положительная корреляция) и Css тиогуаниновых нуклеоти-дов (отрицательная корреляция). Между двумя последними группами внутриклеточных метаболитов выявлена высокая достоверная отрицательная корреляция.

7. Установлено, что низкие показатели С,™,* и AUC неизмененного 6-меркаптопурина в эритроцитах крови, а также низкая активность тиопуринме-тилтранферазы сопровождаются возникновением ранних или поздних рецидивов, а соответственно высокие их показатели - цитотоксическим действием.

8. Разработан комплексный подход, необходимый при создании и применении лекарственных средств, включающий фармакокинетико-фармакодинамические исследования субстанции и лекарственной формы; изучение биотрансформации препарата с идентификацией активных метаболитов; изучение взаимодействия препарата со вспомогательными веществами; установление взаимосвязи между фармакокинетическими и биофармацевтическими характеристиками лекарственного средства (корреляция in vivo/in vitro); поиск фармакокинетических детерминант в проявлении эффекта препарата; оценка качества воспроизведенных препаратов. Дапный подход дает возможность оптимизировать создание нового лекарственного средства, его лекарст-венная(ые) форма(ы) и применение в лечебной практике.

Список работ, опубликованных но теме диссертации:

1. Использование математических уравнений для описания процесса растворения лекарственного вещества из таблеток.// Фармация, 1986, № 3, - С. 34- 37 (Соавт.: Тенцова А.И., Киселева Г. С.)

2. Применение метода статистических моментов при исследовании кинетики растворения и всасывания лекарственных веществ. //Тез. докл. Всесоюзн. науч.конф Львов, 1986, -С.132-133.

3. Dissolution kinetics and pharmacokinetics of orphenum and voltaren tablets. // 6th symposium on biopharmaceutics and pharmacokinetics Czechoslovakia, 1990, -p. 109 -109 (Соавт.: Киселева Г.С, Кукес В.Г.)

4. Взаимосвязь между фармакокинетикой и физико-химическими свойствами в ряду 1,4-бензодиазепина. // III Всесоюз. конф. по фармакокинетике, Москва, 1991, С. 112-114 (Соавт.: Колыванов Г.Б., Посыпанов С.Г.)

5. Биотрансформация и фармакокинетика нового транквилизатора гидазепама в эксперименте и клинике. // III Всесоюзн. конф. по фармакокинетике, Москва, 1991, - С. 122-123 (Соавт.: Жердев В П., Незнамов Г.Г., Колыванов Г.Б.)

6. Зависимость биотрансформации в ряду производных 1,4-бензодиазепина от их химической структуры. // Тез. Международной конф. "Нейрофармакология на рубеже двух тысячелетий", С.-Петербург, 1992, ч.1, - С.72-72. (Соавт.: Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Отабекова С.Г.)

7. Биотрансформация и фармакокинетика гидазепама у крыс. // Хим.-фарм. ж., 1993, №1, С. 16-19 (Соавт.: Жердев В.П. Колыванов Т.Е., Родионов АЛ.)

8. Relationships between in vivo pharmacokinetic parameters and in vitro absorption, dissolution and lipophylity data in a number of derivatives 1,4-benzodizepine. // Eur. J. Drug metab. And Pharmacokinet., 1993, vol.18, №1, - p. 167. (Соавт.: Zherdev V.P., Kolyvanov G.B.)

9. Фармакокинетическая и биофармацевтическая оценка нового транквилизатора гидазепама.// Экспер. и клинич. фармакол., 1993, т.56, №2, -С. 53-55. (Соавт.: Колыванов Г.Б., Жердев В.П. Крученков А.А.)

10. Биотрансформация и фармакокинетика гидазепама у разных видов животных и человека. // Экспер. и клинич. фармакол. ,1993, т.56, №3, С. 48-50. (Соавт.: Колыванов Г.Б., Жердев В.П., Чирков А.М., Отабекова С.Г.)

11. Влияние вспомогательных веществ на биотрансформацию и биодоступность гидазепама. // Экслер. и клинич. фармакол., 1993, т.56, №6, - С.50-52.

(Соавт.: Отабекова С.Г., Жердев В.П., Колыванов Г.Б.)

12. Фармакокинетика пирикапирона - нового аптиэметика и анксиолитика. // В кн. "Актуальные проблемы медицины и биологии ", Киев, 1993, т.2, - С. 268273. (Соавт.: Колыванов Г.Б., Жердев В.П., Комиссаров И.В., Налетов СВ.)

13. Differences between species in the direction and intensity of biotransfoimation of the new tranquilliser gidazepam.// In: Biological basis of individual sensitivity to psychotropic drags (ed.Seredenin S.B., Longo V.), 1994, Graffham.Press Ltd., -p.73-77. (Соавт.: Zherdev V.P. Otabekova S.G., Kolyvanov, G.B.)

14. Экспериментальное изучение фармакокинетики и биодоступности лекарственных форм пирикапирона. // Хим.-фарм. ж., 1994, т.28, №9, С. 18-21. (Соавт.: Налетов СВ., Комиссаров B.C., Грошевой ГА, Жердев В.П.)

15. Биоэквивалентность таблеток метиазола.// Тез.И Российского конгресса "Человек и лекарство", Москва, 1995, - С. 29-29 (Соавт.: Лебедева М.Н., Расходчикова Н.В., Колыванов Г.Б.)

16. Проблемы фармакокинетики при создании и внедрении новых лекарственных средств.// Тез. I съезда РНО фармакологов, Волгоград, 1995, с. 157 -157 (Соавт.: Жердев В.П., Бойко С.С., Колыванов Г.Б., Дворянинов А.А.)

17. Значение фармакокинетических исследований при создании и применении лекарственных средств. // Ж. клинич. и лаб. диагностика, 1998, №9, - С. 16-17 (Соавт.: Жердев В П., Колыванов Г.Б., Незнамов Г.Г.)

18. Биоэквивалентность воспроизведенных препаратов ОАО ХФК "Акрихин".// Тез. Докл. V Российского Конгресса "Человек и лекарство", Москва, 1998, - С. 650-650. (Соавт.: Жердев В.П., Колыванов Г.Б. Сариев А.К., Юрчен-ко Н.И.)

19. Оценка биоэквивалентности препаратов зарубежных фирм, поступающих на российский рынок. // Материалы Всеросс. науч. конф. "От Materia medica к современным медицинским технологиям". С.-Петербург, 1998, - С. 57-57. (Соавт.: Жердев B.IL, Колыванов Г.Б. Ковалев Г.И., Сариев А.К., Стародубцев А К.)

20. Kinetics of fenazepara penetration from transdermal therapeutic system. // Abstracts of 2nd European Congress of Pharmacology, Budapest, 3-7 July, 1999. in: Fundamental and Clinical Pharmacology, Vol.13, Suppl. 1, 1999, P.370-371 (Соавт.: A.K. Sariev, V.P. Zherdev, G.B. Kolyvanov, S.S Sologova, A.E. Vasili-yev.)

21. Значение фармакокинетических исследований в создании и применении лекарственных средств.// Ж. клинич. и лаб. диагностика, 1998, № 9, - С.16-17 (Соавт.: Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Незнамов Г.Г.)

22. Возможность оптимизации фармакотерапии острого лимфобластного лейкоза у детей 6-меркаптопурином (фармакокинетическое исследование).// Тез. докл. Всероссийской научной конференции "От Materia medica к современным медицинским технологиям". С.-Петербург, 1998, - С.56 (Соавт.: Жердев А.В., Колыванов Г.Б., Ковалев Г.И.)

23. Фармакокинетические аспекты оптимизации применения лекарственных средств.// Тез. докл. Всероссийской научной конференции с международным участием "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии". С.-Петербург, 1999, - С.71 (Соавт.: Жердев В.П., Незнамов Г.Г., Сариев А.К., Колыванов Г.Б., Бойко С.С.)

24. Сравнительный анализ метилированных и неметилированых метаболитов 6-меркаптопурина в эритроцитах детей с острым лимфобластным лейкозом.// Мат. докл. "Национальных дней лабораторной медицины России", Ж. клинич. и лаб. диагностика, 1999, - С.40 (Соавт.: Колыванов Г.Б., Румянцев А.Г., Жердев А.В.)

25. Фармакокинетика 6-меркагггопурина и его нуклсотидных метаболитов в плазме и эритроцитах крови детей с острым лимфобластным лейкозом.// Ж. Гематология и трансфузиология, 1999, №6, С. 23-28 (Соавт.: Колыванов Г.Б., Румянцев А.Г., Трубина Н.М., Жердев В.А.)

26. Сравнительная оценка двух лекарственных форм гидазепама. //Тез. Докл. VI Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 1999, - С. 426-426 (Соавт.: Рослякова Н.В., Колыванов Г.Б., Жердев В.П.)

27. Фармакокинетика цитизина при применении его в виде трансдермальной терапевтической системы у кроликов.// Экспер. и клинич. фармакол., 1999, 62, № 6, - С.42-44 (Соавт.: Сариев А.К., Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Сологова С.С., Васильев А.Е.)

28. Сопоставление фармакокдинамики и фармакокинетики нового специфического брадикардического средства брадизола. // Экспер. и клинич. фармакол., 63, № 3,2000. - С.29-32 (Соавт.: Чичканов Г.Г., Цорин И.Б., Жердев В.П., и др.)

29. Оценка фармакокинетических и биофармацевтических параметров новой лекарственной формы гидазепама.// Тез. докл. VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 2000, - С. 706-706 (Соавт.: Рослякова Н.В., Колыванов Г.Б., Жердев В.П.)

30. Влияние измельчения субстанции диазепама на высвобождение его из таблеток. // Тез. докл. VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 2000, - С. 608-609 (Соавт.: Дворянинов А.А., Нечаева Е.Б., Жердев В.П.)

31. Изучение биодоступности таблеток диазепама. // Тез. докл. VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство», Москва, 2000, - С. 609-609 (Соавт.: Дворянинов А.А., Нечаева Е.Б., Жердев В.П.)

32. Вариабельность активности тиопурин-8-метилтрансферазы и уровней концентраций основных внутриклеточных метаболитов 6-меркаптопурина у детей с острым лмфобластным лейкозом. //Тез. III Международной конф. «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам», Суздаль, 15-18 мая, 2001, - С. 58-59 (Соавт.: Жердев В.П, Колы-ванов Г.Б., Румянцев А.Г., Самочатова Н.М., Трубина Н.М., Жердев А.В.)

33. Кинетика растворения и экспериментальная фармакокинетика таблеток гидазепама с различным составом вспомогательных веществ. // Ведомости НЦЭ и КЛС, 2001, № 1(5), - С. 93-95 (Соавт.: Колыванов Г.Б., Рослякова Н.В., Жердев В.П.)

34. Методические рекомендации по проведению качественных клинических исследований биоэквивалентности лекаратсвенных препаратов. Москва, 2001, - с. 24 (Соавт.: Бондарева И.Б., Булаев В.М., Герасимов В.Б., и др.)

35. Оценка фармакокинетики и эффективности феназепама у крыс при транс-дермальном и энтеральном способах введения. // Экспер. и клинич. фармакол,,

2003, 66, № 1, - С.50-53 (Соавт.: Жердев В.П., Воронина Т.А., Т.Л. Гарибова и др)

36. Гармонизация проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов: вопросы и их возможное решение. // Экспер. и клинич.

фармакол., 2003, 66, № 2, С.60-64 (Соавт.: Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Сариев А.К.)

37. Корреляция in vitro- in vivo: может ли тест "Растворение" заменить исследования биоэквивалентности лекарственных препаратов?//Фарматека, 2003, № 3, -С. 109-111 (Соавт. Жердев В.П., Колыванов Г.Б.)

38. Интенсивность дезалкилирования гидазепама после его введения животным в растворах с высокомолекулярными соединениями и в виде твердых дисперсных систем. // Сб. тез. 2-го съезда РНО фармакологов «Фундаментальные проблемы фармакологии», Москва, 21-25 апреля 2003, 4.1, С. 259-259 (Соавт.: Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Рослякова Н.В.)

39. Зависимость биотрансформации производных 1,4-бензодиазепина от их химической структуры. // Хим.-фарм. журн., 2004, № \, С. 45-47 (Соавт.: Колыванов Г.Б., Жердев В.П., Арзамасцев А.П.)

40 Экспериментальная фармакокинетика феназепама при применении транс -дермальной терапевтической системы фенаперкутена. // Экспер. и клинич. фармакол., 67, № 2,2004. С.31-33.

Список условных сокращений

AUCx - площадь под кривой плазменных концентраций экстраполированная до бесконечности;

AUCt - площадь под кривой плазменных концентраций от момента приема до последней, измеренной концентрации в момент t;

во время интервала дозирования в стационарном состоянии; - средняя концентрация в плазме крови; плазменный клиренс

- максимальная концентрация в плазме крови;

- минимальная концентрация в плазме крови; постоянный (равновесный) уровень концентрации

F или f-биодоступность

- константа скорости элиминации MRT-среднее время удержания препарата в организме ti/2 - период полусуществования ДВ в плазме крови;

tnU4 - время, прошедшее с момента приема до наступления Сщах"» ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ДВ - действующее вещество дф-дифосфат КО- ксантиноксидаза ЛВ - лекарственное вещество ЛС - лекарственное средство ЛФ - лекарственная форма

ММПН-6- метилмеркаптопуриновые нуклеотиды МТГН- 6-метилтиогуаниновые нуклеотиды мФ-монофосфат

НПП- нуклеотидный путь превращения ОЛЛ-острый лимфобластный лейкоз ПНФ-пурин нуклеозид фосфорилаза Размах: (Стах-Спия^/Сшт* Р-рибозид

ТГН- 6-тиогуаниновые нуклеотиды ТПМТ- тиопурин- S- метилтрансфераза

ТПМТв- тиопурин-S- метилтрансфераза с высокой активностью

ТГЖГн- тиопурин-S- метилтрансфераза с низкой активностью

тФ- трифосфат

ФК- фармакокинетика

Флуктуация: (Стач -СшшУСа»;

Подписано в печать 9.03.2004 г. Формат 60x90,1/16. Объем 3,0 п.л. Тираж 100 экз. Заказ №55

Отпечатано в ООО "Фирма Блок" 107140, г. Москва, ул. Русаковская, д.1. т. 264-30-73 \у*у\у,Ыок01 centre.narod.ru Изготовление брошюр, авторефератов, переплет диссертаций.

* - А 7 2 ñ

Оглавление диссертации Литвин, Александр Алексеевич :: 2004 :: Москва

Список условных сокращений 5

7-14 15

Введение

Глава 1. Роль фармакокинетических и биофармацевтических исследований в создании, оценке качества и применении лекарственных препаратов (Обзор литературы)

Часть 1. "Специфические брадикардические средства" - но- 15-17 вый V класс, антиаритмических средств.

Часть 2. Фармакокинетические и биофармацевтические особенности трансдермальных терапевтических систем, как лекарст- ^ 7-31 венной формы

Часть 3. Гармонизация проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов: вопросы и их возможное решение

Часть 4. Корреляция in vitro-in vivo: может ли тест «растворение» заменить исследования биоэквивалентности лекарствен- 43-52 ных препаратов?

Часть 5. Роль фармакокинетических исследований 6-меркаптопурина в лечении острого лимфобластного лейкоза у 52-69 детей

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2 Методы исследования и материалы 70

2.1. Разработка методик количественного определения 70-75 брадизола (СМ-345) в биоматериале

2.2. Разработка методики количественного определения 75-88 гидазепама и его метаболита в биоматериале

2.3. Разработка методик количественного определения 88-96 феназепама и его метаболита в биоматериале

2.4. Разработка методики количественного определения 95. \ Q2 цитизина в биоматериале

2.5. Статистический анализ '

2.6. Методы анализа дипиридамола '

2.7. Методы количественного определения неизмененного ] 08-118 6-МП и его метаболитов в биологическом материале

Глава 3. Фармакокинетические подходы в разработке нового антиаритмического препарата V класса - брадизола, обладающего * 19-145 специфическим брадикардическим действием

3.1. Фармакокинетика СМ-345 (брадизола) после однократного внутривенного и комбинированного введения 119-121 (Исследование на крысах и кошках)

3.2. Изучение фармакокинетики СМ-345 в сопоставлении со 121-131 специфической активностью препарата

3.3. Определение биологической доступности и изучение 131-140 экскреции инъекционной лекарственной формы брадизола

3.4. Исследование влияния лекарственной формы брадизо- 141-143 ла на гемодинамику и деятельность интактного сердца кошки

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Литвин, Александр Алексеевич, автореферат

4.1.1. Фармакокинетика феназепама у кроликов после j 45. \ 47 различных способов введения

4.1.2. Фармакокинетика феназепама после его j 47. \ 49 внутривенного введения кроликам.

4.1.3. Изучение трансдермального переноса феназепама из j 49.155

ТТС

4.2.1. Фармакокинетика цитизина у кроликов после его 156-157 внутривенного введения и нанесения циперкутена

4.2.2. Особенности фармакокинетики цитизина после j 57-159 его внутривенного введения

4.2.3. Особенности фармакокинетики цитизина после его ] 59.\54 применения в виде трансдермальной терапевтической систем

Заключение по главе 165-167

Глава 5. Биофармацевтическая оценка лекарственных 7 веществ и их таблетированных лекарственных форм с обычным ' 68-202 высвобождением

5.1. Всасывание (общие сведения) 169-176

5.2. Взаимосвязь между биофармацевтическими свойствами фармакокинетическими параметрами производных ' 77- 1 1,4-бензодиазепина

5.3. Биофармацевтические подходы к оценке твердых ЛФ ' 1

5.3Л. Гидазепам с позиций биофармацевтической 184-185 классификационной системы.

5.3.2. Изучение кинетики растворения гидазепама из ] 86-189 фармацевтически эквивалентных продуктов.

5.4. Корреляция данных in vivo и in vitro. ' 90-195

5.5. Некоторые соображения относительно проведения 195-201 теста «Растворение».

Выводы по главе 201-202

Глава 6. Теоретические и практические основы проведения 203-248 исследований биоэквивалентности лекарственных средств

6.1. Введение 203-204

6.2. Дефиниции 204-207

6.3. План и проведение исследований 207-211

6.4. Стандартизация исследования 211-212

6.5. Включение больных в исследование 212-213

6.6. Изучаемые параметры 213-215

6.7. Химический анализ 215-216

6.8. Препарат сравнения и исследуемый препарат 216-217

6.9. Анализ данных 217-217

6.10. Статистический анализ 217-219

6.11. Учет отклонений от плана исследования 219-219

6.12. Исследования БЭ и дополнительные данные по 219-220 растворению in vitro

6.13. Представление результатов 220-221

6.14. Растворение in vitro 221 -223

6.15. Изучение БЭ таблеток дипиридамола 223-237

6.16. Изучение БЭ таблеток амиодарона 237-249

Выводы по главе: 249

Глава 7. Оптимизация применения 6-меркаптопурина

Фармакокинетика внутриклеточных метаболитов 250-272 6-меркаптопурина у детей с острым лимфобластным лейкозом)

7.1. Введение 250-250

7.2. Результаты исследования 251-266

7.3. Влияние тиопуринметилтрансферазы на образование 266-271 основных внутриклеточных метаболитов 6-МП

Выводы по главе 271 -272

ВЫВОДЫ 273-274

Список литературы 275-297

Список условных сокращений

Аеда - кумулятивная мочевая экскреция JIB экстраполированная до бесконечности;

Aet - кумулятивная мочевая экскреция JIB от момента приема до момента t;

AUCco - площадь под кривой плазменных концентраций экстраполированная до бесконечности;

AUCT - AUC, во время интервала дозирования в стационарном состоянии;

Cav - средняя концентрация в плазме крови; Clp-плазменный клиренс

Сщах максимальная концентрация в плазме крови; Cmin - минимальная концентрация в плазме крови; Css. постоянный (равновесный) уровень концентрации F или f-биодоступность Ке| - константа скорости элиминации MRT-среднее время удержания препарата в организме t|/2 - период полусуществования ДВ в плазме крови; tmax - время, прошедшее с момента приема до наступления Стах; ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ДВ - действующее вещество дф-дифосфат КО- ксантиноксидаза JIB — лекарственное вещество JIC - лекарственное средство ЛФ - лекарственная форма

ММПН-6- метилмеркаптопуриновые нуклеотиды

МТГН- 6-метилтиогуаниновые нуклеотиды мФ-монофосфат

НПП- нуклеотидный путь превращения OJIJl-острый лимфобластный лейкоз ПНФ-пурин нуклеозид фосфорилаза Размах: (Cmax-Cmin)/Cmjn. Р-рибозид

ТГН- 6-тиогуаниновые нуклеотиды ТПМТ- тиопурин- S- метилтрансфераза

ТПМТв- тиопурин-S- метилтрансфераза с высокой активностью

ТПМТн- тиопурин-S- метилтрансфераза с низкой активностью тФ- трифосфат

ФК- фармакокинетика

Флуктуация: (С max Cmjn)/Cav»

ФРПФ- 5-фосфорибозилпирофосфат

ЩФ- щелочная фосфатаза

Введение

Актуальность темы. Изучение фармакокинетики является необходимым этапом в комплексе работ при создании новых лекарственных средств [70; 287] и связано это, прежде всего, с получением объективных характеристик всех процессов, которые происходят в организме животного (человека) с препаратом, начиная с всасывания из места введения, и заканчивая его выведением из организма. Однако большинство доклинических исследований фармакокинетики новых лекарственных препаратов носит комплементарный характер и завершается обычно построением фармакокинетической кривой и получением на ее основе набора фармакокинетических параметров.

Такой комплексный подход, безусловно, способствует оптимизации создания лекарственной формы нового соединения с учетом сложных взаимосвязей с различными вспомогательными веществами, оказывающими существенное влияние на биотрансформацию создаваемого препарата. Изучение закономерностей такого взаимодействия создает возможность для управления метаболизмом лекарственного препарата и соответственно его фармакологическим действием [36, 37].

Таким образом, целью исследования является разработка методологии фармакокинетических и биофармацевтических исследований в создании новых лекарственных средств, совершенствовании лекарственных форм и применении известных препаратов в медицинской практике.

Задачи исследования:

3. Изучение фармакокинетики трансдермальных терапевтических систем с феназепамом и цитизином, изготовленных по различным технологиям, с разным содержанием действующего вещества. Выбор оптимальной (с фармакокинетической точки зрения) трансдермальной терапевтической системы для дальнейших клинических испытаний.

6. Установление роли фармакокинетических параметров неизмененного 6-меркаптопурина, его внутриклеточных метаболитов (метилмеркаптопуриновых и тиогуаниновых нуклеотидов) и активности тиопуринметилтрансферазы в реализации клинического действия препарата.

7. Разработка комплексного подхода к проведению фармакокинетических и биофармацевтических исследований в процессе создания нового лекарственного препарата, оптимизации лекарственной формы и применения лекарственных средств в клинической практике, а также при оценке качества/эффективности воспроизведенных препаратов.

Научная иовизна работы

• Доказана возможность прогноза и коррекции действия феназепама и цитизина при использовании новой лекарственной формы препаратов - трансдермальной терапевтической системы.

• Установлена высокая степень корреляции между фармакокинетическими параметрами неизмененного 6-меркаптопурина (Стах и AUC) в плазме и эритроцитах крови и Css метилмеркаптопуриновых нуклеотидов (положительная корреляция) и Css тиогуаниновых нуклеотидов (отрицательная корреляция) в эритроцитах крови детей с острым лимфобластным лейкозом. Между двумя последними группами внутриклеточных метаболитов выявлен высокий уровень отрицательной корреляции;

• Показано, что у детей с острым лимфобластным лейкозом с высокой активностью тиопуринметилтрансферазы в эритроцитах регистрируются значительные количества метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и низкие — тиогуаниновых нуклеотидов и, наоборот, низкая активность фермента сопровождается низкими показателями Css метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и высокими для Css тиогуаниновых нуклеотидов.

Практическая значимость работы

На основании комплексного фармакокинетического и биофармацевтического исследования оптимальная таблетированная лекарственная форма гидазепама (таблетки гидазепама по 0,02г) рекомендована к дальнейшим фармакологическим исследованиям специфической активности с целью последующего внедрения в медицинскую практику.

Фармакокинетические исследования ТТС, содержащих феназепам (фенаперкутен), явились основанием для разрешения ФГК МЗ РФ проведения их клинических испытаний. 1-я фаза клинических испытаний успешно проведена. ТТС цнперкутена разрешена к медицинскому применению (Государственный Реестр лекарственных средств, Москва, 2001, Том 1,№ 96/185/11).

Результаты корреляционного анализа, полученные в опытах in vitro и in vivo, использованы для разработки теста "Растворение" на таблетки гидазепама.

Показано, что такие ФК параметры неизмененного 6-меркаптопурина, как Стах и AUC могут рассматриваться в качестве прогностических критериев эффективности препарата при лечении острого лимфобластного лейкоза.

В соответствии с этими данными можно корректировать дозировки 6-меркаптопурина у каждого конкретного больного, у которого показатели Сщах и AUC препарата в значительной степени отклоняются от средних показателей соответствующего параметра. Причем, большее предпочтение следует отдать показателю Стах, а не AUC, так как для определения этого параметра не требуется большого количества забора проб крови у больного, тем более что выявлена высокая степень корреляции между этими фармакокинетическими параметрами. Показано также, что Css метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и активность тиопуринметилтрансферазы могут также рассматриваться в качестве детерминант эффективности терапии 6-меркаптопурином. Низкие показатели Css метилмеркаптопуриновых нуклеотидов и, активности фермента сопровождаются недостаточной эффективностью терапии 6-меркаптопурином, а высокие - проявлением цитотоксического действия препарата. Таким образом, определены основные ФК детерминанты (как для неизмененного 6МП, так и для его внутриклеточного метаболита метилмеркаптопуриновых нуклеотидов) проявления терапевтического и побочного действия 6-меркаптопурина у детей с острым лимфобластным лейкозом, которые наряду с активностью тиопуринметилтрансферазы могут играть важную роль в оптимизации применения препарата у больных детей.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на VI, VII, VIII, X Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1999, 2000, 2001, 2003 г.г.); Всероссийской научной конференции "От Materia medica к современным медицинским технологиям" (С.Петербург, 1998 г.); Всероссийской научной конференции с международным участием "Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии" (С.-Петербург, 1999 г.); Национальных днях лабораторной медицины России (Москва, 1999 г.); Международной I научной конференции "Поиск, разработка и внедрение новых лекарственных средств и организационных форм фармацевтической деятельности" (Томск, 2000 г.); II съезде Российского научного общества фармакологов (Москва, 2003); Третьей международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2003).

Публикации. По материалам! диссертации опубликовано 40 печатных работ.

Связь исследования с проблемным планом фармакологической науки.

Диссертация выполнена в рамках Государственной научно-технической программы «Создание новых лекарственных препаратов методами химического и биологического синтеза» (направление 5; 19931997 г.г.); плановой темы научно-исследовательских работ ГУ НИИ фармакологии им. В.В; Закусова РАМН "Изучение молекулярных и клеточных механизмов эндо- и экзогенной регуляции функций ЦНС, создание нейрохимических основ для разработки новых оригинальных нейротропных средств."(№ госрегистрации 01.960.00.80.94.); в рамках федеральной программы «Детская гематология/онкология» на 1996-2001 г. г.

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакокинетические и биофармацевтические подходы при создании и применении лекарственных средств"

ВЫВОДЫ

1. Разработаны высокочувствительные ВЭЖХ-методики анализа брадизола, феназепама, гидазепама, цитизина, 6-меркаптопурина и их метаболитов, позволяющие проводить их количественное определение в биоматериале (плазма крови, моча, гомогенаты органов, тканей, лизаты эритроцитов).

2. Фармакокинетические исследования доказали перспективность разработки инъекционной лекарственной формы брадизола перед энтеральной формой, из-за выраженного эффекта «Первого прохождения через печень».

3. Результаты фармакокинетических исследований, проведенных на животных, свидетельствуют о принципиальной возможности прогнозировать и, соответственно, корректировать действие феназепама и цитизина, используя новую лекарственную форму препаратов -трансдермальную терапевтическую систему.

4. Выявленные корреляционные зависимости в ряду 1,4-бензодиазепина между константой скорости диффузии, константой скорости растворения in vitro и скоростью всасывания, площадью под фармакокинетической кривой in vivo позволяют прогнозировать фармакокинетические характеристики новых соединений этой группы на основании данных, полученных in vitro.

6. Обнаружена положительная корреляция между Стах и AUC неизмененного 6-меркаптопурина как в плазме, так и эритроцитах крови детей с острым лимфобластным лейкозом, а также между этими параметрами и Css метилмеркаптопуриновых (положительная корреляция) и Css тиогуаниновых нуклеотидов (отрицательная корреляция). Между двумя последними группами внутриклеточных метаболитов выявлена высокая достоверная отрицательная корреляция.

7. Установлено, что низкие показатели Стах и AUC неизмененного 6-меркаптопурина в эритроцитах крови, а также низкая активность тиопуринметилтранферазы сопровождаются возникновением ранних или поздних рецидивов, а соответственно высокие их показатели -цитотоксическим действием.

8. Разработан комплексный подход, необходимый при создании и применении лекарственных средств, включающий фармакокинетико-фармако динамические исследования субстанции и лекарственной формы; изучение биотрансформации препарата с идентификацией активных метаболитов; изучение взаимодействия препарата со вспомогательными веществами; установление взаимосвязи между фармакокинетическими и биофармацевтическими характеристиками лекарственного средства (корреляция in vivo/in vitro); поиск фармакокинетических детерминант в проявлении эффекта препарата; оценка качества воспроизведенных препаратов. Данный подход дает возможность оптимизировать создание нового лекарственного средства, его лекарственная(ые) форма(ы) и применение в лечебной практике.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Литвин, Александр Алексеевич

1. Агафонов А.А., Пиотровский В.К. Программа расчета фармакокинетических параметров "M-ind" //Хим.-фарм.ж.- 1991.- Т.25. -№ 10 С.16-19.

2. Алейникова О.В! Результаты лечения острого лимфобластного лейкоза у детей Беларуси // Гематол. и трансф. 1997. - Т.42. - №5- С. 18-21.

3. Андронати С.А., Вотронина Т.А., Головенко Н.Я. Гидазепам.-Киев: Наукова думка, 1992.-с. 196.

4. Безверхая И.С., Западнюк В.И. Возрастные аспекты фармакокинетики (обзор литературы) // Фармакол. и токсикол. 1980. N 1-е. 115-119.

5. Белоусов Ю.Б., Моисеев B.C., Лепахин В.К. // Клиническая фармакология и фармакотерапия. Руководство для врачей. М., Медицина, 1993,398с.

6. Благодатских С.В:, Пиотровский В;К., Метелиица В.И. и др. Клиническая фармакокинетика нитродерма// Хим.-фарм.Ж., 1988, №12, с.1171-1174.

7. Богатский А.В., Андронати С.А., Головенко Н.Я. Транквилизаторы (1,4-бензодиазепины и родственные структуры).- Киев: Наукова думка, 1980.-280с.

8. Бухникашвили К.О., Даргаева Т.Д., Берашвили Д.Т. Трансдермальные лекарственные формьг (Обзор) //Хим. фарм. журнал 1992 г. № 9 - 10 с. 46-51.

9. Васильев А. Е., Фельдштейн М. М: Полимерные мембраны: Макромолекулярные терапевтические системы. Mi 1983. - с. 91.

10. Ю.Васильев А.В., Давыдов А.Б. // Журн. Всесоюз. хим. о-ва им. Д.И; Менделеева. 1990. - №4: - с.24-28.

11. И.Васильев А.Е., Платэ Н А., Фельдштейн М.М. и др., Патент 1459215 РФ., Бюлл. Открыт., 20:11.95.

12. Владимирская Е.Б., Кисляк Н.С., Румянцев А.Г. Причины и пути преодоления лекарственной резистентности при лейкозах и лимфомах у детей // Гематол. и трансф. 1998. - Т.43. - №6 - С. 3 -7.

13. Волкова М.А. Полвека в терапии хронического лимфолейкоза // Гема-тол.и трансф. 1998. - Т.43. - №5 - С. 6-121

14. Головенко Н.Я., Зиньковский В.Г. Феназепам.- Киев: Наукова думка, 1982.-е. 32-86.

15. Городецкий В.М. Осложнение противоопухолевой терапии // Гематол. и трансф. 1998. - Т.43 - С. 11-15.

16. Государственная Фармакопея 11-е изд., доп.- Москва, Медицина 1987, -с.336.

17. Гуревич К.Г., Мешковский А.П. //Фарматека, 2001, № 6, С. 12-16.

18. Двойрин В.В., Аксель Е.М., Дурнов JI.A., Статистика злокачестенных новоборазований детей в России; // Вопросы онкологии 1997 - Т. 43 -С 371-384.

19. Дворянинов А.А., Нечаева Е.Б., Жердев В.П., Литвин А.А. и др. Влияние измельчения субстанции диазепама на высвобождение его из табле-ток.//Тез. докл. VII конгресса «Человек и лекарство», Москва, 2000, 608609;

20. Дворянинов А.А., Нечаева Е.Б., Жердев В;П., Литвин А.А. и др. Изучение биодоступности таблеток диазепама. //Тез. докл. VII конгресса «Человек и лекарство», Москва; 2000, 609-609.

21. Дорохов В.В;, Холодов Л.Е. Анализ связи между фармакокипетическими процессами и фармакологическим эффектом у человека. Фармакология и токсикология, 1985, № 5, с. 119-125.

22. Дурнов Л.А., Курмашов В.И.,Бондаренко Л.В; Неврологические нарушения в процессе химиотерапии лимфобластных опухолей у детей // Весник ОНЦ РАМН. 1994 - С. 39-41.

23. Дуцкова К., Халабала М., Гадзимова Д. Транс дерм ал ьная доставка лекарственных препаратов// Словакофарма ревю IV, 1994,2-3 с. 83.

24. Жердев В:П:, Экономов А. Л., Родионов А.П. и др. Метаболизм нового психотропного средства феназепама //Хим.-фарм. ж. 1979, №7, С. 11-16.

25. Жердев В.П., Комиссаров И.В., Грошевой Т.А. и др. Экспериментальное изучение фармакокинетики и биодоступности лекарственных форм пирикапирона //Хим.-фарм. ж. 1994, № 4 с.18-21.

26. Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Литвин А.А. и др. Кинетика проникновения феназепама из накожной терапевтической системы. IV Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", Москва 812 апреля 1997г. с.260.

27. Жердев В.П., Александровский Ю;А., Незнамов Г.Г. и др. Корреляции между фармакокинегическими показателями транквилизатора феназепама у больных при его однократном и длительном приеме// Фарма-кол. и токсикол. 1987, №1, С. 81-84.

28. Жердев А.В. Значение фармакокинетических исследований 6-меркаптонурина в лечении^ острого лимфобластного лейкоза у детей. Автореф. дис. канд. мед. наук. М;, 2000, С.21.

29. Жердев В.П., Колыванов Г.Б., Литвин А.А. Корреляция in vitro-in vivo: может ли тест «растворение» заменить исследования биоэквивалентности лекарственных препаратов? //Фарматека, 2003, № 3(66), 109 — 111.

30. Жердев В.П., Мартынова Л.А., Кача С. и др. Фармакокинетика феназепама и его метаболита З-оксифеназепама у животных разных видов и человека //Фармакол. и токсикол.,1985,№1,С.31-35.

31. Карачунский А И., Беликова Л.Ю., Штакельберг А. и; др. Лечение рецидивов острого лимфобластного лейкоза у детей : основные итоги в группе BFM и анализ собственного 7-летнего опыта // Гематол.и трансф 1998.- Г. 43 . -№6-С. 8-13.

32. Колыванов Г.Б., Жердев В Л.', Родионов А.П., и др. Биотрансформация и фармакокинетика гидазепама у крыс// Хим.- фарм. ж., 1993, №1, с.16-19.

33. Колыванов Г.Б., Жердев В.П., Чирков A.M. и др. Биотрансформация и фармакокинетика гидазепама у животных разных видов и человека //Экспер. и клинич. фармакол., 1993, №3, С.48-50.

34. Литвин А.А. Технологические и биофармацевтические оценки табле-тированных сульфаниламидных препаратов пролонгированного действия: Автореф: дис. канд. Фарм: наук. М., 1988, С.24;

35. Лоуренс Д Р., Бенитг П.Н. пер. с англ, под ред. В.И.Метелицы. Клиническая фармакология-М: Медицина, 1991.-Т.1-656с.

36. Лурье Ю.Ю. Справочник по аналитической химии//Химия, М., 1989. -448с.

37. Малхазов Л.Б., Пиотровский В.К. // Фармакол. и токсикол. 1986. -Т.49,№5.-с.118-127.

38. Машковский М.Д. Лекарственные средства. М.:Медицина, 1993. - Т.1, с. 157.

39. Мешковский А.П. К вопросу о тесте «Растворение». //Фарматека, 1996, №1,40-41.

40. Метелица В.И., Марцевич С.Ю., Пиотровский В.К. и др. // Тер. Арх. 1991 -Т.58,№6.-с. 58-62.

41. Методические рекомендации; по проведению качественных клинических исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов, Москва, 2001,24 с.

42. Петрухина О.О., Самгин М.А., Фельдштейн М.М. и др. // Хим. -фарм. журнал 1985. - Т.19, №12 - с. 171-174.

43. Пиотровский В.К., Благодатских С.В;, Шор В:А. и др.\ Фармакокинетика глицерина, тринитрата и изосорбида динитрата при аппликации накожных терапевтических систем{нитроперкутен и сорбопер-кутен//Токсикол. и фармакол., 1991, №10, с.7-10.

44. Пиотровский В.К., Белолипецкая В.Е., Васильев А.Е. и др. Фармакокинетика пропранолола при применении трансдермальной терапевтической системы проперкутена (экспериментальные данные) // Экс-пер. и клинич. Фармакол. 1993 Т. 56.-№6.-с. 53-56.

45. Пиотровский В.К., Благодатских С.В., Метелица В.И. и др. Клиническая фармакокинетика нитродерма // Хим.- фарм. ж., 1988: Т.22. №10. С. 1171-1175.

46. Пиотровский В.К., Эльман А.Р., Румянцев Д.О. и др. Применение ионообменных колонок при определении лекарственных препаратов и их метаболитов в биологических жидкостях методом ВЭЖХ. В кн.: Хроматография в биологии и медицине, М., 1983 , с.288.

47. Платонов А.Е. Статисппгеский анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, логика, компьютерные методы. Москва, Издателство РАМН, 2000, 52 с.

48. Профилактическая фармакология в кардиологии /Под ред. В.И: Метелицы, Р.Г. Оганова. -М., 1988:

49. Румянцев А.Г., Самочатова Е.В., Жесткова Н:М: и др. Результаты лечения острых лейкозов у детей с использованием программ интенсивной терапии // в кн.: Детская гематология, онкология, иммунология М., 1994 -С. 156-164.

50. Савин Ю.Ы., Королёв Г.К., Сингин А.С. Фармакокинетика фопурина у крыс с саркомой М-1// Хим: фарм. журнал 1981, № 8, с.326.

51. Сариев А.К., Жердев В.П., Родионов А.П. и др. Фармакокинетика трансдермальной системы цитизина- в эксперименте. Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Москва 8-12 апреля1997г. с. 290

52. Сергиенко В.И., Бондарева И.Б. Математическая статистика в медицине и клинических исследованиях. Москва, ГЕОТАР-МЕД, 2001,256 с.

53. Сергиенко В.И., Джеллифф Р., Бондарева И.Б. Прикладная фармакоки-нетка: Основные положения и клиническое применение. Москва, Издателство РАМН, 2003, 208 с.

54. Середенин С.Б. Клеточные механизмы реализации фармакологического эффекта.-М. Медицина, 1990 >315

55. Середенин С.Б., Чичканов Г.Г., Савельев В.Д., и др. Патент РФ 1995.

56. Современные методы анализа лекарственных веществ и их метаболитов в биологических жидкостях. М.ЗНИИМИ, 1980, 63 с.

57. Станкевич Л И;, Духанин А.С., КушлинскийН.Е. и др. Взаимодействие азатиоприна и 6- меркаптопурина с лимфобластами костного мозга при остром лейкозе // Весник ОНЦ РАМН . 1995 - № 3- С. 28-30.

58. Стыскин Е. Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е. В. Практическая высокоэффективная жидкостная хроматография. М., 1986, - 236 с.

59. Торчилин В Н. Направленный транспорт лекарств в организме// Синтетические полимеры медицинского назначения: Сб. лекций и материалов 1 Всесоюзной школы-семинара по медицинским полимерам. -Ташкент, ФАН, 1984. с. 276-286.

60. Фельдштейн М.М., Мапхазов Л.Б., Каденаци И.Б., и др. Кинетика подачи три нитроглицерина и изосорбида динитрата при аппликации НТС, нитроперкутен и сорбоперкутен // Хим. фарм. журнал, 1993,27,№ 12', с. 10-14.

61. Фирсов А.А., Пиотровский В.К. Фармакокинетические методы в биофармации: оценка биодоступности и пресистемная элининация лекарствен ых средств. Итоги науки и техники. Фармакология, Москва, 1984, Т. 14,114-224.

62. Холодов А.Е., Глезер MX.,. Махарадзе Р.В. Фармакокинетика, фармакодинамика и; биофармация антиаритмических препаратов. Изд. " Ганатлеба", 1988, с. 108 -120.

63. Холодов Л.Е., Яковлев В:П. // Клиническая фармакокинетика, Руководство. М:, Медицина 1985, с. 463!

64. Чичканов Г.Г., Цорин И.Б., КирсановаХ.Ю. // Экспер. и клинич. фарма-кол. 1998.-Т. 61.-№5.-с. 53-56.

65. Экономов А.Л., Жердев В.П. Метод количественного газо-хроматографического определения феназепама и его метаболита 3- ок-сифеназепама в плазме крови человека/Хим.-фарм.Ж., 1980, №8, с.97-100.

66. Экономов А.Л. Фармакокинетика феназепама. Дисс. канд. биол. наук.-М., 1981, 195с.

67. Яковлев С.В. Антимикробная химиотерапия, Москва, 1997, с. 32-37.

68. Abu-Eida E.I., Eros I., Aigner Z. Controlled drug release from coherent systems. Part 1/ Pharmazie, -1999,Vol.54, №10, p.45-49:

69. Adamson P.C., Balis F.M:, Steinberg S.M: et al. Pharmacokinetics of 6-mercaptopurine in children with lymphoblastic leukemia //N. Eng.J.Med. -1990 V. 323 -P. 1565-1566.

70. Allan P.W., Bennet L.L. 6-Methylthioguanylic acid, a metabolite of 6-thioguanine. // Biochem. Pharmacol. 1971. - V.20 - P. 847-852.

71. Arndt C.A.S, Balis F.M., McCully C.L. et al: Bioavailability of low-dose vs high-dose 6-mercaptopurine // Glin Pharmacol.Ther. 1988 .- V.43 - P. 588591.

72. Asano J., Suisha F., Takada M., Kawasaki N. // Biol. Pharm: Bull: 1997 Mar.; 20(3): 288-91.

73. Asche H. Kanzept und Auflan transdermaler therapeutisher system // Schweiz. Rdsch. Med. 1985. - Bd: 74, №11. - S. 257-260.

74. Balis F.M:, Holcenberg J.S., Zimm S. et al: The effect of methotrexate on the bioavailability of oral 6-mercaptopurine // Clin. Pharmacol: Ther. -1987. -V. 41-P. 384-387.

75. Balis F.M., Jeffries S.L., Lange B. et al. Chronopharmacokitetics of oral methotrexate and 6-mercaptopurine: is there diurnal variation in the disposition of antileukemic therapy? //Am. J. Pediatr. Hematol.Oncol. -1989. V. 11 - P. 324-356.

76. Barth.H.G., Barber W.E., LochmuUer.C.H. et al. // Analyt. Chem. 1997. -Vol. 22, №7-12.-P. 431.

77. Bergstrom RF, Lemberger L, Gerimiele В J, Wolen RL, Kisicki JC. Relative bioequivalence of a fluoxetine oral solution versus the marketed capsule. Pharm. Res 1990; 7 Suppl : S251.

78. Berner B, John V. Pharmacokinetic characterisation of transdermal delivery systems. Clin Pharmacokinet\99A\ 26: 121-34.

79. Bertilsson L, Torbjorn T. Clinical pharmacokinetics and pharmacological: effects of carbamazepine and carbamazepine-10,11-epoxide. Clin Pharma-cokinet\986; 11: 177-98.

80. Bertino J.R. Karnofsky memorial lecture. Ode to methotrexate.// J. Clin. Oncol.-1993.-V.11- P. 5-14.

81. Bochner F, Lloyd JV. Aspirine for myocardial infarction. Clinical pharmacokinetic considerations. Clin Pharmacokinet 1995; 28: 433-8:

82. Boddy AW, Snikeris FC, Kringle RO, Wei GCG, Oppermann JA, Midha KK. An approach for widening the bioequivalence acceptance limits in the case of high variability drugs. Pharm Res 1995; 12: 1865-8.

83. Bokkerink J.P.M., Bakker M.A., Hulscher T.W. et al. Purine de novo synthesis as the basis of synergism of methotrexate and 6-mercaptopurine in human malignant lymphoblasts of dfferent lineages. // Biochem. Pharmacol. -1988. V.37-P. 2321-2337.

84. Bokkerink J.P.M:, Bakker M.A., Hulscher T.W. et aL Sequence-, time- and dose-dependent synergism; of methotrexate and 6-mercaptopurine in malignant human T-lymphoblasts. // Biochem. Pharmacol. 1986. - V. 35 - P. 3549-3553.

85. Bokkerink J.P.M., DeAbren R.A., Stet E.H. et al: Cell-kinetics and biochemical pharmacology of methotrexate and 6-mercaptopurine in human; malignant T-lymphoblasts. // Clin Pediatr. 1992: - V. 204 - P. 293-298.

86. Bompard A., Reiffen M., Heider J. et al. //J.Med.Chem.-1991. -v.34.-p.942-947.

87. Borchardt R.T. S-Adenosine-L-methionine-dependent macromolecule me-thyltransferases: potential targets for the design of chemotherapeutic agents. // J. Med. Chem. 1980. - V. 23 - P: 347-357.

88. Bronaugh R.L., Stevart Baymond F. Methoda for in vitro percutaneous absorption studies. VI Preparation of the barrier layer// Parai. Sci. 1989. -Vol: 75, №5.-p. 487-491.

89. Bostrom В., Erdmann G.R. Cellular pharmacology of 6-mercaptopurine in; acute lymphoblastic leukemia. // Am: J. Pediatr. Hematol. Oncol. 1993: V.15 -P. 80-85.

90. Brand R.M., Cry R.H., Proc.Int.Symp.Controlled Release Biactive Mater., -1994, Vol.21, p.389-390.109: Braudau R., Lippoid В Н. Dermal and Transdermal absorption ssen-schaftliche Verlagsgesallschaft. Stuttgart, 1990. - Vol. 4. - 254p.

91. British Pharmacopoeia, 1998

92. Brocks D.R., Meikle AW., Boike S.C., Mazer, N. A. // J. Clin. Pharmacol. 1996 Aug.; 36 (8): 732-9.

93. Cabana B.E. Regulatory consideration in transdermal controlled medication // Drag Dev. Ind. Pharm. 1992. - Vol.9,№ 4. - P. 707-724.

94. Camitta В., Leventhal В., Lauer S. et al. Intermediate-dose intravenous methotrexate and mercaptopurine therapy for non-T, non-B acute lymphocytic leukemia of childhood: a pediatric Oncology Group study. // J. Clin. Oncol.-1989. V.7-P. 1539-1544.

95. Camitta В., Mahoney D., Leventhal B. et all Intensive intravenous methotrexate and mtrcaptopurine treatment of higher-risk non-T, non-B acute lymphocytic leukemia: A Pediatric Oncology Group study. // J. Clin. Oncol. -1994. V.12 - P.1383-1389.

96. Capdeville R., Mousson В., Bax G. et al; Interactions between 6-mercaptopurine therapy and thiopurine methyl-transferase (TPMT) activity. // Eur. J. Clin. Pharmacol. - 1994. - V.46 - P. 385-386

97. Cascella P. J., Powers J.E. Dermatological route of drug delivery//US

98. Cerutti R, Rivolta G, Di Giulio C, Cavalieri L, Grossi E, Vago T, Boldi G, Righini V, Marzo A. Bioequivalence of levothyroxine tablets administered in target population in steady state. Pharmacol Res 1999; 39: 193-201.

99. Chen H., Torchilin V., Langer R. Polymerized liposomes as potential oral vaccine carriers: stability and' bioavailability./ J.Contr. Release, -1996, Vol.42, №12, p.263-272.

100. Chen ML, Pelsor FR. Half-life revisited: implication in clinical trials and bioavailabilityrbioequivalencc evaluation. J Pharm Sci 1991; 80: 406-8.

101. Chessells J.M., Bailey C., Richards S.M: Intensification of treatment and survival in all children with lymphoblastic leukaemia: results of UK medical Research Conncil Working Party of Childhood Leukaemia. // Lancet 1995. -V.345 - P.143-148.

102. Cliien Yie W., Chien Те Yen, Huang Yih-Cliain. Transdermal estrogen progestin dosage unit, system and process: Пат. 4, 906, 169 США /, Put-gers, The State University of New Jersey. -№ 131, 462:

103. Coffey J.J., White C.A., Lesk A.B et al. Effect of allopurinol on the pharmacokinetics of 6-inercaptopurune (NSC 755) in cancer patients. // Cancer Res. 1972. - V. 32 - P. 1283-1289.

104. CPMP working party on efficacy of medicinal products. EU Note for guidance: investigation of bioavailability and bioequivalence. IIIr54r89-EN-FINAL, December 1991. In: The Regulatory Affairs Journal; Volume III; Addendum 2, 1992.

105. CPMP working party on efficacy of medicinal products. EU Note for guidance: the investigation of availability and bioequivalence. Draft released for bioconsultation on December 1998;

106. Crommelin D.J.A., Midha K.K. (Eds.) Topics in Pharmaceuticals siences 1991, Medpharm Scientific Publishers, Shtuttgart, FRG, -1992, 333p.

107. Daemmgen JiW., Kadatz R:, Diederen W. /Cardiovascular actions of 5,6-dimethoxy-2-3[[(a(3,4-dimethoxy)-phenyl-methylamino-propyl-phtalimidine (AQ-A 39), a specific bradycardic agent. //Arzneim.-Forsch . 1981. - v.31. -p.666-670.

108. Dalton J.T., Straughn A.B., Dickason D.A., Grandolfi G.P. Predictive ability of level A in vitro-in vivo correlation for ringcap controlled-release acetaminophen tablets. Pharm; Res. 2001, Vol; 18 (12):1729-1734:

109. Davidson N, Rapoport B. Bioavailability of carbamazepine from four different products and the occurence of side effects./ Clin.Ther., -1999, Vol;21, №3, p.492-5021

110. Davies H.A., Lennard L., Lilleyman J.S. Variable mercaptopurine metabolism in children with-leukaemia: a problem of non-compliance. // BlM.J. -1993. V. 306-P. 1239-1240.

111. De Abreu R.A., Lambooy L.H.J., Stet E.H. et al. Thiopurine induced disturbance of DNA methylation in human malignant cells. //Adv. Ens. Regul. -1995. V. 35- P. 251-263.

112. Dhanaraju M.D., Baskaran T. Enhancement of bioavailability of griseo-fulvin by its complexation with i y9-cyclodextrine// Drug.Dev. & Ind.Pharm., -1998, Vol.24, №6, p.583-587.

113. Diletti E, Hauschke D, Steinijans VW. Sample size determination: extended tables for the multiplicative model and bioequivalence ranges of 0.9 to 1.11 and0.7 to 1.43. Im J Clin Pharmacol Ther Toxicol 1992; 30: S59-62.

114. Dinslage S., Diestelhorst M: // Ger. J. Ophthalmol. 1996 Sep.; 5 (5): 275280.

115. Doherty C., Vork P. The in vitro ph-dissolution dependence and in vivo bioavailability of frusemide PVP solid dispersions./ J.Pharm;Pharmacol:, -1989, Vol.41, №2, p.73-78.

116. El-Arini S.K., Leuenbreger H. Modeling of drug release from polymer matrices: effect of drug loading. / IntJ.Pharm;, -1995, Vol.121, №25, p.141-148.

117. Electrolytic transdermal delivery of polypeptid. Пат. 4878892 США / Sibalis D., Rosen S., Drug Delivery systems Inc. N 12889.

118. Elion G.B: Biochemistry and pharmacology of purine analogs. // Fed. Proc. -1967. V. 26 - P. 898-904.

119. Fernandez-Arevalo Mi, Holdago M;A., Caraballo I., Ortega-Alvaro A. Preclinical study of a controlled release oral тофЫпе system in rats./ Int. J. Pharm., -1996 (Aug.9), Vol.139,p.237-241.

120. Franz T.J. Kinetics of cutaneous drug penetration// Int. J.Dermatol., 1983, Vol. 23, N3, P. 499-505.

121. Frei E. Acute Leukemia Group B. Studies of sequential and combination antimetabolite therapy in acute leukemia: 6-mercaptopurine and methotrexate. //Blood-1961.-V. 18 P: 431-454.

122. Fujimura A., Sasaki Mi, Harada K., Kumagai Y. // J. Clin. Pharmacol. 1996 Oct.; 36 (10): 892-6.

123. Gale R.P., Butturini A. Maintenance chemotherapy and cure of childhood acute lymphoblastic leukaemia. // Lancet 1991. - V.338 - P. 1315-1318.

124. Garteiz DA, Hook RH, Walker В J, Okerholm RA. Pharmacokinetics and biotransformation studies of terfenadine in man. ArzneimForsch 1982; 32: 1185-90.

125. Gonzalez M:A. Trends in transdermal drug delivery. In: Topics in Pharmaceutical Sciences 1991, Washington, Medpharm Publishers, Stuttgart, 1992, Ch.8, p.l 19-135.

126. Grahnen A. The biopharrnaceutical classification system. Impact for drug development. EurJPharm Sci., 1998; 6 Suppl: 1 : S18.

127. Hayder S., Lafolie P., Bjork O. et al. 6-mercaptopurine plasma levels in children plasma levels in children with acute lymphoblastic leukemia: relation to relapse risk and myelotoxicity. // Ther. Drug. Monit: 1989. -V. 11- P. 617-622.

128. Herber S., Lennard L., Lilleymann J.S. et al. 6-mercaptopurine: apparent lack of relation between presribed dose and biological effect in children with leukemia. // Br. J. Cancer 1982. - V. 46 - P. 138-141.

129. Hignite C, Uetrecht J, Tschanz C, Azarnoff D. Kinetics of R and S warfarin enantiomers. Clin Pharmacol Ther 1980; 28: 99-105.

130. Hijiya N., Kato Y., Matsushita Т., Yokoyama Т. Pharmacokinetics of 6-mercaptopurine in children with acute lymphoblastic leukemia: inter individual5and intraindividual variations. // Rinsho Ketsueki 1989. - V. 30 -P. 1931.

131. Huang S.M., Mariott T.B., Weintraub H.S. et al. The effect of food or milk on bioavailability of etintidine in healthy subjects./ Int.J.Clin.Pharmacol., -1988, Vol.26, №3, p.l 13-117.

132. Iacobelli M, Clerici G, Marzo A, Dal Bo L. A comparative bioavailability study of two formulations of calcium heparin. IntMed 1998; 6: 39-44.

133. Ikinci G., Capan Y., Senel S., Dalkara T. Formulation and in vitro/in vivo investigation of carbamazepine controlled release matrix tablets./ Pharmazie, -1999, Vol.54, №2, p.132-136.

134. Inoe Т., Chen G., Hoffman A.S. A hydrophobically modified bioadhesive polymeric carrier for controlled drug delivery to mucosal surfaces./ J.Bioact.Compat.Polym., -1998; Vol 13(1), p.50-64.

135. Ishibashi Т., Matsubara Т., Nakazawa M. et al. /On the mode cardioprotection produced by a new bradycardic agent FR 76830, during ishaemia and after reperfusion in the isolated perfused rat heart a 31P-NMR study. //Cardiov. Res. -1990. v.24,N12.

136. Kato Y., Matsuchita Т., Chiba K. et al: Dose-dependent kinetics of orally administered 6-mercaptopurine in children with leukemia. // J. Pediatr. -1991,-V. 119 P. 311-316.

137. Kato Y., Matsuchita Т., Uchidar H. et al; Rectal bioavailability of 6-mercaptopurine in children with acute lymphoblastic leukemia: partial avoidanct of "first-pass" metabolism. // Eur. J.Clin. Pharmacol. 1992. -V.42 -P. 619-622.

138. Kato Y., Matsuchita Т., Yokoyama Т., et al. Determination of 6-mercaptopurine in acute lymphoblastic leukemia patients plasma by high-performance liquid chromatography. // Ther. Drug Monit. -1991. V. 13 - P. 220-225:

139. Kelm G.R., Sakr A.A. Absorption, bioavailability and pharmacokinetics of tebufelone in the rat. / Drug.Dev. & Ind.Pharm., -1993, Vol.19, №7, p.809-826.

140. Kenzenkamp-Jansen C.W., Van Baal J.M. et al. Detection and identification of 6-methylmercapto-8-hydroxypurine: anumportant metaboliteof 6-mercaptopurine in plasma during intravenous administration. // Clin. Chem.- 1986. Vol.36. - P.65-68.

141. Kerstens P.J.S.M., Stolk J.N., Hilbrands L.B. et al. 5-nucleotidase and azathioprine-related bone-marrow toxicity. // Lancet 1993. - V. 342 - P. 1245-1246.

142. Kobinger W. /Specific bradycardic agents. //Handbuch der experimental Pharmakologie. Berlin, 1989 - Bd.89. - s.423-452:

143. Koren G., Ferrazini G., Sulh Ы. et al. Systemic exposure to mercaptopurine as a prognostic: factor in acute lymphocytic leukemia in: children. // N. Eng. J: Med. 1990. -V. 323 - P: 17-21".

144. Koren G., Langevin A.M., Olivieri N. et al. Diurnab variation in the pharmacokinetics and myelotoxicity of 6-mercaptopurine in children with acute lymphocytic leukemia. // Am. J. Dis. Child. 1990. - V. 144- P. 1135 -1137.

145. Koren G., Solh H., Klein: J: et al. Disposition of oral methotrexate in children with acute lymphoblastic leukemia and its relation to 6-mercaptopurine pharmacokinetics. // Mtd. Pediatr. Oncol. 1989 - V.17 - P. 450-454.

146. Kortejarvi H., Mikkola J:, Backman M., Antila S., Marvola M. Development of level А, В and С in vitro-in vivo correlations for modified-release levosimendan capsules. Int. J. Pharm. 2002, Vol. 241(1), 87-95.

147. Kosaka Tadashi. Medical Plasters // Adhes. Soc. Jap. -1992. Vol. 20, №9:-P. 434-436.

148. Krowczynski L. Zarys biofarmacji. Warszawa: Panstwowy. Zaklad Wydawnictv Lekarskich, -1979, -237s.

149. Krynetski E.Y., Krynetskaia N.F., Yanishevski Y et al. Methylationi of mercaptopyrine, thioguanine, and their nucleotide metabolites by heterologous by expressed human thiopurine S-methyltransferase. // Mol: Pharmacol. 1995. - V. 47 - P. 1141-1147.

150. Kuboto M., Nakano M., Juni K. / Chem.Pharm:Bull:,-1997, Vol.36(l), p.332-337.

151. Lafolie P., Bjork O., Hay der S. et al. Variability of 6-mercaptopurine pharmacokinetics during oral maintenance therapy of children with , acute leukemia. // Med. Oncol. Tumor. Pharmacother. 1989. - V. 6 - P. 259-265.

152. Lafolie P., Hayder S., Bjork O. et al. Intraindividual variation in 6-mercaptopurine pharmacokinetics during oral maintenance therapy of children with acute lymphoblastic leukaemia; // Eur. J. Clin. Pharmacol. -1991.-V. 40 -P. 599-601.

153. Lake O.A., Oiling M., Barends D.M. In vitro/in vivo correlation on dissolution data of carbamazepine immediate-release tablets withparmacokinetic data obtained in healthy volunteers./ Eur. J. Pharm. and Biopharm., 1999, Vol. 48, № 1, p. 13-19.

154. Lang N.Q., Petersen N., Kim S:W. A new transdermal base.// Acta Pharm. Technol., 1985, Vol. 31, № 4; P. 210-214.

155. Langevin А.М:, Koren G., Soldin S.J. Greenberg M. Pharmacokinetic case for giving 6-mercaptopurine maintenance doses at night. // Lancet 1987. -V. 2 - P. 505-506.

156. Latini R, Tognoni G, Kates RE. Clinical pharmacokinetics of amiodarone. Clin Pharmacokinet 1984; 9: 136-56.

157. Lee Ch., Ulman K. Adhesive compositions, controled release compositions and transdermal drug delivery device. Eur. Pat. Ep. 0312265 (1992).

158. Lee E.I.D., Williams K.M; Chirality. Clinical pharmacokinetic and pharmacodinamic consideration;/ Clin;Pharmacokinetic, -1990, Vol.18, №5, p.339-345.

159. Leier CV, Baker ND, Weber PA. Cardiovascular effects of ophthalmic timolol. Ann Int Med 1986; 104: 197-9.

160. Lemberger L, Bergstrom RF, Wolen RL, Farid NA, Enas CG, Aronoff GR. Fluoxetine: clinical pharmacology and physiologic disposition. J Clin Psychiatry 1985; 46 3, Sec.2 : 14-19.

161. Lennard L., Gibson B.E., Nicole T. et al. Congenital thiopurine methyltransferase deficiency and. 6-mercaptopurine toxicity during treatment for acute lymphoblastic leukaemia. // Arch. Dis. Child 1993. - V. 69 - P. 577-579.

162. Lennard L., Keen D., Lilleyman J.S. Oral 6-mercaptopurine in childhood leukemia: parent drug pharmacokinetics and active metabolite conctntrations. // Clin. Pharmacol. Ther. 1986. - V. 40 - P. 287-292.

163. Lennard L., Lilleyman J.S. Individualizing therapy with 6-mercaptopurine and 6-thioguanine related to the thiopurine methyltransferase genetic polymorphism. // Therap; Drug Monitor. 1996. - V. 18 - P: 328-334.

164. Lennard L., Lilleyman J.S., Van Loon J: et al. Genetic variation in response to 6-mercaptopurine for childhood acute lymphoblastic leukemia. // Lancet 1990. - V. 336 - P: 225-229.

165. Lennard L., Van; Loon J.A., Weinsliilboum R.M; Pharmacogenetics of acute azathioprine toxicity relationship to thiopurine methyl transferase genetic polymorphism; // Clin.- Pharmacol: Ther. 1989. - V. 46 - P. 149154.

166. Lennernas H. Humaniintestinal permeability. J Pharm Sci 1998; 87: 40310.

167. Lerk C.F. Improvement of dissolution rates for drugs in oral dosage forni:/ Int.J.Pharm., -1989, Vob3i №1, p.10.

168. Lesko LJ, Marty JP, Pershing LK, Schaefer H, Sequeira JA, Shrivestava SP, Wilkin J, Williams RL. Bioequivalence of topical dermatologicali dosage forms. Methods of evaluation; of bioequivalence. Pharm Res 1998; 15: 16771.

169. Leventlial B.G. Neoplasms and neoplasm-like structures, in Belirman R.E., Kliegman R.M., Nelson W.E. et al: Nelson textbook of pediatries (ed. 14-th ) Philadelphia W.B. Saunders Company 1992. - P. 1291-1322.

170. Lilleyman J.S., Lennard L., Rees C.A., et al. Childhood1 lymphoblastic leukaemia: sex difference in 6-mercaptoprine utilization // Br. J. Cancer -1984;-V. 49-P: 703-707.

171. Loftsson Т., Masson M., Sigurdsson H.H. Cyclodextrine as co-enhancers in dermal and transdermal' drug delivery./ Pharmazie, -1998, Vol:53, №2, p.137-139.

172. Loo T.L., Luce J.K., Sullivan M.P. et al: Clinical pharmacologic observations on 6-mercaptopurine and 6-methylthiopurine ribonucleoside. // Clin Pharmacol. Ther. 1968. - v. 9 - P. 180-194.

173. Marzo A, Ceppi Monti N. Acceptable and5 unacceptable procedures in bioavailability and bioequivalence trials. Pharmacological Research, Vol. 40, No. 4, 199936%

174. Marzo A, Rescigno A. Pharmacokinetics of endogenous substances: some problems and some solutions. Eur J Drug Metab Pharmacokinet \99Ъ\ 18:7788:

175. Marzo A. Clinical pharmacokinetic registration file for NDA and ANDA procedures. Pharmacol Res\991', 36: 425-50.239: Marzo A. Cross-over design tin; tamoxifen» bioequivalence: a; borderline situation. J Pharm Pharmacol\998-, 50: 1433-4.

176. Marzo A. Incoming guidelines on chirality: a challenge for pliannacokinetics in drug development. Arzneim Forsch 1994; 44: 791-3.

177. Marzo A. Open- questions in bioequivalence. Pharmacol Res 1995; 32: 237-40;

178. Marzo F. Open question on bioequivalence: some problems and some solutions. Pharmacol; Res., 1999,40: 357-368!

179. Marzo A. Pharmacokinetic analysis, bioavailability and; operating guidelines. J Pharm Pharmacol 1997; 49: 1259-60:

180. Marzo A. Toxicokinetics of endogenous substances: a neglected issue. Arzneim Forsch 1996; 46: 1-10.

181. McLeod H.L., Relling M.V., Lin Q. et al)' Polymorphic thiopurine methyltransferase in erythrocytes is indicative of activity in leukemic blasts from children with acute lymphoblastic leukemia. // Blood 1995. - V. 85 -P. 1897-1902.

182. Medina R., Hurtado M; Bioequivalence study of paracetamol tablets: in vivo/in vitro correlation./ Drug Dev. Ind. Pharm., 2000, Vol.26, № 8, p. 821828:

183. Mehvar R, Jamali F. Bioequivalence of chiral drugs. Stereospecific versus non-stereospecific methods. Clin Pharmacokinet\991\ 33: 122-41.

184. Meshali M:, Sabbagh I:, Ramadan J: Bioavailability study of the solid dispersions of the trenary systems: trimethoprim-sulfamethoxyzole with polyvnvlpyrrolidone or polyethylenglycol./ Acta. Pharmacol., -1983, Vol.92, №3; p. 173-180.

185. Meyer M.C. Lack of in vivo/in vitro correlation for 50mg and 250mg primidone tablets./ Pharm. Res., -1998; Vol.15, №7, p. 1085-1087.

186. Meyer M.C. Relative bioavailability and in vivo/in vitro correlation for four marketed carbamazepine tablets./ Pharm.Res., -1998, Vol.15, №11, p.1787-1791.

187. Miuazaki S., Mizuoka M., Oda M., Nakada M:: External control of drug release and penetration enhancement of the transdermal absorption of indomethacin by ultrasound irradiation. J. Pharm. Pharmacol. 43, 115116,1991.

188. Mooradian AD: Digitalis: an update of clinical pharmacokinetics, therapeutic monitoring techniques and treatment recommendations. Clin PharmacokinetX 988; 15: 165-79.

189. Moore J.W., Planner H.H. Mathematical comparison of Dissolution Profiles.// Pharm: Technol., 1996, Vol:20, № 6, p. 64-74.

190. Muller P, Botta L, Ezzet F. Bioavailability of estradiol from a new matrix and a conventional reservoirtype transdermal5 therapeutic system. Eur .J Clin Pharmacol

191. Muller M; Mascher H, Kikuta C, Schafer S, Brunner M, Dorner G, Eichler M: Diclofenac concentrations in defined tissue layers after topical administration. Clin Pharmacol Ther 1997; 62: 293-9.

192. Ogata H. in: Topics in pharmaceuticals Sciences 1991, Ed. Crommelin D.J.A., Midha K.K., Medpharm Scientific Publishers, Stuttgart, 1992, -p. 259-262:

193. Osborne R, Joel S, Trew D, Slevin M. Morphine and metabolite behaviour after different routes of morphine; administration: demonstration of the importance

194. Palareti G, Legnani G. Warfarin withdrawal. Pharmacokinetic and; pharmacodynamic considerations. Clin Pharmacokinet 1996; 30: 300-13.

195. Penetration; enhancers for transdermal delivery of systemic agent: Пат. 4,879,275 США / Minaskanian Gevork, Peck James V; Nelsoh Research Development Co., № 199,454.

196. Pieters R., Huisinans D.R., Loonen A H. et al. Relation of cellular drug resistance to long-term clinical outcome in; childhood acute lymphoblastic leukemia.//Lancet- 1991.-V. 338 -P. 399-403.

197. Pieters R., Kaspers G.J., Klumper E. et al: Clinical relevance of in vitro drug resistance testing in childhood acute lymphoblastic leukemia: the state of the art. // Med. Pediatr. Oncol. 1994. - V. 22 - P. 299-308.

198. Pinkel D. Intravenous mercaptopurine: life begins at 40. // J. Clin; Oncol. 1993. - V. 11-P. 1826-1831.

199. Poplack D.G., Balis F.M., Zimm S. The pharmacology of orally administered chemotherapy. A reappraisal // Cancer 1986. - V. 58 - P. 473-480.

200. Pui C.Hi, Crist W.M. Biology and treatment of acute lymphoblastic leukemia. // J. Pediatr. 1994. - V. 124 - P. 491-503:

201. Pui C.H., Simone J.V., Hancock M.L. et al; Impact of three methods of treatment of treatment intensification; on acute lymphoblastic leukemia; in children: long-term results of St. Jude total; therapy study. // Leukemia -1992. -V. 6-P. 150-157.

202. Radwanski E, Perentesis G, Symchowicz S, Zampaglione N. Single and multiple dose pharmacokinetic evaluation of flutamide in normal geriatric volunteers. J Clin Pharmacol 1989; 29: 554-8.

203. Razdan В., Nagaraj N.Y. Evaluation of dosage forms. Part 6. Studies of commercial oxyphenbutazone tablet dosage forms./ Drug.Dev. & Ind.Pharm., -1999, Vol.25, №9, p.1051-1056.

204. Rees C.A., Lennard L., Lilleyman J.S. Maddocks J.L. Disturbance of 6-mercaptopurine by cotrimaxazolc in childhood lymphoblastic leukemia. // Cancer Chemother. Pharmacol: 1984. - V. 15 - P. 87-89.

205. Reiter A., Schrappe M;, Ludwig W.D., et al. Chemotherapy in 998 unselected childhood acute lymphoblastic leukemia patients. Results and conclusions of the multicenter trial ALL-BFM 86. // Blood 1994. - V. 84 — P. 3122-3133.

206. Remy C.N. Metabolism of thiopyrimidines and; thiopurines S-methylation with; S-adenosylmethionine transmethylase and catabolism in mammalian tissues. //J. Biol. Chem. 1963. - V. 238 -P. 1078-1084.

207. Rescigno A, Marzo A, Thyroff-Friesinger V. Mefenamic acid bioequivalence assessment with a new statistical procedure. Pharmacol Res 1996; 33: 149-52.

208. Riccardi R., Balis F.M., Ferrara P., Lassorella A. et al. Influence of food intake on bioavailability of oral 6-mercaptopurine in children with acute lymphoblastic leukemia. // Pediatr. Hematol. Oncol- 1986; V. 3 - P. 319324.

209. Rivard G.E., Infante Rivard C., Dresse M.F., et al. Circadian time-dependent response of childhood lymphoblastic leukemia to chemotherapy: a long-term follow-up study of survival. // Chronobiol. Jnt. 1993. - V. 10 - P. 201-204:

210. Rivard G.E., Infante Rivard C., Hoyoux C., et al. Maintenance chemotherapy for childhood acute lymphoblastic leukaemia: better: in the evening. // Lancet 1985. - V. 2 - P. 1264-1266.

211. Rivard G.E., Lin K.T., Lelers J.M., David M. Milk could decrease the bioavailability of 6-mercaptopurine. // Am: J. Pediatr. Hematol. Oncol; -1989. V. 11 - P. 402-406.

212. Rivera G.K., Pinkef D:, Simone J.V. et al; Treatment of acute lymphoblastic leukemia .30 years experience at St. Jude Children's Research Hospital; II N. Engl; J. Med: 1993; - V. 329- P. 1289-1295.

213. Roshdy M.N;, Schnaare R.L., Sugita E.T., Zietz S., Schwartz J.B. An adjusted phannacokinetic equation for predicting drug levels in vivo based on in vitro square root of time-release kinetics. Pharm. Dev. Technol. 2002, Vol. 7 (2), 203-213;

214. Rowbotham MC, Davies PS, Fields HL. Topical lidocaine gel relieves розШефеНс neuralgia. Ann Neurol\995\ 37: 246-53;

215. Schulz M, Schmoldt A, Donn F, Becker H. The pharmacokinetics of flutamide and its major metabolites after a single oral dose and during chronic treatment. Eur J Clin Pharmacol 1988; 34: 633-6.

216. Schutz E., Gummert J., Mohr F., Oellerich M. Azathioprine-induced myelosuppression in thiopurine methyltransferase deficient heart transplant recipient. // Lancet 1993. - V. 341 - P. 436.

217. Schutz H. Benzodiazepines. A handbook. Basic data, analytical methods, pharmacokinetics and; comprehensive literature.- Berlin, Heidelberg, New-York: Springer Verlag. 1982.- 439 p.

218. Semnikar, L, Rovati L. C., Hilgenstock C. // Arzneimittel- Forschung. 1996 Aug.; 46 (8): 766-73;

219. Sengupta S, Velpandian T, Kabir SR, Gupta SK. Analgesic efficacy and pharmacokinetics of topical nimesulide gel in healthy human volunteers: doubleblind comparison with»piroxicam, diclofenac and placebo. Eur Clin Pharmacol 1998; 54: 541-7.

220. Shoenwald; RD. Ocular drug delivery. Pharmacokinetic considerations. Clin Pharmacokinet 1980; 18: 255-69:

221. Sigel R.A. in: Controlled Release: Challenges and! strategies, Ed. Park K., ACS Symp.Ser.(1996).

222. Singh S.K., Durrani M.J., Reddy L K. // Pharmazie. 1996 Oct. 51 (10): 741744.

223. Smith MT, Watt JA, Cramond T. Morphine-3- glucuronide. A potent antagonist of morphine analgesia. Life Sci 1990; 47: 579-85.

224. Steinijans VW, Hauschke D, Jonkman JHG. Controversies in bioequivalence studies. Clin Pharmacokinet\992; 22: 247-53.

225. Steinijans VW, Hauschke D. International* harmonization of regulatory bioequivalence requirements. Clin Res Reg Affairs 1993; 10: 203-20.

226. Stet E.H., De Abreu R.A., Bokkerink J.P.M! et al. Inhibition of IMP dehydrogenase by mycophenolic acid in Molt F4 human malignant lymphoblasts. // Ann. Clin. Biochem. 1994. - V. 31 - P. 174-180.

227. Stet E.H., De Abreu R.A., Bokkerink J.P.M., et al. Decrease in S-adenosylmethionine synthesis by 6-mercaptopurine and methylmercaptopurine ribonucleoside in Molt F4 human malignant lymphoblasts. // Biochem. J. 1994. - V. 304 - P. 163-168.

228. Sugibayashi K., Morimoto Y. Drug Diposition* and metabolism in skin after topical application. The Conference on Challenges for Drug Delivery and Pharmaceutical Technology// Tokyo. Japan, 1998, 59-60.

229. Takayama K., Nagai T. Formula optimization based on artificial neural networks in transdermal drug delivery. The Conference on Challenges for Drug Delivery and Pharmaceutical Technology// Tokyo, Japan, 1998, 51-52.

230. Tan C.T., Wollner N., Trippett Т., et al. Pharmacologic-quided trial of seqyential methotrexate and thioguanine in children with advanced malignancies. Hi. Clin: Oncol: 1994. - V. 12 - P: 1955-1962:

231. Tidd D.M., Paterson A.R. A biochemical mechanism for the delayed cytotoxic reaction of 6- mercaptopurine. // Cancer Res. 1974. - V. 34 - P. 738-746.

232. United States Pharmacopeia 26 National Formulary 21, US Pharmacopeial Convention, Inc. Rockville, MD, 2003.

233. Van Loon J., Weinshilboum R.M. Thiopurine methyltransferase biochemical genetics human lymphocyte activity. // Biochem.Genet.- 1982. -V. 20 P.637-658.

234. Veiga M.D., Alvarez de Eulate J. Dissolution study of spiramycin: influence of agitation intensity and addition of several substances to the dissolution medium:/ Int. J. Pharm., -1996 (Sep 26), Vol.110, p.223-229.

235. Verdouw P.D., Gom H P.A., Bijleveld R.E. /Cardiovascular responses to increasing plasma^ concentrations of AQ-A 39 CI; a new compound with negative chronotropic effects. //Arzneim.-Forsch. 1983. - v.33. - p.702-706.

236. Verdouw P.D., Saxen P R:, Schamhardt H.C. et al. /The effect ofalinidine, an N-allyl-derivative of clonidine, on regional miocardial perfusion and perfomance in the pig with or without artrial pacing. //Eur J. Pharmacol. -1980a. v.64. - p.209-220:

237. Vierstein H., Plass H:, Tumheini K. Biological anlability of difference cimetidine preparations in the dog./Arzneim:-Forsch, -1990, Vol.40, №6, p.675-678.

238. Vogt M.H., Stet E.H., De Abreu R.A. et al. The importance of metylthio-IMP for methylmercaptopurine ribonucleoside (Me-MPR) cytotoxicity in Molt F4 human malignant T-lymphoblast. // Biochim. Biophys. Acta 1993. -V. 1181 -P.189-194.

239. Wagener H;H.: Topika auf NSAR Basis. Pharmazie in unseres - Zeit 20,211-213, 1991.

240. Walter-Sack I, de Vries JX, Kreiner C, Ittenson A, Stenzhorn G, Voss A, Weber E. Bioequivalence of allopurinol preparations to be assessed by parent drug or the active metabolite? Clin In "est 1993; 71: 240-6.

241. Wang J.X., He L., Li T.L. Correlation between dissolution in vitro and absorption in vivo of dilthiazem hydrochloride controlled-release capsules./ Chin. J. Clin. Pharm., 1999, Vol.8, №6, p.146-149.

242. Warren D.Y., Andersen A., Slordali L. Quantitation of 6-thioguanine residues in peripheral blood leukocyte DNA obtained from patients receiving 6-mercaptopurine-based maintenance therapy. // Cancer.Res. 1995. - V. 55 -P. 1670-1674.

243. White NJ. Clinical pharmacokinetics of dipiridamole. Clin Pharmacokinet 1985; 10: 187-215.

244. Wingard LB, O'Reilly RA, Levy G. Pharmacokinetics of warfarin enantiomers: a search for intrasubject correlations. Clin Pharmacol Ther 1978; 23: 212-17.

245. Woodson; L.C., Dunnete J.H., Weinshilboum-R.M. Pharmacogenetics of human thiopurinemethyltransferase kidney erythrocyte correlation and immunotitration studies. // J;Pharmacol: Exp. Ther. 1982.- V. 222 - P. 174181.

246. Yacatan GJ, Poynor WJ, Talbert RL, Floyd BF, Slough CL, Ampulski RS, Benedict JJ. Clodronate kinetics and bioavailability. Clin Pharmacol Ther 1982;31:401-10.

247. Zimm S., Collins J.M., O'Neill D. et al. Inhibition of first-pass metabolism in cancer chemotherapy: interation of 6-mercaptopurine and allopurinol. // Clin. Pharmacol. Ther. 1983. - V. 34 - P. 810-817.

248. Zimm S., Ettinger L.Y., Holcenberg J.S. et al. Phase 1 and chemical pharmacological study of mercaptopurine adminstered as a prolonged intravenous infusion. // Cancer Res. 1985. -V.45 - P. 1869-1873.

249. Рецензенты: акад. РАМН Ф.И. Комаров, акад. РАМН Е.Д. Гольдберг, проф. А.С. Берляпд, д.м.н. В.Н. Сишохин.1. Ответственные за выпуск:акад. РАМН ВТ. Кукес, проф. А.А. Фирсов, проф. АК. Стародубцев