Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое изучение травы волдырника ягодного (Cucubalus Baccifer L.) и мягковолосника водяного (Myosoton Aquaticum (L.) Moench)

На правах рукописи

Дармограй Сергей Васильевич

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ ВОЛДЫРНИКА ЯГОДНОГО (СиеиВАЪга ВАСС1РЕ11 Ь.) И МЯГКОВОЛОСНИКА ВОДЯНОГО (MYOSOTON АОБАИСЦМ (Ь.) MOENCH)

Специальность 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

1 6 ОКТ 2014

Москва — 2014

005553339

005553339

Диссертационная работа выполнена в ГБОУ ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» Министерства Здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель:

Фурса Николай Сергеевич -доктор фармацевтических наук, профессор Официальные оппоненты:

Ермакова Валентина Алексеевна - доктор фармацевтических наук, профессор, профессор кафедры фармакогнозии ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Чубарова Галина Дмитриевна - кандидат фармацевтических наук, заведующая отделом клинических исследований и регистрации лекарственных средств ЗАО «СКАИ ЛТД»

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства Здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится рЯ.&аЗ'^ 2014 г. в часов на заседании

Диссертационного совета Д 208.040.09 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Министерства Здравоохранения Российской Федерации по адресу: 119019, г. Москва, Никитский бульвар, д. 13

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова (ЦНМБ) по адресу: 117997, г. Москва, Нахимовский проспект, д. 49

и на сайте ГБОУ ВПО 1МГМУ им. И.М. Сеченова www.mma.ru Автореферат разослан <06 » 2014 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Д 208.040.09

доктор фармацевтических наук,

профессор

Демина Наталья Борисовна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Одним из семейств мировой флоры, богатых экдистероидами, сапонинами, фенольными соединениями, является семейство гвоздичные (Caryophyllaceae Juss.). Оно характеризуется большим разнообразием химических структур названных соединений, особенно экдистероидов. С одной стороны, экдистероиды нарушают жизнедеятельность насекомых-фитофагов и нетоксичны для млекопитающих, что создает предпосылки для разработки новых биологических методов борьбы с вредителями и получения более устойчивых сортов растений, а с другой, экдистероиды - структурные аналоги гормонов линьки и метаморфоза насекомых, у млекопитающих выполняющие регуляторные функции и оказывающие анаболическое, иммуномодулирующее, актопротекторное, антигипергликемическое, нейропротекторное, кардиопротекторное, антигипоксическое,

антиишемическое и другие виды действия (Сыров и соавт., 2012; Шулькин, 2012; Lafont R. J. et al„ 2003; Dinan, 2009; Raskin, 2009; Cahlkova et al„ 2011; Lao C.W. et al., 2011 и др.). Они являются основой препаратов (экдистен, Cytodyne, Ecdybol, Power Health, Macamor, Z-mass и др.) анаболического, адаптогенного, тонизирующего и других видов действия. По содержанию и разнообразию природных соединений, в том числе экдистероидов, гвоздичные представляются в сравнении с другими семействами предпочтительными источниками для получения различных субстанций. В связи с чем, нами избрана для сравнительного фармакогностического изучения трава видов с широкой экологической амплитудой из различных подсемейств семейства гвоздичных - волдырника ягодного (Cucubalus baccifer L.) из подсемейства смолевковых и мягковолосника водяного (Myosoton aquaticum Moench.) из подсемейства алсиновых, применяемая в народной медицине разных стран. Во Франции молодые особи волдырника едят как овощ, в России мягковолосник используют как кормовое растение. Вместе с тем, несмотря на значительные природные ресурсы, не проанализирован элементный, углеводный, аминокислотный, липидный, экдистероидный и флавоноидный состав, не проведено морфолого-анатомическое изучение и не выявлены возможности использования травы этих растений в медицине.

Степень разработанности темы диссертации. Объекты настоящего исследования ранее в химическом, хемотаксономическом, товароведческом, фармакологическом, лабораторно-клиническом отношениях исследованы недостаточно. Имеются отдельные публикации иностранных и отечественных ученых о наличие в волдырнике ягодном флавоноидов, Сахаров, экдистероидов, впрочем, наличие последних некоторыми нашими и зарубежными исследователями ставилось под сомнение. Однако, обнаружением этих веществ в обоих объектах, наша работа позволила доказать обратное.

Цель настоящего исследования. Целью работы явилось сравнительное изучение элементного состава, веществ первичного и вторичного обмена, морфолого-анатомических признаков травы волдырника ягодного и мягковолосника водяного для выявления потенциальных источников новых видов лекарственного растительного сырья и разработка методов их стандартизации.

Постановка задач и выбор средств для их решения. Для ее выполнения следовало решить следующие задачи:

1. Осуществить анализ данных литературы о современном состоянии химических, фармакологических, хемотаксономических и морфолого-анатомических исследований гвоздичных;

2. Предпринять сравнительное изучение элементного состава, веществ первичного (углеводов, аминокислот, липидов, спиртов) и вторичного (экдистероидов, флавоноидов) обмена волдырника ягодного и мягковолосника водяного, выявить возможности их использования в хемотаксономии и медицине;

3. Разработать методики качественного обнаружения и количественного определения экдистероидов и флавоноидов для стандартизации травы объектов исследования;

4. Выявить морфолого-анатомические особенности предполагаемых видов лекарственного растительного сырья;

5. Провести оценку острой токсичности настоев и гепатопротекторной активности экстрактов изучаемых растений;

6. Составить нормативную документацию (ФСП) на траву волдырника и мягковолосника.

Решение задач осуществлялось путем обобщения данных литературы и проведения экспериментальных исследований.

Научная новизна. Впервые с использованием современных физико-химических методов анализа (рентгенофлуоресцентный, атомно-абсорбционный, масс-спектрометрия с индуктивно связанной плазмой, ВЭЖХ, хромато-масс-спектрометрия, капиллярный электрофорез и др.) проведено сравнительное фитохимическое изучение травы волдырника ягодного и мягковолосника водяного. При этом определено 9 макро-, 54 микро- и ультрамикроэлемента, в свободном состоянии 2 сахара, в связанном - 4 (2 пентозы и 2 гексозы), 20 аминокислот, 7-8 экдистероидов, не менее 10 флавоноидов, показаны возможности их использования для хемотаксономии гвоздичных и в виде лекарственного сырья. Методом ГХ/МС в траве растений идентифицировано 41, а в семенах - 54 различных природных соединения и выявлены индивидуальные особенности их накопления. Впервые ТСХ проведено сравнительное изучение экдистероидов травы волдырника японского (СисиЬак^ ]арошсия (М1ц.) МГоговсЬ.) в сравнении с травой в. ягодного и мягковолосника водяного и с использованием ВЭЖХ и МС показано наличие отдельных из них (экдистерона, полиподина В).

Разработаны ВЭЖХ-методики количественного определения экдистероидов и флавоноидов и установлено, что в траве волдырника

содержание экдистерона больше, чем в траве мягковолосника, и, наоборот, виценина больше в последнем, чем, возможно, обусловлена их различная гепатопротекторная активность.

Проведен сравнительный морфолого-анатомический анализ травы растений, отмечены их общие и специфические признаки.

Определена острая токсичность настоев и изучена гепатопротекторная активность экстрактов травы обоих растений. Обобщены результаты лабораторно-клинических испытаний различных экдистеронсодержащих препаратов при различной патологии, в частности в лечении и профилактике кариеса зубов и гингивита, поражений глаз, ожогов, гнойных ран, защищенных 6 патентами РФ.

Теоретическая значимость работы. Впервые в двух видах семейства гвоздичных, принадлежащих к двум подсемействам, обнаружены десятки различных соединений первичного и вторичного обмена. Это очень важно для химии и таксономии семейства, так как наличие в обоих растениях одинаковых и структурно близких веществ, в том числе фитоэкдистероидов и флавонового диглюкозида виценина, свидетельствует о близком родстве этих видов. Это обстоятельство дало повод усомниться в выводах некоторых авторов, что часть растений семейства не содержит фитоэкдистероиды, очень важные соединения.

Практическая значимость работы. В качестве лекарственного сырья предложена трава волдырника ягодного и мягковолосника водяного. На основании проведенных исследований разработаны ВЭЖХ-методики количественного определения в них экдистероидов и флавоноидов, внедренные в учебный процесс отдельных кафедр ЯГМА, Пермской ГФА Курского ГМУ, ФГБУ «ИМЦЭУАОСМП» Росздравнадзора, Курский филиал (Федеральное государственное бюджетное учреждение «Информационно-методический центр по экспертизе, учету и анализу обращения средств медицинского применения» Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития, Курский филиал) (Акты внедрения).

Результаты исследований отражены в проектах ФСП «Волдырника ягодного трава» и «Мягковолосника водяного трава».

Методология и методы исследования. Методологическую основу исследования составили труды советских и российских ученых: Ф.А. Сацыперова, А.Ф. Гаммерман, И.А. Самылиной, Л.Н. Березнеговской, Ю.К. Траппа, К.Ф. Блиновой, Г.П. Яковлева и других, благодаря которым фармакогнозия в нашей стране стала наукой, изучающей, в числе прочих, товароведческие аспекты в исследовании лекарственного растительного сырья и продуктов животного происхождения, а так же во многом определяющей качество этих показателей, химический состав. В качестве методов исследования использовались все виды фармакогностического анализа лекарственного растительного сырья.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 35 работ, из них 6 в журналах, в том числе 3 в изданиях, входящих в «Перечень ведущих

рецензируемых научных журналов», рекомендованных ВАК. Имеется 6 патентов на изобретение.

Степень достоверности результатов. Диссертация представляет собой научно-исследовательскую работу, достоверность полученных результатов которой подтверждена использованием общепринятых методик анализа и статистической обработкой полученных результатов. Выводы и положения, выносимые на защиту, обоснованы и логичны.

Апробация диссертации. Основные результаты работы доложены и обсуждены на: ежегодных научных конференциях студентов и молодых ученых ЯГМА (Ярославль, 2007-2013), конгрессе «Традиционная медицина-2007», посвященном 30-летию со дня открытия Центрального научно-исследовательского института рефлексотерапии (Москва, 2007); научно-практической конференции с международным участием, посвященной 25-летию кафедры фармакогнозии ЯГМА «Изыскание и создание природных лекарственных средств» (Ярославль, 2009), региональных научно-практических конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2011-2013), VIII Mezinarodni vedecko-prakticka konference «Vedecky pokrok na prelomu tysenenulety - 2012» (Praha, 2012), VIII Международна научна практична конференция «Новини на научна прогрес - 2012» (София, 2012), III ВсеукраУнськш науково-практичшй конференцн «Хкпя природних сполук» (Тернопшь, 2012), Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновационные процессы в лекарствоведении», посвященной 30-летию фармацевтического факультета ЯГМА (Ярославль, 2012); на совместном заседании кафедр: фармакогнозии и фармацевтической технологии, фармацевтической и токсикологической химии, управления и экономики фармации, фармакологии ЯГМА (Ярославль, 2013).

Личный вклад автора. После критического обобщения современных данных литературы автором осуществлен сравнительный анализ элементного состава, веществ первичного и вторичного обмена травы волдырника ягодного и мягковолосника водяного, разработаны методики и проведено количественное определение в них виценина, экдистерона и полиподина В, предпринято сравнение их макро- и микродиагностических признаков,' изучена гепатопротекторная активность экстракта травы мягковолосника.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертации соответствуют паспорту заявленной специальности 14.04.02 - «фармацевтическая химия, фармакогнозия» (фармацевтические науки). Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно пунктам 6 и 7 паспорта специальности «фармацевтическая химия, фармакогнозия».

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Ярославской государственной медицинской академии (номер государственной регистрации 01201052792).

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты определений элементного состава травы волдырника и мягковолосника.

- итоги обнаружения и изучения в них веществ первичного и вторичного обмена.

- данные сравнительного морфолого-анатомического анализа травы объектов исследования.

- выявленные особенности гепатопротекторной активности экстрактов обоих растений.

- разработанные нормативные документы на сырье волдырника и мягковолосника.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 219 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (5 глав), общих выводов, списка литературы и приложения; иллюстрирована 92 рисунками и 27 таблицами. Список литературы включает 249 источников, из них 89 на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цели и задачи исследования, показана научная новизна и практическая значимость работы.

В обзоре литературы (первая глава) отражено современное состояние химического, фармакологического и хемотаксономического изучения видов семейства гвоздичных, в том числе волдырника ягодного и мягковолосника водяного, и особенности их медицинского применения. Во второй главе описаны материалы и методики исследований. В третьей главе приведены данные исследования элементного состава, в четвертой - результаты изучения веществ первичного обмена, в пятой - материалы по качественному обнаружению и количественному определению флавоноидов и экдистероидов, в шестой - морфологические и микродиагностические признаки травы объектов исследования.

Приложение включает проекты ФСП «Волдырника ягодного трава», «Мягковолосника водяного трава» и другие материалы, подтверждающие значимость проведенных исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объектом исследования для фармакогностических исследований служила трава волдырника ягодного (Cucubalus baccifer L.) и мягковолосника водяного (Myosoton aquaticum Moench.), произрастающих в окрестностях г. Рязани, и трава волдырника японского, собранная на Дальнем Востоке.

При проведении сравнительного анализа нами использованы классические и современные методы исследований, в частности хроматография на бумаге (БХ) и в тонких слоях (ТСХ), капиллярный электрофорез (прибор Applied Biosystem 273 Т, USA), масс-спектрометрия с индуктивно-связанной аргоновой плазмой (масс-спектрометр ELAN-DRC-e, USA), рентгенофлуоресцентный и атомно-адсорбционный метод

-7-

(дифракционный спектрограф ДФС-13-1), хромато-масс-спектрометрия (ГХ/МС) с использованием газового хроматографа 6850 с масс-селективным детектором 5973 фирмы Agilent Technologies (USA), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) с фотометрической детекцией (аминокислотный анализатор Hitachi 835, Япония), жидкостный хроматограф Surveyor MSQ фирмы Thermo Finnigan и Waters Acquity UPLC (USA), УФ-спектрофотометрия (СФ-56), титриметрия, товароведческий, макроскопический и микроскопический анализ. В процессе исследований использованы реактивы, стандарты, растворители, отвечаюшие требованиям соответствующей нормативной документации. Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по общепринятым методикам.

Определение элементного состава

Определение макро-, микро- и ультрамикроэлементов проведено с использованием атомно-абсорбционного, рентгенофлуоресцентного и масс-спектрометрического анализа.

При атомно-адсорбционном анализе нами определено содержание 8 техногенных элементов в траве волдырника и мягковолосника, собранной в окрестностях г. Рязани (табл. 1).

Таблица 1

Содержание техногенных элементов в траве растений

Сырье Элемент, мкг/г

Fe Cd Мп As Си РЬ Hg Zn

Трава волдырника 49,700 0,132 121,600 не обн. 3,800 1,560 не обн. 26,200

Трава мягковолосника 37,800 1,174 147,000 не обн. 5,900 1,320 не обн. 48,600

Из результатов анализа следует, что анализируемое сырье по содержанию особо опасных элементов (С(1, 1%, РЬ, Ав) не превышало допустимый уровень (СанПин 2.3.2.1078-01 от 2001 г.). Мышьяк и ртуть нами не обнаружены. Трава волдырника в большей мере накапливала Сё, Си, Ъл\ мягковолосника - РЬ, но оба вида сырья экологически безопасны.

При рентгенофлуоресцентном анализе нами определено 5 макро-(Са,С1, К, Р, Б) и 17 микроэлементов (Вг, V, Ре, Мп, Си, Мо, Аэ, №, Шз, РЬ, Бе, Бг, Т1, Сг, 7л\, 7х). Из макроэлементов больше всего содержалось калия, кальция; микроэлементов - Бе, Мп, 5г, Ъл, Тй Ш), Вг, Си, Мо, РЬ, №, большинство из которых является эссенциальными.

При масс-спектрометрическом анализе нами выявлен 61 элемент, из них 7 макро-, 54 микро и ультрамикроэлемента (табл. 2).

Таблица 2

Элементный состав травы анализируемых растений, мкг/г

Трава Трава

Элемент волдыр- мягково- Элемент волдыр- мягково-

ника лосника ника лосника

Макроэлементы, мкг/г Hg 0,0170 0,0074

А1 290,0000 207,0000 Но 0,0058 0,0500

Са 1139,1000 7821,0000 I 0,2500 0,3400

К 3957,4000 6003,8000 La 0,1900 0,1800

Mg 4070,0000 3968,0000 Li 0,2400 0,7500

Na 61,4000 62,5000 Lu 0,0024 0,0022

Р 3535,0000 5840,0000 Mn 63,8000 62,9000

Si 1781,0000 2007,0000 Mo 1,3300 0,8300

Микро- и ультрамикроэлементы, Nb 0,1300 0,0730

мкг/г Nd 0,1600 0,1400

Ag 0,0140 0,0190 Ni 1,2000 0,7100

As < 0,0005 < 0,0005 Pb 3,6700 3,0300

Au 0,0076 0,0007 Pr 0,0410 0,0360

В 25,7000 15,9000 Rb 17,6000 9,5400

Ва 20,1000 25,4000 Sb 0,2100 0,3500

Be 0,0050 <0,0010 Se 0,4000 0,8600

Bi 0,0089 0,0081 Sm 0,0290 0,0300

Вг 13,9000 11,9000 Sn 0,1800 0,0730

Се 0,4200 0,3400 Sr 33,8000 36,7000

Cd 0,0810 0,1400 Та 0,0053 0,0056

Со 0,2900 0,3300 Tb 0,0049 0,0041

Cs 0,0390 0,0240 Ti 36,1000 26,5000

Cr 2,6100 1,4000 Th 0,0460 0,0340

Си 4,0600 6,2400 Tl 0,0260 0,0050

Dy 0,0290 0,0260 Tm 0,0023 0,0024

Er 0,0170 0,0120 U 0,0210 0,0180

Ей 0,0054 0,0052 V 0,9500 0,7600

Fe 518,0000 294,0000 W 0,1800 0,0550

Ga 0,1200 0,1100 Y 0,1600 0,1300

Gd 0,0320 0,0270 Yb 0,0160 0,0110

Ge 0,0140 0,0160 Zn 27,0000 70,6000

1 Hf 0,0320 0,0260 Zr 1,6100 1,3600

Трава волдырника ягодного и мягковолосника водяного характеризуется индивидуальными особенностями в накоплении отдельных химических элементов. Преобладающее их количество (38) содержалось в траве первого (Ве, В, Вг, V, Вь Ос1, Са, Но, Эу, Ей, Бе, Аи, УЬ, У, Ьа, Ьи, Мп, Мо, Мз, Ш, N1, Бп, Рг, Н§, ЯЬ, РЬ, Т1, ТЬ, ТИ, и, Сг, Се, Се, Ег) и значительно меньше (15) в траве второго (Ва, ве, I, Сё, Со, и, Си, Бт, Бе,

Ag, БЬ, Та, Тт, Хп). В траве мягковолосника в большей мере накапливалось К, Иа, Р, чем волдырника, и, наоборот, в последнем выявлены более значительные концентрации А1, Са, Возможно, более значимое

содержание многих элементов обусловливает использование волдырника как овощного растения. Вместе с тем в нем несколько больше содержалось Ве, Ре, Н8, РЬ, Т1, в мягковолоснике - Ва, Сс1, Си, Ъл. Наряду с этим нами отмечено, что содержание токсичных элементов в траве анализируемых растений удовлетворяло требованиям для БАД на растительной основе (СанПин 2.3.2.1078-01), что позволило использовать ее для дальнейших исследований.

Вещества первичного обмена Определение углеводов

БХ нами обнаружены в свободном состоянии глюкоза и фруктоза. Их содержание определяли ВЭЖХ, связанных Сахаров - методом капиллярного электрофореза. Сбор и обработку хроматограмм осуществляли с помощью программы «Эко Хром» (табл. 3 и 4).

Таблица 3

Содержание свободных углеводов в траве растений

Растение Содержание, %

фруктоза глюкоза сумма

Волдырник 2,3 0,7 3,0

Мягковолосник 1,2 0,6 1,8

Содержание свободных Сахаров в траве волдырника больше, чем мягковолосника. Среди них доминировала фруктоза.

Таблица 4

Содержание связанных Сахаров в траве растений

Растение Содержание,%

Пентозы Гексозы Общая сумма

арабиноза ксилоза сумма глюкоза галактоза сумма

Волдырник 1,8 1,7 3,5 3,4 1,9 5,3 8,8

Мягковолосник 2,7 2,5 5,2 1,0 2,6 3,6 8,8

Набор связанных Сахаров более разнообразен, чем свободных. В траве мягковолосника доля пентоз (арабиноза, ксилоза) выше, чем волдырника и, наоборот, в последнем доля гексоз (глюкоза, галактоза) больше.

Определение аминокислот

Наличие аминокислот в траве обоих растений обнаруживали нингидриновой реакцией и хроматографией на бумаге. Их анализ проводили

с помощью аминокислотного анализатора «Hitachi», модель 835 (Япония). Результаты определений отражены на рис. 1, 2.

Retention Time (mm}

Рис. 1. Хроматограмма аминокислот травы волдырника ягодного

!

»•I■I'1Ч Ч■I■111■I■I■1■I■I ■ I■I I l'I'l'l'l'l'1'

ю it ta и J»

Retention Time (min)

Рис. 2. Хроматограмма аминокислот травы мягковолосника водяного

В траве анализируемых растений нами определено 20 аминокислот, из которых 12 заменимых (Ala, Gly, Ser, Туг, Cys, Asp, Glu, Arg, Orn, His, OH-Pro, Pro) и 8 незаменимых (Val, Ile, Leu, Met, Thr, Phe, Lys, OH-Lys). Орнитин обнаружен в следовых количествах. Сумма аминокислот в траве волдырника выше, чем мягковолосника. Их основную долю составляли моноаминомонокарбоновые (Ala, Val, Gly, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Туг, Phe, Cys), меньше содержалось моноаминодикарбоновых (Asp, Glu), диаминомонокарбоновых (Arg, Lys, OH-Lys) и гетероциклических (His, ОН-Pro, Pro) кислот. Сумма заменимых кислот почти в 2 раза больше, чем незаменимых.

При хромато-масс-спектрометрическом анализе этанольных извлечений травы и семян нами выявлено в траве волдырника 33, мягковолосника 35, соответственно в семенах 42 и 36 веществ. Общее количество веществ, идентифицированных в траве растений, равно 41, в семенах - 54 (табл. 5).

Таблица 5

Результаты ГХ/МС-анализа этанольных извлечений травы и семян исследуемых растений, % от общей суммы

Вещество Время удержи в. Волдырник Мягковолосник

трава семена трава семена

1 2 3 4 5 6

Алании 4,25 0,362 0,110 0,681 0,017

Глицин 4,39 - 0,007 0,025 _

3-гидроксипропановая кислота 4,62 0,991 0,012 - -

3-гидроксибутановая кислота 4,76 0,045 0,003 0,015 -

2-аминобутановая кислота 4,87 - 0,012 0,063 -

Валин 5,25 0,364 0,151 1,195 0,014

Дигидроксиацетон 5,27 - 0,007 - 0,025

4-гидроксибутановая кислота 5,38 0,176 - - -

Бензойная кислота 5,50 0,045 0,004 - 0,023

Каприновая кислота 5,58 0,026 - - 0,020

Лейцин 5,67 - 0,012 - _

Глицерин 5,71 5,543 0,981 7,083 1,930

Изолейцин 5,86 0,463 0,072 0,534 0,013

Пролин 5,90 4,547 0,235 3,418 0,019

Янтарная кислота 5,97 1,238 0,038 0,427 0,047

2-метил-янтарная кислота 6,05 - 0,004 0,026 -

2,3-дигидрокси-пропановая кислота 6,12 0,513 0,006 0,197 -

Урацил 6,17 0,085 0,026 0,055

Пеларгоновая кислота 6,26 - - - 0,022

Серин 6,31 0,076 0,015 0,265 -

Продолжение таблицы 5

1 2 3 4 5 6

Треонин 6,49 0,105 0,052 0,366 -

Каприловая кислота 6,86 - - - 0,015

Цитрамалевая кислота 7,02 0,551 - - -

Яблочная кислота 7,08 0,553 0,042 1,577 0,025

Эритритол 7,21 0,662 0,129 0,333 -

5-оксопролин 7,31 2,586 0,202 4,786 0,040

Треоновая кислота 7,50 0,373 - 0,178 -

2-гидроксипента-декановая кислота 7,54 0,075 - - -

Ксилитол 7,79 - - - 0,231

Фенилаланин 7,84 0,063 0,023 0,330 -

Пирогаллол 7,88 - - - 0,149

Арабитол 8,33 7,056 0,25 1,532 -

Глицеролфосфат 8,50 0,829 0,259 0,351 0,137

Глютамин 8,52 - - 0,800 -

Арабиновая кислота 8,55 - - 1,183 -

Азелаи новая кислота 8,56 - - - 0,252

Арабиноза 8,71 8,235 - 5,023

Фруктоза 8,75 9,579 2,599 5,925 0,177

3,4-диоксибензойная кислота 8,76 - 1,853 - 0,656

Миристиновая кислота 8,78 - - - 0,336

Инозитол 8,84 0,984 4,000 0,363 0,171

Галактоза 8,87 8,603 1,170 0,358 0,106

Глюкоза 9,03 - 2,742 1,691 0,139

Ксилопираноза 9,12 - 0,175 - -

Пентадекановая кислота 9,19 - - - 0,136

Тирозин 9,23 - 0,155 - -

Маннитол 9,28 - 0,099 - -

Ксилоза 9,39 - 1,157 - -

Пальмитиновая кислота 9,59 2,614 4,297 5,212 15,997

Коричная кислота 9,82 - - 0,324 -

Маргариновая кислота 9,85 - 0,106 - 0,470

Фитол 10,08 1,003 - 1,523 -

Транс-олеиновая кислота 10,10 - - - 0,207

Линолевая кислота 10,24 1,763 7,454 2,262 17,128

Олеиновая кислота 10,25 - 3,182 - 11,178

Линоленовая кислота 10,27 2,408 0,525 2,331 2,840

Окончание таблицы 5

1 2 3 4 5 6

Стеариновая кислота 10,32 - 0,855 1,177 2,999

Дигидроабиетиновая кислота 10,95 - - - 0,761

Арахиновая кислота 10,98 - - - 0,322

Сахароза 11,41 37,483 66,048 48,382 40,719

Лигноцериновая кислота 12,47 - - - 1,094

Цианиданол 12,84 - 0,199 _

Гамма-токоферол 13,48 - 0,732 - 1,584

Всего веществ 33 42 35 36

В семенах волдырника ГХ/МС идентифицировано 11 аминокислот, 6 углеводов, 6 жирных кислот, 8 органических кислот, 6 спиртов; мягковолосника - соответственно 5, 4, 12, 5, 5 упомянутых веществ; аналогично в траве волдырника - 8, 5, 4, 9 и 6; мягковолосника - 11, 7, 4, 5 и 6 веществ, т.е. анализируемые растения характеризуются индивидуальными особенностями в накоплении отдельных природных соединений. Из них наиболее разнообразный состав (14 веществ) отмечен для жирных кислот семян мягковолосника, первый подобный пример для видов гвоздичных. Несколько меньше (11) в его траве содержалось аминокислот и углеводов (7). В траве волдырника разнообразнее набор органических кислот (9), чем мягковолосника (5). Качественный состав спиртов (6) в траве обоих растений идентичен. Кроме того, пирогаллол и ксилитол обнаружены только в семенах мягковолосника, маннитол и цианидол - волдырника. Общими для всех органов являлось 16 веществ, из которых в большей мере содержалось сахарозы (в траве в пределах 37,483-48,382%; в семенах 40,719-60,048% от общей суммы веществ), фруктозы (соответственно 5,925-9,579% и 0,1772,599%), галактозы (0,358-8,603% и 0,106-1,17%), жирных кислот линолевой (1,763-2,262% и 7,454-17,128%), линоленовой (2,331-2,408% и 0,525-2,84%), пальмитиновой (2,614-5,212% и 4,297-15,997%), глицерина (5,543-7,083% и 0,981-1,93%), инозитола (0,363-0,984% и 0,171-4,00%), органических кислот янтарной (0,487-1,238% и 0,038-0,047%), яблочной (0,025-0,042% и 0,5531,577%), аминокислот аланина (0,362-0,681% и 0,11-0,017%), валина (0,3641,195% и 0,014-0,151%), изолейцина (0,463-0,534 и 0,013-0,072%), 5-оксопролина (2,586-4,76% и 0,04-0,202%), пролина (3,418-4,547% и 0,0190,235%), глицеролфосфата (0,351-0,829% и 0,137-0,259%). Отмеченные особенности нами впервые установлены для видов семейства гвоздичных.

Вещества вторичного обмена Качественными реакциями, хроматографией на бумаге и в тонком слое в траве анализируемых растений обнаружены фенольные соединения и экдистероиды. При их исследовании методом ВЭЖХ (рис. 3,4, таблицы 6, 7) отмечено в траве волдырника 17 и мягковолосника 21 вещество, общими для

-14-

Рис. 3. ВЭЖХроматограмма 70% этанольного извлечения травы мягковолосника водяного

Таблица 6

Результаты ВЭЖХ-анализа этанольного извлечения фенольных соединений травы мягковолосника водяного

Время удерживания, мин Высота шУ Площадь шУ*сек Концентрация Соединение

3,14 52,62 977,20 3.66 танин

3,462 120,74 1997,89 7,48 галловая к-та

3,961 47,20 1593,20 5,96 катехин

4,834 23,47 656,21 2,46 не идент.

5,206 20,27 571,84 2,14 хлорогеновая к-та

5,75 24,69 619,32 2,32 эпикатехин

6,298 67,53 1742,00 6,52 виценин

7,303 119,75 3337,08 12,49 кофейная к-та

8,987 82,76 3844,11 14.39 дигидрокумарин

10.16 19,78 577,50 2,16 дигидрокверцетин

10,59 20,40 621.53 2,33 не идент.

11,11 16,86 596,61 2,23 гиперозид

11,92 12,93 450,36 1,69 не идент.

12,58 15,52 1166,31 4,37 полиподин

14,28 11,79 625,33 2,34 рутин

15,68 12,32 1207,05 4,52 лютеолин-7-гл-д

17,2 8,53 652,81 2,44 лютеолин

18,89 10,09 1560,09 5,84 витексин

21,87 6,71 2656,32 9,94 не идент.

31,04 3,43 587,59 2,20 не идент.

33,88 2,48 675,43 2,53 не идент.

Рис. 4. ВЭЖХроматограмма 70% этанольного извлечения травы волдырника ягодного

Таблица 7

Результаты ВЭЖХ-анализа этанольного извлечения фенольных соединений травы волдырника ягодного

Время удерживания, мин Высота тУ Площадь тУ*сек Концентрация Соединение

3,213 61,61 1038,19 8,79 танин

3,529 137,32 2997,26 25,38 галловая к-та

4,586 20,38 413,57 3,50 эпгкг

5,032 12,39 304,84 2,58 хлорогеновая к-та

5,536 11,58 267,89 2,27 не идент.

6,061 6,81 98,78 0,84 эпикатехин

6,286 5,83 94,62 0,80 не идент.

6,726 7,68 165,25 1,40 виценин

7,048 6,40 203,43 1,72 не идент.

8,198 6,20 138,47 1,17 гесперидин

8,677 12,89 287,48 2,43 не идент.

10,14 1,77 29,36 0,25 дигидрокверцетин

10,69 43,78 1080,57 9,15 гиперозид

13,58 95,93 4353,43 36,87 экдистерон

16,29 1,58 60,89 0,52 не идент.

16,91 1,48 134,42 1Д4 не идент.

21,41 3,87 140,07 1Д9 кемпферол

травы обоих растений оказались 6 (танин, эпикатехин, галловая и хлорогеновая кислоты, виценин, дигидрокверцетин). Наряду с этим в траве мягковолосника идентифицировано еще 8 (кофейная кислота, дигидрокумарин, катехин, полиподин, рутин, лютеолин и его 7-гликозид, витексин) и волдырника 5 веществ (эпигаллокатехин, эпикатехин, гесперидин, экдистерон, кемпферол), т.е. они различаются набором фенольных соединений, в частности флавоноидов, и экдистероидов. Гесперидин и дигидрокверцетин впервые выявлены в видах семейства гвоздичных. С использованием разработанных нами методик ВЭЖХ количественного определения отдельных веществ установлено, что накопление виценина в траве мягковолосника происходило в 4 раза интенсивнее, чем волдырника. Содержание экдистерона оказалось довольно высоким (до 1%) в траве волдырника, что явилось основанием для его выделения и использования в различных лекарственных формах.

С использованием ТСХ нами впервые обнаружено 7-8 экдистероидов в траве волдырника японского, среди них преобладали экдистерон и полиподин В, наличие которых подтвердили ВЭЖХ и масс-спектрометрией.

Морфолого-анатомическое изучение

После описания морфологических признаков собранной от начала цветения до начала плодоношения травы анализируемых растений, представляющей собой цельные или измельченные стебли с листьями, цветками и плодами различной степени развития, мы провели анатомическое изучение отдельных органов. Так, при рассмотрении поперечного среза листа (рис. 5) волдырника виден слабо развитый абаксиальный киль (небольшой, полукруглый, с выемкой). В центре листа находится главная жилка, по краям - боковые жилки. Его большую часть занимает мезофилл, в клетках которого заметны многочисленные друзы оксалата кальция.

д) е) г)

Рис. 5. Лист волдырника (поперечный срез)

а) общая схема, б) край листовой пластинки, в) центральная часть; а)-в) (М 1:150), г) основание листовой пластинки (М 1:600), д)(М 1:150); е) (М:400).

Условные обозначения: 1 - верхний эпидермис со складчатой кутикулой, 2 - многоклеточный волосок, 3 - мезофилл, 4 - друзы оксалата кальция, 5 - проводящий пучок, 6 - ксилема, 7 - флоэма, 8 - нижний эпидермис со складчатой кутикулой.

При рассмотрении препарата листа волдырника с поверхности видны клетки эпидермиса обеих сторон с извилистыми стенками. Верхний эпидермис не имеет устьиц и волосков, покрыт толстым слоем складчатой кутикулы. На нижнем эпидермисе многоклеточные аномоцитного типа устьица (длиной 184,5 ± 6,5 мкм) окружены 4-5 клетками и покрыты слоем складчатой кутикулы. На нижней стороне, чаще по жилкам, и по краю листа, встречаются многочисленные волоски. По краю листа они простые многоклеточные, прямые или коленчатые, покрытые толстым слоем складчатой кутикулы.

Вдоль жилки волоски простые многоклеточные, прямые, тонкие, длинные, состоящие из 8-10 клеток, иногда со спавшимися члениками, крайние из них бородавчатые. Среди микродиагностических признаков препаратов с поверхности сырья волдырника следует отметить наличие волосков разнообразного строения. Так, стебли опушены простыми одно- и многоклеточными, многоклеточными с крючковиднозагнутой вершиной и многоклеточными головчатыми волосками со складчатой кутикулой, листья -простыми одно- и многоклеточными волосками со складчатой кутикулой, по их краю слегка изогнутыми в сторону верхушки; чашелистики и лепестки -волосками, состоящими из двух-пяти клеток. Их клеточная стенка без складчатой кутикулы. При рассмотрении препарата листа мягковолосника с поверхности (рис. 6) видно, что верхний эпидермис состоит из клеток со слабоизвилистыми стенками, немного вытянутыми вдоль оси листа. На нижней эпидерме клетки более мелкие с сильноизвилистыми стенками (длина клеток -366±21 мкм, ширина - 326±52 мкм). С нижней стороны листа имеются погруженные устьица аномоцитного типа (длина - 127±9 мкм, ширина - 110±22 мкм). Они округлой или овальной формы, ориентированы по длине листа, окружены чаще 4 околоустьичными клетками. Волоски головчатые, на многоклеточной ножке. В мезофилле листа большое количество друз оксалата кальция (144+27 мкм). Стебли опушены простыми многоклеточными железистыми волосками, имеющими базальную клетку; чашелистики и лепестки - головчатыми волосками на многоклеточной ножке.

а) б)

Рис. 6. Препарат с поверхности листа мягковолосника а) нижний эпидермис (М 1:400), б) волосок по краю листа (М 1:400) (доп. X 4).

Условные обозначения: 1 - основные клетки, 2 - простой прямой многоклеточный волосок, 3 - простой коленчатый волок, 4 - устьица.

В результате морфолого-анатомического изучения надземных органов волдырника и мягковолосника, видов разных подсемейств семейства гвоздичных, выявлены характерные для них признаки, использование которых возможно для определения подлинности экдистероидсодержащего сырья и для применения в систематике.

Товароведческий анализ По методикам ГФ XI издания, определили некоторые числовые показатели травы волдырника и мягковолосника, в частности «Зола общая» (не более 12%), «Зола, нерастворимая в кислоте хлористоводородной» (не более 11,5%), «Влажность» (не более 6%), «Экстрактивные вещества, извлекаемые 40% спиртом этиловым» (не менее 25%).

Разработка нормативной документации Результаты проведенных нами исследований положены в основу проектов ФСП на траву волдырника и мягковолосника, разработанных в соответствии с ОСТ 91500.05.001 «Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения».

Фармакологические и лабораторно-клинические исследования Экдистероиды - мощные стимуляторы биосинтеза белка в организме млекопитающих. Они оказывают многосторонние положительные воздействия на организм лабораторных животных в норме и особенно при патологических состояниях. Настои волдырника и мягковолосника отнесены к 4 классу опасности «Вещества малоопасные». Гепатопротекторная активность экстракта мягковолосника сопоставима с легалоном. При изучении предложенных нами мазей, медицинских масел, настоек и других лекарственных форм для наружного применения, с включением в них как индивидуальных экдистероидов, так и суммы БАВ, выделенных из травы анализируемых гвоздичных, выявлена их эффективность, что послужило основанием для их патентной защиты. Противоожоговая мазь, содержащая сумму фитоэкдистероидов, обладала выраженным обезболивающим и противоотечным эффектом. Она ускоряла эпителизацию поверхностных ожогов, улучшала микроциркуляцию гранулирующих ран, активизировала краевую и островковую эпителизацию, сокращала срок лечения и подготовку гранулирующих ран к аутодермопластике (Патент РФ №2119331 от 27.09.98 г.) В процессе лечения гнойных ран различной этиологии наложением марлевых салфеток или тампонадой турундой, пропитанной мазью, в состав которой введен экдистерон, отмечено увеличение грануляций, усиление регенерации эпителиального покрова в экспериментальной группе на 64,1% по сравнению с контрольной (Патент РФ №2299664 от 20.05.2007 г.). Экдистеронсодержащие капли эффективны в лечении поражений глаз различной этиологии. Они позволяют в короткие сроки добиться значительного улучшения состояния глаз, стимулируя процессы их эпителизации и репарации, снижая воспаление и отек роговицы, улучшая ее питание и дыхание, что сокращает сроки госпитализации (Патент РФ №2284813 от 10.10.2006 г.). Использование медицинского масла с добавлением экдистерона в лечении и профилактике кариеса зубов и

гингивита обеспечивало высокую степень регенерации пораженных тканей, хорошее бактерицидное и обезболивающее действие при отсутствии нежелательных воздействий на ткани зуба и пародонта (Патенты РФ №2401663 от 20.10. 2010 г., №2463015 от 10.10.2012 г., №2470654 от 27.12.2012 г.). Клинические показатели, характеризующие состояние твердых тканей зуба и пародонта, сразу после курса лечения и через месяц после его окончания существенно не отличались, что позволяет судить о стойкой ремиссии патологического процесса.

ВЫВОДЫ

1. При использовании современных методов впервые осуществлено сравнительное изучение волдырника ягодного и мягковолосника водяного для возможного использования полученных данных в хемотаксономии и выявления потенциальных источников новых видов лекарственного растительного сырья, проанализирован элементный, углеводный, аминокислотный, жирнокислотный, фенольный и экдистероидный состав, выявлены общие и специфические микродиагностические признаки, изучены некоторые фармакологические свойства.

2. При атомно-абсорбционном, рентгенофлуоресцентном и масс-спектрометрическом анализе с индуктивно связанной плазмой в траве исследуемых растений определено 63 элемента, из них 9 макро- (А1, Са, С1, К, Ыа, Р, Б, 81), 54 микро- и ультрамикроэлемента (Ag, А8, Аи, В, Ва, Ве, Вй Вг, Се, Сс1, Со, Сг, Се, Си, Оу, Ег, Ей, Ие, йа, вс], йе, Щ Щ, Но, I, Ьа, 1л, Ьи, Мп, Мо, №>, N(1, №, РЬ, Рг, ЯЬ, 5Ь, Бе, 8ш, Бп, 8г, Та, ТЬ, ТЬ, Ти Т1, Тш, и, V, У, УЬ, 7п, 7х), имеющих определенное значение в хемосистематическом, токсикологическом и медицинском аспектах.

3. Прямофазной ВЭЖХ и капиллярным электрофорезом проведен анализ углеводов травы волдырника и мягковолосника и определено содержание в свободном виде 2 (глюкоза, фруктоза) и в связанном 4 Сахаров, из них 2 пентоз (арабиноза, ксилоза) и 2 гексоз (галактоза, глюкоза), а при количественном определении аминокислот с использованием ВЭЖХ с фотометрической детекцией в траве этих растений обнаружено 20 аминокислот (моноаминокарбоновые, моноаминодикарбоновые, диаминомонокарбоновые и гетероциклические). Впервые в этанольном извлечении семян анализируемых растений методом ГХ/МС выявлено 54 соединения, в траве — 41, среди которых аминокислоты (12 веществ), углеводы (6), жирные (12) и другие органические кислоты (8), спирты (6), наличие и содержание которых обусловливает видовые различия.

4. При ВЭЖХ-анализе травы волдырника идентифицировано 11 соединений (в том числе преобладающий экдистерон); а в траве мягковолосника — 15 (в том числе экдистероид полиподин В), при этом из них ВЭЖХ-методикой произведены количественные определения экдистерона и виценина в траве волдырника ягодного и полиподина и виценина в траве мягковолосника водяного.

5. В результате сравнительного морфолого-анатомического анализа надземных органов выявлены общие и специфические морфологические и микродиагностические признаки для исследуемых растений.

6. При фармакологическом изучении препараты волдырника и мягковолосника отнесены к 4 классу опасности веществ - «Малоопасные», экстракт мягковолосника проявил гепатотропную активность на уровне легалона. На основании всех исследований и того факта, что эти растения описаны как пищевые и кормовые мы провели лабораторно-клинические исследования экдистерона включенного в комплексные препараты для наружного применения при стоматологических и других заболеваниях с очень хорошим результатом - на что получено несколько патентов.

7. На основании комплексных исследований составлены проекты ФСП «Волдырника ягодного трава» и «Мягковолосника водяного трава».

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Дармограй, В.Н. Экдистероиды волдырника ягодного (Cucubalus baccifer L.) / В. H. Дармограй, H. С. Фурса, С. В. Дармограй // Ж. Успехи современ. естествознания. - 2006. - №5. - С. 95-98.

2. Изучение элементного состава и эффективности фитокомпозиций некоторых видов гвоздичных / С. В. Дармограй, С. Н. Соленникова, Т. А. Горохова и др. // Ж. Новости здравоохранения. - 2007. - №1. - С. 24-28.

3. Дармограй, C.B. Микродиагностическая характеристика травы Cucubalus baccifer L. - потенциального источника экдистероидсодержащих препаратов / С. В. Дармограй // Сб. научных работ студентов и молодых ученых. - Ярославль: ЯГТУ, 2007. - С. 105-106.

4. Дармограй, C.B. Изучение элементного состава и эффективности фитокомпозиций некоторых видов мягковолосника и смолевки / С. В. Дармограй, С. Н. Соленникова, В. Г. Корниевская и др. // Запорожский мед. журнал.-2007.-№2(41).-С. 148-151.

5. Сравнительный анализ элементного состава отдельных видов валериановых, вересковых, гвоздичных и яснотковых, используемых в традиционной медицине / Е. В. Кузьмина, С. В. Дармограй, ... Н. С. Фурса // Традиционная медицина - 2007: Сб. науч. тр. конгресса, поев. 30-летию со дня открытия Центр, научно-исслед. инс-та рефлексотерапии. - М.: Изд-во Федер. научного клин, эксперт, центра трад. методов диагностики и лечения Росздрава, 2007. - С. 66-68.

6. Дармограй, В.Н. Определение степени экологической чистоты травы мягковолосника, произрастающего в различных районах г. Рязани / В. Н. Дармограй, Н. С. Фурса, С. В. Дармограй // Влияние природных и антропогенных факторов на социоэкосистемы: Межрегион, сб. науч. тр. -Вып. 4. - Рязань, 2007.-С. 236-240.

7. Дармограй, C.B. Экдистероиды в лечении последствий лучевой терапии / С. В. Дармограй // Сб. науч. работ студентов и молодых ученых ЯГМА. -Ярославль: ЯГТУ, 2008. - С. 141-142.

8. Дармограй, C.B. Рентгенофлуоресцентный анализ эссенциальных элементов в траве и листьях семейства гвоздичных и вересковых / С. В. Дармограй, А. В. Искра, А. А. Таланов // Актуальные проблемы образования и общества: Мат-лы научно-практ. конф. с междун. участием, 14 мая 2008 г. -Т. 1,-Ярославль:ЯГТУ, 2008.-С. 156-157.

9. Дармограй, C.B. Определение экологической чистоты, заменимых и незаменимых аминокислот в траве волдырника и мягковолосника // С. В. Дармограй, Н. С. Фурса / Рос. медико-биол. вестник имени академика И.П. Павлова. - 2008. - №4. - С. 130-136.

10. Дармограй, C.B. Экдистероиды в лечении гнойных ран / С. В. Дармограй // Сб. научн. работ студентов и молодых ученых Всерос. конф. с междун. участием: Актуальные вопросы медицинской науки, поев. 65-летию ЯГМА. - Ярославль: ЯГТУ, 2009. - С. 223.

11. Дармограй, C.B. Экдистероидсодержащие препараты в лечении гнойных ран / С. В. Дармограй // Изыскание и создание природных лекарственных средств: межвуз. сб. научн. тр. с междун. участием, поев. 25-летию кафедры фармакогнозии ЯГМА / Ответ, ред. Н. С. Фурса. - Ярославль: Ярмедиагрупп, 2009. - С. 112-114.

12. Дармограй, C.B. Некоторые результаты изучения видов рода волдырник (Cucubalus L.) семейства Caiyophyllaceae Juss. / С. В. Дармограй, Н. С. Фурса, В. Н. Дармограй // Флора и растительность: Тр. Рязан. отд. рус. бот. об-ва. - Вып. 2. - Рязань, 2009. - С. 141 - 142.

13. Дармограй, C.B. Изучение элементного состава, свободных и связанных Сахаров в траве волдырника ягодного и мягковолосника водяного / С. В. Дармограй, Н. С. Фурса // Рос. медико-биол. вестник имени академика И.П. Павлова. - 2010. - №1. - С. 148-155.

14. Анализ аминокислотного состава отдельных видов семейств бурачниковых, валериановых, вересковых, гвоздичных, грушанковых и яснотковых / Н. С.Фурса, С. В. Дармограй , Л. С. Мазепина // Фармация. -2010.-№4.-С. 22-24.

15. Дармограй, C.B. К химическому изучению звездчатки средней / С. В. Дармограй // Актуальные вопросы медицинской науки: Сб. науч. работ студентов и мол. ученых Всерос. научно-практ. конф. с междун. участием, поев. 65-летию СНО ЯГМА. - Ярославль: ЯГТУ, 2011. - С. 305-306.

16. Ерофеева, Н.С. Товароведческий анализ травы волдырника ягодного / Н. С. Ерофеева, С. В. Дармограй // Актуальные вопросы медицинской науки: Сб. науч. работ студентов и мол. ученых Всерос. научно-практ. конф. с междун. участием, поев. 65-летию СНО ЯГМА. - Ярославль: ЯГТУ, 2011. -С. 311-312.

17. Анатомо-морфологические особенности волдырника ягодного (Cucubalus baccifer L.) семейства гвоздичные (Caryophyllaceae Juss.) / С. В. Дармограй, Н. С. Фурса, Н. С. Ерофеева, Г. В. Дубоделова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. - Вып. 66. - Пятигорск: ООО «Рекламно-информационное агентство на КМВ», 2011.-С. 52-59.

18. Морфолого-анатомическое изучение мягковолосника водяного (Myosoton aquaticum Moench.) семейства гвоздичных (Caryophyllaceae Juss.) / С. В. Дармограй, Н. С. Фурса, Н. С. Ерофеева, Г. В. Дубоделова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. - Вып. 66. - Пятигорск: ООО «Рекламно-информационное агентство на КМВ», 2011. - С. 59-64.

19. Дармограй, C.B. Изыскание и клиническое испытание экдистеронсодержащих препаратов гвоздичных / С. В. Дармограй // Актуальные вопросы медицинской науки: Сб. науч. работ студентов и молодых ученых Всерос. научно-практ. конф. с междун. участием, поев. 70-летию профессора A.A. Чумакова. - Ярославль: ЯГТУ, 2012. - С. 336.

20. Дармограй, C.B. Поиск и разработка экдистероидсодержащих препаратов гвоздичных / С. В. Дармограй, Пётр Ю. Шкроботько, Павел Ю. Шкроботько, Н. С. Фурса // Vedecky pokrok na prelomu tysyaenalety - 2012: Materialy VIII Mezinarodni vedecko-prakticka konference. 27 kvetna-05 cervna 2012 roku. Dil.26.Chemie a chemicka technologie. Zemedelstvi. Zverolekarstvi. -Praha: Publishing House «Education and science» s.r.o., 2012. - S. 5-8.

21. Семейство гвоздичные - Caryophyllaceae Juss. Сообщение 1. Макро- и микроэлементы / С. В. Дармограй, П. Ю. Шкроботько, Т. А. Горохова и др. // Новини на научния прогрес - 2012: Материали за VIII Международна научна практична конференция. 17-25 август 2012. Т.7. Лекарство. Биологии. - София: «БялГРАД - БТ» ООД, 2012. - С. 43-45.

22. Дармограй, C.B. Семейство гвоздичные - Caryophyllaceae Juss. Сообщение 2. Углеводы / С. В. Дармограй, П. Ю. Шкроботько, Т. А. Горохова, Н. С. Фурса // Новини на научния прогрес - 2012: Материали за VIII Международна научна практична конференция. 17-25 август 2012. Т.7. Лекарство. Биологии. - София: «БялГРАД - БТ» ООД, 2012. - С. 45-47.

23. Дармограй, C.B. Семейство гвоздичные - Caryophyllaceae Juss. Сообщение 3. Азотсодержащие соединения / С. В. Дармограй, П. Ю. Шкроботько, Н. С. Фурса // Новини на научния прогрес - 2012: Материали за VIII Международна научна практична конференция. 17-25 август 2012. Т.7. Лекарство. Биологии. - София: «БялГРАД - БТ» ООД, 2012. - С. 47-48.

24. Семейство гвоздичные — Caryophyllaceae Juss. Сообщение 4. Экдистероиды /С. В. Дармограй, Павел Ю. Шкроботько, Пётр Ю. Шкроботько, С. Н. Соленникова, Н. С. Фурса // Новини на научния прогрес -2012: Материали за VIII Международна научна практична конференция. 1725 август 2012. Т.7. Лекарство. Биологии. - София: «БялГРАД - БТ» ООД 2012.-С. 48-50.

25. Семейство гвоздичные — Caryophyllaceae Juss. Сообщение 5. Фенольные соединения / С. В. Дармограй, П. Ю. Шкроботько, А. Л. Исаханов, С. Н. Соленникова. Н. С. Фурса // Новини на научния прогрес -2012: Материали за VIII Международна научна практична конференция. 1725 август 2012. Т.7. Лекарство. Биологии. - София: «БялГРАД - БТ» ООЛ 2012.-С. 50-52.

26. Семейство гвоздичные - Caryophyllaceae Juss. Сообщение 6. Эффективность экдистероидсодержащих фитокомпозиций в лечении сердечно-сосудистых заболеваний / С. В. Дармограй, П. Ю. Шкроботько, С. Н. Соленникова, Т. А. Горохова, Н. С. Фурса // Новини на научния прогрес -2012: Материали за VIII Международна научна практична конференция. 1725 август 2012. Т.7. Лекарство. Биологии. - София: «БялГРАД - БТ» ООД, 2012. - С. 53-56.

27. Дармограй, C.B. ВЕРХ-анайз фенольних та шших сполук трави слабника водяного / С. В. Дармограй, С. М. Соленнжова, М. С. Фурса// Xímíh природних сполук: III Всеукр. науково-практ. конф. 30-31 жовтня 2012 року. - Тернопшь: Укрмедкнига, 2012. - С. 114-115.

28. Биологически активные вещества и применение гвоздичных /С. В. Дармограй, С. Н. Соленникова, Н. С. Фурса, В. Н. Дармограй // Инновационные процессы в лекарствоведении: Сб. мат-лов Всерос. научно-практ. конф. с междун. участием, поев. 30-летию фармац. фак-та ЯГМА / Ответ, ред. Н.С. Фурса. - Ярославль: Аверс Плюс, 2012. - С. 86-100.

29. Дармограй C.B. Жирнокислотный состав семян волдырника ягодного и мягковолосника водяного / C.B. Дармограй, Ю.А. Джурко, A.A. Парфенов // Актуальные вопросы медицинской науки: Сб. науч. работ ст-тов и мол. ученых Всерос. научно-практ. конф. с междун. участием, поев. 85-летию профессора E.H. Дормидонтова. - Ярославль: ООО Издательско-полиграфический комплекс «Индиго», 2013. - С. 219.

30. Патент №2119331 РФ МПК A6IK9/06, 35/78. Средство для лечения ожоговых ран «Витадерм» / В.Н. Дармограй, С.М. Потехинский, Ю.И. Ухов, В.К. Петров, С.С. Потехинский, C.B. Дармограй. - Заявка №96104062; заявл. 29.02.1996; опубл. 27.09.98. Бюл. №27.-3 с.

31. Патент №2284813 РФ МПК А61К 31/07, А61Р 27/02, А61К 36/16, А61К 36/63. Способ лечения поражений глаз / В.Н. Дармограй, В.А. Соколов, Е.А. Севастьянов, C.B. Дармограй. - Заявка №2005108393; заявл. 24.03.2005; опубл. 10.10.2006. - Бюл. №28. - 3 с.

32. Патент №2299064 РФ МПК А61К 31/045, А61К 31/56, А61К 36/18, А61Р 17/02. Способ лечения гнойных ран / В.Н. Дармограй, A.B. Федосеев, Е.Д. Бурмистров, C.B. Дармограй. - Заявка №2005114799; заявл. 14.05.2005; опубл. 20.05.2007. - Бюл. №14. - 4 с.

33. Патент №2401663 РФ МПК А61/К36/28 36/36, 36/736,36/739. А61Р 1/02. Способ лечения и профилактики кариеса зубов и гингивита / В.Н. Дармограй, O.A. Гализина, С.И. Морозова, C.B. Дармограй, Н.С. Фурса. - Заявка №2009105708/14; заявл. 18.02.2009; опубл. 20.10.2010; Бюл.№29. - 4 с.

34. Патент №2463015 РФ МПК А61С 5/00, А61К 6/00, А61К 31/045, А61К 31/56, А61К 33/40, А61К 35/64, А61К 36/36 А61Р 1/02. Способ лечения острого и хронического глубокого кариеса зубов комплексным препаратом / Чэнь Вей, В.Н. Дармограй, С.И. Морозова, Н.С. Ерофеева, C.B. Дармограй, Н.С. Фурса, Г.С. Межевикина. - Заявка №2011112131; заявл. 30.03.2011; опубл. 10.10.2012. -Бюл. №28. - 5 с.

35. Патент №2470654 РФ МПК А61К 36/185, А61К 8/97, А61Р 1/02. Способ лечения кандидоза слизистой оболочки рта комплексным фитопрепаратом / Г.С. Межевикина, В.Н. Дармограй, С.И. Морозова, C.B. Дармограй, Н.С. Фурса, М.В. Чулкова, А.Н. Огнева, Чень Вей. - Заявка 2011128789; заявл. 13.07.11; опубл. 27.12.2012. - Бюл. №36. -5 с.

Научное издание

Дармограй Сергей Васильевич

ФАРМАКОГНОСТПЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ТРАВЫ ВОЛДЫРНИКА ЯГОДНОГО (сисшльив ВАСОИЖ Ь.) И МЯГКОВОЛОСНИКА ВОДЯНОГО (\IYOSOTON А(2иАТ1СЦМ (Ь.) MOENCH)

Специальность 14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Печатается на коммерческой основе за счет средств автора

Сдано в печать 29.09.2014. Бумага писчая. Гарнитура Times. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз.

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Рязанский государственный медицинский университет имени академика ИЛ. Павлова» Министерства здравоохранения Российской Федерации 390026, г. Рязань, ул. Высоковольтная, 9

Отпечатано в редакционно-издательском отделе ГБОУ ВПО РязГМУ Минздрава России 390026, г. Рязань, ул. Т. Шевченко, 34