Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое изучение козлобородника восточного и козлобородника лугового

На правах рукописи

ПРОХОРОВА СОФЬЯ АЛЕКСАНДРОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОЗЛОБОРОДНИКА ВОСТОЧНОГО И КОЗЛОБОРОДНИКА ЛУГОВОГО

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

21 НАР 2013

005050927

Курск-2013

005050927

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор Бубенчикова Валентина Николаевна

Официальные оппоненты:

Киселева Татьяна Леонидовна, доктор фармацевтических наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Баландина Ирина Анатольевна, доктор фармацевтических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», начальник управления экспертизы Центра экспертизы и контроля готовых лекарственных средств

Ведущая организация:

Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «УбЗ^М^ 2013 г. в /</■'&!? часов

на заседании диссертационного совета Д 208.039.03 при ГБОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, д. 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО КГМУ Минздрава России.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Евгений Николаевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы. Лекарственные растения являются одним из источников получения новых лекарственных средств. По современным представлениям, растительное лекарство - это цельный биогенетически сложившийся комплекс, включающий в себя активно действующие вещества и другие вторичные метаболиты, протеины, эфирные масла, хлорофилл, микроэлементы, неорганические соли, витамины и т. д. [Гриневич М.А., 1990]. Существует мнение, что такой комплекс, сформировавшийся в живой клетке, имеет большее сходство с человеческим организмом, чем изолированное, химически чистое действующее вещество, легче ассимилируется и дает меньше побочных эффектов. Для решения данной задачи наука постоянно обращается к богатому опыту народной медицины и фитотерапии, пользуясь новейшими достижениями фармацевтической практики.

Среди большого разнообразия лекарственных растений отечественной флоры значительный интерес представляют растения рода Козлобородник: козлобородник восточный (Tragopogon опеШаНзЬ.) и козлобородник луговой (Тга§0р0£0П рга1епз!зЬ.) семейства Астровые (АБ1егасеае), не используемые в научной медицине.

Козлобородник восточный и козлобородник луговой широко распространены на территории Центральной России, имеют достаточную сырьевую базу и с древних времен применяются в народной медицине при кашле, почечнокаменной болезни, как ранозаживляющее и противовоспалительное средство. Их химический состав и биологическая активность отечественными учеными практически не изучались. Поэтому всестороннее изучение растений рода Козлобородник является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы явилось фармако-гностическое изучение травы козлобородника восточного и козлобородника лугового флоры Центральной России, выявление возможности использования их в качестве источника получения фитопрепаратов.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: - проведение общего фитохимического изучения козлобородника восточного и козлобородника лугового;

- изучение состава основных групп биологически активных веществ;

- разработка методик количественного определения основных групп биологически активных веществ;

- проведение морфолого-анатомических исследований для выявления диагностических признаков;

- установление товароведческих показателей сырья;

- проведение предварительных фармакологических исследований травы козлобородника восточного и козлобородника лугового, комплексов биологически активных веществ, полученных из них.

Научная новизна. Проведено фитохимическое изучение травы козлобородника восточного и козлобородника лугового флоры Центральной России. Установлено наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпеновых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, флавоноидов, кумаринов, фенолкарбоновых кислот), минеральных элементов.

С использованием различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве козлобородника восточного были обнаружены 22 соединения фенольной природы, из которых идентифицированы 13 соединений, представленных дубильными веществами (танин), флавоноидами (виценин, рутин, ориентин, лютеолин, апигенин, кверцетин) и фенолкарбоновыми кислотами (галловая, хлорогеновая, неохлорогеновая, кофейная, коричная и феруло-вая). В траве козлобородника лугового обнаружено 12, идентифицировано 8 соединений: флавоноиды (рутин, виценин, ориентин, лютеолин), фенолкарбоно-вые кислоты (галловая, хлорогеновая и кофейная) и дубильные вещества (танин). Новыми для изученных видов явились: из фенолкарбоновых кислот в траве козлобородника восточного - галловая, хлорогеновая, неохлорогеновая, кофейная, феруловая, коричная кислоты, в траве козлобородника лугового - галловая, хлорогеновая, кофейная кислоты; из флавоноидов в траве козлобородника восточного - виценин, рутин; в траве козлобородника лугового - рутин.

Впервые проведено выделение полисахаридов по фракциям: водорастворимые полисахариды, пектиновые вещества, гемицеллюлозы А и Б. Изучен качественный и количественный моносахаридный состав.

Проведено морфолого-анатомическое изучение травы (стебля, листа, корзинки) козлобородника восточного и козлобородника лугового. Установлены диагностические признаки для определения подлинности сырья. Определены числовые показатели доброкачественности сырья «Козлобородника трава».

Впервые проведены исследования по стандартизации травы козлобородника, в результате чего разработаны методики количественного определения суммы водорастворимых полисахаридов (гравиметрический метод) и суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид (методом спектрофотометрии по реакции комплексообразования с алюминия хлоридом). Проведена валидация методики спектрофотометрического определения по линейности, правильности, воспроизводимости и повторяемости.

Результаты скрининговых фармакологических исследований настоев и полисахаридных комплексов травы козлобородника восточного и козлобородника лугового показали наличие противовоспалительного, диуретического, антимикробного эффектов.

Практическая значимость. Результаты проведенных исследований позволяют расширить сведения о морфолого-анатомических признаках, химическом составе, фармакологической активности травы козлобородника восточного и козлобородника лугового. Данные, полученные в ходе фармакологических исследований, являются экспериментальным обоснованием для дальнейшего углубленного изучения с целью внедрения растений рода Козлобородник в научную медицину.

Предложена стандартизация сырья по содержанию суммы флавоноидов и суммы полисахаридов. На основании морфолого-анатомического исследования установлены макро- и микродиагностические признаки для определения подлинности сырья «Козлобородника трава».

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- микродиагностический анализ травы козлобородника лугового (Акт внедрения в работу фармацевтического факультета ГОУ ВПО «Северо-Осетинский государственный университет им. К.Л. Хетагурова» от 20.01.2011 г.);

- методика количественного определения суммы флавоноидов в траве козлобородника восточного (Акт внедрения в работу ОКК ЗАО «Фирма «Здоровье» от 20.11 2009 г.);

- методика количественного определения суммы флавоноидов в траве козлобородника лугового (Акт внедрения в работу кафедры фармацевтической химии и клинической фармации ВГМА им. H.H. Бурденко от 12.05.2010 г.).

Положения, выносимые на защиту:

- результаты фитохимического исследования травы козлобородника восточного и козлобородника лугового;

- методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы полисахаридов;

- результаты морфолого-анатомических исследований с установлением диагностических признаков сырья;

- результаты разработки и определения показателей доброкачественности сырья «Козлобородника трава»;

- результаты предварительных фармакологических исследований травы козлобородника восточного и козлобородника лугового.

Апробация работы. Основные положения диссертации апробированы и представлены на 74-й научной конференции КГМУ, сессии ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: теория, практика, инновации» (Курск, 2009); на 75-й межвузовской научной конференции студентов и молодых ученых-медиков «Молодежная наука и современность» (Курск, 2010); на 3-й и 4-й международных научных конференциях «Актуальные проблемы регионоведения» (Курск, 2008, 2009); на научной конференции КГМУ, сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН «Университетская наука: взгляд в будущее», посвященной 76-летию КГМУ (Курск, 2011); на юбилейной научно-практической конференции с международным участием «Фармакогноз1я XXI стол¡ття. Досяг-нення та перспективи» (Харкт, 2009); на 2-м Российском фитотерапевтическом съезде (Москва, 2010); на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Традиции и инновации фармацевтической науки и

практики», посвященной 45-летию фармацевтического факультета КГМУ (Курск, 2011).

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Курского государственного медицинского университета (номер государственной регистрации 01200952872).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 22 работы, из них 4 в изданиях из перечня, рекомендованного ВАК.

Личный вклад автора. Автор принимал участие в постановке цели и задач исследования, определении путей их реализации. Диссертантом проведен анализ отечественных и зарубежных источников литературы, выполнены фито-химические, микродиагностические и фармакологические исследования. Под руководством научного руководителя осуществлен анализ полученных экспериментальных данных, статистическая обработка результатов, сделаны выводы. Доля автора в сборе, анализе и обобщении информации составляет 90%. В работах, выполненных в соавторстве, использованы результаты исследования с долей личного участия диссертанта 80-90%.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (1 глава), главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, приложения. В тексте содержится 31 таблица, 73 рисунка. Список цитируемой литературы включает 153 источника, из них 37 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цель и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы, основные положения, выносимые на защиту.

В первой главе (обзор литературы) приведены сведения, отражающие современное состояние изучения козлобородника восточного и козлобородника лугового, их применение в народной медицине, фармакологические исследования, обоснован выбор объектов диссертационного исследования.

Во второй главе содержатся сведения об объектах исследования, используемых методах фитохимического, фармакологического, микробиологического, микроскопического и товароведческого анализов.

Материал третьей главы отражает результаты изучения качественного и количественного состава групп биологически активных веществ травы козлобородника восточного и козлобородника лугового, а также выделения и исследования полисахаридных комплексов.

Четвертая глава посвящена исследованию морфологических и микродиагностических признаков, товароведческих показателей сырья «Козлобородника трава», разработке методик количественного определения полисахаридов, фла-воноидов.

В пятой главе приведены результаты изучения фармакологической активности настоев, полисахаридных комплексов травы козлобородника восточного и козлобородника лугового.

В приложении содержатся материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты исследования

Объектами наших исследований явились трава козлобородника восточного (Тгадоро§ол опетаПэ Ь.)и козлобородника лугового (Tragopogon рга(епБ!зЬ.). Сырье заготавливали в течение 2008 - 2011 гг. в Курской области в фазу цветения растений.

Изучение качественного и количественного состава биологически активных веществ козлобородника восточного и козлобородника лугового

Предварительное фитохимическое изучение травы козлобородника восточного и козлобородника лугового флоры Центральной России показало наличие углеводов, азотсодержащих соединений, органических кислот, тритерпено-вых соединений, каротиноидов, фенольных соединений (дубильных веществ, флавоноидов, кумаринов, фенолкарбоновых кислот), минеральных элементов.

Установлено содержание в траве козлобородника восточного и козлобородника лугового: азотсодержащих соединений - 0,10%, 0,14%, в том числе хо-лина- 0,06%, 0,01%; дубильных веществ - 4,17%, 6,14%; органических кислот - 4,75%, 3,73%; аскорбиновой кислоты - 0,19%, 0,15%; тритерпеновых соединений-0,01%, 0,16%, каротиноидов - 3,45 мг%, 5,14 мг% соответственно.

Исследован аминокислотный состав изучаемых растений, представленный 17 аминокислотами: аспарагиновой кислотой, глутаминовой кислотой, треонином, серином, пролином, цистеином, глицином, аланином, валином, метиони-ном, изолейцином, лейцином, тирозином, фенилаланином, лизином, аргинином и гистидином. Суммарное содержание свободных аминокислот практически одинаково в обоих видах - от 1,36 мг/100 мг до 1,37 мг/100 мг, из них незаменимых 0,56 мг/100 мг.

Методом элементного спектрального анализа определили присутствие в золе растений рода Козлобородник пять макроэлементов (кальций, калий, сера, фосфор и магний) и восемь микроэлементов (кремний, железо, стронций, рубидий, марганец, бром, медь и цирконий). Наиболее богата минеральными элементами трава козлобородника лугового.

С использованием различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) установлен качественный состав фенольных соединений. В траве козлобородника восточного были обнаружены 22 соединения, из которых идентифицированы 13 соединений фенольной природы, представленных дубильными веществами (танин), флавоноидами (виценин, рутин, ориентин, лю-теолин, апигенин, кверцетин) и фенолкарбоновыми кислотами (галловая, хло-рогеновая, неохлорогеновая, кофейная, коричная и феруловая кислоты). В траве козлобородника лугового обнаружено 12, идентифицировано 8 соединений: флавоноиды (рутин, виценин, ориентин, лютеолин), фенолкарбоновые кислоты (галловая, хлорогеновая и кофейная кислоты) и дубильные вещества (танин) (табл. 1).

Таблица 1

Фснольные соединения травы козлобородника восточного н козлобородника лугового, идентифицированные методом ВЭЖХ

Группа БАВ

Идентифицированные вещества

Трава козлобородника восточного

Количественное соотношение, %

Трава козлобородника лугового

Количественное соотношение, %

Фенолокислота

Галловая кислота

43,17

35,05

Оксикоричпые кислоты

Хлорогеновая кислота

Кофейная кислота

Феруловая кислота

Неохлорогеновая кислота

Коричная кислота

9,10

1,91

8,01

1,48

0,40

7,45

6,22

Дубильные вещества

Танин

14,85

12,54

Рутин

Виценин

Флавоноиды

Ориентин

Лютеолин

Апигенин

Кверцетин

5,93

4,15

1,24

1,04

0,23

0,03

14,72

2,16

1,76

0,98

Для получения водорастворимых полисахаридных комплексов использовали воздушно-сухой шрот сырья после экстракции полифенольных соединений спиртом этиловым 70%. Полисахариды получали последовательно фракци-онно: водорастворимые полисахаридные комплексы (ВРПС), пектиновые вещества (ПВ), гемицеллюлозы (Гц А, Гц Б) (рис. 1).

Выход ВРПС из травы козлобородника восточного составил 6,07%, козлобородника лугового - 10,43%, выход пектиновых веществ - 12,70%; 10,87%, выход Гц А составил 3,96%; 5,38%, Гц Б - 7,64%; 4,67% соответственно (табл. 2).

Таблица 2

Выход фракций полисахаридов из травы растений рода Козлобородник

Вид растения Фракции полисахаридов, %

Водорастворимые полисахариды Пектиновый комплекс Гемицеллюлоза А Гемицеллюлоза Б

Козлобородник восточный 6,07 12,70 3,96 7,64

Козлобородник луговой 10,43 10,87 5,38 4,67

Экстракция

Концентрирование

Шрот сырья козлобородников после экстракции полифеноль-ных соединений

Горячей водой

с>

\

Смесью 0,5%

растворов кислоты

щавелевой и аммония

оксалата (1:1)

/ \

Водное извлечение

Кислое извлечение

Водный концентрат

Кислый концентрат

Осаждение тремя объемами спирта этилового 96%

Водорастворимый полисахаридный комплекс

10% водным раствором натрия гидроксида

Щелочное извлечение

Осаждение пятью объемами спирта этилового 96%

£

Осаждение двумя объемами кислоты уксусной, фильтрация

Осадок на фильтре

Пектиновый комплекс

Фильтрат

Гемицеллюлоза А

Осаждение двумя объемами спирта этилового 96%

Гемицеллюлоза Б

Рис. 1. Схема выделения полисахаридных фракций из травы козлобородника восточного и козлобородника лугового.

Изучен их качественный и количественный моносахаридный состав. Для определения мономерного состава полисахаридных комплексов проводили их гидролиз кислотой серной (1 моль/л). Хроматографически в гидролизатах исследуемых ВРПС обнаружены от 5 до 7 веществ моносахаридного характера, идентифицированных с достоверными образцами как глюкоза, галактоза, ара-биноза, ксилоза, рамноза, галактуроновая и глкжуроновая кислоты. В гидролизатах исследуемых пектиновых веществ идентифицировали 4 моносахарида: галактозу, арабинозу, рамнозу и галактуроновую кислоту. В гидролизатах ге-мицеллюлоз А и Б определили 5 моносахаридов: глюкозу, галактозу, арабинозу, ксилозу, рамнозу.

Определение количественного состава моносахаридов в гидролизатах полисахаридных комплексов проводили денситометрически после хроматографии гидролизатов в тонких слоях сорбента в системе растворителей: н-бутанол - кислота уксусная - вода (3:1:1).

Преобладающими сахарами в ВРПС являются арабиноза (18,7% у козлобородника восточного и 16,9% у козлобородника лугового), галактоза (14,3% у козлобородника восточного и 15,1% у козлобородника лугового). Основу пектиновых веществ составляет галактуроновая кислота (91,5% у козлобородника восточного и 92,1% у козлобородника лугового). Преобладающий моносахарид в Гц А и Гц Б - ксилоза (9,8% - 14,2%), что указывает на наличие полисахаридов типа ксилана.

Проведено определение функциональных групп пектиновых веществ тит-риметрическим методом.

Исследование подлинности, показателей качества сырья «Козлобородника трава»

Возможность применения в медицинской практике надземной части изучаемых растений рода Козлобородник делает необходимым разработку показателей качества и характеристики подлинности данного вида сырья.

Нами проведено изучение морфолого-анатомических особенностей травы

козлобородника восточного и козлобородника лугового с целью определения подлинности сырья. Установлены признаки, позволяющие проводить диагностику сырья. Выявлено, что стебель в поперечном сечении округлый, со слегка выступающими ребрами, пучкового типа строения, не опушен (рис. 2). Клетки эпидермиса стебля прямостенные, разнообразной формы: от многоугольных паренхимных до почти прямоугольных, вытянутых вдоль оси стебля.

Лист имеет дорзовентральное строение. Клетки верхнего и нижнего эпидермиса извилистостенные, устьица аномоцитного типа встречаются в основном на нижней поверхности листа. Эпидермис листа опушен простыми волосками: они гусеницевидные многоклеточные тупоконечные, тонкостенные (рис. 3); у козлобородника лугового дополнительно имеются одноклеточные тонкостенные остроконусовидные волоски.

Клетки эпидермиса венчика в очертании почти прямоугольные, клетки нижнего эпидермиса более извилистые. По краю отгиба венчика, а также па его верхушке имеются сосочковидные выросты. Эпидермис венчика и обертки опушен разнообразными простыми волосками.

На обертке у обоих видов встречаются следующие типы волосков: остроконусовидные тонкостенные одноклеточные; многоклеточные гусеницевидные тонкостенные; двух-, трехклеточпые с остроконусовидной конечной клеткой; многоклеточные нитевидные тонкостенные с бурым содержимым (рис. 4).

Только у козлобородника восточного имеются: бичевидные волоски; одноклеточные тонкостенные волоски с тупой верхушкой и двухклеточные волоски с остроконусовидной верхушкой и бородавчатой кутикулой. Отличительной чертой козлобородника лугового являются одноклеточные длинные толстостенные волоски с полостью.

Венчик обоих видов опушен одноклеточными бахромчатыми: многоклеточными гусеницевидными тонкостенными; двурядными многоклеточными тонкостенными волосками (рис. 5).

Рис. 2. Фрагмент поперечного среза стебля козлобородника восточного (увел. х80). I - эпидермис; 2 - колленхима: 3 хлорофиллоносная паренхима; 4 - эндодерма; 5 млечники; 6 - наружная флоэма; 7 - сосуды ксилемы; 8 внутренняя флоэма; 9 - механическая обкладка; 10 - сердцевина.

Рис. 3. Фрагмент нижнего эпидермиса листа козлобородника лугового (увел. хЗОО). I - гусеницевидные волоски.

, , А Б Рис. 4. Фрагменты эпидермиса листочка обертки с разнообразными простыми многоклеточными волосками: А - козлобородник восточный (увел. хЗОО); Б - козлобородник луговой (увел. хЗОО)

I - двухклеточный волосок с остроконусовидной конечной клеткой; 2 - бичевидный волосок; 3 - длинный тонкостенный волосок с бурым содержимым; 4 - одноклеточный тонкостенный остроконусовидный волосок; .5 многоклеточный гусеницевидный волосок.

Рис. 5. Фрагменты эпидермиса отгиба венчика козлобородника лугового (увел. х200; 300) I - бахромчатые волоски; 2 сосочковидные выросты; 3 - многоклеточный тонкостенный двурядный волосок.

Вдоль жилок на листе, стебле и обертке просматриваются членистые анастомозирующие млечники.

Для установления доброкачественности сырья «Козлобородника трава» определены числовые показатели: содержание общей золы не более 7,0%, золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной, - не более 1,0%; влажность не более 13,0%. Установлена норма «Содержание экстрактивных веществ, извлекаемых спиртом этиловым 70%» не менее 35,0%.

С целью объективной оценки качества сырья «Козлобородника трава» разработаны методики количественного определения основных классов биологически активных веществ. Для количественного определения суммы флавоноидов был применен спектрофотометрический метод, включающий в себя проведение реакции комплексообразования с алюминия хлоридом с последующим спектрофотометрическим дифференциальным определением оптической плотности комплексов. Для получения более воспроизводимых результатов реакцию комплексообразования вели в кислой среде.

В ходе исследования установили, что оптимальными условиями, обеспечивающими максимальный выход флавоноидов, являются: степень измельчения - 2 мм, концентрация спирта этилового как экстрагента - 70% (в соотношении сырье - растворитель 1:100), время экстракции - 45 мин на водяной бане, концентрация спиртового раствора алюминия хлорида - 2%, объем 2% спиртового раствора алюминия хлорида - 2 мл. Измерения проводили в области максимума светопоглощения при длине волны 395 нм. Расчет содержания суммы флавоноидов вели в пересчете на цинарозид (лютеолин-7-глюкозид) с использованием удельного показателя поглощения.

Установлено, что содержание флавоноидов в траве козлобородника восточного составляет от 1,47% до 2,23%, а в траве козлобородника лугового оно колеблется от 1,75% до 1,96%. Поэтому нами установлена норма содержания флавоноидов для сырья «Козлобородника трава» не менее 1,4%. Проведена валидация методики по показателям линейности, правильности, воспроизводимости и повторяемости, в результате чего методика признана прецизионной в данных условиях.

Для количественного определения водорастворимых полисахаридов использовали гравиметрический метод, основанный на экстракции суммы полисахаридов из сырья с последующим осаждением их спиртом этиловым 96%. Согласно полученным экспериментальным данным, оптимальными условиями, обеспечивающими максимальный выход полисахаридов, являются: степень измельчения - 1 мм, четырехкратная экстракция горячей водой в течение 120 минут (4 раза по 30 минут), полнота осаждения достигается использованием четырехкратного количества спирта этилового 96%. Установлено, что содержание суммы полисахаридов в траве козлобородника лугового составляет от 11,61% до 12,30%, а в траве козлобородника восточного от 7,45% до 7,79%. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 4,80%. Поэтому нами установлена норма содержания суммы полисахаридов для сырья «Козлобородника трава» не менее 7,0%.

Изучение фармакологической активности растений рода Козлобородник

Объектами фармакологических исследований служили настои, которые готовили по ГФ XI издания, и водорастворимые полисахаридные комплексы.

Исследование острой токсичности настоев в дозах от 1000 до 5000 мг/кг и полисахаридных комплексов в дозах от 100 мг/кг до 300 мг/кг травы козлобородника восточного и козлобородника лугового показало, что фитопрепараты козлобородника, согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм, можно отнестик классу «вещества малоопасные».

При изучении антиэкссудативных свойств настоев и водорастворимых полисахаридных комплексов исследуемых растений установлено, что под действием фитопрепаратов происходило достоверное снижение величины отека лапы мыши от 68,65% (настой травы козлобородника лугового) до 53,63% (настой травы козлобородника восточного). При введении полисахаридных комплексов в дозе 100 мг/кг отек достоверно уменьшался с 61,98% до 61,04%. Наи-

большие антиэкссудативные свойства проявил настой козлобородника восточного, противовоспалительный эффект препарата составил 46,40%.

Влияние фитопрепаратов на образование грануляционно-фиброзной ткани оценивали на модели «ватной гранулемы». Установлено, что под влиянием исследуемых фитопрепаратов вес грануляционной ткани по сравнению с контролем (140,55±8,10 мг) уменьшался с 85,63±6,17 мг до 60,20±5,10 мг, что приводило к достоверному снижению воспалительного процесса. Наиболее выраженное антипролиферативное действие оказывают фитопрепараты травы козлобородника лугового.

Настои и водорастворимые полисахаридные комплексы обладают выраженной капилляроукрепляющей активностью, о чем свидетельствует увеличение латентного периода появления пятен окрашивания с 6,54±0,31 мин (настой травы козлобородника восточного) до 9,09±0,29 мин (ВРПС травы козлобородника лугового) после введения фитопрепаратов по сравнению с контролем (3,98±0,17 мин). При этом регистрировалось достоверное уменьшение диаметра пятен окрашивания с 1,23±0,05 см (настой травы козлобородника лугового) до 0,94±0,05 см (настой травы козлобородника восточного) по сравнению с контролем (1,70±0,04 см).

Изучение диуретической активности проводили на беспородных белых крысах, помещенных в «обменные клетки». Мочегонным эффектом по сравнению с контролем обладает настой травы козлобородника лугового (0,55 мл мочи на 100 граммов массы крысы). Применение настоя козлобородника восточного не приводило к достоверному изменению показателей диуреза.

Изучение антимикробной активности показало, что настой травы козлобородника лугового проявляет выраженную антимикробную активность в отношении грибов рода Candida во всех соотношениях, Proteus vulgaris в соотношении 1:2, 1:4 и Bacillus cereus в разведении 1:2. Настой травы козлобородника восточного проявляет выраженную антимикробную активность в отношении Proteus vulgaris, Staphylococcus aureus в концентрации 1:2, Bacillus cereus в разведении 1:2,1:4, и Pseudomonas aeruginosa в разведении 1:2.

выводы

1. Проведено фитохимическое изучение травы козлобородника восточного и козлобородника лугового. Установлено, что биологически активными веществами, содержащимися в траве козлобородника восточного и козлобородника лугового, являются углеводы, азотистые основания (0,10% и 0,14%, в т.ч. холин 0,06% и 0,01%), дубильные вещества (4,17%, 6,14%); органические кислоты (4,75%, 3,73%); аскорбиновая кислота (0,19%, 0,15%); тритерпеновые соединения (0,01%, 0,16%), каротиноиды (3,45 мг%, 5,14 мг%) соответственно.

Данные растительные объекты содержат богатый комплекс аминокислот, в том числе незаменимых, а также макро- и микроэлементы.

2. С использованием различных методов хроматографии (бумажной, тонкослойной, ВЭЖХ) в траве козлобородника восточного были обнаружены 22 соединения фенольной природы, из которых идентифицированы 13 соединений, представленных дубильными веществами (танин), флавоноидами (вице-нин, рутин, ориентин, лютеолин, апигенин, кверцетин) и фенолкарбоновыми кислотами (галловая, хлорогеновая, неохлорогеновая, кофейная, коричная и феруловая кислоты). В траве козлобородника лугового обнаружено 12, идентифицировано 8 соединений: флавоноиды (рутин, виценин, ориентин, лютеолин), фенолкарбоновые кислоты (галловая, хлорогеновая и кофейная кислоты) и дубильные вещества (танин).

3. Впервые проведено выделение полисахаридов по фракциям: водорастворимый полисахаридный комплекс - выход составил от 6,07% до 10,43%; пектиновые вещества - от 10,87% до 12,70%; гемицеллюлоза А - от 3,96% до 5,38%; гемицеллюлоза Б - от 4,67% до 7,64%. Установлен их качественный и количественный моносахаридный состав.

4. Проведено морфолого-анатомическое изучение травы козлобородника восточного и козлобородника лугового. Установлены диагностические признаки: стебель в поперечном сечении округлый, продольно бороздчатый, пучкового типа строения; устьица аномоцитного типа; характерные волоски на эпидермисе листа, венчика и обертки, наличие млечников вдоль жилок и сосочковид-

ных выростов по краю лепестков венчика. Наиболее важными микродиагностическими признаками изучаемых растений являются многообразие и расположение простых волосков.

5. Установлены числовые показатели доброкачественности сырья: содержание общей золы не более 7,0%; золы нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной - не более 1,0%; влажность не более 13,0%; экстрактивных веществ, извлекаемых спиртом этиловым 70%, не менее 35,0%.

6. Впервые разработаны методики гравиметрического определения суммы полисахаридов и спектрофотометрического определения суммы флавоноидов для сырья «Козлобородника трава». Содержание суммы полисахаридов в сырье колеблется от 7,45% до 12,30%. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на цинарозид составило от 1,47% до 2,23%. Установлены нормы содержания суммы полисахаридов не менее 7,0%, суммы флавоноидов - не менее 1,4%.

Проведена валидация методики спектрофотометрического определения суммы флавоноидов по показателям линейности, правильности, воспроизводимости и повторяемости.

8. Результаты скрининговых фармакологических исследований настоев, полисахаридных комплексов травы козлобородника восточного и козлобородника лугового показали наличие противовоспалительной, диуретической, антимикробной активности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бубенчикова, В.Н. Фотохимическое изучение травы козлобородника восточного (Tragopogon orientalis L.) / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова, В .Д. Собакинских // Тр. 3-й междунар. науч. конф. «Актуальные проблемы ре-гионоведения». - Курск, 2008. - Ч. 1. - С. 45-47.

2. Бубенчикова, В.Н. Разработка методики количественного определения флавоноидов в сырье козлобородника восточного / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова, О.С. Богатырева // Университетская наука: теория, практика, инновации: сб. тр. 74-й науч. конф. КГМУ и сес. Центрально-Чернозем. науч. центра

РАМН и отд. РАЕН: в 3 т. - Курск : КГМУ, 2009. - Т. 2. - С. 206-208.

3. Бубенчикова, В.Н. Азотистые основания козлобородника восточного / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Фармакогноз1я XXI столптя. Досягнення та перспективи: Матер1али ювшейноТ науково-практичноТ конференцп з м1жнародною участю. - Харюв, 2009. - С. 17.

4. Бубенчикова, В.Н. Исследование состава органических кислот растений рода Козлобородник / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // XVI Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (6-10 апр. 2009 г.): тез. докл. - М., 2009. - С. 626.

5. Бубенчикова, В.Н. Азотистые основания козлобородника лугового /

B.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Ботанические сады в XXI веке: сохранение биоразнообразия, стратегия развития и инновационные решения» (18-21 мая 2009 г.). - Белгород, 2009. -

C. 412-414.

6. Бубенчикова, В.Н. Анализ полисахаридного состава травы козлобородника лугового / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Фармация Казахстана: интеграция науки, образования и производства». - Шымкент, Казахстан, 2009. - Т. 1. - С. 213-214.

7. Бубенчикова, В.Н. Фитохимическое изучение водных извлечений из травы козлобородника восточного (Tragopogon orientalis L.) / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Междунар. форум «Интегративная медицина - 2009» (5-7 июня 2009 г.): сб. науч. тр. - М., 2009. - Вып. 4. - С. 248-249.

8. Бубенчикова, В.Н. Исследование потенциального мочегонного эффекта настоев растений рода Tragopogon / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова, М.П. Гладченко // Актуальные вопросы фармакологии и фармации: сб. тр. меж-вуз. науч. конф., посвящ. памяти проф. В.В. Пичугина и 75-летию КГМУ. -Курск : КГМУ, 2009. - С. 135.

9. Прохорова, С.А. Изучение пектиновых веществ травы козлобородника лугового (Tragopogon pratensis L.) / С.А. Прохорова, С.Н. Редькина // Материалы IV междунар. науч. конф. молодых ученых-медиков: в 3-х т. - Курск : КГМУ, 2010.-Т. 1.-С. 72-73.

10. Бубенчикова, В.Н. Изучение тритерпеновых соединений в растениях рода Козлобородник (Tragopogon L.) / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Тр. 4-й междунар. науч. конф. «Актуальные проблемы регионоведения». -Курск, 2009.-С. 24-25.

11. Бубенчикова, В.Н. Содержание дубильных веществ в растениях рода Козлобородник (Tragopogon L.) / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Актуальные проблемы фармацевтической науки и практики: сб. науч. тр. Всерос. науч,-практ. конф. - Владикавказ, 2010. - С. 22-23.

12. Прохорова, С.А. Изучение состава фенольных соединений козлобородника восточного методом ВЭЖХ / С.А. Прохорова, О.С. Богатырева // Молодежная наука и современность: материалы 75-й Всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых-медиков с междунар. участ., посвящ. 75-летию КГМУ. -Курск : КГМУ, 2010. - Ч. 2. - С. 319.

13. Бубенчикова, В.Н. Изучение пектиновых веществ травы козлобородника восточного (Tragopogon orientalis L.) / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2010. - Вып. 65. - С. 17.

14. Бубенчикова, В.Н. Изучение полисахаридов козлобородника восточного (Tragopogon orientalis L.) / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова, О.С. Богатырева // 2-й Рос. фитотерапевтический съезд: сб. науч. тр., (22-23 октября 2010 г.). Приложение к журналу «Традиционная медицина» № 3(22) 2010 г. - М. : Изд-во Профессиональной ассоциации натуротерапевтов, 2010. - С. 109-112.

15. Прохорова, С.А. Исследование минерального состава травы козлобородника лугового / С.А. Прохорова // Экология России и сопредельных территорий: материалы XV междунар. эколог, студенч. конф. - Новосибирск, 2010. -С. 322.

16. Бубенчикова, В.Н. Состав и капилляроукрепляющая активность водорастворимого полисахаридного комплекса козлобородника лугового (Tragopogon pratensis L.) / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Кубан. науч. мед. вести. - 2010. - № 7 (121). - С. 41-43.

17. Бубенчикова, В.Н. Исследование противовоспалительной активности настоев травы козлобородника лугового / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Университетская наука: взгляд в будущее: материалы итог. науч. конф. КГМУ, Центрально-Чернозем. науч. центра РАМН и отд. РАЕН, посвящ. 76-летию КГМУ (2-3 февраля 2011 года). В 3-х т. - Курск : КГМУ, 2011. - Т. 2. -С. 198-201.

18. Бубенчикова, В.Н. Изучение антибактериальной активности настоя травы козлобородника лугового / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова, О.Д. Лечении // XVIII Рос. нац.конгр. «Человек и лекарство» (8-12 апр. 2011 г.): тез. докл. - М., 2011. - С. 625-626.

19. Бубенчикова, В.Н. Исследование противовоспалительной активности настоев травы козлобородника восточного / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2011.-Вып. 66.-С. 486.

20. Бубенчикова, В.Н. Флавоноиды козлобородника восточного / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова // Вести, новых мед. технологий. Тема-тич. выпуск: «Немедикаментозное воздействие». - 2011. - № 3. - С. 272-273.

21. Бубенчикова, В.Н. Изучение анатомических признаков травы козлобородника восточного / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова, Я.С. Тремба-ля // Науч. ведомости Белгород, гос. ун-та. Сер. «Естеств. науки». - 2011. -Вып. 15/2. - № 9 (104). - С. 81-86.

22. Бубенчикова, В.Н. Изучение состава фенольных соединений некоторых растений рода Козлобородник и рода Лапчатка методом ВЭЖХ / В.Н. Бубенчикова, С.А. Прохорова, Ю.А. Сухомлинов // Сорбц. и хроматограф. проц. - 2012. - Т. 12. - Вып. 1. - С. 85-88.

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 30.01.2013 г. Подписано в печать 04.02.2013 г. Формат 30х42'/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 229"А". Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.