Фармакогностическое исследование первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного

Романова, Земфира Рашитовна

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Фармакогностическое исследование первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Романова, Земфира Рашитовна Курск 2010 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему Фармакогностическое исследование первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного

На правах рукописи

Романова Земфира Рашитовна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПЕРВОЦВЕТА ВЕСЕННЕГО И ПЕРВОЦВЕТА КРУПНОЧАШЕЧНОГО

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 7 ЯН В 2011

Курск-2010

4842890

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: кандидат фармацевтических наук, доцент

Латыпова Гузель Минулловна Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

Киселева Татьяна Леонидовна, доктор фармацевтических наук, профессор Даргаева Тамара Дарижаповна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение Высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « » 2011 г. в асов на заседании

^ Т

диссертационного совета Д 208.039.03 при Государственном образовательном учреждении Высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, д. 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Пашин Е.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из актуальных задач российской фармацевтической науки и практики является расширение арсенала эффективных и безопасных отечественных лекарственных средств, в том числе растительного происхождения.

Растительные препараты, содержащие природный комплекс полифеноль-ных соединений, полисахаридов, органических кислот и других биологически активных веществ (БАВ), обладают широким спектром фармакотерапевтиче-ского действия: антиоксидантным, антигипоксантным, ангиопротекторным, ан-тиатеросклеротическим и многими другими.

В качестве импортозамещающих отечественных сырьевых источников комплекса БАВ, содержащего полифенольные соединения, органические кислоты и тритерпеновые сапонины представляют интерес широко распространенные на территории РФ растения рода Primula - первоцвет весенний (Primula veris L., или P. officinalis (L.) Hill.) и его подвид первоцвет крупночашечный (P. macrocalyx Bunge). В отечественной официнальной медицинской практике разрешено к применению 10 зарубежных препаратов на основе корневищ первоцвета весеннего в качестве отхаркивающих средств. Листья первоцвета весеннего применяются в качестве поливитаминного пищевого растительного сырья. Первоцвет крупночашечный широко используется в народной медицине. Однако в химическом отношении надземная часть первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного изучены недостаточно. Существующая отечественная нормативная документация (НД) на листья первоцвета весеннего (ГОСТ 3166-76) не позволяет объективно оценивать качество лекарственного растительного сырья (JIPC), поскольку не предусматривает определение содержания действующих веществ.

спектра фармакологического действия, критериев оценки качества сырья, изучение сырьевой базы является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования. Фармакогностическое изучение первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного с целью расширения номенклатуры официнального импортозамещающего лекарственного растительного сырья и препаратов на его основе.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

- провести анализ результатов современных исследований по биологическим, химическим и фармакологическим свойствам первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;

- изучить химический состав исследуемых видов рода Primula и разработать методики определения содержания основных групп БАВ;

- провести морфолого-анатомическое изучение сырья двух видов первоцвета в сравнительном аспекте и установить его диагностические признаки;

- разработать характеристики подлинности и показатели качества сырья;

- провести ресурсные исследования травы первоцвета крупночашечного в некоторых районах республики Башкортостан;

- разработать технологию получения густого экстракта из травы первоцвета весеннего (ГЭТПВ) и гранул сухого экстракта из травы первоцвета весеннего (СЭТПВ);

- изучить специфическую фармакологическую активность ГЭТПВ.

Научная новизна. Впервые проведено фармакогностическое изучение

травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в сравнительном аспекте, обоснована целесообразность использования сырья обоих видов производящих растений в качестве источников соединений фенольной природы и органических кислот.

Хроматографически (ТСХ, ВЭЖХ) идентифицировано:

- в траве первоцвета весеннего - 17 соединений фенольной природы, из которых 14 обнаружены впервые: арбутин, умбеллиферон, галловая, хлороге-

новая, кофейная, цикориевая, феруловая, коричная кислоты, рутин, апигенин, лютеолин-7-гликозид, дигидрокверцетин, витексин, байкалин;

- в траве первоцвета крупночашечного - 23 соединения фенольной природы, обнаруженных впервые: арбутин, катехин, галловая, хлорогеновая, о-кумаровая, кофейная, цикориевая, феруловая, неохлорогеновая, салициловая, коричная кислоты, кверцимеритрин, дигидрокумарин, о-метоксикумарин, рутин, гиперозид, витексин, кумарин, байкалин, яцеин, кверцетин, дигидрокверцетин, апигенин.

Впервые в сырье обоих видов первоцвета методом ВЭЖХ обнаружены свободные органические кислоты: щавелевая, лимонная, винная, маликовая, янтарная, фумаровая; определено количественное содержание их суммы; обнаружены полисахариды, дубильные вещества, тритерпеновые сапонины; впервые количественно определено содержание урсоловой кислоты.

Впервые изучен аминокислотный состав травы первоцвета весеннего и крупночашечного, установлено наличие 13 аминокислот, из них 8 незаменимых; проведено исследование макро- и микроэлементного состава, определено количественное содержание 10 элементов.

Впервые проведено морфолого-анатомическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в сравнительном аспекте и установлены диагностические признаки сырья. Разработаны критерии оценки и числовые показатели, регламентирующие его качество. Полученные данные включены в проект ФС «Первоцвета листья».

Впервые разработана технология получения отечественных растительных препаратов на основе травы первоцвета весеннего (ГЭТПВ и СЭТПВ); установлена антиоксидантная активность, ангиопротекторное и антигипоксантное действие ГЭТПВ. Таким образом, в результате комплекса проведенных исследований разработаны научно обоснованные составы, технология, критерии и методы оценки качества новых отечественных препаратов и исходного сырья отечественных представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

Практическая значимость. Полученные результаты позволили обосновать возможность и целесообразность расширения отечественной номенклатуры официнального сырья за счет двух представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного, а также расширить сведения об их морфолого-анатомическом строении, химическом составе, биологической активности. Результаты выполненных фармакологических исследований являются эскспериментальным обоснованием для проведения дальнейшего комплекса исследований с целью создания современных импортозамещающих препаратов на основе сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- проект ФС «Первоцвета листья» подготовлен и принят к рассмотрению в установленном порядке;

-разработанные ТУ «Трава первоцвета весеннего», утверждены в установленном порядке и включены в ТУ «Сырье растительное» № 9700-01426795008-2005 (ООО «Травы Башкирии», г. Уфа);

- методики количественного определения суммы флавоноидов (акты внедрения - № 35 от 18.11.2009 г. - ОКК ООО «Травы Башкирии»; N2 25 от 20.11.2009 г. - «Центр контроля качества лекарственных средств» ГОУ ВПО БГМУ) и аскорбиновой кислоты (соответственно, акты № 36 от 18.11.2009 г. и № 26 от 20.11.2009 г.) в траве первоцвета весеннего;

- методики и результаты анализа сырья «Трава первоцвета весеннего» по морфолого-анатомическим признакам и критериям оценки качества (Акт ОКК ООО «Травы Башкирии» № 34 от 18.11.2009 г.);

- Патент на изобретение № 2342942 «Средство растительного происхождения, обладающее антиоксидантной активностью» от 10.01.2009 г.

Положения, выдвигаемые на защиту:

- результаты изучения фитохимического состава травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;

- результаты исследований по разработке методик количественного определения суммы флавоноидов и аскорбиновой кислоты;

- результаты морфолого-анатомических исследований и диагностические признаки сырья первоцвета весеннего и первоцвета кругшочашечного;

- результаты исследований и обоснование показателей качества с целью стандартизации JIPC изучаемых видов;

- результаты проведенных ресурсных исследований травы первоцвета крупночашечного;

- результаты фармакологических исследований ГЭТПВ и обоснование возможности создания новых лекарственных форм (ГЭТПВ и СЭТПВ).

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на итоговых научных конференциях молодых ученых и студентов, итоговых научных сессиях БГМУ и отделения медико-биологических наук Уфимского филиала НЦ РАМН «Химия и медицина» (Уфа, 2006; 2008 гг.); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора JI.H. Березнеговской (Томск, 2006 г.); на научно-практической конференции с международным участием, посвященной 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА (Ярославль, 2007 г.); на VI Всероссийском научном семинаре с молодежной научной школой «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.); на V Всероссийской конференции-школе «Химия и технология растительных веществ» (Уфа, 2008 г.).

Публикации. Основные положения диссертации отражены в 18 научных работах, из них 1 - в журнале, рекомендуемом ВАК, и одном патенте на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы «Объекты и методы исследования», экспериментальной части (4 глав), общих выводов, списка литературы и приложений. В тексте содержится 35 таблиц, 16 рисунков. Список цитируемой литературы включает 158 источников, из них 31 - на иностранных языках.

Во введении обоснована актуальность выбранной темы, определены цель и задачи исследования, показана научная и практическая значимость работы, представлены основные положения, выносимые на защиту.

В Обзоре литературы (Гл. 1) приведены сведения, отражающие современное состояние исследований по химическому составу и фармакологическому действию изучаемых представителей рода первоцвет, а также их применение в научной и народной медицине. Обоснована актуальность выбора объектов для проведения настоящего исследования.

Во второй главе приведены объекты и методы исследований.

Материалы третьей главы отражают результаты изучения качественного и количественного состава различных групп БАВ изучаемых видов первоцвета.

В четвертой главе представлены материалы по стандартизации и разработке проектов НД на лекарственное растительное сырье «Первоцвета листья».

Глава 5 посвящена морфолого-анатомическому изучению двух видов первоцвета в сравнительном аспекте, определению сроков заготовки и ресурсных запасов травы первоцвета крупночашечного на территории республики Башкортостан.

В шестой главе приведены экспериментальные данные по разработке технологии ГЭТПВ и СЭТПВ, результаты изучения фармакологической активности ГЭТПВ.

В приложениях приводятся материалы, подтверждающие практическую значимость проведенных исследований.

Объекты исследования. Объектами исследования являлись трава первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного, заготовленные в 2005-2009 гг. в Курской и Белгородской областях, а также Нуримановском, Чишминском, Иглинском и др. районах Башкортостана в фазу начала цветения. Сушка сырья - воздушно-теневая.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Изучение качественного и количественного состава биологически активных веществ травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного

В результате фотохимического изучения травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного установлено наличие фенольных соединений

(флавоноидов, дубильных веществ, кумаринов, фенолокислот, оксикоричных кислот), амино- и других органических кислот, тритерпеновых сапонинов, углеводов, макро- и микроэлементов. Результаты количественного определения различных групп БАВ в траве первоцвета крупночашечного и первоцвета весеннего представлены в таблице 1.

Таблица 1

Содержание различных групп БАВ в траве первоцвета крупночашечного и первоцвета весеннего

Группа БАВ Количественное содержание,%

Первоцвет кру пночашечный Первоцвет весенний

Полисахариды зд 3,3

Сумма свободных органических кислот 6,7 7,3

Аскорбиновая кислота 2,3 3,6

Дубильные вещества 5,2 5,4

Сумма тритерпеновых сапонинов в пересчете на урсоловую кислоту 7,5 3,3

Сумма флавоноидов в пересчете на рутин 3,9 5,5

Из данных таблицы I видно, что для ряда групп БАВ установлено приблизительно одинаковое их количественное содержание в сырье обоих видов растений. В то же время количество тритерпеновых сапонинов в пересчете на урсоловую кислоту в траве первоцвета крупночашечного более чем в два раза выше по сравнению с первоцветом весенним.

Впервые методами ТСХ (на пластинках «вогЬШ») и ВЭЖХ (на аминокислотном анализаторе «ААА-339», Чехия) проведено изучение аминокислотного состава исследуемых растений. Установлено наличие 13 свободных аминокислот (из них 8 - незаменимых): аргинин, валин, гистидин, глицин, изолейцин, лейцин, лизин, метионин, пролин, серин, треонин, тирозин, фенилаланин. Для количественной оценки определяли площади пиков идентифицированных амиинокислот. Содержание суммы аминокислот в траве первоцвета весеннего составило 6,2 мг%, первоцвета крупночашечного - 8,2 мг%.

Хроматографически в траве первоцвета, весеннего и первоцвета крупночашечного методами ТСХ (на пластинках «Sorbfil») и ВЭЖХ (хроматограф фирмы «Gilston», Франция, с последующей обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром для «Windows») обнаружены и идентифицированы с использованием стандартов фирм «Fluka», «Sigma», «ISN» (США) органические кислоты: щавелевая, лимонная, винная, маликовая, янтарная, фумаровая. Определено количественное содержание их суммы (табл. 1).

В обоих видах растений методами хроматографии (ТСХ, ВЭЖХ) идентифицировано 23 вещества фенольной природы. Для первоцвета весеннего впервые идентифицировано 14 соединений, из них преобладающими являются галловая кислота, рутин, апигенин, кемпферол. Для первоцвета крупночашечного впервые идентифицировано 23 соединения фенольной природы, которые в основном представлены кумаринами, флавоноидами, производными фенолкарбо-новых кислот (табл. 2).

Из данных таблицы 2 видно, что оба исследуемых вида первоцвета имеют аналогичный спектр фенольных соединений, однако более широко он представлен в сырье первоцвета крупночашечного.

ГОСТ 3166-76 «Листья первоцвета весеннего» не предусматривает проведения качественного и количественного анализа флавоноидов, а также таких показателей, как экстрактивные вещества, зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной, определение радионуклидов и микробиологической чистоты. Поэтому для объективной оценки качества сырья «Первоцвета листья» нами были разработаны методики качественного анализа флавоноидов, количественного определения суммы флавоноидов и аскорбиновой кислоты для данного вида сырья, представленные ниже в разделе «Стандартизация».

С использованием эмиссионного спектрального анализа (метод испарения) на базе лаборатории спектрального анализа ФГУ «Центр гигиены и эпидемиологии» впервые изучен макро- и микроэлементный состав надземных частей (травы) исследуемых растений (спектрометр «ДФС-8-1», Россия; фотомет-рирование спектрограмм с помощью атласа спектральных линий и спектров-

стандратов с погрешностью не более 2% в пересчете на золу). Установлено, что изучаемые виды сырья накапливают К, Са, Р, Ъъ., Ре, Си, Мп, I.

Таблица 2

Фенольные соединения травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного, идентифицированные методом ВЭЖХ

Группа БАВ Первоцвет весенний Первоцвет крупночашечный

Флавоноиды Апигенин Байкалин Витексин Дигидрокверцетин Кверцетин Рутин Кемпферол Лютеолин-7-гликозид Апигенин Байкалин Витексин Дигидрокверцетин Кверцетин Рутин Кверцимеритрин Гиперозид Яцеин

Простые фенолы Арбутин Арбутин

Дубильные вещества Танин Катехин

Кумарины Умбеллиферон Дигидрокумарин Кумарин О-метоксикумарин

Фенолокислоты Галловая кислота Галловая кислота Салициловая кислота

Оксикоричные кислоты Коричная кислота Кофейная кислота Феруловая кислота Хлорогеновая кислота Цикориевая кислота Коричная кислота Кофейная кислота Феруловая кислота Хлорогеновая кислота Цикориевая кислота Неохлорогеновая кислота О-кумаровая кислота

Стандартизация сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного Внешние признаки и микроскопия. Сравнительное морфологическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного позволило выявить следующие отличительные признаки: у первоцвета весеннего листья имеют сравнительно короткую эллипсоидальную пластинку листа, внезапно суженную в узко-крылатый черешок; для первоцвета крупночашечного характерны более длинные пластинки листа, постепенно суженные в крылатый,

часто, зубчатый черешок. У первоцвета весеннего чашечка цветка перепончатая, трубчато-колокольчатая, угловато-гранистая, 8-15 мм длины, вздувается лишь после цветения. У первоцвета крупночашечного чашечка ширококолокольчатая, вздутая до цветения, 12-18 мм длины.

Впервые проведено микроскопическое исследование цветоноса, чашелистика, венчика, поперечного среза черешка листа первоцвета весеннего, а также полное микроскопическое исследование травы первоцвета крупночашечного.

Лист. Эпидермис верхней и нижней стороны однослойный. Клетки верхнего эпидермиса - слегка извилистые, нижнего - сильноизвилистые, с тонкими оболочками; определены размеры клеток. Устьица аномоцитного типа с замыкающими клетками почковидной формы, овальной или округлой формы, расположены в основном на нижней, изредка - на верхней стороне.

В эпидермисе обеих сторон листа во множестве отмечены волоски двух типов - простые (изредка) и железистые (преимущественно); определены размеры волосков. Простые - 2-3 клеточные, расширены у основания и заострены на конце, с тонкими стенками, располагаются главным образом по краю листа; железистые - с шаровидными одноклеточными головками различной величины, расположенными на 3-клеточной ножке. Содержимое головок зачастую заполнено серовато-бурой массой.

Мякоть листа очень рыхлая, с многочисленными крупными межклетниками не только в губчатой, но и в палисадной ткани.

Клетки эпидермиса черешка прозенхимной формы, с наклонными боковыми стенками, тонкими оболочками, с изредка встречаемыми устьицами. Эпидермис опушен волосками - простыми и железистыми.

Изучение поперечного среза черешка проведено впервые и включено в проект ФС «Первоцвета листья». Черешок треугольной формы с роговидными выростами по бокам. Механическая ткань представлена уголковой колленхимой, расположенной в 5-7 слоев. Проводящая система включает один крупный пучок, расположенный в центре, и по два - в латеральных выростах. Выявлены отличительные признаки в строении железистых волосков: у первоцвета весен-

него железистые волоски с шаровидными одноклеточными головками, зачастую заполненными серовато-бурой массой, у первоцвета крупночашечного головки железистых волосков ничем не заполнены (рис. 1).

Д Е

Рис. 1. Фрагменты листа первоцвета весеннего (А, В, Д) и первоцвета крупночашечного (Б, Г, Е):

А, Б - верхний эпидермис листа (х400); В, Г - край листа (хЮО); Д, Е - поперечный срез черешка (хЮО). Обозначения: 1 - клетки эпидермиса, 2 - устьице, 3 - простой волосок, 4 - железистый волосок, 5 - эпидермис, 6 - проводящие пучки, 7 - основная паренхима, 8 - уголковая колленхима.

На основании проведенных исследований включены в проект ФС и ТУ морфолого-анатомические признаки листа первоцвета весеннего для цельного, измельченного и порошкованного сырья. Цельное сырье представляет собой смесь отдельных и измельченных листьев с черешками. Листья с черешком до 20 см длины, 2-6 см ширины, яйцевидные или яйцевидно-продолговатые, внезапно суженные в черешок, городчатые или неравномерно-городчатые по краю, на верхушке тупые, морщинистые, с вдавленными сверху и выступающими снизу жилками, серовато-зеленого цвета. Запах слабый. Вкус водного извлечения слегка горьковатый, слизистый.

Качественные реакции и ТСХ. Качественное обнаружение флавонои-дов проводили методом ТСХ в системе растворителей: спирт бутиловый - кислота ледяная уксусная - дистиллированная вода (4:1:1) и детектированием пластинки в УФ-свете.

Числовые показатели. В основу количественного определения суммы флавоноидов положен спектрофотометрический метод с использованием реакции флавоноидов с хлоридом алюминия в среде 70% спирта этилового с добавлением кислоты уксусной. Определены оптимальные условия экстракции суммы флавоноидов из листьев первоцвета: степень измельчения сырья - 1 мм, экстрагент - 70% спирт этиловый, нагревание на кипящей водяной бане -30 мин., соотношение сырье-экстрагент - 1:100. Устойчивое окрашивание извлечений с хлоридом алюминия наступает через 30 мин. и сохраняется в течение 1,5 ч., максимум светопоглощения - 408 нм. Расчет содержания суммы флавоноидов проводили в пересчете на рутин. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 3,25%.

С помощью разработанной методики были проанализированы образцы сырья, заготовленные из разных мест произрастания. Содержание суммы флавоноидов колебалось в них от 4,7 до 5,5%

Количественное определение аскорбиновой кислоты проводили СФ-методом, основанным на цветной реакции аскорбиновой кислоты с фосфорно-молибденовым комплексом. Подобраны оптимальные условия экстракции ас-

корбиновой кислоты: степень измельчения сырья - 1 мм, экстрагент — 40% этанол, нагревание на кипящей водяной бане - 30 мин., соотношение сырье-экстрагент - 1:25, экстрагирование проводили трижды по 50 мл экстрагента. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 4,48%.

С помощью разработанной методики проанализированы исследуемые образцы сырья; содержание аскорбиновой кислоты составило от 2,0 до 3,6%.

Проведена валидация методик количественного определения суммы фла-воноидов и аскорбиновой кислоты по следующим характеристикам: правильность, прецизионность, специфичность, линейность.

Для установления доброкачественности сырья на основании анализа образцов из различных мест заготовки, были предложены нормы числовых показателей: содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин — не менее 3%, аскорбиновой кислоты - не менее 1,5%, зола общая - не более 12%, зола, нерастворимая в '10% растворе кислоты хлористоводородной - не более 3,5%, влажность - не более 13%, экстрактивные вещества, извлекаемые водой - не менее 30%, извлекаемые 70% спиртом этиловым - не менее 40%. Показатели включены в проект ФС «Первоцвета листья».

Для стандартизации сырья проводили определение микробиологической чистоты, содержание радионуклидов, показатели которых включены в проект ФС «Первоцвета листья».

Ресурсно-биологические исследования травы первоцвета

Для оптимизации сроков заготовки сырья бьшо проведено изучение динамики накопления суммы флавоноидов и аскорбиновой кислоты в зависимости от фазы вегетации растений в траве первоцвета крупночашечного и листьях первоцвета весеннего. Установлены оптимальные сроки заготовки при максимальном содержании БАВ - начало цветения.

Определение запасов сырья травы первоцвета крупночашечного на территории республики Башкортостан (РБ) проводили на конкретных зарослях в районах РБ. В работе использованы картографические материалы и данные геоботанических описаний Института биологии Уфимского НЦ РАН, на основе которых был проведен целенаправленный поиск зарослей первоцвета крупно-

чашечного в районах РБ. В изученных районах первоцвет крупночашечный образует заросли, имеющие промысловое значение, в смешанных широколиственных и сосновых лесах, особенно в березняках и дубняках, на полянах и опушках лесов, на остепненных и злаково-разнотравных лугах. Объемы возможных ежегодных заготовок травы составляют от 0,038 до 0,263 т в пересчете на воздушно-сухую массу сырья.

Разработка технологии и изучение фармакологической активности густого экстракта из травы первоцвета весеннего

В результате проведенных исследований удалось установить, что наиболее рациональным типом экстракта, обеспечивающим максимальный выход полифенольных соединений, является ГЭТПВ. Изучены и определены оптимальные условия экстракции суммы флавоноидов: экстрагент- 70% спирт этиловый, степень измельчения сырья - 1 мм, соотношение сырье-экстрагент -1:10, а также технологические свойства травы первоцвета весеннего - насыпная масса, угол естественного откоса, коэффициент поглощения, степень набухания в воде и в 70% спирте этиловом.

Выбор оптимальных параметров экстрагирования сырья контролировали по содержанию суммы экстрактивных веществ и суммы флавоноидов в пересчете на рутин. В результате сравнительных исследований (методами бисмаце-рации, перколяции и реперколяции) в качестве оптимального метода экстрагирования был выбрана перколяция. Разработан способ получения ГЭТПВ в лабораторных условиях. Полученный экстракт представлял собой густую вязкую массу темно-зеленого цвета с приятным специфическим запахом, горьковатого вкуса, хорошо растворим в воде, спирте этиловом, не растворим в эфире, хлороформе, бутаноле, этилацетате.

Методами ТСХ, ВЭЖХ установлен компонентный состав фенольных соединений ГЭТПВ, представленный, в основном, кумаринами, флавоноидами, производными фенолкарбоновых кислот; идентифицировано 15 соединений, из которых преобладающими БАВ экстракта были гиперозид, рутин, витексин,

кверцимеритрин, коричная и феруловая кислоты. Содержание суммы флаво-ноидов в пересчете на рутин в образцах ГЭТПВ составляет от 6,6 до 7,3%.

На следующем этапе исследований была разработана технология получения гранул СЭТПВ: ГЭТПВ высушивали в сушильном шкафу при температуре 60° С до остаточной влажности 5%. Определены оптимальные условия получения гранул СЭТПВ: наполнитель - лактоза в соотношении 1:1, связывающая жидкость - 70% спирт этиловый.

Технология получения гранул СЭТПВ: предварительно высушенные лактозу и СЭТПВ просеивали через сито № 35, смешивали до однородности, добавляли постепенно при постоянном быстром перемешивании 70% спирт этиловый и продавливали через сито из нержавеющей стали с диаметром отверстий 2 мм. Влажные гранулы сушили тонким слоем в вытяжном шкафу, просеивали для отделения мелких и крупных фракций и упаковывали в герметично закрытые банки из темного стекла. Полученные серии гранул анализировали для определения условий и срока хранения по следующим показателям: время распадаемости, количество перешедших в раствор флавоноидов, сыпучесть, фракционный состав, содержание влаги, механическая прочность на истирание. Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин в СЭТПВ находится в пределах от 7,8 до 8,2%.

Экспериментальные исследования по изучению фармакологической активности ГЭТПВ выполнялись на белых мышах и крысах.

Изучение острой токсичности водных растворов ГЭТПВ в дозе до 3000 мг/кг (максимальная доза) показало малую токсичность препарата. Изучение влияния ГЭТПВ при повторном введении в течение 30 дней также подтвердило малую токсичность данного препарата.

Изучение антиоксидантной активности с помощью хемилюминометра «ХЛМ-003» позволило установить, Что при добавлении в модельные системы (генерирующая активные формы кислорода и с желточными липопротеидами) раствора ГЭТПВ происходит дозозависимое угнетение основных параметров хемилюминесценции - светосуммы свечения и амплитуды свечения. В обеих

модельных системах было установлено прямое антиоксидантное действие раствора ГЭТПВ.

Изучение антигипоксантного действия проводили в условиях экспериментальной нормобарической гипоксии с гиперкапнией. Продолжительность жизни животных, получавших раствор ГЭТПВ, была в 2 раза выше, а уровень МДА в тканях головного мозга был ниже, чем в группе контроля (гипоксия), что свидетельствует об антигипоксантной активности ГЭТПВ.

Влияние на проницаемость капилляров ГЭТПВ изучали с помощью модифицированного метода К.Н. Монаковой. При комбинированном стрессе в группе интактных и стрессированных животных, получавших раствор ГЭТПВ, достоверно увеличилось время появления петехий и время отчётливого их прокрашивания относительно групп контроля (интактных и стрессированных). Результаты эксперимента свидетельствуют о наличии у ГЭТПВ ангио-протекторного действия.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Проведено сравнительное фитохимическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного. С применением современных физико-химических методов установлено наличие фенольных соединений (в том числе флавоноидов, дубильных веществ, кумаринов), тритерпеновых сапонинов, органических кислот (в том числе аскорбиновой кислоты, аминокислот), углеводов, макро- и микроэлементов.

2. С использованием различных видов хроматографии (ТСХ, ВЭЖХ) в изученных растениях установлено наличие 13 аминокислот (из них 8 - незаменимых); идентифицировано 23 фенольных соединения, из которых 14 -в первоцвете весеннем, 23 - в первоцвете крупночашечном. Фенольные соединения представлены кумаринами: кумарином, о-метоксикумарином, умбелли-фероном; производными фенолкарбоновых кислот: галловой, хлорогеновой, кофейной, цикориевой, о-кумаровой, феруловой, коричной кислотами; флаво-ноидами - кверцетином, кемпферолом, гиперозидом, рутином и др.

3. Проведено морфолого-анатомическое изучение и выявлены диагностические признаки, позволяющие провести дифференциальную диагностику сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного. Дня первоцвета крупночашечного характерны более длинные пластинки листа по сравнению с первоцветом весенним, постепенно суженные в крылатый, часто, зубчатый черешок; чашечка широко-колокольчатая, вздутая до цветения; у первоцвета весеннего чашечка перепончатая, трубчато-колокольчатая, угловато-гранистая, вздувается после цветения. Анатомически: у первоцвета весеннего железистые волоски с шаровидными одноклеточными головками, зачастую заполненными серовато-бурой массой, у первоцвета крупночашечного головки железистых волосков не заполнены.

4. Разработаны спектрофотометрические методики количественного определения суммы флавоноидов и аскорбиновой кислоты в сырье первоцвета (ошибка единичного определения с 95% вероятностью соответственно 3,25 и 4,48%); проведена валидация методик по следующим характеристикам: правильность, прецизионность, специфичность, линейность.

5. Разработаны критерии оценки качества сырья первоцвета (содержание суммы флавоноидов, аскорбиновой кислоты, влажность, сумма экстрактивных веществ, извлекаемых водой и 70% спиртом этиловым, содержание золы общей и нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной и др,) и предложены нормы числовых показателей; определена микробиологическая чистота для цельного, измельченного и порошкованного сырья, содержание радионуклидов. Обоснован срок годности сырья - 2 года.

6. Определены запасы травы первоцвета крупночашечного и объем возможных ежегодных заготовок в некоторых районах республики Башкортостан с учетом природоохранных мероприятий. Объемы возможных ежегодных заготовок составляют от 0,038 до 0,263 т в пересчете на воздушно-сухую массу сырья. Обоснованы рациональные сроки заготовки сырья - начало цветения.

7. Разработана технология получения и методы стандартизации густого экстракта из травы первоцвета весеннего с содержанием суммы флавоноидов

в пересчете на рутин 6,6-7,3%. На его основе разработаны технология получения и методы стандартизации гранул сухого экстракта с содержанием суммы флавоноидов в пересчете на рутин 7,8-8,2%.

8. В результате предварительных доклинических исследований для густого экстракта из травы первоцвета весеннего впервые установлено наличие антиокси-дантного, антигипоксантного и ангиопротекторного видов действия; водный раствор густого экстракта отнесен к классу практически нетоксичных соединений.

9. Результаты проведенных исследований включены в проект ФС «Первоцвета листья» и ТУ «Трава первоцвета весеннего» № 9700-014-26795008-2005 (ООО «Травы Башкирии», г. Уфа)

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Латьшова, Г.М. Применение фитобальзама при лечении заболеваний сердечно-сосудистой системы / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова, Г.В. Соколов, Л.Т. Гильмутдинова // Мат-лы Всерос. научно-практ. конф., поев. 100-летию проф. Л.Н. Березнеговской (11-12 сент. 2006 г.). - Томск, 2006 г. - С. 215-217.

2. Латыпова, Г.М. Влияние экстракта первоцвета весеннего на клиническое течение заболеваний сердечно-сосудистой системы в период реабилитации / Г.М. Латыпова, Г.В. Соколов, Л.Т. Гильмутдинова, З.Р. Романова // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: сб. мат. науч.-практ. конф. С междунар. участием Ярослав, гос. акад. - Ярославль, 2007 г. - С. 180-182.

3. Латьшова, Г.М. Изучение качественного состава фенольных соединений первоцвета весеннего / Г.М. Латыпова, Г.В. Соколов, З.Р. Романова // Современные вопросы теории и практики лекарствоведения: сб. мат. науч.-практ. конф. С междунар. участием Ярослав, гос. акад. - Ярославль, 2007 г. - С. 183-185.

4. Латыпова, Г.М. Разработка методики количественного определения флавоноидов в сырье первоцвета весеннего / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова, В.Н. Бубенчикова, В.А. Катаев // Башкирский химический журнал. - 2007. -№5.-С. 67-69.

5. Латыпова, Г.М. Исследование состава фенольных соединений первоцвета весеннего, произрастающего во флоре Башкортостана / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова, В.Н. Бубенчикова, В.А. Катаев, Л.Т. Гильмутдинова, Г.В. Соколов // Башкирский химический журнал. - 2007. - № 5. - С. 34—36.

6. Латыпова, Г.М. Применение экстракта первоцвета весеннего в восстановительном лечении больных ишемической болезнью сердца / Г.М. Латыпова, Г.В. Соколов, Л.Т. Гильмутдинова, З.Р. Романова, А.Н. Михайлова, Н.Т. Габ-дуллин // Вестник восстановит, мед-ны. - 2007. - № 2. - С. 58-60.

7. Закиева, C.B. Изучение состава травы первоцвета весеннего флоры Башкортостана / C.B. Закиева, З.Р. Романова // Химия и медицина : тез. докл. VI Всерос. науч. семинара с молодеж. науч. школой (26-29 ноября 2007 г.; г. Уфа). - Уфа: Гилем, 2007. - С. 154-155.

8. Исхаков, И.Р. Исследование антиоксидантной активности экстракта первоцвета весеннего / И.Р. Исхаков, Р.Т. Сафаргалиева, З.Р. Романова // Вопросы теоретической и практической медицины: сб. науч. тр. 73-й Респ. науч. конф. студентов и мол. уч. с межд. участием - Уфа: БГМУ, 2008. - С. 168-170.

9. Соколов, Г.В. Исследование влияния экстракта травы первоцвета на клиническое течение сердечно-сосудистых заболеваний / Г.В. Соколов, Л.Т. Гильмутдинова, Г.М. Латыпова, З.Р. Романова // Вопросы традиционной медицины : мат-лы межрегион, науч.-практ. конф.-Уфа, 2008. - С. 189-195.

10. Латыпова, Г.М. К вопросу об изучении антиоксидантной активности экстракта травы первоцвета весеннего / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова, Г.В. Соколов // Интегративная медицина 2008. Лекарственные растительные средства. Фитотерапия: мат-лы межд. форума- Москва, 2008. - С. 155-161.

11. Латыпова, Г.М. Изучение антиоксидантных свойств травы первоцвета / Г.М. Латыпова, Л.Т. Гильмутдинова, З.Р. Романова, Г.В. Соколов, А.Н. Михайлова // Химия и технология растительных веществ: тез. докл. V Всерос. науч. конф. - Сыктывкар-Уфа, 2008. - С. 188.

12. Латыпова, Г.М. Сравнительное изучение качественного состава экстракта и травы первоцвета весеннего / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова, Г.В. Соко-

лов, JI.T. Гильмутдинова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической промышленности: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2008. - С. 296-297.

13. Пат. 2342942 Российская Федерация, МПК51 А61К 36/185, А61Р 39/06. Средство растительного происхождения, обладающее антиоксидантной активностью / Латыпова Г.М., Романова З.Р., Соколов Г.В. и др.; заявитель и патентообладатель ГОУ ВПО БГМУ Росздрава. - № 2007144096/15; заявл. 16.11.07; опубл. 10.01.09, Бюл. № 1. - 8 с. с ил.

14. Романова, З.Р. Разработка показателей качества травы первоцвета весеннего / З.Р. Романова, Г.М. Латыпова // Аграрная Россия. Спец. вып. - 2009. - С. 100.

15. Латыпова, Г.М. Изучение качественного состава фенольных соединений первоцвета крупночашечного / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова // Аграрная Россия. Спец. вып. - 2009. - С. 89.

16. Латыпова, Г.М. Определение запасов сырья травы первоцвета крупночашечного в районах Башкирии / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. -Пятигорск, 2009. - Вып. 64. - С. 73-75.

17. Латыпова, Г.М. Определение технологических свойств и числовых показателей травы первоцвета весеннего / Г.М. Латыпова, Р.Я. Давлетшина, З.Р. Романова, З.М. Искандарова // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск, 2009. - Вып. 64. -С. 176-177.

18. Латыпова, Г.М. Выбор метода экстрагирования надземной части первоцвета, произрастающего во флоре Башкортостана, для получения экстракта / Г.М. Латыпова, Р.Я. Давлетшина, В.Н. Бубенчикова, З.Р. Романова, Г.В. Аюпо-ва // Вестник Оренб. гос. ун-та. Спец. вып. - 2009. - С. 101-103.

19. Латыпова, Г.М. Исследование качественного и количественного состава флавоноидных соединений густого экстракта первоцвета лекарственного / Г.М. Латыпова, З.Р. Романова, В.Н. Бубенчикова, Г.В. Аюпова // Химия раст. сырья. - 2009. - № 4. - С. 113-116.

Романова Земфира Рашитовна

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ПЕРВОЦВЕТА ВЕСЕННЕГО И ПЕРВОЦВЕТА КРУПНОЧАШЕЧНОГО

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Издательская лицензия № 06788 от 01.11.2001 г. ООО «Издательство «Здравоохранение Башкортостана» 450000, РБ, г. Уфа, а/я 1293; тел.: (347) 250-81-20; тел./факс (347) 250-13-82.

Подписано в печать 24.12.2010 г. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Бумага офсетная. Отпечатано на ризографе. Усл. печ. л. 1,0. Уч.-изд. л. 1,5. Тираж 100. Заказ № 583.

Оглавление диссертации Романова, Земфира Рашитовна :: 2010 :: Курск

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Современное состояние исследований первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

1.1. Ботанико- морфологическая характеристика первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

1.2. Химический состав первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

1.3. Применение первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в научной и народной медицине.

ГЛАВА 2. Объекты и методы исследований.

2.1. Объекты исследования, их характеристика.

2.2. Методы фитохимических исследований.

2.2.1. Приготовление водных экстрактов для проведения качественых реакций и хроматографического анализа.

2.2.2. Углеводы.

2.2.2.1. Свободные сахара.

2.2.2.2. Связанные сахара. . .'.

2.2.2.3. Количественное определение водорастворимых полисахаридных комплексов.

2.2.3. Аминокислоты.

2.2.3.1. Качественное обнаружение.

2.2.3.2. Количественное определение.

2.2.4. Органические кислоты.

2.2.4.1. Качественное обнаружение.

2.2.4.2. Изучение органических кислот методом ВЭЖХ.

2.2.4.3. Количественное определение.

2.2.5. Дубильные вещества.

2.2.5.1. Качественное обнаружение.

2.2.5.2. Количественное определение.

2.2.6. Тритерпеновые сапонины.

2.2.6.1. Качественное обнаружение.

2.2.6.2. Количественное определение.

2.2.7. Приготовление спирто-водных извлечений и фракционирование фенольных соединений органическими растворителями.

2.2.8. Изучение фенольных соединений.

2.2.8.1. Арбутин.

2.2.8.2. Кумарины.

2.2.8.3. Фенолкарбоновые кислоты.

2.2.8.4. Флавоноиды.

2.2.8.5. Изучение фенольных соединений методом ВЭЖХ.

2.2.8.6. Количественное определение суммы флавоноидов.

2.2.9. Макро- и микроэлементный состав.

2.3. Методики стандартизации сырья.

2.3.1. Методы отбора проб для анализа.

2.3.2. Морфолого-анатомический анализ.

2.3.3. Определение числовых показателей качества сырья.

2.3.4. Определение микробиологической чистоты сырья.

2.3.5. Определение содержания радионуклидов.

2.3.6. Определение сроков хранения сырья.

2.4. Статистическая обработка данных.

2.5. Методы токсико-фармакологических исследований.

2.5.1. Изучение острой токсичности.

2.5.2. Исследование антиоксидантной активности.

2.5.2.1. Методика исследования хемилюминесценции на приборе «ХЛМ

003».

2.5.3. Изучение антигипоксантного действия.

2.5.4. Изучение влияния на проницаемость капилляров.

2.6. Методика определения ресурсных запасов лекарственного растительного сырья.

ГЛАВА 3. Изучение качественного и количественного состава биологически активных веществ первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

3.1. Качественный анализ основных групп биологически активных соединений.

3.1.1. Углеводы.

3.1.1. 1. Свободные сахара.

3.1.1.2. Связанные сахара.

3.1.1.3. Количественное определение водорастворимых полисахаридных комплексов.

3.1.2. Аминокислоты.

3.1.2.1. Качественное обнаружение.

3.1.2.2. Количественное определение.

3.1.3. Органические кислоты.

3.1.3.1. Качественное обнаружение.

3.1.3.2. Количественное определение.

3.1.4 . Дубильные вещества.'.

3.1.4.1. Качественное обнаружение.

3.1.4.2. Количественное определение.

3.1.5. Тритерпеновые сапонины.

3.1.5.1. Качественное обнаружение.

3.1.5.2. Количественное определение.

3.1.6. Изучение фенольных соединений.

3.1.6.1. Арбутин.

3.1.6.2. Кумарины.

3.1.6.3. Фенолкарбоновые кислоты.

3.1.6.4. Флавоноиды.

3.1.6.5. Изучение фенольных соединений методом ВЭЖХ.

3.1.6.6. Количественное определение суммы флавоноидов.

3.1.7. Макро- и микроэлементный состав.

Выводы по главе 3.

ГЛАВА 4. Стандартизация и разработка нормативной документации на лекарственное растительное сырье «Первоцвета листья».

4.1. Морфологическое исследование листа первоцвета весеннего.

4.2. Микроскопическое исследование листа первоцвета весеннего.

4.3. Разработка методики качественного обнаружения флавоноидов в листьях первоцвета весеннего.

4.4. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в листьях первоцвета весеннего.

4.5. Разработка методики количественного определения аскорбиновой кислоты в листьях первоцвета весеннего.

4.6. Установление числовых показателей и сроков годности сырья.

Выводы по главе 4.

ГЛАВА 5. Ресурсно-биологические исследования травы первоцвета.

5.1. Морфолого-анатомическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

5.2. Определение сроков заготовки травы первоцвета крупночашечного

5.3. Определение ресурсных запасов сырья травы первоцвета крупночашечного в разных районах республики Башкортостан. . ■.

Выводы по главе 5.

ГЛАВА 6. Разработка технологии и изучение фармакологической активности фитопрепарата на основе травы первоцвета весеннего.

6.1. Получение фитопрепаратов первоцвета весеннего.

6.1.1. Разработка технологии и стандартизации ГЭТПВ.

6.1.2. Разработка технологии и стандартизации гранул СЭТПВ.

6.2. Изучение острой токсичности ГЭТПВ.

6.3. Изучение влияния ГЭТПВ при повторном введении.

6.4. Исследование антиоксидантной активности ГЭТПВ.

6.5. Изучение антигипоксантного действия ГЭТПВ.

6.6. Изучение влияния ГЭТПВ на проницаемость капилляров.

Выводы по главе 6.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Романова, Земфира Рашитовна, автореферат

Растительные препараты, содержащие природный комплекс полифе-нольных соединений, полисахаридов, органических кислот и других биологически активных веществ (БАВ), обладают широким спектром фармакотерапев-тического действия: антиоксидантным, антигипоксантным, ангиопротектор-ным, антиатеросклеротическим и многими другими.

В качестве импортозамещающих отечественных сырьевых источников комплекса БАВ, содержащего полифенольные соединения, органические кислоты и тритерпеновые сапонины, представляют интерес широко распространенные на территории РФ растения рода Primula - первоцвет весенний (Primula veris L., или P. officinalis (L.) Hill.) и его подвид первоцвет крупночашечный (P. macrocalyx Bunge). В отечественной официнальной медицинской практике разрешено к применению 10 зарубежных препаратов на основе корневищ первоцвета весеннего в качестве отхаркивающих средств. Листья первоцвета весеннего применяются в качестве поливитаминного пищевого растительного сырья. Первоцвет крупночашечный широко используется в народной медицине. Однако в химическом отношении надземная часть первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного изучена недостаточно. Существующая отечественная нормативная документация (НД) на листья первоцвета весеннего (ГОСТ 3166-76) не позволяет объективно оценивать качество лекарственного растительного сырья (ЛРС), поскольку не предусматривает определение содержания действующих веществ.

Таким образом, изучение отдельных представителей рода Primula, произрастающих на территории РФ, первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного как сырьевых источников для расширения арсенала отечественных эффективных и безопасных препаратов, определение их химического состава, спектра фармакологического действия, критериев оценки качества сырья, изучение сырьевой базы является актуальной проблемой.

Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи:

- разработать характеристики подлинности и показатели качества сырья;

- изучить специфическую фармакологическую активность ГЭТПВ.

Научная новизна. Впервые проведено фармакогностическое изучение травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного в сравнительном аспекте, обоснована целесообразность использования сырья обоих видов производящих растений в качестве источников соединений фенольной природы и органических кислот.

Хроматографически (тонкослойной хроматографией (ТСХ), высокоэффективной жидкостной хроматографией (ВЭЖХ)) идентифицировано:

- в траве первоцвета весеннего - 17 соединений фенольной природы, из которых 14 обнаружены впервые: арбутин, умбеллиферон, галловая, хлороге-новая, кофейная, цикориевая, феруловая, коричная кислоты, рутин, апигенин, лютеолин-7-гликозид, дигидрокверцетин, витексин, байкалин;

Впервые разработана технология получения отечественных растительных препаратов на основе травы первоцвета весеннего (ГЭТПВ и СЭТПВ); установлена антиоксидантная активность, ангиопротекторное и антигипоксант-ное действие ГЭТПВ. Таким образом, в результате комплекса проведенных исследований разработаны научно обоснованные составы, технология, критерии и методы оценки качества новых отечественных препаратов и исходного сырья отечественных представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

Практическая значимость. Полученные результаты позволили обосновать возможность и целесообразность расширения отечественной номенклатуры официнального сырья за счет двух представителей рода Primula - первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного, а также расширить сведения об их морфолого-анатомическом строении, химическом составе, биологической активности. Результаты выполненных фармакологических исследований являются экспериментальным обоснованием для проведения дальнейшего комплекса исследований с целью создания современных импортозамещающих препаратов на основе сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного.

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- проект ФС «Первоцвета листья» подготовлен и принят к рассмотрению в установленном порядке;

- разработанные ТУ «Трава первоцвета весеннего», утверждены в установленном порядке и включены в ТУ «Сырье растительное» № 9700-01426795008-2005 (ООО «Травы Башкирии», г. Уфа);

- методики количественного определения суммы флавоноидов (акты внедрения - № 35 от 18.11.2009 г. - ОКК ООО «Травы Башкирии»; № 25 от 20.11.2009 г. - «Центр контроля качества лекарственных средств» ГОУ ВПО БГМУ) и аскорбиновой кислоты (соответственно, акты № 36 от 18.11.2009 г. и № 26 от 20.11.2009 г.) в траве первоцвета весеннего;

- патент на изобретение № 2342942 «Средство растительного происхождения, обладающее антиоксидантной активностью» от 10.01.2009 г.

Положения, выдвигаемые на защиту:

- результаты изучения фитохимического состава травы первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;

- результаты морфолого-анатомических исследований и диагностические признаки сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного;

- результаты исследований и обоснование показателей качества с целью стандартизации ЛРС изучаемых видов;

- результаты проведенных ресурсных исследований травы первоцвета крупночашечного;

Апробация работы. Основные положения диссертации были представлены на итоговых научных конференциях молодых ученых и студентов, итоговых научных сессиях БГМУ и отделения медико-биологических наук Уфимского филиала НЦ РАМН «Химия и медицина» (Уфа, 2006, 2008 г.г.); на Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 100-летию со дня рождения профессора Л.Н. Березнеговской (Томск, 2006 г.); на научно-практической конференции с международным участием, посвященной 25-летию фармацевтического факультета ЯГМА (Ярославль, 2007 г.); на VI Всероссийском научном семинаре с молодежной научной школой «Химия и медицина» (Уфа, 2007 г.); на V Всероссийской конференции-школе «Химия и технология растительных веществ» (Уфа, 2008 г.).

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое исследование первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного"

ВЫВОДЫ

2. С использованием различных видов хроматографии (ТСХ, ВЭЖХ) в изученных растениях установлено наличие 13 аминокислот (из них 8 — незаменимых); идентифицировано 23 фенольных соединения, из которых 14 - в первоцвете весеннем, 23 - в первоцвете крупночашечном. Фенольные соединения представлены кумаринами: кумарином, о-метоксикумарином, умбелли-фероном; производными фенолкарбоновых кислот: галловой, хлорогеновой, кофейной, цикориевой, о-кумаровой, феруловой, коричной кислотами; флаво-ноидами - кверцетином, кемпферолом, гиперозидом, рутином и др.

3. Проведено морфолого-анатомическое изучение и выявлены диагностические признаки, позволяющие провести дифференциальную диагностику сырья первоцвета весеннего и первоцвета крупночашечного. Для первоцвета крупночашечного характерны более длинные пластинки листа по сравнению с первоцветом весенним, постепенно суженные в крылатый, часто, зубчатый черешок; чашечка широко-колокольчатая, вздутая до цветения; у первоцвета весеннего чашечка перепончатая, трубчато-колокольчатая, угловато-гранистая, вздувается после цветения. Анатомически: у первоцвета весеннего железистые волоски с шаровидными одноклеточными головками, зачастую заполненными серовато-бурой массой, у первоцвета крупночашечного головки железистых волосков не заполнены.

4,48 %); проведена валидация методик по следующим характеристикам:- правильность, прецизионность, специфичность, линейность.

5. Разработаны критерии оценки качества сырья первоцвета (содержание суммы флавоноидов, аскорбиновой кислоты, влажность, сумма экстрактивных веществ, извлекаемых водой и 70 % спиртом этиловым, содержание золы общей и нерастворимой в 10 % растворе кислоты хлористоводородной и др.) и предложены нормы числовых показателей; определена микробиологическая чистота для цельного, измельченного и порошкованного сырья, содержание радионуклидов. Обоснован срок годности сырья - 2 года.

7. Разработана технология получения и методы стандартизации густого экстракта из травы первоцвета весеннего с содержанием суммы флавоноидов в пересчете на рутин 6,6-7,3 %. На его основе разработаны технология получения и методы стандартизации гранул сухого экстракта с содержанием суммы флавоноидов в пересчете на рутин 7,8-8,2 %.

8. В результате предварительных доклинических исследований для густого экстракта из травы первоцвета весеннего впервые установлено наличие ан-тиоксидантного, антигипоксантного и ангиопротекторного видов действия; водный раствор густого экстракта отнесен к классу практически нетоксичных соединений.

9. Результаты проведенных исследований включены в проект ФС «Первоцвета листья» и ТУ «Трава первоцвета весеннего» № 9700-014-267950082005 (ООО «Травы Башкирии», г. Уфа)

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Романова, Земфира Рашитовна

1. Александрова, А.Е. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация /

2. A.Е. Александрова, А.П. Арзамасцев, В.Л. Багирова. СПб.: СпецЛит, 2001. - 223с.

3. Алексеев, Ю.Е. Определитель высших растений Башкирской АССР / Ю.Е. Алексеев, А.Х. Галеева, И.А. Губанов. -М.: Наука, 1989. 375с.

4. Ареалы лекарственных и родственных им растений СССР (Атлас) / Под ред. В.М. Шмидта. 2-е изд., испр. Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1990. - 224 с.

5. Арзамасцев, А.П. Оценка показателей антиоксидантной активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья / А.П. Арзамасцев, Е.И. Шкарина, Т.В. Максимова//Хим. фармац. журн. - 1999. - № 11. - С. 17-20.

6. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР / Под ред. П.С. Чикова. М.: Изд-во ГУК, 1976. - 340с.

7. Атлас лекарственных растений СССР / Под ред. Н.В. Цицина. М.: Госкомиздат, 1962. - С. 420-421.

8. Багирова, В.Л. О стандартизации лекарственных средств на современном этапе / В.Л. Багирова, Е.Л. Ковалева, Н.П. Садчикова // Хим.-фарм. журн.-2000. Т.34, №5. - С. 47-48.

9. Баева, В.М. Изучение полифенольного состава водных извлечений травы некоторых видов манжетки / В.М. Баева, A.M. Можайский // Фармация. 2001. -№ 5. - С. 25-26.

10. Бакин, О.В. Сосудистые растения Татарстана / О.В. Бакин, Т.В. Рогова, А.П. Ситников. Казань: Изд-во Казанского ун-та, 2000. - 496 с.

11. Бандюкова, В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды /

12. B.А. Бандюкова//Химия природ, соединений. 1983. - № 3. -С. 263-273.

13. Барнаулова, С.О. Пищевые лекарственные растения как ангиопротек-торы / С.О. Барнаулова, О.Д. Барнаулов // Юбилей. X науч.-практ. конф. «Ней-роиммунология» (28-31 мая 2001 г., г. Москва). Т. 2, СТ. 49 - С. 223-297.

14. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. Л.: Наука, 1963. - С. 435-436.

15. Беликов, B.B. Методы анализа флавоноидных соединений / В.В. Беликов, М.С. Шрайбер // Фармация. 1970. - № 1. - С. 68-72.

16. Беликов, В.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов / В.В. Беликов, Т.В. Точкова // Фенольные соединения и их физиологические свойства. Алма-Ата, 1973.-С. 168-172.

17. Биологически активные вещества растительного происхождения / Б.Н. Головнин, Р.Н. Руденская, И.А. Трофимова, А.И. Шретер; отв. ред. В.Ф. Семихов. М.: Наука, 2001. - 350 с.

18. Брезгин, Н. Лекарственные растения центральной части России / Н. Брезгин. М.: Медицина, 1993. - 320 с.

19. Бубенчиков, P.A. Флавоноиды фиалки трехцветной / P.A. Бубенчиков, И.Л. Дроздова // Фармация. 2004. - № 2. - С. 11-12.

20. Виноградова, Р.П. Физико-химические методы анализа в биохимии / Р.П. Виноградова, Б.Л. Цидзевич, С.Н. Храпунов. Киев: Наука Думка, 1983. - 387 с.

21. Гаммерман, А.Ф. Дикорастущие лекарственные растения СССР / А.Ф. Гаммерман, И.И. Гром. М.: Медицина, 1976. - С. 132.

22. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е Дмитрук. Новосибирск: Наука, 1990. - 333 с.

23. Гонтарь, Э.М. Витаминоносность некоторых видов Primula L. Алтая / Э.М. Гонтарь // Эколого-морфологические и биологические особенности полезных растений дикорастущей флоры Сибири. Новосибирск: Медицина, 1970.-С. 262-264.

24. ГОСТ 17768-90. Средства лекарственные. Упаковка, маркировка, транспортировка и хранение. М., 1990. - 24 с.

25. ГОСТ 3166-76. Листья первоцвета весеннего. Технические требования на продукцию, поставляемую на экспорт. Взамен ГОСТ 3166-46; введ. 01.07.1977.-М., 1977.-С. 51-53.

26. Государственная фармакопея СССР. Вып. 1: Общие методы анализа/ МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

27. Государственная фармакопея СССР. Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989.-400 с.

28. Государственная фармакопея Российской Федерации/ Минздравсоц-развития России. 12-е изд. - М.: Научный центр экспертизы средств применения, 2008. - 704 с.

29. Государственный реестр лекарственных средств М.: Минздравмед-пром РФ, 1996.-608 с.

30. Государственный реестр лекарственных средств М.: Минздрав России, 2001.-Т. 1.-1247 с.

31. Дикорастущие полезные растении России / Отв. ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Лесиовская. СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. - 663с.

32. Дремина, Е.С. Определение антиоксидантной активности биологических и лекарственных препаратов: методологические аспекты / Е.С. Дремина,

33. B.C. Шаров, Ю.А. Владимиров // Пульмонология. 1995. - № 1. - С. 73-75.

34. Жукович, E.H. Стандартизация густого экстракта каштана конского / E.H. Жукович, Л.А. Шарикова, Т.Ф. Прибыткова // Фармация. 2005. - № 2.1. C. 12-14.

35. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений / М.Н. Запрометов. М.: Высш. Шк., 1974. - 214с.

36. Зенкевич, И.Г. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки / И.Г. Зенкевич, В.Л. Багирова, Т.А. Сокольская // Фармация. 2002. - № 1. -С. 43-45.

37. Зенкевич, И.Г. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки (продолжение) / И.Г. Зенкевич, В.Л. Багирова, Т.А. Сокольская // Фармация. — 2002.-№2.-С. 45-48.

38. Зенкевич, И.Г. Обзор физико-химических методов стандартизации настоек, экстрактов и эликсиров в ведущих странах Европы и Америки (продолжение) / И.Г. Зенкевич, В.Л. Багирова, Т.А. Сокольская // Фармация. — 2002.-№3.-С. 45-46.

39. Ильясова, С.М. Выявление флавоноидов в листьях калины / С.М. Ильясова, Д.М. Попов // Фармация. 2005. - № 5. - С. 12-15.

40. Исследование микроэлементного состава объектов растительного происхождения / Д.А. Муравьева и др.. // Юбилей, науч.-практ. конф. «Достижения современной фармацевтической науки и образования практическому здравоохранению». - Пермь, 1997. - С. 224.

41. Касумханлы, P.A. Клиническое испытание местного Primula macro-calyx как отхаркивающего средства / P.A. Касумханлы // Науч. тр. / Азерб. пед. ин-т.- 1945.-Т. 1.-С. 165-166.

42. Клебанов, Г.И. Оценка антиоксидантной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов / Г.И. Клебанов, М.В. Бабенкова, Ю.О. Теселкин // Лаб. Дело. 1988. - № 5. - С. 59-62.

43. Клеопов, Ю.Д. Анализ флоры широколиственных лесов европейской части СССР / Ю.Д. Клеопов. Киев: Наукова думка, 1990. - 352 с.

44. Колесова, В.Г. Антиоксидантная терапия растениями / В.Г. Колесова,

45. B.А. Дадали, В.И. Лойко // Эфферентная терапия. 1996. - Т.2, № 1. - С. 67-70.

46. Коломиец, Н.Э. Вопросы стандартизации травы хвоща полевого / Н.Э. Коломиец, Г.И. Калинкина // Фармация. 2007. - № 1. - С. 11-14.

47. Косман, В.М. Информационное обеспечение для идентификации фе-нольных соединений в обращенно-фазовой ВЭЖХ. Флавоны, флавонолы и их гликозиды / В.М. Косман, И.Г. Зинкевич // Раст. ресурсы. 1997. - Т. 33, вып. 2. - С. 14-26.

48. Костюк, В.А. Антиокислительная активность флавоноидов в различных системах перекисного оксиления липидов / В.А. Костюк, А.И. Потапович,

49. C.М. Терещенко // Биохимия. 1988. - Т. 53, № 8. - С. 1365-1370.

50. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.И. Кочетков. М.: Химия, 1970. - 378 с.

51. Крикова, A.B. Биологическая активность растительных источников флавоноидов / A.B. Крикова, Н.С. Ляхова, B.C. Давыдов // Фармация. 2006. -№3.-С. 36-37.

52. Куликов, П.В. Конспект флоры Челябинской области (сосудистые растения) / П.В. Куликов. Екатеринбург-Миасс: «Геотур», 2005. - 537с.

53. Куркин, В.А. Определение флавоноидов в траве чистотела большого /

54. B.А. Куркин, Е.С.Артамонова // Фармация. 2007. - № 5. - С. 10-12.

55. Кучеров, Е.В. Дикорастущие пищевые растения и их использование / Е. В. Кучеров. Уфа: РИО Госкомиздата БССР, 1990. - 160 с.

56. Кучеров, Е.В. Полезные растения Южного Урала / Е. В. Кучеров, Г.К. Байков, И.Б. Гуфранова. М.: Наука, 1976. - 264 с.

57. Кучеров, Е.В. Ресурсы основных видов дикорастущих лекарственных растений в Башкирии / Е.В. Кучеров, А.Х. Галеева. Уфа: Башкирский Науч. Центр Урал. отд. АН СССР, 1991. - 114 с.

58. Кучеров, Е.В. Целебные растения и их применение / Е.В. Кучеров, Д.Н. Лазарева. Уфа, 1993. - 287 с.

59. Лавренов, В.К. Важнейшие лекарственные растения / В.К. Лавренов, Г.В. Лавренова. М.: «Издательство Аст», 2004. - 510 с.

60. Ладынина, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Ладынина, Р.С. Морозова. Л., 1990.-304 с.

61. Лекарственное растительное сырье. Фармакогнозия: учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб.: СпецЛит., 2004. - 765 с.

62. Листья подорожника большого // Государственная фармакопея СССР. Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье // МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - С. 264-268.

63. Лужников, Е.А. Клиническая токсикология. / Е.А. Лужников. М.: Медицина, 2000. - 416 с.

64. Лукманова, К.А. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерон / К.А. Лукманова, В.А. Рябчук, Н.Х. Салихова // Фармация. -2000.-№ 1.-С. 25-27.

65. Лысенко, Т.А. Эколого-биологические особенности Primula veris L. В лесостепи Украины / Т.А. Лысенко // Раст. ресурсы. 1994. - вып. 3.1. C. 15-24.

66. Макарова, М.Н. Антирадикальная активность флавоноидов и их комбинаций с другими антиоксидантами / М.Н. Макарова, В.Г. Макаров, И.Г. Зенкевич // Фармация. 2004. - № 2. - С. 30-32.

67. Манолова, Н. Лечебни растения инхибитори на вируси / Н. Маноло-ва, В. Максимова. София, 1988. - 148 с.

68. Мараховский, Ю.Х. Значение биофлавоноидов в медицине / Ю.Х. Мараховский // Здравоохранение Минск. 1999. - № 7. - С. 33-35.

69. Матющенко, Н.В. Стандартизация плодов рябины / Н.В. Матющенко, Т.А. Степанова // Фармация. 2003. - № 5. - С. 16-18.

70. Машковский, М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. -15-е изд., перераб., испр. и доп. М.: Новая волна, 2005. - 1200 с.

71. Меньшикова, Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окси-лительных процессов / Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков // Успехи соврем, биологии. 1993. - Т. ИЗ, вып. 4. - С. 442-455.

72. Методика определения запасов лекарственных растений: учеб. пособие / А.И. Шретер, И.Л. Крылова, H.A. Борисова и др. М., 1986. - 51 с.

73. Методические рекомендации по санитарному контролю за содержанием радиоактивных веществ в объектах внешней среды. М., 1980. - 12 с.

74. Мичник, О.В. Разработка технологии сухого гранулированного напитка с экстрактом примулы / О.В. Мичник // 49-я регион, конф. «Фармация». Пятигорск, 1994. - С. 51.

75. Мичник, О.В. Химический состав первоцвета крупночашечкового / О.В. Мичник // Раст. ресурсы . 1976. - Т. 12, вып. 3. - С. 391-394.

76. Мичник, О.Ю. Методы получения сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья / О.Ю. Мичник // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: сб. науч. тр. Пятигорск, 2004. -Вып. 59.-С. 101.

77. Муравьев, И.А. Спектрофотометрический метод количественного определения урсоловой кислоты / И.А. Муравьев, В.В. Шатило, В.Ф. Семен-ченко // Химия природ, соед. 1972. - № 6. - С. 738.

78. Муравьева, В.И. Исследования растений, применяемых в народной медицине, на содержание аскорбиновой кислоты / В.И. Муравьева, А.И. Баньковский // Науч. тр. / ВНИИ лек. и аром. раст. 1974. - Вып. 9. -С. 39-118.

79. Никонов, Г.К. Основы современной фитотерапии / Г.К. Никонов, Б.М. Мануйлов. М.: Медицина, 2005. - 520 с.

80. Определитель высших растений Башкирской АССР. М.: Наука, 1989.-375 с.

81. Определитель сосудистых растений Среднего Урала. М.: Наука, 1994.-525 с.

82. ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. М., 2000. - 55 с.

83. ОФС 42-0011-03. Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье. Стронций-90, цезий-137. Отбор проб, анализ, оценка результатов. М., 2003. - 27 с.

84. ОФС 42-0013-03. Правила приемки лекарственного растительного сырья и методы отбора проб // Фармация. 2003. - № 6. - С. 3-8.

85. ОФС 42-0067-07 «Методы микробиологического контроля лекарственных растительных средств, состоящих из одного вида сырья или нескольких (сборов) фасованная продукция, а также растительного сырья «ангро».

86. Оценка безопасности лекарственного растительного сырья в БАДах и фитопрепаратах / В.А. Тутельян, И.А. Самылина, С.А. Хотимченко и др.// Фармация. 2009. - № 1. - С. 3-5.

87. Пастушенков, JI.B. Растения антигипоксанты / JI.B. Пастушенков, Е.Е. Лесиовская. СПб.: Наука, 1991. - С. 26-27.

88. Пахомов, В.П. Определение in vitro фитоантиоксидантного потенциала лекарственных растений / В.П. Пахомов, А.В. Копейкина, А.А. Макарян // Рос. Аптеки. 2003. - №5. - С. 64-66.

89. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; Семейства Paeoniaceae Thimelaeaceae. / Отв. ред. П.Д. Соколов. - Л.: Наука, 1986. - С. 175-176.

90. Растительные ресурсы России и сопредельных государств / под ред. Л.М. Беленовской, Л.И. Медведева. СПб: Мир и семья - 95, 1996. - 571 с.

91. Регистр лекарственных средств России. 9-е изд., перераб. и доп. -М.: «РЛС-2002», 2002. - 1504 с.

92. Редченкова, В.Н. Анализ требований некоторых фармакопей, предъявляемых к экстрактам / В.Н. Редченкова, О.М. Хишова // Хим.-фармац. журн. 2006. - Т. 40, № 1. - С. 37-40.

93. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева М.: Медицина, 2005.-832 с.

94. Самылина, И.А. Пути использования лекарственного растительного сырья и его стандартизация / И.А. Самылина, И.А. Баландина // Фармация. — 2004.-№2.-С. 39-41.

95. Самылина, И.А. Современное состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья / И.А. Самылина, В.А. Ермакова // Хим.-фармац. вестн. 1999. - №6. - С. 19-22.

96. СанПиН 2.3.2.1078-01. Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов. Введ. 01.09.2002. // Новая аптека. -2008.-№ 8.-С. 21-23.

97. Селиванчикова, И.Б. Изучение компонентного состава флавоноидов и фенолкарбоновых кислот в гомеопатических настойках методом ВЭЖХ. Сообщение 2. / И.Б. Селиванчикова, З.П. Костенникова // Фармация. 2001. -№4.-С. 21-22.

98. Селиванчикова, И.Б. Количественное определение флавоноидов в гомеопатических настойках туи методом спектрофотометрии. Сообщение 3. / И.Б. Селиванчикова, М.Н. Лякина, З.П. Костенникова // Фармация. 2001. -№6.-С. 14-16.

99. Сергеев, П.В. Влияние антиоксидантов на быструю вспышку Бе24" " индуцированной хемилюминесценции / П.В. Сергеев, А.Г. Белых, С.А. Чукаев // Эксперим. и клинич. фармакология. 1992. - Т. 55., №2. - С. 60-62.

100. Сернов, Л.М. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.М.Сернов, В.В. Гацура. М., 2000. - 352 с.

101. Смирнов, Л.П. Особенности применения стандартного образца рутина в анализе растительного сырья, витаминных и фитопрепаратов / Л.П. Смирнова, С.С. Николаева, В.А. Быков // Хим. фармац. журн. - 2000. - Т. 34, № 1. - С. 29-31.

102. Современные аспекты стандартизации лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов, содержащих флавоноиды / В.А. Куркин, Г.Г. Запесочная, В.Б. Браславский // Всерос. съезд фармац. работников (5-7 июня 2005 г., г. Сочи). Сочи, 2005. - С. 95-96.

103. Современная фитотерапия / под ред. чл-корр. проф. д-ра Веселина Петкова. София: Медицина и физкультура, 1988. - 503с.

104. Содержание тритерпеновых гликозидов в некоторых видах сем. Pri-mulaceae флоры Средней Азии и Кавказа / A.M. Захаров, Д.А. Пакалин, О.И. Захарова, К.И. Боряев // Растит, ресурсы. - 1974. - Т. 10, № 3. - С. 375-379.

105. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям (фитотерапия) / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. М.: Недра, 1987. - 512с.

106. Сорокин, В.В. Применение направленной экстракции при получении препаратов травы зверобоя /В.В. Сорокин, И.Е. Каухова, В.А. Вайнштейн // Фармация. 2007. - № 4. - С. 34-35.

107. Стандартизация густого экстракта водяники черной / Е.В. Ермилова, Т.В. Кадырова, Е.А. Краснов, A.A. Блинникова // Хим.-фарм. журн. 2002. -Т. 36, №9-С. 40-43.

108. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Полисахариды) / Б.Н. Степаненко. М.: Высш.шк., 1978. - 256 с.

109. Степаненко, Б.Н. Химия и биохимия углеводов (Моносахариды) / Б.Н. Степаненко. М.: Высш.шк., 1977. - 222 с.

110. Трава зверобоя // Государственная фармакопея СССР. Вып. 2: Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье // МЗ СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989. - С. 323-325.

111. ТУ 9161-037-46865780-03. БАД таблетки «Виратон», per. уд. 77.99.02.916.Б.000641.0803.

112. Тюкавкина, H.A. Природные флавоноиды как пищевые антиокси-данты и биологически активные добавки / H.A. Тюкавкина, И.А. Руленко, Ю.А. Колесник // Вопр. питания. 1996. - № 2. С. 33-38.

113. Удельнова, Т.Н. Микроэлемент, экология и здоровье человека / Т.Н. Удельнова, С.Г. Торгин, В.А. Ягодин // Успехи современной биологии. -1990.-Вып. 2.-С. 279.

114. Фархутдинов, P.P. Клинические аспекты применения метода регистрации хемилюминесценции крови /P.P. Фархутдинов // Терапевт, арх. -1984. Т. 56, № 8. - С. 150-153.

115. Фархутдинов, Р. Р. Метод регистрации хемилюминесценции в клинической практике / P.P. Фархутдинов, Х.С. Бикмухаметова, Р.Г. Фатихов // Совр. медицина. -1986. № 3. - С. 86-89.

116. Фархутдинов, P.P. Хемилюминесцентные методы исследования свободно-радикального окисления в биологии и медицине / P.P. Фархутдинов, В.А. Лиховских. Уфа, 1995. - 92с.

117. Фитотерапия ожирения и сахарного диабета / Под ред. K.M. Дьяченко. Киев.: Наука Думка, 1993. - 96 с.

118. Фитотерапия с основами клинической фармакологии / под ред. В.Г. Кукеса. -М.: Медицина, 1999. 192 с.

119. Флавоноиды как гепатопротекторы и антиоксиданты / В.А. Куркин // IX Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (7-11 апр. 2002 г., г. Москва). М., 2002.-С. 164.

120. Флавоноиды как государственные стандартные образцы и их значение для целей стандартизации сырья и препаратов / В.А. Куркин // X Рос. нац. конгр. «Человек и лекарство» (7-11 апр. 2003 г., г. Москва). М., 2003. - С. 728.

121. Флавоны и жирные кислоты надземной части Primula macrocalix Bge. / Ю.С. Косенкова, М.П. Половинка, Н.И. Комарова и др. // V всерос. науч. конф. «Химия и технология растительных веществ» (8-12 июня 2008 г., г. Уфа) -Уфа,2008.-С. 162.

122. ФС 42-2508-87. Рутин стандартный образец. - М., 1987.

123. Хазиев, Р.Ш. Совершенствование технологии настоев из травы горца птичьего / Р.Ш. Хазиев, А.Г. Фролов // Фармация. 2001. - № 4. - С. 24-26.

124. Химический анализ лекарственных растений. / под ред. Н.И. Грин-кевич и Л.Н. Сафронич. М.: Высш.шк., 1984. - 176 с.

125. Хроматография в тонких слоях / Под ред. Э. Шталя. М.: Мир, 1968.-352 с.

126. Хроматография на бумаге / под ред. И.М. Хайца, К. Мацека. — М.: Изд-во иностр. лит-ры, 1962.- 851 с.

127. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. 2-е изд., испр. и доп. - СПб.: СпецЛит, 2002. - 407 с.

128. Юрьев, Д.В. Анализ флавоногликозидов в препаратах и БАД на основе Ginkgo Biloba/ Д.В. Юрьев, К.И. Эллер, А.П. Арзамасцев // Фармация. -2003.-№2.-С. 7-9.

129. Accumulation of Pb, Cd, Cu and Zn in plants and hypercumulator choice in Lanping lead-zinc mine area, Chine / Zu Yanqun, Li Yuan, Christian Schvartz, Laurent Lahglade, Lui Fan // Environment International. 2004. - Vol. 30, № 4. - P. 567-576.

130. Arti, A. Structure-activity relationships for antioxidant activities of a si-ries of flavonoids in a liposomal system / A. Arti, G.N. Muraleedharan, M. Gale // Free Radic. Biol. And Med. 1998. - Vol. 24, № 9. - P. 1355-1363.

131. Bahorun, T. Phenolic constituents and antioxidant capacities of Crataegus monogyna (Hawthorn) callus extracts / T. Bahorun, E. Aumjaud, H. Ramphul // Nahrung. 2003. -Vol. 47, № 3. - P. 191-198.

132. Benson, J.R. Some recend advances in amino acid analisis / J.R. Benson // Instrumentation in amino acid seguence analisis. London: New York, 1975. - P. 1-40.

133. Bohm, H. Flavonols, flavone and anthocyanins as natural antioxidants of food and their possible role in the prevention of chronic disesses / H. Bohm, H. Boeing, J. Hempel // Z. Ernahrungswiss. 1998. - Vol. 37, № 2. - P. 47-63.

134. Bors, W. Flavonoids as antioxidants: determinations of ragical-scavenging effeciens / W. Bors, W. Heller // Metods Ensimol. San Diego: Acad. Press, 1990. - Vol. 186. - P. 343-355.

135. British Pharmacopoeia. London: The Stationery Office, 2001. -Vol. 1.- 855 p.

136. Burda, S. Antioxidant and Antiradical Activities of Flavonoids / Stanislaw Burda, Weislaw Oleszek // J. Agric. Food Chem. 2001. - Vol. 49. P. 277Ф-2779.

137. Calis, I. Saponin and sapogenol: comparative stady on the sapogenol constituents of three Primula species / I. Calis // Doga: Tip Eczacilic, 1987. -Vol. 11, №2.-P. 206-215.

138. Chevallier, A.M. The Encyclopedia of Medicinal Plants / A.M. Chevallier. London, 1996. - 336 p. .

139. Economic Botany. New York, 1962. - Vol. 16. - P. 22.

140. European Pharmacopoeia. 3-rd edition. - Paris: Maisonneuve S.A., 2001.-948 p.

141. Halliwell, B.A. Antioxidant characterization. Methodology and mechanism / B. A. Halliwell // Biochem. Pharmacol. 1995. - Vol. 49, № 10. - P. 1341-1348.

142. Harborn, J.B. The flavonoids. / J.B. Harborn, T.J. Mabry, H. Mabry. -New York: Charman and Hall, 1975. 1200 p.

143. Herdan, J. Antioxidanti. / J. Herdan, M. Giurginca, M. Merghea. Bucu-resti: Ed. Tehnica. -1995. - P. 43-59.

144. HPLC separation and wavelength area rations of more than 50 phenolic acids and flavonoids / W.L. Banwart, P.M. Porter, T.C. Granato, I.I. Hassett // J. Chem. Ecol. 1985. - Vol. 11, №3. - P. 383-395.

145. Mabry, T.J. The systematic identification of flavonoids. / T.J. Mabry, K.R. Markham, M.B. Thomas. New York: Springer, 1970. - 354 p.

146. Marica Medic-Saric. Application of numerical methods to the TLC analysis of flavonoids and Phenolic acids of Rosmarini folium / Marica Medic-Saric, Zeljan Males // J. of Planar Chromatogr. 1997. - Vol.10. - P. 182-186.

147. Merck, E. Dyeing Reagents for Thin Layer and Paper Chromatography / E. Merk. Darmstadt, 1980. - 114 p.

148. Paris, R. Sur les flavonoides des primeveres indigenes: Presence d'un he-teroside du kaempferol dans les fleurs de Primula officinalis Jacq. / R. Paris // Ann. pharm. franc. 1957. - T. 17, № 5. - P. 331.

149. Phillipson, D. Herbal Drugs and Phytopharmaceutical / D. Phillipson. -Medpharm, 1994. P. 206-207.

150. Rice-Evans, C. Structure antioxidant activity relationships of flavono-ids and isoflavonoids / C. Rice:Evans, N.J. Miller //Flavonoids in health and diseases. - Ch. 5. - 1999. - P. 199-219.

151. The flavonoids as the bioantioxidants / V.A. Kurkin at al. //21 International conference on polyphenols «Polyphenols Communications 2002». Marra-kech-Morocco, 2002. - P. 285-286.

152. Trease, G.E. Pharmacognosy / G.E. Trease. London: WB Saunders, 1996.-812 p.

153. Triterpene saponins from Primula veris subsp. Macrocalyx and Primula elatior subsp. Meyeri / Qali§ Ihsan, Yürüker Ay§en, Rue"gger Henz and others // J. Natur. Prod. 1992. - Vol. 55, № 9. - P. 1299-1306.

154. Volak, J. Plants Medicinalis / J. Volak, J. Stodola. Paris: Grund, 1983. - 320 s.

155. Wulf, L.W. Analisis of phenolic acids and flavonoids by high pressure liquid chromatography / L.W. Wulf, C.W. Nagel // J. Chromatogr. 1976. -Vol. 116,№2.-P. 271-279.