Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Факторы неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана

АВТОРЕФЕРАТ
Факторы неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана - тема автореферата по медицине
Манасова, Зарипат Шахбановна Ростов-на-Дону 2009 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.16
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Факторы неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана

МАНАСОВА ЗАРИПАТ ШАХБАНОВНА

На правах рукописи

ФАКТОРЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ОСТРОМ ПЕРИТОНИТЕ НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ ОЗОНИРОВАННОГО ПЕРФТОРАНА

14.00.16 - ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ ФИЗИОЛОГИЯ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 5 ОКТ 2009

Ростов-на-Дону - 2009

003479919

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Дагестанская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Саидов Марат Зиявдинович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Дзугкоева Фира Соломоновна, доктор медицинских наук, профессор Кожин Александр Алексеевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО Астраханская государственная медицинская академия.

Защита состоится/^ноября 2009г. в/^часов на заседании диссертационного совета Д 208.082.03 при ГОУ ВПО «Ростовский Государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Ростовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан $ . 2009г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук,

Л.А Хаишева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы Сохраняющаяся до настоящего времени высокая летальность при перитоните свидетельствует о том, что эта проблема остается в центре внимания практических хирургов и реаниматологов (М.И. Кузин, 1995,2000; В.А. Белов и соавт., 1998; А.Г. Гусейнов, 2000; М.К. Абдулжалилов, 2003; В.Е1з5е1е & М. Ьашу, 1998).

Причиной летальных исходов при перитоните, чаще всего, являются гнойно-септические осложнения, связанные с измененной иммунологической реактивностью организма на всех этапах развития перитонита. Известно, что при перитоните определяются все признаки вторичного иммунодефицита, играющего важную роль в исходе основного патологического процесса (Петров Р.В и соавт. 1976; В.К.Гостищев и соавт., 1992; В.Я. Глумов и соавт.,1993 и др.).

Развитию вторичной иммунодепрессии способствует нтенсификация процессов перекисного окисления липидов, нарушение оксидантно-антиоксидантного баланса, выработка целого ряда биологически активных веществ, запуск неконтролируемого каскада изменений в системе коагуляции и фибринолиза, которые инициируют дизрегуляцию иммунных реакций (В.А. Руднов,1997; Я.С. Вопе,1996; СЛ. восЫп, Я.А. Ва1к,1997).

От всего этого зависит характер иммунокоррекции, которая должна быть направлена на восполнение нарушенного звена иммунитета (Э.А. Нечаев; Г.Г. Савицкий, 1992).

С этих позиций представляет интерес использование в целях коррекции данных нарушений газотранспортного кровезаменителя на основе перфторуглеродов - перфторана. Перфторан обладает крайне важными для коррекции эндотоксикоза свойствами.

Способность перфторана к стабилизации клеточных мембран, а также его сорбционные свойства способствуют очищению мембран клеток,

обеспечивают цитопротекторное влияние препарата: повышает устойчивость к действию осмотических, механических и химических повреждающих агентов (С.П. Воробьев и соавт., 1996; Т.Г.Сазонова и соавт., 2002.).

Стало очевидным, что определение иммунологических сдвигов, правильная их диагностика и направленная коррекция являются неотъемлемой частью ведения больных в отделениях хирургии и интенсивной терапии.

Известно, что перфторан, который является полифункциональным препаратом, используется не только как кровезаменитель, но и для профилактики и лечения критических состояний, постишемических изменений, спаечных процессов и т. д. Имеются еще сведения, что перфторан используется для активации перитонеальных макрофаггов (A.M. Голубев, 1995; А.Г. Гусейнов, 2000) и органов иммунной системы (Ф.Ф.Белоярцев и A.M. Голубев, 1987.; И.Н.Кузнецова, 2001; P.M. Рагимов и соавт., 2001, 2002, 2003.)

Используемые в последнее время в медицине озон-кислородные смеси и их растворы обладают не только бактерицидным, но и детоксикационным и иммуномодулирующим действиями (А.Д.Лелянов,1999).

И в этом отношении представляет большой интерес оценка иммунотропных эффектов перфторана и озонированного перфторана. Последний, по мнению A.M. Голубева, P.M. Рагимова и А.О.Османова (2005), оказывает положительный эффект при остром перитоните в эксперименте.

Поэтому изучение иммунотропных свойств озонированного перфторана является актуальным, поскольку внедрение его в клинике требует изучения дополнительных его характеристик, в том числе, иммунотропного действия.

Цель исследования Изучение факторов неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана.

Задачи исследования.

1. Изучить факторы неспецифической резистентности (показатель ФАЛ, сывороточной активности и цитохимический показатель интрацеллюлярной антимикробной активности) и клеточный состав перитонеальной жидкости у крыс контрольной группы в динамике на фоне введения озонированного перфторана, озонированного физиологического раствора, перфторана и физиологического раствора.

2. Изучить макроскопическую картину в динамике развития экспериментального перитонита на фоне введения указанных растворов.

3. Выявить особенности изменений неспецифического иммунитета и клеточного состава перитонеальной жидкости в динамике экспериментального перитонита на фоне введения озонированного перфторана, озонированного физиологического раствора, перфторана и физиологического раствора.

4. Сравнить динамику изменений изучаемых сывороточных и внутриклеточных антимикробных систем и клеточный состав перитонеальной жидкости в опытной группе.

5. На основании полученных данных дать оценку эффективности использования озонированного перфторана при остром перитоните с целью иммунокоррекции.

Научная новизна

В диссертационной работе впервые исследованы факторы

неспецифической резистентности при экспериментальном перитоните на

фоне внутрибрюшинного введения озонированного перфторана.

5

1. Впервые изучена морфологическая характеристика перитонеальной жидкости в динамике острого калового перитонита на фоне введения перфторана и озонированного перфторана.

2. Впервые показаны иммунотропные свойства озонированного перфторана.

3. Впервые на основании экспериментальных данных показано, что озонирование перфторана приводит к появлению дополнительных бактерицидных свойств этого препарата, что положительно влияет на показатели неспецифического иммунитета при остром перитоните.

4. Разработана модификация способа выявления катионных белков. Рациональное предложение, выданное ДГМА № 07-1376 от 18 апреля 2007г.

Научно-практическая значимость. Исследования носят экспериментальный характер, а полученные результаты относятся к области фундаментальных знаний, так как расширяют представления и дают новые знания о механизме развития иммунодефицита при перитоните и возможности коррекции иммунологических расстройств озонированным перфтораном.

Сформулированные основные положения, полученные в работе используются в учебном процессе на кафедре патологической физиологии Дагестанской государственной медицинской академии. Результаты исследования имеют не только теоретическое, но и практическое значение, так как могут быть рекомендованы для внедрения в практическое здравоохранение.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При экспериментальном перитоните отмечается достоверное снижение активности МПО, КБ, активности лизоцима, бактерицидной активности

крови, фагоцитарной активности лейкоцитов, что является показателем депрессии врождённого иммунитета.

2. Внутрибрюшинное введение озонированного перфторана и перфторана при экспериментальном перитоните вызывает нормализацию таких показателей врождённого иммунитета, как БАС, активность лизоцима в сыворотке крови, ФАЛ, гистотохимически определяемых КБ и МПО.

ЗОзонирование перфторана вызывает улучшение бактерицидных, иммунотропных свойств перфторана.

4. Озонированный перфторан оказывает антимикробный и антитоксический эффект и, ограничивая область воспаления, является эффективным препаратом для коррекции неспецифического иммунитета при экспериментальном перитоните.

Внедрение результатов исследования в практику

К известным свойствам перфторана на основании полученных в нашем исследовании данных были определены дополнительные иммунотропные и бактерицидные свойства озонированного перфторана. Это позволило рекомендовать введение озонированного перфторана в комплекс лечебных мероприятий у больных с перитонитом в постоперационном периоде. Иммунотропные свойства перфторана и озонированного перфторана обосновывают возможность использования этих препаратов для коррекции вторичного иммунодефицита, развивающегося при перитоните. Модификация метода выявления катионных белков внедрена в практику работы ЦНИЛ Дагестанской государственной медицинской академии и патологоанатомического бюро Минздрава РД. Полученные результаты используются в учебно-методическом плане кафедры патофизиологии ДГМА на практических занятиях и лекциях по теме: «Воспаление».

Апробация диссертационной работы. Основные положения доложены и обсуждались на научно-практических конференциях молодых ученых и студентов (Махачкала, 2004, 2005, 2006), научно- практических конференциях «Новые технологии в медицине» (Махачкала, 2004, 2006); VI региональной научно-практической конференции «Новые технологии в рекреации здоровья населения» (Владикавказ, 2007); совместном заседании сотрудников кафедр нормальной и патологической физиологии, анатомии человека, фармакологии, общей гигиены и экологии человека, патологической анатомии, хирургических болезней Дагестанской государственной медицинской академии для педиатрического и стоматологического факультетов.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 143 страницах машинописного текста, включая библиографию и приложение. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, общих выводов, списка использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 276 источников, из них 98 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 38 рисунками, 23 таблицами.

Материал и методы исследования.

Исследования проводились на 170 белых беспородных крысах-самцах, массой 140-160 гр. Все эксперименты проводились согласно международным правилам работы с лабораторными животными ("Principles of laboratory animal care", 1985, издание Национального Института Здоровья США, № 88-23) и утверждённому приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 года, который изменён и подтверждён в приказе №742 от 13.11.84 (приложения

№3и 4). Подопытные крысы содержались в обычных условиях вивария.

8

Животные были разделены на 2 группы: контрольную и опытную, а каждая группа - на 4 серии. В контрольной группе крысам внутрибрюшинно вводили:

в 1 серии - озонированный перфторан (п=20);

во 2 серии - озонированный физиологический раствор (п=20);

в 3 серии - перфторан (п=20);

в 4 серии - физиологический раствор(п=20)

Указанные растворы вводились из расчета 1,5мл на 100г. массы животоного. У крыс опытной группы вызывали острый каловый перитонит по методике С.С. Ременника (1965), введением в брюшную полость 5% каловой взвеси, приготовленной на физиологическом теплом растворе. Крысам под хлороформным наркозом вводили 1,0 мл на 100 г массы животного.

Сразу же после каловой взвеси вводили аналогично озонированный перфторан (1 серия), озонированный физиологический раствор (2 серия), перфторан (3 серия) и физиологический раствор (4 серия) из того же расчета, что в контрольной группе..

Озонирование перфторана и физиологического раствора проведено барботированием их озон-кислородной смесью в течение 15 минут со скоростью 0,5л/мин и заданной концентрацией озона ЗОООмкг/л на озонаторе «Медозонс - БМ АОТ - Н-010Арз-91» (фирмы ОАО «Арзамасский приборостроительный завод»). Концентрацию озона в растворах определяли на «Спектрофотометре - НФ 254/1». Изменений перфторана при воздействии озон-кислородной смеси не отмечено. Опытные крысы, которым вводили физиологический раствор, использовались как серия для сравнения.

Животных выводили из эксперимента декапитацией под хлороформным наркозом на 1-е,2-е,3-е,7-е и 14-е сутки. Для исследований брали кровь в количестве 3-5 мл. из ярёмного синуса крысы. Мазки перитонеальной жидкости брали непосредственно сразу после вскрытия брюшной полости. Все эксперименты проводились в идентичных условиях.

9

Методы исследования

1. Число лейкоцитов определяли по унифицированному методу подсчета в счетной камере Горяева (1972).

2. Фагоцитарную активность лейкоцитов крови изучали по модифицированной методике И.Я. Серебрийского и М.А. Антоновой (1950)

3. Бактерицидную активность сыворотки (БАС) крови определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966) фотонефелометрическим методом.

4. Активность лизоцима определяли нефелометрическим методом по В.Г. Дорофейчуку (1968).

5. Цитохимические методы определения КБ, МПО. Активность катионных белков в лейкоцитах периферической крови выявляли по нашей методике «Модификация способа выявления катионных белков». Для выявления активности МПО в мазках лейкомассы использовали методы по Грехем-Кнолю в модификации Корновского(1966).

Статистическая обработка материала

Статистическая обработка проводилась с помощью компьютерной

программы «Биостат». В качестве уровня значимости было принято

значение. В случае нормального распределения экспериментальных

показателей опытных групп рассчитывались: среднее арифметическое

значение - М, стандартное отклонение - о (представленные в таблицах).

Достоверность различий между сравниваемыми группами вычислялась с

применением дисперсионного анализа и парного критерия Стьюдента с

поправкой Бонферрони. Различия между сравниваемыми группами

считаются достоверными при Р<0,05. В некоторых случаях нами был выбран

метод статистической обработки по критерию Манна-Уитни с определением

медианы, процентилей, минимума и максимума.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Известно, что разлитой гнойный перитонит сопровождается изменениями в

10

системе иммунитета, трактуемыми многими авторами как вторичный иммунодефицит.

Приобретение активного специфического иммунитета в результате перенесенного заболевания обычно сопровождается повышением фагоцитарной активности лейкоцитов в отношении соответствующего возбудителя. Активность фагоцитов зависит от множества факторов, касающихся как самих фагоцитов, так и того биологического материала, который подвергается фагоцитозу.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при

остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана ___ (1 серия)___

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 2,25±0,09* 2,37±0,11* 2,15±0,22 1,94±0,16* 1,28±0,03* 2,25±0,24

ФЧ 91,3±3,08*" 87,6±7,13* 86±2,6* 84,3±4,3* 74,2±4,5* 84,8±2,91

БАС 51,7±3,54*' 59±1,23** 60,8±1,56*" 72,2±3,07* 69,2±1,09* 47±1,23

Лизоцим 9,89±0,78*" 15,2±2,39*" 19,4±1,33** 16,3±1,0* 29,3±0,87" 17,4±1,13

МП 2,42±0,1*" 2,27±0,06*" 2,39*0,07*" 2,34±0,07*" 2,26±0,09* 2,7±0,13

КБ 2,5±0,13* 2,46±0,1* 2,43±0,1* 2,51±0,06* 2,39±0,08# 2,52±0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, о - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; * Р <0,05 по сравнению с контролем.

В 1 серии опытной группы, которой был введён озонированный перфторан, выраженной депрессии данного показателя не наблюдалось, а наоборот, БАС была самой высокой среди всех серий на все сроки эксперимента. Так, БАС имела тенденцию к повышению с 1-х по 7-е сутки и на данном этапе была максимальной. Только на 14 сутки БАС незначительно снизилась, но была выше нормальной величины и выше показателей других серий.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного физиологического

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 1,06±0,1*" 1,43±0,09** 1,01±0,15*" 1,44±9,94 0,79±0,07* 2,25±0,24

ФЧ 72,1 ±5,09"" 76,3±3,54*" 69,9±3,26*" 71,8±4,27** 57,7±2,25* 84,8±2,91

БАС 42,3± 1,12** 37,4±0,73*" 35±1,12*" 42,5±0,84* 40,5±0,58" 47 ±1,23

Лизоцим 8,77±0,83** 8,67±1,32** 10,3±1,11*" 16,5±1,05* 28,5± 1,52* 17,4±1,13

МП 1,61 ±0,6*" 1,47±0,08** 1,46±0,06*" 1,66±0,04*" 1,44±0,08* 2,7±0ДЗ

КБ 1,85±0,18** 1,65±0,08*я 1,72±0,09*# 1,68±0,08** 1,82±0,07# 2, 52±0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, а - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; " Р <0,05 по сравнению с контролем.

Лизоцим

■ 1 серия

■ 4 серия

■ норма

Рис.2 Динамика активности лизоцима при экспериментальном перитоните на 3 сутки.

Рис.1 Динамика бактерицидной активности крови крыс при экспериментальном перитоните на 3 сутки.

Титр лизоцима в сыворотке крови снижается при острых инфекционных заболеваниях, и степень снижения зависит от тяжести состояния: в остром периоде болезни титр лизоцима резко падает, в период выздоровления - нормализуется.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при

остром перитоните на фоне введения перфторана _(3 серия)_

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 1,58*0,13** 1,89*0,15*" 1,58*0,12*" 1,54±0,11 0,84*0,07" 2,25*0,24

ФЧ 80,1*3,52* 85,2±4,09* 81,6±5,08* 82,6*5,34* 65,5*5,36" 84,8*2,91

БАС 45,8*0,97*" 53,3*1,32*" 45,9*1,45* 49,8*0,98*" 46,8*0,75 47*1,23

Лизоцим 10,0*0,71" 16,3*1,32* 13,2±1,30*" 9,8±0,75*" 20,8±0,98" 17,4*1,13

МП 2,05*0,11*' 1,92*0,15*" 1,94*0,06*" 1,68±0,05** 1,71±0,07* 2,7*0,13

КБ 1,9*0,22*" 2±0,05*" 2*0,11 ** 1,7*0,06*" 1,73*0,04* 2,52*0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, а - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; # Р <0,05 по сравнению с контролем.

На 1 сутки в первой серии опытной группы активность лизоцима была низкой, но на 2-3 сутки этот показатель вырос значительно. На 7 сутки активность временно снизилась и максимально выросла на 14 сутки. Исходя из данных показателей заметно, что в 1 серии ухудшение активности лизоцима на 1 и 3 сутки приводила к резкому, компенсаторному увеличению на 2, 7, 14 сутки. Показатель активности лизоцима на 14 сутки в 1 серии был максимальным среди всех серий и суток эксперимента. Такое повышение активности лизоцима подразумевает положительное влияние озонированного перфторана на течение воспалительного процесса и, соответственно, выздоровления, учитывая иммуномодулирующее,

мембраностабилизирующее, цитопротекторное, антигипоксантное действие перфторана в комплексе с бактерицидным действием озона. Необходимо заметить, что активность лизоцима коррелирует здесь с БАС крови и на 14 сутки БАС дает также максимальный результат в 1 серии.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при

остром перитоните на фоне введения физиологического раствора _(4 серия)_

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 0,74±0,1* 0,79±0,12* 0,72±0,04* 0,62±0,06 - 2,25±0,24

ФЧ 62,1±4,49" 60±5,77" 59,4±3,84" 52,3±3,4" - 84,8±2,91

БАС 29,9±1,05" 27,6±1,01* 32,3±1,37* 16,2±1,5* - 47 ±1,23

Лиздцим 6,44±0,73* 2,6±0,53" 6,7±0,82" 8,5±1,05* - 17,4±1,13

МП 1,19±0,05" 1,19±0,05" 1,22±0,06* 1,(Ш=0,03" - 2,7±0,13

КБ 1,26±0,07" 1,19*0,1" 1,25±0,07* 1,2±0,0б" - 2,52±0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, о - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; * Р <0,05 по сравнению с контролем.

МПО является важным компонентом врождённого иммунитета изученным нами в этой связи.

Во всех сериях показатель активности миелопероксидазы низок на все сроки, учитывая, что в данном случае (опытная группа) развивается острый каловый перитонит, влекущий за собой вторичную иммунодепрессию без адекватного антибактериального лечения. Таким образом, на 1 сутки СЦП был достоверно самым высоким в 1 серии. На 2 сутки в 1 серии СЦП миелопероксидазной активности немного снизился, но был выше, чем в остальных сериях и в последующие сроки оставался максимально приближенным к норме.

1 серия

2 серия

Рис.3. Активность МПО в нейтрофилах крыс опытной группы по сериям на первые сутки эксперимента

В эксперименте опытной группы с перитонитом, учитывая то, что антибиотикотерапия не проводится, наблюдается резкое угнетение данного показателя. В серии с введением озонированного перфторана СЦП катионных белков в нейтрофилах максимально приближен к норме с 1 по 7 сутки, что имеет основное значение в ведении больных с перитонитом. Только на 14 сутки данный показатель снизился, но даже на эти сутки показатель был высоким по сравнению с другими сериями. Процент нейтрофилов с высокой степенью активности был максимально высоким на 7 сутки и составлял 70%.

3 серия 4 серия

1 серия

2 серия

Рис.3. Активность КБ в нейтрофилах крыс опытной группы по сериям на первые сутки эксперимента

В динамике изменений влияния озонированного перфторана на состояние перитонеального экссудата следующие показатели:

Количество лимфоцитов в опытной группе во все сроки эксперимента в серии с озонированным перфтораном было выше нормы. В неспецифической антибактериальной резистентности первой линией защиты от гнойной инфекции являются нейтрофилы и моноциты, которые являются первой линией в антибактериальной защите организма. Подобно нейтрофилам, моноциты способны захватывать, убивать и переваривать микроорганизмы. Однако эти клетки не только обеспечивают резистентность по отношению к возбудителям гнойно-воспалительных заболеваний и осложнений, но и участвуют в иммунном ответе, представляя антигены лимфоцитам, продуцируя регулирующие иммунный ответ медиаторы и осуществляя кооперацию участвующих в иммунном ответе клеток.

Моноциты перитонеальной жидкости были в 3 раза выше нормы уже на первые сутки эксперимента и оставались примерно на этом уровне и на вторые сутки. На 3-е сутки данный показатель немного снизился по сравнению с предыдущими сроками, но был в 2 раза выше нормальных величин. Только на 7-14 сутки количество мононуклеаров снизилось ниже нормы, учитывая, что никакого лечения данным животным с острым каловым перитонитом не проводилось. Также в работе было замечено, что в сериях с озонированным перфтораном и перфтораном встречались чаще активные перфторофаги, с высокой степенью активности, что ещё раз подтверждает способность перфторана стимулировать двигательную и фагоцитирующую активность макрофагов. Также этот момент подтверждается показателями интрацеллюлярной микробицидной системы нейтрофилов, а именно активностью МПО и катионных белков.

Количество плазматических клеток также в данной серии было выше показателей других серий. Немного снизившись на вторые сутки, количество плазматических клеток резко повысилось на третьи сутки и продолжало повышаться и на 7 сутки. На 14 сутки количество плазматических клеток увеличилось, и было в 5 раз выше нормы. Такая положительная динамика со стороны плазматических клеток говорит о высокой активности клеток неспецифической защиты. Также прослежена выживаемость животных по срокам и сериям эксперимента, в которой выражены показатели смертности в серии с физиологическим раствором. На основании полученных данных и данных литературы нами предложена следующая схема патогенеза острого воспаления брюшины в условиях эксперимента и механизм влияния на данные изменения озонированного перфторана.

Рис.3. Схема патогенеза острого воспаления брюшины в условиях эксперимента и механизм влияния на данные изменения озонированного перфторана.

* - изменения, выявленные автором в ходе эксперимента.

В условиях введения озонированного перфторана повышается миграция перитонеальных макрофагов в брюшную полость. Появляются макрофаги, известные в литературе как перфторофаги, или пенистые макрофаги с высокой степенью активности, что приводит к раннему ограничению воспалительного процесса и препятствует распространению перитонита по брюшине, в связи с бактериостатическими свойствами озона, усиленными иммуномодулирующим, антигипоксантным,

мембраностабилизирующим действием перфторана.

В работе показаны существенные изменения показателей врождённого иммунитета и выраженная эффективность озонированного перфторана на модели экспериментального перитонита. Анализ полученных результатов позволил заключить, что три исследованных блока врождённого иммунитета, а именно: фагоцитарный блок с общим количеством лейкоцитов, блок интрацеллюлярной бактерицидности, представленной уровнем катионных

белков и миелопероксидазы, а также блок бактерицидной активности сыворотки крови, включая активность лизоцима, интегрировано реагируют на процесс острого гнойного воспаления брюшины. Ингибиция этих показателей в динамике развития экспериментального перитонита является отражением существенного угнетения активности всех звеньев иммунной системы, включая и врожденный иммунитет. Обращает на себя внимание, что такие показатели, как количество лейкоцитов, ФА, ФИ, уровень катионных белков, миелопероксидаза и активность лизоцима достоверно снижаются на все сроки эксперимента в серии с физиологическим раствором. Иными словами показатели, характеризующие перечисленные выше различные аспекты врождённого иммунитета, однотипно реагируют на процесс гнойного воспаления брюшины. Временная динамика изученных показателей с 1-х по 14-е сутки отражает адаптацию механизмов врождённого иммунитета к конкретной форме и активности воспалительного процесса. Но в целом выявляется общая закономерность, состоящая в том, что утяжеление процесса сопровождается более глубокими изменениями показателей врождённого иммунитета. Эти изменения, наряду с изменениями приобретённого иммунитета и составляют патофизиологическую основу вторичной недостаточности иммунной системы при разлитом гнойном перитоните. На этом фоне очевиден лечебный эффект озонированного перфторана, подтверждаемый клиническими наблюдениями и позитивной динамикой изученных показателей врождённого иммунитета. Таким образом, положительный терапевтический эффект озонированного перфторана связан не только с активацией и увеличением числа фагоцитирующих мононуклеаров и антибактериальным действием озона, которые препятствуют распространению воспаления по брюшине и последующему спайкообразованию, но и протекторным действием данного препарата на неспецифическое звено иммунологической резистентности организма.

На основании полученных нами данных обоснована наша рекомендация по применению озонированного перфторана в клинической практике.

Выводы

1. У крыс контрольной группы наблюдается значимое повышение таких показателей, как ФАЛ, бактерицидная активность сыворотки, активность лизоцима, тогда как в сериях с физиологическим раствором и озонированным физиологическим раствором данные показатели достигали контрольных величин только на 7-14 сутки эксперимента.

2.При экспериментальном каловом перитоните уровень ФАЛ, бактерицидной активности сыворотки и активности лизоцима на 30% ниже по сравнению с контрольными значениями этих показателей, что указывает на ослабление общей антимикробной неспецифической резистентности организма, что необходимо учитывать при проведении комплекса лечебных мероприятий.

3. Благодаря бактериостатическому действию озона с момента внутрибрю-шинного введения каловой взвеси блокируется пролиферация и размножение микробных агентов и макроскопическая картина перитонита не столь выражена, как в серии с физиологическим раствором, где наблюдается развёрнутая картина распространённого гнойно-фибринозного перитонита. Течение экспериментального калового перитонита на фоне введения озонированного физиологического раствора сопровождается угнетением факторов неспецифической резистентности всего лишь на 20%.

3. Факторы неспецифической резистентности, клеточный состав

перитонеальной жидкости в динамике развития экспериментального

перитонита в серии с перфтораном активны и находятся примерно на

уровне показателей 2-й серии. Такая картина связана со стимуляцией

миграции фагоцитирующих клеток в перитонеальный экссудат и

повышением их функциональных свойств, а также стимуляцией

интрацеллюлярной микробицидности.

20

4. Физиологический раствор практически никакого корригирующего влияния на течение перитонита и факторы врождённого иммунитета не оказывает. Такие показатели, как ФАЛ, бактерицидная активность сыворотки крови, уровень лизоцима на протяжении всего времени эксперимента значительно ниже показателей 1-3 серий.

5. Наиболее выраженный бактерицидный, иммуномодулирующий эффект определялся при введении экспериментальным животным озонированного перфторана, выражавшийся в статистически значимом повышении таких показателей врождённого иммунитета, как ФАЛ, бактерицидная активность, уровень лизоцима сыворотки крови, количество КБ и активность МП нейтрофильных гранулоцитов и улучшении показателей выживаемости крыс на 30-50% по сравнению с остальными сериями. Такое влияние, возможно, обусловлено более выраженным бактерицидным и иммунокорригирующим действием озонированного перфторана.

6. На основании полученных данных можно рекомендовать использование озонированного перфторана в клинической практике и экспериментально-клинических исследованиях для лечения перитонита.

Практические рекомендации

1. Выявленные дополнительные иммунотропные и бактерицидные свойства озонированного перфторана позволяют рекомендовать его внутрибрюшинное введение в момент операции и в комплексе лечебных мероприятий у больных с перитонитом в послеоперационном периоде.

2. Иммунотропные свойства перфторана и озонированного перфторана обосновывают возможность использования этих препаратов для коррекции вторичного иммунодефицита, развивающегося или сопутствующего в течение экспериментального перитонита.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Манасова З.Ш. Влияние внутрибрюшинного введения озонированного перфторана на течение острого перитонита в эксперименте /Османов А.О., Гусейнов Т.С.., Рагимов P.M., Магомедов С.М., Бахмудова И.Г. // Вестник РГМУ. Материалы I Международной (X Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции Москва, 16 марта 2006r, С.147.

2. Манасова З.Ш. Факторы неспецифической резистентности организма на фоне введения озонированного перфторана / Рагимов Р.М, Хачиров Дж. Г, Саидов М.З., Голубев A.M. // IV региональная научно-практическая конференция «Новые технологии в рекреации здоровья населения» (Северо-Осетинская государственная медицинская академия, 2007, VII, с.165-169).

3. Манасова З.Ш. Острый перитонит и факторы неспецифической резистентности при введении озонированного перфторана/ Голубев A.M., Рагимов P.M., Саидов М.З., //Общая реаниматология, Москва, 2008., IV;1- с. 50-54.

4. Манасова З.Ш. Озонированный перфторан в профилактике развития острого перитонита / Рагимов P.M.// Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Фармакология и фармакотерапия; достижения и перспективы». - Махачкала, 2006.-С.226-228.

5. Манасова З.Ш. Влияние озонированного перфторана на динамику развития перитонита в эксперименте. / Рагимов P.M., Голубев A.M., Гусейнов Т.С., Саидов М.З., Ганиева А.И., Рагимова Д.М., Бахмудова И.Г.// Сборник научных трудов Дагестанской Государственной Медицинской академии Махачкала, 2006.- С.149-151.

6. Манасова З.Ш. Возможность использования перфторана и новокаина в комплексе антипаретической терапии при операциях на органах брюшной полости /Магомедов З.М., Магомедов С.М, Далгатов Г.М.,

22

Бекеев К.В., Мамайханов С.М.// Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007 - С.218-220.

7. Манасова З.Ш. Сопротивление тонкой кишки в динамике перитонита на фоне внутрибрыжеечного введения перфторана / Загиров У.З., Рагимов P.M., Магомедов З.М., Магомедов С.М., Мамайханов С.М., Бекеев К.В.// Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007 - С.220-222.

8. Манасова З.Ш. Способ оценки эвакуаторной функции ЖКТ при экспериментальном каловом перитоните/ Магомедов З.М., Магомедов С.М., Мамайханов С.М., Бекеев К.В.// Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007. -С.226-228.

9. Манасова З.Ш. Цитологическое исследование перитонеальной жидкости при внутрибрыжеечном введении перфторана на фоне острого перитонита / З.М. Магомедов, С.М. Магомедов, С.М. Мамайханов, К.В. Бекеев // Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007. - С.222-223.

Список сокращений АКБ, КБ - антимикробные катионные белки МП - миелопероксидаза НГ - нейтрофильный гранулоцит ПО-гранулы - пероксидазные гранулы СЦП - средний цитохимический показатель ФИ - фагоцитарный индекс ФЧ - фагоцитарное число БАС - бактерицидная активность сыворотки

Искренне признательны доценту кафедры анатомии человека Рагимову P.M. за помощь в выполнении и анализе цитологической части исследования.

Печать цифровая. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Формат 60x84/16. Объем 1,0уч.-изд.-л. Заказ № 1406. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Суворова, 19, тел. 247-34-88