Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Факторы неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана

МАНАСОВА ЗАРИПАТ ШАХБАНОВНА

На правах рукописи

ФАКТОРЫ НЕСПЕЦИФИЧЕСКОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ОСТРОМ ПЕРИТОНИТЕ НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ ОЗОНИРОВАННОГО ПЕРФТОРАНА

14.00.16 - ПАТОЛОГИЧЕСКАЯ ФИЗИОЛОГИЯ АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 5 ОКТ 2009

Ростов-на-Дону - 2009

003479919

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Дагестанская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Саидов Марат Зиявдинович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Дзугкоева Фира Соломоновна, доктор медицинских наук, профессор Кожин Александр Алексеевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО Астраханская государственная медицинская академия.

Защита состоится/^ноября 2009г. в/^часов на заседании диссертационного совета Д 208.082.03 при ГОУ ВПО «Ростовский Государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (344022, г. Ростов-на-Дону, пер. Нахичеванский, 29)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Ростовского государственного медицинского университета.

Автореферат разослан $ . 2009г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат медицинских наук,

Л.А Хаишева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность работы Сохраняющаяся до настоящего времени высокая летальность при перитоните свидетельствует о том, что эта проблема остается в центре внимания практических хирургов и реаниматологов (М.И. Кузин, 1995,2000; В.А. Белов и соавт., 1998; А.Г. Гусейнов, 2000; М.К. Абдулжалилов, 2003; В.Е1з5е1е & М. Ьашу, 1998).

Причиной летальных исходов при перитоните, чаще всего, являются гнойно-септические осложнения, связанные с измененной иммунологической реактивностью организма на всех этапах развития перитонита. Известно, что при перитоните определяются все признаки вторичного иммунодефицита, играющего важную роль в исходе основного патологического процесса (Петров Р.В и соавт. 1976; В.К.Гостищев и соавт., 1992; В.Я. Глумов и соавт.,1993 и др.).

Развитию вторичной иммунодепрессии способствует нтенсификация процессов перекисного окисления липидов, нарушение оксидантно-антиоксидантного баланса, выработка целого ряда биологически активных веществ, запуск неконтролируемого каскада изменений в системе коагуляции и фибринолиза, которые инициируют дизрегуляцию иммунных реакций (В.А. Руднов,1997; Я.С. Вопе,1996; СЛ. восЫп, Я.А. Ва1к,1997).

От всего этого зависит характер иммунокоррекции, которая должна быть направлена на восполнение нарушенного звена иммунитета (Э.А. Нечаев; Г.Г. Савицкий, 1992).

С этих позиций представляет интерес использование в целях коррекции данных нарушений газотранспортного кровезаменителя на основе перфторуглеродов - перфторана. Перфторан обладает крайне важными для коррекции эндотоксикоза свойствами.

Способность перфторана к стабилизации клеточных мембран, а также его сорбционные свойства способствуют очищению мембран клеток,

обеспечивают цитопротекторное влияние препарата: повышает устойчивость к действию осмотических, механических и химических повреждающих агентов (С.П. Воробьев и соавт., 1996; Т.Г.Сазонова и соавт., 2002.).

Стало очевидным, что определение иммунологических сдвигов, правильная их диагностика и направленная коррекция являются неотъемлемой частью ведения больных в отделениях хирургии и интенсивной терапии.

Известно, что перфторан, который является полифункциональным препаратом, используется не только как кровезаменитель, но и для профилактики и лечения критических состояний, постишемических изменений, спаечных процессов и т. д. Имеются еще сведения, что перфторан используется для активации перитонеальных макрофаггов (A.M. Голубев, 1995; А.Г. Гусейнов, 2000) и органов иммунной системы (Ф.Ф.Белоярцев и A.M. Голубев, 1987.; И.Н.Кузнецова, 2001; P.M. Рагимов и соавт., 2001, 2002, 2003.)

Используемые в последнее время в медицине озон-кислородные смеси и их растворы обладают не только бактерицидным, но и детоксикационным и иммуномодулирующим действиями (А.Д.Лелянов,1999).

И в этом отношении представляет большой интерес оценка иммунотропных эффектов перфторана и озонированного перфторана. Последний, по мнению A.M. Голубева, P.M. Рагимова и А.О.Османова (2005), оказывает положительный эффект при остром перитоните в эксперименте.

Поэтому изучение иммунотропных свойств озонированного перфторана является актуальным, поскольку внедрение его в клинике требует изучения дополнительных его характеристик, в том числе, иммунотропного действия.

Цель исследования Изучение факторов неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана.

Задачи исследования.

1. Изучить факторы неспецифической резистентности (показатель ФАЛ, сывороточной активности и цитохимический показатель интрацеллюлярной антимикробной активности) и клеточный состав перитонеальной жидкости у крыс контрольной группы в динамике на фоне введения озонированного перфторана, озонированного физиологического раствора, перфторана и физиологического раствора.

2. Изучить макроскопическую картину в динамике развития экспериментального перитонита на фоне введения указанных растворов.

3. Выявить особенности изменений неспецифического иммунитета и клеточного состава перитонеальной жидкости в динамике экспериментального перитонита на фоне введения озонированного перфторана, озонированного физиологического раствора, перфторана и физиологического раствора.

4. Сравнить динамику изменений изучаемых сывороточных и внутриклеточных антимикробных систем и клеточный состав перитонеальной жидкости в опытной группе.

5. На основании полученных данных дать оценку эффективности использования озонированного перфторана при остром перитоните с целью иммунокоррекции.

Научная новизна

В диссертационной работе впервые исследованы факторы

неспецифической резистентности при экспериментальном перитоните на

фоне внутрибрюшинного введения озонированного перфторана.

5

1. Впервые изучена морфологическая характеристика перитонеальной жидкости в динамике острого калового перитонита на фоне введения перфторана и озонированного перфторана.

2. Впервые показаны иммунотропные свойства озонированного перфторана.

3. Впервые на основании экспериментальных данных показано, что озонирование перфторана приводит к появлению дополнительных бактерицидных свойств этого препарата, что положительно влияет на показатели неспецифического иммунитета при остром перитоните.

4. Разработана модификация способа выявления катионных белков. Рациональное предложение, выданное ДГМА № 07-1376 от 18 апреля 2007г.

Научно-практическая значимость. Исследования носят экспериментальный характер, а полученные результаты относятся к области фундаментальных знаний, так как расширяют представления и дают новые знания о механизме развития иммунодефицита при перитоните и возможности коррекции иммунологических расстройств озонированным перфтораном.

Сформулированные основные положения, полученные в работе используются в учебном процессе на кафедре патологической физиологии Дагестанской государственной медицинской академии. Результаты исследования имеют не только теоретическое, но и практическое значение, так как могут быть рекомендованы для внедрения в практическое здравоохранение.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. При экспериментальном перитоните отмечается достоверное снижение активности МПО, КБ, активности лизоцима, бактерицидной активности

крови, фагоцитарной активности лейкоцитов, что является показателем депрессии врождённого иммунитета.

2. Внутрибрюшинное введение озонированного перфторана и перфторана при экспериментальном перитоните вызывает нормализацию таких показателей врождённого иммунитета, как БАС, активность лизоцима в сыворотке крови, ФАЛ, гистотохимически определяемых КБ и МПО.

ЗОзонирование перфторана вызывает улучшение бактерицидных, иммунотропных свойств перфторана.

4. Озонированный перфторан оказывает антимикробный и антитоксический эффект и, ограничивая область воспаления, является эффективным препаратом для коррекции неспецифического иммунитета при экспериментальном перитоните.

Внедрение результатов исследования в практику

К известным свойствам перфторана на основании полученных в нашем исследовании данных были определены дополнительные иммунотропные и бактерицидные свойства озонированного перфторана. Это позволило рекомендовать введение озонированного перфторана в комплекс лечебных мероприятий у больных с перитонитом в постоперационном периоде. Иммунотропные свойства перфторана и озонированного перфторана обосновывают возможность использования этих препаратов для коррекции вторичного иммунодефицита, развивающегося при перитоните. Модификация метода выявления катионных белков внедрена в практику работы ЦНИЛ Дагестанской государственной медицинской академии и патологоанатомического бюро Минздрава РД. Полученные результаты используются в учебно-методическом плане кафедры патофизиологии ДГМА на практических занятиях и лекциях по теме: «Воспаление».

Апробация диссертационной работы. Основные положения доложены и обсуждались на научно-практических конференциях молодых ученых и студентов (Махачкала, 2004, 2005, 2006), научно- практических конференциях «Новые технологии в медицине» (Махачкала, 2004, 2006); VI региональной научно-практической конференции «Новые технологии в рекреации здоровья населения» (Владикавказ, 2007); совместном заседании сотрудников кафедр нормальной и патологической физиологии, анатомии человека, фармакологии, общей гигиены и экологии человека, патологической анатомии, хирургических болезней Дагестанской государственной медицинской академии для педиатрического и стоматологического факультетов.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Объём и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 143 страницах машинописного текста, включая библиографию и приложение. Состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования и их обсуждения, заключения, общих выводов, списка использованной литературы и приложения. Библиографический указатель включает 276 источников, из них 98 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 38 рисунками, 23 таблицами.

Материал и методы исследования.

Исследования проводились на 170 белых беспородных крысах-самцах, массой 140-160 гр. Все эксперименты проводились согласно международным правилам работы с лабораторными животными ("Principles of laboratory animal care", 1985, издание Национального Института Здоровья США, № 88-23) и утверждённому приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 года, который изменён и подтверждён в приказе №742 от 13.11.84 (приложения

№3и 4). Подопытные крысы содержались в обычных условиях вивария.

8

Животные были разделены на 2 группы: контрольную и опытную, а каждая группа - на 4 серии. В контрольной группе крысам внутрибрюшинно вводили:

в 1 серии - озонированный перфторан (п=20);

во 2 серии - озонированный физиологический раствор (п=20);

в 3 серии - перфторан (п=20);

в 4 серии - физиологический раствор(п=20)

Указанные растворы вводились из расчета 1,5мл на 100г. массы животоного. У крыс опытной группы вызывали острый каловый перитонит по методике С.С. Ременника (1965), введением в брюшную полость 5% каловой взвеси, приготовленной на физиологическом теплом растворе. Крысам под хлороформным наркозом вводили 1,0 мл на 100 г массы животного.

Сразу же после каловой взвеси вводили аналогично озонированный перфторан (1 серия), озонированный физиологический раствор (2 серия), перфторан (3 серия) и физиологический раствор (4 серия) из того же расчета, что в контрольной группе..

Озонирование перфторана и физиологического раствора проведено барботированием их озон-кислородной смесью в течение 15 минут со скоростью 0,5л/мин и заданной концентрацией озона ЗОООмкг/л на озонаторе «Медозонс - БМ АОТ - Н-010Арз-91» (фирмы ОАО «Арзамасский приборостроительный завод»). Концентрацию озона в растворах определяли на «Спектрофотометре - НФ 254/1». Изменений перфторана при воздействии озон-кислородной смеси не отмечено. Опытные крысы, которым вводили физиологический раствор, использовались как серия для сравнения.

Животных выводили из эксперимента декапитацией под хлороформным наркозом на 1-е,2-е,3-е,7-е и 14-е сутки. Для исследований брали кровь в количестве 3-5 мл. из ярёмного синуса крысы. Мазки перитонеальной жидкости брали непосредственно сразу после вскрытия брюшной полости. Все эксперименты проводились в идентичных условиях.

9

Методы исследования

1. Число лейкоцитов определяли по унифицированному методу подсчета в счетной камере Горяева (1972).

2. Фагоцитарную активность лейкоцитов крови изучали по модифицированной методике И.Я. Серебрийского и М.А. Антоновой (1950)

3. Бактерицидную активность сыворотки (БАС) крови определяли по О.В. Смирновой и Т.А. Кузьминой (1966) фотонефелометрическим методом.

4. Активность лизоцима определяли нефелометрическим методом по В.Г. Дорофейчуку (1968).

5. Цитохимические методы определения КБ, МПО. Активность катионных белков в лейкоцитах периферической крови выявляли по нашей методике «Модификация способа выявления катионных белков». Для выявления активности МПО в мазках лейкомассы использовали методы по Грехем-Кнолю в модификации Корновского(1966).

Статистическая обработка материала

Статистическая обработка проводилась с помощью компьютерной

программы «Биостат». В качестве уровня значимости было принято

значение. В случае нормального распределения экспериментальных

показателей опытных групп рассчитывались: среднее арифметическое

значение - М, стандартное отклонение - о (представленные в таблицах).

Достоверность различий между сравниваемыми группами вычислялась с

применением дисперсионного анализа и парного критерия Стьюдента с

поправкой Бонферрони. Различия между сравниваемыми группами

считаются достоверными при Р<0,05. В некоторых случаях нами был выбран

метод статистической обработки по критерию Манна-Уитни с определением

медианы, процентилей, минимума и максимума.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Известно, что разлитой гнойный перитонит сопровождается изменениями в

10

системе иммунитета, трактуемыми многими авторами как вторичный иммунодефицит.

Приобретение активного специфического иммунитета в результате перенесенного заболевания обычно сопровождается повышением фагоцитарной активности лейкоцитов в отношении соответствующего возбудителя. Активность фагоцитов зависит от множества факторов, касающихся как самих фагоцитов, так и того биологического материала, который подвергается фагоцитозу.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при

остром перитоните на фоне введения озонированного перфторана ___ (1 серия)___

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 2,25±0,09* 2,37±0,11* 2,15±0,22 1,94±0,16* 1,28±0,03* 2,25±0,24

ФЧ 91,3±3,08*" 87,6±7,13* 86±2,6* 84,3±4,3* 74,2±4,5* 84,8±2,91

БАС 51,7±3,54*' 59±1,23** 60,8±1,56*" 72,2±3,07* 69,2±1,09* 47±1,23

Лизоцим 9,89±0,78*" 15,2±2,39*" 19,4±1,33** 16,3±1,0* 29,3±0,87" 17,4±1,13

МП 2,42±0,1*" 2,27±0,06*" 2,39*0,07*" 2,34±0,07*" 2,26±0,09* 2,7±0,13

КБ 2,5±0,13* 2,46±0,1* 2,43±0,1* 2,51±0,06* 2,39±0,08# 2,52±0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, о - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; * Р <0,05 по сравнению с контролем.

В 1 серии опытной группы, которой был введён озонированный перфторан, выраженной депрессии данного показателя не наблюдалось, а наоборот, БАС была самой высокой среди всех серий на все сроки эксперимента. Так, БАС имела тенденцию к повышению с 1-х по 7-е сутки и на данном этапе была максимальной. Только на 14 сутки БАС незначительно снизилась, но была выше нормальной величины и выше показателей других серий.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при остром перитоните на фоне введения озонированного физиологического

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 1,06±0,1*" 1,43±0,09** 1,01±0,15*" 1,44±9,94 0,79±0,07* 2,25±0,24

ФЧ 72,1 ±5,09"" 76,3±3,54*" 69,9±3,26*" 71,8±4,27** 57,7±2,25* 84,8±2,91

БАС 42,3± 1,12** 37,4±0,73*" 35±1,12*" 42,5±0,84* 40,5±0,58" 47 ±1,23

Лизоцим 8,77±0,83** 8,67±1,32** 10,3±1,11*" 16,5±1,05* 28,5± 1,52* 17,4±1,13

МП 1,61 ±0,6*" 1,47±0,08** 1,46±0,06*" 1,66±0,04*" 1,44±0,08* 2,7±0ДЗ

КБ 1,85±0,18** 1,65±0,08*я 1,72±0,09*# 1,68±0,08** 1,82±0,07# 2, 52±0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, а - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; " Р <0,05 по сравнению с контролем.

Лизоцим

■ 1 серия

■ 4 серия

■ норма

Рис.2 Динамика активности лизоцима при экспериментальном перитоните на 3 сутки.

Рис.1 Динамика бактерицидной активности крови крыс при экспериментальном перитоните на 3 сутки.

Титр лизоцима в сыворотке крови снижается при острых инфекционных заболеваниях, и степень снижения зависит от тяжести состояния: в остром периоде болезни титр лизоцима резко падает, в период выздоровления - нормализуется.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при

остром перитоните на фоне введения перфторана _(3 серия)_

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 1,58*0,13** 1,89*0,15*" 1,58*0,12*" 1,54±0,11 0,84*0,07" 2,25*0,24

ФЧ 80,1*3,52* 85,2±4,09* 81,6±5,08* 82,6*5,34* 65,5*5,36" 84,8*2,91

БАС 45,8*0,97*" 53,3*1,32*" 45,9*1,45* 49,8*0,98*" 46,8*0,75 47*1,23

Лизоцим 10,0*0,71" 16,3*1,32* 13,2±1,30*" 9,8±0,75*" 20,8±0,98" 17,4*1,13

МП 2,05*0,11*' 1,92*0,15*" 1,94*0,06*" 1,68±0,05** 1,71±0,07* 2,7*0,13

КБ 1,9*0,22*" 2±0,05*" 2*0,11 ** 1,7*0,06*" 1,73*0,04* 2,52*0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, а - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; # Р <0,05 по сравнению с контролем.

На 1 сутки в первой серии опытной группы активность лизоцима была низкой, но на 2-3 сутки этот показатель вырос значительно. На 7 сутки активность временно снизилась и максимально выросла на 14 сутки. Исходя из данных показателей заметно, что в 1 серии ухудшение активности лизоцима на 1 и 3 сутки приводила к резкому, компенсаторному увеличению на 2, 7, 14 сутки. Показатель активности лизоцима на 14 сутки в 1 серии был максимальным среди всех серий и суток эксперимента. Такое повышение активности лизоцима подразумевает положительное влияние озонированного перфторана на течение воспалительного процесса и, соответственно, выздоровления, учитывая иммуномодулирующее,

мембраностабилизирующее, цитопротекторное, антигипоксантное действие перфторана в комплексе с бактерицидным действием озона. Необходимо заметить, что активность лизоцима коррелирует здесь с БАС крови и на 14 сутки БАС дает также максимальный результат в 1 серии.

Динамика изменений показателей неспецифической резистентности при

остром перитоните на фоне введения физиологического раствора _(4 серия)_

1 сутки 2 сутки 3 сутки 7 сутки 14 сутки Контроль

ФИ 0,74±0,1* 0,79±0,12* 0,72±0,04* 0,62±0,06 - 2,25±0,24

ФЧ 62,1±4,49" 60±5,77" 59,4±3,84" 52,3±3,4" - 84,8±2,91

БАС 29,9±1,05" 27,6±1,01* 32,3±1,37* 16,2±1,5* - 47 ±1,23

Лиздцим 6,44±0,73* 2,6±0,53" 6,7±0,82" 8,5±1,05* - 17,4±1,13

МП 1,19±0,05" 1,19±0,05" 1,22±0,06* 1,(Ш=0,03" - 2,7±0,13

КБ 1,26±0,07" 1,19*0,1" 1,25±0,07* 1,2±0,0б" - 2,52±0,14

Примечание: М - средняя арифметическая, о - стандартное отклонение; * Р<0,05 по сравнению с 4 серией; * Р <0,05 по сравнению с контролем.

МПО является важным компонентом врождённого иммунитета изученным нами в этой связи.

Во всех сериях показатель активности миелопероксидазы низок на все сроки, учитывая, что в данном случае (опытная группа) развивается острый каловый перитонит, влекущий за собой вторичную иммунодепрессию без адекватного антибактериального лечения. Таким образом, на 1 сутки СЦП был достоверно самым высоким в 1 серии. На 2 сутки в 1 серии СЦП миелопероксидазной активности немного снизился, но был выше, чем в остальных сериях и в последующие сроки оставался максимально приближенным к норме.

1 серия

2 серия

Рис.3. Активность МПО в нейтрофилах крыс опытной группы по сериям на первые сутки эксперимента

В эксперименте опытной группы с перитонитом, учитывая то, что антибиотикотерапия не проводится, наблюдается резкое угнетение данного показателя. В серии с введением озонированного перфторана СЦП катионных белков в нейтрофилах максимально приближен к норме с 1 по 7 сутки, что имеет основное значение в ведении больных с перитонитом. Только на 14 сутки данный показатель снизился, но даже на эти сутки показатель был высоким по сравнению с другими сериями. Процент нейтрофилов с высокой степенью активности был максимально высоким на 7 сутки и составлял 70%.

3 серия 4 серия

1 серия

2 серия

Рис.3. Активность КБ в нейтрофилах крыс опытной группы по сериям на первые сутки эксперимента

В динамике изменений влияния озонированного перфторана на состояние перитонеального экссудата следующие показатели:

Количество лимфоцитов в опытной группе во все сроки эксперимента в серии с озонированным перфтораном было выше нормы. В неспецифической антибактериальной резистентности первой линией защиты от гнойной инфекции являются нейтрофилы и моноциты, которые являются первой линией в антибактериальной защите организма. Подобно нейтрофилам, моноциты способны захватывать, убивать и переваривать микроорганизмы. Однако эти клетки не только обеспечивают резистентность по отношению к возбудителям гнойно-воспалительных заболеваний и осложнений, но и участвуют в иммунном ответе, представляя антигены лимфоцитам, продуцируя регулирующие иммунный ответ медиаторы и осуществляя кооперацию участвующих в иммунном ответе клеток.

Моноциты перитонеальной жидкости были в 3 раза выше нормы уже на первые сутки эксперимента и оставались примерно на этом уровне и на вторые сутки. На 3-е сутки данный показатель немного снизился по сравнению с предыдущими сроками, но был в 2 раза выше нормальных величин. Только на 7-14 сутки количество мононуклеаров снизилось ниже нормы, учитывая, что никакого лечения данным животным с острым каловым перитонитом не проводилось. Также в работе было замечено, что в сериях с озонированным перфтораном и перфтораном встречались чаще активные перфторофаги, с высокой степенью активности, что ещё раз подтверждает способность перфторана стимулировать двигательную и фагоцитирующую активность макрофагов. Также этот момент подтверждается показателями интрацеллюлярной микробицидной системы нейтрофилов, а именно активностью МПО и катионных белков.

Количество плазматических клеток также в данной серии было выше показателей других серий. Немного снизившись на вторые сутки, количество плазматических клеток резко повысилось на третьи сутки и продолжало повышаться и на 7 сутки. На 14 сутки количество плазматических клеток увеличилось, и было в 5 раз выше нормы. Такая положительная динамика со стороны плазматических клеток говорит о высокой активности клеток неспецифической защиты. Также прослежена выживаемость животных по срокам и сериям эксперимента, в которой выражены показатели смертности в серии с физиологическим раствором. На основании полученных данных и данных литературы нами предложена следующая схема патогенеза острого воспаления брюшины в условиях эксперимента и механизм влияния на данные изменения озонированного перфторана.

Рис.3. Схема патогенеза острого воспаления брюшины в условиях эксперимента и механизм влияния на данные изменения озонированного перфторана.

* - изменения, выявленные автором в ходе эксперимента.

В условиях введения озонированного перфторана повышается миграция перитонеальных макрофагов в брюшную полость. Появляются макрофаги, известные в литературе как перфторофаги, или пенистые макрофаги с высокой степенью активности, что приводит к раннему ограничению воспалительного процесса и препятствует распространению перитонита по брюшине, в связи с бактериостатическими свойствами озона, усиленными иммуномодулирующим, антигипоксантным,

мембраностабилизирующим действием перфторана.

В работе показаны существенные изменения показателей врождённого иммунитета и выраженная эффективность озонированного перфторана на модели экспериментального перитонита. Анализ полученных результатов позволил заключить, что три исследованных блока врождённого иммунитета, а именно: фагоцитарный блок с общим количеством лейкоцитов, блок интрацеллюлярной бактерицидности, представленной уровнем катионных

белков и миелопероксидазы, а также блок бактерицидной активности сыворотки крови, включая активность лизоцима, интегрировано реагируют на процесс острого гнойного воспаления брюшины. Ингибиция этих показателей в динамике развития экспериментального перитонита является отражением существенного угнетения активности всех звеньев иммунной системы, включая и врожденный иммунитет. Обращает на себя внимание, что такие показатели, как количество лейкоцитов, ФА, ФИ, уровень катионных белков, миелопероксидаза и активность лизоцима достоверно снижаются на все сроки эксперимента в серии с физиологическим раствором. Иными словами показатели, характеризующие перечисленные выше различные аспекты врождённого иммунитета, однотипно реагируют на процесс гнойного воспаления брюшины. Временная динамика изученных показателей с 1-х по 14-е сутки отражает адаптацию механизмов врождённого иммунитета к конкретной форме и активности воспалительного процесса. Но в целом выявляется общая закономерность, состоящая в том, что утяжеление процесса сопровождается более глубокими изменениями показателей врождённого иммунитета. Эти изменения, наряду с изменениями приобретённого иммунитета и составляют патофизиологическую основу вторичной недостаточности иммунной системы при разлитом гнойном перитоните. На этом фоне очевиден лечебный эффект озонированного перфторана, подтверждаемый клиническими наблюдениями и позитивной динамикой изученных показателей врождённого иммунитета. Таким образом, положительный терапевтический эффект озонированного перфторана связан не только с активацией и увеличением числа фагоцитирующих мононуклеаров и антибактериальным действием озона, которые препятствуют распространению воспаления по брюшине и последующему спайкообразованию, но и протекторным действием данного препарата на неспецифическое звено иммунологической резистентности организма.

На основании полученных нами данных обоснована наша рекомендация по применению озонированного перфторана в клинической практике.

Выводы

1. У крыс контрольной группы наблюдается значимое повышение таких показателей, как ФАЛ, бактерицидная активность сыворотки, активность лизоцима, тогда как в сериях с физиологическим раствором и озонированным физиологическим раствором данные показатели достигали контрольных величин только на 7-14 сутки эксперимента.

2.При экспериментальном каловом перитоните уровень ФАЛ, бактерицидной активности сыворотки и активности лизоцима на 30% ниже по сравнению с контрольными значениями этих показателей, что указывает на ослабление общей антимикробной неспецифической резистентности организма, что необходимо учитывать при проведении комплекса лечебных мероприятий.

3. Благодаря бактериостатическому действию озона с момента внутрибрю-шинного введения каловой взвеси блокируется пролиферация и размножение микробных агентов и макроскопическая картина перитонита не столь выражена, как в серии с физиологическим раствором, где наблюдается развёрнутая картина распространённого гнойно-фибринозного перитонита. Течение экспериментального калового перитонита на фоне введения озонированного физиологического раствора сопровождается угнетением факторов неспецифической резистентности всего лишь на 20%.

3. Факторы неспецифической резистентности, клеточный состав

перитонеальной жидкости в динамике развития экспериментального

перитонита в серии с перфтораном активны и находятся примерно на

уровне показателей 2-й серии. Такая картина связана со стимуляцией

миграции фагоцитирующих клеток в перитонеальный экссудат и

повышением их функциональных свойств, а также стимуляцией

интрацеллюлярной микробицидности.

20

4. Физиологический раствор практически никакого корригирующего влияния на течение перитонита и факторы врождённого иммунитета не оказывает. Такие показатели, как ФАЛ, бактерицидная активность сыворотки крови, уровень лизоцима на протяжении всего времени эксперимента значительно ниже показателей 1-3 серий.

5. Наиболее выраженный бактерицидный, иммуномодулирующий эффект определялся при введении экспериментальным животным озонированного перфторана, выражавшийся в статистически значимом повышении таких показателей врождённого иммунитета, как ФАЛ, бактерицидная активность, уровень лизоцима сыворотки крови, количество КБ и активность МП нейтрофильных гранулоцитов и улучшении показателей выживаемости крыс на 30-50% по сравнению с остальными сериями. Такое влияние, возможно, обусловлено более выраженным бактерицидным и иммунокорригирующим действием озонированного перфторана.

6. На основании полученных данных можно рекомендовать использование озонированного перфторана в клинической практике и экспериментально-клинических исследованиях для лечения перитонита.

Практические рекомендации

1. Выявленные дополнительные иммунотропные и бактерицидные свойства озонированного перфторана позволяют рекомендовать его внутрибрюшинное введение в момент операции и в комплексе лечебных мероприятий у больных с перитонитом в послеоперационном периоде.

2. Иммунотропные свойства перфторана и озонированного перфторана обосновывают возможность использования этих препаратов для коррекции вторичного иммунодефицита, развивающегося или сопутствующего в течение экспериментального перитонита.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Манасова З.Ш. Влияние внутрибрюшинного введения озонированного перфторана на течение острого перитонита в эксперименте /Османов А.О., Гусейнов Т.С.., Рагимов P.M., Магомедов С.М., Бахмудова И.Г. // Вестник РГМУ. Материалы I Международной (X Всероссийской) Пироговской студенческой научной медицинской конференции Москва, 16 марта 2006r, С.147.

2. Манасова З.Ш. Факторы неспецифической резистентности организма на фоне введения озонированного перфторана / Рагимов Р.М, Хачиров Дж. Г, Саидов М.З., Голубев A.M. // IV региональная научно-практическая конференция «Новые технологии в рекреации здоровья населения» (Северо-Осетинская государственная медицинская академия, 2007, VII, с.165-169).

3. Манасова З.Ш. Острый перитонит и факторы неспецифической резистентности при введении озонированного перфторана/ Голубев A.M., Рагимов P.M., Саидов М.З., //Общая реаниматология, Москва, 2008., IV;1- с. 50-54.

4. Манасова З.Ш. Озонированный перфторан в профилактике развития острого перитонита / Рагимов P.M.// Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Фармакология и фармакотерапия; достижения и перспективы». - Махачкала, 2006.-С.226-228.

5. Манасова З.Ш. Влияние озонированного перфторана на динамику развития перитонита в эксперименте. / Рагимов P.M., Голубев A.M., Гусейнов Т.С., Саидов М.З., Ганиева А.И., Рагимова Д.М., Бахмудова И.Г.// Сборник научных трудов Дагестанской Государственной Медицинской академии Махачкала, 2006.- С.149-151.

6. Манасова З.Ш. Возможность использования перфторана и новокаина в комплексе антипаретической терапии при операциях на органах брюшной полости /Магомедов З.М., Магомедов С.М, Далгатов Г.М.,

22

Бекеев К.В., Мамайханов С.М.// Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007 - С.218-220.

7. Манасова З.Ш. Сопротивление тонкой кишки в динамике перитонита на фоне внутрибрыжеечного введения перфторана / Загиров У.З., Рагимов P.M., Магомедов З.М., Магомедов С.М., Мамайханов С.М., Бекеев К.В.// Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007 - С.220-222.

8. Манасова З.Ш. Способ оценки эвакуаторной функции ЖКТ при экспериментальном каловом перитоните/ Магомедов З.М., Магомедов С.М., Мамайханов С.М., Бекеев К.В.// Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007. -С.226-228.

9. Манасова З.Ш. Цитологическое исследование перитонеальной жидкости при внутрибрыжеечном введении перфторана на фоне острого перитонита / З.М. Магомедов, С.М. Магомедов, С.М. Мамайханов, К.В. Бекеев // Доклады 58 научной конференции молодых учёных и студентов. - Махачкала, 2007. - С.222-223.

Список сокращений АКБ, КБ - антимикробные катионные белки МП - миелопероксидаза НГ - нейтрофильный гранулоцит ПО-гранулы - пероксидазные гранулы СЦП - средний цитохимический показатель ФИ - фагоцитарный индекс ФЧ - фагоцитарное число БАС - бактерицидная активность сыворотки

Искренне признательны доценту кафедры анатомии человека Рагимову P.M. за помощь в выполнении и анализе цитологической части исследования.

Печать цифровая. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Формат 60x84/16. Объем 1,0уч.-изд.-л. Заказ № 1406. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Суворова, 19, тел. 247-34-88