Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фагоцит-зависимые и нитроксидергические механизмы противовоспалительного и психотропного эффектов бета-лактамных антибиотиков

На правах рукописи

Тренина Елена Александровна

ФАГОЦИТ-ЗАВИСИМЫЕ И НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО И ПСИХОТРОПНОГО ЭФФЕКТОВ БЕТА-ЛАКТАМНЫХ АНТИБИОТИКОВ

14.00.25-фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Научные руководители:

доктор медицинских наук,_

профессор Ратников Владимир Иванович

доктор медицинских наук,

профессор Волчегорский Илья Анатольевич

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Ларионов Леонид Петрович Сибиряк Сергей Владимирович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Защита диссертации состоится «_»_2004 года в

_часов на заседании Диссертационного совета Д 208.117.03 при

Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации», по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского,64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации».

Афтореферат разослан « »_2004 г.

Учёный секретарь Диссертационного Совета, доктор медицинских наук,

профессор Телешева Л.Ф.

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. Бета-лактамные антибиотики являются широкой группой средств антибактериальной терапии, включающей исторически первый антибиотик - пенициллин (Навашин СМ., Навашин П.С., 1993). Благодаря широкому спектру противомикробного действия современные бета-лактамы рассматриваются как средства выбора для эмпирической терапии нозокомиальных и хирургических инфекций (Савицкая К.И. и'соавт., 1993; Яковлев СВ. 1999).

Инфекционная патология, для лечения которой используются бета-лактам-ные антибиотики, связана с развитием острого воспалительного процесса, главными эффекторами которого являются фагоцитирующие клетки (нейтрофильные гранулоциты (НГ) и мононуклеарные фагоциты) (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989; Никитин А.В. и др., 2001). В литературе достаточно широко представлены сведения о влиянии бета-лактамов на функциональное состояние фагоцитирующих клеток (Абдрашитова Н.Ф., Романов Ю.А., 2001). Зачастую эти сведения являются весьма противоречивыми и не позволяют составить однозначного представления о влиянии бета-лактамов на эффекторы воспалительного процесса. При этом, практически отсутствуют данные о влиянии бета-лактамов на чувствительность к асептическим флогогенам, которые широко используются в экспериментальных фармакологических исследованиях для скрининга средств с антифлогис-тической активностью. Имеются лишь единичные указания на наличие противовоспалительного действия у антибиотиков пенициллинового ряда (Голиков П.П.,2002). Современные группы бета-лактамов (цефалоспорины и карбапене-мы) до настоящего времени не изучались на предмет противовоспалительной активности в условиях действия асептических флогогенов.

Отдельного внимания заслуживает рассмотрение состояния нитроксидер-гических процессов под влиянием антибактериальных средств бета-лактамной структуры. В литературе отмечается либо отсутствие сдвига нитроксидергичес-ких процессов (Pallister C.J., Lewis K.J.,2000), либо их подавление при введении пенициллинов и карбапенемов (Smith A.L., 1998). Иначе обстоит ситуация с цефа-лоспоринами. Установлено, что низкие дозы цефодизима стимулируют продукцию оксида азота (N0), а высокие оказывают противоположное действие (Deby-Dupont G., Mathy Hartert M., Deby C, 1995). В большинстве публикаций, посвященных нитроксидергическим эффектам антибиотиков, рассматриваются вопросы цитокин-опосредованной регуляции индуцибельной NO-синтазы (iNOS) (Eigler A., Endres S., 1997; Nelson S., 2001). К сожалению, отсутствуют исследования, посвященные рассмотрению взаимосвязей между нитроксидергическими эффектами, фагоцитотропным действием и сдвигами реактивности к флогогенным воздействиям при введении бета-лактамов.

Известно, что риск инфекционно-воспалительных осложнений после плановых хирургических вмешательств существенно зависит от предоперационного психоэмоционального состояния больного (Волчегорский И. А, Попов А.Н., 2001, 2002; Попов А.Н., 2001). С другой стороны, давно установлена способность бета-лактамов увеличивать возбудимость нейронов (Романова Н.Н.,1990). Это действие антибиотиков традиционно рассматривается в контексте их нежелательных

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА

побочных действий. Нельзя исключить, что нейротропные эффекты бета-лакта-мов могут оказаться потенциально полезными для коррекции проявлений «поведения болезни», закономерно сопровождающих острый воспалительный процесс (Dantzeг R. et а1., 1998). Не исключено также, что стимулирующее влияние бета-лактамов на ЦНС может повлиять на чувствительность организма к острым фло-гогенным воздействиям.

Таким образом, целенаправленное изучение взаимосвязей между влиянием бета-лактамных антибиотиков на функциональное состояние фагоцитирующих клеток, интенсивность нитроксидергических процессов, психоэмоциональный статус и поведение, а также чувствительность к флогогенам является актуальной задачей экспериментальной фармакологии.

Цель исследования

Исследовать фагоцит-зависимые и нитроксидергические механизмы влияния бета-лактамных антибиотиков (ретарпена, цефтазидима и тиенама) на чувствительность к асептическим флогогенам и поведение экспериментальных животных.

Задачи работы:

1. Изучить влияние бета-лактамных антибиотиков (ретарпена, цефтазидима и тиенама) на показатели фагоцитарной реакции и НСТ-теста нейтрофильных гранулоцитов крови мышей.

2. Изучить влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама. на N0-продуцирующую активность перитонеальных макрофагов мышей

3. Изучить влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на показатели нитроксидемии мышей и нитроксидурии крыс.

4. Изучить действие ретарпена, цефтазидима и тиенама на выраженность острого асептического воспаления с использованием моделей формалинового, декстранового и серотонинового отеков.

5. Изучить влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на длительность иммобильности мышей в тесте подвешивания мышей за хвост и их поведение в «открытом поле».

6. Изучить взаимосвязи между влиянием бета-лактамных антибиотиков на функциональное состояние фагоцитирующих клеток, нитроксидергические процессы, поведение животных и их устойчивость к действию асептических флогоге-нов.

Научная новизна

Впервые показано, что угнетающее влияние бета-лактамных антибиотиков на фагоцитарную реакцию и кислород-зависимый метаболизм НГ является механизмом антифлогистического действия ретарпена, цефтазидима и тиенама в условиях острого воспалительного процесса. Продемонстрирован параллелизм между влиянием бета-лактамов на КО-продуцирующую функцию перитонеальных макрофагов (МФ) и нитроксидемическими эффектами изученных антибиотиков. Показано угнетающее влияние бета-лактамных антибиотиков на бемитил- и про-дигиозан-индуцированный прирост продукции N0 МФ и сопутствующее увеличение нитроксидемии.

Впервые продемонстрировано стимулирующее влияние ретарпена, цефта-

зидима и тиенама на поведение мышей в «открытом поле». Установлено, что подоплекой стимуляции поведения животных под действием бета-лактамных антибиотиков является их антидепрессивная активность. Впервые показано,ьчто чувствительность экспериментальных животных к серотониновому отеку отражает их устойчивость к экспериментальному депрессогенному воздействию. Впервые продемонстрирована взаимосвязь между психотропным действием бета-лактам-ных антибиотиков и их влиянием на устойчивость к асептическим флогогенам.

Теоретическая и практическая значимость.

Теоретическая значимость работы связана с характеристикой ранее неизвестных аспектов фармакодинамики бета-лактамных антибиотиков. Полученные результаты могут рассматриваться как теоретическая база для оптимизации клинического использования бета-лактамов с учетом их антифлогистической активности и стимулирующего влияния на состояние центральной нервной системы.

Положения, выносимые на защиту:

1. Введение бета-лактамных антибиотиков (ретарпена, цефтазидима и тиенама) интактным экспериментальным животным вызывает снижение показателей фагоцитарной реакции и НСТ-теста НГ крови, снижает КО-продуцирующую функцию перитонеальных МФ и увеличивает устойчивость животных к действию асептических флогогенов.

2. Введение бета-лактамных антибиотиков (ретарпена, цефтазидима и тиена-ма) экспериментальным животным оказывает антидепрессивный эффект и увеличивает показатели поведенческой активности в «открытом поле».

3. Выраженность стимулирующего влияния бета-лактамных антибиотиков на поведение зависит от их гипонитроксидемической и антифлогистической активности.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены, обсуждены и опубликованы в материалах международной конференции «Медицинская иммунология» (Москва, 1999), VI Российском конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1999), XXXI научно-практической конференции «Современные проблемы медицины и биологии» (Курган, 1999), международной конференции «Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биология. Ветеринария.» (Екатеринбург, 1999), конференции «Вклад молодых ученых и специалистов в развитие науки и культуры» (Челябинск, 2000),научной сессии «Актуальные проблемы медицинской науки и профессионального образования» (Челябинск, 2000), научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центр.-Черноземного научного центра РАМН (Курган, 2002), Ш -ей Конференции Иммунологов Урала (Челябинск, 2003), конференции, посвященной 10-летию НПЦ диагностики, лечения и профилактики дисбактериозов НИИ Иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО Челябинская государственная медицинская академия МЗ РФ «Современные проблемы диагностики и лечения дисбактериозов» (Челябинск, 2004).''

Апробация работы состоялась на научном заседании кафедры фармакологии ГОУ ВПО ЧелГМА МЗ РФ при участии сотрудников кафедр биохимии и микробиологии.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследований включены в обучающие материалы кафедры фармакологии ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия МЗ РФ».

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 печатных работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 140 листах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4-х разделов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и списка использованной литературы. Диссертация иллюстрирована 37 таблицами и 8 рисунками. Список литературы содержит 214 источников, из которых 116 опубликовано в отечественных и 98 в зарубежных изданиях.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на мышах линий СВА и (СВА х С57 В116) Б1, а также на белых беспородных мышах массой 18-20 г, и белых беспородных крысах массой 200-250 г. Использованные в работе животные были получены из вивария (Уральский Научно-Производственный Центр Радиационной Медицины РФ) и вивария ЧелГМА. Животных размещали в стандартных пластиковых клетках и содержали на протяжение всего экспериментального периода на стандартном лабораторном рационе при свободном доступе к воде в помещении с температурой воздуха 18-25°С.

Использованные в работе лекарственные средства отражены в таблице 1.

Изученные бета-лактамы вводили в 3-х дозовых режимах с использованием 3-х стандартных схем введения. Каждая доза антибиотика вводилась 1 раз в сутки

Таблица 1

Лекарственные средства, использованные в работе

№ Фармакологический. препарат (лекарственное средство) Фармакологическая группа

1 Тиенам (Имипенем+циластатин) 11.1.5. (Антибиотики)

[MSD, Швейцария]

2 Фортум (Цефтазидич) [Glaxo Wellcome,

Великобритания] 11.1.9. (Антибиотики)

3 Ретарпен (Бензатин бензил-пенициллин) 11.1.11. (Антибиотики)

[Biochemie, Австрия]

4 Продигиозан (LPS Serratia marcences) 5.5. (Иммуномодуляторы)

[Россия]

5 Бемитил (2-этилтиобензимидазола 5.5. (Иммуномодуляторы)

гидробромид) [Россия]

6 Полиглюкин (Декстран) [Россия] 7.8., 7.11., 7.12.

(Плазмозамещающее средство)

7 Диклофенак [Astrapin, Германия] 9. (НПВС)

8 Золофт (Сертралин) [Pfizer, США] 8.2. (Антидепрессанты)

на протяжении 1, 5 и 10 дней. В отдельных сериях экспериментов с изучением нитроксидемиии нитроксидурии сразу после заключительной инъекции антибиотика животным однократно вводили продигиозан (1 мг/кг). В отдельных сериях экспериментов с изучением N0- продуцирующей активности перитонеальных МФ, мышам сразу после заключительной инъекции антибиотика внутрибрюшин-но вводили бемитил в дозе 25 мг/кг.

Ретарпен и цефтазидим применяли в дозах 10,40 и 400 мг/кг. Оба антибиотика перед введением разводили в 0,9% растворе NaCl до концентраций 0,4; 1,6 и 16 мг/мл и вводили внутрибрюшинно мышам в объеме 0,025 мл/г массы. Крысам данные антибиотики вводили внутримышечно в концентрациях 2; 8 и 80 мг/мл, в объеме 0,005 мл/г массы.

Тиенам применяли в дозах 20, 100 и.200 мг/кг. Антибиотик разводили в изотоническом растворе NaCl до концентраций 0,8; 4 и 8 мг/мл и вводили мышам в объеме 0,025 мл/г массы, а крысам - в концентрациях 4; 20 и 40 мг/мл в объеме 0,005 мл/г.

Через сутки после этого приступали к оценке NO-предуцирующей функции МФ и количественному изучению стабильных метаболитов NO в крови или моче.

Контрольные животные получали эквиобъемные инъекции 0,9% раствора-

NaCl.

О функциональном состоянии НГ крови судили по показателям метаболизма кислорода (НСТ-тест) и фагоцитарной реакции (Волчегорский И. А и соавт. ,2000; Долгушин И.И. и соавт., 1992). Для регистрации НСТ-теста использовался модифицированный метод А.Н. Маянского и М.Е. Виксмана (1979).

Для изучения NO- продуцирующей функции перитонеальных макрофагов получали суспензию мононуклеаров из перитонеальной полости мышей. После внутрибрюшинного введения 1 мл 3% тиогликолята проводили промывание брюшной полости мышей 5 мл RPMI с гепарином 5 ЕД/мл. Потом 6 х 105 клеток (МФ) вносили в ячейки стандартной планшеты для иммунологических реакций и инкубировали в газопроточном термостате ГПИ-01 с 5% содержанием СО2 в воздушной среде и температурой 37ПС. Затем планшет вынимали из термостата и в условиях стерильного ламинарного шкафа СМИ-130 содержимое ячеек извлекали с последующим их 2-х-кратным промыванием от неприлипших клеток средой RPMI. Потом в каждую ячейку добавляли по 200 мкл RPMI с пенициллином, стрептомицином, L-глютамином и фетальной сывороткой в пропорциях, указанных выше. С целью стимуляции выработки NO МФ, добавляли липополисахарид Е. Coli в концентрации 10 нг/мл, после чего, планшет вновь помещали в газопроточный термостат на 48 часов при температуре 37°С. По истечении этого срока пробы доставали из термостата, по 100 мкл супернатанта МФ переносили в каждую ячейку другого планшета, затем добавляли составляющие реактива Грисса: 50 мкл 1% раствора сульфаниламида (белого стрептоцида) и 50 мкл 0,1% раствора N-нафтилэтилендиаминди-гидрохлорида (НЭДА). Через 10 мин. инкубации полученной смеси при комнатной температуре, определяли экстинцию полученного раствора при длине волны 540 нм. Концентрацию нитритов расчитывали по калибровочной кривой.

О нитроксидемических и нитроксидурических эффектах изученных антибиотиков судили по концентрации суммы стабильных метаболитов окиси азота (NO3 + NO,; NOx) в крови и моче. Определение NOx проводилось с помощью реактива Грисса после предварительного восстановления нитратов губчатым кадмием (Ем-ченко Н.Л., 1994).

Для изучения влияния бета-лактамных антибиотиков на чувствительность к асептическим флогогенам было использовано 3 модели острого асептического воспаления (формалиновый, декстрановый и серотониновый отеки).

Для моделирования формалинового отека мышам под апоневроз стопы вводили 0,05 мл 3,3% водный раствор формалина, в контрлатеральную стопу вводили эквиобъемное количество 0,9% раствора NaCl. Через 24 часа проводили эк-зартикуляцию в голеностопном суставе. Отделенные стопы взвешивали на торсионных весах и рассчитывали выраженность воспалительного отека по формуле (Балтина Л. А. и соавт., 1988; Волчегорский И.А. и соавт., 2000):

Масса стопы после введения формалина (мг) — масса стопы после

отек (%) Масса стопы после введения 0,9% р-ра NaCl (мг)

Для моделирования декстранового отека мышам под апоневроз стопы вводили 0,05 мл полиглюкина (Стамова Л.Г., 1998). В контрлатеральную стопу вводили эквиобъемное количество 0,9% раствора NaCl. Через 1 час проводили экзар-тикуляцию в голеностопном суставе. Отделенные стопы также взвешивали на торсионных весах. Выраженность воспалительного отека рассчитывали также как при моделировании формалинового воспаления.

Для моделирования серотон и нового отека использовали серотонин креати-нин сульфат («Реанал», Венгрия), который разводили в изотоническом растворе NaCl до конечной концентрации 500 мкг/мл. Для ускорения развития серотонино-вого отека мы увеличили дозу этого амина по сравнению с описанной в литературе (Гацура В.В.,1974). Через 1 час после субапоневротического введения 0,05 мл серотонина и эквиобъемной инъекции 0,9% раствора NaCl в контрлатеральную стопу проводили экзартикуляцию в голеностопном суставе. Выраженность воспалительного отека оценивали так же, как при моделировании формалинового и декстранового воспаления.

Для оценки психотропных эффектов изученных лекарств проводилось исследование поведения мышей в тесте «открытое поле» no M.L. Weischer (1976). Организация эксперимента и регистрация параметров поведения мышей в «открытом поле» осуществлялась двумя независимыми наблюдателями в соответствии с описанием И.А. Волчегорского и соавт. (2000).

В отдельной серии экспериментов проводилось изучение влияния бета-лактамных антибиотиков и сертралина на «поведение отчаяния» мышей в тесте подвешивания мышей за хвост (Stem L., 1985). Оценка результатов проводилась визуально с соблюдением правил «слепой» постановки опыта. Длительность «поведения отчаяния» регистрировалась как суммарная продолжительность непод-

вижности животных за шестиминутный период наолюдения.

Полученные данные были обработаны методами дискриптивной статистики и представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М±т). О достоверности различий судили с помощью критерия Манна-Уитни. В отдельных случаях достоверность различий оценивали по критерию Розенбаума и точному критерию Фишера (Гублер Е.В., 1978). Для изучения статистических взаимосвязей использовали межгрупповой корреляционный анализ (Archer J., 1973) с исчислением коэффициентов корреляции Спирмена (Rs) и Кендела (Rk). Проверка статистических гипотез проводилась при критическом уровне значимости Р = 0,05. Статистическая обработка результатов выполнялась с помощью пакета прикладных программ StatSoft Statistica v.6.0.

Результаты и обсуждение

В результате проведенных исследований было установлено, что изученные антибиотики оказывают выраженное модулирующее действие на функциональный статус нейтрофильных гранулоцитов (НГ). Наиболее значимая НГ- модулирующая активность бета-лактамов проявлялась при их использовании а максимальных дозировках, равноэффективных терапевтическим дозам для человека (таб. 2).

Наиболее заметное влияние ретарпена на состояние НГ отмечалось при использовании дозы 400 мг/кг. Вне зависимости от схем введения эта доза антибиотика вызывала достоверное уменьшение активности «спонтанного» и «индуцированного» НСТ-теста. Влияние ретарпена на показатели фагоцитарной реакции было менее выражено и касалось главным образом активности фагоцитоза, которая также как показатели НСТ-теста, снижалась при введении 400 мг/кг антибиотика. Интенсивность фагоцитоза при введении данной дозы ретарпена снижалась только на фоне 5-кратного применения, но не изменялась при 1-й 10-кратном использовании. Однократное введение низких доз ретарпена (10 и 40 мг/кг) вызывало активацию НГ.

Применение максимальной дозы цефтазидима безотносительно схем введения вызывало достоверное снижение активности фагоцитоза, интенсивности «спонтанного» и «индуцированного» НСТ-теста и активности «индуцированного» НСТ-теста. Кроме того, при 5- и 10- дневном введении цефтазидима отмечалось достоверное угнетение активности «спонтанного» НСТ-теста, а при 10- дневном введении антибиотика в данной дозе дополнительно наблюдалось значимое снижение интенсивности фагоцитоза НГ. Введение цефтазидима в дозе 40 мг/кг стимулировало НГ безотносительно схем введения. Не исключено, что НГ-стимулирующий эффект малых доз ретарпена и цефтазидима обусловлен известной антиглюкокор-тикоидной активностью бета-лактамов (Голиков П.П., 2002).

Наиболее яркие сдвиги в состоянии циркулирующих НГ были отмечены у мышей, получавших антибиотик карбапенемового ряда-тиенам (имипенем+цила-статин). В отличие от ретарпена и, особенно, цефтазидима, тиенам оказывал однонаправленное угнетающее действие, как на показатели респираторного взрыва, так и фагоцитарной реакции вне зависимости от доз и схем введения. Применение максимальных доз ретарпена и цефтазидима, а также всех дозовых режимов тиена-

Таблица2

Влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на показатели функционального состояния нейтрофилов крови

мышей (М±т).

Доза мг/кг Антибиотик Схема с>т. N А-НСТ спонт. нф, % И-НСТ спонт. нф, у е. А-НСТ индуц. нф, % И-НСТ индуц. нф, у .е. АФ нф, % ИФ нф, у.е. ФЧ нф, У-е-

Контроль - 10 12,20±0.77 0,149±0,009 17,10±1,02 0,211±0,011 27.40±2,07 2,11±0,25 7,64±0,58

400 рстарпсн 1 7 8.86±0,91 Р=0,022 0,111 ±0,009 Р=0,019 13,71±0.89 Р=0,032 0,141±0,011 Р=0,003 17,86± 1,67 Р=0,007 1,78±0,13 7,01±0,45

5 7 7,29±0,75 Р=0,002 0,097±0,009 Р=0,003 12,71±0,64 Р=0.007 0,134±0,009 Р=0.001 13,43±1,41 Р=0.001 1,37±0,21 Р=0,032 7,12±0,53

10 7 7,29±0,42 Р=0.001 0,101±0,010 Р=0,007 10,71 ±0,81 Р=О,О02 0,П6±0.008 Р=0,001 13,43±1,34 Р=0,001 и9±0.19 6,92±0,43

. 400 цсфтазидим 1 7 10,43±0,46 0,110±0,005 Р=0,005 20,43±0,61 Р=0,032 0,167±,0006 Р=0,01 20,14±1,61 Р=0,028 1,80±0.12 7,40±0,30

5 7 9,43±0,61 ' Р=0,022 0,104±0,008 Р=0,005 12,57±0,92 Р=0,013 0,153±0,009 Р=0,004 20,43±2,08 Р=0,036 1,69±0,24 7,20±0,57

10 7 8,29±0,94 Р=0.013 0,097±0,008 Р=0.002 11,71 ±0,89 Р=0.003 0,136±0,008 Р=0.001 17,57±1,74 Р=0.(Ю7 1,40±0,17 Р=0,032 7,19±0,38

200 тиенам 1 7 6,29±0,64 Р=0,001 0,069±0,006 Р=0,001 10,57±0,69 Р=0,002 0,133±0,007 Р=0,001 15,43±0,95 Р=0,001 0,809±0.079 Р=0,001 6,76±0,47

5 6 5,67±0,49 Р=0,001 0,058±0,005 Р=0,001 9,33±0,33 Р=0.001 0,113±0,006 Р=0.001 10.67±0,84 Р=0.001 0,735±0,027 Р=0,001 5,75±0,54

10 7 5,67±0,53 Р=0,001 0,064±0,007 Р=0,001 8,86±0,34 Р=(),001 0,099±0,005 Р=0,001 8,86±0,70 Р=0,001 0,787±0,078 Р=0.001 5,84±0,52

Примечания: 1. В таблице указана статистическая значимость только достоверных различий с контролем.

2. А-НСТ спонт. - активность «спонтанного» НТС-теста; И-НСТ спонт. - интенсивность «спонтанного» НСТ-теста; А-НСТ индуц. - активность «индуцированного» НСТ-теста; И-НСТ индуц. - интенсивность «индуцированного» НСТ-теста; АФ - активность фагоцитоза; ИФ - интенсивность фагоцитоза (частицы латекса на 100 нейтрофилов), ФЧ - фагоцитарное число (частицы латекса на 1 фагоцит).

ма, характеризующегося наиболее выраженной антибактериальной активностью (Страчунский Л С, Козлов С.Н. 2002.), оказывало угнетающее действие на НГ скорее всего за счет подавления Гр- флоры кишечника, которая является источником LPS, оказывающих стимулирующее влияние на НГ (Shibazaki Т., 1996).

Таким образом, применение давно известного антибиотика пеницилинового ряда (ретарпена) и современных представителей бета-лактамов (цефтазидима и тиенама) в дозах, соответствующих терапевтическому диапазону для человека, приводит к подавлению фагоцитоза и респираторного взрыва нейтрофильных гранулоцитов периферической крови мышей.

В процессе изучения влияния бета-лактамных антибиотиков на NO-проду-цирующую функцию перитонеальных МФ мышей было установлено, что ретар-пен, цефтазидим и тиенам, вводимые в максимальных дозах вызывали существенное снижение содержания нитритов в переживающих культурах перитонеальных МФ мышей (таб. 3). Несмотря на достоверное увеличение концентрации NO2" в культуре перитонеальных МФ мышей после однократного введения животным бемитила (25 мг/кг), изученные бета-лактамные антибиотики сохраняли способность подавлять NO-продуцирующую активность МФ. Важно отметить, что относительно низкие дозы ретарпена оказывали менее выраженное угнетающее влияние на содержание NO2' в культурах МФ Однако введение этого антибиотика в дозе 40 мг/кг также снижало NO-продуцирующую функцию МФ безотносительно схемы введения. Такое же действие оказывал тиенам в дозе 100 мг/кг.

Таблица 3

Влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на уровень нитритов в переживающих культурах перитонеальных макрофагов мышей (М±т).

Антибиотик Дои мг/кг Схема N Нитриты нмоль/мл Р

Контроль - 9 14,82±0,85 -

Ретарпсн 400 1 cvt 8 11,07±0,41 0.012

5 сут 8 10,67±0,59 0,009

Юсут 8 9.32±0.70 0.003

Цефтазидим 400 1 сут 8 11,75±0,71 0.007

5 сут 8 9Д8±0,39 0,001

Юсут ' 8 9,52±0,47 0,001

Тиенам 200 1 сут 9 7.09±0.58 0.0005

5 cvt 10 6,80±0.58 0.0004

Юсут 9 5,84±0.56 | 0.00005

Относительно низкие дозировки цефтазидима не влияли на содержание нитритов в макрофагальных культурах.

Характер влияния бета-лактамных антибиотиков на КО-продуцирующую активность макрофагов хорошо соответствовал направленности действия бета-лактамов на функциональный статус нейтрофилов крови. Это иллюстрируется прямой корреляцией между сдвигами КО-продуцирующей активности макрофагальных культур и изменениями интенсивности фагоцитоза (Из = 0,83; р = 0,005), фагоцитарного числа (Из = 0,75; р = 0,02), активности НСТ-теста, как «спонтанно-

го», так и «индуцированного» (И = 0,80-0,95; р = 0,009-0,001) и интенсивности НСТ-теста, как «спонтанного», так и «индуцированного» (Иб = 0,823-0,783; р = 0,006-0,01) под действием различных схем введения высших доз изученных антибиотиков Представленные данные межгруппового корреляционного анализа подтверждают сочетанный характер влияния бета-лактамных антибиотиков на функции НГ и МФ.

Результаты исследования влияния бета-лактамных антибиотиков на уровень нитроксидемии в основном соответствовали данным по антибиотико-индуци-рованным сдвигам макрофагальной продукции N0, что иллюстрируется результатами межгруппового корреляционного анализа (рис.1) Применение ретарпена в дозе 40 мг/кг на протяжении 5 суток привело к достоверному нарастанию уровня циркулирующих N0x. 10-суточное введение максимальной дозы антибиотика (400 мг/кг), наоборот, вызывало значимое снижение концентрации нитритов и нитратов в крови мышей (таб 4)

Циркулирующие КОк О Ц. 1

(°« от контроля)

р с—( , 1 ),78 01

р=0, оц5

цю ряс р'1

о т/1 р'юо

1

о т/10 öt5

30 3S 40 45 50 55 60 65 70 75 80

Нитриты в кчльт)ра\ ч&крофаювСЧотконтро 1я)

Рис. 1. Корреляционная зависимость между уровнем нитритов в переживающих культурах перитонеальных макрофагов мышей и концентрацией суммарных метаболитов азота оксида (NOx) в крови животных получавших тиенам (200 мг/кг), цефтазидим (400 мг/кг) и ретарпен (400 мг/кг) в течение 1, 5 и 10

суток.

Примечание: Каждая точка на корреляционном поле обозначена дробью, в числителе которой вводимый антибиотик, а в знаменателе - схема (сутки)

Для оценки вовлеченности iNOS в развитие отмеченных сдвигов было изучено влияние ретарпена на нитроксидемию в условиях стимуляции липополисаха-ридным препаратом из клеточной стенки Serratia marcescens - продигиозаном. Введение 1 мг/кг продигиозана интактным мышам приводило к достоверному приросту концентрации NOx с 16,77±0,9 мкмоль/л (в контроле; п=9) до 25,11 ±0,88

Таблица4

Влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на уровень NOx в крови

мышей (М±га).

Антибиотк Дои мг/кг Схема N ЯОх чкмоль/л Р

Контроль - 9 16,77±0,90 -

Ретарпен 400 1 сут 8 14,30*1.03 0,188

5 сут 9 14,52±1,06 0,257

Юсут 10 12,69±0,66 0,010

Цефтазидим 400- 1 сут 10 22.64±0,59 0,0002

5 сут 10 15,6640,98 0,940

Юсут 10 12,90±0,61 0,054

1 сут 9 13,26±1,75 0,133

200 5 сут 10 8,12±0,47 0,0002

Юсут 10 7,05*0,43 0,0002

мкмоль/л (п=9; р=0,0011). Этот прирост является следствием LPS-зависимой стимуляции макрофагов, приводящей к усиленной экспрессии iNOS (Проскуряков и соавт, 2000). В условиях стимуляции продигиозаном отмечалось нивелирование нитроксидемических эффектов ретарпена, который уже не оказывал статистически значимого влияния на концентрацию NOx в крови мышей.

Введение цефтазидима интактным мышам вызывало однонаправленное уве* личение нитроксидемии, которое достигало статистически значимого уровня при пятикратном применении дозы 40 мг/кг и однократном введении 400 мг/кг антибиотика (таб. 4)

Противоположное действие цефтазидима на нитроксидемию было отмечено у продигиозан-стимулированных животных. В этой серии экспериментов было установлено достоверное гипонитроксидемическое действие цефтазидима в дозах 40 и 400 мг/кг при 5- и 10-суточном применении. Полученный результат позволяет предположить, что нитроксидемические эффекты цефтазидима у интактных и продигиозан-стимулированных животных реализуются через разные механизмы.

Введение тиенама интактным мышам. обусловило достоверное снижение нитроксидемии при использовании высшей дозы (200 мг/кг), примененной в течение 5 и 10 суток (таб. 4). Та же доза тиенама вызывала статистически значимое снижение уровня нитритов и нитратов в крови продигиозан-стимулированных животных независимо от использованных схем,

В результате межгруппового корреляционного анализа была установлена прямая зависимость (Rs =0,95; р = 0,0001) влияния тиенама на нитрксидемию у продигиозан-стимулированных животных от эффектов антибиотика в отношении макрофагальной продукции NO. Как видно, сдвиги нитроксидемии при введении различных доз тиенама и использовании разных схем существенно зависели от

эффектов антибиотика в отношении макрофагальной продукции N0. По-видимому, нитроксидемические эффекты тиенама связаны главным образом с его влиянием на iNOS макрофагов, что соответствует данным литературы о центральной роли макрофагальной iNOS в развитии гипернитроксидемии при тяжелой воспалительной патологии (Бондаренко ВМ., Виноградов НА., Малеев В.В., 1999).

Влияние различных схем введения максимальных изученных доз бета-лак-тамных антибиотиков на макрофагальную продукцию N0 прямо коррелировало с выраженностью их нитроксидурического действия (Rs=0,88; p = 0,002). Тем не менее, дозы и схемы введения ретарпена, приводившие к достоверным сдвигам нитроксидемии у мышей, не оказали статистически значимого влияния на нитро-ксидурию крыс. Введение цефтазидима интактным крысам привело к достоверному повышению нитроксидурии только при однократном применении антибиотика в дозе 400 мг/кг с 58,58 ± 2,97 мкмоль/л (в контроле; п = 5) до 69,08 ± 5,02 мкмоль/л (n=4; p = 0,05). В условие стимуляции продигиозаном нитроксидури-ческие эффекты цефтазидима качественно изменялись и смещались к диапазону более низких доз. Это проявилось достоверным снижением концентрации NOx в моче крыс, получавших 10 мг/кг антибиотика при одно- и пятикратном применении, а также 40 мг/кг цефтазидима при однократном введении.

Нитроксидурические эффекты тиенама носили в основном однонаправленный характер с его влиянием на нитроксидемию. В высшей из использованных доз (200 мг/кг) тиенам вызывал гипонитроксидурию безотносительно схем введения. Аналогичный эффект наблюдался при десятикратном применении тиенама в дозе 100 мг/кг, а также при однократном введении антибиотика в минимальной из изученных дозе 20 мг/кг. Полученные результаты дают основания полагать, что сдвиги содержания NOx в крови и моче экспериментальных животных, получавших тиенам, являются следствием влияния данного антибиотика на макрофагаль-ную продукцию NO.

Справедливость этого положения иллюстрируется результатами межгруппового корреляционного анализа. Было показано, что в условии введения тиенама уровень нитритов в переживающих культурах перитонеальных МФ мышей, стимулированных бемитилом, прямо коррелирует с концентрацией NOx в моче про-дигиозан-стимулированных крыс (Rs = 0,83; р = 0,005). Была также выявлена прямая корреляционная зависимость между уровнем нитритов в макрофагаль-ных культурах и концентрацией NOx в моче у животных, получавших тиенам (Rs=0,73; p=0,025).

Угнетающее влияние высших доз бета-лактамных антибиотиков на функциональный статус НГ и макрофагальную продукцию NO позволило предположить, что ретарпен, цефтазидим и тиенам могут оказывать противовоспалительное действие на моделях острого асептического воспаления. Целенаправленное изучение такой возможности полностью подтвердило правомерность данного предположения. Как видно (таб. 5), на моделях формалинового и декстранового отеков все изученные антибиотики продемонстрировали статистически значимую антифлогистическую активность. Наиболее выраженное противовоспалительное действие отмечалось при 5- и 10-суточных схемах введения. Правомерность соображений о взаимосвязи между фагоцитотропным действием изученных бета-лак-

Таблица 5

Влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на формалиновый и декстрановый отеки у мышей ( М ± т ).

Примечания: 1. Здесь и далее данные представлены в виде дроби, в числители которой значение контроля, в знаменатели - опыта.

2. В скобках представлено количество животных, использованных в эксперименте.

3. В столбцах «Р» представлена значимость различий между опытом и контролем

тамных антибиотиков и их антифлогистическим эффектом на моделях формалинового и декстранового отеков подтверждается результатами непараметрического межгруппового корреляционного анализа В процессе этого анализа было установлено, что влияние различных схем введения максимальных доз изученных антибиотиков на интенсивность «спонтанного» НСТ-теста нейтрофилов прямо коррелирует с действием бета-лактамов, как на формалиновый отек (Rk = 0,51, р = 0,05), так и на декстрановое воспаление (Rk = 0,57, р = 0,032)

Помимо этого, влияние различных схем введения максимальных доз бета-лак-тамов на выраженность декстранового отека прямо коррелировало с антибиотик-индуцированными сдвигами интенсивности фагоцитоза НГ (Rk = 0,61, р = 0,02)

Влияние различных схем введения высших доз ретарпена, цефтазидима и тиенама на концентрацию NOx в крови продигиозан-стимулированных мышей прямо коррелировало с выраженностью формалинового отека на фоне введения этих антибиотиков (Rk = 0,54, р = 0,045)

Влияние бета-лактамных антибиотиков на серотониновый отек существенно отличалось от их действия на формалиновый и декстрановый отеки (таб 6)

Таблица 6

Влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на серотониновый отек у мышей

(М±т)

Схема (с}т) % прироста воспалите тыгого отека

Ретарпен (400 к г/ч г ) Р Цефтазидим (400 мг/кг) Р Тиенам (200 мг/кг) Р

1 44.40±3.20 (9) 30,28±2,63 (8) 0,007 2б.31±2.21 (10) 32,81±2,38 (8) 0,05 (ТКФ) 41.93±5.6(5) 39,29*4,10 (6) 0,72

5 29.57±3.98 ПО) 28 37±3,81 (9) 0,935 47.16±5.24 (8) 33,03±3,02 (9) 0,036 34.96±1.34(8) 37,29±1,22(10) 0Д1

10 26.72±1.25 (10) 34,91±2,05 (9) 0,006 54.95*4.26 (9) 33,20±4,43 (8) 0,0039 40.71±5.49 (6) 27,47±3,73 (10) 0,008

Примечания. 1 ТКФ - обозначение достоверности различий по точному критерию Фишера 2 Остальные примечания - смотри таблицу № 5

Прежде всего, это касается максимальных доз ретарпена и цефтазидима, которые при однократном введении оказывали действие противоположное эффектам 10-суточной схемы При этом, первоначальная противовоспалительная активность ретарпена (при однократном введении антибиотика) сменялась достоверным про-воспалительным действием при его 10-кратном использовании Цефтазидим, наоборот, увеличивал выраженность серотонинового отека при однократном применении и достоверно снижал этот показатель при использовании 5- и 10-суточ-ных схем Тиенам достоверно снижал выраженность серотонинового отека при применении 10-суточной схемы введения

Полученные данные позволили предположить, что влияние бета-лактамныч антибиотиков на серотониновый отек, не столько отражает изменение устойчиво-

сти животных к острым флогогенным воздействиям, сколько свидетельствует об антибиотик-индуцированных сдвигах чувствительности к серотонину. При эгом известно, что изменение чувствительности к серотонину при длительном введении лекарственных средств является важнейшим механизмом их антидепрессивной активности (Машковский М.Д. и др., 1983; Olivier E.J F.L., 1995). На основании этого общеизвестного факта было сформулировано предположение об антидепрессивном действии изученных бета-лактамов.

Для проверки этого предположения было изучено влияние бета-лактамных антибиотиков на длительность периода иммобильности в тесте подвешивания мышей за хвост (Stem L., 1985). Применение этого мегода является информативным подходом к фармакологическому скринингу веществ с антидепрессивной активностью, наличие которой проявляется сокращением длительности иммобиль-ности мышей («поведения отчаяния»).

В результате проведенного исследования было установлено, что однократное введение тиенама в дозе 200 мг/кг приводит к статистически значимому нарастанию периода иммобильности (таб.7). Десятикратное применение той же дозы тиенама, наоборот, достоверно сокращало длительность «поведения отчаяния».

Установленные факты свидетельствуют об изменении направленности действия тиенама на выраженность депрессивного поведения у мышей в зависимости от длительности применения антибиотика. Подобная зависимость характерна для многих клинически эффективных антидепрессантов (Машковский М Д. и соавт, 1983; Раевский К.С., 2001). Не исключено, что антидепрессивный эффект бета-лактамных антибиотиков может быть связан с их противовоспалительной активностью. Правомерность соображений о взаимосвязи антидепрессивного и противовоспалительного действий изученных антибиотиков была проверена на примере фармакологического средства из группы современных антидепрессантов (селективных ингибиторов обратного нейронального захвата серотонина) - сертралина. Однократное введение сертралина в дозе эквивалентной средней терапевтической для человека (20 мг/кг) за 30 мин до подвешивания за хвост приводило к 3-х -кратному сокращению периода иммобильности с 157,8 ± 6,87 сек (в контроле; п = 10) до 50,44 ± 2,6 сек (в опыте; п=9; р=0,008). На этом же фоне отмечалось существенное уменьшение выраженности серотонинового отека с 34,72 ± 5,33 % ( в контроле; п=10) до 19,9 ± 2,33 % (в опыте; п=9; р=0,017). Полученные данные позволяют считать, что развитие антидепрессивного эффекта закономерно сопровождается антифлогистическим действием на модели серотонинового воспаления.

В отличие от тиенама, введение высших дозировок ретарпена и цефтазиди-ма (400 мг/кг в обоих случаях) оказывало однонаправленное антидепрессивное действие. При этом ретарпен достоверно сокращал длительность «поведения отчаяния» при пяти- и десятикратном введении, а цефтазидим оказывал статистически значимое антидепрессивное действие при одно- и пятикратном применении. Таким образом, полученные данные (таб. 7) свидетельствуют о наличии антидепрессивной активности у изученных бета-лактамных антибиотиков.

Следует отдельно подчеркнуть, что правомерность постановки вопроса о том, что интенсивность серотонинового отека является маркером чувствительности к серотонину на системном (в т.ч. на церебральном) уровне иллюстрируется

Таблица 7

Влияние ретарпена, цефтазидима и тиенама на длительность иммобильности и поведение мышей в «открытом

поле» (М±т).

Антибиотик доза (мг/кг) Схема (сут) Время иммобилыюсти (сек) Р Двигательная актшшость (смена секторов) Р Ориентировочная реакция (вертикальные стойки) Р Исследовательское поведение (выглядывания чсрс'1 отвсрствия) Р

Регарпен 400 1 89.11*12.02(9) 86,33*15,32(9) 0,825 68,90*4.65(10) 102,78*8,9(9) 0,0048 14.20*2.46(10) 26,67*2,87(9) 0,0002 5.80*1.22(10) 18,56*1,43(9) 0,0025

5 133.80*10.04 (10) 38,63*8,67 (8; 0,001 98.90*9.17(10) 91,44*9,25(9) 0,74 33.70*3.52(10) 36,33*3,71(9) 0.37 19.2*2.48(10) 22,67*2,81(9) 0,46

10 114,40*6.56 (10) 79,78*4,48(9) 0,001 105.90*2.9(10) 126,90*3,6(10) 0,0013 22.90*0.88(10) 32,40*1,32(10) 0,0002 19.10*1.29(10) 25,40*1,01(10) 0,0036

Цсфтазидим 400 1 158 50*21.72(10) 126,75*19,24(8) 0,025 (ТКФ) 57.00*4.54(10) 64,00*4,66(8) 0,564 17.40*1.68(10) 23;88±2,83(8) 0,045 10.40*1.05(10) 17,00*2,92(8) 0,051

5 116.75*21.39(10) 44,80*5,50(8) 0,0003 74.71*6.98(14) 52,71*4,38(16) 0,038 22.50*3.59(14) 14,44*2,68(16) 0,173 13.71*2.58(14) 7,81*1,61(16) 0,098

10 153.78*14.64(9) 113,25*21,21 (8) 0,135 68.14*1.92(7) 71,78*4,95(9) 0,634 17.29*1.77(7) 22,22*1,81(9) 0,101 6 14*0.67(7) 18,33*2,27(9) 0,001

Тиснам 200 1 50.00*7.57 (6) 89,17*9,69 (6) 0,013 64.00*6.86(11) 58,80*6,25(10) 0,86 18.36*3.80(11) 25,90*3,77(10) 0,20 11.36*3.03 (11) 18,30*3,12(10) 0,11

5 162.63*14.61 (8) 127,10*11,33(10) 0,09 39.70*6.54(10) 58,93*6,15(14) 0,035 5.60*1.09(10) 19,64*1,98 (14) 0,0004 3.20*0.88 (10) 14,29*2,11(14) 0,0016

10 185.80*32.68(5) 113,60*13,50(10) 0,05 46.71*4.52 (17) 61,35*6,20(17) 0,05 (У) 16.06*2.88(17) 26,47*271 (17) 0,009 10.76*1.84(171 17,00*1,86(17) 0,031

Примечания: см. таблицу 5.

отрицательной корреляцией (Rs = -0,516; п=18; р=О,ОЗЗ) между длительностью иммобильности в тесте подвешивания за хвост и выраженностью серотонинового отека у контрольных мышей.

В отдельной серии экспериментов по изучению влияния бета-лактамных антибиотиков на поведение мышей в «открытом поле» было установлено, что ретарпен, цефтазидим и тиенам существенно увеличивают спонтанную исследо-вательско-ориентировочную и двигательную активность животных (таб. 7). В целом, полученный результат позволяет считать, что психо-фармакологической-подоплекой стимулирующего влияния изученных антибиотиков на поведение мышей является антидепрессивный эффект.

С целью углубленного анализа механизмов стимулирующего влияния бета-лактамных антибиотиков на поведение животных в «открытом поле» было изучено дозозависимое действие тиенама на двигательную активность, ориентировочную реакцию и исследовательское поведение мышей в сопоставлении с антифло-гистическим и нитроксидемическими эффектами данного антибиотика. Полученные данные были проанализированы с помощью межгруппового корреляционного сопоставления (рис. 2), которое позволило установить четкое соответствие между способностью различных доз и схем введения тиенама снижать формалиновый отек и увеличивать показатель ориентировочной активности мышей в «открытом поле». Выявленная закономерность иллюстрирует сочетанный характер противовоспалительного и психотропного эффектов тиенама.

Число вертикальных стоек в «открытом нате»

350

300 250 200

150

100

50

200/5

Rs=-0,68 > P=d1 (M

О20/Ю vtv '

200 10°

о 2 ЛwiO

100/1 100/10

О»"

75

90

100

105 НО IIS 120 Формалиновый отек С о пт контроля)

Рис.2. Корреляционная зависимость между выраженностью формалинового отека и числом вертикальных стоек в «открытом поле» у животных получавших тиенам. Примечание: Каждая точка на корреляционном поле обозначена дробью, в числителе которой доза тиенама (мг/кг), в знаменателе - схема (сутки).

Важно добавить, что выраженность психотропного действия тиенама при использовании изученных режимов введения антибиотика существенно зависела от его влияния на показатели нитроксидемии. Это иллюстрируется значимой отрицательной корреляцией между влиянием различных схем и доз применения тиенама на конценрацию

NOx в крови мышей и сопутствующим изменением ориентировочной активности животных в «отрытом поле» (Rs = -0,7; р = 0,036)

Полученный результат может рассматриваться как свидельство того, что угнетающее влияние тиенама на фагоциты одновременно приводит к уменьшению воспалительной реактивности животных и снижает выраженность фагоцит-зависимого нейродепримирующего контроля. Это соображение соответствует данным литературы о том, что функциональное состояние НГ одновременно определяет изменение психо-эмоционального состояния и риск острых воспалительных осложнений при планозых эндохирургических вмешательствах (Волчегорс-кий И А, Попов АН., 2001; 2002; Попов А.Н., 2002).

В целом, полученные результаты позволяют считать, что угнетающие влияния ретарпена, цефтазидима и тиенама на функциональное состояние НГ и N0-продуцирующую активность МФ одновременно являются механизмами анти-флогистического и психотропного эффектов этих антибиотиков.

Выводы:

1. Введение бета-лактамных антибиотиков (ретарпена, цефтазидима и тиена-ма) оказывало дозо-зависимое и в меньшей степени схемо-зависимое влияние на функциональное состояние фагоцитирующих клеток, а также показатели нитро-ксидемии и нитроксидурии у экспериментальных животных.

• 2. Введение бета-лактамных антибиотиков (ретарпена, цефтазидима и тиена-ма) в дозах, эквивалентных теапевтическим для человека, приводит к снижению показателей фагоцитарной реакции и НСТ-теста нейтрофилов крови мышей.

3. Ретарпен, цефтазидим и тиенам оказывают угнетающее действие на N0-продуцирующую активность перитонеальных макрофагов мышей при введении в дозах, эквивалентных терапевтическому диапазону для человека.

4. Введение цефтазидима (400 мг/кг) и тиенама (200 мг/кг) мышам оказывает гипонитроксидемическое действие в условиях дополнительной стимуляции животных продигиозаном (1 мг/кг). Нитроксидемические эффекты бета-лактамных антибиотиков прямо коррелируют с их влиянием на N0-продуцируюшую функцию макрофагов. Аналогичная корреляцинная зависимость отмечается в отношение нитроксидурического эффекта различных режимов введения тиенама у крыс.

5. Введение ретарпена, цефтазидима и тиенама в дозах, эквивалентных терапевтическим для человека, оказывает противовоспалительное действие на моделях формалинового и декстранового отеков Выраженность антифлогистического эффекта изученных антибиотиков прямо коррелирует с их угнетающим влиянием на показатели интенсивности «спонтанного» НСТ-теста, ин генсивности фагоцитоза нейтрофилов крови и гипонитроксидемическим эффектом у продигиозан-сти-мулированных животных.

6. Выраженность флогогенного эффекта серотонина у мышей достоверно отражает чувствительность животных к экспериментальному депрессогенному

воздействию. Изученные бета-лактамы оказывают диаметрально противоположный эффект на чувствительность к эдемогенному действию серотонина при различных схемах применения. Это сопровождается развитием отчетливого антидепрессивного эффекта повторных введений ретарпена, цефтазидима и тиенама.

7. Десятикратное введение ретарпена, цефтазидима и тиенама мышам в дозах, эквивалентных терапевтическим для человека, вызывает увеличение поведенческой активности животных в «открытом поле». Влияние различных режимов введения тиенама на ориентировочную реакцию мышей достоверно коррелирует с выраженностью его гипонитроксидемического действия и антифлогистического эффекта на модели формалинового отека.

8. Угнетающие влияния ретарпена, цефтазидима и тиенама на функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов и NO-продуцирующую активность макрофагов одновременно являются механизмами антифлогистического и психотропного эффектов этих антибиотиков.

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1. Ратников В.И. Фармакореабилитация 2-меркаптобензимидазолами имму-носупрессии, индуцированной антибиотиками / В.И. Ратников, ЕА Тренина, З.П. Важенина, Н.В.Макарова // International journal ofimmunoreabilitation. -1999. -№ 12.-C.126.

2. Ратников В.И. Исследование нитрергических механизмов при иммуно-корригирующей терапии / В.И. Ратников, З.П. Важенина, Л.М. Рассохина, ЕА Тренина//Медицинская иммунология: Тезисы докладов международной конференции. - Москва, 1999. - т.1,№ 3-4. - С.41-42.

3. Ратников В.И. Влияние карбапенемов на активность нитрергических механизмов неспецифического иммунитета / В.И. Ратников, ЕА Тренина // VI Российский конгресс «Человек и лекарство»: Тезисы докладов. -Москва, 1999. -С. 208.

4. Ратников В.И. Изучение влияния тиенама на активность нитрергических механизмов в перитонельных макрофагах / В.И. Ратников, Е.А Тренина// Современные проблемы медицины и биологии: Тезисы докладов XXXI научно-практической конференции. -Курган, 1999. - С.175-176.

5. Ратников В.И. Защитный эффект бемитила при иммуносупрессии, обусловленной карбапенемами / В.И. Ратников, ЕА Тренина // Диагностика, лечение и профилактика инфекционных заболеваний. Биотехнология. Ветеренария: Материалы международной конференции. - Екатеринбург, 1999. - С. 116-117.

6. Тренина ЕА Исследование влияния тиенама на активность нитрергических процессов у мышей / ЕА Тренина // Вклад молодых ученых и специалистов в развитие науки и культуры: Тезисы докладов конференции. - Челябинск, 2000. - С.42-43.

7. Ратников В.И. Сравнительный анализ влияния различных бета-лактамных антибиотиков на экскрецию с мочой метаболитов азота оксида / В.И. Ратников, Е.А. Тренина // Антибиотики и антибиотикорезистентность на пороге XXI века: Материалы международной конференции. — Москва, 2000. -С.84.

8. Ратников В.И. Изменение активности нитроксидергических механизмов неспецифического иммунитета под влиянием бета-лактамных антибиотиков /В.И. Ратников, ЕА. Тренина // Актуальные проблемы медицинской науки и профессионального образования: Труды научной сессии. - Челябинск, 2000. — С. 164-167.

9. Ратников В.И. Изменение нитроксидергических процессов под действием ряда фармакологических агентов / В.И. Ратников, З.П. Важенина, Л М. Рассохина, Л С. Коротовских, МИ. Макаров, А.В, Мутовкина, ГП. Пономарева, ЕА Тренина// Актульные вопросы клинической медицины: Юбилейный сборник научных работ к 100-летию Петра Михайловича Тарасова. - Челябинск: Издательство ЧелГМА - 2001.-С.115-117.

10. Ратников В.И. Влияние бета-лактамов на активность N0-зависимых механизмов неспецифического иммунитета/В.И. Ратников, ЕА Тренина//Сборник работ 68-ой научной сессии КГМУ и отделения медико-биологических наук Центр -Черноземного научного центра РАМН.- Курск, 2002. - С. 113-114.

11. Ратников В.И. Нитроксидергические механизмы в действии известных фармакологических средств /В.И. Ратников, 3 П. Важенина, Л.М. Рассохина, Е.А. Тренина, ИА Волчегорский // Иммунология Урала: Материалы Ш конференции иммунологов Урала. — Челябинск, 2003. - №1(3). - С.9-10.

12. Волчегорский И. А. Экспериментальное изучение антидепрессивных эффектов бета-лактамных антибиотиков у мышей / И.А. Волчегорский, Е.А. Тренина// Современные проблемы диагностики и лечения дисбактериозов: Материалы конференции, посвященной 10-летию НПЦдиагностики, лечения и профилактики дисбактериозов НИИ Иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» МЗ РФ. - Челябинск: Издательство ЧелГМА под редакцией члена-корреспондента РАМН И.И. Долгушина. - 2004. -С. 17-18.

13. Волчегорский И.А. Исследование сочетанного влияния тиенама на поведение мышей и их устойчивость к формалиновому отеку / И.А. Волчегорский, Е.А. Тренина // Современные проблемы диагностики и лечения дисбактериозов: Материалы конференции, посвященной 10-летию НПЦ диагностики, лечения и профилактии дисбактериозов НИИ Иммунологии ЧелГМА и 60-летию ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» МЗ РФ. - Челябинск: Издательство ЧелГМА под редакцией члена-корреспондента РАМН И.И. Долгушина. - 2004. - С. 19-20..

Тренина Елена Александровна

ФАГОЦИТ-ЗАВИСИМЫЕ И НИТРОКСИДЕРГИЧЕСКИЕ МЕХАНИЗМЫ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОГО И ПСИХОТРОПНОГО ЭФФЕКТОВ БЕТА-ЛАКТАМНЫХ АНТИБИОТИКОВ

14.00.25-фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск -2004

Отпечатано в издательстве «Челябинская государственная медицинская

академия». Лицензия № 01906. Подписано к печати 20.05.04 г. Объем 1 п.л. Формат 64x84. Гарнитура «Times New Roman суг». Бумага для офисной техники, 80 мг/м2. Тираж 100 экз.

04" 1 46 7 1