Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Естественные антитела к биологически активным соединениям у больных стенокардией и влияние на их уровень плазмосорбции и плазмафереза

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ МЕДИЦИНСКИЙ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ имени H.A. СЕМАШКО

На правах рукописи

НОВОЖЕНОВА Татьяна Владимировна

УДК 616.12—009.72—085.38+616—092:612.017.1

ЕСТЕСТВЕННЫЕ АНТИТЕЛА К БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМ СОЕДИНЕНИЯМ У БОЛЬНЫХ СТЕНОКАРДИЕЙ И ВЛИЯНИЕ НА ИХ УРОВЕНЬ ПЛАЗМОСОРБЦИИ И ПЛАЗМАФЕРЕЗА

14.00.06. — Кардиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва — 1992

(

Работа выполнена в институте сердечно-сосудистой хирургии им. Л.Н. Бакулева Российской Академии медицинских наук.

Научный руководитель академик РАМН профессор O.K. Гаврилов

Официальные оппоненты:

— член-корреспондент РАМН, лауреат Государственной премии, заслуженный деятель наук, доктор медицинских наук, профессор И.И. Сивков;

— доктор медицинских наук, профессор B.C. Задионченко. Ведущее учреждение:

— Московский Медицинский Университет им. Н.И. Пирогова.

Защита состоится "_^__1992 г. в ._час. на

заседании специализированного Совета Д.084.08.01 при Московском ордена Трудового Красного Знамени медицинском стоматологическом интституте им. Н.А. Семашко <ул. Каляевская, д. 18, строение 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (ул. Вучетича, 10-а).

Автореферат разослан "_"_1992 г.

Ученый секретарь специализированого Совета доктор медицинских наук,

профессор Л.Л. Кириченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Изучение нарушений иммунной систсмы при сердечно-сосудистых заболеваниях является актуальной проблемой современной медицины. У кардиологических больных обнаруживаются существенные нарушения клеточного и гуморального иммунитета, что указывает на участие иммунных механизмов в патогенезе заболевания /А.И.Климов, 1986; Б.И. Шулутко и соавт., 1987/. Особое место занимает изучение у этой категории больных содержания факторов гуморального иммунитета, так как их повышенный уровень рассматривается в настоящее время как одна из причин избыточной активации иммунокомпетентных клеток, способной привести к развитию иммунорегуляторного дисбаланса /Е.И.Насонов, 1986/. Кроме того, активация гуморального иммунитета может являться причиной органных и клеточных повреждений.

Исследования последних лет показали, что важной составной частью циркулирующих иммуноглобулинов являются естественные антитела /е-АТ/ / \V.Mahana е! а1, 1988/. Они постоянно выявляются у практически здоровых люден и рассматриваются как физиологический механизм, обеспечивающий выведение из организма потенциально патогенных субстанций и продуктов клеточной деструкции, а также участвующий в регуляции обмена биологически активных соединений /П.Н.Грабарь, 1975; И.Е.Ковалев, О.Ю.По-левая, 1981; И.Е.БрЛгег^а!, 1990/. При патологических процессах уровень е-АТ может изменяться и коррелировать с тяжестью течения заболевания и эффективностью проводимой терапии /И.М.Ко-рочкин и соавт., 1990/.

В настоящее время лзввестнь: е-АТ к продуктам тканевого распада, белкам цитоскелета, рибосомальным протеинам, фибриногену и продуктам его деградации, к факторам На и Ха свертывания крови, а также к эндогенным соединениям типа нейромедиаторов, гормонов. ферментов, Однако, е-АТ к биологически активным соединениям изучены недостаточно. Данные о характере изменения их содержания при патологиях противоречивы. Выявление е-АТ проводилось в основном методом иммунопреципитации, не обеспечивающим достаточную точность результатов. Изменение их уровня в процессе комплексной терапии,включающей плазмосорбцию (ПС) н плазмаферез (ПА), не исследовалось.

Установлено, что изменение нормального содержания е-АТ к биологически активным соединениям является уникальным маркером нарушения метаболизма соответствующего антигена /И.М.Короч-к:ш и соавт., 1983/. В этой связи большой интерес представляет

изучение у больных стенокардией уровня е-АТ к широкому кругу соединений, изменение метаболизма которых имеет место при данном заболевании.

Актуальной проблемой является также поиск путей для применения современных высокочувствительных методов диагностики в кардиологической практике. Среди них — выявление е-АТ на основе твердофазного иммуноферментного анализа.

Цель исследования

Целью настоящей работы является исследование у больных стенокардией уровня свободноциркулирующих естественных антител к широкому кругу биологически активных соединений, принимающих участие в патогенезе заболевания, а также изменения их содержания при проведении ПС и ПА.

Основные задачи исследования

Учитывая современное состояние проблемы и исходя из цели исследования были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительное исследование уровня е-АТ к тромбину, О^-макроглобулипу (a2MG), антитромбину III (AT III), про-стагландинам (PG) F2Ö и Ег, гистамину, серотонину, дофамину, норадреналину, адреналину, адренохрому у здоровых людей и больных стенокардией.

2. Изучить взаимосвязь между уровнем е-АТ к вышеназванным соединениям и тяжестью течения стенокардии, а для е-АТ к компонентам свертывающей системы крови -также и гсмоста-тичсской активностью.

3. Исследовать изменение содержания е-АТ у больных стенокардией при проведении лечебного ПС и ПА.

4. Оценить особенности изменения уровня е-АТ г компонентам свертывающей системы крови одновременно с изменением гс-мостатической активности под влиянием ПС и ПА с целью установления их прогностической значимости.

5. Проанализировать взаимосвязь между нормализацией уровня е-АТ в процессе ПС и ПА и показателями клинической эффективности этих методов.

6. Применить метод твердофазного иммуноферментного анализа для определения е-АТ к широкому кругу биологически активных соединений в плазме больных стенокардией.

Научная новизна работы

В результате проведенных исследований у больных стенокардией III-го и IV-ro функционального класса /ФК/ выявлены неизучае-

мые ранее у этой категории больных е-АТ к широкому кругу биологически активных соединений, принимающих участие в патогенезе заболевания. При этом, опрелеленис е-АТ ка2 MG, AT III, PGE2, серотонину, дофамину, норадреналнну, адреналину не проводилось ранее ни у здоровых доноров, ни при патологиях.

Показано, что у части больных наблюдаются существенные изменения уровня е-АТ по сравнению со здоровыми людьми. При этом у наибольшего процента больных отмечаются изменения нормального содержания е-АТ к тромбину и AT III, норадреналнну и адреналину.

Установлено, что у больных стенокардией при повышенном уровне е-АТ к тромбину и катехоламинам наблюдается достоверное увеличение тяжести течения заболевания, а для е-АТ к тромбину — также н достоверное увеличение активности свертывающей системы крови.

Исследована динамика изменения содержания е-АТ при проведении ПС и ПА. Отмечен избирательный характер влияния экстракорпоральных методов на уровень е-АТ, неоднозначный для е-АТ к различным соединениям, зависящий от исходной величины отклонений от нормального уровня.

Показано, что коррекция состава плазмы с помощью ПС и ПА сопровождается нормализацией исходно повышенного уровня е-АТ к тромбину, AT III, PGF20: и Ег, гистамину, серотонину. Выяв- . лена высокодостоверная прямая корреляционная зависимость между снижением исходно высокого содержания е-АТ к названным соединениям и показателями клинической эффективности этих методов, а для е-АТ к тромбину и антитромбину III также и высокодостоверная обратная корреляционная зависимость между нормализацией их уровня в процессе ПС и ПА и уменьшением активности свертывающей системы крови.

Показано, что больным с повышенным уровнем е-АТ для достижения клинического эффекта требуется достоверно большее количество экстракорпоральных сеансов, чем больным с их нормальным содержанием.

Разработаны условия определения е-АТ к тромбину, Ct2MC, AT III, PGF2O: и Е2, серотонину, гистамину, дофамину, норадреналнну, адреналину и адренохрому в плазме больных стенокардией на основе твердофазного иммуноферментного анализа.

Практическая значимость работы

Выявление у больных стенокардией изменений нормального уровня свободноциркулирующих е-АТ к широкому кругу биологически активных соединений указывает на наличие неисследованных ранее нарушений гуморального иммунитета у этой категории больных.

Уровень е-АТ к тромбину и катсхоламинам у больных стенокардией является показателем тяжести течения заболевания, а е-АТ к тромбину — также и критерием гемостатнческих нарушений и может служить показанием для проведения ПС и ПА.

Изменение содержания е-АТ имеет прогностическое значение при проведении ПС и ПА как показатель быстроты достижения клинического эффекта.

Нормализация содержания е-АТ у больных стенокардией в процессе комплексной терапии, включающей ПС и ПА, служит показателем эффективности проводимого лечения, так как снижение их исходно повышенного уровня коррелирует с достигаемым клиническим эффектом, а для е-АТ к тромбину и антитромбину III — также и с антнкоагуляционным эффектом методов.

Применение современного метода твердофазного иммунофермен-тного анализа для определения е-АТ в плазме больных стенокардией позволит повысить точность и качество исследований.

Внедрение в практику

Метод определения естественных антител к высокомолекулярным и низкомолскулярным биологически активным соединениям на основе твердофазного иммуноферментного анализа у больных стенокардией апробирован в Московском городском центре гравитационной хирургии крови №1 на базе ГКБ №52 и внедрен в научно-исследовательскую практику как диагностический и прогнастиче-ский критерий тяжести течения стенокардии и гемостатичсских нарушений, а также как показатель клинической эффективности терапии, включающей ПС и ПА.

Совместно с ИФАВ АН СССР начаты работы посозданиютсхноло-пш иммуноферментных тест-систем для "выявления е-АТ к биологически активным соединениям.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены на Международной конференции "Лазеры и медицина" /Ташкент, 1989/, на Конгрессе международного общества патофизиологов /Москва, 1991/, на Всесоюзной конференции "Физиология и патология гемостаза" / Полтава, 1991/.

Диссертация апроб^ана на совместном заседании научно-учеб-нопроизводствснного объединения на базе института профилактической кардиологии и кафедры терапии факультета усовершенствования врачей Московского ордена Трудового Красного Знамени медицинского стоматологического института имени Н. А. Семашко и академгруппы академика АМН СССР проф. О.К. Гаврилова.

По результатам диссертации опубликовано 6 научных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 4-х глав /обзора литературы, описания материалов и методов, результатов исследования и их обсуждения/, выводов, практических рекомендации. Работа изложена на 163 страницах, содержит 35 таблиц, 6 рисунков и список литературы /111 отечественных и 62 иностранных источников/.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы исследования

По теме диссертации исследовали плазму 74 человек. Основную группу составили 62 больных ишемической болезнью сердца /55 мужчин и 7 женщин/ в возрасте от 37 до 74 лет, в комплексное лечение которых были включены ПС или ПА. Средний возраст состапил56,7 ± 2,8 лет. В качестве контрольной группы была исследована плазма 12 здоровых людей / II мужчин и 1 женщина/ в возрасте от 33 до 52 лет. Средний возраст составил 47,3 ± 2,4 года.

У всех больных была стенокардия напряжения III — IV ФК. Больных стенокардией напряжения III ФК было 23 человека /20 мужчин и 3 женщины/ в возрасте от 37 до 67 лет. Средний возраст составил 54,7 ±2,1года. У этих больных отмечалось в среднем 6,8 ±1,3 приступа стенокардии в сутки, для купирования которых требовалось 10,2 ± 1,5 таблеток нитроглицерина. Стенокардия напряжения IV ФК была у 39 больных /35 мужчин и 4 женщины/ в возрасте от 41 до 74 лет. Средний возраст составил58,9 ± 1,7 лет. У этой группы больных наблюдалось в среднем 10,8 ± 2,4лриступа стенокардии в сутки, для купирования которых требова-лось10,2 ± 1,6таблеток нитроглицерина.

Всем больным в стационаре проводилзсь комплексная медикаментозная терапия, включавшая: нитраты пролонгированного действия — сустак /6,4 мг/ до 10 таблеток в сутки, нитронг /2,6 мг/ до 10 таблеток п сутки или нитросорбвд /0,01 мг/ до 16 таблеток в сутки; /S-блокаторы — анаприлип до 200 мг в сутки; антагонисты кальция — финоптин до 240 мг в сутки. Гепарин подкожно до 20 тысяч ЕД в сутки, ацетилсалициловая кислота 0,25 в сутки, седа-тивные препараты. На фоне этой терапии не удавалось добиться улучшения клинического состояния.

Кровь для исследования брали утром натощак, после 14 часового голодания, из вены локтевого сгиба, по схеме: до лечения ПС или ПА, на 1-е или 3-й сутки между сеансами и на 1-е, 3-й и 7-е сутки после последнего сеанса. Для проведения ПС использовался углеродный сорбент ФАС и отечественный портативный фракцчонзтор крови ПФ-0,5, с помощью которого осуществлялась сепарация

плазмы. Курс лечения состоял из 2-3 сеансов, проводимых с интервалом трое суток. Для проведения ПА использовался отечественный аппарат ПФ-0,5. Курс лечения состоял из 2-3 сеансов. Достоверность различий между группами оценивали по критерию Стью-дента. Достоверность частоты распределения признаков — по критерию х2.

Методы исследования

В плазме больных основной группы и здоровых людей контрольной группы было исследовано содержания е-AT методом твердофазного иммуноферментного анализа. Для этого использовались следующие биохимические и химические реагенты: конъюгаты антител против JgG и JgM человека, меченные псроксидазой хрена /Sigma/, антисыворотка против -MG и AT III человека /Boehringer и НИИЭМ им. Н.И.Габричевского/ тромбин человека /Boehringer Mannheim/, агар /Fprak/, п-нитрофенилакрилат /Дзержинск/, твин-20 /Sigma/,30% перекись водорода, о-фс-нилендиамин /Мсгк/, 25% глютаровый альдегид /Sigma/. Для синтеза конъюгированных антигенов применяли дофамин, но-радреналин и адреналин /Rcanal/, PGF2 и Ег /Reanal/, серото-нин и гистамин /Rcanal/. Синтез конъюгатов низкомолекулярных соединений осуществляли на основе полинитрофенилакри-лата. a2-MG выделяли из донорской сыворотки аффинной хроматографией на сорбенте с ковалентно связанными специфическими антителами. AT III выделяли из криосупернатанта донорской плазмы хромотографией на сорбенте, с ковалентно связанным гепарином.

Индивидуальность выделенногоа2МС и AT III доказывали имму-нопреципитацией по Оухтсрлони в агаре. Работа проводилась совместно с к.х.н. М.А.Мягковои на базе лаборатории иммунохимии ИФАВ АН СССР.

Для исследования высокомолекулярных и ннзкомкекуляриых соединений осуществляли выбор оптимальных условий проведения ИФА, для чего использовали прием шлхматного титрования.

Исходя из выбранных условий проводили анализ содержания JgM и JgG антител ко всем исследуемым соединениям в индивидуальных плазмах больных и доноров. Планшеты сснсебнлизнровали раствором антигена по 100 мкл в лунку, концентрации которых составляли: 1мкг/мл для тромбина и AT III, 100нг/мл— дляа2МС йот 1-0,1 мкг/мл — для низкомолекулярныхантигенов. Разведение плазмы для определения с-АТ к тромбину и a2MG было 1:400, для определениия с-АТ к AT III — 1:400 и 1:200 для JgG и JgM соответственно, для определения с-АТ к гистамину, серотонину, простагландинам и катсхоламинам — 1:200. Оптическую плотность измеряли на спектрофотомерс "Multiskan" /Финляндия/ при длине волны 492 нм.

В качестве контрольного эксперимента проводили ИФА без исследуемой плазмы, при этом оптическая плотность составляла 0,220,27, а ошибка иммуноферментного анализа не превышала 15%. Так как в образцах донорской плазмы разброс значений е-АТ находился в небольшом интервале, не превышающем ошибку ИФА, то это позволило считать содержание е-АТ у здоровых людей постоянным и принять его за 100%. Уровень антител для каждой индивидуальной плазмы выражали в процентах как отношение оптической плотности в ИФА для данной плазмы к среднему значению оптической плотности донорской плазмы.

Для проведения коагулогических исследований /активированноее частичное тромбопластиновое время (АЧТВ), тромбиновое время (ТВ), протромбиновое время (ПТВ)/ пользовались стандартной методикой /З.С.Баркаган, 1985/ с использованием реактивов фирмы "Boehringer Mannheim" /ФРГ/.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Естественниые антитела к биологически активным соединениям у больных стенокардией

Проведенные исследования показали, что в плазме больных стенокардией III и IV ФК, также как и у здоровых людей, постоянно выявляются свободноциркулирующие е-АТ к тромбину, AT III, a2MG, PGF20:и Ег, гистамину, серотонину, дофамину, норадренз-лину, адреналину, адренохрому. При этом у больных возможны существенные изменения в их содержании по сравнению с контрольной группой (табл. 1).

Обращает на себя внимание, что наиболее часты отклонения от нормального уровня е-АТ к тромбину, AT III и катехоламннам, главным образом к норадреналину и адреналину.

Анализ изотипичсского состава, выявленных е-АТ, показал, что oini относятся к иммуноглобулинам двух классов — G и М. Однако, отклонения от нормального уровня наблюдаются для е-АТ лишь одного из названных нзотипов. Так, изменения уровня е-АТ к тромбину и a2MG отмечались для JgG. Изменения уровня е-АТ к AT III, PGF2 а и Е2, гистамину, серотошпгу, катехоламннам—для JgM.

В процессе исследования была изучена взаимосвязь между уровнем е-АТ к тромбину, AT III, (z2MG с одной стороны и гемостатической активностью и тяжестью течения стенокардии — с другой. Тяжесть течения заболевания оценивали по частоте приступов стенокардия в сутки и по количеству принимаемых таблеток нитроглицерина. Активность системы гемостаза оценивали с помощью АЧТВ, ТВ н ПТВ.

Таблица1

Уровень е-АТ к биологически активным соединениям у больных стенокардией

Группы Уровень е-АТ, в% Количество больных, в %

е-АТ к тромбину п-62 I 136,7 ± 7,4* 43,5

II 104,8 ± 1,87 56,5

е-АТ к агMG п-62 I 61,8 ± 7,9* 11,3

II 100,9 ± 1,56 88,7

с-АТ к AT III п-25 1 136,0 ±3,7* 44,0

II 103 ±1,8 56,0

е-АТ к дофамину п»20 I 136,1 ±3,7'* 35,0

II 103,2 ± 1,8 65,0

е-АТ к норадрсналину п°20 155,0 ± 4,8* 70,0

II 106,0 ± 2,2 30,0

е-АТ к адреналину п-20 147,6 ±5,2* 70,0

102,2 ±2,1 30,0

е-АТ к PGF2CZ п-36 I 139,0 ±4,0* 25,0

II 96,8 ±5,2 61,1

III 74,3 ±3,28* 13,9

е-АТ к PGE2 ri~36 I 139,7 ±4,1* 25,0

II 100,2 ± 3,4 61,1

III 72,6 ±2,9* 13,9

е-АТ к гистамину п~36 I 139,3 ±4,3* 27,8

II 99,0 ±2,2 58,3

Ш 70,8 ± 3,4* 13,9

е-АТ к ссротошшу п~36 I 140,6 ±3,5* 19,4

II 96,3 ±3,5 52,8

III 75,9 ± 2,2* 27,8

I группа — больные с повышенным уровнем е-АТ;

II группа — больные с нормальным уровнем е-АТ;

III группа — больные с пониженным уровнем е-АТ; * — достоверность различий по критерию Стьюдсита

по сравнению с контрольной группой.

В зависимости от уровня е-АТ к тромбину больные были разделены на две группы. В первую группу вошли больные с повышенным уровнем е-АТ к тромбину, во вторую группу — больные с их нормальным содержанием.

Результаты показали, что в обеих группах наблюдается достоверное ускорение ЛЧТВ по сравнению со здоровыми людьми, однако у больных с повышенным уровнем е-АТ к тромбину отмечается достоверно более короткое АЧТВ и ТВ, чем у больных с нормальным содержанием (табл.2). Это указывает на то, что в первой группе имеет место большая активность свертывающей системы крови, чем во второй. Следовательно, повышенный уровень е-АТ к тромбину является показателем глубины гемостатнческнх нарушений.

Оценка клинических показателей тяжести течения стенокардии, проведенная в каждой группе больных, показала, что хотя распределение больных по группам в зависимости от функционального класса стенокардии было статически недостоверно р > 0,05/, однако в первой группе отмечались достоверно большая частота приступов стенокардии и количество принимаемых таблеток нитроглицерина, чем во второй группе (табл.2). Это свидетельствует о том, что уровень е-АТ к тромбину является также и критерием тяжести течения стенокардии.

Таблица 2

Клинические показатели тяжести течения стенокардии и коагулогические параметры у больных в зависимости от уровня е-А Ткт ромбину

Показатели I группа, п=35 II группа, п=35 Р

Количество больных IIIФК б 17 —

IV ФК 21 18 —

Количество приступов 9,8 ±0,4 7,2 ±0,3 р < 0,05

Количество таблеток нитроглицерина 18,2 ±0,9 15,3 ±0,8 р < 0,05

АЧТВ, в сек 26,0 ±0,7 28,9 ±0,9 р < 0,05

ТВ, в сек 15,7 ±0,6 17,1 ±0,7 р<0,05

ПТВ, в сек 13,5 ±0,4 13,4 ±0,2 р > 0,05

I группа — больные с повышенным уровнем е-АТ к тромбину; И группа — больные с нормальным уровнем е-АТ к тромбину.

При анализе взаимосвязи между уровнем с-АТ к AT III и (X2MG, гсмостатичсской активностью и тяжестью течения стенокардии отмечено, что у больных с изменениями уровня с-АТ к AT III и a-flAG не наблюдается достоверных различий ни по коагулогиче-ским параметрам, ни по частоте приступов стенокардии, ни по количеству принимаемых таблеток нитроглицеоина, от больных с нормальным уровнем с-АТ к этим соединениям. Таким образом, из всех исследованных компонентов системы гемостаза только е-АТ к тромбнну можно рассматривать как показатель активности свертывающей системы крови и тяжести течения стенокардии.

Изучение взаимосвязи между уровнем е-АТ к PGF2а и Ег, гис-тамнну, ссротонину и показателями тяжести течения стенокардии показало, что у больных с изменениями уровня таких с-АТ /повышенный и пониженный/ не было обнаружено достоверных отличий от больных с нормальным уровнем с-АТ к этим соединениям ни по частоте приступов стенокардии, ни по количеству принимаемых таблеток нитроглицерина /р>0,05/. Частота распределения больных по группам /с повышенным, пониженным и нормальным содержанием с-АТ/ в зависимости от функционального класса стенокардии такжебыла статистически недостоверна /р > 0,05/.

Таблица 3

Клинические показатели тяжести течения стенокардии у больных а зависимости от уровня е-ЛТ к кшпехоламинам

Показатели I группа и-7 II группа п-7 III rpvnna п-6 Р

Количество больных III ФК 2 4 4 —

IV ФК 5 3 2 —

Количество приступов 10,1 ±0,7* 8,6 ±0,6 7,8 ±0,6"* р < 0,05

Количество таблеток нитроглицерина 18,7 ±4,6 15,0 ±5,1 14,0 ±2,3 р > 0,05

I группа — больные с повышенным уровнем с-АТ к дофамину,

норадрсналнну и адреналину;

II группа — больные с нормальным уровнем с-АТ к дофамину и повышенным уровнем с-АТ к норадрсналнну и адреналину;

III группа — больные с нормальным уровнем с-АТ к дофамину, норадрсналнну и адреналину;

* — достоверность различий по критерию Стыодснта между группами.

Анализ лнагностичсской значимости уровни е-АТ к катехоламн-нам показал следующие результаты. Исходя из пелич ны отклонс-

ний от нормального уровня таких с-АТ, больные были разделены на три группы. В первую группу вошли больные с повышенным содержанием е-АТ к дофамину /134,4 ±3,7%/, норадреналину /166 ±5,4%/ и адреналину /156,0 ±6,2%/. Вторую группу составили больные с нормальным уровнем е-АТ к дофамину /114,1 ± 1,3%/ и повышенным, хотя и в меньшей степени, чем в первой группе, уровнем с-АТ к норадреналину /142,4 ±6,6%/ и адреналину /130,7 ± 3,6%/. Третью группу составили больные с нормальным уровнем с-АТ к дофамину, норадреналину и адреналину. Хотя распределение больных по группам в зависимости от функционального класса стенокардии было статистически недостоверно /р > 0,05/, однако в первой группе отмечалось достоверно бслыиап частота приступов стенокардии,

чем у больных

третьей группы (табл.3). Это свидетельствует о том, что повышенный уровень е-АТ к дофамину,норадреналину и адреналину имеет диагностическое значение как показатель тяжести течения стенокардии.

Естественные антитела к тромбину, aj-макроглобулину и антнтромбину III в условиях ГТС и ПА

В ходе исследования были изучены изменения с-АТ к тромбину, ßf2MG и AT III у больных стенокардией при проведении ПС и ПА. Первым этапом стало изучение изменения содержания е-АТ к тромбину под влиянием этих мстодоп. Установлен, что коррекция состава плазмы методами ПС и ПА позволяет нормализовать повышенный уровень с-АТ к тромбину. При этом скорость нормализации зависит от исходной величины отклонения от нормального содержания. Так, при проведении ПС у 28 больных стенокардией отмечено, что, если исходный уровень е-АТ к тромбину составлял 128-134%, то нормализация их содержания наблюдалась госле первого сеанса. Если же исходный уровень е-АТ к тромб, ту составлял 135-143%, то его снижение отмечалось после второго сеанса ПС.

Аналогичный эффект оказывал ПА. Исследования, проведенные на 34 больных показали, что, если исходное содержание е-АТ к тромбину было 128-130%, то снижение его до нормы наблюдалось после первого сеанса ПА. Если же исходили уровень »оставлял 132-149%, то нормализация отмечалась после второго сеанса ПА. При этом, снижение повышенного содержания с-АТ к тромбину происходилотолькодоуроиня нормальных значении как после ПС, так и после ПА. У больных с исходно нормальным уровнем с-АТ к тромбину он оставался неизменным под влиянием этих процедур.

Динамика содержания с-АТ к AT 111 и Д2\Ю исследовалась у 25 больных стенокардией при проведении им ПС. Показано, что при исходно повышенном уровне е-АТ к AT III /141,5 ± 3,7%/ приведение ПС не приводило к нормализации их содержания. У больных

с менее выраженными отклонениями от нормы /128,8 ±4,8%/ проведение ПС позволило нормализовать их содержание после первого сеанса. Это свидетельству ет отом, что возможность восстановления нормальных значений е-АТ к AT III также зависит от исходной величины отклонений от нормального уровня.

Что касает я е-АТ к O^MG, то у больных с их пониженным содержанием /11,3%/, нормализация наблюдалась уже после первого сеанса ПС и сохранялась на достигнутом уровне на протяжении всего курса. Исходно нормальный уровень е-АТ к AT III и a2MG при проведении ПС колебался в пределах нормы.

Изуение динамики е-АТ к тромбину, AT III и a2MG в процессе ПС и IiA проводилось одновременно с анализом изменений гемо-статичсской активности и клинических показателей тяжести течения стенокардии. Результаты показали, что у больных с повышенным уровнем е-АТ к тромбину /11 человек/ проведение ПС не сопровождалось достоверным изменением АЧТВ по сравнению с исходным значением/26,5 ± 0,5 сек дон 28,8 ± 1,8 сек после ПС/. У больных с нормальным уровнем е-АТ к тромбину /17 человек/ после курса ПС АЧТВ достоверно отличалось от исходного и достигало нормы /28,5 ±0,2 сек до и 30,7±0,9сек после ПС, N=32,4 ± 0,74 сек/, что свидетельствует о нормализации гемоста-т»ческой активности у этих больных.

В результате проведения курса ПА у больных с повышенным уровнем е-АТ к тромбину /14 человек/ отмечалось достоверное удлинение АЧТВ по сравнению с исходным значением, которое, однако, не достигало нормы /26,2 ± 0,6сек до и 29,2 ± 0,8 сек после ПА/. У больных с нормальным уровнем е-АТ к тромбину /20 человек/ пеле курса ПА наблюдалась полная нормализация гемостатнче-ской активности /28,9 ± 0,9 сек до, 32,9 ± 1,7 сек после ПА/. Как видно из приведенных данных наибольший антнкоагуляционнын эффект достигается у больных с нормальным уровнем е-АТ к тромбину. Это позволяет рассматривать содержание е-АТ к тромбину как прогностический показатель нормализации активности свертывающей системы крови при проведении ПС и ПА.

Между снижением исходно повышенного уровня е-АТ к тромбину в процессе ПС и ПА и удлинением АЧТВ отмечена высокодостоверная обратная корреляционная зависимость /ч—0,72, р < 0,01 при ПС и ч=-0,82, р < 0,01 и ПА соответственно/.

Удлинение АЧТВ при проведении курса ПС коррелирует также со еннже! лем исходно повышенного уровня е-АТ к AT III /ч=-0,97, р < 0,01/. Это позволяет рассматривать восстановление нормального уровня е-АТ к AT III как показатель эффективности норма-лнзацги гемостатической активности i условиях ПС.

Анализ взаимосвязи изменения уровня е-АТ к тромбину в процессе ПС и ПА с динамикой клинических показателей тяжести течения стенокардии выявил наличие высокодостоверной прямой корреля-

ционной зависимости между снижением исходно повышенного уровня е-АТ к тромбину с одной сторэны и уменьшением частоты приступов стенокардии и сокращением количества принимаемых таблеток нитроглицерина с другой /соответственно, г-0,90, г-0,89, р < 0,01/. Это указывает 1а то, что снижение уровня е-АТ к тромбину в процессе ПС и ПА можно рассматривать как показатель клинической эффективности этих методов.

Оценка частоты проведения сеансов ПС и ПА показала, что клинический эффект достигается быстрее при отсутствии изменений в уровне е-АТ к тромбину.

Между группами больных с нормальным и измененным уровнем е-АТ к АТIII н а2Мй достоверных различий в частоте проведения сеансов ПС не наблюдалось.

Естественные антитела к простагландинам Рг а и Ег, гистамину, серотонину и катехоламинам в условиях ПС

Изучение динамики уровня е-АТ к простагландинам Р2(2 й Е2, гистамину и серотонину проводилось у 36 больных стенокардией при проведении им ПС. Установлено, что при имеющихся изменениях нормального уровня е-АТ к назпанным низко ¡олскулярным соединениям /повышенный или пониженный по сравнению с контрольной группой/ нормализация отмечается лишь у больных с исходно повышенным содержанием. У больных с исходно пониженным уровнем е-АТ нормализации их содержания под влиянием ПС не наблюдалось, за исключением е-АТ к гистамину, для которых отмечалась тенденция к повышению, однако, недостигающая:-чрмы.

У больных с исходно нормальным содержанием е-АТ к этим соединениям, их уропень под влиянием ПС оставался неизменным. Таким сбразом, возможность нормализации содержания е-АТ к простагландинам и Ег, гистамину и серотонину зависит от:.. !рак-тера отклонений от уровня контрольной группы.

Изучсннединамики е-АТ к катехоламинам /дофамин, норадрена-лнн, адреналин и адренохром/ проводилось у 7.0 больных стенокардией при проведении им ПС. Показано, что проведение ПС не приводит к достоверному снижению исходно повышенного уровня е-АТ к этим соединениям. Тенденция к нормализации отмечается лишь для е-АТ к дофамину, которая, од| ко, не достигает уровня контрольной группы. Исходно нормальное содержание е-А'Г к катехоламинам под влиянием ПС не изменяется.

Эти и представленные выше результаты свидетельствуют о том, что влияние экстракорпоральных методов на ур:мень е-АТ к биологически активным соединениям носит избирательный характер и неоднозначно для с-АТ к различным антигенам. Скорость нормализации уровня е-АТ под влиянием коррекции состава плазмы зависит от исходной величины отклонений по сравнению с I 5нт-

рольной группой. Снижение исходно повышенного уровня е-АТ не является следствием их механического удаления из циркуляции, так как изменений исходно нормального содержания е-АТ под влиянием ПС и ПА не наблюдается, а снижение исходно повышенного уровня происходит только до уровня нормальных значений.

У больных с нормальным и измененным уровнем е-АТ к вышеназванным низкомолекулярным соединениям был проведен сравнительный анализ изменений показателей тяжести течения стенокардии в процессе ПС, а также количества проведенных сеансов.

Нами выявлены достоверные различия в частоте проведения сеансов ПС между группами больных с пониженным и нормальным уровнем е-АТ к Р&Рга и Ег /х^ЗД р < 0,01/ с повышенным и нормальным уровнем е-АТ к гистамину /х2 =12,4, р<0,01/, с пониженным и нормальным уровнем е-АТ к серотонину р < 0,01/. Во всех случаях больным с нормальным уровнем е-АТ к вышеназванным соединениям требовалось меньше сеансов ПС, чем больным с изменениями в их содержании.

Установлено, что нормализация уровня е-АТ к РвРгсг и Ег, гистамину и серотонину в процессе ПС является показателем клинической эффективности метода. Так, корреляционный анализ выявил наличие положительной корреляционной зависимости между нормализацией исходно повышенного уровня е-АТ к РС?2& и Ег, и снижением частоты приступов стенокардии после курса ПС /г=0,95, р < 0,01 /, а также уменьшением количества принимаемых таблеток нитроглицерина /г=0,96, р < 0,01/.

Положительная корреляционная зависимость отмечается также между снижением исходно повышенного уровня е-АТ к гистамину в процессе ПС с одной стороны и уменьшением частоты приступов стенокардии /р=0,96, р < 0,01/ и количества принимаемых таблеток нитроглицерина /г=0,95, р < 0,01/ с другой. Между изменением исходно пониженного уровня е-АТ к гисталшну в процессе ПС и сокращением количества приступов и таблеток нитроглицерина наблюдается обратная корреляционная зависимость /соответственно, г=-0,84, г=-0,86, р < 0,05 /. Нормализация »сходно повышенного уровня е-АТ к серотонину коррелирует с уменьшением частоты приступов стенокардии /п=0,95, р < 0,01/.

Таким образом, уровень е-АТ к РОРго: и Ег, серотонину и гистамину имеет прогностическое значение как критерий быстроты достижения клинического эффекта ПС, а нормализация их уровня в процесс-4 ПС — как показатель эффективности метода.

Изучение изменений уровня е-АТ к катехоламинам под влиянием ПС также проводилось одновременно с анализом показателен клинически! эффективности метода. Резу. угаты показали, что больным с исходно повышенным уровнем е-АТ к дофамину, норадрена-лину и адреналину /I группа/ для достижения клинического эффекта ПС требуется больше сеансов, чем больным с нормальным

уровнем таких е-AT /III группа/ или с менее выраженными отклонениями от нормальных значений /н группа/.

Установлено, что между изменением уровня е-АТ к дофамину з процессе ПС и уменьшением частоты приступов стенокардии и количества таблеток принимаемого нитроглицерина имеется положительная корреляционная взаимосвязь /соответственно, г=0,89, г-0,82, р < 0,01/.

Таким образом, уровень е-АТ к катехоламинам имеет прогностическое значение при оценке эффективности ПС.

ВЫВОДЫ

1. У больных медикаментозно-резистентной стенокардией III и IV функционального класса, также как и у здоровых людей, постоянно выявляются свободноциркулирующие естественные антитела к тромбину, антитромбину III, ОГ2-макрог.!обулину, ;:ро-стагландннам ??ß и Ег, гистамииу, серотонину, дофамину, норадрсналину, адреналину и адренохрому. При этом, у больных стенокардией возможны существенные изменения содержания естественных антител к вышеназванным высокомолекулярным и низкомолскулярным соединениям.

2. Выявленные естественные антитела относятся к иммуноглобулинам класса G и М, при этом, отклонения от нормального уровня наблюдаются для естественных антител, принадлежащих только к одному из указанных нзотнпов.

3. Уровень естественных антител к тромбину и катехоламинам у больных стенокардией является показателем тяжести течения заболевания, а уровень естественных антител к громбнну — также показателем активности свертывающей системы крови.

4. Содержание естественных антител у больных стенокардией име-

ет прогностическое значение при проведении лечебного плазма-фереза и плазмосорбцни как показатель быстроты достижения клинического эффекта.

5. Нормализация исходно повышенного уровня естественных анти-

тел к тромбину, антитромбину III, простагландинам F2K и Ег, гистамииу, серотонину и дофамину коррелирует с показ;, гелями клинической эффективности плазмосорбцни и ллазмафере-за, а нормализация уровня естественных антител к тромбину и антитромбииу III — также и с достигаемым антигЬагуляцнон-ным эффектом. Это позволяет рассматривать восстановление нормального уровня естественных антител под влиянием коррекции состава плазмы как показатель эффективности проводимого лечения.

6. Изменение содержания естественных антител у больных стенокардией под воздействием плазмосорбции и плазмафереза не является следствием их механического удаления из циркуляции. Влияние экстракорпоральных методов на эти показатели .. неоднозначно для естественных

антител к различным соединениям и зависит от исходной величины отклонений уровня естественных антител в плазме больных от нормального содержания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Определение содержания естественных антител, как важной составной части циркулирующих иммуноглобулинов, целесообразно проводить в кардиологической клинике. Установлено, что у больных стенокардией с повышенным содержанием естественных антител к тромбину и катехоламинам отмечается достоверно большая частота приступов стенокардии и количество принимаего нитроглицерина, чем у больных с нормальным уровнем антител, а у больных с повышенным содержанием естественных антител к тромбину — также и большая активность свертывающей системы крог\и. Это указывает на значимость уровня естественных антител к тромбину и катехоламинам для оценки выраженности гемостати-Ческих нарушений и тяжести течения стенокардии.

При включении в комплексное лечение больных стенокардией плазмосорбции и плазмафереза данные о содержании у них естественных антител к тромбину, AT III, PGF2Q: и Ег, гистамину, серо-тонььу, дофамину, норадреналину и адреналину являются прогностическим показателем быстроты достижения клинического эффекта. Больным с нормальным уровнем естественных антител требуется меньше сеансов ПС и ПА, чем с больным с изменениями в их содержании.

Снижение уровня естественных антител к тромбину, AT III, PGF2CC и Е2, гистамину, серотоннну, дофамину под влиянием коррекции состава плазмы следует рассматривать как показатель эффективности проводимого лечения, так как оно коррелирует с клинической эффектна ¡¿остью ПС и ПА, а для естественных антител к тромбину и AT III — также и с улучшением состояния гемостаза.

Применение твердофазного иммуноферментного анализа значительно рг.?ширяет возможности исследованиий, улучшает качество и точность результатов и позволяет выявлять естественные антитела к широкому кругу биологически активных высокомолекулярных к- низкомолекулярных соединенна. Метод прост и информативен. Реактивы и оборудование доступны для любой лабораторш!.