Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Эмбриональные нейроэпителиальные опухоли больших полушарий головног мозга (светооптическое, иммуногистохимическое и электронно-микроскопическое исследование)

Р Г 5 0.

6 л с о '

¡¿V - МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РФ

МОСКОВСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ СТОМАТОЛОГИЧЕСКИЙ ИНСТИТУТ им. Н.А.Семашко

на правах рукописи

ГАДЖИЕВА Ольга Александровна

УДК 516. 831 - 006 - 07

ЭМБРИОНАЛЬНЫЕ НЕЙРОЭПИТЕПИАЛЬНЫЕ ОПУХОЛИ БОЛЬШИХ ПОЛУШАРИЙ, ГОЛОВНОГО МОЗГА (светоогтшческое, иммуногистохимичгског: и электронно-микроскопическое

исследсзание). ,

14.00.15. - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва, 1995

Работа выполнена в Научно-исследовательском ордена Трудового Красного знамени й ордена Дружбы народов Институте нейрохирургии им. акад. ННБурденко РАМН { директор - академик РАМН, лрофессор АККоновалов).

Научные руководители:

- доктор медицинских наук АГХоршунов

- доктор медицинских наук ЕЛЮрищев

Официальные оппоненты:

- доктор медицинских наук, профессор В.И£лисеенко

- доктор медицинских наук АГЛерееощиков

Ведущее учреждение-

Научно-исследовательский институт неврологии РАМН

"" С/ пц

Защита диссертации состоится 1995 г.

в часов на заседаниии Специализированного Ученого Совета

' Д 084.08.03 при Московсокм ордёна Трудового Красного Знамени медицицинском стоматологическом институте им.НА.Семашко ( г Москва, 103473, ул. Делегатская, д. 20/1.).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института ( Москва, ул. Вучетича, д. 9а).

Автореферат разослан " 3(- 01 1995 г.

Ученый секретарь Специализированного Совета доктор медицинских наук,

профессор _ ИВЯрема

Актуальность исследования.

Среди внутримозговых опухолей детского возраста одно" из ведущих мест по частоте встречаемости занимают • злокачественные малодифференцированные опухоли нейроэпителиального происхождения, которые в современных патологоанатомических классификациях опухолей центральной нервной системы (ЦНС) выделены в рубрику эмбриональных - нейроэпителиальных ■ опухолей (ЭНО). По данным различных статистик, ЭНО оставляют от 20 до 35 % опухолей ЦНС у детей. Все исследователи отмечают общность гистологической структуры, цитогенезз и 'биологического поведения" ЭНО, для которых характерны высокая степень гистологической и биологической злокачественности, а также тенденция к частому имплантационному метастазированию по ликворной системе головного и спинного, мозга - , субарахноидальным .. пространствам и стенкам желудочков мозга. ( Смирнов, 1962; Хоминский, 1952,1968; Burger et al, 1991, Freidman et al, 1991; Kleihues et si, 1993; Russel & Rubinstein, 1989; Tom'ta et al, 1986).

Существенные отличия гистоструктуры и биологии ЭНО от других новообразований нейроэпителиального происхождения, включающие и различную чувствительность этих новообразований к химиотерапевтическим агентам и лучевому воздействию позволили внести соответствующие коррективы в лечебные протоколы ЭНО следствием чего явилось существенное улучшение результатов их комбинированного лечения в виде

значительного увеличением срока-жизни курируемых больных. ( Хухлаева и др., 1993; Friedman et al., 1991; Tomita et al, 1986).

В литературе - ведутся постоянные дискуссии. о цитогенетическом происхождении ЭНО и их связи с другими категориями новообразований нервной системы, кроме того гистологическая классификация этих опухолей, подвергается постоянным пересмотрам и модификациям. Авторы различных классификаций ЭНО сходятся во мнении, что одним из определяющих факторов биологии этих опухолей является отсутствие соетооптических признаков нейроэпителиальной дифференцировки у части опухолевых клеток, а также присутствие в структуре опухолей очаговой дифференцировки клеток ( нейрональной, глиальной и тд.).( Becker & - Hinton, 1983; Dehner, 1986,1990; Lopes et al, 1993; Rorke et al, 1985; Rubinstein, 1972,1985). "

Наиболее достоверными критериями, определяющими

фенотипические особенности опухолей различного гистогенеза являются их антигенная структура и ультраструктурные признаки , тя. маркеры, которые могут быть достоверно верифицированы лишь при использовании соответствующих методов исследования - иммуногистохимии и электронной микроскопии. Изучение иммуноморфологии и ультраструктуры ЭНО ЦНС уже было проведено рядом исследователей, однако подавляющее большинство изученных опухолей - это ЭНО мозжечковой локализации тг. медуллобластомы { Burger et al, 1987, Caputy et al 1987, Cruz-Sanches et al, 1989; Gould et al, 1990; Kastetos, 1989). Особенности иммуноморфологии и ультраструктуры ЭНО имеющих локализацию в веществе больших

полушарий головного мозга представлены в виде отдельных наблюдений, это во многом объясняется тем, что подобная локализация ЭНО -встречается достаточно редко. ( Grieshammer et al, 1991; Kleinert 1991; Smith et al, 1990).

Тем не менее, в современной нейроонкопогической литературе прочно укоренилась концепция тя. "примитивных нейроэпителиальных опухолей"("ПНЕО") предложенная Hart & Earle в 1973 году, согласно которой среди полушарных ЭНО имеется большая группа светооптически малодифференцированных новообразований, состоящих, по мнению авторов, из "мультипотентных примитивных клеток нейроэпителия", которые являются стволовыми клетками, способными к дивергентной дифференцировке. Тем не менее, несмотря на широкое распространение, концепция "ПНЕО" пока не получила убедительного ультраструктурного и им'муногистохимического подтверждения. В связи с вышеизложенным , комплексное патологоанатомическое исследование репрезентативной серии полушарных ЭНО, включающее их светооптическое, ультраструктурное и иммуноморфологическое изучение этих новообразований может оказать существенную помощь в уточнении их цитогенезз и иметь важное значение для разработки оптимального варианта гистологической классификации ЭНО.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящего исследования было комплексное патологоанатомическое изучение 42 ЭНО больших полушарий головного

мозга с применением различных методов исследования с последующим фенотипировашем изученных новообразований и разработкой их гистологической классификации. Для решения цели исследования были поставлены следующие задачи.

1. Изучение материала операционных биопсий полушарных ЭНО по унифицированной методике, включающей иммуногисгохимию и электронную микроскопию.

2. Выявление различных иммуногисгохимических и ультрасгруктур»>1х маркеров дифференцировки клеи* полушарных ЭНО. '

3. Фенотипирование ЭНО^больших полушарий и выделение среди этих новообразований отдельных разновидностей имеющие общие антигенные и упьтраструкгурные особенности.

4. Всесторонний анализ полученных: данных - в свете имеющихся представлений о цитогенезе и классификациях ЭНО.

Научная новизна.

- 1. Впервые количественно репрезентативная группа новообразований с локализацией в больших полушариях головного мозга, верифицировать^ при светооптическом изучении как ЭНО, была исследована с привлечением современного методического потенциала, включающего иммуногисгохимию и электронную микроскопию.

2. Комплексное патологоанатомическое исследование этих новообразований установило, что во всех опухолях были

верифицированы признаки антигенной и ультраструктурной дифференцировки опухолевых клеток, таким образом факт существование среди ЭНО больших полушарий фенотипов опухолей полностью состоящих из недифференцированных клеток в нашем исследовании не был подтвержден.

3. Иммунологическое типирование и ультраструктурный анализ позволили выделить 4 отдельных разновидности полушарных ЭНО -нейробластому, нейроэпителиому, эпендимобластому -и хориоидкарциному.

4. Полученные. нами данные свидетельствуют об отсутствии среди исследованных нами 42 полушарных ЭНО фенотипов с признаками полиморфной ( или дивергентной) нейроэпителиальной дифференцировки опухолевых клеток.

Практическая значимость.

Полученные данные могут быть использованы:

1. В качестве методических рекомендаций при изучении иммуноморфопогии и 'ультраструктуры малодифференцированных новообразований нервной системы на материале операционных биопсий.

2. Для согершенствования патологоанатомической диагностики ЭНО.

3. Для разработки на основании полученных данных дифференцированного лечебного подхода к различным формам ЭНО.

4. Для определения прогностической значимости отдельных фенотипические особенности полушарных ЭНО.

Внедрение в практику

Полученные результаты используются для диагностики малодифференцированных опухолей нервной системы в патологоанатомическом отделении НИИ нейрохирургии им^кад. НЛБурденко РАМН, а также используются в отдеолениях детской нейрохирургии и нейрорадиологии НИИ нейрохирургии для разработки рациональной терапевтической тактики при ЭНО различной локализации.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены:

на конференции молодых ученых НИИ нейрохирургии (1987)

на треьем Международной конференции по нейроонкологии ¡Лондон,

1993)

на десятом Всемирном Конгрессе нейрохирургов ( Акапулько, 1993) Диссертация апробирована на межотделенческой научной конференции НИИ нейрохирургии имлкад. ННБурденко РАМН в июле 1994 года

Публикации: по теме диссертации опубликовано три печатные работы, еще одна находится в печати.

Объем и структура диссертации: Диссертация состит из введения четырех глав, общего заключения, выводов, списка литературы и

пприложения. Текст диссертации изложен на страницах машинописи, работа содержит 44 рисунка и 2 таблицы. Список литературы включает 24 работы отечественных авторов и 169 зарубежных.

Материал и методы исследования.

Объектом настоящего исследования был материал 48 операционных биопсий, полученных от 42 больных оперированных в Институте нейрохирургии имлкад. H.H. Бурденко РАМН за период с 01.01.1990 года по 01.06.1994 года включительно.

Возраст оперированных больных от 2 до 32 лет, среди них было 35 детей до 16 лет (83 %), средний возраст больных составил 12 лет. Больных мужского пола было 24, женского 18. Все больные были обследованы и оперированы в НИИ нейрохирургии мм.Н.Н.Бурденкс>. .. - >

После макроскопического изучения, присланный операционный материал был разделен следующим образом.

Часть фрагментов немедленно замораживалась в жцдком азоте с последующим получением серийных срезов.

Другая часть фрагментов ( не менее 5) фиксировалась в нейтральном забуференном 10% растворе формальдегида в течение 12-24 часов с последующей заливкой парафин {Hstowax, Leica, Германия).

Третья порция фрагментов (не. менее 10) фиксировалась в 2,5% • растворе глутаральдегида.

Замороженные и залитые в парафин срезы окрашивались гематоксилин-эозином, трихромовым методом Массона, по Ван-Гизон и Нисслю. Замороженные срезы ймпрегнировались золото-сулемовым методом Рамон-и-Кахаля, а также аргентофильными методами Бильшовского и Пердро.

Для иммуногистохимического исследования замороженных и залитых в парафин срезов толщиной 5-6 мкм. в большинстве наблюдений был использован трехсгадийный пероксидазно-антипероксидазный метод (ПАП) с широкой панелью первичных моно и поликлональных антител к различным тканевым антигенам.

Количественная оценка иммуногистохимического окрашивания - опухолевых клеток проводилась .с помощью анализатора цветового, изображения Quantniet color 500 + (Leica Cambrige, Германия- Англия).

Фрагменты электронно-микроскопического исследования, после фиксации в глютаральдегиде и посгфиксации в тетраокиси осмия подвергались дегидратации в спиртах и ацетоне с последующей заливкой в эпон 812. Ультратонкие срезы изучали в электронных микроскопах Jern (Jeol) 100 С и Jem (Jeol) 1200 EX (Япония) при разгоняющем напряжении 80 KV.

Оценка клинических данныхпроводилась на основании записей в историях болезни, протоколов операций и изучения PK и MP томограмм.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Комплексное патоморфологическое изучение 42 ЭНО больших полушарий головного мозга с использованием иммуногестохимических методов и электронной микроскопии позволило выделить три группы 4 новообразований, различающихся по иммуноморфологическим и ультраструктурным признакам дифференцировки опухолевых клеток.

I. Первая группа - ЭНО больших полушарий головного мозга с признаками нейрональной дифференцировки опухолевых клеток 26 наблюдений, что составило 62% от всех исследованных случаев. В свою очередь, в пределах этой категории новообразований нами были верифицированы два отдельных фенотипа - нейробластома и нейроэпителиома.

1. Нейробластомы больших полушарий головного . . мозга диагностированы в 20 наблюдениях, что составило 48% от всех . . исследованных случаев... ... ... . . . .

При светооптическом изучении полушарные нейробластомы состояли из мономорфных округлых и овальных клеток с гиперхромными ядрами овальной и вьпянутой формы, которые характеризовались равномерным распределением хроматина и отсутствием ядрышек. Цитоплазма у большинства клеток выявлялась в виде узкого перинуклеарного ободка, а у части клеток не визуализировалась совсем.

Клеточный и ядерный полиморфизм был выражен умеренно, в опухолевых клетках постоянно обнаруживались многочисленные фигуры патологических митозов.

В гистоструктуре и цитоархитектонике полушарных нейробластом можно было отметать следующие особенности.

На отдельных участках опухоли были построены в виДе островков и тяжей, которые были отделены друг от . друга прослойками грубоволокнисгой соединительной ткани имеющих толщину до 10 мкм. В центральных отделах клеточных островков часто обнаруживались -скопления псевдорозеток типа Хомера-Райта имеющих фибриллярный эозинофилькый центр, окаймленный скоплениями клеток с несколько вытянутыми ядрами, а также колоннарные структуры, представляющие собой продольные срезы через псевдорозетки.

Местами нейроблэстомы больших полушарий включали в себя структуры, называемые "бледными островками" (pale islands), которые представляли собой скоплений компактно расположенных клеток с f оптически светлой - ,;тзплазмой и гиперхромным ядром. • *

В некоторых участках полушарные нейробластомы имели вид фасцикулярных структур, представленных рядами ритмически повторяющимися, параллельно расположенных гиперхромных ядер опухолевых клеток (тя. палисадные структуры). Клетки, образующие ядерные^ палисады, имели вытянутую форму и полярно отходящие отростки различной длины, которые переплетаясь между собой формировали фасцикулы.

В структуре полушарных нейробластом выявлялись многочисленные

(_.

полнокровные сосуды с отсутствием признаков пролиферации клеток

эндотелия. Мелкие очаги некроза, преимущественно колликвзционного типа были обнаружены во всех исследованных опухолях.

При импрегнации замороженных криопэтных срезов нейробластом по методу Бильшовского, выявлялось окрашивание цитоплазмы, а также выраженная импрегнация отростков опухолевых клеток.

Иммуногистохимическое исследование выявило сильно позитивное окрашивание при инкубации срезов нейробластом только с антителами к антигенам нейронального ряда - нейрофиламентам, нейронспецифической энолазе (Ю), хромогранину А и синаптофизину.

При количественном анализе иммуногисгохимической экспрессии рз зличных антигенов в полушарных нейробластомах было выявлено, что - среднее число клеток позитивно окрашенных антителами к НСЭ составило в . 20 исследованных наблюдениях 83,7 + 2,1%, число клеток' окрашенных - - антителами к нейрофиламентам 68 КДа - 81,7 + 9,1%, нейрофиламентам 160 • ■ КДА - 82,0+3,4%, нейрофиламентам 200 КДа -80,4+ 4,9%, хромогранину А -85,4 + 3,2%, синаптофизину - 873 + 5,4%.

При электронно-микроскопическом изучении в структуре опухоли были обнаружены клеточные элементы, имеющие различное строение. Меньшая часть клеточных элементов опухоли не имела ультраструктурных признаков дифференцировки, тогда как в блышнстве опухолевых клеток были выявлены ультраструетурные маркеры нейрональной дифференцировки; цитоплазма этих клеток была хорошо развитой, в ней выявлялись многочисленные цистерны ШЭР полирибосомы, а также группы специфических органелл - пучки филаментов диаметром 10-12 нм.

микротрубочки до 30 нм. в диаметре, а также скопления многочисленных элекгронноплотных гранул диаметром 80 -250 нм., окруженных двойной мембраной. В ультраструктуре опухоли выявлялись многочисленные межклеточные промежутки заполненные отростками опухолевых клеток, имеющих строение, типичное для аксонов; эти отростки имели четко оформленную мембрану^" (аксолемму), в их цитоплазме (аксоплазме) выявлялось большое количество митохондрий и полирибосом, а также другие органеллы-микротрубочки, филаменты и нейросекреторныё гранулы, ультраструктура которых полностью соответствовала аналогичным органеллам, выявленным в цитоплазме клеток. Мемжмебранные плотные контакты типа гопи!ае асШаеге^еБ обнаруживались крайне редко и только между мембранами аксонов.

Вторая разнози5чосп> полушарных ЭНО с признаками нейрональной дифференцировки были обозначены нами термином "нейроэпителиомы"; эти новообразования были верифицированы у 6 больных, что составило 14% от всех исследованных случаев.

При светооптическом изучении обзорных препаратов полушарных нейроэпителиом, установлено, что эти опухоли состояли из относительно мономорфных клеток округлой или полигональной формы, которые имели четко визуализируемую эозинофильную цитоплазму и межклеточные границы. Клетки нейроэпителиом содержали эксцентрически расположенные крупные гиперхромные ядра округлой, овальной или несколько вытянутой формы, ядрышко выявлялось в незначительном количестве ядер. Ядерный

полиморфизм был выражен умеренно, фигуры патологических митозов были многочисленны.

Яркой отличительной чертой структуры нейроэпителиом было наличиев опухоли большого количества так называемых нейроэпитепиальных колец или истинных розеток типа Флекснера-Винштетера (Иехпег-\М'п5Ь{е1ег). При светооптическом изучении истинные розетки представляли собой образования округлой или несколько вытянутой овальной формы, характеризующиеся наличием центрального канала (или кольца) с четко контурируемой краевой мембраной, окаймленного венчиком из радиально расположенных опухолевых клеток.

При иммуногмстохимическом исследовании нейроэпителиом больших полушарий было зарегистрировано сильнопозитивное окрашивание большинства клеток опухоли при обработке срезов ' антителами к нейрофиламентам различной молекулярной массы и НСЭ.

Кроме того, было верифицировано также гранулярное окрашивание цитоплазмы отдельных комплексов опухолевых клеток при инкубации срезов с антителами к общему цитокератину.

Количественный анализ выраженности иммуногистохимической экспрессии различных антигенов выявил, что г среднее число клеток позитивно окрашенных антителами к НСЭ составило в 6 исследованных наблюдениях 745 + 6,1%, число клеток окрашенных антителами к нейрофиламентам 68 КДа - 71,7 + 4,5%, нейрофиламентам 160 »(ДА -74,6+4,2%, нейрофиламентам 200 КДа - 76,64- 5,1%, общему цитокератину - 23.4% + 7.2. .

При электронно-микроскопическом изучении обнаружено, что ультраструктура полушарных нейроэпителиом характеризуется относительной мономорфностыо. ' •' Опухоли состояли из ' компактно' расположенных клеток округлой, овальной и чаще полигональной формы; размеры клеток варьировали в незначительных пределах. Мембраны клеток тесно прилежали друг к другой, в ультраструктуре нейроэпителиом выявлялось большое количество плотных межмембранных контактов типа десмосом; межклеточные промежутки отсутствовали полностью. Опухолевые клетки имели крупные ядра, при этом в большинстве из них ядерная мембрана образовывала многочисленные инвагинации, в результате чего часть ядер имела многолопастную форму. В цитоплазме клеток нейроэпителиом выявлялось"" большое количество промежуточных филаментов диаметром 6-10 нм. В цитоплазме опухолевых клеток выявлялись также многочисленные рибосомы и полирибосомы .обилие расширенных цистерн ШЭР, в просвете которых имелись короткие филаменты диаметром 6-8 нм.

II разновидность ЭНО больших полушарий головного мозга - это новообразования с фенотапическими признаками эпендимарной дифференцировки опухолевых клеток, обозначенные нами

"эпендим'областомы." Эти опухоли были диагностированы нами у 11 больных, что составило 26% от всех исследованных случаев.

При светооптическом изучении эпендимобластом установлено, что эти опухоли состоят из двух типов клеток - относительно мономорфных клеток округлой или полигональной формы, которые имели четко визуализируемую

эозинофильную цитоплазму и округлой формы ядро и мелких клеток с гиперхромными ядрами овальной или вытянутой формы, цитоплазма которых была представлена или в виде узкого перинуклеарного ободка или совсем не верифицировалась светооптически. В обоих типах опухолевых клеток эпендимобластом выявлялись многочисленные фигуры митотического деления.

Структура опухоли была представлена солидными полями опухолевых клеток, среди которых наблюдались отдельные соединительнотканные волокна. Характерной особенностью гистоструктуры эпендимобластом было наличие в опухоли истинных псевдомногослойных розеток, которые были представлены кольцами овальной или округлой с оптически • пустым центром в просвете которого иногда обнаруживалось слйбоэозинофильное бесструктурное содержимое. Просвет розетки окружен слабобазофильной мембраной на наружной поверхности которой располагались опухолевые клетки.

Псевдомногослойные розетки имеют тенденцию к группировке в связи с чем в отдельных участках они обнаруживаются в изобилии, тогда как другие участки опухоли представляли собой солидные поля клеток без псевдорозеток. Периваскулярные розетки, столь характерные для структуры более зрелых форм новообразований эпендимарного ряда, в эпендимобластомах обнаруживались крайне редко.

В структуре эпендимобластом обнаруживались многочисленные, сосуды,, самого разнообразного калибра, отмечалось также, наличие большого количества полнокровных тонкостенных сосудов, напоминавших

кавернозные гемангиомы. Для гистосгруктуры эпендимобластом характерно наличие многочисленных мелких очагов колликвационного некроза.

При иммуногистохимическом исследовании эпендимобластом выявлено интенсивное диффузное окрашивание цитоплазмы и мембран большинства опухолевых клеток при инкубации срезов с антителами к виментину. Отдельные группы опухолевых клеток со светлыми ядрами и четкой цитоплазмой демонстрировали внутрицитоплазматическуга экспрессию ГФКБ и белка 5-100 с четким окрашиванием мелких опухолевых отростков, однако число клеток ГФКБ и 5-100 позитивных было значительно меньшим чем виментинпозитивных. Наибольшая выраженность экспрессии ГФКБ обнаруживалась в клетках расположенных периваскулярно, в том числе и тех, которые формировали периваскулярные псевдорозетки.

Количественные показатели иммунного окрашивания

эпендимобластом были следующие - количество виментин-позитивных клеток - 78,6 + 3,2%; число ГФКБ- позитивных клеток -13,7 + 5,7%; число 5-100-позитивных клеток- 13,4 + 4,1 %.

При электронно-микроскопическом исследовании ультраструктура эпендимобластом была представлена двумя типами клеток: - мелкие клетки без признаков специфической ультраструктурной дифференцировки, и клетки с наличием четких ультраструктурных признаков эпендимарной дифференцировки. Последние имели крупное тело с обильной цитоплазмой, в которой выявлялись многочисленные профили ШЭР, скопления полирибосом, а также хаотично расположенных филаментов диаметром 8-

12 нм. Некоторые клетки имели короткие отростки, содержащие пучки филаментов и заполняющие межклеточные промежутки. Контуры цитоплазматических мембран опухолевых клеток были складчатые и иногда формировали своеобразные пальцевидные структуры. Клетки прилежали друг к другу достаточно плотно, на поверхности их мембран имелись многочисленные соединительные комплексы. На поверхности мембран клеток имелись множественные микроворсинки, а в просветах интерцеллюлярных промежутков иногда ' выявлялись продольно и поперечно срезанные реснички типа 9+2. В прилежащих к базальным отделам р'есничек участкам цитоплазмы обнаруживались многочисленные элеетронноплотные тельца диаметром до 100 нм. тл. базальные тельца.

. III группа ЭНО больших полушарий головного мозга - это новообразования со структурными признаками. • хориоидной дифференцировки опухолевых клеток, обозначенные нами термином "хориоидкарциномы". Эти опухоли верифицированы нами у 5 больных, что составило 12% от всех исследованных случаев.

При светооптическом изучении хориодкарцином установлено, что опухоли состояли из округлых и полигональных клеток, содержащих мелкие гиперхромные ядра; иногда обнаруживались клетки с более крупными светлыми ядрами, содержащими с пылевидный хроматин и хорошо контурирующее ядрышко. В клетках хориодкарцином отмечался умеренный ядерный полиморфизм, а также фигуры атипических митозов.

В целом структура хориодкарцином выглядела достаточно

1

мономорфной, однако на некоторых участках обнаруживались тубулярные структуры представленные слоем опухолевым клеток, окружающих каналы с узкими, щелевидными просветами. В зонах контакта комплексов клеток опухоли с соединительнотканными волокнами трабекул формировались базалиомоподобные структуры глубоко вдающиеся в подлежащий слой коллагеновых волокон . Ни в одной из 5 полушэрных хориодкарцином не было обнаружено папиллярных структур.

В хориоидкарциномах выявлялось большое количество сосудов различного калибра без признаков пролиферации клеток эндотелия. В опухоли обнаруживалось большое количество некрозов колликвационного типа.

При иммуногистохимическом исследовании выявлено сильнопозитивное • иммунное окрашивание цитоплазмы и мембран отдельных групп опухолевых клеток при обработке срезов антителами к преальбумину, виментину и общему цитокератину. Отмечалось также позитивное окрашивание отдельных клеточных комплексов при обработке срезов антителами к ГФКБ и протеину 5-100.

При количественном изучении экспрессии отдельных антигенов в хориоидкарциномах было установлено, что экспрессия преальбумина выявлена в 43 + 0,6 % опухолевых клеток, виментина - в 35,8 + 7,4 %, цитокератина - в 383 + 1,4%, ГФКБ - 19,6 + 3,2% и белка Б-ЮО в 18,4 + 1,8%. '

При электронно-микроскопическом изучении хориодкарцином было выявлено, что часть клеток опухоли не имела четких ультраструктурных признаков цитологической дифференцировки - это были относительно мономоофные клетки с крупным ядром вытянутой формы и скудной цитоплазмой, содержащей отдельные огранеллы, в том числе и структуры типа annulate lamellae. В большей части клеток были выявлены признаки хориоидной дифференцировки - наличие многочисленных межклеточных соединений типа замыкающих плотных межмембранных контактов; на отдельных участках опухоли прослеживались также элементы базальной мембраны. При этом, в опухолевых клетках, прилежащих к мембране четко идентифицировалась базально-апикальная поляризация - участки базальной поверхности цитоплазматической мембраны ыли складчатые и утолщены, а на апикальной поверхности клеток имелись комплексы микроворсинок.

Проведенное нами комплексное патологоанатомическое изучение 42 ЭНО, локализующихся в веществе больших полушарий головного мозга с использованием иммуногистохимических методов исследования и электронной микроскопии обнаружило, что все исследованные новообразования ■ имели признаки фенотипической дифференцировки -нейрональной, эпендимарной или хориоидальной.

Полученные нами данные свидетельствуют о том, что все 42 исследованные опухоли, верифицированные светооптически как ЭНО, имели четкие признаки структурной и функциональной дифференцирозки. опухолевых клеток, проявляющейся как иммунофенотопически так и ультраструктурно. Таким образом, проведенное нами исследование

свидетельствует об отсутствии среди исследованных нами 42 ЭНО больших полушарий "недифференцированных примитивных' нейроэпителкальных опухолей, выделяемых авторами некоторых классификаций. (Becker & Hinton, 1983, Dehner , 1986, 1990, Rorke et al 1985). Коме того, мы считаем, что опухоли, не имеющие признаков иммуноморфологической и ультраструктурной дифференцировки вообще не могут быть точно гистогенетически верифицированы и должны обозначаться как "некпассифицируемые опухоли" или "цитобластомы".

Проведенное нами- исследование позволяет нам высказать мнение о том, что иммуногистохимический метод имеет большую ценность для определении направленности дифференцировки клеток ЭНО и имеет ряд несомненных преимуществ перед электронной микроскопией. С одной стороны, иммуногистохимический метод позволяет оценить особенности антигенной экспрессии в достаточно больших популяциях опухолевых клеток, а также позволяет оценить особенности распределения антигенной экспрессии в участках опухоли, имеющих различную гистологическую структуру; тогда как электронно-микроскопический метод исследования позволяет оценить особенности ультраструктуры в относительно малочисленной популяции опухолевых клеток. С другой стороны, сам по себе факт верификации при ультраструктурном изучении специфических органелл в цитоплазме опухолевых клеток, свидетельствующих об их дифференцировке, не в состоянии оценить особенности молекулярной биологии этих структур и затрудняет определение их тканевой принадлежности. В большей степени это касается идентификации

промежуточных филаментов различных классов, которые ультраструктурно фактически неотличимы друг от друга, тем не менее иммуногистохимическое исследование позволяет четко определить их биохимическую, антигенную и соответственно тканевую специфичность.

Использование иммуногистохимических методов позволило нам выделить среди полушарных ЭНО фенотипы новообразований имеющих антигенную структуру, присущую тканям различного гистогенеза. Так в нейроэпителиомах были иммуногистохимически верифицирована экспрессия нейрональных (нейрональных и НСЭ) и эпителиальных (общий цитокератин) маркеров, а в хориоидкарциномах - коэкспрессия глиальных ( ГФКБ и белокБ-ЮО), эпителиальных (цитокератин) и мезенхимальных (виментин) маркеров. Подобные варианты антигенного- спектра ЭНО, обнаруженные при помощи иммуногистохимических методов, свидетельствует о наличии полиморфизма в направленности дифференцировки отдельных фенотипов полушарных ЭНО.

ВЫВОДЫ.

5. ЭНО больших полушарий голов.юго мозга - это редкие новообразования центральной нервной системы; за период с 1990 по 1994 год они были верифицированы в 42 наблюдениях, что составило 1,05% от всех новообразований ЦНС, 2,8% от всех интрацеребрзльных опухолей больших полушарий головного мозга и 13% от всех ЭНО ЦНС. Полушарные ■ ЭНО выявляются преимущественно у лиц детского возраста - 83% больных с ЭНО больших полушарий были моложе 15 лет.

2. Комплексное патологоанатомическое изучение 42 ЭНО больших полушарий. включающее электронную микроскопию и иммуногистохимическое исследование с унифицированным методическим протоколом выявило, что во всех исследованных случаях, несмотря на определенное фенотипическое сходство полушарных ЭНО при их светооптическом изучении, имеются четко определенные ультраструктурные и иммуногистохимические маркеры, свидетельствующие о дифференцировке опухолевых клеток.

3. Наиболее оптимальным методом для выявления признаков и направленности дифференцировки опухолевых клеток ЭНО больших полушарий является иммуногистохимическое исследование с использованием широкой панели антител и. количественным изучением позитивно окрашенных клеток с помощью компьютерного анализатора изображения. ... - . ...

4. Полученные нами данные свидетельствуют о том, что среди 42 ЭНО полушарной локализации имеются отдельные фенотипы опухолей, в клетках которых четко верифицированы признаки однонаправленной (или унипотентной) дифференцировки - нейрональной, эпендимарной и хориоидно-клеточной. На основании полученных данных, среди полушарных ЭНО нами выделено 4 разновидности новообразований - нейробластома, нейроэпителиома, эпендимобластома и хориодкарцинома.

5. Ни в одной из исследованных нами 42 ЭНО больших полушарий головного мозга не было верифицировано новообразований лей, сочетающих в себе признаки полиморфизма нейроэпителиальной

дифференцировки опухолевых клеток - нейрональной и глиальной одновременно, т.е. ЭНО, состоящих из мультипотентных примитивных клеток нейроэпителия известных в литературе под названием "ПНЕО".

6. В некоторых разновидностях полушарных ЭНО присутствуют варианты сочетания нейроэктодермального и эпителиального иммунофенотипа - нейронального и эпителиального в нейроэпителиомах и глиального и эпителиального в хориоидкарциномах, что однако это не свидетельствует о "мультипотентной нейроэпителиальной дифференцировке" клеток этих новообразований.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Cerebral neuroblastoma and neuroepithelioma.// In: 3-d international neuroroncologic conference. London. 1993. p. 47. ( в соавт. с АГХоршуновым).

2. Primitive neuroepithelial tumors of the cerebral hemispheres.// In : 10 international congress of neurological surgery. Acapulco. 1993. p.176 (в созвтю с АГХоршуновым и БЛЛихтерманом).

3. Эмбриональные нейроэпитеалиальные опухоли больших полушарий. // Архив патол. - 1995 - Вып.1. - с. (в созвт. с АГХоршуновым, АВ.Смирновым, З.В.Сычевой).

4. Примитивные нейроэпителиальные опухоли. // В кн. Очерки по патологической анатомии нейрохирургических заболеваний. Спб ( в печати).