Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Электрокинетические характеристики клеток крови и их взаимосвязь с другими гематологическими показателями в норме и патологии

РГО ОД ;

{{А ЗАНСКИЙ. ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ " '} Г.Ш' Вй'ЙДВДШСКИЙ ИНСТИТУТ имени С.В.ЮРАШОВА

Ка правах рукописи

гаььогданов

. РУСТАМ ЯКУБОВИЧ

УДК 591.III: 612.014.42 : 616- 008.8

ЭЛЕЮТОКИНЕТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ КЛЕТОК КРОВИ И ИХ ВЗАИМОСВЯЗЬ С ДРУШМ ГЕМАТОЛОПМЕСКЖИ ПОКАЗАТЕЛЯМ В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Казань - 1994

/

/ / ^

Работа выполнена во Всероссийском научно- исследовательском ветеринарном институте, г. Казань.

Научные консультанты - Член-корр. АН Республики Татарстан,

Официальные оппоненты -

1. Доктор медицинских наук, профессор Г.И.ЕОЗКНЕЦ

2. Доктор биологических наук, профессор В.Н.КИ1Л03

3. Доктор медицинских наук, профессор И.М.РАХМАТУЛЛИН

Ведущая организации - Российский Университет Дружбы народов (г. Москва)

Защита состоится " /¿> " О^&ЛлЛ 1994 г< а ¿7_часов

на заседании специализированного совета Д 084.29.03 при Казанском ордена Трудового Красного Знамени государственном медицинском институте им. С.В.Курапшва (420012, г. Казань, ул. Бутлерова, 49).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке

доктор ветеринарных наук, профессор А.З.РАВИЛСВ

-Засл. деятель науки Республики Татарстан, доктор медицинских наук, профессор Г.И.ПОЛЕТАЕВ

специализированного совета, профессор

Р.Х.ХАШЬЯШВА

I. ОЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАВЛИ Актуальность теми. В основе жизнедеятельности организма лежат общие приспособительные реакции к постоянно меняющимся факторам окружающей среды, сформировавшая в длительном процессе эволюции и предполагающие координированное функционирование всех ого систем и уровней (Горизонтов Й.Д., 1931; Судаков К.В., 1987). В исследовательской практике этот "единый процесс регуляции и управления" искусственно расчленяется на отдельное звенья, рассматриваемые изолированно. При этом акцент делается на нервную и гормональную системы. На сегодняшний день назрела необходимость более полного, с привлечением современных методов, изучения других систем и их взаимосвязей в комплексной защитной реакции организма на воздействие.

Особую значимость приобретает концепция о системе кровообращения как индикаторе адаптационно— приспособительной деятельности организма, сформулированная В.В.Париным к соавт. (1967), В широком понимании она охватывает и систему крови, форменным элементам которой принадлежит ватаое'(если не ведущее) значение при адаптации биообъекта к факторам различной природы, в том числе в условиях патологии.

Мембраны эритроцитов, отражая, несмотря на некоторые характерные особенности, общие принципы структуры мембран клеток организма (Постнов Ю.В., 1977), как объекты исследования обладают такими преимуществами как простота вьделения, стабильность в искусственной среде, своеобразие организации, не усложненной внутриклеточными мембранами вследствие отсутствия органелл и ядерного аппарата ( Са^оз А., 1973). Они являются прекрасной модельной системой мышечных мембран - по содержанию контрактуяь-ного аппарата из сократительных белков спектрина и актина (Чер-

ниц^кий Е.А., Воробей A.B., 1981), а также нервных клеток - по характеру переноса ионов, коэффициенту распределения рада веществ (Болдырев A.A., I9SI). Сравнение больаинства характеристик заряда наружной поверхности мембран нейронов спинальных ганглиев крыс, клеток нейробластомы мыши и эритроцитов показало их подобность (Долгая Е.В. и соавт., 1985). Как и у эпителиальных клеток, в состав мембран эритроцитов входит крупный сиалогликопротеиновый. компонент гликофорин, участвующий в акте прилипания к клетке кл-коплазм ( Banni и. и соавт., 1978) и, следовательно, на эритроцитах можно исследовать кногие аспекты взаимодействия микоплазм с клетками эпителия дыхательных и половых органов (Румянцев С.Н., 1983).,

Эритроциты б качестве тест- обьектов (Соколов В.В., Габдул-гадиыова P.A., 1986) позволят, в недалеком будущем, решить, в определенной степени, проблему гуманного отношения к животным при фармако- токсикологических исследованиях, заставляющую искать и' развивать методы, не требующие использования в экспериментах животных, или, по крайней мере, большого их количества. Так, в 1937 году в США вышел закон, предписывающий применять в токсикологии "альтернативные метода", т.е. проводить эксперимента без использования лабораторных животных ( гъInden G., 1991). Аналогичные требования изложены и в "Правилах проведения работ с использованием лабораторных животных", утвержденных Минздравом СССР и справедливы для медико- биологических и ветеринарной наук в целом.

Открытие в конце 70-х годов рецепторов к фармакологическим препаратам на иммунокомлетентных клетках подвело теоретическую базу для объяснения юмуиотропного эффекта многих химических соединений. Однако, по мнению С.Н.Голикова и соавт. (1986), "задача по оценке токсического действия химических веществ на иммунную

систему только поставлена" и ждет своего решения.

Актуальность совершенствования неспецифических критериев

оценки степени воздействия возрастает при контакте организма, с

малотоксическими веществами или с токсическими соединениями в ма-

0

лых дозах, поскольку клиническая картина и морфологические изменения в таких случаях терло? относительную специфику и на первый план выступают "неспецифические" реакции организма. В этом плане успехи мембракологии, ее идеи и методы, широко используемые в последнее время а различных областях биологии, медицины и ветеринарии, помогают расшифровать молекулярные механизмы развития патологических процессов и Еыработать подходы к лечения конкретных заболеваний. Установлена зависимость значительного числа патологических состояний о^арушения деятельности наружной клеточной мембраны а различных тканях и органах (Меерсон 5.3., 1973; Рыску-лова С.Г., 1988). Изложенное обьясняет большой интерес исследователей к изучению функций мембранного аппарата клеток в условиях действия патогенных агентоз.

В современном арсенале методов изучения клеточной поверхности достойное ¡.;есто занял электрофорез, основанный на регистрации перемещения клеток в электрической поле, чтсрозволяет оценивать электрофоретическу» подвижность (Э5Й) клеток, а также, используя математические преобразования, электрокинетический потенциал (ЭКП) и плотность заряда на их поверхности. . •

В нашей стране выпущено несколько монографий, посвященных данной проблвке (Харамснеико С.С., Ракитянская A.A., 1974; Киношников А.И. и соавт., 1977, 1986; Коэинец Г.И. и соавт., 1986) и защищено более 40 диссертаций. Тем не менее, определенный круг задач не нашел должного решения. В исследовании электрокинетических свойств клеток доминируют биофизическая направленность и фе~ .

номенологический подход, тогда как взаимосвязь Э4П с широко используемыми показателям! (биохимическими, иммунологическими, гематологическими и т.д.) изучена слабо, что снижает ее информативность, специфичность; ко позволяет оценить роль и место в системе показателей, характеризующих состояние организма; создать целостную картину того или иного инфекционного и фармако-- токсического процессов.

Концептуальному осмысления к анализу фактического материала с позиция системного подхода (Анохин П.К., 19*73), выявлению возможностей клеточного электрофореза в медицине и ветеринарии посвящена данная работа.

Цоль работы. Целью настоящих исследований являлась оценка электрокинеткческих свойств клеток крови человека и гшвотных, а также взаимосвязи их с гематологическими, иммунологическими и морфологическими показателями при воздействии на организм инфекционных и фармако- токсических агентов.

Основные задачи исследования;

1. Определить коррелятивные отношения параметра электрофо-ретической подвижности клеток крови с другими показателями жизнедеятельности организма в условиях "нормы", "напряжения механизмов адаптации" и патологии.

2. Оценить возможности использования клеточного электрофореза при изучении инфекционных и вакцинных процессов.

3. Исследовать особенности действия химических агентов на олектрофоретическую подвижность клето^рови и взаимосвязь этого показателя с другими.

4. Изучить и оптимизировать, опираясь на данные клеточного эл< ктрофореза, отдельные этапы биотехнологических процессов получения эритроцитарных диагностикумов, гибридом и культивирования

клеток.

Решение поставленных задач позволило сформулировать следующие основные научные положения, выдвигаете на защиту:

- поверхностный электрический потенциал клеток крови является одним из показателей конституционального иммунитета организма к инфекционным и химическим агентам;

' - скоординировшшость связей электрофоретической подвижности клеток крови с другими физико- химическими и иммунологическими ее показателями, выражающаяся в уровне коррелятивных отношений и избирательной их комбинации, адекватно отражает функциональное состояние организма;

- представление электрокинетических свойств'клеток и других физико- химических характеристик крови как единой системы показателей с определенной, изменяющейся при внешних воздействиях, степенью взаимосвязей, является основой оптимизации метода клеточного электрофореза, повышения его информативности при физиологических исследованиях, диагностика и изучении патологических состояний.

Научная новизна. Впервые электрофоретическая подвижность клеток крови рассмотрена а'комплексе с другими ее физико- химическими показателями, проанализирована внутри- и межвидовая взаимосвязь их в условиях "нормы", функциональной нагрузки и патологического процесса. Запатентован способ определения функционального состояния организма, основанный на характеристике степени скоординированное™ связей электрофоретической подвижности клеток крови с другими физико- химическими ее показателями и отличающийся большей, в сравнении с оценкой одиночных показателей, чувствительностью. Установлено, что невысокая в "норме" корреляция при физиологических нагрузках значительно возрастала. Патологические

состояния характеризовались распадом отмеченных коррелятивных отношений ЭЙ1 клеток с другими показателями крови.

Показано определенное значение поверхностного электрического потенциала эритроцитов в формировании иммунного ответа организма на инфекционные агенты. Сравнительно- видовой анализ выявил зависимость чувствительности животных к столбнячному и ботулшш-ческим токсинам от уровня Э£Л эритроцитов и лимфоцитов крови относительно друг друга, что позволяет рассматривать поверхностный электрический потенциал клеток крови как один из факторов конституционального иммунитета человека и животных.

Разработаны научно- теоретические основы повышения достоверности и информативности клеточного электрофореза при физиологических исследованиях и изучении патологических процессов. Показана принципиальная возможность его использования для совершенствования отдельных биотехнологических процессов изготовления эритроцитарных диагностикумов и гибридом, оценки контаминации культур клеток различными микроорганизмами.

Практическая ценность работа. Результаты исследований вошли в методическое пособие для ВУЗов и ФПК "Клеточный электрофорез прдйзучении инфекционной патологии сельскохозяйственных животных" (утверждено Отделением ветеринарной медицины ВАСХНШ1 от 24.05.92) и используются при чтении лекций по патологической физиологии, биохимии и биофизике сельскохозяйственных животных.

Материалы по клеточному электрофорезу при воздействии на организм животных йодохлорина - нового средства для общей санации - позволившие оценить его безвредность, послужили основой разработки нормативно- технического документа "Наставление по применению препарату йодохлорина для санации воздушной среды и организма животных", утвержденного ГУБ Щ СССР от 31.10.91 г.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены на Республиканских научно- технических конференциях по теоретическим и практическим вопросах! ветеринарии и зоотехнии (Казань,

1984, 1988- 1992), 12-м Пленарном заседании комиссии по борьбе с

о

сибирской язвой (Воронеж, 1986), Всесоюзной конференции "Эпизоотология, эпидемиология, средства диагностики, терапии и специфической профилактики инфекционных болезней, общих для человека и животных" (Львов, 1988), Всесоюзном симпозиуме "Актуальные вопросы диагностики инфекционных болезней лабораторных животных, разработка и производство современных тест- систем" (Москва, 1989), Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Современные аспекты клеточного электрофореза" (Москва, 1589), Все союзной конференции "Актуальные вопросы эпидемиологии, диагностики и профилактики риккетсиозов" (Москва, 1989), Региональной научно-практической конференции "Электрофорез клетки" (Уфа, 1989), Всесоюзном симпозиуме "Современные проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринарной медицине" (Н. Новгород, 1990), Все-соизной конкуренции "Совершенствование методов государственного контроля ветеринарных препаратов" (Москва, 1991), 1-м съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), Всероссийском научном совещании "Биология клетки в культуре" (Санкт-Летербург, 1992), Российской научной конференции "Создание лекарственных средств" (Купавна, 1992)» Международном симпозиуме "Проблемы саногенного и патогенного эффектов экологических воздействий на внутреннюю среду организма" (Бишкек, 1993), Российской научной конференции "Культуры клеток в ветеринарии и биотехнологии" (Москва, 1993), Всероссийской научно- методической конференции "Диагностика, патогенез, патоыорфология и профилактика болезней сельскохозяйственных животных (Воронеж, 1993).

Публикации по теме работы. По материалам диссертации опубликованы 31 статья и I методическое пособие. Получено положительное решение на изобретение. Принято во ВН5ШТЭИСХ и зарегистрировано 8 отчетов по проведенным исследованиям.

Обьем и структура диссертации. Диссертация изложена на 321 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований (4 главы), обсуждения (3 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций к списка литературы (всего 614 источников, в том числе 22? иностранных авторов). Работа иллюстрирована 54 таблицами и 26 рисунками.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Материалы и методы исследования. Работа выполнена в соответствии с планом НИР в период с 1983 по 1993 годы в лабораториях физических методов исследования, патоморфологии и культуры клеток Всероссийского научно- исследовательского ветеринарного института (г. Казань).

Всего было использовано 65? яивотнкх обоего пола, из них IS0 белых ш-ией, 34 белых крыс, 162 морских свинок, 83 кролика породы серыЯ великан, 61 свинья крупной белой породы разного возраста, 37 коров, 19 телят и 12 бычков бестужевской породы, 45 овец и 10 баранов породы прокос. Серия исследований проведена на 58 больных и клинически здоровых людях. Основная масса экспериментов осуществлена на клетках крови (эритроциты, лимфоциты в виде суспензии неразделенно!! и разделенной на Т- и В- популяции). Кроме того, изучались перитонеальные макрофаги и культуры клеток линий ТКЭК (тонкого кишечника эмбриона коров), СПЭВ (дачки эмбриона свиньи), ППЭС (перевиваемой почки эмбриона свиньи), выращенные на средах с сыворотками крови различных видов животных (коров и их

—J II —

эмбрионов, лошадей, овец и свиней), а также линии миеломных клеток SP 2/0, IiSО, PAX, спленоциты мъше'й м гибридош к U. egalacfcia.

Влияние химических препаратов на клетки крови изучали в опытах in vivo и in vitro. Исследованы различные группы соедине-нений: ентикоагулшты (гепарин, ЭДТА. я цитрат натрия); биологически активные препарата с иммуностимулирующими свойствами (кси-медон и миедопид -В-активин); анестетик (гексенал); фиксирующие препараты (формалин, акролеин, три-оксиметил-фосфин); танин; средство для санации (йодохлорин); ферментный препарат микробного происхождения (пектофоетидин П 10х); столбнячный и ботулинические типов А, В, С и Е анатоксины; шкотоксин (патулин); фосфор-, и хлороргалические соединения (гексахлсрциклогексан и высокотоксичные 40С антихолинестеразного действия).

При изучении патогенеза инфекционного процесса применяли антигены Chi.' рвИ^вс^'возбудателей аборта коров (итаым "250") и и овец (штамм "Ростиново-70"), Coxiella burnetii (штамм "Грита" и "Барабинский"), Вг. аЪси-tuo (штаммы "19" и "82").

Лимфоциты крови выдаляли центрифугированием в градненто плотности поливиниловый спирт- верографин (Адамчук JI.B. и соавт., 1982) с последующим лизированиеы эритроцитов в осадке 0.83Í- ным раствором хлористого аммония.

Выли использованы биофизические (клеточный электрофорез, им-педансометрия), гематологические (определение СОЭ, гематокрита, количества эритроцитов и лейкоцитов, лейкоформули и уровня гемоглобина в крови), иммунологические (определение функционального состояния нейтрофилов, количества Т- и В- лимфоцитов, циркулирующих иммунных комплексов, бактерицидной и лизоцимной активности сыворотки крови, адгезивной и фагоцитарной активности перитоне-альных макрофагов), биохимические (определение резервной щелоч-

ности, фибриногена и сиаловых кислот плазмы, общего белка, церу-лоплаэмина, альбуминов и фракций глобулинов в сыворотке крови), серологические (реакции непрямой гемаггдютинации, агглютинации, длительного связывания комплемента.и имцуноферыентный анализ), гистологические (морфология печени, почек и лимфоузлов) методы исследования, а также гибридомная технология (получение гибридом к возбудителю агалактии овец и. аваЗ-ас^а с использованием различных типов миеломних клеток: ибо, зр 2/0, рах.

При биометрической обработке результатов исследования вычислялись среднее арифметическое, среднее квадратическое отклонение, коэффициент вариации, а также достоверность выборочной

разности по критериям Стьюдента и Фишера (Урбах В.Ю., 1964; Пло-*

хинский Н.А., 1970). Дисперсионный, с оценкой силы влияния регулируемых факторов (Ь2А), и корреляционный анализы осуществляли по Н.А.Пдохинскому (1970).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЗДЕНЙЕ

Перед непосредственным изучением тех или иных воздействий нами рассмотрена зависимость ЭЕ1 клеток 'крови различных животных от методических факторов: электропроводности крови и ее жидких компонентов (сыворотки и плазмы), длительности хранения, температуры суспензионной среды и силы измерительного тока, что поз-вялило подобрать определенные режимы измерения.

Показано резкое падение ЭШ эритроцитов овец и коров через X сутки после взятия крови, которая уже через 2 суток приближает-•ся к исходному уровню. Изменения электросопротивления крови и ЭФ1 эритроцитов при хранении не коррелировали между собой, что позволяет с большим основанием пропагандировать метод определения электропроводности >фови, разработанный пришлем участии

(Тукшаитов Р.Х., Гильмутдинов Р.Я., Латдаов М.М., 1984). Экспериментально нами не подтвердило« установившееся в литературе положение об изменении Э5П клеток на с изменением температуры измерительной среда на 1°С. Для эритроцитов коров эта величина составляла 3,3$, а для эритроцитов овец - 3,1$, что важно 0 учитывать при сопоставлении результатов измерений проведенных при различных температурах. Выявленную неидентичность изменений ЭШ эритроцитов и лимфоцитов крови при воздействии таких стрессовых факторов, как длительное содержание животных (до I года) при пониженных температурах и транспортировке на большие (около 800 км) расстояния должна учитываться при постановке опытов.

Впервые проведенное нами сравнительно-видовое изучение МП эритроцитов и лимфоцитов крови животных и человека выявила большую, относительно эритроцитов, величину ее у лимфоцитов коров (на 9£), свиней (на 18&) и кроликов (на 42^), тогда как у овец, морских свинок и человека Э5П эритроцитов, наоборот, выше (табл.1).

Таблица I

ЭЗД клеток кроей различных видов животных и человека

Виды животных ЭШ, мкм см В""1 с""1 Различия

и человек • эритроцитов лимфоцитов Э5П в %

Овцы 1.13 0,75 34

Морские свинки 1,00 а,81 19

Белые мыши 1,12 1,02 9 '

Коровы 0,81 0,89 -9

Свиньи 0,61 0,74 -18

Поросята 0,7? 0,78 близкие значения

Кролики 0,43 0,74 -42

Человек 0,85 0,71 17

Высокий заряд эритроцитов а сочетании со значительным их количеством и многообразием функций, в том числе высокой адсорб.

ционной способность», предопределяют контакт с чужеродными антигенами. Представляя сконцентрированные на поверхности биологически активные молекулы лимфоцитам, эритроциты оказывают разнонаправленное воздействие на иммунный ответ организма при различных физиологических и патологических состояниях. С подобных позиций эритроциты исследованы слабо, хотя и немногочислегеше работы Т.А.РубиноЯ (1962), Б.Т.Василенко (1903), А.Я.Ольшанского и со-авт. (1984), Н.В.Ильчзвича и соавт. (1986) и других подтверждают отот тезис. Выдвинутое наш научное положение о конкурентных по величине поверхностного электрического потенциала отношениях между эритроцитами и лимфоцитами крови за контакт с поступившими в кровь антигенами нашло полное подтверждение при изучении инфекционных и токсических воздействий на организм.

Моделирование инфекционного процесса осуществлялось нами воздействием, на различных животных возбудителей лихорадки Ку и хламидиоза, вакцинных пташов бруцелд. Кроме того, изучали пневмония и бронхит инфекционной природа у лодей. Столбнячный и бо-тулинические анатоксины, как моделирующие патогенность возбудителей столбняка и ботулизма, тем не менее рассматривались при анализе действия на организм химических агентов.

При иммунизации против бруцеллеза чувствительных к нему коров и обладающих конституциональным иммунитетом кроликов (Румянцев СЛ., 1984) обнаружены принципиальные различия в динамике изменения Э5Л эритроцитов в зависимости от сроков после введения антигена, объясняемые )¡а;,;л' видовыми особенностями их мембран. Несмотря на незначительные, и в большинстве сроков недостоверные, различия в динамике изменения Э£>П эритроцитов и лимфоцитов крови при воздействии различных штаммов, дисперсионный анализ позволил установить Елкяние сроков после иммунизации против

бруцеллеза на ЭФП, более выраженное из клеток крови - для лимфоцитов, из видов аивотных - у коров, а из штаммов бруцелд - для птам-ыа "82". Падение Э$П лимфоцитов т связываем с пряной активацией В- лимфоцитариого звена клеточного иммунитета (Голубикекий Е.П. и соавт., 1987), увеличением количества В-димфоцитов, а также с Т~ -лимфопенией (Белозеров E.G., Шаймарданов Н.К., 1989).

При лихорадке Ку большинство' изученных тестов показало относительно низкую информативность, что согласуется с литературой, где отмечается выраженный полиморфизм клиники лихорадки Ку, в отличие от других риккетсиозов (Лобан K.M., 1987). В этом плане определенную значимость имеет показатель Э5П эритроцитов крови, которая даже у иммунизированных животных была, как правило, ниже. Для эритроцитов это характерно во всех случаях, тогда как для лимфоцитов - при использовании« штамма "Грита".

Параллельный анализ динамики изменения Э$П эритроцитов к морфологии печени, лимфоузлов позволил установить влияние заряда эритроцитов на диапедез, До сих пор считалось, что основным фактором миграции клеток из кровеносного русла является изменение электрофизиологического состояния только стенок сосудов,

У людей при хроническом бронхита и острой пневмонии, помимо Э20 эритроцитов исследовали такие широко используемые в клинической лабораторной диагностике геморе оло гичэ с кие показатели, как фибриноген, сиаловые кислоты, СОЭ, коэффициент агрегации эритроцитов и геыатокрит до и после лечения. Эти заболевания в последние года протекают атипично и поиск критериев выздоровления при hjöc является актуальный (Шпак Б.Ю. н соавт., 1977). Дос -товерные различия при пневмонии выявлены только в уровне опаловых кислот, возраставшем при выздоровлении, а при бронхите не изменялся ни один из показателей. В то же время, изменения в Эй1

эритроцитов имели место b обоих случаях. При пневмонии это объяснимо снижением уровня сиаловых кислот в крови, а при бронхите можно предположить опосредованное влияние на ЭЙ] эритроцитов гепарина, содержание которого в крови возрастает (Федосеев Г.Б. и соавт., 197?). Таким образом, из всех тестов наиболее чувствительным оказался показатель ЭШ эритроцитов.

Из изученных фармако- токсических воздействий рассмотрим действие столбнячного и ботулинических анатоксинов, нового средства для санации животных - йодохлорина и высокотоксичного фос-фороргаиического соединения ДОС) с выраженным антихолинесте-разнш действием.

При столбняке и ботулизма рутинные клинико- лабораторные исследования не представляют ценности (Михайлов Б.В., 1980). Большинство показателей крови, например, претерпевают незначительные неспецифические изменения лииь при тяжелых формах ботулизма. Данные литературы (Иллютович A.D., 1962; Цыбуляк Г.Н., 1971; Крыжановский Г.Н., 1966; Zecks S., Sbeff U., 1964; Kama-ta i." и соавт., 1986; Uontecuoco С. и соавт., 1988 и др.) косвенно свидетельству»? о роли электрических явлений во взаимодействии столбнячного и ботулинических токсинов с клеткам;« и требуют дополнительных прямых исследований. Клетки Крови в этом плане интересны тем, что доказан (Цыбуляк Г.Н,, 1971; Михайлов В.В., 1980) гематогенный путь распространения данных токсинов m организму. Межвидовые различия в действии их на организм подт-. верждагат выдвинутое наш научное положение об участии эритроцит в иммунологических процессах: наименее чувствительными, в поряд ке. возрастания, являются кролики, свиньи, коровы, то есть живот ныэ с меньшим, относительно лимфоцитов крови, зарядом эритроцитов. Очевидно имеет значение и абсолэтная величина электрическо

ю заряда эритроцитов, так как наиболее чувствительные к этим токсинам животные (лопади) имевт и максимальный уровень Э® эритроцитов, наоборот, для ншшепез чувствительных животных (кролики) характерна и минимальная ЭФП эритроцитов.

В экспериментах со столбнячным и ботулиияческкми анатоксинами нами показано влияние кратности иммунизации и наличия адью-ванта на ЭЗД эритроцитов роликов, тогда как Э® лимфоцитов зависела только от кратности иммунизации. Данные факты позволяют интерпретировать механизм действия адьювантов как изменение степени участия эритроцитов в иммунологических процессах. Варьирование сроками введения анатоксинов но изменяло Э® клеток.

Наши данные являют собой дальнейшее логическое развитие и конкретизацию концепции Р.Н.Крыхановского (1966) о периферических барьерных механизмах, эацищаицих нервну» и мозговую ткани от проникновения, например, столбнячного токсина и определяющих конституциональный иммунитет к нему. Как уже отмечалось, имеет место межвидовая корреляция ЭФП эритроцитов с чувствительность») к столбняку.

При разработка нормативов на безвредность нового средства для санации - йодохлорша - на»,« изучен ряд гематологических показателей при аэрозольном воздействии на кроликов к телят, а также после выпаивания его кроликам.

При выпаивании Р.одохлорина в дозе КЗ мл/кг кроликам из всех показателей достоверно изменялось только количество лейкоцитов через I сутки и эритроцитов - через 10 суток. г

Аэрозольное многократное воздействие на телят в дозе 15 ¡.п/ьР увеличивало лишь количество лоПкоцитов при 5-кратной обработке и средних.значений ЭФП эритроцитов - при 3- и 5-кратных обработках, причем достоверность различий была вше у неотмытых

клеток, в сравнении с отмытыми. Этот факт, а также стабильность белкового состава плазмы, показывают влияние на Э5Л эритроцитов не только адсорбции определенных веществ на поверхности, но, очевидно, и структурных ее изменений.

Аэрозольная обработка кроликов также не выявила изменений в показателях, за исключением Э5П эритроцитов и лимфоцитов крови.

Изложенное свидетельствует, что наиболее чувствительными к действию йодохлорина оказались тесты количества лейкоцитов (при выпаивании) и Э5Л эритроцитов и лимфоцитов 1фови при обработке аэрозолем.

В экспериментах по воздействтз высокотоксичного ЮС анти-холинестеразного действия на ЭФП эритроцитов свиней и поросят оно использовалось как непосредственно, так и в сочетании с предварительным воздействием профилактических рецептур А (перорально) и В (подкожно). Кроме Э5Л эритроцитов определялись и другие показатели. Специфический для $0С тест - активность ацетилхолинэсте-раэн (АХЭ) крови - резко снижался уже на 1-е сутки во всех случаях и в более поздние сроки был ниже исходного уровня, хотя и наблюдалась тенденция к его восстановлению.

При сочотании 50С с рецептурой А у овец, помимо АХЭ, изменялась лишь Э1П эритроцитов (возрастала на 3- и сутки). Комбинация ЙОС с рецептурой Б увеличивала общий белок, щелочной резерв крови и Э$П эритроцитов через I сутки после воздействия. Без профилактики ®)С снижало резервную щелочность на 3- 7-е сутки, а картина изменений 3£П эритроцитов била аналогичной таковой при воздействии ¿СС с рецептурой Б, однако достоверные различия отмечались лизь на 1 и 30-е сутки.

Сочетание 40С с рецептурой А в опытах на поросятах измена-

ло показатели в более поздние сроки после воздействия: общий белок возрастал на 30-е сутки, гемоглобин - на 45-è. ЭЗП эритроцитов увеличивалась также через I сутки и била все время (за исключением 10-х суток) вше исходного значения.

АХЭ является основной мишеныз для ЮС и ее структура чрезвычайно схожа для эритроцитов и головного мозга. В крови она локализована в основном на наружной поверхности эритроци-тарной мембраны. Это гликопротзид, в состав которого, наряду с другими компонентами, входят сиалоше кислоты (Черницкий Е.А., Воробей A.B., 1981), определяющие, как отмечалось, электрический заряд поверхности клеток. Эти и другие факты логически подводят нас к предположения п связи активности АХЭ и Э2П эритроцитов, а следовательно роли поверхностных зарядов в мембрано-тропном эффекте ФОС. Представленные результаты подтверждают изложенные теоретические предпосылки. Выявлены шсока/j положительная корреляция Э31 эритроцитов с активностью АХЭ при воздействии ЮС (г - 0,72; р<0,05) и ее отсутствие при сочетании 50С с антидотнмми рецептурами А и В. Таким образом, тест корреляции активности АХЭ с ЭФП эритроцитов повышает специфичность собственно показателя активности АХЭ. Снижение ее активности отмечалось во всех случаях, а при сочетании îCC с рецептурой Б в огштзх на овцах угнетение активности даже было сильнее, чем при воздействии только 3S0C. Специфичность ЭШ эритроцитов к_воздействию ЗСС подтверждается тем, что все погибяие в опыте животные (4 овцы и I поросенок) имели в интактнсм cocïb-янии минимальную, п сравнении с другими янзотннми, ЭШ эрптро-цитов^

Обобщая результаты исследований по инфекционным и фарма-ко- токсическим воздействиям, отметим, что в большинстве случа-

ев (воздействие 50С, аэрозоля йодохлорина, ферментных кормовых добавок, возбудителей лихорадки Ку-и хламидиоэа, транспортном стрессе, а также при бронхите и пневмонии) выявлена высокая чувствительность Э® эритроцитов к лимфоцитов крова в сравнении с другими показателями.

При термическом ожоге, иммунизации против бруцеллеза и лихорадки Ку, воздействии микотоксина патулина, выпаивании йодохлорина изменения ЭШ клеток крови, как и других гематологических показателей, били незначительными, либо отсутствовали.

Б предстазленном материала 3=Ш эритроцитов рассматривает, ся как самостоятельный показатель и несет определенную информативную нагрузку. Однако оценка одиночных показателей не перекрывает всего потенциала воздействий на организм.и вопрос о.взаимосвязях между признаками, характеризующими его жизнедеятель-

4

ность, является основополагающим как в физиологии, так и в патофизиология.- С этих позиций коэффициент корреляции признаков можно рассматривать как более адекватный показатель состояния организма. Применительно к электрокинетическим свойствам клеток крови мы не встретили литературы, где они рассматривались бы с позиций "системного" подхода. Наши данные по корреляции в обобщенном и биометрически обработанном виде отражены в таблицах 2, 3 и 4.

Перспективность коэффициента корреляции как теста наглядно демонстрируется анализом коррелятивных отношений ЭФП эритроцитов и лимфоцитов крови с титром специфических антител при лихорадке Ку у шрских свинок, иммунизации против бруцеллеза коров и кроликов, а также воздействии столбнячного и ботулинических анатоксинов на кроликов (табл. 2). Подтверждается положение о протек-тивном участии эритроцитов в иммунном процыссе. У кроликов выявлена отрицательная корреляция титра антител с ЭШ эритроцитов,

Таблица 2

Коэффициенты корреляции Э2П с другими характеристиками эритроцитов человека и животных при различных воздействиях

Виды животных и человек Воздействуйте агенты Количество соэ Геи а-то-крит Коэфф. агрегации Осмог. резистентность

I 2 3 4 5 6 7

Белые Лихорадка Ку 0,35 -0,51 итии (заражение) 0,21 -0,30

Лихорадка Ку -0,40 (заражение) -0,15

S0C -0,40

0,72х

■ 2ЮС+А -0.40

Овцы -0,94х

0,17

Цитрат • -0,41

Антикоа- на1Р11Я ,

гУлпнта Гепа- 1оТ41

рин -0,37

Морские Лихорадка Ку 0,30 свинки (иммунизация) 0,49

Цитрат

,, , натрия Коро- Антикоа- _

вы гулянты Гепарин

-0,57х Л) ,21

-0,57 -0,55

Телята Йодохлорин

0,35 0,51

Продолжение табл. 2

.....1

Бычки

Кормовые добавки 0,11-0,56х

0.30

Термический ожог

0,51 -0,67 0,30 -0,42

Свиньи

Антикоагулянты

Цитрат натрия

-0,60х -0,10

Гепарин

-0,60х —0,57*

ЭДТА

-0,60х -0,45

0,99х 0,17

20С+А

Поросята

0,47 0,36

Иымуноыо-■ дуляторы

0.47 0,49

Бронхит

Человек

0,83х 0,34

-0.93х -0,13

гО.23 -0,15

0.75х 0,29

Пневмония

0.75 0,43

-0,86х -0,18 -0,47 ^0,51

0.61х 0,14

0,87х 0,42

1,00х 0,51

Бедно Ыикотокснн 0Т56 крысы патулин 0,43

Примечание: в тасднтеле - величина коэффициента корреляции .в "норме", в знаменателе - при воздействиях; х - р< 0,05- 0,01

Таблица 3

Коэффициенты корреляции ЭФП эритроцитов с биохимическими показа-

телями крови человека и животных при различных воздействиях

Виды животных и Воздействующие агента Гемо- Сиал. Резерв, щелочность Общий Альбу- Фракции глобулинов

человек глобин к-ти белок мины » 1

Лих-ка Ку (зараж.) 0,24

сос -0,82х 0,18 -0,81х 0,80

Овцы ФОС+А -0,82х -0,21 -0,81х -0,93х

ОСОБ 82х 0,86 -0,81х -0,42

Телята Йодохлорин -0,40 0,26 0,29 0,59х 0,29 0,21 0,31 0,25 0,35 0,44 0,27 0,56

Бычки Кормовые добавки -0,50 0,67х

Йодохлорин лики -0,43 -0,52 0,12 0,32 0,30 0,32 0,27 0,16 -0,03 0,08 0,39 0,01

Термичес- 0,93х 0,79х 0,58

Поро- кий ого г 0,35 0,23 0,15

сята 5ЮС+А -0,76х 0,95х . 0,54 0,61х 0,61х 0,39

Белые Микотоксин -0,57

крысы патулин О,67х-О,38

Чело- Бронхит 0,91х ■ -0,23 0,92х 0,31 г

-0,56 0,34

Примечание: в числителе - величина коэффициента корреляции в "норме", в знаменателе - при воздействии; х - р<0,05- 0,01

превышающая по величине таковую с ЭФП лимфоцитов при иммунизации столбнячным анатоксином и вакцинным штаммом бруцелл, тогда как у морских свинок и у коров при иммунизации, соответственно, против лихорадки Ку и бруцеллеза, корреляция титра специфических антител отмечалась только с ЭФЯ лимфоцитов крови.

Числовые значения и интерпретация коррелятивных отношений исследованных показателей в литературе противоречива. С целью выявления определенных закономерностей мы обьеднаили человека и животных по силе воздействия, оказанного на них и, соответственно, по их состоянию, в следующие группы:

1. "норма" (в иаиих опытах это фок и контроль);

2. "состояние физиологической адаптации" (это животные, подвергшиеся иммунизации, воздействию йодохлорина, им-муномодулятороэ, кормления с использованием ферментных добавок);

3. "неудовлетворительная адаптация" и патология (животные после интоксикации £0С,.микотохсиноы патулином, генса-хлорцнклогексаном, заражения возбудителем лихорадки Ку, а такяе люди, больше бронхитом и пневмонией).

В большинстве случаев, особенно это наглядно продемонстрировано в табл. 3, связи Э*Л эритроцитов с гематологическими показателями в "норме" незначительны и возрастают при воздействиях на уровне функциональных нагрузок, вызывающих состояние "физиологической адаптации". В ряде случаев наблюдается формирование новых взаимосвязей при снижении уровня прежних. Переход из этого состояния с последующее, характеризуемое "утяжелением" патологического процесса (3-я груша), соответствует распаду большинства коррелятивных отношений олектрофоретической подвижности с другими показателями.

и

Таблица 4

Коэффициенты корреляции ЭШ эритроцитов и лимфоцитов с иммунологическими показателями крови животных при воздействии различных агентов

Виды Воздействующие агенты Клетки крови Количество Титр антител

ЕИВОТ— ных лейкоцитов лимсбо-цитоп Т-кле-ток В-кле-ток

[оровы Бруцеллез эр-ты 0 0,17

(иммунизация) лимф_та 0 0,85

Бруцеллез (иммунизация) эр-ты 0 -0,99х

1ИМф~ТН 0 0,98х

йгт<т*лптуин эр-ты 0,03 0,33 0,29 0,26 0,16 0,18

Кролики лимф-ты 0,46 0,38 0,13 0,22 0,19 0,15

Столбнячный эр-ты 0 -0,53х

анатоксин

лимф-ты

О

Вотулиничес- лиИ1 кие анатоксины

0,15 -0,21

0.45 0,48

-0,43 0,32

0,26 О

0,38

•~о~Т1Т 0,12

эр-ты

Поро- йммуноыо- _

сята дуляторы лимф-ты

0,13

0,53 0,71х

О

0,25

-0,45

эр-ты

Морские Лихорадка Ку _

свинки (иммунизация)лимф-ты

0,35

0,41 0,45

ОЖ 0,21

0,55х

Примечание; в числителе - величина коэффициента корреляции в "норме", в знаменателе'- при воздействии; х - р<0,05- 0,01

Несоответствие выявленным закономерностям результатов опытов на телятах и поросятах, подсвинках объясняются нами незрелостью адаптационных механизмов у молодых особей.

Таким образом, на примере электрофоретической подвижности клеток крови и их взаимосвязи с другими гематологическими показателями мы продемонстрировали наличие ГШЕОНИНЕЗА, то есть способности организма перестраивать свои функциональные связи, их уровень в соответствии с силой воздействия.

Представленный материал позволяет оценить иммунобиологическое значение электрокинетических свойств клеток крови в формировании защитной реакции организма на воздействие.

« ВЫВОДЫ

1. Комплексные исследования кровц человека и животных с привлечением широкого арсенала методических приемов позволили оценить степень взаимосвязи параметра злектрофоретической под- . вижности (ЭОЛ) клеток крови с ее физико- химическими и иммунологическими показателями в норме- патологии. Невысокая в норме корреляция, пр^фиэиологических нагрузках значительно возрастала, тогда как патологические состояния характеризовались снижением уровня этих связей.

2. Разработан новый способ определения функционального состояния организма, основанный на выявлении нарушения коррелятивных отношений между ЭФП клеток крови с одной стороны и отдельными гематологическими и биохимическими показателями - с другой. Способ отличается высокой, в сравнении с оценкой одиночных показателей, чувствительностью и может быть использован при изучении механизмов инфекционных и фармако- токсических процессов, л

а также в диагностике. .

3. Электрофорезом клеток крови и перитонеальных макрофагов определены степень выраженности и другие особенности ответа организма животных на разные штаммы возбудителей хламидиоза, бруцеллеза и лихорадки Ку, а также сероваров ботулотоксинов. В частности показано, чтс/лроцесс адсорбции хлашдий штамма "250"15 макрофагами длится I сутки, а штамма "Ростиново-70" - завершается в течение 3 часов. При этом в I случае ЭФП макрофагов в большей степени коррелировала с их фагоцитарню/л свойствами, а во 2-ом - с адгезивными.

4. При вакцинации различными штаммами бруцелл корреляция титра специфических антител с ЭЗП эритроцитов, в определенной степени характеризующая участие последних в иммунологических процесссах, отсутствовача у коров и била достоверно отрицательной у кроликов. Э2П лимфоцитов крови положительно коррелировала с титром антител у обоих видов животных.

5. Выявлены различия в динамике изменения Э$П Т- и В- популяций лимфоцитов крови новорожденных телят прфиспепсии. 3*il Т- лимфоцитов снижалась уже на 1-е сутки жизни, тогда-как сдвиги в ЭФП у В-клеток имели wie сто только на 3-й сутки. На 10-е сутки жизни телят уровень Э2Я обоих типов клеток нормализовался. Отмеченные изменения коррелировали с уровнем альбуминов, циркулирующих иммунных комплексов, резервной щелочностью и активностью нейтрофилов в крови. •

6. Клеточный электрофорез, помимо собственного значения в диагностик«, иозподяэг совершенствовать и другие метода оценки патологических процессов, а именно гибридомной технологии, изготовления оритроцитарных диагностикумов и культивирования клеток. В плане оптимизации тсхнологическог^процесса изготовления эри-

троцитарных диагностикумов установлены большая эффективность

фиксации клеток три-(оксикетил)гфзсфином и акролеином в сравнении с формалином, а такс зависимость Э5П эритроцитов от длительности инкубации с сенсктином и температуры. Наличие положительной корреляции данного показателя с титром специфических антител используется при подборе адекватных режимов сенсибилизации.

7. При воздействии битулинических анатоксинов и возбудителя лихорадки Ку ЭЭД суспензии лимфоцитов крови в большей степени отражала фуыаглонгльное состояние В-популяции клеток, чем

количественное соотношение Т- и В- популяций. Дисперсионным анализом показано влияние кратности иммунизации столбнячным анатоксином на Э2П эритроцитов к лимфоцитов крови. Титр специфических антител коррелирован с Э5П лимфоцитов только при использовании адьювялта, что позволяет увязывать изменения 32П с фуша-иональпымн сдвигам;! в В- популяции.

8. При токсическом воздействии фосборорганическогс]соедк-нения (20С) отмечается гибель жнвотних с исходно минимальными урОЕнши Э£П эритроцитов. Для КС-интоксикации характерна корреляция ЭШ эритроцитов с уровнем ацетилхилинэстераэы в крови, отсутствующая в норме и при воздействии КС в. сочетании с анти--дотами.

9. Оценка эффекта действия нового средства для общей санации - йодохлорина - на организм животных с помощью клеточного электрофореза и другими методами выявила большую чувствительность теста ЭФП. Установлены особенности действия данного препарата в аэрозольной фор:'.о и прл его ешаисонки. В I-;.? случао имели место функциональные сдвиги в состоянии эритроцитов и лимфоцитов крови, в во 2-м - доминировали их количественные изменения.

10. Видовые особенности электрокинетического поведения клеток крови человека и животных в норма и в динамике развития инфекционных и фармако-токсических процессов позволяют рассматривать различия в ЭШ эритроцитоз и лимфоцитов как один из факторов конституционального иммунитета.

ПРАКТИЧЕСКИЕ Р Е К С U Е Н Д Л Ц И II

1. По результатам комплексных исследований электрофорети-ческой подвижности клеток крови и перитснеадьных макрофагов, а также гематологических, биохимических, иммунологических, серологических и гистологических показателей при различных видах ин— фекционных заболеваний, для применения в учебной, научно- исследовательской и лабораторной практике рекомендуется :.:етодическэе пособие "Клеточный электрофорез при изучении инфекционной патологии сельскохозяйственных животных" (Казань, 1992), одобренное отделением ветеринарной медицины ВАСХНИД от 24.С5.92 г.

2. Материалы по клеточному электрофорезу при воздействии на организм животных нового средства для санации - йодохлорина, позволившие оценить его безвредность, пислуккли основой разработки нормативно- технического документа "Наставление по применению препарата йодохлошна для санации воздушной среды и организма животных", утвержденного ГУВ ЮС СССР от 31.10.91 г.

3. Предложен новый способ определения функционального состояния организма по характеристике степени скоординированное™ связей электрофоретической подвижности клеток крови с другими физико- химическими ее показателями, отличавшийся большей, в сравнении с оценкой одиночных показателей, чувствительность».

4. Экспешкентальнс|знявленная роль поверхностного потенциала клеток крови в конституциональном иммунитете животных к различным гематогенно воздействующим агентам позволяет по новому ин-

терпретирОЕать накопленный в литературе иатергал и осуществлять адекватный подбор биообьектов для исследовательской работы.

5, Клеточный электрофорез, при наличии собственного диагностического потенциала, позволяет совершенствовать и другие методы диагностики патологических процессов, а именно гибридоы-ной технологии, изготовления эритроцитарных диагностикумов и культивирования клеток. Так, метод рекомендуется для целенаправленного поиска новых, более эффективных химических соединений, используемых при изготовлении эритроцитарных диагностикумов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

«

1. Гильмутдинов Р.Я., Ахыеров Д.Ш., Юсупов Р.Х., Галиул-лин А.К, Биофизическая характеристика состояния эритроцитов на отдельных этапах получения сибиреязвенных диагностикумов, // Тез. докл. 12 Пленар. заседания Межведоы. научно- иетод. комиссия по борьбе с сиб. язвой "Актуал. вопросы профилактики скб. • язвы". - М., 1986. - С. 45- 46.

2. Ситдиков Р.И., Гильмутдинов Р.Я., Юсупов Р.Х. и др.

Иммунологическая характеристика растворимого .антигена риккетсий

Бернета. // Тез. докл. Респ. научно- производ. конф. "Достижения ветеринарной и зоотехнической наук - в животноводство". -- Казань, 1988.- С.28.

3. Гильмутдинов Р.й., Юсупов Р.Х., Госманов Р.Г., Ситдиков Р.И. Состояние лимфоцитов при иммунизации животных антигеном возбудителя лихорадки Ку по данным клеточного электрофореза. // Мат. Всес. конф. "Эпизоотол., эпидеююл., средства диагностики, терапии и специф. профилактики инфекц. болезней, об" щих для человека и животных". - Львов, 1988. - С.434,

4. Виноградова В.Й., Гильмутдинов Р.Я. Некоторые показатели резистентности телят при желудочно- кишечной патологии. // Тез. докл. Респ. научно- производ. конф. "Теорет. и практ.. вопросы ветеринарии и зоотехнии". - Казань, 1989. - С.84- 86.

5. Гильмутдинов Р.Я. Роль электрического заряда эрктро-;итов в фошиоованин показателя СОЭ. // Тез, докл. Респ. науч-ю- пооизвод. конф. "Теотхзт. и практ. вопросы ветеринарии и юотехнии". - Казань, 1989. - C.8G- 87.

6. Гильмутдинов Р.Я., Хаертынов С.Х., Матвеева Л.И. (лектрофоретическая подвижность культур клеток, контаминиро-¡енных микроорганизмами. // Кежвузов. сб. науч.. трудов "Акту-1Л. вопросы эпизоотологии и меры борьбы с туберкулезом живот-шх". - Казань, 1989. - С.74- 76.

7. Шафикова P.A., Равилов А.З., Гильмутдинов Р.Я. Изме-¡ение биологических и физико- химических свойств перитонеаль-гах макрофагов белых мыией послеввведения хламидай. // Межвузов. сб. науч. трудов "Актуал. вопросы эпизоотологии и меры 5орьбы с тубетжулезом животных". - Казань, 1960. - С.92- 99.

8. Гильмутдинов Р.Я., Салахутдиков P.A. Влияние стрес- . ;овых факторов на поверхностный заряд клеток крови морских :вннок. // Тез. докл. Всес. симл. "Актуал. вопросы диагностики анфекц. болезней лаб. животных, разработка и производство современных тест- систем". - М,, 1989. - С. 8- 9.

9. Салахутдинов P.A., Гильмутдинов Р.Я., Ситдиков Р.И. Специфические и неспецифические механизмы защиты у морских связок на фоне трансповткого стресса. // Тез. докл. Всес.. симл. "Актуал. воптэосы диагностики инфекц. болезней лаб. животных, разработка и производство тест- систем". - М., I9S9. - С.18-19. _

10. Гильмутдинов Р.Я. Клеточный электрофорез а изучении инфекционной патологии животных. // Тез. докл. научно- практ. Регион, конф. "Электрофорез клетки"., - Уфа, 1989. - С.39- 40.

11. Гильмутдинов Р.Я. Гематологические показатели у животных при лихорадке Ку. // Мат. 4 Всес. конф. "Актуал. вопросы эпидемиол., диагностики, лечения и профилактики риккетсио-зов\ - М., 1989. - С.12- 15.

12. Гильмутдинов Р.Я., Шоиокин В.А, Электрофоретическая подвижность и ультраструктура кммунокомлетентных клеток лрк лихорадке Ку. // Мат. 4 Всес. конф. "Актуал. вопросы опидемиол., диагностики, лечения и профилактики риккетсиозов". - Ii., 1989.-

C.I5- 17.

13. Гильмугди-юв Р.Я., Шафикова P.A. Оценка функционального состояния макрофагов при хламидийной инфекции методом клеточного электрофореза. // Докл. ВАСХШЛ, 1989, }fö, С.З&- 37.

14. Гильмутдинов Р.Я., Галиуллин А.К. Оптимизация режимов изготовления эритроцитарных диагностикумов по данным клеточного электрофореза. // Тез. докл. Всес. научно- техн. конф. "Соврем, пробл. иммунологии, биотехнологии, ген. и клеточн. инженерии в вет. недкцине". - Li., 1990. - С. 201- 202.

15. ГкльмутдиноЕ Р.Я., Шафикова P.A. Электрофорез клеток крови при хлачидийной инфекции. // Тез. докл. Всес. научно--техн. конф. "Соврем, пробл. иммунологии, биотехнологии, ген. и клеточк. инженерии в вот. медицине". -М., 1990. - С. 202- 204.

16. Титов В.В., Гильмутдинов Р.Я., Семина Е.И., Хабибул-лин Т.Н. Морфологические и функциональные изменения в организме животных при использовании ферментных добавок в корма. // Тез. докл. Респ. научно- производ. конф. "Достижения Казанской вет. школы - а практику животноводства". - Казань, 1991. - С.251.

17. Гильмутдинов Р.Я., Равилов А.З., Угрюмова-B.C., Герасимов В.В.- Возможности применения клеточного электрофореза при оценке нобых хкки»терапевтических средств. // Тез. докл. Всес. науч. конф. "Совершенствование методов гос. контроля Еет. препаратов". IS9I. - С,225- 226.

18. Гильмутдинов Р.Я., Равилов А.З., Титов В.В. Клеточный электрофорез при изучении инфекционной патологии сельскохозяйственных животных. - Казань, 1992. - 96с.

19. Гильмутдинов Р.Я. Температурный фактор при электрокинетических исследованиях клеток животных. // Тез. докл. Респ. конф. по вопр. ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 1992.- С. 19.

20. Гильмутдинов Р.Я., Папуниди К.Х., Адагамова Г.А. Роль мембранных элсктрокккзтических эффектов в патогенезе ботулики-ческой интоксикации. // Тез. до!сл. Респ. конф. по вопр. ветеринарии и зоотехнии. - Казань, 1992. - С. 118.

21. Гильмутдинов Р.Я., Папуниди К.Х., Титов В.В. Электрофорез клеток кров« в фармако- токсикологических исследованиях.

// Тез. докл. Рос. иауч. конф. "Создание лекарственных средств". - Купавна-М., 1592 ~ - С.215- 216.

22. Курбанот H.A., Хисматулина H.A., Накачен И., Юсупов Р.Х., Гильмутдинов Р.Я. Изучение схем иммунизации при лихорадке Ку. // Тез. докл. I съезда иммунологов России. - Новосибирск, 1992. - С.263.

23. Гильмутдинов Р.Я. Влияние степени контаминации мико-плазмами на электрофоретическую подвижность клеток ГШЭС. // Цитология, 1992, Т.34, £9, С. 62.

24. Гильмутдинов Р.Я., Сергеев В.А., Валимухаметова Д.А. Электрофоретическая подвижность эритроцитов и другие геморео-логические показатели у больных острой пневмонией и хроническим бронхитом до и после лечения. // Гематология и трансфузиология, 1993, )f3, С. 42- 43.

25. Гильмутдинов Р.Я. . Баранов В.А., Медетханов Ф.А., Аланов H.H. Электрофоретическая подвижность эритроцитов крови свиней пси термическом ожоге кожи. // Ыежвузов. сб. науч. трудов "Рациональные методы профилактики, диагностики и терапия незаразных болезней животных". - Казань. 1993. - С. 39- 43.

26. Гильмутдинов Р.Я., Ситдиков Р.И. К биофизической интерпретации механизма диопедеза при лихорадке Ку. // Казанск. мед. журнал, 1993, Jfö, С.37С- 371. '

27. Гильмутдинов Р.Я., Титов В.В., Ситдиков Р.И. Системный морфофункциональный подход при анализе инфекционных и фармакологических воздействий. // Мат. Всерос. научно- метод, конф'. "Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней с.-х. животных". - Воронеж, 1993. - С.36.

28. Гильмутдинов Р.Я. Коррелятивные связи гематологических показателей в оценке адаптационных возможностей организма. // Тез. долл. междунар. симп. "Пробл. саногенного и патогенного эффектов экологических воздействий на внутренние среду организма". -Бишкек, 1993. - С.47.

29. Гильмутдинов Р.Я. Электрокинетические свойства клеток используемых при получении гибридом. //Билл. Всерос. НИИ эиспер. ветеринарии, 1994 (в печати).

30. Гильыутдинов Р.Я., В&пимухаметова Д.А., Новошишв Г. и др. Способ прогнозирования терапевтической эффективности биологически активных соединений. / положительное .решение о вь даче патента на изобретение № 5042298 от 14.03,94 г.

31. Гильмутдинов Р.Я., Палуниди К.Х., Адагамова Г.А. Электро кинетические исследования клеток крови в процессе икму! ного ответа на столбнячный анатоксин. // Межвузов. сб. науч. трудов " Физиологические аспекты зоотехнологии и ветеринавки". • Казань, 1994. - в печати.

32. Гильмутдинов Р.Я., Юсупов Р.Х,, Ситдиков Р.И. Дина, мика морфофункционадьных изменений в организме животных, иммунизированных против лихорадки Ку. // Межвузов, сб. науч. трудов "Вопросы инфекц. патологии с.-х. животных". - Казань, 199' - в печати.

• 33. Юсупов Р.Х., Гильмутдинов Р.Я., Курбанова И.А., Го с-ыанов Р.Г. Иммунологические и биофизические показатели крови животных при иммунизации антигеном возбудителя лихорадки Ку. , Межвузов. сб. науч. трудов "Вопросы инфекц. патологии с.-х. животных". •• Казань, 1994. - в печати.

Заказ !Р08 . Подписано в печать 09.03 . 94. Формат

Печать офсетная. 2 п.д. Тиваж 100 экз.

Участок офсетной печати КВИ. Казань- 420074. Ветинституг