Автореферат и диссертация по медицине (14.01.21) на тему:Экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP у больных множественной миеломой в процессе интенсивной терапии и аутотрансплантации
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.01.21
Автореферат диссертации по медицине на тему Экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP у больных множественной миеломой в процессе интенсивной терапии и аутотрансплантации
На правах рукописи
4В5А■
Гапонова Татьяна Владимировна
Экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP у больных множественной миеломой в процессе интенсивной терапии и аутотрансплантации.
14.01.21 - Гематология и переливание крови
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
2 9 СЕН 2011
Москва 2011
4854791
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении Гематологический научный центр Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.
Научные руководители:
Доктор медицинских наук Менделеева Лариса Павловна Кандидат биологических наук Мисюрин Андрей Витальевич
Официальные оппоненты:
Доктор медицинских наук, профессор А.А.Масчан Доктор медицинских наук, профессор А.К. Голенков
Ведущее научное учреждение:
ФГУ Московский Научно-Исследовательский Онкологический институт им. П.А.Герцена Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.
Защита состоится«28» сентября 2011 г в 14 часов.
на заседании Диссертационного Совета Д 208.135.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении Гематологический научный центр Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации по адресу: 125167, Москва, Ново-Зыковский проезд, д.4.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке при Федеральном государственном бюджетном учреждении Гематологический научный центр Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.
Автореферат разослан «_» августа 2011г.
Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат медицинских наук
Е.Е.Зыбунова
Общая характеристика работы.
Актуальность темы.
Внедрение в клиническую практику программ высокодозной химиотерапии множественной миеломы (ММ) в конце 80-х гг XX века позволило значительно оптимизировать результаты лечения. Так, интенсивная индукция на ранних этапах лечения с последующей высокодозной консолидацией, включающей трансплантацию аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто ТГСК), обеспечивает достижение не только клинико-гематологической, но и иммунохимической ремиссии у значительного числа пациентов. Полные ремиссии (ПР) достигаются у 24-75% больных ММ, получающих соответствующую терапию, достаточный опухолевый ответ, включающий полные и частичные ремиссии - у 75- 95%. При этом медиана сохранения стойкого противоопухолевого эффекта после аутотрансплантации составляет 24-35 мес., а 5-летний период без признаков прогрессии заболевания переживают от 10 до 30% больных.[Bariogie В., Jagannath S., Desican K.R. Total Therapy with Tandem Transplants for Newly Diagnsed Multiple Myeloma. Blood 1999; 93:55-65]
Следующий, качественно новый этап в лечении ММ обусловлен внедрением в клиническую практику таких лекарственных препаратов, как ингибиторы протеасом (бортезомиб) и иммуномодуляторы (талидомид, леналидомид). Сочетание препаратов, воздействующих на молекулярные механизмы миеломной клетки, дальнейшая высокодозная консолидация позволяют достичь существенного улучшения результатов лечения. Так, применение комплексного леченя по программе «Тотальная терапия - III» с включением в схему индукции бортезомиба и талидомида/леналидамида позволило группе исследователей из Университетского госпиталя Арканзаса добиться 56% безрецидивной выживаемости в течение 2-х лет после завершения лечения. Тем не менее, ММ является пока еще биологически неизлечимым заболеванием. Резистентность опухолевого процесса к адекватному терапевтическому воздействию, некурабельный рецидив болезни, выход опухоли из-под химиотерапевтического контроля - все это лежит в основе так называемых неудач в лечении.
В основе опухолевого роста и формирования механизмов лекарственной резистентности, как правило, лежит нестабильность генома опухоли. [Burington В., Barlogie В., Zhan F., et al. Tumor cell Gene expression changes following Short-term in vivo exposure to single agent chemotherapeutics are related to survival in Multipal Myeloma. Clin Cancer Res 2008; 14(15). 4821 - 4829] Последовательность случайных генетических событий в опухолевых клетках, в совокупности приводящая к нарушению процессов дифференцировки клеток и бесконтрольному делению вследствие блокирования апоптоза, обусловливает прогрессирующее течение опухолевого заболевания. В регуляции механизма программированной гибели клеток принимает участие большое число как апоптотических, так и антиапоптотических белков и, в конечном счете, их соотношение предопределяет: будет клетка жить или norH6iicT.[Lcilst М., JaattelS М. Four deaths and funeral: from caspases to alternative mechanisms. Nature Reviews Molecular Cell Biology 2001; 2: 589-598]
В начале 1990-х годов в злокачественно трансформированных гемопоэтических клетках была обнаружена аномальная экспрессия ряда генов, получивших общее название С/Т (cancer/testis), так как в норме их транскрипция присуща главным образом клеткам семенников. [Valeria С. С. Andrade, Vettore А. L., et al. Prognostic impact of cancer/testis antigen expression in advanced stage multiple myeloma patients. Cancer Immunity 2008; 8: 2-10] Одним из представителей данного семейства, часто экспрессирующимся при онкогематологических заболеваниях, является ген PRAME, обладающий антиапоптотическим действием и являющийся устойчивым коингибитором ядерных рецепторов семейства RAR. [Matsushita М., Yamazaki R., Ikeda Н. et al. Preferentally expressed antigen of Melanoma (PRAME) in the development of diagnostic and therapeutic metods for hematological malignacies. Leukemia&Lymphoma 2003; 44(3): 439-444]
Кроме того, известен целый ряд так называемых опухолеассоциированных генов, принимающих участие в механизмах регулирования клеточного цикла и клеточной дифференцировки. Среди них отмечен ген WT1, вследствие мутации приобретающий свойства доминантного онкогена. [Hatta Y, Takeuchi Т, Saitoh Т et
al. WT1 expression level and clinical factors in multiple myeloma. J Exp Clin Cancer Res 2005,24: 595-599]
Особый интерес представляет также ген-ингибитор апоптоза XIAP, являющийся наиболее мощным ингибитором каспаз из всего семейства ингибиторов апоптоза IAP. Экспрессия XIAP определяется во всех клетках здоровых людей, гиперэкспрессия гена часто обнаруживается в опухолевых клетках. [Silke J., Ekert P.G., Day C.L. et al. Direct inhibitor of caspase 3 is dispensable for the anti-apoptotic activity of XIAP. The EMBO Jornal. 2001; 20(12): 3114-3123]
В течение последнего времени был опубликован ряд работ, показавших возможность использования указанных генов в качестве маркеров опухолевого клона при острых лейкозах. В некоторых исследованиях было также обнаружено, что гиперэкспрессия FRAME, WTI и XIAP непосредственно связана с резистентностью опухоли к проводимой химиотерапии. Учитывая достаточно частую экспрессию указанных генов при ММ (от 30% до 60% по литературным данным), несомненный интерес представляет изучение роли указанных генов в формировании опухолевого фенотипа и их возможное прогностическое значение в определении особенностей течения заболевания и чувствительности ММ к проводимому лечению.
Цель исследования - определить экспрессию генов FRAME, WTI и XIAP у больных множественной миеломой в дебюте заболевания и в процессе интенсивной терапии как факторов прогноза течения заболевания.
Задачи исследования:
1. Изучить экспрессию FRAME, WT1 и XIAP у первичных больных множественной миеломой.
2. Проанализировать изменение экспрессии генов на фоне индукционной химиотерапии по схеме VAD и терапии биологическими препаратами направленного действия (бортезомиб).
3. Проанализировать экспрессию генов на фоне высокодозной консолидации с последующей аутотрансплантацией.
4. Выявить закономерности экспрессии генов FRAME, WT1 и XIАР, определяющие результаты лечения цитостатическими и биологическими препаратами направленного действия (ингибитор протеасом).
5. Определить параметры экспрессии опухолеассоциированных генов, влияющие на безрецидивную выживаемость после аутотрансплантации.
Научная новизна.
Установлена частота экспрессии и гиперэкспрессии опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIАР у первичных больных множественной миеломой. Выявлена корреляция между выраженностью экспрессии опухолеассоциированных генов и достижением ответа на индукционную терапию.
Выявлено снижение уровней экспрессии генов PRAME и WTI по мере уменьшения опухолевой массы в результате индукционной полихимиотерапии.
Обнаружено повышение уровня экспрессии гена-ингибитора апоптоза XIAP у больных множественной миеломой во время проведения индукционной химиотерапии по схеме VAD, в большей степени у пациентов с резистентной формой заболевания.
Отмечено, что исходная гиперэкспрессия XIAP не является фактором неблагоприятного прогноза в отношении проведения индукционной терапии бортезомибом, в то время как при стандартной химиотерапии гиперэкспрессия этого гена коррелирует со снижением частоты общего ответа на лечение.
Установлена возможность использования показателя экспрессии генов FRAME и WT1 для мониторинга минимальной остаточной болезни у больных множественной миеломой.
Научно-практическая ценность работы.
Разработаны методы детекции экспрессии опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени.
Показана целесообразность использования показателей экспрессии генов PRAME и WT в качестве молекулярных маркеров опухоли у больных множественной миеломой.
Определено, что исходная гиперэкспрессия генов PRAME, WT и XIAP, является фактором, свидетельствующим о целесообразности проведения индукционной терапии препаратом бортезомиб.
Положения, выносимые на защиту.
1. У больных множественной миеломой в дебюте заболевания экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 выявляется более, чем в 60% и 20% случаев, соответственно.
2. Ген-ингибитор апоптоза XIAP гиперэкспрессируется более чем у 70% первичных больных множественной миеломой.
3. Выраженный противоопухолевый ответ, достигнутый в результате индукционной терапии, сопровождается снижением уровня экспрессии опухолеассоциированных генов.
4. Опухолеассоциированные гены PRAME, WT1 могут быть использованы в качестве маркеров минимальной остаточной болезни у больных множественной миеломой.
Публикации.
По материалам диссертации опубликовано 8 научных трудов, в том числе в изданиях, рекомендованных ВАК - 4.
Апробация диссертации.
Основные положения работы доложены на Московской международной конференции "Лейкозы. Терапия и фундоментальные исследования" (Москва, 2008г), Международной конференции "Трансплантация гемопоэтических стволовых клеток у взрослых и детей" (Санкт- Петербург, 2008г).
Объем и структура работы.
Диссертация изложена на 143 страницах, состоит из введения, обзора литературы, методической главы, двух глав собственных результатаов, заключения, выводов, указателя литературы. Работа иллюстрирована 18 таблицами и 9 рисунками. Список использованной литературы включает 169 источников, из них 12 отечественных и 157 зарубежных.
Диссертация носила клинико-лабораторный характер и была выполнена в отделении высокодозной химиотерапии и трансплантации костного мозга (руководитель д.м.н. Е.Н.Паровичникова), и лаборатории генной инженерии (заведующий к.б.н. А.В.Мисюрин) ФГБУ ГНЦ Минздравсоцразвития РФ (Генеральный директор член-корр РАМН, д.м.н., профессор В.Г.Савченко).
Содержание работы.
Характеристика больных. В настоящей работе приводятся результаты проспективного исследования экспрессии опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP в клетках костного мозга у 45 больных множественной миеломой. Все больные наблюдались в отделении высокодозной химиотерапии и трансплантации костного мозга (руководитель д.м.н. Е.Н.Паровичникова) в период с 2006 по 2009гг. Диагностика и оценка противоопухолевого эффекта основывались на современных критериях, разработанных Международной рабочей группой по миеломе. Среди включенных в исследование больных было 26 мужчин и 19 женщин в возрасте от 28 до 68 лет; со II (55,5%) или III (44,5%) стадией заболевания. У 36 больных была диагностирована миелома G, у 2 - А, у 5 - BJ, а так же по одному случаю миелома D и М.
В исследованной группе пациентов индукционная терапия проводилась по трем схемам: у 28 больных индукция включала 3-4 курса полихимиотерапии VAD с интервалом между курсами 28 дней. В случаях с недостаточной химиочувствительностью опухоли к курсам VAD, в индукционную программу дополнительно включали 4-8 курсов бортезомиб+ дексаметазон +/- адриабластин. Терапия бортезомибом, в качестве препарата второй линии, проведена 13 пациентам. У других 15 больных в качестве индукционной терапии уже на
начальных этапах, применялась схема бортезомиб + дексаметазон +/- адриабластин в количестве 4-8 курсов. Далее проводилась мобилизация и сбор гемопоэтических стволовых клеток крови (СКК) по схеме циклофосфан 4-6г/м2+ гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Затем выполненяли однократную или двойную трансплантацию аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (аутоТГСК), в качестве предтрансплантационного кондиционирования были использованы высокие дозы мелфалана (200мг/м2).
Методы исследования. Молекулярное исследование клеток костного мозга методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени выполнялось в лаборатории генной инженерии (заведующий к.б.н. А.В.Мисюрин). Экспрессия опухолеассоциированных генов была изучена в 255 образцах костного мозга больных ММ. В каждой пробе была проанализирована экспрессия трех опухолеассоциированных генов PRAME, WT1, XIAP и контрольного гена ABL. Таким образом, реакция ПЦР в реальном времени была выполнена на 1020 пробах. Исследования проводились в следующие сроки: у 45 больных в момент диагностики, до начала терапии; после индукционных курсов химиотерапии по программе VAD у 28 пациентов, после назначения бортезомиба в качестве препарата первой линии у 15 больных. На этапе консолидации ремиссии, а именно до и после выполнения аутоТГСК, экспрессия опухолеассоциированных генов изучена у 9 больных. У 8 пациентов ПЦР выполнялась в посттрансплантационном периоде неоднократно, в течение от 1 до 12 месяцев, и у 2 больных анализ экспрессии генов проводился в момент рецидива заболевания. Число проведенных исследований у каждого больного составило от 1 до 8, медиана 2. В качестве контроля экспрессия опухолеассоциированных генов изучена в клетках костного мозга 8 здоровых доноров.
Выделение тотальной мРНК из клеток костного мозга пациентов с ММ и доноров проводилось по методу Chomczynski. Для постановки реакции обратной транскрипции к раствору РНК (1мкг) добавляли 2мкл гексамеров (концентрация ПОпМ) и проводили отжиг ЗОсек при 95°С. Далее осуществляли реакцию в растворе, содержащем 75мМ KCl, 50мМ Трис, ЮмМ DTT, ЗмМ MgC12, 1мМ каждого из четырех дезоксирибонуклеотидов, 20ед. ингибитора РНКаз (Promega),
ЮОед. обратной транскриптазы M-MLV (Promega) в течение 1-1,5 часов при 37°С. Объем реакционной смеси составлял 20мкл.
Количественное определение экспрессии генов FRAME, WT1 и XIAP проводилось методом ПЦР в реальном времени по технологии TaqMan. Для проведения реакции использовался прибор ICycler IQ (BioRad).
Экспрессия генов FRAME, WT1, XIAP и ABL определялась в числе копий мРНК соответствующего гена. В качестве положительного контроля использовались плазмиды pGEM-T, содержащие клонированные фрагменты этих генов. На основании серии разведений плазмиды в каждом эксперименте строилась калибровочная кривая, по которой определялось число копий гена в исследуемых образцах. Серия разведений плазмиды представляла собой последовательность 10-кратных разведений, использовались разведения от 107 до 103 копий в 1 мкл.
Таблица 1
Нуклеотидные последовательности праймеров и зондов.
Праймеры и зонды 5' - 3' последовательность нуклеотидов Анализируемый ген
PRAME-F GAC TCT TTA TTT TTT CCT TAG А PRAME
PRAME-R CGA AAG CCG GCA GTT AGT TAT T
PRAME-probe FAM- CTG GAT CAG (T-RTQ1 )TG CTC AGG CAC GTG А
WT1-F CAGGCTGCAATAAGAGATATTTTAAGCT WT1
WT1-R GAA GTC АСА CTG GTA TGG TTT CTC А
WT1-probe FAM-CTT АСА GAT GCA CAG CAG GAA GCA CAC TG BHQ1
XIAP-F ACT TGA GGA GTG TCT GGT AA XIAP
XIAP-R GGA TTT TGG AAG ATG GTA TCA TC
XIAP-probe FAM AAC TAC (T-BHQ)GA GAA AAC ACC АТС ACT AAC TAG AAG AA p
ABL-F AGC TCC GGG TCT TAG GOT AT ABL
ABL-R TAG TTG CTT GGG ACC CAG CC
ABL-probe Fam CC A TT(T-RTQl) TTG GTT TGG GCT TCA CAC CAT Tp
Для каждого образца, в том числе и для разведений плазмид, ПЦР-реакция проводилась в трех повторах. В качестве гена сравнения использовался ген ABL. Для каждой тройки образцов рассчитывалась средняя экспрессия гена. Система праймеров и зондов была разработана в лаборатории генной инженерии ГНЦ РАМН в 2002году. Нуклеотидные последовательности праймеров и зондов представлены в таблице 1.
Окончательный результат относительной экспрессии генов выражался в виде
нормированных процентов по формуле:
Число копий гена (PRAME, WT1, XIAP)
- х 100%
Число копий ABL
Статистическая обработка данных проводилась методами описательной статистики, анализом таблиц сопряженности (Критерий хи-квадрат Пирсона) и корреляционного анализа (коэффициент корреляции Спирмена). Обработка данных осуществлялась с использованием программы BIOSTAT версия 4.03 Copy right© 1998 McGraw Hill. Прогностическая значимость экспрессии опухолеассоциированных генов оценивалась посредством построения кривых безрецидивной выживаемости с использованием метода Каплан-Майер (программа Stat View).
Результаты исследования и их обсуждение.
Экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, fVTl и XIAP у первичных больных множественной миеломой.
Изучение экспрессии генов PRAME, WT1 и XIАР в клетках костного мозга у 45 первичных больных множественной миеломой в момент диагностики показало, что экспрессия гена PRAME выявлялась у 31 больного (68,9%). Экспрессия гена WT1 была обнаружена у 11 пациентов (24,4%), причем оказалось, что WT1 определялся только у Р&4АЖ-позитивных больных. Экспрессия гена XIАР была выявлена у всех первичных больных ММ (достоверно чаще, чем у доноров р=0,00239, точный критерий Фишера).
Таблица 2
Экспрессия генов PRAME, fVTl иХ1АРу первичных больных ММ и доноров
костного мозга.
Изучаемые параметры Опухолеассоциированные гены
FRAME WT1 XIAP
Частота выявления у больных 68,9% 24,4% 100%*
у доноров 50% (4/8) 12,5% (1/8) 62,5%* (5/8)
Медиана экспрессии (нормированные %) у больных 0,05 0 66
у доноров 0,0035 0 18
Диапазон значений (нормированные %) у больных 0-132 0-2,5 4-606
у доноров 0-0,254 0-0,0017 0-18
Примечание *р=0,0024
При исследовании костномозговых клеток доноров оказалось, что экспрессия опухолеассоциированных генов выявляется и у здоровых лиц, однако наблюдается несколько реже, чем у больных ММ. Так экспрессия PRAME была обнаружена у 4 из 8 человек (50%), WT1 экспрессировался лишь у 1 донора (12,5%), а экспрессия гена Х1АР выявлялась в 5 случаях (62,5%). (Таблица 2)
При анализе диапазона значений экспрессии опухолеассоциированных генов было отмечено, что минимальные показатели экспрессии у больных и доноров были одинаковы, в то время как максимальные значения экспрессии в группе пациентов и значительно превышали таковые в контрольной группе. Так, для гена PRAME разброс значений колебался от 0% до 132%, для WT1 - от 0% до 2,54%, для XIAP - от 4% до 606%. В связи с этим, для дальнейшего анализа больные были разделены на группы с низкой экспрессией опухолеассоциированных генов (или полным ее отсутствием) и высокой экспрессией, превышавшей условную норму, вычисленную по результатам обследования здоровых доноров.
Таким образом, по результатам нашего исследования было выявлено, что опухолеассоциированный ген FRAME экспрессируется почти у 70% больных с впервые выявленной ММ. При этом у каждого второго из этих пациентов количественные показатели свидетельствуют о гиперэкспрессии гена. Экспрессия гена-ингибитора апоптозаXIAP определялась у всех больных ММ, и у 75,5% из них в виде гиперэкспрессии. Экспрессия гена WT1 была обнаружена у каждого четвертого пациента с ММ, уровень экспрессии данного маркера был выше контрольных значений у всех МТУ-положительных пациентов.
Принимая во внимание широкий диапазон количественных показателей экспрессии гена PRAME и особенно гена XIАР у больных ММ в момент диагностики заболевания нами был проведен сравнительный анализ, направленный на определение зависимости результатов противоопухолевой терапии от наличия исходной гиперэкспрессии опухолеассоциированных генов. Пациенты были разделены на группы в соответствии с тем, превышали или нет указанные показатели значения, выявленные у доноров костного мозга и условно принятые за норму. Таким образом, были выделены две группы больных: с гиперэкспрессией исследуемых генов, а также с экспрессией, не превышающей значения, обнаруженные у доноров или с полным отсутствием экспрессии.
Противоопухолевый ответ на химиотерапию по схеме VAD в зависимости от экспрессии опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP.
Индукционная терапия по схеме VAD была выполнена 28 больным ММ. Число курсов составляло от 1 до 4. В результате проведенного лечения у 4 больных была констатирована полная ремиссия (ПР), еще у 4 пациентов - очень хорошая частичная ремиссия (охЧР), у 10 больных удалось достичь частичной ремиссии (ЧР). У других 10 пациентов отмечался лишь минимальный ответ (МО) или наблюдалась резистентность опухоли к проводимой терапии.
Для оценки взаимосвязи химиочувствительности опухоли с экспрессией опухолеассоциированных генов нами были предприняты сопоставления
результатов терапии по схеме VAD в зависимости от качественных характеристик экспрессии генов PRAME, WT1 и XIAP.
Таблица 3
Частота противоопухолевого ответа после терапии VAD в зависимости от исходной экспрессии генов.
Уровень исходной экспрессии, Gen/ABL*100% Частота ПР+охЧР после 3-х курсов VAD, % больных Частота ПР+охЧР+ЧР после 3-х курсов VAD, % больных
PRAME <=0,245% (n=17) >0,245% (n-11) 35,5% (n=6) 71% (n=l 1)
18% (n=2) 54% (n=6)
WTl <= 0,002% (n=23) > 0,002% (n=5) 30,5% (n=7) 69,5% (п=16)
20% (n=l) 40% (n=2)
XIAP <= 18% (n=7) >18% (n-21) 28,6% (n=2) 85,8% (n=6)
28,5% (n=6) 57%(n=12)
Из результатов, представленных в таблице 3, видно, что в группе больных с нормальной исходной экспрессией генов PRAME и WT1 почти вдвое чаще удавалось достичь ПР и охЧР, чем у больных с исходной гиперэкспрессией этих генов (35,3% против 18% для PRAME и 30,4% против 20% для №77). При этом частота достижения значимого противоопухолевого ответа (ПР+ охЧР +ЧР) в группе больных с нормальной экспрессией генов PRAME и WT1 составляет 70,6% и 69,5%, соответственно, в то время как в группе больных с гиперэкспрессией этих маркеров общий ответ не превышает 54,4% и 40%, соответственно.
При исследовании уровней экспрессии гена XIAP мы исходили из предположения, что повышение показателей экспрессии этого гена-ингибитора
апоптоза может ассоциироваться с развитием резистентности опухоли к химиотерапии. При сопоставлении результатов терапии в зависимости от выраженности исходной экспрессии XIAP оказалось, что частота достижения ПР + охЧР у больных с нормальной и гиперэкспрессией этого гена была практически одинаковой и составляла 28,6%. Однако, при анализе частоты достижения общего ответа (ПР+ охЧР +ЧР) выявлено, что в группе больных с нормальной экспрессией XIAP этот показатель (85,8%) превышает почти на треть таковой в группе больных с гиперэкспрессией (57%).
Противоопухолевый ответ после индукционной терапии ингибитором протеасом (бортезомибом) в качестве препарата I линии в зависимости от экспрессии опухолеаесоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP.
Индукционная терапия с использованием биологического препарата направленного действия - бортезомиба в качестве препарата первой линии проводилась 15 пациентам ММ. Число курсов бортезомиб+дексаметазон+/-доксорубицин составляло от 4 до 8. В результате лечения у 1 больной была достигнута ПР, у 5 пациентов - охЧР, у 7 больных удалось достичь ЧР и у 2 пациентов эффект был выражен лишь в пределах МО.
Результаты представленные в таблице 4 свидетельствуют о том, что в группе больных с нормальной исходной экспрессией генов PRAME и WT1 в результате терапии бортезомибом удавалось чаще достичь ПР+охЧР, чем у больных с гиперэкспрессией этих генов (66,7% против 16,6% для PRAME и 54,5% против 25% для WT1). Однако при анализе общего противоопухолевого ответа (ПР+охЧР+ЧР) оказалось, что частота достижения значимого лечебного эффекта не зависит от величины исходной экспрессии генов PRAME и W77 (88,9% при нормальной экспрессии PRAME против 83,4% при гиперэкспрессии и 81,7% при нормальной экспрессии ?F77 против 100% при гиперэкспрессии).
Частота противоопухолевого ответа после терапии бортезомибом в качестве препарата I линии в зависимости от исходной экспрессии генов.
Уровень исходной экспрессии, Gen/ABL*100% Частота ПР+охЧР после бортезомиба, % больных Частота ПР+охЧР+ЧР после бортезомиба, % больных
PRAME <= 0,245% (n=9) > 0,245% (n-6) 66,7% (п=6) 88,9% (п=8)
16,6% (п=1) 83,4% (п=5)
WT1 <=0,002% (n=l!) > 0,002% (n-4) 54,5%(п=6) 81,7% (п=9)
25%(п=1) 100% (4)
XIAP <=18% (n=l) > 18% (n—14) 1/1
42,8% (п=6) 85,6% (п=12)
Сопоставление результатов терапии в зависимости от исходной экспрессии rmaXIAP затруднено из-за крайней малочисленности группы с низкой экспрессией этого гена. Нормальный уровень экспрессии XIAP был зафиксирован лишь у одного больного, в результате индукционной терапии бортезомибом у него была достигнута охЧР. В группе пациентов с гиперэкспрессией XIAP частота полных и очень хороших частичных ремиссий составила 42,8%, а общий ответ был достигнут у 85,6% больных.
Отметив снижение частоты достижения противоопухолевого ответа на индукционную терапию в группах пациентов с исходной гиперэкспрессией опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP, был проведен сравнительный анализ эффективности двух принципиально различных схем лечения: химиотерапии по схеме VAD и терапии с использованием биологического препарата направленного действия (бортезомиба). (таблица 5)
Частота противоопухолевого ответа у больных с гиперэкспрессией PRAME, WT1 и XIАР в дебюте ММ зависимости от программы индукции.
Проведенное лечение ПР+охЧР; % Частота общего ответа (ПР+охЧР+ЧР); %
PRAME> 0,245% терапия VAD (п=П) 18% (п=2) / (п=6) \
PRAME > 0,245% терапия бортезомибом (п=6) 16,6% (п=1) 1 83,4%* 1 (п=5) Ур=0,08
WT1 >0,002% терапия VAD (п=5) 20% (п=1) »0%**"\ / (П=2) \
WT1 >0,002% терапия бортезомибом (п=4) 25% (п=1) У 100%** J \ (п=4) У ^ р=0,1
XIАР > 18% терапия VAD (п= 21) 28,5% (п=6) / (n=12) \
XIAP > 18% терапия бортезомибом (п=14) 42,8% (п=6) \ 85,6%*** J (п=12) У ---р=0,07
Примечание: *р=0,08, **р=0,1, ***р=0,07
Из представленных в таблице 5 данных следует, что у пациентов ММ с исходной гиперэкспресией опухолеассоциированных генов PRAME, WTI и XIAP, назначение индукционной терапии бортезомибом, позволяет увеличить число общих ответов на лечение (ПР+охЧР+ЧР) по сравнению со стандартной химиотерапией по схеме VAD. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что пациентам с исходной гиперэкспрессией опухолеассоциированных генов предпочтительнее назначать бортезомибсодержащие курсы уже на первых этапах индукционного лечения.
Противоопухолевый ответ после индукционной терапии ингибитором протеасом (бортезомибом) в качестве препарата II линии в зависимости от экспрессии опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 kXIAP.
Терапия с использованием биологического препарата направленного действия - бортезомиба в качестве препарата второй линии проводилась 13 пациентам ММ. Большей части больных (п=12) данное лечение было назначено в связи с недостаточным ответом на индукционную терапию по схеме VAD в объеме от 1 до 4 курсов. Число курсов бортезомиб+дексаметазон+Аадриабластин составляло от 4 до 8 (медиана 6). При этом бортезомибсодержащие схемы назначали на фоне ЧР - 8 больным, МО - 3 больным и на фоне резистентности к VAD-терапии - одному больному. Еще одному пациенту терапия второй линии бортезомибом выполнялась для лечения рецидива, выявленного после второй аутологичной трансплантации. Таким образом, в данную группу были включены пациенты с наиболее неблагоприятным течением заболевания.
В результате лечения у 2 больных была достигнута ПР, у 5 пациентов - охЧР, у 1 больной удалось достичь ЧР, еще у одной пациентки отмечалась стабилизация заболевания (противоопухолевый ответ сохранялся по-прежнему в пределах ЧР), у 4 пациентов отмечалась прогрессия опухоли на фоне проводимого лечения. Можно сделать вывод, что применение препарата бортезомиб в качестве второй линии терапии позволило привнести дополнительный противоопухолевый эффект у 8 из 13 больных. Для оценки возможного влияния исходного уровня экспрессии опухолеассоциированных генов на результаты терапии бортезомибом в качестве терапии второй линии были предприняты следующие сопоставления, (таблица 6)
Из представленных в таблице 6 данных видно, что наименьший противоопухолевый ответ на терапию бортезомибом в качестве препарата второй линии, был достигнут у больных с исходной гиперэкспрессией гена PRAME (частота достижения ПР+охЧР 25% против 66,6%, а общих ответов 50% против 77,7%). На основании полученных данных можно предположить, что совокупность двух факторов: гиперэкспрессия гена PRAME, выявленная в момент диагностики ММ, и отсутствие противоопухолевого ответа на индукционную VAD-терапию,
определяет группу пациентов высокого риска в отношении неэффективности терапии бортезомибом, применяемым в качестве препарата второй линии.
Таблица 6
Частота противоопухолевого ответа после терапии бортезомибом (II линия) в зависимости от исходной экспрессии генов.
Уровень исходной экспрессии, Частота ПР+охЧР Частота ПР+охЧР+ЧР
Сеп/АВЬ*100% после бортезомиба, после бортезомиба,
% больных % больных
РНАМЕ <= 0,245% (п=9) 66,6% (п=6) 77,7% (п=7)
> 0,245% (п=4)
25% (1/4) 50% (2/4)
№77 <=0,002% (п=10) 50% (п=5) 70% (п=7)
> 0,002% (п=3)
66,6% (2/3) 66,6% (2/3)
XIАР <= 18% (п=6) > 18% (п-7) 33,3% (п=2) 66,6% (п=4)
71,3% (п=5) 71,3% (п=5)
Что касается группы пациентов с исходной гиперэкспрессией гена Х1АР, то полученные данные подтверждают предыдущее предположение о том, что гиперэкспрессия этого гена не является неблагоприятным прогностическим фактором в отношении эффективности терапии бортезомибом: в результате лечения более чем у 70% больных этой группы была достигнута ПР+охЧР. Можно предположить, что для пациентов с исходной гиперэкспрессией Х1АР предпочтительнее проводить индукционную терапию, начиная сразу с бортезомибсодержащих курсов.
Экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP на фоне высокодозной химиотерапии мелфаланом с последующей аутоТГСКК.
Уровень экспрессии опухолеассоциированных генов в течение этапа консолидации, то есть выполнения однократной или двойной трансплантации аутологичных стволовых клеток, был исследован у 9 пациентов. Следует отметить, что все эти пациенты уже на момент проведения мобилизации и сбора стволовых кроветворных клеток находились в состоянии полной или очень хорошей частичной ремиссии, которая сохранялась к моменту выполнения трансплантации.
Несмотря на небольшое количество обследованных больных, нам удалось отметить некоторые тенденции в изменении экспрессии генов в зависимости от продолжительности ремиссии после трансплантации. Пациенты были разделены на две группы. В первую группу включены 7 больных, которые сохраняли ремиссию в течение 25 - 36 месяцев (медиана наблюдения 26,5 месяцев) после аутотрансплантации. Во вторую группу были отнесены двое пациентов, у которых был зафиксирован рецидив заболевания через 9 и14 месяцев после трансплантации.
Наиболее яркие различия экспрессии опухолеассоциированных генов среди пациентов исследованных двух групп были отмечены в отношении экспрессии гена PRAME.
При анализе экспрессии данного маркера в группе больных с устойчивой продолжительной ремиссией было отмечено, что как перед трансплантацией, так и через месяц после трансплантации экспрессия PRAME не превышала нормальных значений (медиана показателя экспрессии до ауто ТГСКК-0,001%, на+ЗОдень- 0%).
Показатели экспрессии опухолеассоциированных генов в зависимости от длительности сохранения ремиссии после трансплантации.
Показатели экспрессии опухолеассоциированных генов Изучаемые параметры
Частота встречаемости экспрессии гена, % больных Показатели экспрессии
Разброс значений, нормированные % Медиана, нормированные %
Больные, сохранившие ремиссию в течение 25-36 мес после ауто-ТСКК (п=7) До ауто-ТСКК PIW4E 57% (п=4) 0 - 0,052 0,001
WT1 57%(п=4) 0-0,035 0,001
XIАР 100% (п=7) 1-654 18
+30день после ауто-ТСКК PRAME 42,8% (п=3) 0-0,21 0
WT1 85,7% (л=6) 0-1,03 0,32
XIAP 100% (п=7) 22-492 174
Больные, с рецидивом ММ через 9-14мес после ауто-ТСЮС (п=2) До ауто-ТСКК PRAME 100% (п=2) 0,33-6,1 3,215
WT1 50% (п=1) 0-0,4 0,2
XIАР 100% (п=2) 2-348 175
+30день после ауто-ТСКК FRAME 100% (п=2) 5,44 - 13,2 9,32
WT1 100% (п=2) 0,317-2,21 1,26
XIAP 100% (п=2) 162 - 303 232,5
В малочисленной группе пациентов, утративших противоопухолевый ответ в течение 9-14 месяцев после завершения трансплантаионной терапии, как до так и после трансплантации отмечалась гиперэкспрессия гена FRAME. Минимальные показатели экспрессии (0,33%) значительно превышали таковые у доноров, а медиана экспрессии определялась на уровне 3,215%, что в 1000 раз превышало медиану экспрессии у доноров. После трансплантации значения экспрессии гена
FRAME еще более возросли, достигая уровня 5,44 -13,2%. Таким образом, у двух больных с гиперэкспессией гена FRAME перед аутоТГСК был зафиксирован рецидив заболевания. Небольшое количество обследованных больных не позволяет сделать статистически значимых выводов, однако можно предполагать, что гиперэкспрессия гена PRAME, выявленная у больных перед трансплантацией, может рассматриваться как прогностически неблагоприятный фактор, указывающий на присутствие остаточного пула опухолевых клеток и формирование лекарственной резистентности.
Для анализа динамического изменения экспрессии опухолеассоциированных генов FRAME, WT1 и XIАР в процессе интенсивной терапии ММ была подробно изучена наиболее благоприятная группа пациентов с длительной безрецидивной выживаемостью после аутоТГСК.
Таблица 8
Изменение экспрессии генов РЯАМЕ, \УТ1 и XIАР на фоне терапии у больных (п=7) с продолжительной безрецидивной выживаемостью после
аутоТГСК.
Исходно После индукции Перед аутоТГСК +30день аутоТГСК
PRAME Частота гиперэкспресии Gene/abl*100 (мед) 42%* (3/7) 0,05 0 0,001 0 0,001 0* 0
WT1 Частота гиперэкспрессии Gene/abl*100 (мед) 28,5%*« (2/7) 0 42% (3/7) 0 42% (3/7) 0,001 85,7%" (6/7) 0,32
XIAP Частота гиперэкспрессии Gene/abl*100(Mefl) 57% (4/7) 25 28,5% (2/7) 15 42% (3/7) 18 100% 373
Примечание: *р=0,05, **р=0,05
Из представленных в таблице 8 данных видно, что исходные характеристики экспрессии генов в группе больных с продолжительной безрецидивной
выживаемостью после аутоТГСК существенно не отличались от таковых в общей группе пациентов. Однако отмечено, что уже после окончания индукционной терапии ни у одного больного не выявлялась гиперэкспрессия гена PRAME и данные параметры сохранялись все время наблюдения (р=0,05). Медиана экспрессии PRAME снижалась в процессе эффективного лечения с 0,05% до 0%. Таким образом, нами была выявлена взаимосвязь уровня экспрессии гена PRAME как исходного, так и снижающегося после индукционной терапии с возможностью достижения выраженного противоопухолевого эффекта. Возможным объяснением этой взаимосвязи может рассматриваться значительное снижение массы опухоли в результате индукционной терапии, что и сопровождается снижением уровня экспрессии опухолеассоциированного гена. Безусловно, в данном контексте, геи PRAME может выступать как маркер миеломных клеток, отражая уменьшение опухолевой массы в процессе индукционной терапии.
Кроме того при анализе динамических изменений экспрессии был констатирован феномен достоверного увеличения частоты и выраженности экспрессии гена WT1. Данное наблюдение трактовать с клинических позиций в настоящее время затруднительно.
Так же отмечено, что показатели экспрессии гена XIAP снижались в результате эффективной терапии: медиана экспрессии соответствовала нормальным значениям уже после окончания индукционной терапии. Однако, после выполнения аутоТГСКК у всех больных выявлялась гиперэкспрессия этого гена. Повышение уровня экспрессии XIAP у пациентов после трансплантации можно объяснить возмущающим воздействием проводимого кондиционирования высокими дозами мелфалана и, как следствие, повышение экспрессии генов, ингибиторов апоптоза всеми, в том числе и здоровыми клетками костного мозга.
Заключение.
Полученные нами данные подтвердили необычайную биологическую гетерогенность множественной миеломы, эволюция которой связана с возникновением огромного количества генетических аберраций на фоне
терминально обусловленной вариабельности генотипа хозяина. Одной из характерных черт заболевания является пока мало изученный процесс каскадного гипометилирования ДНК, приводящий к экспрессии целого ряда нехарактерных для данного тканевого типа генов. Комплексное изучение особенностей аберрантной экспрессии опухолеассоциированных генов, накопление сведений, полученных в результате исследовательской работы, вне всякого сомнения, дадут необходимую информацию для дальнейшей классификации множественной миеломы и индивидуального подбора эффективной терапии этого заболевания.
Выводы.
1. У первичных больных ММ экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME и WT1 выявляется в 68,9% и 24,4% случаев (соответственно), при этом у 51,5% и 100% из них определяется гиперэкспрессия указанных генов.
2. Экспрессия гена-ингибитора апоптоза XIAP выявлялась достоверно чаще у пациентов ММ, чем у здоровых доноров (р<0,05). Гиперэкспрессия на момент диагностики обнаружена у 75,5% больных.
3. Показано, что значимый противоопухолевый ответ на индукционную и высокодозную консолидирующую терапию сопровождается достоверным снижением уровня экспрессии гена PRAME (р=0,05).
4. У больных с исходной гиперэкспрессией гена PRAME частота достижения ПР+охЧР+ЧР увеличивается при использовании ингибитора протеасом в сравнении с химиотерапией по схеме VAD (83,4% против 54%, соответственно, р=0,08).
5. Исходная гиперэкспрессии гена XIAP коррелирует с резистентностью к VAD-химиотерапии, однако, не ассоциирована с резистентностью к терапии ингибитором протеасом. Частота достижения ПР+охЧР+ЧР увеличивается при использовании ингибитора протеасом в сравнении с химиотерапией по схеме VAD (85,6% против 57%, соответственно, р=0,07).
6. У больных с нормальной экспрессией гена PRAME перед аутоТГСК безрецидивная выживаемость составила 100% при сроке наблюдения от 25 до 36 месяцев.
Список опубликованных работ по теме диссертации:
1. Л.П.Менделеева, О.С.Покровская, Е.О.Грибанова, Т.В.Гапонова,
Е.И.Желнова, М.В.Анухина, Е.С.Урнова, Е.Ю.Варламова, Н.Н.Калинин, Е.М.Грецов, В.Г.Савченко. Высокодозная химиотерапия с последующей аутотрансплантацией у пожилых больных множественной миеломой// Клиническая геронтология.-2007.- №4.-С. 20-24.
2. Gaponova T., Misurin A., Mendeleeva L., Varlamova Е., Parovichnikova Е.,
Savchenko V. Expression of tumor associated genes in Multiple Myeloma patients during high dose chemotherapy and therapy of proteosome inhibitors. -Haematologica, 2009, vol.94, suppl.2 (Abstract book of 14-th Congress of the European Hematology Association, Berlin, Germany, June 4-7, 2009) p609, abst 1576.
3. Т.В.Гапонова, Л.П.Менделеева, А.В.Мисюрин, Е.Ю.Варламова,
B.Г.Савченко. Экспрессия опухолеассоциированных генов FRAME, WT1 и XIAP у больных множественной миеломой//0нкогематология.-2009.- №2.-
C. 52-57.
4. Т.В.Гапонова. Современные молекулярно-биологические характеристики
множественной миеломы//Гематология и трансфузиология.-2009.-№6.-С.38-44.
5. T.V.Gaponova, L.P.Mendeleeva, A.V.Misurin, E.Yu.Varlamova,
E.N.Parovichnikova, V.G.Savchenko. Expression of tumor associated genes in Multiple Myeloma patients during high- dose chemotherapy and auto-SCT. Cellular Therapy and Transplantation, 2009, vol.2, number 5, p.95-96.
6. T.B. Гапонова, Л.П.Менделеева, А.В.Мисюрин, В.Г.Савченко. Экспрессия
генов FRAME, WT1 и XIAP у больных множественной миеломой как фактор
прогноза эффективности индукционной терапии/УВестник гематологии,-2011.-Т.7.- №2.-С.14.
7. Покровская О.С., Менделеева Л.П., Урнова Е.С., Гапонова Т.В., Грибанова
Е.О., Алексеева И.В., Дроков М.Ю., Калинин H.H., Грецов Е.М., Клясова Г.А., Савченко В.Г. Оптимизация режимов мобилизации гемопоэтических стволовых клеток крови у больных множественной миеломой//Терапевтический архив.-2011.-Т.83.-№7.-С. 50-57
8. Pokrovskaya О., Mendeleeva L., Alekseeva I., Gaponova T., Urnova E.,
Gribanova E., Varlamova E., Kalinin N., Gretsov E., Savchenko V. Treatment of multiple myeloma with autologous stem cell transplantation: a long-term observation. Bone Marrow Transplantation, 2011, vol.46, suppl. 1, (37-th Annual meeting of the European Group for Blood and Marrow Transplantation), p.265, abstr.P906.
Заказ № 270-1/08/2011 Подписано в печать 26.08.2011 Тираж 50 экз. Усл. пл. 1,2
ООО "Цифровичок", тел. (495) 649-83-30 ) \vw\v. с/г, ги; е-таИ: т/о@с/г. ги
Оглавление диссертации Гапонова, Татьяна Владимировна :: 2011 :: Москва
Список используемых сокращений.
Введение.
Глава 1. Обзор литературы.
Глава 2. Материалы и методы исследования.
2.1. Характеристика больных.
2.2.Схемы химиотерапии, проводимой у больных, включенных в исследование.
2.3.Критерии эффективности проводимой терапии.
2.4. Методы исследования.
Глава 3. Экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP у первичных больных множественной миеломой.
3.1 Экспрессия генов PRAME, WT1 и XIAP у больных множественной миеломой до начала лечения.
3.2 Взаимозависимость экспрессии генов PRAME, WT1 и XIAP с клинико-лабораторными характеристиками ММ.
Глава 4. Экспрессия опухолеассоциированных генов у больных ММ на различных этапах интенсивной терапии.
4.1. Влияние экспрессии генов PRAME, WT1 и XIAP на эффективность индукционной терапии по программе VAD.
4.2. Взаимосвязь экспрессии генов PRAME, WT1, XIAP и противоопухолевого ответа на бортезомиб, применявшейся в качестве препарата первой линии терапии.
4.3. Взаимосвязь экспрессии генов PRAME, WT1, XIАР и противоопухолевого ответа на бортезомиб, применявшийся в качестве препарата второй линии терапии.
4.4. Сопоставление изменений экспрессии опухолеассоциированных генов на фоне различных схем индукционной терапии.
4.5. Изменение уровня экспрессии генов PRAA4E, WT1 и XIAP в результате высокодозной химиотерапии мелфаланом с последующей трансплантацией аутологичных стволовых клеток.
Введение диссертации по теме "Гематология и переливание крови", Гапонова, Татьяна Владимировна, автореферат
Актуальность проблемы.
Внедрение в клиническую практику программ высокодозной химиотерапии множественной миеломы (ММ) в конце 80-х гг XX века позволило значительно оптимизировать результаты лечения. Так, интенсивная индукция на ранних этапах лечения с последующей высокодозной консолидацией, включающей трансплантацию аутологичных гемопоэтических стволовых клеток (ауто ТГСК), обеспечивает достижение не только клинико-гематологической, но и иммунохимической ремиссии у значительного числа пациентов. Полные ремиссии (ПР) достигаются у 2475% больных ММ, получающих соответствующую терапию, достаточный опухолевый ответ, включающий полные и частичные ремиссии - у 75- 95%. При этом медиана сохранения стойкого противоопухолевого эффекта после аутотрансплантации составляет 24-35 мес., а 5-летний период без признаков прогрессии заболевания переживают от 10 до 30% больных.[21]
Следующий, качественно новый этап в лечении ММ обусловлен внедрением в клиническую практику таких новых лекарственных препаратов, как ингибиторы протеасом (бортезомиб) и иммуномодуляторы (талидомид, леналидомид). Сочетание препаратов, воздействующих на молекулярные механизмы миеломной клетки, с высокодозной химиотерапией позволяет достичь дальнейшего улучшения результатов лечения. Так, применение высокодозного протокола по программе «Тотальная терапия — III» с включением в схему индукции бортезомиба и талидомида/леналидамида позволило группе исследователей из Университетского госпиталя Арканзаса добиться 56% безрецидивной выживаемости в течение 2-х лет после завершения лечения. Тем не менее, ММ является пока еще биологически неизлечимым заболеванием. Резистентность опухолевого процесса к адекватному терапевтическому воздействию, некурабельный рецидив болезни, выход опухоли из-под химиотерапевтического контроля - все это лежит в основе так называемых неудач в лечении.
В основе опухолевого роста и формирования механизмов лекарственной резистентности, как правило, лежит нестабильность генома опухоли. [37] Последовательность случайных генетических событий в опухолевых клетках, в совокупности приводящая к нарушению процессов дифференцировки клеток и бесконтрольному делению вследствие блокирования апоптоза, обусловливает прогрессирующее течение опухолевого заболевания. В регуляции механизма программированной гибели клеток принимает участие большое число как апоптотических, так и антиапоптотических белков и, в конечном счете, их соотношение предопределяет: будет клетка жить или погибнет. [100]
В начале 1990-х годов в злокачественно трансформированных гемопоэтических клетках была обнаружена' аномальная экспрессия ряда генов, получивших общее название С/Т (cancer/testis), так как в норме их транскрипция присуща главным образом клеткам семенников [157]. Одним из представителей данного семейства, часто экспрессирующимся при онкогематологических заболеваниях, является ген PRAME, обладающий антиапоптотическим действием и являющийся устойчивым коингибитором ядерных рецепторов семейства RAR.
Кроме того, известен целый ряд так называемых опухолеассоциированных генов, принимающих участие в- механизмах регулирования клеточного цикла и клеточной дифференцировки. Среди них отмечен ген WT1, вследствие мутации приобретающий свойства доминантного онкогена.
Особый интерес представляет также ген-ингибитор апоптоза XIAP, являющийся наиболее мощным ингибитором каспаз из всего семейства ингибиторов апоптоза IAP. Экспрессия XIАР определяется во всех клетках здоровых людей, гиперэкспрессия гена часто обнаруживается в опухолевых клетках [59,144,150]:
В течение последнего времени был опубликован ряд работ, показавших возможность использования указанных генов в качестве маркеров опухолевого клона при острых лейкозах. В некоторых исследованиях было также обнаружено, что гиперэкспрессия PRAME, WT1 и XI.АР непосредственно связана с резистентностью опухоли к проводимой химиотерапии. Учитывая достаточно частую экспрессию указанных генов при ММ (от 30% до 60% по литературным данным), несомненный интерес представляет изучение роли указанных генов в формировании опухолевого фенотипа и их возможное прогностическое значение в определении особенностей течения заболевания и чувствительности ММ к проводимому лечению.
Цель исследования.
Определить экспрессию генов PRAME, WT1 и ШАР у больных множественной миеломой в дебюте заболевания и в процессе интенсивной терапии как факторов прогноза течения заболевания.
Задачи:
• Изучить экспрессию PRAME, WT1 и XIAP у первичных больных множественной миеломой.
• Проанализировать изменение экспрессии генов на фоне индукционной химиотерапии по схеме VAD и терапии биологическими препаратами направленного действия (бортезомиб).
• Проанализировать экспрессию генов на фоне высокодозной консолидации с последующей аутотрансплантацией.
• Выявить закономерности экспрессии генов PRAME, WT1 и XIАР, определяющие результаты лечения цитостатическими и биологическими препаратами направленного действия (ингибитор протеасом).
• Определить параметры экспрессии опухолеассоциированных генов, влияющие на безрецидивную выживаемость после аутотрансплантации.
Научная новизна.
• Установлена частота экспрессии и гиперэкспрессии опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и ШАР у первичных больных множественной миеломой.
• Выявлена корреляция между выраженностью экспрессии опухолеассоциированных генов и достижением ответа на индукционную терапию.
• Выявлено снижение уровней экспрессии генов PRAME и WT1 по мере уменьшения опухолевой массы в результате индукционной полихимиотерапии.
• Обнаружено повышение уровня экспрессии гена-ингибитора апоптоза XIAP у больных множественной миеломой во время проведения индукционной химиотерапии по схеме VAD, в большей степени у пациентов с резистентной формой заболеваниям
• Отмечено, что исходная гиперэкспрессия ЖАР не является фактором неблагоприятного прогноза в отношении проведения индукционной терапии бортезомибом, в то время как при стандартной химиотерапии гиперэкспрессия этого гена коррелирует со снижением частоты общего ответа на лечение.
• Установлена возможность использования показателя экспрессии генов PRAME и WT1 для мониторинга минимальной остаточной болезни у больных множественной миеломой.
Научно-практическая ценность работы.
• Разработаны методы детекции экспрессии опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и ЖАР с помощью полимеразной цепной реакции в реальном времени.
• Показана целесообразность использования показателей экспрессии генов PRAME и WT в качестве молекулярных маркеров опухоли у больных множественной миеломой.
• Определено, что исходная гиперэкспрессия генов PRAME, WT и XIAP, является фактором, свидетельствующим о целесообразности проведения индукционной терапии препаратом бортезомиб.
Положения, выносимые на защиту.
1. У больных множественной миеломой в дебюте заболевания экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 выявляется более, чем в 60% и 20% случаев, соответственно.
2. Ген-ингибитор апоптоза XIAP гиперэкспрессируется более чем у 70% первичных больных множественной миеломой.
3. Гиперэкспрессия генов PRAME, WT1 и XIAP, выявленная на момент диагностики заболевания, не коррелирует с клинико-лабораторными характеристиками, определяющими стадию заболевания.
4. Выраженный противоопухолевый ответ, достигнутый в результате индукционной терапии, сопровождается снижением уровня экспрессии опухолеассоциированных генов.
5. Опухолеассоциированные гены PRAME, WT1 могут быть использованы в качестве маркеров минимальной остаточной болезни у больных множественной миеломой.
Заключение диссертационного исследования на тему "Экспрессия опухолеассоциированных генов PRAME, WT1 и XIAP у больных множественной миеломой в процессе интенсивной терапии и аутотрансплантации"
Выводы
1. У первичных больных ММ экспрессия опухолассоциированных генов PRAME и WT1 выявляется в 68,9% и 24,4% случаев (соответственно), при этом частота гиперэкспрессии составляет 35,5% и 24,4%. Гиперэкспрессия гена-ингибитора апоптоза XIАР на момент диагностики обнаружена у 75,5% больных.
2. Показано, что; значимый противоопухолевый ответ на индукционную и высокодозную консолидирующую терапию сопровождается снижением уровня экспрессии гена PRAME.
3. Исходная гиперэкспрессия гена PRAME коррелирует с резистентностью к химиотерапии по схеме VAD и терапии препаратом бортезомиб.
4. Исходная гиперэкспрессии гена XIAP коррелирует с резистентностью к VAD-химиогерапии, однако;, не обуславливает резистентность к терапии бортезомибом.
5. После выполнения высокодозной консолидации и трансплантации аутологичных стволовых клеток экспрессия гена PRAME у 80% больных отсутствовала или не превышала нормальных значений. У 20% больных сохранялась гиперэкспрессия гена PRAME. Гиперэкспрессия гена PRAME коррелировала с сокращением срока, безрецидивной выживаемости (медиана 11,5 месяцев против 26 месяцев).,
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Гапонова, Татьяна Владимировна
1. Абелев Г.И. механизмы дифференцировки и опухолевый рост//Биохимия.-2000.-С.127-140.
2. Абраменко И. В., Белоус Н. И., Мисюрин A.B. Экспрессия гена PRAME при миеломной болезни/ЛГерапевтический архив.- 2004.-Ж7-С.35- 40.
3. Андреева Н.Е. Вялотекущая множественная миелома/ЯТроблемы гематологии.-1983.-№4.-С.55-58.
4. Барлоги Б., Эпстайн Дж., Сельваньягам П., Алексаниан Р. Плазмоклеточная миелома II. Новое в диагностике и лечении заболевания//Гематология и трансфузиология.-1992.-№7-8.-С.ЗЗ-39.
5. Барышников А.Ю. Программированная клеточная смерть (апоптоз)//Клиническая онкогематология под редакцией! М.А.Волковой.-2001 .-С.34-41.
6. Воробьев А.И. Общий патогенез гемобластозов//Руководство по гематологии. Под редакцией академика А.И. Воробьева-2007.-Т.1.-С.147- 150.
7. Жеребцова В.А., Сурин B.JL, Менделеева Л.П. Молекулярный мониторинг МРБ при ММ//Проблемы гематологии и переливания крови.-2006.-С.2.
8. Козинец Г.И., Мокеева P.A., Касаткина В.В.и соавт. Пролиферация плазматических клеток при множественной миеломеавторадиографическое исследование)//Гематология итрансфузиология.-1986.-Т.31 .-№7.-С. 13—17.
9. Ю.Кузнецов С.В. Апоптоз и некоторые механизмы его регуляции// Проблемы гематологии.-1998.-№2.-С.22-27.
10. Татосян A.F., Зуева Э.Ш. Механизмы активации онкогенов// Клиническая гематология под редакцией М.А.Волковой.-2001.-Т. 2.-С.22-28.
11. Alt F.W., Oltz Е.М., Young F., et al: VGJ recombination. Immunol. Today 1992; 13: 306-313.
12. Anderson K.C. Targeted therapy for multiple myeloma// Semin.Hematol.-2001.-Vol.38.-P.286—294.
13. Andrade VC, Vettore A, Felix R ete al. Prognostic impact of cancer/testis antigen expression in advanced stage multiple myeloma patients//Cancer Immunity.-2008.-Vol.8.-P.2-9.
14. Attal M., Harousseau J.L., Stoppa A-M. A prospective, randomized trial of autologous bone marrow transplantation and chemotherapy in multiple myeloma.//N. Engl. J. Med.-1996.-Vol.335.-P.9r-97.
15. Baird P.N., Simmons P.J. Expression-of the Wilms tumor gene (WT1) in normal hemopoiesis//Exp. Hematol.-1997.Vol 25.-P312-320.
16. Bakkus M.H., Heirman C., Van Riet Г., et al. Evidence that multiple myeloma Ig heavy chain VDJ genes contain somatic mutations but show no intraclonal variation//Blood.-1992.-Vol.80.-P.2326-2335.
17. Bakkus M.H.C., Van-Rirt I. Evidence that the clonogenic cell in multiple myeloma originates from pre-switched but somatically mutated B-cell//Br. J. haematol.-1994.-Vol.87.-P.68-74.
18. Barlogie B., Alexanian R., Dicke K.A., et al. High-dose chemoradiotherpy and autologous bone marrow transplantation for resistans multiple myeloma//Blood.-1987.-70.-P.869-872.
19. Barl9gie B., Jagannath S., Desican K.R. Total Therapy with Tandem Transplants for Newly Diagnsed Multiple Myeloma/ZBlood.-1999.-93 .-P.55-65.
20. Barlogie B., Shaughnessy J., Tricot G., et al. Treatment of multiple myeloma//Blood.-2004.-103.-P.20-32.
21. Barragan E., Cervera J., Bolufer P., et al. Prognostic implications of Wilms tumor gene (WT1) expression in-patients with de novo acute myeloid leukemia//Haematologica.-2004.-89.-P.926-933.
22. Bataille R., BoccadoroM., Klein B. et al. C-reactive protein and beta2 microglobulin produce a sample and powerful myeloma staging system//Blood.-1992>80.-P.733—737.
23. Bataille R., Durie B.G.M., Grenier J. et al. Prognostic factors and' staging in multiple myeloma: A reappraisal//.!. Clin: Oncol.-1986.-4.-P.80-87.
24. Bataille R., Durie B.G.M., Grenier J. Serum beta 2 microglobulin and survival duration in multiple myeloma: A simple reliable marker for staging.//Br. J. Haematol.-1983.-55.-P.439—447.
25. Bataille R., Lourdan M., Zhang X. et al. Serum levels of interleukin-6, a potent myeloma cell growth factor, as a reflect of disease severity plasma cell dyscrasia//J. Clin. Invest.-1984.-84.-P.2008-2011.
26. Beauvais D.M., Burbach B.J., Rapraeger AC. The syndecan-1 ectodomain regulates {alpha}v{beta}3 integrin activity in human mammary carcinoma cells.//J. Cell. Biol.-2004.-167.-P. 171-181.
27. Bergsagel D.L., Wong О., Bergsagel P.L. Benzene and multiple myeloma: appraisal of scientific evidence/ZBlood.-1999.-94.-1174-1182
28. Bernfield M., Gotte M., Park P.W. et al. Functions of cell surface heparan sulfate proteoglycans//Ann. Rev. Biochem.-1999.-68.-P.729-77.
29. BGM Durie, J-L Harousseau, JS Miguel et all. Международные единые критерии ответа при множественной миеломе/ZLeukemia!-2006.-20.-Р.1467-1473.
30. Blade J., Samson D., Reece D., et al. Criteria for evaluating disease response and progression in patients with multiple myeloma treated by high-dose therapy and haematopoietic stem cell transplantation//Br. J. Haematol.-1998.-l 02.-P.1115-1123.
31. Borset M., Hjorth-Hansen H., Seidel C. et al. Hepatocyte growth factor and its receptor c-met in multiple myeloma//Blood.-1996.-88.-P.3998-4004.
32. Borset M., Waage A., Brekke O.L., Heiseth E. TNF and IL-6 are. potent growth factors for OH-2, a novel human myeloma cell line.//Eur.J:Haematoh-1994.-53 :-P.31-37.
33. Boyapati A., Kanbe E., Zhang D.E. p53 alterations in myeloid leukemia//Acta Haematol:-2004.-111 .-P. 100-106.
34. Вгеппе A.-T., Baade Ro Т., Waage A. et ah Interleukin'21 is a growth and survival factor for human myeloma cells//Blood.-2002.-99.-P.3756—3762.
35. Burington B:, Barlogie В., Zhan F., et al. Tumor cell Gene expression changes following Short-term in vivo exposure to single agent chemotherapeutics are related to survival in Multipal Myeloma//Clin Cancer Res.-2008.-14(15).-P.4821 4829.
36. Call K.M., Glaser Т., Ito C.Y., et al. Isolation and characterization of a zinc finger polypeptide gene at the human chromosome 11 Wilms tumor locus//Cell.-1990.-60.-P.509-520.
37. Cavo M., Zamagni E., Tosi P., et al. First-line therapy with thalidomide and dexamethasone in preparation for autologous stem cell transplantation for multiple myeloma//Haematologica.-2004.-89.-P.826-831.
38. Chen F., Castranova V., Shi X. New insights into the role of Nuclear Factor-KB in cell growth regulation//Am. J. Pathol.- 2001.-159.-P.387-397.
39. Chiusa L., Francia de Cell P., Campisi P., et al. Prognostic value of quantitative analysis of WT1 gene transcripts in adult acute lymphoblastic leukemia//Haematologica.-2006.-91 .-P.270-271.
40. Condomines M, Hose D, Raynaud P et al. Cancer/testis genes in multiple myeloma: expression patterns and prognosis value determined by microarray analysis//.! Immunol.-2007.-178.-P3307-3315.
41. Creiner J., Ringhoffer M., Simikopinko O., et al. Simultaneous expression of different immunogenic antigens in acute myeloid leukemia//Exp. Hematol.-2000l-28.-P. 1413-1422.
42. D'Amato R.J., Loughnan M.S., Flynn E., Folkman J. Thalidomide is an inhibitor of angiogenesis/ZProc. Natl. Acad. Sci. US A.-1994.-91.-P.4082-4085.
43. Dalton W.S. The tumor microenvironment: focus on myeloma//Cancer Treat. Rev.-2003.-29.-P. 11-19.
44. Damiano J. S., Cress A. E., Hazlehurst L.A. Cell Adhesion Mediated Drug Resistance (CAM-DR): Role of Integrals and Resistance to
45. Apoptosis in Human Myeloma Cell Lines//Blood.-1999.-93.-P. 16581667.
46. Davies F.E., Raje N., Hideshima T., et al. Thalidomide and immunomodulatory derivatives augment natural killer cell cytotoxicity in multiple myeloma//Blood.-2001 .-98.-P210-216.
47. Derksen P.W., Keehnen R.M., Evers L.M. et al. Cell surface proteoglycan syndecan-1 mediates hepatocyte growth factor binding and promotes Met signaling in multiple myeloma//Blood.-2002.-99.-P.1405—1410.
48. Desplaniques G, Giuliani N, Dilsignore R et al. Impact of XIAP protein levels on the survival of myeloma cells//Haematologica.-2009.- 94.-P.87-93.
49. Deveraux Q.L., Takahashi R., Salvesen G.S., et al. X-linked IAP is a direct inhibitor of cell-death proteases//Nature.-1997.-388.-P.300-304.
50. Drach J., Gattringer C., Glassl H. et al. The biological and clinical significance of the Ki-67 growth fraction in multiple myeloma//Hematol. Oncol.-1992.-10.-№2.-P. 125-134.
51. Durie B.G., Salmon S.E., A clinical stading system for multiple myeloma. Correlation of measured myeloma cell mass with presenting clinical features, response to treatment, and survival//Cancer.-1975.-36-P.842-854.
52. Durie B.G.M., Stock-Novack D., Salmon S.E. et al. Prognostic value of pretreatment serum beta2 microglobulin in myeloma: A Southwest Oncology Group study//Blood.-1990.-75.-P.823—830.
53. Epping M.T., Bernards R. A causal role for the Human tumor antigen prreferntially expressed antigen of Melanoma in cancer//Cancer Res.-2006.-66 (22).-P. 10639- 10642.
54. Evan G., Liltlewood T. A matter of life and cell death//Science.-1998.-281.-P.1317-1322.
55. Fonseca R., Blood E., Rue M., et al. Clinical and biologic implication of recurrent genomic aberration in myeloma//Blood.-2003.-101.-P.4569-4575.
56. Fonseca R., Debes-Marun C.S., Picken E.B., et al. The recurrent IgH translocations are highly associated with nonhyperdiploid varian multiple myeloma//Blood.-2003.-102.-P.2562-2567.
57. Fu J., Jin Y, Arend L.J. Smac3, a novel Smac/DIABLO splicing variant, attenuates the stability and apoptosis-inhibiting activity of X-linked inhibitor of apoptosis, protein//J. Biol. Chem.-2003.-278.-P. 52660-52672.
58. Gaiger A, Schmid D, Heinze G, Linnerth B, Greinix H, Kalhs P, et al.Detection of the WT1 transcript by RT-PCR in complete remission has no prognostic relevance1 in de novo acute myeloid* leukemia//Leukemia.-1998.-12.-P. 1886-94.
59. Gaiger A., Reese V., Disis M.L. et al. Immunity to WT1 in the animal model- and in patients with acute myeloid' leukemia//Blood.-2000.-96(4).-P. 1480-1489.
60. Garcia-Gila M., Cabanas C., Garcia- Pardo A. Analysis of the activation state of a4bl integrin in human B cell lines derived from myeloma, leukemia or lymphoma//FEBS Lett.-1997.-418.-P.337-340.
61. Gastinne T., Leleu X., Duhamel A. et al. Plasma cell growth fraction using Ki-67 antigen expression identifies a subgroup of multiple myeloma patients displaying short survival within the ISS stage I//Eur. J. Haematol.-2007.-79.-№4-P.297-304.
62. Georgii-Hemming P., Wiklund HJ., Ljunggren O., Nilsson K. Insulinlike growth factor I is a growth and. survival factor in human multiple myeloma cell lines//Blood.-1996.-88.-P.2250-2258.
63. Goellner S., Steinbach D., Schenk T., et al. Childhood acute myelogenous leukemia: Association between PRAME, apoptosis- and MDR- related gene expression//Eur. J of Cancer.-2006.-42.-P.2807-2814.
64. Greaves M.F.//Cancer. Surveys.-1982.-1.-P. 189-204.
65. Greipp P.R., Lust J.A., O'Fallon W.M. et al. Plasma cell labeling index and beta2 microglobulin predict survival independent of thymidine-kinase and C-reactive protein in multiple myeloma//Blood:-1993.-81.-P.3382—3387.
66. Greipp P.R., Lust J.A., O'Fallon W.M. et al. Plasma cell labeling index and beta2 microglobulin predict survival independent of thymidine-kinase and C-reactive protein=in multiple myeloma//Blood.-1993.-81.-P.3382—3387.
67. Guikema J.E.J., Hovenga S., Vellenga E. et- al. GD27 is heterogeneously expressed in multiple myeloma: low CD27 expression^ in patients with high-risk disease//Br. J. Haematol.-2003.-121.-P.36-43.
68. Gupta D:, Treon S.P., Shima Y. et al. Adherence of multiple myeloma cells to bone marrow stromal cells upregulates vascular endothelial growth factor secretion: therapeutic applications//Leukemia.-2001.-15.-P.1950-1961.
69. Haber D.A., Sohn R.L., Buckler A.J., et al. Alternative splicing and genomic structure of the Wilms tumor gene WTl//Proc. Natl. Acad. Sei USA.-1991 .-88.-P.9618-9622.
70. Hallek M., Bergsagel P. L., Anderson K.C. Multiple myeloma: increasing evidence for a multistep transformation process/ZBlood.-1998.-Vol.91 .-№ 1 .-P.3-21.
71. Hatta Y, Takeuchi T, Saitoh T et al. WT1 expression level and clinical factors in multiple myeloma//J Exp Clin Cancer Res.-2005.-24.-P.595-599.
72. Heckman C., Mochon E., Arcinas M., et al. The WT1 protein is a negative regulation of the normal bcl-2 allele in t(14;18) lymphomas//J Biol Chem.-1997.-272.-P. 19609-19614.
73. Hideshima T., Bergsagel P.L , Kuehl W.M. et al. Advances in biology of multiple myeloma: clinical applications//Blood.-2004.-104.-607-618.
74. Hideshima T., ChauhanD., Hayashi T. et al. The biological sequelae of stromal' cell-derived factor—1 alpha in multiple myeloma//Mol. Cancer Ther.-2002.-1 .-P.539—544.
75. Hideshima T., Chauhan D., Shima Y., et al. Thalidomide and its analogs overcome drug resistance of human multiple myeloma cells to conventional threpy//Blood.-2000.-96.-P.2943-2950.
76. Hideshima T., Raje N., Richardson P.G., et al. A review of lenalidomide in combination with dexamethasone for the treatment of multiple myeloma//Ther Clin Risk Manag.-2008.-4(l).-P.129-136.
77. Hideshima T., Richardson P. Anderson K.C. Novel therapeutic approaches for multiple myeloma//Immunological Reviews.-2003.-194.-P. 164-176.
78. Hjorth-Hansen H., Waage A., Borset M. Interleukin-15 blocks apoptosis and induces proliferation of the human myeloma cell line OH-2 and freshly isolated myeloma cells//Brit. J. Haematol.-1999.-106.-P.28-34.
79. Holclic M., Korneluk R. G. X-chromosome-linked Inhibitor of Apoptosis (XIAP)//Nature Reviews Molecular Cell Biology.-2001.-2.-P.550-556.
80. Hosen N., Sonoda Y., Oji Y., et al. Very low frequencies of human normal CD34+ haematopoietic progenitor cells expression the Wilms tumor gene WT1 at levels similar to those in leukemia cells//Br. J. Haematol.-2002.-116.-P.409-420.
81. Hu S., Yang X. Cellular inhibitor of apoptosis 1 and 2 are ubiquitin ligases for the apoptosis inducer Smac/DIABLO//J. Biol. Chem.-2003.-278.-P. 10055-10060.
82. Huang Y., Park Y.C., Rich R.L., et al. Structural basis of caspase inhibition by XIAP: differential roles of the linker versus the BIR domain//Cell.-2001 .-104.-P.781-790.
83. Humphries M.J. Integrin structure//Biochem. Soc. Trans.-2000.-28,-P.311-339.
84. Joazeiro C.A., Weissman A.M. RING finger proteins: mediators of ubiquitin ligase activity//Cell.-2000.-102.-P.549-552.
85. Kanavaros P.,. Stefanaki K., Vlachonikolis J: et al. Immunohistochemical expression of the p53, p21\waf-l, Rb, pl6 and Ki-67 proteins in multiple myeloma//Anticancer Res.-2000.-20.-N6B.-P.4619—4625.
86. Kavano M., Hirano T., Matsuda T. et al. Autocrine generation and essential requirement' of BSF/IL-6 for human multiple myeloma//Nature.-1988.-332.-P.83-85.
87. Kawano M.M., Huang N., Harada H. et al. Identification of immature and mature myeloma cells in the bone marrow of human myelomas//Blood.-1993.-82.-P.564— 570.
88. Klein B., Zhang XG., Jourdan M. et al. Paracrine rather than autocrine regulation of myeloma-cell growth and differentiation by interleukin-6//Blood.-l 989.-73.-P.517-526.
89. Kool M., van der Linden M., de Haas M., et al. MRP3, an organic anion transporter able to transport anti-cancer drugs//Proc. Natl. Acad. Sci.USA.-1999.-96.-P.6914-6919.
90. Kumar S., Rajkumar S.V., Kimlinger T. et al. CD45 expression by bone marrow plasma cells in multiple myeloma: clinical and biological correlation//Leukaemia.-2005.-19.-N8-P. 1466-1470.
91. Kyle R.A., Child J.A., Durie B.G.M. Criteria for the classification of monoclonal gammapathies, multiple myeloma, and related disorders: a report of the international Myeloma Working Group//Br.J.Haematol.-2003.-12 l-P.749-757.
92. Kyle R.A., Garton J.P. Spectrum of IgM monoclonal gammopathy in 430 cases//Mayo ClinProc.-1987.-62.-P;719-731.
93. Kyle R.A., Gertz M:A., Witzig T. E. et al. Review of 1027 Patients With Newly Diagnosed Multiple Myeloma//Mayo. Clin. Proc.-2003.-78.-P.21-331
94. Lee J.S., Scala S., Matsumoto Y., et al. Reduced drug accumulation and multidrug resistance in human breast cancer cells without associated P-glycoprotein or MRP overexpression//J Cell Biochem.-1997.-65.-P.513-526.
95. Leilst M., Jäättelä M. Four deaths and funeral: from caspases to alternative mechanisms//Nature Reviews Molecular Cell Biology.-2001.-2.-P.589-598. t
96. Leilst M., Jäättelä M. Four deaths and funeral: from caspases to alternative mechanisms//Nature Reviews Molecular Cell Biology.-2001.-2.-P.589-598.
97. Lu Z.Y., Zhang X.G., Wijdenes J. et al. Interleukin 10 is a growth factor for human myeloma cells//Blood.-1995.-85.-P.2521-2527.
98. Luque R., Garcia-Trujillo J.A., Camara C. et al. CD106 and activated-CD29 are expressed on myelomatous bone marrow plasma cells and their downregulation is associated with tumour progression//Br. J. Haemat.-2002.-l 19.-P.70-78.
99. MacFarlane M., Merrison W., Bratton S.B., et al. Proteasome-mediated degradation of Smac during apoptosis: XIAP promotes Smac ubiquitination in vitro//J. Biol. Chem.-2002.-277.-P.36611-36616.
100. Malpas J.S., Bergsagel P.L., Kyle R., et al. Myeloma. Biology and management//3-rd Ed. Newcastle.-2004.-P.163-194.
101. Mateo G., Castellanos M., Rasillo A. et al. Genetic Abnormalities, and Patterns of Antigenic Expression* in Multiple Myeloma//Clin. Cancer Res.-2005.-ll.-N10-P.3661—3667.
102. Matsushita M, Yamazaki R, Ikeda H, Kawakami. Y. Preferentially expressed antigen of melanoma (PRAME) in the development of diagnostic and»- therapeutic methods for hematological-malignancies//Leuk Lymph.-2003 .-44.-3 .-P:439-444.
103. Matsushita M., Yamazaki R., Ikeda H. et al. Preferentally expressed antigen of Melanoma (PRAME) in the development of diagnostic and therapeutic metods for hematological malignancies//Leukemia&Lymphoma.-2003.-44.-3 .-P.439-444.
104. McElwan T.J., Powles R.L. High-dose intravenous melphalan for plasma-cell leukemia and myeloma//Lancet.-1983.-l.-P.822-824.
105. Michigami T., Shimizu N., Williams P.J. et al. Cell-cell contact between marrow stromal cells and myeloma cells via VCAM-1 and a(4)b(l)-integrin enhances production of osteoclast—stimulating activity//Blood.-2000.-96.-P. 1953—1960.
106. Miller, L.K. An exegesis of LAPs: salvation and'surprises from BIR motifs//Trends Cell. Biol.-1999.-9.-P.323-328.
107. Mitsiades CS, Mitsiades N, Poulaki V et al. Activation of NF-kappaB and upregulation of intracellular anti-apoptotic proteins via the IGF-1/Akt signaling in human multiple myeloma cells: therapeutic implications//©ncogene.-2002.-21.-P.5673-83.
108. Moehler T.M., Neben K., Ho A.D., Goldschmidt H. Angiogenesis in hematologic malignancies//Ann. Hematol.-2001.-80.-P.695-705.
109. Moreau P., Robillard N., Avet-Loiseau H. et al. Patients with GD45 negative multiple myeloma receiving high-dose therapy have a shorter survival than those with CD45 positive multiple myeloma//Haematologica.-2004.-89.-P.547—551.
110. Nakagawa Y, Abe S, Kurata M et al. IAP family protein expression correlates with poor outcome of multiple5 myeloma patients in association with chemotherapy-induced overexpression of multidrug resistance genes//Am J Hematol.-2006.-81.-P.824-83k
111. Nakatani K., Sakane H., Thompson DA., et al. Identification of a human AKT3 (protein kinase b gamma) which contains the regulatory serine phosphorylation site//Biochem Biophys Res Commun.-1999.-257.-P.906-910.
112. Nicholson, D.W. Apoptosis. Baiting death inhibitors//Nature.-2001.-410.-P.33-34.
113. Norfolk D.} Child J.A., Cooper E.H. et al. Serum beta 2 microglobulin in myelomatosis: Potential value in stratification and monitoring//Br. J. Cancer.-1979.-39.-P.510-515.
114. Oh Y., Gucev Z., Ng L., Muller H.L., Rosenfeld R.G. Antiproliferative actions of insulin-like growth factor binding protein (IGFBP)-3 in human breast cancer cells//Prog. Grow. Fact. Res.-1995.-6.-P.503—512.
115. Ong Y.L., McMullin M.F., Bailie KEM, et al. High bax expression is a good prognostic indicator in acute myeloid leukemia//Br. J Haematol.-2000.-111 .-P. 182-189.
116. Perez-Simon J.,A., Garcia-Sanz R., Tabernere M.D., et al. Prognostic value of numerical chromosomal aberrations in multiple myeloma: a FISH analysis of 15 different chromosoms//Blood.-1998.~91.-P.3366-3371.
117. Proto-Siqueira R., Figueiredo- Pontes. L.L., Panepucci R.A. et al. PRAME is a membrane and cytoplasmic protein aberrantly expressed in chronic lymphoid leukemia and mantle cell lymphoma/ZLeukemia Research.-2006.-30.-P. 1333-1339.
118. Qin Y, Zhu H, Jiang B et al. Expression patterns of WT1 and PRAME in acute myeloid leukemia patients and their usefulness for monitoring minimal residual disease//LeukResearch.-2009.-33.-P.384-390.
119. Rajkumar S.V., Leong .T, Roche P.C., et al. Prognostic value of bone marrow angiogenesis in multiple myeloma//Clin. Cancer Res.-2000.-6.-P.3111-3116.
120. Rapraeger A.C. The coordinated regulation of heparan sulfate, syndecans and cell behavior//Curr. Opin. Cell Biol.-1993.-5.-P.844-853.
121. Rawstron A., Barrans S., Blythe D. et al. Distribution of myeloma plasma cells in peripheral blood and bone marrow correlates with CD56 expression//Br. J. Haematol.-1999.-104.-P. 138-143.
122. Reiman T., Seeberger K., Taylor B.J., et al. Persistent preswitch clonotypic myeloma cells correlate with decreased survival: evidence for isotype switching within the myeloma clone//Blood.-2001.-98.-P.2791-2740.
123. Richardson P. G., Blood E., Mitsiades C. S., et al. A randomized phase 2 study of lenalidomide therapy for patients with relapsed or relapsed and refractory multiple myeloma//Blood.-2006.-108.-10.-P.3458-3464.
124. Ridley R.C., Xiao H., Hata H. et al. Expression of syndecan regulates human myeloma plasma cell adhesion to type I collagen/ZBlood.-1993 .-81 .-P.767-774.
125. Riedel D.A., Pottern L.M. The epidemiology of , multiple myeloma//Hematol Oncol Clin North Am.-1992.-6.-P.225-247.
126. Rivera M.N., Haber D.A. Wilms tumor: connecting tumorogenesis and organ development in the kidney//Nat. Rev. Cancer.-2005.-5.-P.699-712.
127. Ross D.D. Novel mechanisms of drug resistance in leukemia//Leukemia:-2002.-14.-P.467-473.
128. Ross D.D., Yang W., Abruzzo L.V., et al. Atypical multidrug resistance: breast cancer resistance protein messenger RNAexpression in mitoxantrone-selected cell lines//J Natl. Cancer Inst.1999.-91.-P.429-433.
129. Saatchi C, Caglayan A, Kocyigit I et al. Expression of WT1 gene in multiple myeloma patients at diagnosis: is WT1 gene expression a useful marker in multiple myeloma//Hematology.-2010.-Vol.l5.-Nl.-P.39-41.
130. Sahota S.S., Garand R., Mahroof R. et al. V(H) gene analysis of IgM-secreting myeloma indicates an origin from a memory cell undergoing isotype switch events//Blood.-1999.-Vol.94.-P. 1070-1146.
131. San Miguel J.F., Garcia-Sanz R., Gonzalez M. et al: A new staging system for multiple myeloma based on the number of S-phase plasma cells//Blood.-1995.-85.-P.448—455.
132. Sanz—Rodriguez F., Hidalgo A., Teixido J. Chemokine stromal cell-derived factor-la modulates VLA-4 integrin-mediated multiple myeloma cell1 adhesion to CS-l/fibronectin and VCAM-l//Blood.-2001 .-97.-P.346-351.
133. Schlessinger J., Plotnikov A.N., Ibrahimi O.A. et al: Crystal structure of a ternary FGF—FGFR-heparin complex reveals a dual role for heparin in FGFR binding and dimerization//Mol. Cell Endocrinol.2000.-6:-P.743—750:
134. Schwartz M.A., Ginsberg M.H. Networks and crosstalk: integrin signaling spreads//Nat. Cell. Biol.-2002.-4.-E65-E68.
135. Sezer O., Niemoller K., Eucker J. et al. Bone marrow microvessel density is a prognostic factor for survival in patients with multiple myeloma//Ann. Hematol.-2000.-79.-P.574—577.
136. Shain K.H., Landowski T.H., Dalton W.S. The tumor microenvironment as a determinant of cancer cell survival: a possible mechanism for de novo drug resistance//Curr. Opin. 0ncol.-2000.-12.-P.557-563.
137. Shou Y., Martelli M.L., Gabrea A., et al. Diverse karyotypic abnormalities of the c-myc locus associated with c-myc dysregulation and tumor progression in multiple myeloma//Proc. Natl. acad. Sci. USA.-2000.-97.-P.228-233.
138. Silke J., Ekert P.G., Day C.L. et al. Direct inhibitor of caspase 3 is dispensable for the anti-apoptotic activity of XEAP//The EMBO Jornal.-2001.-20.-12.-P.3114-3123.
139. Singhal S., Mehta J., Desikan R. et al. Antitumor activity of thalidomide in refractory multiple myeloma//N. Engl. J. Med.-1999.-341.-P.1565-1571.
140. Smadja N.V., Bastard C., Brigaudeau C., et al. Hypodiploidy is a major prognostic factor in. multiple myeloma//Blood.-2001.-98.-P.2229-2238.
141. Srinivasula S.M., Hedge R., Saleh A., et al. A conserved XIAP-interaction< motif in caspase-9 and Smac/DIABLO regulates caspase activity and apoptosis//Nature.-2001 .-410.-P. 112-116.
142. Sun Y. E 3 Ubiquitine ligases as Cancer Targets and Biomarkers//Neoplasia.-2006.-8.-P.645-654.
143. Tai Y.T., Podar K., Catley L. et al. Insulin-like growth factor-1 induces adhesion and migration in human multiple myeloma cells via activation of bl—integrin and phosphatidilinositol 3'-kinase/AKT signaling//Cancer Res.-2003.-63.-P.5850-5858.
144. Tamm I., Kornblau S.M., Segall H., et al. Expression-and prognostic Significance of IAP- Family genes in Human Cancer and Myeloid Leukemias//Clin. Cancer Res.-2000.-6.-P.1796-1803.
145. Tanaka Y., Kimata K., Adams D.H;, Eto S. Modulation of cytokine function by heparan sulfate proteoglycans: sophisticated models for the regulation of cellular responses to cytokines//Proc. Assoc. Am. Physicians.-1998.-110.-P.118- 125.
146. Valeria C. C. Andrade, Vettore A. L., et al. Prognostic impact of cancer/testis antigen expression in advanced' stage multiple myeloma patients//Cancer Immunity.-2008.-8.-P.2-10.
147. Vescio R.A., Cao J., Hong C.H: et al. Myeloma Ig heavy chain V region sequences reveal prior antigenic selection and marked somatic mutation but no intraclonal diversity//.!. Immunol.-1995.-Vol.155.-P.2487-2497.
148. Vivanco I., Sawyers C.L. The phosphatidilinositol 3-kinase — Akt pathway in human cancer. Nature reviews: cancer. 2002; 2: 489-501
149. Watari K., Tojo A., Nagamura-Inoue T., et al. Indefication of a melanoma antigen, PRAME, as a BCR/ABL inducible gene//FEBS Lett.-2000.-466.-P.367-371.
150. Wijdenes J., Vooijs W.C., Clement C. et al. A plasmacyte selective monoclonal antibody (B-B4) recognizes syndecan-l//Br. J. Haematol.-1996.-94.-P.318-323.
151. Xu J.L., Lai R., Kinoshita T. et al. Proliferation, apoptosis, and intratumoral vascularity in multiple myeloma: correlation with the clinical stage and cytological grade//J. Clin. Pathol.-2002.-55.-P.530-534.
152. Yaccoby S., Barlogie B., Epstein J. Primary myeloma cells growing in SCID-hu mice: a model for studying the biology and treatment of myeloma and its manifestations//Blood.-1998.-92.-P.2908-2913.
153. Yang L., Han Y, Saiz F.S. et al. A tumor suppressor and oncogene: the WT1 story//Leucemia.-2007.-21.-P.868-876.
154. Yang, Y, and Yu, X. Regulation of apoptosis: the ubiquitous way//FASEB J.-2003.-17.-P.790-799.