Автореферат и диссертация по медицине (14.00.31) на тему:Экспериментальное изучение влияния эремомицина и сочетания клафорана с лизоцимом на лимфатическую и калликреин-кининовую системы

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСОТ ЦЕНТРАЛЬНЫЙ ИНСИТУТ УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЯ ВРАЧЕЙ

На правах рукописи

ВАРАКИНА Надежда Ивановна

ЭКСЖРИМЕНТАЛЫЮЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЭРйЮМИЦША И СОЧЕТАНИЯ КЛАФОРАНА С ЛИЗОЦИМОМ НА ЛИМФАТИЧЕСКУЮ И КАЛЛИКРЕИН-КИНИНОВУЮ СИСТЕМ!

(14.00.31 - Химиотерапия и антибиотики)

\

Автореферат диосертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

МОСКВА - 1992

П

)

Работа выполнена в Центральном институте усовершенотвования врачей Министерства здравоохранения РСФСР

Научны." руководитель - доктор биологических наук,

профессор Э.Г.ЩЕРБАКОВА

Научный консультант - доктор биологических наук,

профессор Г.А.ЯРОВАЯ

Официальные оппоненты: доктор медицинских нау?, • профессор Е.А.ВЩШИНА ,

доктор медицинских наук, профессор В.М.МЕЛЬНИКОВА

Ведущее учреждение: Институт хирургии ел. А.В.Вшневокого

Защита состоится .¿¿¿¿¿сЯ/_• 1992 года

в I^ часов на заседании специализированного совета Д.001.05.01 в научно-исследовательском институте по изысканию новых антибиотиков Российской Академии медицинских наук С119867, Москва, Б.Пироговская ул., д.II), телефон 246-99-80; 246-97-71

С диссертацией можно ознакомиться в библиотека института по адресу: г.Москва, Б.Пироговская ул.,д.II

II п

Автореферат разослан__ 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических . наук /-г

Т. А.УСПЕНСКАЯ

к

' • ' Г

. ; ^Актуальность темц. Прогрэсс современной антпбиотнкотера-^^.'да^п^едполагает создание новых шцшвс антибактериальных препаратов, а также изыскаше путей повышения эффективности существующих антибиотиков.

Важнейшая патогенетическая роль лимфатической системы при гнойно-воспалительных заболеваниях, сопровождающихся лнмфоген-ным распространением или персистенцией возбудителя, определяет возрастание интереса к лимнологическим аспектам антибиотико-терапии, изучению фармакокинетики и фарглакодяаамлкя антибиотиков в лимфатической системе, введению ряда антибиотиков непосредственно в лимфатические сосуды - эндолимфаткчески (ЭЛ) (Щербакова Э.Г., 1983-1591; Панченков Р.Т. и др., 1984 ч др.). С точки зрения взаимоотношений с лимфатической системой значительный интерес представляют гликопептидные антибиотики, поскольку принято считать, что высокомолекулярные вещества преимущественно всасываются в лимфатическое русло (Малек П,, 1963).

Перспективным путем повышения эффективности антибпотико-терапии бактериальных инфекций, особенно на фоке вторичккх . игкукодефлцитшх состояний, является сочетанное применение антибиотиков с препарата™, обладающими иммуномодулгфующпм действием. Одним лз наяболээ интересных препаратов такого рода ягляется лизоцим, который относится к факторам неспецнфл-чс ясой резистентности органазьа и широко применяется в медицинской практике благодаря уникальному сочетанию ферментных, антимикробных, иммуномодулиругащих и других свойств, способнос-та повышать против -инфекционную резистентное!*», препятствовать активации фактора Хагекана (Зубапров Д.М., 1973), синр^гизму

со многими антибиотиками (Бухарин О.В., Васильев Н.В., 1974; Бухарин О.В. и др., 1987). Однако, лииь единичные исследования катится влияния лизоцима на распределение антибиотиков и их действие на лимфатическую систему, в частности, при сочетании ампициллина с лизоцимэм (Щербакова Э.Г. и др., 1989, 1991 ; Ларин Б.А., 1989). Это определяет перспективность изучения взаимодействия с лимфатической системой сочетаний лизоцима с другими сянергедно действующими антибиотиками.

Наряду со значимостью лимфатической система, в молекулярных механизмах регуляции многообразных функций организма ключевые позиции запишет калликреин-кининовая систеьа (i<KC), тесно связанная с зависимыми от фактора Хагемана протеолити-ческими системам и нойтрофилама.

Контроль за деятельностью калликреинов и яротеолитичео-ких ферментов нейтрофилов осуществляется ингибиторами протен-наз, в зависимости от сбалансированности с которыми ККС и нейтрофилы могут выполнять не только занщтные, но и патогенетические функции. При врожденном или приобретенном дефиците cL j-протепназного ингибитора ( «¡¿д—ПИ) чрезмерная активация ККС я дезинтеграция фагоцитов способствуют поступлению во внеклеточную среду свободной эластазы гранулоцитов, что может приводить к лизису эластиновых и коллагеновых волокон с деструкцией собственной соединительной ткани (Fritz н. et ei., 1984; Jannoff A., IS89) KozinF., 1983).

У больных со сниженной антипротеиназной активностью лечение и профилактика гнойных заболеваний представляет значительные трудности из-за высокого риска возникновения обширных и длительно незаживающих воспалительных очагов, тязелых самопод-

двржизавдихся деструктивных заболеваний, Следует такие учитывать, что многие микроорганизмы продуцируют протеолитические ферменты, способные инактивироЕать оЬ ^-ПИ, а липополисаха-риды бактериальной стенки являются мощными активаторами К1СС и некрофилов. Кроме того, совершенно неизученными остаются вопросы ■члияния на указанные си стели антибактериальных препаратов. Очевидно, у таких больных этиопатогенетяческкй подход к лечении должен предусматривать не только достижение полноценного антибактериального эффекта з очаге, на лимро-генном и гематогенном путях распространения инфекция, но и коррекцию антипротеиназной активности, других механизмов поддержания гомеостаза с "четом влияния на них лечебных воздействий,,

Целью настоящей работы явилось экспериментальное обоснование рационального применения нового антибиотика эремомацяна и сочетания клафорана с лазоцимом с позиций их влияния на лимфатическую и калликреин-кининовую система.

Задачи исследования:

- провести экспериментальное сравнительное изучение распределения эремокицина в лимфатической и кровеносной системах при ЭЛ и внутримышечном (в/м) методах введения антибиотика, изучить его влияние-на морфофункциональное состояний лимфатических узлов, состояние ККС, ингибиторы протеиказ и функциональную активность нейтрофилов ;

- изучить влияние лизоцита на фармакокинетику клафорана при одновременном в/м применении препаратов в экспериментах на собаках ;

- изучить в эксперименте влияние лизоцима при его в/м введении на состояние ККС, ингибиторы протеиназ и функциональную активность нейтрофилов ;

- исследовать влияние илафорана и его сочетания с лпзо-цимом на морфофункциональное состояние лимфатических узлов, активность ККС и ингибиторов протеиназ, функциональную активность нейтрофилов при в/м введении здоровым собакам;

- изучить состояние ККС и активность ингибиторов проте-иназ нейтрофилов у больных с различной патологией ;

- оценить влияние одновременного в/м применения лизоцима с клафораном на указанные системы у больных со снияенной антипротеиказной активностью.

Научнря новизна:

- в эксперименте впервые проведено изучение распределения эремошцина в лимфатической система яри в/м и ЭЛ методах введения; выявлено хорошее проникновение эремомяцина в лимфатическую систему при его в/м введении и отсутствие преимуществ ЭЛ применения антибиотика;

- выявлено повышение концентраций клафорана в лимфатической системе, пролонгация его антибактериального дейст: тя в организме и стимулирующий эффект на морфофункциональное состояние лимфатических узлов при его одновременном в/м применении с лизоцкмом;

- проведено изучение взаимодействия эремошцина, клафорана и лизоцима с ККС, ингибиторами протеиназ и функциональной активностью нейтрофилов ; выявлено увеличение активности Л д-Ш, снижение активности ККС и фазовые изменения функциональной активности нейтрофилов после в/м применения лизоцима

и актлЕация ККС послэ применения клафорана ; одновременное введеняе клафорана с лизоцимом вызывает более Еырсхешюа и длительное увеличение активности оС j-Ш ло сравнению с применением одного лизоцяма ; эремомицин на влиял на изученные показатели ;

- получено клиническое подтверждение возмо.?.; .юти быстрой коррекции активности oLj—Ш, ККС и функциональной активности вейтрофялов при применении клафорана с лизоцимом у ЛОР-онко-логическях больных со сниженной антипротен.-гзной активностью сыворотки крови.

Практическая ценность работы:

- экспериментально обоснована схема прпмэн^ния клафорана с лизоцимом, предусматривающая одновременное в/м взедрнлэ препаратов I раз в сутки в сред1шх суточных дозах ;

- получено клинико-лабораторное подтверждение целесообразности одновременного в/м применения клафорана с лизоцимом в средних суточных дозах для повышения эффективности профилактики послеоперационных осложнений и коррекции сниженной антипротеиназной активности у больных с онкологической патологией ЛОР-органов.

Апробагщ. Основные результаты исследований доложены и обсуздены на I Всесоюзной конференции молодых ученых институтов и факультетов усовершенствования врачей "Современные проблемы гомеостаза" (Москва, 1987) ; научной конференции ".Актуальные проблемы лимфологии и ангиологии" (Ц0ЛИ7 врачей, Москва, 1-Я нюня 1989 г.) ; Всесоюзной конференции "Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций" (Москва, 1991) ; Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Патогенез хрониче-

ского воспаления" (Новосибирск, 1991).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем л структура диссертации. Работа изложена на 178 страницах машинописи и состоит из введения, обзора литературы, 3 глав, в которых изложены результаты собственных исследований, заключения, выводов. Библиографический указатель содержит 347 работ, в том числе 129 - отечественных и 218 - иностранных авторов. Диссертация иллюстрирована 24 рисунками, содержит 5 таблиц.

Внедрение. Разработанная схема одновременного применения клафорана с лизоцимом I раз в сутки в средних суточных дозах применяется в ЛОР-отделениях ГКБ К 67 г. Москвы.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛВДОВАНШ

Экспериментальные исследования проведены, на 43 здоровых собаках массой тела от 10 до 15 кг. Все манипуляции по введению препаратов и отбору проб проводили под общим наркозом, вводя интраплеврально тиопентал натрия в виде 2$ раствора в дозе 2 ли/кг. По окончании эксперимента животных заб"вали путем передозировки наркотического вещества. Контролем слу-жшш 5 интактных собак в состоянии наркоза.

В работе использованы лекарственные црепараты: эремоми-цин, предоставленный ВНИИ по изысканию новых антибиотиков СССР ,- цефотаксим (клафоран) фирмы нТЛаа£ ЕстззеГ*; . лизоцим - инъекционный препарат производства ПО Мосмедцрепа-раты им. Л.Я.Карпова.

В экспериментальных исследованиях препараты вводили

в/м, однократно, в дозах, адекватных средним суточным для взрослого человека: эремокицин - 25 мг/кг, цефотаксим - 30 мг/кг, лизоцлм - 2 мг/кг. Кроме того, эремомицин вводили в периферические лимфатические сосуда в области скачковой вены !.,.. задней конечности собак но методу, предао".енног.у Р.Т.Па1 юнковым л Ю.Е.Выренковым с соавт. (1979).

Концентрации эремомицина (%р) и клафорана (К^) в лимфе, сыворотке крови.спинномозговой жидкости и гомогенатах органов определяли методом диффузии в агар с использованием в качестве тест-микроба спор Вас. зиМШз атсс 6633. Данные фармакокинетяки эремомидина в крови после ЭЛ введения интерпретировали в ракхах „вучастевой модели, после в/м введения эремомицина и клафорана - по двучастевой модели со всасыванием (Соловьев В.Н. и др. 1980).

Содержание лизоцима в исследуемых образцах определяли методом диффузии в агар по лизису ацетонового порошка клеточных стенок Шогосоесиз 1узойеШ;1о-из штамм 2665 (Каграма-нова К.А., Ермольева З.В. 1966). Морфологическое исследование тканей тазоЕых, брыжеечных и трахеобрснхдальных лимфатических узлов, почки, печени, миокарда и клаечника проводили па криостатных срезах толщиной 7 мхм, окрашенных гал-лоцианином с докраской родамином-62 (Имурун Р.И., 1967). Морфометрическую оценку клеточного состава лимфатических узлов выполняли методом "точечного счета" с помоцьз окулярной сетки (Автавдилов Г.Г., 1973).

Определение компонентов ККС - активности калликреина я содержания прекалликреина - проводили в- сыворотке крови хро-матографическим методом, предложенным Пасхиной Т. и. и Яро-

вой Г.А. (1974). При экспериментальных исследованиях для определения активности ККС в сыворотке крови собак был использован упро^онный вариант метода, не требующий хромато-графической колонки (Доцекко В.Л. и др. 1982).

Активность ингибиторов протедназ - / д-ПИ и ^ 2~МГ в сыворотке крови человека и животных определяли при помощи унифицированного энзилатического метода (:1арт.г-кова В.Ф., Пасхина Т.С. 1979).

£яя оценки функционального состояния нейтрофилов исчоль-зовали модифицированную реакцию восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-теса) в монослое клеток (01^0г<1 и.к., 1970).

Киинико-лабораторные исследование проведены у 80 больных, в том числе страдающих хронической почечной недостаточностью и находящихся на гемодиализе (13 чел.), онкологически™ заболеваниями ЛОР-органов (12 чел.) и эндокринной системы (.17 чел.), не специфическими колитами (18 чел.), бронхолегочными заболеваниями (20 чел.).

Цифровой ттериал, полученный при фармакокянетических, морфологических, цитохимических и биохимических исследованиях, обрабатывался статистически. Достоверность определяли по методу Стыэдента с использованием таблиц Стрелкова Р.Б.; различия принимались за достоверные при уровне вероятности безошибочного суждения, равном или вша 957, (Рй 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСЗЩЕШЗ

Проведенное нами сравнительное изучение распределения эремомицина в лимфатической системе после его ЭЛ я в/м введения не выявило преимуществ ЭЛ метода введения яо сравнению с в/м.

Показано, что эремомицин при в/м введении хоропо проникает в лимфатическую систему. В первые 3 ч после гз/м введения эремомицина его концентрации в центральной лимфе составляли 28,5 + 5,8 мкг/мл я были сопоставимы с такозымн в сыворотке крови (23,3+2,7). Через 6 ч Кдр в лимфе становились в 1,5 раза выше, чем в крови, и в 2,5 раза выше, чр'т к этому сроку после ЭЛ введения, и эти соотношения сохранялись до 24 ч. Обращает на себя внимание тот факт, что после в/м введения эремомицина его концентрации в лимфатических узлах я тканях других внутренних органов нарастали постепенно и через 18-24 ч были выше, чем максимальные концентрации в сыворотке крови.

После ЭЛ введения эремомицина его максимальные концентрации в центральной лим|е создавались узе через 15 млн и достигали 1834+ 48,5 мкг/мл. К 2 ч уровень антибиотика резко снижался (до 30- 56 мкг/мл) и через сутки составлял 2,2 + 0,3 щс/мл, В сыворотке крови при этом методе введения максимальные Кдр (44,4+3,2 мест/мл) также создавались уже через 15 (лин, затем они постепенно снижались и к 24 ч составляли 3,1 + 0,88 мкг/мл. В лимфатических узлах максимальные концентрации эре'-рмицлна определялись уже через I ч после ЭЛ введения. При этом наибольшие Кдр (244,5± 10,3 мкг/г) со-

здавались в тазовых лимфатических узлах, регионарных к месту введения, и в 12,5-13,6 раз превышали таковые в отдаленна группах лимфатических узлов (брыжеечных, трахео-бронхиальных), что характерно для этого метода применения антибиотиков. Через 6 и 24 ч такое соотношение концентраций антибиотика в группах лимфатических узлов сохранялось.

Такк-и образом, нами было показано, что при ЭЛ введении зремомицина сохраняется такая общая для ртого метода закономерность, как быстрое создание в центральной лимфе и регионарных лимфатических узлах максимальных концентраций антибиотика, многократно превышающих таковые при в/м введении. Однако для эремомицгна оказалось нехарактерно второе важное преимущество ЭЛ введения - пролонгация циркуляции антибиотика в лимфатическом и кровеносном руслч. Основные фармакоки-нетические параметры, такие как период полувыведения, период полураслределения, Ст, лис отличались незначительно при обоих методах введения.

Морфологическое исследование показало, что эремомицин при в/м применении в выбранной дозо не оказывает повреждающего действия на структуру и клеточный состав, всех исследованных лимфатических узлов. В то же время, после ЭЛ введения препарата через I и 6 ч наблюдался небольшой отек стромы мозгового вещества тазовых лимфоузлов, который исчезал к 24 ч. 3 ткани почек, через 6 ч после ЭЛ введения эремомацина появлялись такие признаки нарушения микроциркуляции, как кежка-нальцевый отек стромы, расширение канальцевых петель и просвета лимфатических сосудов. Через 24 ч, вне зависимости от

метода введения препарата, наблюдади резко выраженный оток почечной стромы, особенно её корковой зоны.

Эремомицян достоверно не изменял активность ХКС при обоих методах- введения по сравнению с контролем (животные в состоянии наркоза). Изучение ингибиторов протеиказ показало, что чере° 30 мин после ЭЛ введения эремомяцяка активность </. снижалась вдвое по сравнению с исходным уровнем и контролем, однако уже черчз I ч этот показатель стойко кортализ^ вался. При в/м применении эремомицина активность -A. j—ПИ не изменялась. При обоих методах введения эремомицина отмечена тенденция к повышении активности et по датой.! ли-

тературы, может быть одним из признаков сгудения крог (Dite

O.v. 1984).

Поскольку эремомяцин является антибиотиком узкого спектра, применяемым для нацеленной терапии инфекций, вызванных чувствительной к нему микрофлорой, а устойчивость к орвмомн-цину и друтям глдкопептидам практически не развивается, то могло считать нецелесообразным созданио чрезмерных концентраций в лимфатической системе, которые мы наблюдали в первое часы после ЭЛ введения. Кроме тогог при Э1 введеши -того антибиотика отмечено более раннее появление межканальцевого отека почечной стромы я саженце антлпротенназной активности сыворотки крови.

Таким образом, при гнойно-воспалительных процессах, в том числе сопровождающихся лимфогенным распространением возбудителей, рациональным является в/м применение эремомицяна.

Экспериментальное исследование неизученных аспектов взаимодействия сочетаний лизоцига и цефалоспоринового антибиотик широкого спектра клафорана с лимфатической системой, ККС, ингибиторами лротеяназ и нейтрофилама явилось предметом второго этапа нашей работы.

Нами впервые было показано, что лизоцим, введенный в/м одновременно с клафораном здоровым собакам, способствует повышенна концентраций антибиотика в органпме. В центральной лимфе в течение 3, ч сохранялось плато высокого уровня концентраций антибиотика (64+5,2 мкг/мл), через 6 ч Квд снижались вдвое, ко дале через 24 ч еще определялись на терапевтическом уровне. Во воз сроки исследования К^ в лимфе превышали таковые при применении одного клафорана в 2-10 раз.

В сыворотке крови после одновретнного применения препаратов высокий уровень антибиотика (50 - 60 мкг/мл) удерживался лигь в течение I ч, через 3 ч К^ снижались в 3,5 раза, ' но до конца суток определялись на терапевтическом уровне. После введения одного клафорана сравнимые концентрации в кро-еи создавались лишь в первые 15 мин ; через 3 и 6 ч Кщ были в 2-8 раз ниже, чем после применения сочетания препаратов, а через 24 ч антибиотик в крови не обнаруживался.

Одновременное введение клафорана с лизоцимом приводило к возрастанию в 1,8-3,6 раза К^ в тканях лимфатических узлов и сохранению терапевтического уровня антибиотика в них до 24 ч, что имеет несомненное значение для блокирования лим-фогенного распространения инфекции.

Выявленное возрастание концентрации клафорана в лимф-\ сыворотке крови и лимфатических узлах может быть обусловлено несколькими механизмами. Ведущим из них, очевидно, является синергизм действия лизоцима и беталакт&'.зшх антибиотиков, в результате которого возрастает антибактериальная активность клафорана я общая бактерицидность биологических жидкостей. Можно предположить, что лизоцлм повышает также . антимикробную активность долгоживущих метаболитов клафорана, в частности, дезоксяацетилцефотаксш.а и способствует его выявлению. Не исключено также влияние лизоцима'как фермента и катионного бе^ка на проницаемость гисто-сосудистых и интер-стициальных барьеров,., степень и прочность связывания анти- ' биотяка и его метаболитов с циркулирующими белками и клеточными структура!®, что может отрэ"<аться на распределении антибиотика в организме.

Морфологическое и глорфоматрическое изучение показало, что сочетание клафорана с лизоцямом приводит к выраженной активации имгдуноморфологических зон лимфатических узлов здоровых собак. При этом объемная д^ля иммунобластов я зрелых плазмо-цитов достоверно повышается уже к 6 ч после введения препаратов и сохраняется1 на высоком ровне до 24 ч, по сравнению с применен:.эм одного клафорана, который, как нами было впервые показано, также оказывает некоторое яммуноактивируыщее действие на лимфатические узлы. Так, через 6 и 24 ч после применения клафорана в герминативных центрах лимфоидаых узелков, паракортякальной зоне и мозговых тяжах объемная доля плазмоцитов и зрелых плазмобластов увеличивалась в 1,5-1,7

раза по сравнению с контролем, однако при этом ширина коры, числи и размеры ли^фоидных узелков практически не изменялись. Анализ собственных и литературных данных (Щербакова Э.Г. 1989, Ларин Б.А. 1989) позволяет полагать, что выявленная активация дымуноморфологяческих зон лимфатических узлов при сочетанном применении клафорана с лизоцимом обусловлена синергизмом им-муноактивирующего действия' применяемых препаратов. Так, по данным Э.Г.Щербаковой и др. (1987), Е.А.Ларина (1989), лизо-цим активирует иммуноморфологические зоны лимфатических узлов,, однако в указанные сроки он вызывает лишь увеличение ширины коры и объемной доли макрофагов, практически не изменяя объемную дола плазмоцитов и плазмсбластов.

Таким образом, ьосле однократного сочетанного применения .лафорана с лизоцимом имеет место более выраженная дммуномор-фологическая активация лимфатических узлов по сравнению с реакцией на введение каждого Из препаратов в отдельности.

В развитие теоретических и прикладных вопросов применения синергидных сочетаний антибиотиков с лизоцимом целесообразно дальнейшее углубленное изучение их взаимоотношений с микроорганизмом, особенно с ККС и ингибиторами протеиназ.

Наш впервые было показано, что однократное в/м введете собакам клафорана с лие нимом вызывает значительное увеличение антппротеиназной активности, приводит к снижению активности ККС и вызывает фазовые изменения функциональной активности нойтрофилов. Изучение влияния к&чздого из препаратов на указанные системы показало, что выявленные нами изменения обусловлены применением лизонима, но сочетшше препаратов вызывав белее вир&женную и продолжительную реакцию со сто-

роны изучаема показателей.

Так, ням удалось показать, что лизоцим в дозе 2 кг/кг повышал активность j—ПИ через 3 ч после введения в 1,5 раза, через 6 ч - в 4 раза, но к 24 ч отмечалась тенденция к нормализации активности этого ингибитора. После применения клафорана в дозе 30 мг/кг активность d ^-ПИ практически не изменялась в течение 24 ч. Применение антибиотика одновременно с лизоцимом приводило, через 3 ч к возрастанию активности ингибитора, подобно описанному при введении лизоцима, но оно было более длительным и активность c¿ j-ПИ достигала максимума к 24 ч.

Мы выявили также ингибируюцее действие лизоцима на ККС, которое проявлялось в снижении активности калликреина в 2 раза и увеличении содержания прекалтакреяна в 1,5 раза через 1-6 ч после введения препарата. Поскольку опыты, проведенные наш in vitro совместно с кафедрой биохимии ВДУВ, не выявили прямого янгнбирукцего действия лизоцима на ККС, можно полагать, что его действие является опосредованным, благодаря тому, что лизоцим как кьтионный белок препятствует активация фактора Хагемана (Зу._аиров Д.М. 1973, Kozin р. 1989). Однократное в/м введение клафор;_ла, наоборот, оказывало активирующее дс :ствие на ККС, что выражалось в снижении активности калликреина и содержания прекалликреина в среднем в 1,6 и 2,5 раза через 1-6 ч после введения препарата. Через 24 ч активность калликреина нормализовалась, в то время как содержание прекалликреина оставалось сниженным в 3 раза по сравнению с исходным. Активность Is^-IT не изменялась в течение 24 ч Експеримента. Выявленная нами активация ККС под

действием клафорана может обусловливать хорошее проникновение антибиотика в очаг воспаления, благодаря общеизвестному сосудорасширяющему действию кинянов (КогЗл ?„, 1939), а индуцированное этой активацией усиление хемотаксиса нейтрофи-лов и освобовдение эластазы вследствие активации ККС объясняет усиление антибактерда" ьного действия антибиотика (Р.КогЗл 1989, Вгоес. н. 1989). Однако, на фоне сниженной антяпротелназной активности сыворотки крови активация ККС будет способствовать углублению дефицита Х^-Ш.

При сочетанном применении клафорана с лизоцимом, как и в случае применения одного лизоцима, выявлено снижение активности ККС. Очевидно, в результате разнонаправленного действия клафорана и лизоцима. это снижение активности ККС было менее сражено, но определялось в течение 24 ч. В связи с тем, что снижение активности ККС приводит к уменьшению проницаемости кровеносных сосудов, не исключено, что этим отчасти объясняется пролонгация антибактериального действия, наблюдаемая наш при сочетаыом применения лизоцима с клафораном.

Под действием лизоцима нами выявлены фазовые изменения ' функциональной активности нейтрофилов. Так, в течение первых 6 ч после введения препарата происходило постепенное увеличение процента НСТ-актавнчх нейтрофилов в 1,3-1,5 раза по сравнению с исходным, К 24 ч этот показатель снижался в 5 раз по сравнению с предыдущим сроком, при этом имело место значительное (в 7-10 раз) увеличение содержания общего числа нейтрофилов за счет клеток небольшого размера с хорошо контурирован-ными сегментными ядрами.

- ь> -

Сочетание' лизоцима с клафораном приводило к более рез • ким и быстром изменениям функциональной активности нэйтрофялов, тогда как один клафоран не влиял на показатели НСТ-теста.

Анализ полученных намл экспериментальных данных позволил выявить новые механизмы, обеспечивающие высокую эффективность сочетания клафорана с лизоцимом в лечении и профилактике гной-но-воспалптельных заболеваний: синергизм яммуномодулярующего действия препаратов, повышение и пролонгация антибактериального действия антибиотика в кровеносной и лимфатической системах, повышение активности Х^ПИ в сочетании с ингибяроваки-ем активности ККС и модуляцией функциональной активности нейт-рофилов.

Полученные материалы явились обоснованием для рекомендации применения клафорана одновремзнно с лизоцимом у больных со сниженной антипрстеиназной активностью, т.е. имеющих повышенный риск возникновения обширных и длительно незаживающих воспалительных очагов. Лабораторное обследование, проведенное нами у 80 больных на базах БНЦХ, кафедр проктология и ЛОР-болезнэй ЦОЛЮТ, института эндокринологии и больницы .'в II г. Косквы, позволило выявите снижение антяпротеиназной активности у 37 больных: дз них у 13 больных с хронической почечной недостаточностью, находящихся на гемодиализе, у 12 больных со средне-тяжелой и тяжолой формами болезни Крона и у 12 больных с ЛОР-онкологическима заболеваниями П и И стадия.

На 'основании полученных экспериментальных данных мы предложили и апробировали для профилактики послеоперационных осложнений в ЛОР-клиняке новую схему сочетанного применения клафорана с лизоцимом, включающую в себя одновременное вяе-

дение препаратов I раз в сутки с использованием клафорана в дозг". I - 2 г и лязоцима 50 - 100 мг. Препараты при: :эняли за 30 мин до операции и затем в течение 5-7 дней послеоперационного периода. Изучение фармакокинетики клафорана при его сочетанном применении с лизоцимом показало, что К^д в сыворотке крови во ьое споки наблюдения р среднем в 4 раза превышали таковые при введении одного клафорана и сохранялись на терапевтическом уровне до 24 ч. В тканях опухоли и лимфатических узлов, удаленных при операции,через 1,5-2 ч после введения препаратов, К^ повышались в 2,5 раза. Ваяно отметить, что введение лизоцима за 2 ч до клафорана практически не о:ц?акалось на фармакокинетяке антибиотика.

У 10 из 12 обследованных больных акти. :юсть была

снижена в среднем в 3 раза по сравнению с физиологическим уровнем и лишь у 2 больных не отличалась от нормы. Снижение аятипротеиназной активности у наблюдаемых нами больных сопровождалось активацией ККС разной степени выраженности: у 4 больных она былг незначительна, а у 8 больных отмечали резкую активацию ККС с 10-кратным повышением активности калли-креина, снижением в 1,3-1,6 раза содержания прекалликреина и активности об ¿-МТ.

У 7 больных, которым перед операцией однократно вводили сочетание клафорана с лизоцимом, через 6 и 24 ч активность ё- д-Ш возрастала в 2,5-3,5 раза по сравнению с исходной, :огда как у 5 больных, получавших только клафоран, активность ^ ПИ но изменялась в течение 24 ч. Возрастание аятицротеи-назной активности при сочетанном применении препаратов создает одтчмальные условия для ограничения зоны воспалительной

■деструкции и тем самым способствует снижению числа лослеопе-'рационных осложнений.

Активность ККС через 24 ч после сочетайного введения кла-форана с лизоцимом у всех больных имела тенденцию к снижению, что подтверждает наши экспериментальные данные.

Нами было показано также, что применение лизоцима с кла-фораном приводит к коррекции функциональной активности непт-рофялоз по КСТ-тесту,

Клинические наблюдения, проведенные Л.А.Мололкяной у 32 больных с указанной патологией, показали, что у больных, получавших кла^оран с лизоцимом по предложенной схеме, в 5 раз снизилась частота возникновения послеоперационных гнойных осложнений, приводящих к образованию стойких инвалидазируюцих дефектов глотки и шейного отдела пищевода, требующих в последующем проведения пластических операций. На фоне применения препаратов ускорялась санация послеопорацяонных ран и начало процессов регенерации, в среднем на 6 койко-дней уменьшилась длительность послеоперационного пребывания больных в стационаре .

Предложенная схема одновременного применения клафорана с лизоцимом высокоэффективна при профилактика гнойно-воспалительных осложнений благодаря синергизму антибактериального действия, обеспечивающему полноценную санацию кровеносной, лимфатической систем и воспалительного очага, синергизму иммуноакти-вяруюцего действия препаратов, а также способности повышать антипротеиназную активность сыворотки крови я таким образом предотвращать деструктивные изменения соединительной ткали.

ВЫВОДЫ

1. Впервые изучены в эксперименте фармакокинетика и фарма-кодпнамика эремомицина в лимфатической системе и его влияние

на протеолитические системы при в/м п ЭЛ введении. Показано, что эремомицин при в/м введении хорошо проникает в лимфатическую систему и длительно сохраняется в организме. При в/м и ЭЛ введении антибиотик но оказывает отрицательного влияния на морфофункционадьное состояние лимфатических узлов, активность ККС и ингибиторов прогеиназ, функциональную активность нейтрофилов. ЭЛ применение эремомицина создает максимальные концентрации в центральной лимфе, но не обеспечивает существенных преимуществ перед в/м введением антибиотика.

2. Клафорап при в/м введении здоровым собакам в дозе '30 мг/кг вызывает некоторую стимуляцию иммуноморфолотческих зон лимфатических узлов, снижает активность калликреина и содержание прекалликреипа и не оказывает влияния на активность ингибиторов прогеиназ и функциональную активность нейтрофилов собак.

3. Лизоцим при в/м введении здоровы;.! собакам в дозе

2 мг/кг вызывает увеличение активности Л |-ПИ, сникает активность ККС и приводит г фазовым изменениям функционального' состояния нейтрофилов у собак.

4. Лизоцим при одновременном в/м введении с клафораном способствует повышению концентраций и пролонгации циркуляции антибиотика в лимфатической и кровеносной системах и тканях внутренних органов собак, усилению стимулирующего влияния клафорана на лимфатические узлы.

5. Одновременное в/м применение клафорана с лизоцимом вызывает усиление и пролонгацию активирующего влияния лизоцима на ПИ, приводит к более быстрым и выраженным изменениям функциональной активности нейтрофилов и некоторому снижению актпвностп ККС в сыворотке крови собак.

6. Выявлено снижение антипротеиназной активности сыворотки крови, активация ККС и высокая функциональная активность нейтрофилов у больных с хронической почечной недостаточностью, находящихся на гемодиализе, болъшх с тяжелым и средне тяжелым течением болезни Крона и больных с онкологическими заболеваниями ЛОР-органов, что свидетельствует о высоком риске возникновения обширных и длительно незаживающк- воспалительных очагов и необходимости коррекции этих показателей.

7. Впервые показано, что профилактическое применение клафорана одновременно с лизоцимом ЛОР-снкологическим больным обеспечивает быстрое повышение активности е^-ПИ, снижение активное-', ти ККС и модуляцию функциональной активности нейтрофилов, что создает оптимальные условия для ограничения зоны воспалительной деструкции тканей, способствует пятикратному снижению процента инвалидазпрующих послеопорацполных осложнений, требующих вспос-

ледствли проведения пластичесГ-их операций. \

СПИСОК "АБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕЛЕ ДИССЕРТАЦИИ

I. Варакина Н.И., Воробьева Л.С., Нешкова Е.А. Состояние калликренн-кининовой системы у больных с хронической почечной недостаточностью // Современные проблемы гомеостаза.:Еаучные труды ЦОЛИУ врачей.- 1987.- Т. 26.- С. 19-20.

2. Баранина Н.И., Круглова И.О., Щербакова Э.Г. Состояние лимфатических узлов и калликреин-кининовой систем" у больных неспецифическими колиташ // Актуальные проблемы лимфологии и ангиологии : Материалы науч.конф. ЦОЛИУВ. - 1989 (Деи. в ШО "Союэмединформ" 6.12.89, Ш8859-Д.).

3. Баракинг Н.И., Щербаков В.Е., Башанкаев H.A., Яровая Г.А. Состояние калликреин-кининовой системы при хирургическом лечении хронических воспалительных заболеваний а опухолях эндокринной системы // Патогенез хронического воспаления: Тез.докл.Всесоюзн, конф. - Новосибирск, 1991. - С. 8-10.

4. Щербакова Э.Г., Круглова И.С., Растунова Г.А., Ларин Б.А., Баранина Н.И., Воробьева Л.С. Лимфолотческие аспекты повышения эффективности беталакгамных антибиотиков // Актуальные проблемы .химиотерапии бактериальных инфекций : Тез. докл.Воес.конф. -М., ч.П.- 1991,- С. 742-744.

5. Щербакова Э.Г., Варакина Н.И., Журавлева Т.П., Круглова И.С., Ларин Б.А., Растунова Г.А., Малкова И.В. Эремомяцин и

его взаимоотношения с лимфатической системой // Там же, С,741-742.

6. Щербакова Э.Г., Варакина Н.И., Яровая Г.А., Белорусов 0.С. Доценко В.Л., Воробьева Л.С. Состояние калликреин-кининовой системы, ингибиторов г.^отепказ и факторы неспецифической резио-гентности у больных с хронической почечной недостаточностью, находящихся на гомодаализе, и у реципиентов почечного трансплантата // Вопросы медицинской химии. - 1991.- Т. 37. - С. 40-43.

92-100 ЦИУв