Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Экспериментальное исследование фармакологической активности скипофитов при курсовых чрезкожных воздействиях

На правах рукописи

004609634

АРСЕНИН СЕРГЕЙ ВЛАДИМИРОВИЧ

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ СКИПОФИТОВ ПРИ КУРСОВЫХ ЧРЕЗКОЖНЫХ ВОЗДЕЙСТВИЯХ

14 03 06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 6 СЕН 2010

Старая Купавна - 2010

004609634

Работа выполнена в ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ» и Московском научно—практическом Центре спортивной медицины Департамента здравоохранения Правительства г Москвы

Научный руководитель: Доктор биологических наук,

профессор Митрохин Николай Михайлович

Научный консультант: Доктор медицинских наук

Орджоникидзе Зураб Гивиевич

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук,

профессор Утешев Даниил Борисович

Заслуженный деятель науки РФ доктор медицинских наук, профессор Сейфулла Рошен Джафарович

Ведущая организация: Московский государственный медико-стоматологический университет

Зашита состоится «с№Р » сентября 2010 года в «¡Очасов на заседании диссертационного совета Д 217 004 01 ВНЦ БАВ(142450, Московская обл , пос Старая Купавна, ул Кирова, 23)

Сдиссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ВНЦ БАВ

Автореферат разослан « » августа 2010 г

Ученый секретарь диссертационного совета

д х н , профессор _/1^/1_ Скачилова С Я

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время в терапии ряда заболевании широко используются курсовые воздействия скипидарныхванн, приготовленных по рецептурам А С Залманова (Залманов А С , 1966), в основе которых лежит эмульгирование скипидара с помощью ПАВ - "белой скипидарной эмульсии" и "желтого скипидарного раствора" Известно, что терпены, основные компоненты скипидара, проявляют активные окислительные свойства, которые обусловливают антибактериальные, местнораздражаюшие и антифунгальные свойства (Ильев С В , Папанов Г Я 1969, Модестова Н В 1953, Тихонова Л Я 1955) Механизм лечебного действия скипидарных ванн по Залманову заключается в том, что они осуществляют профилактику микротромбозов и капиллярных стазов, улучшают микроциркуляцию Их эффективность объясняется воздействием на общие защитные механизмы организма, их стимуляцию на уровне капиллярного кровотока

При обобщении опыта применения скипидарных ванн можно прийти к заключению, что белые скипидарные ванны способствуют повышению артериального давления, стимуляции кожных капилляров, улучшению кровообращения в мышцах и внутренних органах Все это приводит к усилению обменных процессов при гипотрофических и атрофических изменениях в тканях, при заболеваниях периферических артерий и гипотонических состояниях В то же время желтые скипидарные ванны за счет более глубокого проникновения скипидара во внутренние слои кожи (Васильева 3 А, Пухова О П , 1972) способствуют снижению показателей газообмена в состоянии покоя, снижают системное артериальное давление, оказывают положительные сдвиги при атеросклерозе у пациентов с нормокинезией и гиперкинезиеи миокарда (Амиров Р 3 , Жильцова М Н , 1979), уменьшают частоту дыхания легочную вентиляцию и уменьшают потребление кислорода Сходство в действии двух видов ванн в том, что они вызывают выраженное улучшение капиллярного кровообращения и ускорение тока крови, обладают бактерицидным и аналыезирующим действием, стимулируют дыхательный центр

Рекомендуется применение скипидарныхванн для улучшения функциональных возможностей нервной системы (Чончик Д И , 1972), при заболеваниях опорно-двигательного аппарата с учетом их седативного действия Предполагается, что скипидарные ванны могут применяться и при других заболеваниях, в генезе которых лежат нарушения кровообращения и обменно-трофических процессов (Олефиренко В Т , 1976) Как самостоятельный метод лечения они нашли широкое применение в терапии заболеваний органов дыхания, кровообращения, нервной системы, в кожной и гинекологической практике, спортивной медицине и широко используются в лечебных учреждениях, санаториях, на курортах России, Украины и других стран СНГ (Акимочкина Р Т , Пеннер Г Т , 1970, Головач А В 1998, Горохова ФМ 1971, Куликова Р С, с соавт, 1977, Марюха Н П , Паскаль НА 1976, Иду па 1 С 2007)

Следует отметить, что большинство работ по изучению терапевтической эффективности применения скипидарныхванн 20-30 летней давности Кроме того, в литературе практически отсутствуют данные экспериментальных исследований по изучению влияния курсовых трансдермальных воздействии растворов скипидара на организм экспериментальных животных Имеются лишь единичные публикации, посвященные отдельным аспектам изучения механизма их лечеб-

нош действия в отношении рецепторного аппарата кожи крыс (Нефедов В М , 1970), вегетативной нервной системы кроликов (Невструева В С , 1970) метаболизма в нервной, мышечной и костно-хрящевой тканях (Чончик Д И , 1970)

Ошеченное не позволяет дать объективную оценк\ эффективности применения скипидарных ванн в качестве терапевтических средств при ряде заболевании опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной системы и лр В дополнение к вышесказанном! в рецептуре используемых в медицинской практике растворов для принятия ванн кроме компонентов, предложенных А С Залмановым, как правило, входят различные вспомогательные вещества в виде ароматизаторов настоек трав и тд Именно последним объясняется го, что доступные в аптечной сети эмучьсии и растворы скипидара являются лишь косметическими средствами и для их регистрации, как препаратов требуется проведение лопочнительных доклинических исследований, в том числе и изучения специфической фармакологической активности

Цель работы. Оценить в эксперименте терапевтическую эффективность курсового применения чрезкожных воздействий растворов скипидара «Скипофит, бе чая эмульсия» и «Скипофит желтый раствор» на организм интактных крыс и крыс с модечированием острого и хронического воспалительною процесса

Задачи исследования Всоответствии с посчавченной целью при выполнении лапнои работы проводичось решение следующих задач

( Изучить влияние растворов скипофитов при курсовом чрезкожном применении в сравнении с воздействием водных процедур на поведенческие реакции, артериальное давление, показатели ЭКГ, частоту сердечных сокращении состав крови и выдечитсльную систему интактных крыс

2 Иссчедовать ачияние растворов скипофитов на динамику острой воспали гельной реакции (каррагешшовый огек) V крыс в сравнении с системным действием НПВС,

3 В сравнительном эксперименте с НПВС опредечить эффективность применения скипофитов при модечировании хронического воспалительного процесса

- ванной гранулемы V крыс,

4 В сравнительном эксперименте с НПВС и хонлропротектором исследовать влияние скипофитов на хронический воспали 1ельныи процесс на модели адъю-вантного артрита крыс

Научная новизна Впервые установлено, что растворы скипофитов при курсовом, в течение 30 дней, чрезкожном воздействии не влияют на активность чрансаминаз щеточную фосфатазу, антиоксидантный статус и состав крови интактных крыс Курсовое воздействие на животных теп чой воды вызывает выраженное снижение всех двигатечьных и исследоватечьских реакций в «открытом поле» относитечьно интактных животных При применении растворов скипофитов в той или иной степени наблюдается восстановление поведенческих реакций, причем это действие бочее выражено у раствора «Скипофит белая эмульсия» Эмоциональное состояние крыс при воздействии обоих растворов снижается Впервые в эксперименте показано, что оба вида скипофитов усиливают спонтанный ди\рез Курсовое воздействие раствора «Скипофит белая эмульсия» способствует повышению, а раствора «Скипофит жечтый раствор»

- понижению АД без изменения ЧСС

Впервые показано что воздействие скипофитов в течение 14 дней приводит к снижению выраженности острого каррагенин-индуцированного отека лап крыс Лечебный эффект растворов скипофитов впервые продемонстрирован в

эксперименте на модели хронических воспалительных реакций — ватной гранулемы и адъювантного артрита у крыс с нормализацией антиоксидантного статуса, состава крови и обменных процессов

Положения, выносимые на защиту.

1 Влияние курсового воздействия растворов скипофитов на интактных крыс проявляется в отношении поведенческих реакций и увеличении спонтанного диуреза без изменения антиоксидантного статуса, морфологического и биохимического состава крови,

2 «Скипофит белая эмульсия» при 15-минутных чрезкожных воздействиях в концентрации 0,03% (скипидара) при 37°С через день в течение 30 дней способствует повышению, а «Скипофит желтый раствор» - снижению артериального давления крыс

3 Увеличение длительности курса чрезкожных воздействий скипофитов приводит к достоверному замедлению развития острого воспалительного процесса у крыс - каррагенинового отека,

4 Применение растворов скипофитов приводит к ингибированию развития хронической воспалительной реакции на модели ватной гранулемы, менее выраженного, чем при системном действии НПВС,

5 При моделировании хронического воспалительного процесса — адьювант-ного артрита у крыс растворы скипофитов замедляют развитие воспалительного процесса, менее выраженное, чем при системном действии НПВС и хондро-протектора, с нормализацией морфологии хряшевой ткани, антиоксидантного статуса, состава крови и обменных процессов

Практическая ценность работы В результате проведенных исследований получены данные, включенные в досье документации на регистрацию растворов скипофитов в качестве лекарственных средств, позволяющие рекомендовать проведение клинических испытаний курсовых чрезкожных воздействий растворов «Скипофит белая эмульсия» при гипотонических состояниях, растворов «Скипофит желтый раствор» при артериальной пшертензии, обоих видов скипофитов при воспалительных заболеваниях опорно-двигательного аппарата

Апробация диссертации Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на XVI и XVII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» в 2009 и 2010 гг, межвузовской научной конференции «Актуальные вопросы фармакологии и фармации», 2009, г Курск, расширенном заседании отдела фармакологии ОАО «ВНЦ БАВ»

Публикации По теме диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 2 патента, одна монография и одна работа в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК

Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав с описанием результатов исследований, обсуждения полученных результатов и выводов Работа иллюстрирована 19 рисунками и 26 таблицами Библиографический список содержит 167 источников, в том числе 110 отечественных и 57 иностранных авторов

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили

1 «Скипофит Белая эмульсия»: скипидарная эмульсия для принятия ванн в предложенном нами составе, которая состоит из скипидара живичного 50%,

салициловой кислоты, а также вспомогательных веществ - детского мыла, камфорного спирта дистиллированной воды, экстрактов трав (почки сосны, березы, цветы календулы, ромашки, тысячелистника трава душицы, зверобоя чабреца, череды, полыни горькой, чистотела пустырника, корни одуванчика, валерианы аира, плоды фенхеля, листья крапивы шалфея, подорожника, мяты перечной, эвкалипта), приготовленных по специальной технологии

2 «Скипофит желтый раствор»: скипидарныи раствор для принятия ванн в предложенном нами составе, которая состоит из скипидара живичного 50%,, а также вспомогательных всшеств - олеиновой кислоты, касторового масла, едкого натра и экстрактов трав (почки сосны, березы, цветы календулы, ромашки, тысячелистника, трава душицы, зверобоя чабреца, череды, полыни горькой, чистотела, пустырника, корни одуванчика валерианы, аира, плоды фенхеля, листья крапивы, шалфея, подорожника, мяты перечной, эвкалипта), приготов-тенных по специальной технологии

В качестве препаратов сравнения использованы

- НПВС «Диклофенак натрия таблетки 50 мг» производства ' Hemofarm", Сербия

- НПВС«Индометаиин таблетки 25 мг» прои ¡воиства Фармахим», Болгария

- Хондропрогектор «Дона (DONA)» производства «Rottapharm», Италия, содержащий в качестве активной субстанции глюкозамина с\льфат

Эксперименты выполнены на 248 нетинейных крысах-самцах массой 200-250 г (Таблица 1) Животных содержали в стандартных условиях вивария Эксперименты проведены в соответствии со статьей 11-и Хельсинской декларации Всемирной медицинском ассоциации (1964) и «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) Все манипуляции, причиняющие животным боль, проводились под общим обезболиванием Дтя анестезии использован этаминал-натрия, вводимый внутрибрюшинно в дозе 50 мг/кг (Сернов Л Н Гацура В В , 2000)

Экспериментальных крыс помешали в клетк\ размером 35x24x15 с приготовленным раствором скипофита (на 7 литров воды 3,5 мл скипофита) Расчет концентрации скипидара в экспериментальной ванне проводили с учетом терапевтической концентрации для человека и межвидового переноса доз (1 7) (Freireich Е J et al, 1966) Предварительно скипофиты растворяли в 50 мл воды температура воды — 370С—380С Крысы были погружены в растворе по шею Сверху клетка закрывалась решеткой Животные находились в ванне 15 мин (Рис 1)

Животные контрольной группы подвергались аналогичному воздействию, но без добавления скипофитов Через 15 мин животных вынимали из клетки и обсушивали

В первой серии опытов по окончании курсового воздействия после проведения последнего сеанса воздействия растворов скипидара (по окончании про-с\шивания животных) исстедовали функциональное состояние нервной системы по показателям спонтанной двигательной активности в тесте «Открытое поле» (Буреш Я с соавт , 1991) Регистрировали горизонтальные перемещения животных (пересечение квадратов) вертикальное движение (стойки), груминг, исследовательское поведение (посещение внутренних квадратов, количество дефекаций Затем определяли систолическое артериальное давление (АД) неин-вазивным методом с использованием специально разработанного в ВНЦ БАВ электронною манометра с манжетой, накладываемой на верхнюю часть хвоста, а с помошью электрокардиографа 6NEK4 (Германия) регистрировали ЭКГ

Таблица I.

Распределение животных по экспериментальным группам.

ч п/п Раздел исследования Вид живот ных, пол Количество животных Исходная масса, г

1,- Влияние белой эмульсии и желтого раствора при 30-дневном воздействии на интактных крыс на поведенческие реак ции, ЧСС, АД, состав и биохимические показатели крови. нелинейные крысы. 40 200-250

2 Влияние белой эмульсии и желтого раствора при 4 и 14-днсвном воздействии на каррагениновый отек нелинейные крысы.о 48 200-250

3. Влияние белой эмульсии и желтого раствора при 30-дневном воздействии на хроническое воспаление (модель ватной гранулемы) нелинейные крысы,5 40 200-250

4. Влияние белой эмульсии и желтого ски пидарного раствора на хроническое вое паление при моделировании адьювангно го артрита Нелинейные крысы. 120 200-250

Всего: крысы 248

Рис. i. Животные в эксперименте но изучению эффектов чрезкожных. воздействий растворов «-Скипофит белая эмульсия» и «Скипофш желтый раствор».

Далее животных помешали в обменные клетки лля определения суточного диуреза (Шуйская Н И.. Карамзина Н.Н.1966). Измеряли объем и рН собранной мочи, а также брали кровь для анализа. В крови определяли содержание гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, общего белка, альбумина, глюкозы, общего холестерина с помощью рутинных методов анализа (Меньшиков В.В. 1987). Общепринятыми методами регистрировали уровень МДА, Fe-индуцированного МДА активность аланиновой и аспарагино-вой трансаминаз, щелочной фосфатазы. каталазы и СОД.

В серии опытов по оценке противовоспалительной активности при остром воспалительном процессе - каррагениновом отеке - животных помешали в растворы скипофитов в течение 4 дней один раз в день в первой серии и 14 дней

во второй На 4 или 14 день через 30 мин после окончания воздействия вводили субпчантарно а правую лапу крысы 1 % расгвор карратешша в объеме 0 1 мл Через 2 часа животных опять помешали в раствор скипофита на 15 мин Через четыре часа после введения каррагенина проводили измерение объема правой и левой (интакгной) лап с помощью плетизмометра (Ugo Basile) Воспалительную реакцию и эффект терапевтического воздействия оценивали по разнице объемов чевой и правой лап

Хроническое пролиферативное воспаление вызывали имплантациеи пол кожу медиальной части спипы простерилизованных ватных шариков массой 40±2 wr Операцию вьшотаяли пол легким эфирным наркозом в асептических усчовиях На 8-е сутки после операции ватные шарики с образовавшейся вокру! них грануляционной 1канью извлекали, взвешивали и высушивали до постоянной массы в течение 48 часов при 60°С Пролиферативную реакцию (ПР) оценивали по разнице между массой высушенной гранулемы (МСУХ) и исходной массой ватного шарика (МИСХ) (в мг) Экссудативную реакцию (ЭР) оценивают по разнице между массами сырой (MC В) и высушенной гранучсмы (МСУХ, мг) Противовоспалительное действие (влияние на пролиферативный и экссудативныи компоненты воспаления) выражали в процентах по отношению к контрольной и ингактной группам

Известно, что механизм развития хронического воспалительного процесса адъювантного артрита в эксперименте близок к таковому неспецифических воспалительных заботеванин человека — котлагенозач (полиартрит, ревматизм) Эта модель представляет интерес также и потому, что клинические проявления адъюватного артрита у крыс имеют много общих черт с ревматоидным артритом у человека Это касается не только характера воспалите чгьного поражения суставов, но и внесуставных проявлений (Hitchon С А , El-Gabalawy H S , 2004) Адъювантный артрит у крыс моделировали субплантарным введением в правую заднюю лапу 0,1 мл адъюванта Фрейнда - взвесь вакцины БЦЖ 5 мг/мл в вазелиновом масле (Pearson С M , Wood F D 1963, Венгеровский A И с соавт 1979) Препараты сравнения вводили перорально в течение 22 дней в дозе дикло-фенак натрия 10 мг/кг, глюкозамина сучьфат 20 мг/кг Чрезкожные воздействия скипофитов осуществляли в течение того же срока с частотой воздействия через сутки

Прирост объема воспаленной лапы крысы определяли онкометрически с помощью плетизмометра, оценивали также вторичную иммунологическую реакцию (отек на левой лапе)

Изучали лечебно-профилактическое (12 лнеи, начиная с 3 дня после инъекции адъюванта) и терапевтическое (с 14 по 22 день после инъекции адью-ванта) действие скипофитов и препаратов сравнения Противовоспалительную активность оценивали по способности уменьшать отек конечностей, периметр хвоста и нормализовать гематологические показатели, а также по способности предотвращать деструктивные изменения соединительной ткани в пораженных суставах, устанавливаемую с помощью гистологического исследования костной и хряшевой ткани Эти показатели определяли до начала опытов, на двенадцатые и двадцать вторые сутки Гистологические исследования проводили на коленных и голеностопных суставах Образцы помешали в 10% формалин Дека-льштфикашпо осуществляли в 5% азотной кислоте, проводили по спиртам восходящей крепости и заключали в целлоидин На микротоме «Reihert» готовили срезы толщиной 6-8 г, окрашивали гематоксилином и эозином и исследовали на светоолтическом уровне Микропрепараты просматривали в световой микроскоп Jenaval (Австрия)

Состояние сердечно-сосудистой системы оценивали с помощью электро-

кардиографии во втором отведении до начала эксперимента и при его завершении посте 30-дневных воздействий растворов скипофитов ЭКГ записывали под обшим наркозом с использованием эгаминала натрия в дозе 50 мг/кг внут-рибрюшинно Для записи кардиограмм применяли кардиограф марки 6NEK4 Регистрировали ряд электрофизиологических параметров, характеризующих ве-пичину пиков и интервалы Неинвазивным методом без наркотизации у крыс регистрировали систолическое артериальное давление (АД) и частоту сердечных сокращении (ЧСС)

Кровь собирали из бедренной вены Определяли содержание гемоглобина, количество эритроцитов теикошпов и тромбоцитов с помощью рутинных методов анализа Всыворотке крови опредепяли определя ш содержание альбумина по реакции с бромкрезолом зеленым. общею белка биуретовым методой, мочевины по реакции с диацетилмонооксимоч, гемоглобина гемиглобинпиаштдным методом (ООО «Агат-Мед»), концентрацию общего холестерина энзиматичес-ким методом, акшвность Ac<VT и АлАТ \инфицированным методом Райхмана-Френкеля, (ООО «Альвснс Диагностику«», Сашст Петербург) уровень глюкозы глюкозооксидазньш методом (ЗАО «Диакон») (Кост Е А 1973. Меньшиков В В 1987) Определяли содержание конечного продукта ПОЛ уровня МДА по тесту с шобарбитуровой кисчоюи Содержание МДА в печени экспериментальных животных оценивали модифицированным методом (Меньшиков В В , 1987, С сальная ИД, 1977). проводя предварительною экстракцию чипидов печени по Фотчу (Покровский А А, 1969)

Активность СОД оценивали по торможению восстаноатенного нитротертра-зочиевого синего (HCT) в присутствии биологического материала (гомогенат ткани печени) (Чевари С и др 1985), а активность каталазы но реакции перекиси водорода с молибденовокислыч аммонием в неокрашенных или слабо окрашенных растворах (Королюк М А 1998)

Активность глутатионпероксидазы определяли в сопряженной глутатион-глу-татионредуктазнои системе по окислению НАДФН, используя гидроперекись трет-бутила в качестве субстрата при ЗОС (Paglia D Е Valentine W N , 1967, Ланкин В 3 с соавт , 1981) .Активность глутатионредуктазы определяли общепринятым методом Ракера (Racker Е , 1955) Уровень восстановленного ravra-тиона оценивали по методу (Beutler Е , 1963) с использованием 5, 5-ДТНБ с регистрацией оптической плотности при 412 нм

Активность АЛТ и ACT опредетяли спекгрофотометрическим метолом при длине волны 537 нм, а активность щелочной фосфат азы также спекгрофотометрическим методом (оптимизированный метод Бессея-Лоури-Брока) при 404 нм для п-нитрофенопа

При гистологических исследованиях поврежденных суставов крыс выраженность изменении суставов исследованных животных контрольных и опытных групп оценивали по четырехбалльнои системе

- - отсутствие изменения в хряше и капсуле сустава, + - изменения стабо выражены, ++ - средневыраженные изменения, +++ - выраженные нарушения

Ol меченные показатели характеризовали состояние хряща по потере блеска, пояачение окрашенных зон, наличие участков эрозии, состояние параартику-лярных тканей — цвет и консистенция синовиалыюи жидкости наличие отека Для чряша оценивалась организация поверхностной, промежуточной и глубокой зоны наличие инфильтратов, состояние синовиального слоя капсулы — по степени гиперемии инфильтрации, микроциркуляторного русла, фиброзного слоя — по степени разволокненности коллагеновых волокон и инфильтрации

Статистическую обработку полученных результатов исследований проводили методами вариационной статистики Вычисляли среднее арифметическое (М) и среднее квадратическое отклонение (ш) Достоверность результатов оценивали с помощью метода «-квадрат» и t-критерия Стьюдента Разница между результатами полученными для 2-х rpvnn считалась достоверной при уровне значимости Р<0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Впервые сеансы помещения крыс как в теплую воду, так и в растворы ски-пофмтов отмечалось возбуждение животных, выражавшееся в попытках выбраться из емкости с водой Начиная с пятого сеанса и до конца эксперимента их поведение оставалось спокойным Результаты изучения 30-дневных воздействий скипофи-тов на поведение крыс в тесте «открытое поле», представлены в таблице 1

Таблица 1

Влияние IS-разовых по 15-минут в течение 30 дней чрезкожных воздействии растворов, содержащих -Скипофит белая эмульсия» и «Скипофит желтый раствор», на спонтанную двигательную активность крыс-самцов (M±m, n= 10)

Опыт Виды двигательной активности Общая двигат активность Дефекация количество болей

Пересеч квадраты Стойки Груминг Норки

Интактный контроль 24,8+2 3 11,2+1,9 6 7+1,3 2,0+0,4 44 7±4,7 5,3+0,7

Вода контроль 2 7,3+2,6" 8,1±2,6 0,5±0,2** 0,6±0,2* 15,1+3,4" 5 0±1 2

Скипофит белый 14 0+3,6* 9 6+2 9 7 2+2,51' 0,7±0,2* 31,5±53,91 1,2±0,5*"-

Скипофит желтый 14 1+3 3" 7 8±2 0 1 3+0 5* 0,9±0,4 23,1+3,7» 1 8±0 5*"

Примечание *, ** - схастистически значимое отличие относительно контроля 1, & и && - отличие относитетьно контротя 2 при Р<0,05 и Р£0 01 соответственно, й1- Р<0,05 относительно группы «скипофит жечтый»

Согласно полученным данным, погружение животных в теплую воду в течение 15 сеансов значитетьно уменьшает горизонтальную двигательную активность относительно группы шггактных животных При этом бочее чем в 3 раза снижается исследовательская активность по показатепю «норки», значительно снижается акшвность груминювых реакций как показателя комфортносш и интегральный показатель «общая двигательная активность» Эмоциональность животных по показателю «дефекации» практически не отличается от данных для интакного контроля

Воздействие раствора «Скипофит белая эмульсия» статистически значимо не изменяет двигательную горизонтальную активность относительно контрольной группы 2, которая остается достоверно ниже данных для интактного контроля, но все же наблюдается выраженная тенденция к усилению последней в 2 раза (tsi=l 51) Активность фумшковой реакции не отличается ог интакною конт-ротя, что указывает на устранение дискомфорта, характерного при воздействии теплой воды Общая двшате 1ьная активность не отличается от таковой у интак-тных животных и статистически значимо выше, чем в контроле 2 Исследовательская реакция таккже остается в 3 раза ниже, чем для интакного контроля Характерным для этого воздействия явчяется бочее чем 4-х кратное снижение дефекации как показателя снижения эмоциональности при сравнении с интак-тньш контролем 1 и 2

Применение раствора «Скипофит желтый раствор» статистически значимо

не изменяет двигательную горизонтальную активность относительно контроля 2 (теплая вода без раствора скипофига), оставаясь достоверно ниже интактного контроля, но все же наблюдается выраженная в 2 раза тенденция к усилению последней (tst=l 62) В оттичие от скипофита белого в этом случае не наблюдается восстановления показателя комфортности («груминг») и обшей двигательной активности Эмоциональность животных снижена как по отношению к интактному контролю, так и к контролю 2

Следует отметить что относительная эффективность воздействия растворов скипофитов наиболее характерна для горизонтальной двигательной активности, груминга и дефекаций

В таблице 2 представлены результаты оценки влияния скипофитов на АД и ЧСС крыс Приведенные данные указывают на то, что процедура курсового воздействия воды в течение 30 дней не вызывает достоверных изменений АД и ЧСС по отношению к интактньш животным контроля 1, контроля 2 и к исходному уровню В отношении «•Скипофита белая эмульсия» следует отметить выраженную тенденцию к повышению систолического артериального давления по отношению к контрольной группе 2 (tst=l,72), а в отношении «Скипофит жечтый раствор» - к снижению последнего (ts>t=l 17) Вместе с тем при расчете эффекта методом парных сравнений с исходными данными выявляется достоверное повышение АД для белой эмульсии и снижение — для жетгого раствора

Таблица 2

Изменение систолическою артериального давления и частоты сердечных сокращении крыс при курсовых воздействиях скипофитов в течение 30 дней (М±т, п=10)

Опыт АД, ми рт ст ЧСС, уд/мин

Исход Через 30 дн Исход Через 30 дн

Интактный контроль 119 0x3 2 122,0±4 1 370,3x4,5 363,6±3,8

Вода, Контроть 2 121 5±3 1 119 1±3,4 369 1x6 7 361 7±9 9

Скипофит белый 120,7x3,2 129,2±4,8 (t,=2,32) 360,2x5,8 356,2±4,9

Скипофит желтый 119,3+3,2 113,5+3 5 (t„=2 39) 366x6,4 351,2*8,2

Наблюдается достоверное таеличенпе на 24-28% спонтанного суточного диуреза (Табл 3), в равной степени выраженного как для бетой эмутьсии, так и для желтого скипидарного раствора Кислотность мочи осталась на прежнем уровне

Таблица 3

Суточный ди\рез крыс после воздействия растворов скипофитов в течение 30 суток (М±т, п= 10)____

Группы животных Диурез за 24 часа, мл pH мочи

Исход Через ЗОсуток Исход Через 30 суток

Интактный контроль 1 3 60±0 15 3 68±0 19 6 62±0 03 6 63±0 04

Ванны контроль 2 3,8510,18 3 75±0,20 6,55±0,07 6,58Ю,06

Скипофит белый 3,65±0,15 4,53±0 20* 6,68+0,04 6,59±0 06

Скипофит желтый 3,58±0,19 4,59±0,19* 6,6410,04 6,61+0,05

Примечание * - сгасгистически значимое оттичие относительно исходного уровня и ммпрояя 1 и 2

При изучении влияния теплых ванн на параметры ЭКГ крыс при 30-дневном воздействии полученные результаты указывают на отсутствие достоверных изменений в отношении амплитуды зубцов и временныхинтервалов.Отсутствует также влияние курсовых воздействий растворов «Скипофит белая эмульсия» и «Скипофит желтый раствор» на показатели ЭКГ крыс.Вопытахне было зарегистрировано влияние курсового помещения животных в теплую воду и в скипидарные растворы на содержание в крови эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов и уровень гемоглобина. В сыворотке крови отсутствовали изменения активности АсАТ, АлАТ. шелочной фосфатазы, СОД и каталазы, уровня инокозы. общего холестерина, обшего белка и альбумина, МДА и Ре-индуцированного МДА.

Выявленные различия в действии «Белой эмульсии» и «Желтого раствора» в отношении изменения АД и груминга, как мы полагаем, обусловлены различием состава вспомогательных веществ, использованных в ихрецептуре, — салициловая кислота, детское мыло и камфорный спирт в первом случае и олеиновая кислота с касторовым маслом во втором. Полученные результаты указывают на возможность применения скипидарных ванн, приготовленных с использованием исследованных растворов (после проведения клинических испытаний), в качестве дополнительных терапевтических воздействий наряду с базисной терапией при гипо- и гипергензивных состояниях, сниженном диурезе и психоэмоциональном возбуждении.

Результаты по изучению противовоспалительных эффектов чрезкожных воздействий теплой воды, растворов скипофитов и препаратов сравнения при пе-роральном введении представлены на рисунке 2.

Применение «Скипофита желтого» в течение 4 дней не уменьшает выраженность воспатительной реакции, вызванной каррагенином: доля прироста отека в опытной группе имеет лишь тенденцию к относительному уменьшению выраженности воспаления (151= 1.48).Увеличение длительности применения скипофитов до 14 дней приводит к статистически достоверному уменьшению

Торможение каррагенинового отека лап крыс при курсовом воздействии растворов скипофитов и НПВС %

т.............-............................-..........................-..........-..................................................................................—-....... 70

12345675

------------------------------------------------------------------------------------------------------10

Группы животных: 1 — интактный контроль; 2 — ванны; 3,5 — скипофит белый 4 и 14 дней; 4, 6 — скипофит желтый 4 и 14 дней: 7 — ишомёташш; 8 - диклофенак

Рис. 2. Влияние курсового воздействия растворов скипофитов и НПВС индометацина и диклофе-нака натрия на вырахсенность ингибирования каррагенинового отека лап крыс. По оси ординат - отношение прироста отека в опыте к таковому в контрольной группе 2.

воспалительной реакции прирост отека составил 40.913,0*% против 49,4±2,7% в контрольной группе (Р<0,05)

Применение «Скипофита белою» в течение 4 дней также вызывает существенную тенденцию к относительному уменьшению выраженности воспаления (151=1,73) Увеличение длительности применения до 14 дней приводит к статистически достоверному уменьшению воспалительной реакции прирост отека составил для скипофита белого 40,2+3,5% (Р<0,05)

Таким образом, торможение отека при применении скипофита белою составило 18,6±7,1%, а желтого — 17,2—5 9% от нелеченого контроля Торможение отека при применении диклофенака натрия в дозе 10 мг/кг перорально за 2 часа до инъекции каррагенина составило— 58,7±1,7%, а при применении шшомета-шша в дозе 10 мг/кг - 52,5±2,5% от нелеченого контроля

Противовоспалительным течебно-профилактический эффект скипофитов и препараюв сравнения при моделировании хроническою воспали гельного заболевания изучен на модели ватной гранулемы у крыс Препаратом сравнения был диклофенак натрия в дозе 10 мг/кг В опыте использованы две группы контрольных животных контрой — ишактные животные без дополнительных воздействий, опыт 1 - пероральное введение диклофенака натрия опыт 2 — 8-кратные ежедневные общие накожные аппликации растворов скипофита желтого, опыт 3 - 8-кратные ежедневные общие накожные аппликации растворов скипофита белого

Введение крысам диклофенака натрия в дозе 10 мг/кг тормозит как проли-феративный, так и экссудативный компоненты воспаления на 55,6±12 1% и 35 5±3 6% соответственно (Таблица 4) Курсовое 8-разовое чрезкожное воздействие растворов скипофитов, желтого и белого, также вызывает противовоспалительное действие, но менее выраженное, чем при системном действии диклофенака натрия Так при аппликациях скипофита желтого происходит торможение пролиферативной реакции на 25, (±8,7%, а экссудативный на 12,7±3,0%, что составляет 45 1±15 6% и 35 8+8,5% от эффекта диклофенака натрия

Скипофш белый также оказал противовоспалительный эффект на этой модели хронического воспаления Однако его действие оказалось несколько менее выраженным при аппчикацияхскипофита белого происходит торможение пролиферативной реакции на 20,0+8,0% а экссудативный на 10 4±3.8%, что составляет 36.0+14,4% и 29,3±10,7% от эффекта диклофенака натрия Следует отметить, что, для скипофита белого характерна выраженная тенденция к ингибированию экссудативной воспалительной реакции (151=1,94) Кроме того эффективность исследованных воздействии в отношении пролиферативной реакции выше, чем в отношении экссудативной

Противовоспалительным лечебно-профилактический и лечебный эффект скипофитов и препаратов сравнения также изучен на другой модели хронического воспаления - адъювантном артрите у крыс Согласно полученным данным введение адъюванта Фрейнда в правую лапу интактныхкрыс (контроль) вызывает прирост отека инъецированнои лапы на 71,7±6 7% и 72,7+4,4% на 12 и 22 день после инъекции, соответственно На фоне курсового лечебно-профилактическою применения скипофитов прирост отека был менее выражен и составил для техже сроков 56,6+5,1% и 62,9±3,6%для «Скипофита белого», а для -»Скипофита желтого» - 53,6x4,9% и 56,2+4,4% (Рис 3)

Введение адъюванта Фрейнда в правую лапу интактных крыс вызывает прирост отека также и неинъецированнои левой лапы, начиная с 10-12 суток после инъекции который составил 20,0±1 5% и 60.0±4,2% на 12 и 22 день после инъ-

Таблица 4

Торможение развития ватной гранулемы у крыс при пероралыюм введении диклофенака натрия и курсовых чрезкожных воздействиях растворов скипофитов

Группы животных, п=8 Масса сы -рой грану -лемы (мг) Масса вы -сушенной грануле -мы, (мг) Торможение развития воспаления

Пролиферативная реак -ция Экссудативная реакция

%к контролю 1 % копыту! %к контролю 1 % к опы - ту 1

Контроль 1 ишаюгные 422,4±16,2 85,9±3,7 0±4,3 - 0±3,8 -

Диклофенак натрия (опыт П 287,5±13,7 * 61,5±Е,3* 55,6412,1 0x0 35,5±3,6 0x0

Скипофит белый 374,1±11,3 74,9±3,8 25,1±8,7 ' 45,1±15,6* 12,7±3,0*" 35,8±8,5*

Скипофит желтый 382,8±14 5" 77,1±3,5' 20,0±8,0** 36 0±14,4* 10 4±3,8* 29 3±10, Г

екиии, соответственно При воздействии теплой воды динамика развития отека осталась прежней (20,6±1,6% и 61,7+4,1%) На фоне курсового применения скипофитов прирост отека и в этом случае был менее выражен и составил для тех же сроков ¡6,6+(Л*? и 48 3±3 I% для «Скилофита белого», а для «Скштофита желтого» - 7,5+1,2% и 27,6±3,1% (Рис 4) Хондропротектор глюкозамина сульфат и НПВС диклофснак натрия при пероральном введении оказались более эффективными и ингибировали прирост объема лап на 63,6 и 71,8% на 12 день а также на 55,3 и 61,6% на 22 день, соответственно

В следующей серии опытов при изучении возможного терапевтического эффекта растворы скипофитов применялисьс 12 по 22 сутки после инъекции адью-ванта Фрейнда На фоне курсового терапевтического применения скипофитов прирост отека инъецированной лапы был менее выражен и составил для 22 дня 64 3±4,1% и 62,6±3,8% (Р<0,05 к контрольной группе) для раствора «Скипофит белая эмульсия» и «Скипофит желтый раствор», соответственно (Рис 5)

Таким образом, чрезкожное воздействие скипофитов при курсовом лечебном применении в течение 10 дней, начиная с 12 дня после инъекции, также выявило их активность При этом, если в контрольной группе к 22 дню отек лап достоверно не менялся в сравнении с данными для 12 дня и сохранятся около 60% то оба вида скипофитов вызывали достоверное его снижение Следует отмстить для этой серии опытов, что эффективность применения хондропро-тектора глюкозамина сульфата и НПВС диклофенака натрия при их лечебном действии оказалась в 2 раза выше, чем растворов скипофитов

Подтверждением терапевтической эффективности применения растворов скипофитов являются полученные нами данные изменения в процессе эксперимента массы животных (Рис 6) Для интакного контроля наблюдается прирост массы тела с 185,1±2,4 г до 213,3±3,5г, а при адъювантном артрите наблюдается снижение этого показателя до 181,9+2,9 г Применение растворов скипофитов, НПВС и хондропро1ектора способствует восстановлению лого интегрального показателя, причем по эффективности изученные воздействия могут быть расположены в следующем порядке

Диклофенак> аюкозамингхкшюфшп ж&1тый>сн.шюфит бе.шй>теп.1ая вода При развитии адъювантного артрита у животных наблюдается увеличение

%

Рис. 3. Прирост объема инъецированных лап крыс на 12 (левые столбцы) и 22 день (правые столбцы) относительно исходного объема лап. 1 контроль, 2 - курсовое воздействие теплой воды, 3 - скнпофт желтый. 4 - скипофит белый. 5 глюквамина сульфат 10 мг/кг, 6 - диклофенак 10 мг/кг. периметра хвоста на 3.0+0,2 мм и 5,0±0,2 мм на 12 и 22 сутки, соответственно. НПВСи хондропротектор замедтают этот процесс на 70,011,0 и 56,7±1,7% на 12 день и 48,012,6% и 40,013,4% на 22 день, соответственно.Оба вида скипо-фитов в отличие от теплой воды также обладают таким действием, замедляя скорость увеличения периметра хвоста на 46,7+4,0 и 40,013,7% на 12 день и 34,014,4 и 28,013,8% на 22 день для растворов скипофита желтого и белого, соответственно (Р<0,05).

Для регистрации изменений биохимических параметров животных при введении адъюванта Фрейнда декапитировали через 12 и 22 суток после инъекции, получая для анализа ткань печени и после центрифугирования собранной крови — сыворотку.Определяли в печени и сыворотке активность глутатионпе-роксидазы, глутатионредуктазы, супероксиддисмутазы, каталазы, АлТ, АсТ, уровень восстановленного глутатиона, МДА, гемоглобина и содержание эритроцитов.

При развитии патологического процесса наблюдается снижение уровня эритроцитов к 12 суткам на 22%. К 22-м суткам — на 19%. СОЭ возросла в 2 раза, а число лейкоцитов увеличилось на 30,4 и 32,8%. Применение чрезкожных воздействий скипофитов вызывает тенденцию к восстановлению количества эритроцитов и достоверное снижение СОЭ на 27-30% на 12 и 22 сутки. Однако этот уровень все еше оставался более высоким, чем в контроле 2. Применение глю-козамииа и диклофенака натрия более значимо оказывало терапевтический эффект, причем диклофенак натрия являлся наиболее активным (Рис.7, Табл.5).

Увеличение содержания лейкоцитов в крови при воздействии скипофитов оказалось менее выраженным, причем для желтого раствора к 22 дню эта разница стала достоверной при р<0,05. Применение диклофенака натрия и для этого показателя выявило максимальную эффективность, в то время как глюкозамина сульфата — отсутствие эффекта.

Активность трансаминаз при развитии артрита увеличивается к 12 и 22 дню для АЛТ на 31,4 и 32,4%, а для АСТ - на 34,6 и 37,1%, соответственно. Применение теплой воды практически не влияло на эти показатели. В то же время воздействие скипофитов достоверно уменьшает прирост активности АЛТ в оба

Рис. 4. Прирост объема неинъецированных лап крыс на 12 (левые столбцы) и 22 день правые столбцы) относительно исходного. 1 - контроль. 2 - курсовое воздействие теплой воды, 3 - скипофит

желтый, 4 - скипофит белый, 5 - глкжозамина сульфат 10 мг/кг, б - диклофенак 10 мг/кг. %

Рис. 5. Прирост объема инъецированных лап крыс на 12 (левые столбцы) и 22 день (правые столбцы) относительно исходного объема лап при применении препаратов с 12 по 22 день после инъекции. 1 - контроль, 2 - курсовое воздействие теплой воды, 3 - скипофит желтый, 4 - скипофит белый, 5 - глюкозамина сульфат 10 мг/кг, 6 - диклофенак 10 мг/кг.

срока наблюдения и вызывает тенденцию к таковой для активности ACT. И лишь к 22 дню, для скилофита белого, разница становится достоверной. Введение глюкозамина сульфата по эффективности оказалось близким к скипофитам, а дикло-фенака натрия — также оказалось наиболее эффективным.

Инъекция адъюванта Фрейнда после курсовых воздействий теплой воды

» к;| тро1Ь

Рис 6 Динамика массы тела крыс с адьювантным артритом в процентах от исходного уровня при к\рсовых воздействиях растворами скипофитов и препаратами сравнения в сроки 1 - исходный \ровень, 2-3 суток, 3 - 12 суток 4-22 суток * - достоверные оттичия от группы интакгною яонтротя, и - достоверные отличия от группы с адыовангныч артритом (АдА)

приводит к значительному снижению анпюксиданшого статуса организма крыс через 22 дня При этом при сравнении с группой интактных животных активность путатионпероксидазы в сыворотке снизилась к этому сроку на 27,75,3%, гтугатионредуктазы - на 27,35 7%, в отношении супероксиддисмутазы наблюдается снижение активности на 36 36,6%, а для катал азы — на 24,36,8% (Р<0,05)

Бчизкие эффекты выяшгены в отношении активности антиоксидантныхфер-ментов при этом типе хронического воспаления в ткани печени животных эффекты были аналогичными по направтенности, но отличались по выраженности в отношении антиоксидаитного статуса крыс Так, активность тутатионперок-сидазы имела снизилась через 22 суток на 29,85,6%, глутатионреду ктазы — на 18,04,7% (Р<0,05) Для супероксиддисмутазы снижение активности составило 28,55,5%, а каталазы - 25 24,6 (Р<0,05)

При регистрации уровня восстановленного п\татиона и МДА в сыворотке и печени выявлено увеличение уровня конечного продукта ПОЛ МДА. и уменьшение антиоксидантной субстанции — восстановленною глутатиона Уровень Г8Н в сыворотке уменьшился на 26,57 5% - с 3 320,18 мМ/мл в контрольной группе до 2,440,20 мМ/мл (Р<0,01) через 22 сую к В ткани печени аналогичные показатели составили -21,43,8% с 7,860,34 до 6Л80,30 тМ/г ткани Уровень МДА увеличивался в сыворотке на 99 67,6% (Р<0,01) Концентрация МДА в ткани печени уветичивалась на 35,57 3%

При згой патовдгии при курсовом чрезкожном воздействии скипофитов наблюдается выраженная тентенция к восстановлению антиоксидантного статуса организма с повышением уровня восстановленною глутатиона и достоверным снижением интенсивности накопления МДА в сыворотке крови В пользу последнего свидетельствует менее выраженное снижение активности путатионовой пероксидазы в сыворотке на 13,34,9% и 11,54 0% для белой эмульсии и желтого раствора, соответственно (р<0,05) Достоверное отличие набтюдается также для глутатионовой пероксидазы печени при воздействии желтого раствора разница с группой АдА составила 24 05,6%, а также для активности СОД разница с группой АдА составила 18,64,2%

Повышение содержания МДА в сыворотке крови на фоне АдА оказалось менее значимым при воздействии обоих видов скипофитов в сравнении с конт-

210 190 170 150 110 110

90

Рис 7 коррегируюшее действие аптикаиий растроровскнпофигов, тиклофенака натрия и пюкоими-нт с} гьфчта н ! С (У) (мм час1 при -1дыо!кН11ном чрфшс V крыс 1 looi.fi тоснисс - рремя поело вкетенпя ■иьювтлт г Фрсипла, I утки по оси ортннтг - относите п.но^ и.мснсшк СОЭ в

Табтииа 5

Влияние екипофитов при к\ рсопых чрезкожных позтсиствиях и препаратов сравнения при пероральном введении на изменение содержания лейкоцитов в крови (ел* 109/титр)

Опыт Исходные значения 12 сутки 22 сутки

Интактный Контроль 1 12,1 ±0,9 11,5-1:1,2 12,5±1,1

АдА Контроль 2 12,4±1,1 15,5±0,8* 16 2±0,9*

АдА+ Ванны П,3±1,0 16,0±1,0* 16,4±0,9*

АдА+скипофит белая эмульсия 12,9±1,1 14,4±1,0 14,1x1,0

АдА+скипофит желтый раствор 12,3x0,8 13,7±1,0 13,6x0,8"

АдА+ Диклофенак 12,5x1,2 12,9x1,1"" 12,6x1,2Г"

АдА+ Глкжозамин 13,0x0,8 15 4x0,8* 15 7x0,9*

Примечание * - Р'-О 0? 01 поставлю 1р\1шы ком [роль I - Ри 05 оишипе гыш группы кот ро 1ь 2, <« - Р '0 05 ожоапельно фч'ппы Л ьУ-Ваины

ро 1ьнои 1р\ттои на 20/г Для уровня восиднов 1енною пумтона в сыворо1ке и печени, а 1акже МДА в печени наб 1юдае1ся выраженная тенченпия к норма-шзании

Эффекты диклофенака натрия при системном действии на фоне моделирования АдА в отношении антиоксидантного статуса оказатнсь наиболее значимыми При этом в сравнении с интактными животными набтюдастся тенденция к снижению активностей антиокаианшых ферментов как в сыворотке гак и в печени и лишь и отношении \ровня Г5Н фиксируется достоверное снижение на 13, 23 99а

Г но ко ¡амина су чьфат показагеш ангиоксидантном шшпы корре!провал не

столь значимо и по некоторым позициям был близок к действию растворов скипофитов Последнее имело отношение к. активности ГЗН-Рх, ГБЗГ-Я, СОД, каталазы плазмы крови Однако в отношении активности ферментов в печени достоверная разница с действием диклофенака натрия отсутствовала Уровень восстановленного глутатиона в сыворотке достоверно не отличался от интакно-го контроля, а в печени был достоверно ниже на 13,75,0% В то же время содержание МДА в сыворотке хотя и достоверно повышалось на 29 68,1%, но все же было достоверно ниже, чем при моделировании АдА на 37,54 0% (Рис 8)

В результате проведенных исследований при макроскопическом и микроскопическом исследовании по окончании опыта выявлены характерные изменения в голеностопных суставах для каждой группы

Контроль 1 (интактные животные) При макроскопическом исследовании показана подвижность сустава у всех животных Суставной хрящ имеет характерный блеск Слабо опалесцирующая суставная жидкость заполняет просвет сустава Капсула сустава падкая При микроскопическом исследовании в суставном хряше выявляются три зоны с характерным распределением клеток Для капсулы характерен синовиальный слой из 3-4 рядов синовиоиитов, а фиброзный слой представлен коллагеповыми волокнами с достаточно упорядоченным расположением

Контроль 2 (адъювантный аргриО При макроскопическом исследовании наблюдается тугоподвижность сустава у всех животных Суставной хряш, как правило, местами не имеет характерного блеска, а в краевых частях окрашен в бурый цвет Суставная жидкость визуально имеет примсси крови Капсула сустава гиперемироваш и имеет утолщенную форму В околосуставных тканях и суставах стопы наблюдается выраженные изменения, связанные с пояалением обширных участков грануляционной ткани и лимфогистоцигарных инфильтратов Коллагеновые волокна сухожилий рыхло расположены Между сухожилиями и прилежащей соединительнои тканью в краевых отделах определяются значительные по протяженности участки, заполненные гистиоишфоцитарны-ми клеточными элементами Мышечная ткань длетальных отделов конечностей имеет очаги деструкции с частью лизированных и распадающихся волокон со значительным уменьшением количества миоцитов Фиксируются обширные инфильтраты в рыхлой соединительной ткани и капсуле, капилляры расширены Сгепки сосудов в состоянии отека с пролиферагами из гисшоииюв, лимфоцитов и фибробластов

Фиксируется значительный отек и утолщение синовиальной оболочки гипертрофия ворсинок, выполненных лимфогистиоцитарными клетками, деструкция синовиоиитов, обширные инфильтраты в фиброзном слое капсулы нарушение структуры коллагеновых волокон

Развитие воспалительного процесса в суставе вызвало развитие паннуса, нарастающего на поверхность суставного чряща, который состоит из лимфоид-ных, тучных, плазматических клеток и в небольшом количестве фибробластов Наблюдается лизирование суставного хряща вблизи паннуса В завороте сустава определяются инфильтраты, которые распространяются по периостальнои поверхности кости

Полученные изменения являются характерными для из\1енений в голеностопном суставе и периартикулярныхтканяху животных при моделировании адъ-юваптного артрита

В гру ппах животных, которые получали диклофенак натрия или глюкоза-мина сульфат, наблюдали схожие изменения, характерные для адъювашного

Уровень Г5Н и МДА в сыворотке крови крыс через 22 суток после инъекции эдыовантэ фрейнда

МДА

Уровень Г5Н и МДА в печени крыс через 22 суток после инъекции адьюванта Фрейнда

МДА

Рис 8 Изменение содержания восстановленного глутатиона и МДА в печени крыс с экспериментальным хроническим воспалением По оси ординат уровень восстановленного глутатиона и МДА в % относительно исходных значений

артрита, но менее выраженные, которые заключались в сдабовыраженныхи выраженных изменениях в суставах и околосуставных тканях

При макроскопическом исследовании показана тугоподвижность сустава у 50% животных Суставной хряш местами не имеет характерного блеска Суставная жидкость визуально имеет примеси крови Капсула сустава гиперемирована У 5 из 10 животных в группе, получавшей диклофенак натрия и у 6 из 10 животных в группе, получавшей глюкозамина сульфат определяются обширные лимфогистиошггарные инфильтраты в рыхлой соединительной ткани, вблизи сухожилий и в мышечной ткани Капсула суставов инфильтрована местами У 4 животных в каждой группе из 10 инфильтраты распространяются вглубь тканей вплоть до периостальной поверхности малоберцовой кости У пятой части животных наблюдается лизис хряша, полость сустава практически у всех животных свободная и лишь в краевых отделах капсулы обнаруживаются мелкоочаговые инфильтраты из лимфогистионитарных клеток У капсул синовиальный гипер-

трофирован за счет увеличения количества синовиоцитов и фибробластов Формирование паннуса не наблюдается

Для групп животных, получавших курсовые чрезкожньге воздействия скипофитов, как белой эмучьсии, так и желтою раствора, выявленные изменения суставов были менее выраженные, чем в контрольной группе, хотя и более выраженные, чем при применении НГТВС Последнее заключалось в том, что тугоподвижность сустава наблюдается у 8 из 10 животных, сам суставной хряш имеет участки матового цвета, капсула сустава утолщена и гиперемирована, синовиальная жидкость имеет примеси крови

У 7 из 10 животных в группах, получавших аппликации скипофитов в дис-тальном отделе конечностей фиксируются лимфогастиокитарные инфильтраты в рыхлой соединительной ткани, вблизи сухожилий и в мышечной ткани Капс>ла суставов инфильгрована местами У 6 животных в каждой группе из 10 инфильтраты распространяются вглубь тканей вплоть до периостальной поверхности малоберцовои кости У половины животных наблюдается лизис хряща, потость сустава практически у всех животных свободная и лишь в краевых отделах капс\-лы обнаруживаются мелкоочаговые инфильтраты из лимфогистиоцитарных клеток У капсул синовиальный гипертрофирован за счет увеличения количества синовиоиитов и фибробтастов Формирование паннуса не наблюдается

Представленные в Табл 6 данные указывают на то, чю как использовавшиеся в работе НПВС диклофенак натрия и хондропротектор глюкозамина сульфат при курсовом введении, так и курсовые чрезкожные воздействия скипофитов вызывает согласно макро- и микроскопическим исследованиям различное по выраженности противовоспалительное и антидегенаритивное действие Эффективность скипофитов несколько ниже, чем эффективность использовавшихся офииинальных препаратов

Описанные эффекты могут быть представлены в виде таблицы

Таблица 6

Повреждения голеностопных суставов и тканей конечностей крыс при адъ-ювантром артрите_

Опыт Мышечная ткань Су хо ли ЛИЯ Рыхлая соеди нитель ная ткань Сустав ной хрящ Капсу ла Фор мирова ние пан нуса Всего баллов Степень выражен носги по врежде ния суста ВОВ, %

Интактный Контроль 1 - - - - - - 0 0

АдА Контроль 2 +++ ++ +++ ++ +++ +++ 16 100

АдА+ Ванны +++ ++ +++ ++ +++ +++ 16 100

АдА+скипо фит белая *мульсия +++ + +++ + ++ + 11 69

АдА+скипо фит желтый раствор +++ + ++ + ++ + 10 62

АдАГ Диклофенак ++ - ++ + + - 6 37

АдА| Глюкотамин ++ + ++ + + - С 44

Приведенные данные указывают на возможность проявления противовоспалительной активности курсовых чрезкожных воздействий растворов скипофи-тов, как белой эмульсии, так и желтого раствора при хронических воспалительных процессах, в том числе и артритах

ВЫВОДЫ

1 Курсовые в течение 30 дней через день при 37-38°Спо 15 мин чрезкожные воздействия скипофитов в концентрации 0,03% (по скипидару) на интактных крыс приводят к снижению эмоциональности животных (повышению устойчивости к психо-эмоциональным воздействиям) и усилению на 25% спонтанного диуреза

2 Курсовое применение скипофига белой эмульсии приводит к повышению АД, а скипофига желтого раствора к его снижению у интактных крыс

3 При курсовом чрезкожном воздействии растворы скипофитов желтого раствора и белой эмульсии не влияют на активность трансаминаз, щелочную фосфатазу, ЧСС, ЭКГ, состав крови и антиоксидантный статус организма интактных крыс

4 Курсовое профилактическое чрезкожное воздействие растворов скипофита желтого и скипофита белого в течение 4 дней приводит к выраженной тенденции к проявлению торможения острой экссудативной реакции при каррагенин-индуиированном отеке Увеличение длительности курса до 14 дней вызывает достоверный эффект торможения, который по интенсивности составляет 1/3 от противовоспалительного действия диклофенака натрия или индометадина в дозе 10 мг/кг

4 При курсовых лечебно-профилактических ежедневных в течение 8 дней чрезкожных воздействиях скипофитов проявляется их противовоспалительное действие как на пролиферативный, так и экссудативный компоненты воспаления на модели ватной гранулемы у крыс, менее выраженное, чем у диклофенака натрия

5 При курсовых лечебно-профилактических через день в течение 22 дней и лечебных в течение 10-12 дней, начиная с 12 дня после инъекции адъюванта Фрейнда чрезкожных воздействиях скипофитов проявляется их противовоспалительное действие на модели адъювантного артрита у крыс

6 Аппликации скипофитов при адъювантном артрите приводят к уменьшению активации ПОЛ, антиоксидантного статуса организма, активности трансаминаз и щелочной фосфатазы, увеличения СОЭ, лейкоцитов крови и морфологических изменений пораженных суставов

7 По терапевтической эффективности в отношении развития адъювантного артрита изученные воздействия располагаются в следующем порядке дикло-фенак натрия > глюкозамина сульфат > скипофит желтый раствор > скипофит белая эмульсия > теплая вода

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Желтый скипидарный раствор Арсенина СБе лекарственными растениями, обладающий общеукрепляющим, тонизирующим и омолаживающим действием, и способ проведения ванн/ С В Арсенин// Патент РФ 1Ш 2307663 от 10 10 2007 по заявке 2006110297/15 от 31 03 2006, Бюлл № 28

2 Белая скипидарная эмульсия Арсенина СБе лекарственными растениями, обладающий общеукрепляющим, тонизирующим и омолаживающим действием, и способ проведения ванн/ С В Арсенин// Патент РФ Я и 2307662 от 10 10 2007 по заявке 2006110297/16 от 31 03 2006, Бюлл № 28

3 Грязелечение и водные процедуры/ С В Арсенин // Ростов н/Д «Феникс», 2009, 281 с

4 Исследование фармакологической активности скипофитов — белой скипидарной эмульсии и желтого скипидарного раствора с экстрактами целебных трав в эксперименте/ С В Арсенин, Н М Митрохин, С А Суханова, Е М Носейкина, С В Башеров// Тез докл XVI Российского конгресса «Человек и лекарство», 2009, с 698

5 Противовоспалительная активность скипидарных ванн (экспериментальное исследование/ С В Арсенин, Н М Митрохин, О А Соколова, Т И Ларина// Актуальные вопросы фармакологии и фармации Труды межвузовской научной конференции Курск, 2009, с 83-85

6 Влияния скипидарных ванн на сердечно-сосудистую, центральную нервную и выделительную систему интактных крыс/ С В Арсенин, Н М Митрохин, О А Соколова, С А Суханова // Актуальные вопросы фармакологии и фармации Труды межвузовской научной конференции Курск, 2009, с 85-87

7 Экспериментальное обоснование применения накожных аппликаций белой и желтой эмульсии скипидара в виде ванн при заболеваниях опорно-двигательного аппарата/ С В Арсенин, Н М Митрохин// Тез докл XVII Российского конгресса «Человек и лекарство», 2010, с 569

8 Изучение влияния скипидара при накожном применении в виде эмульсий на сердечно-сосудистую, центральную нервную и выделительную систему крыс/ С В Арсенин, Н М Митрохин// Тез докл XVII Российского конгресса «Человек и лекарство», 2010, с 570

9 Влияния курсовых чрезкожных воздействий растворов скипидара на поведенческие реакции, выделительную и сердечно-сосудистую систему интактных крыс/ С В Арсенин, Н М Митрохин , С А Суханова)// Кубанский научный медицинский вестник №3 (117), 2010, с 20-24

Бумага офсетная Формат 60x84 1/16 Гарнитура Times ЕТ Печать способом ксерографии Уел печ л 15 Тираж 60 шт Заказ № 877 Типография «Литера-принт» Москва, ул Прянишникова, д 19а, стр 4. Тел /факс (495) 771-34-77

Актуальность исследования. В настоящее время в терапии ряда заболеваний широко используются курсовые воздействия скипидарных ванн, приготовленных по рецептурам А.С Залманова (Залманов А.С., 1966), в основе которых лежит эмульгирование скипидара с помощью ПАВ - "белой скипидарной эмульсии" и "желтого скипидарного раствора". Известно, что терпены, основные компоненты скипидара, проявляют активные окислительные свойства, которые обусловливают антибактериальные, местнораздражающие и антифунгальные свойства (Ильев С.В., Папанов Г.Я. 1969, Модестова Н.В. 1953, Тихонова Л.Я. 1955). Механизм лечебного действия скипидарных ванн по Залманову заключается в том, что они осуществляют профилактику микротромбозов и капиллярных стазов, улучшают микроциркуляцию. Их эффективность объясняется воздействием на общие защитные механизмы организма, их стимуляцию на уровне капиллярного кровотока.

При обобщении опыта применения скипидарных ванн можно прийти к заключению, что белые скипидарные ванны способствует повышению артериального давления, стимуляции кожных капилляров, улучшению кровообращение в мышцах и внутренних органах. Все это приводит к усилению обменных процессов при гипотрофических и атрофических изменениях в тканях, при заболеваниях периферических артерий и гипотонических состояниях. В то же время желтые скипидарные ванны за счет более глубокого проникновения скипидара во внутренние слои кожи, способствуют снижению показателей газообмена в состоянии покоя, снижают системное артериальное давление, оказывают положительные сдвиги при атеросклерозе у пациентов с нормокинезией и гиперкинезией миокарда (Амиров Р.З., Жильцова М.Н., 1979), уменьшают частоту дыхания, легочную вентиляцию и уменьшают потребление кислорода. Сходство в действии двух видов ванн в том, что они вызывают выраженное улучшение капиллярного кровообращения и ускорение тока крови, обладают бактерицидным и анальгези-рующим действием, стимулируют дыхательный центр.

Рекомендуется применение скипидарных ванн для улучшения функциональных возможностей нервной системы (Чончик Д.И., 1972), при заболеваниях опорно-двигательного аппарата с учетом их седативное действие. Предполагается, что скипидарные ванны могут применяться и при других заболеваниях, в ге-незе которых лежат нарушения кровообращения и обменно-трофических процессов (Олефиренко В.Т. 1976). Как самостоятельный метод лечения они нашли широкое применение в терапии заболеваний органов дыхания, кровообращения, нервной системы, в кожной и гинекологической практике, спортивной медицине и широко используются в лечебных учреждениях, санаториях, на курортах России, Украины и других стран СНГ (Акимочкина Р.Т., Пеннер Г.Т., 1970, Головач

A.В. 1998, Куликова Р.С, с соавт., 1977, Марюха Н.П., Паскаль Н.А. 1976, Raynal С. 2007).

Следует отметить, что большинство работ по изучению терапевтической эффективности применения скипидарных ванн 20-30 летней давности. Кроме того, в литературе практически отсутствуют данные экспериментальных исследований по изучению влияния курсовых трансдермальных воздействий растворов скипидара на организм экспериментальных животных. Имеются лишь единичные публикации, посвященные отдельным аспектам изучения механизма их лечебного действия в отношении: рецепторного аппарата кожи крыс (Нефедов

B.М., 1970), вегетативной нервной системы кроликов (Невструева В.С , 1970), метаболизма в нервной, мышечной и костно-хрящевой тканях (Чончик Д.И. , 1970).

Отмеченное не позволяет дать объективную оценку эффективности применения скипидарных ванн в качестве терапевтических средств при ряде заболеваний опорно-двигательного аппарата, сердечно-сосудистой, нервной системы и др. В дополнение к вышесказанному в рецептуре используемых в медицинской практике растворов для принятия ванн кроме компонентов, предложенных А.С. Залмановым, как правило, входят различные вспомогательные вещества в виде ароматизаторов, настоек трав и т.д. Именно последним объясняется то, что доступные в аптечной сети эмульсии и растворы скипидара являются лишь косметическими средствами и для их регистрации как препаратов требуется проведение дополнительных доклинических исследований, в том числе и изучения специфической фармакологической активности.

Цель работы. Оценить в эксперименте терапевтическую эффективность курсового применения чрезкожных воздействий растворов скипидара «Скипо-фит, белая эмульсия» и «Скипофит, желтый раствор» на организм интактных крыс и крыс с моделированием острого и хронического воспалительного процесса.

Задачи исследования. В соответствии с поставленной целью при выполнении данной работы проводилось решение следующих задач:

1. Изучить влияние растворов скипофитов при курсовом чрезкожном применении в сравнении с воздействием водных процедур на поведенческие реакции, артериальное давление, показатели ЭКГ, частоту сердечных сокращений, состав крови и выделительную систему интактных крыс.

2. Исследовать влияние растворов скипофитов на динамику острой воспалительной реакции (каррагениновый отек) у крыс в сравнении с системным действием НПВС;

3. В сравнительном эксперименте с НПВС определить эффективность применения скипофитов при моделировании хронического воспалительного процесса - ванной гранулемы у крыс;

4. В сравнительном эксперименте с НПВС и хондропротектором исследовать влияние скипофитов на хронический воспалительный процесс на модели адью-вантного артрита крыс.

Научная новизна. Впервые установлено, что растворы скипофитов при курсовом в течение 30 дней чрезкожном воздействии не влияют на активность трансаминаз, щелочную фосфатазу, антиоксидантный статус и состав крови интактных крыс. Курсовое воздействие на животных теплой воды вызывает выраженное снижение всех двигательных и исследовательских реакций в «открытом поле» относительно интактных животных. При применении растворов скипофитов в той или иной степени наблюдается восстановление поведенческих реакций, причем это действие более выражено у раствора «Скипофит белая эмульсия».

Эмоциональное состояние крыс при воздействии обоих растворов снижается. Впервые в эксперименте показано, что оба вида скипофитов усиливают спонтанный диурез. Курсовое воздействие раствора «Скипофит белая эмульсия» способствует повышению, а раствора «Скипофит желтый раствор» - понижению АД без изменения ЧСС.

Впервые показано, что воздействие скипофитов в течение 14 дней приводит к снижению выраженности острого каррагенин-индуцированного отека лап крыс. Лечебный эффект растворов скипофитов впервые продемонстрирован в эксперименте на модели хронических воспалительных реакций - ватной гранулемы и адьювантного артрита у крыс с нормализацией антиоксидантного статуса, состава крови и обменных процессов.

Положения, выносимые на защиту.

1. Влияние курсового воздействия растворов скипофитов на интактных крыс проявляется в отношении поведенческих реакций и увеличении спонтанного диуреза без изменения антиоксидантного статуса, морфологического и биохимического состава крови;

2. «Скипофит белая эмульсия» при 15-минутных чрезкожных воздействиях в концентрации 0,03% (скипидара) при 37°С через день в течение 30 дней способствует повышению, а «Скипофит желтый раствор» - снижению артериального давления крыс.

3. Увеличение длительности курса чрезкожных воздействий скипофитов приводит к достоверному замедлению развития острого воспалительного процесса у крыс - каррагенинового отека;

4. Применение растворов скипофитов приводит к ингибированию развития хронической воспалительной реакции на модели ватной гранулемы, менее выраженного, чем при системном действии НПВС;

5. При моделировании хронического воспалительного процесса - адьювантного артрита у крыс растворы скипофитов замедляют развитие воспалительного процесса, менее выраженное, чем при системном действии НПВС и хондропротектора, с нормализацией морфологии хрящевой ткани, антиоксидантного статуса, состава крови и обменных процессов.

Практическая ценность работы. В результате проведенных исследований получены данные, включенные в досье документации на регистрацию растворов скипофитов в качестве лекарственных средств, позволяющие рекомендовать проведение клинических испытаний курсовых чрезкожных воздействий растворов «Скипофит белая эмульсия» при гипотонических состояниях, растворов «Скипофит желтый раствор» при артериальной гипертензии, обоих видов скипофитов при воспалительных заболеваниях опорно-двигательного аппарата.

Апробация диссертации. Результаты работы и основные положения диссертации были доложены и обсуждены на XVI и XVII Российских национальных конгрессах «Человек и лекарство» в 2009 и 2010 г.г., межвузовской научной конференции «Актуальные вопросы фармакологии и фармации», 2009, г Курск, расширенном заседании отдела фармакологии ОАО «ВНЦ БАВ», 2010.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ, в том числе 2 патента, одна монография и одна работа в рецензируемом издании, рекомендованном ВАК.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 4 глав с описанием результатов исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 26 таблицами. Библиографический список содержит 167 источников, в том числе 110 отечественных и 57 иностранных авторов.

выводы

1. Курсовые в течение 30 дней через день при 37-38°С по 15 мин чрез-кожные воздействия скипофитов в концентрации 0,03% (по скипидару) на интактных крыс приводят к снижению эмоциональности животных (повышению устойчивости к психо-эмоциональным воздействиям) и усилению на 25% спонтанного диуреза.

2. Курсовое применение скипофита белой эмульсии приводит к повышению АД, а скипофита желтого раствора к его снижению у интактных крыс.

3. При курсовом чрезкожном воздействии растворы скипофитов желтого раствора и белой эмульсии не влияют на активность трансаминаз, щелочную фосфатазу, ЧСС, ЭКГ, состав крови и антиоксидантный статус организма интактных крыс

4. Курсовое профилактическое чрезкожное воздействие растворов скипофита желтого и скипофита белого в течение 4 дней приводит к выраженной тенденции к проявлению торможения острой экссудативной реакции при каррагенин-индуцированном отеке. Увеличение длительности курса до 14 дней вызывает достоверный эффект торможения, который по интенсивности составляет 1/3 от противовоспалительного действия диклофенака натрия или индометацина в дозе 10 мг/кг.

4. При курсовых лечебно-профилактических ежедневных в течение 8 дней чрезкожных воздействиях скипофитов проявляется их противовоспалительное действие как на пролиферативный, так и экссудативный компоненты воспаления на модели ватной гранулемы у крыс, менее выраженное, чем у диклофенака натрия.

5. При курсовых лечебно-профилактических через день в течение 22 дней и лечебных в течение 10-12 дней, начиная с 12 дня после инъекции адъюванта Фрейнда чрезкожных воздействиях скипофитов проявляется их противовоспалительное действие на модели адьювантного артрита у крыс.

6. Аппликации скипофитов при адъювантном артрите приводят к уменьшению активации ПОЛ, антиоксидантного статуса организма, активности трансаминаз и щелочной фосфатазы, увеличения СОЭ, лейкоцитов крови и морфологических изменений пораженных суставов.

7. По терапевтической эффективности в отношении развития адъю-вантного артрита изученные воздействия располагаются в следующем порядке: диклофенак натрия > глюкозамина сульфат > скипофит желтый раствор > скипофит белая эмульсия > теплая вода.