Автореферат и диссертация по медицине (14.04.01) на тему:Экспериментально-теоретическое обоснование технологии получения мази и капсул с экстрактом прополиса для акушерско-гинекологической практики

На правах рукописи

Петрова Виктория Витальевна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ МАЗИ И КАПСУЛ С ЭКСТРАКТОМ ПРОПОЛИСА ДЛЯ АКУШЕРСКО-ГИНЕКОЛОГИЧЕСКОЙ ПРАКТИКИ

14.04.01 — Технология получения лекарств

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени л иг.а

I I нил 7015

кандидата фармацевтических наук

Уфа-2015 005564359

005564359

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научный руководитель: Шикова Юлия Витальевна Официальные оппоненты: Пантюхин Андрей Валерьевич

доктор фармацевтических наук, доцент

Джавахян Марина Аркадьевна

доктор фармацевтических наук, доцент ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский

университет имени В.И.Разумовского» Минздрава России, заведующий кафедрой фармацевтической

технологии и биотехнологии кандидат фармацевтических наук, ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт

лекарственных и ароматических растений», заведующая отделом фармацевтической технологии

Ведущая организация:

Пятигорский медико-фармацевтический институт - филиал государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Защита состоится «29» декабря 2015 года в 12.00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.088.01, созданного на базе ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Минздрава России (197376, г. Санкт-Петербург, ул. проф. Попова, д. 14, лит. А).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия» Минздрава России (197227, г. Санкт-Петербург, пр. Испытателей, д. 14) и на сайте организации (Ьйрз^/Б^ез^оодЬ.сот/а/рЫиттиЛесЬ.сотЛЦязоуе!).

Автореферат разослан « » 2015 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208.088.01, кандидат фармацевтических наук, доцент

Орлов А .С.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования

Поиск и разработка составов новых лекарственных средств с продуктами пчеловодства, в том числе с экстрактом прополиса (ЭП) (спиртовым и масляным), обусловлены возрождением пчеловодства в России и перспективой развития. Продукты пчеловодства находят широкое применение не только в народном хозяйстве, но и в медицинской практике, а именно: в фармацевтической отрасли [Кривцов И.И., 2010]. Наиболее перспективным продуктом пчеловодства является прополис, применение которого в виде экстракта весьма актуально при разработке лекарственных средств для гинекологической практики, в частности, при воспалительных заболеваниях женской половой сферы и для подготовки шейки матки к родам в акушерской практике. Одним из воспалительных заболеваний органов малого таза является хронический эндометрит (воспаление эндометрия), или внутренней слизистой оболочки матки, при котором применяют комплексное лечение; ведущую роль . играют препараты антимикробного и противовоспалительного действия. Высокий терапевтический эффект препарата может быть достигнут при введении лекарственных препаратов, в том числе противомикробных, интравагинально для создания концентрации лекарственных веществ в очаге хронического воспаления, поэтому актуальна разработка лекарственной формы в виде вагинальных капсул с метронидазолом, сульфадимезином и ЭП, рекомендованных для комплексного лечения послеабортного эндометрита.

Разработка лекарственного средства интравагинального применения для акушерской практики в виде мази с трутневым расплодом пчел, маточным молочком, ЭП и экстрактом ламинарии для подготовки шейки матки к родам, обусловлена существующей проблемой в акушерстве. Своевременная и правильная оценка состояния готовности («зрелости») шейки матки к родам имеет большое значение при определении прогноза течения предстоящих родов и, особенно, при уточнении показаний и выбора времени для родовозбуждения. Актуально использовать биологически активные антиоксиданты, содержащие фитогормоны, продукты пчеловодства: трутнево-расплодный гомогенат, маточное молочко, ЭП в сочетании с экстрактом ламинарии для разработки средства, влияющего на процесс подготовки шейки матки к родам. Следовательно, значительный интерес представляет разработка мягких лекарственных форм интравагинального применения, содержащих ЭП в сочетании с метронидазолом и сульфадимезином в виде капсул для комплексного лечения воспалительных заболеваний в гинекологии и мази, применяемой в акушерстве, содержащей ЭП в сочетании с продуктами пчеловодства и экстрактом ламинарии.

Степень разработанности темы исследования

Большой интерес вызывает разработка интравагинальных средств в виде мази и капсул, это направление разработано недостаточно, особенно это касается лекарственных средств, применяемых в акушерстве для подготовки шейки матки к родам. В настоящее время технологические исследования по созданию акушеркой мази недостаточно разработаны, следовательно, есть возможность изучения и использования продуктов пчеловодства в сочетании с экстрактом ламинарии. Имеются неполные сведения по разработке капсул для интравагинадьного применения, содержащего наполнитель, включающий микрогранулы в сочетании с экстрактом прополиса.

Цель it задачи исследования

Разработка новой технологии мягких лекарственных форм, предназначенных для профилактики, комплексного лечения воспалительных заболеваний в гинекологии, и в акушерстве, для подготовки шейки матки к родам.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

1) Научно обосновать и разработать состав, технологию получения лекарственных средств, содержащих ЭП.

2) Изучить влияние вспомогательных веществ на показатели качества создаваемых лекарственных форм.

3) Разработать технологические схемы получения вагинальных лекарственных форм в виде мягких капсул с метронидазолом, сульфадимезином и ЭП и мази с маточным молочком, трутневым гомогенатом, экстрактом прополиса и экстрактом ламинарии.

4) Изучить фармацевтическую доступность лекарственных средств: капсул и мази - в опытах in vitro.

5) Разработать методы стандартизации капсул и мази (капсулы с метронидазолом, сульфадимезином и ЭП, мази с маточным молочком, трутневым гомогенатом, экстрактом прополиса и экстрактом ламинарии).

6) Изучить антиоксидантную активность разработанных составов лекарственных форм, содержащих продукты пчеловодства в сочетании с антибактериальными веществами, определить стабильность, условия хранения и сроки годности разработанных лекарственных форм.

7) Разработать нормативную документацию в виде проектов фармакопейных статей предприятий и лабораторные регламенты на лекарственные формы -капсулы и мазь.

Научная новизна

На основании биофармацевтических, технологических и аналитических исследований впервые разработаны составы мягких лекарственных средств: комплексной мази для акушерской практики для подготовки шейки матки к родам и вагинальных капсул комплексного действия для профилактики и комплексного лечения послеабортного эндометрита.

В разработанные составы лекарственных средств в виде капсул и мази впервые введены действующие компоненты для гинекологических капсул: метронидазол, сульфадимезин, ЭП; для акушерской мази трутневый расплод, маточное молочко, ЭП и экстракт ламинарии.

Впервые разработаны технологические схемы на получение мягких вагинальных капсул и акушерской мази, проведено нормирование качества, установлены условия и сроки годности для разработанных лекарственных форм.

Разработаны и валидированы методики анализа активных компонентов, входящих в состав мази и мягких капсул.

Новизна основных фрагментов исследований подтверждена патентом РФ №2496507 «Мазь с экстрактом прополиса, трутневым расплодом пчел, маточным молочком и экстрактом ламинарии для подготовки шейки матки к родам» от 27.10.2013; патентом РФ №2553353 «Гинекологические капсулы (овули) для комплексного лечения послеабортного эндометрита» от 18.05.2015.

Теоретическая и практическая значимость

Впервые разработаны и теоретически обоснованы составы и технологические схемы производства акушерской мази с ЭП, трутневым расплодом пчел, маточным молочком и экстрактом ламинарии для подготовки шейки матки к родам; мягких гинекологических капсул содержащие метронидазол, сульфадимезин и ЭП. Разработаны методики качественного (ТСХ) и количественного (ФЭК, СПФ, ХМСПФ) анализа лекарственных форм.

Разработаны «Лабораторный регламент на производство мази с экстрактом прополиса, трутневым расплодом пчел, маточным молочком и экстрактом ламинарии», «Лабораторный регламент на производство гинекологических капсул с метронидазолом, сульфадимезином и экстрактом прополиса»; проекты ФСП: «Мазь с экстрактом прополиса, трутневым расплодом пчел, маточным молочком и экстрактом ламинарии», «Капсулы с метронидазолом, сульфадимезином и экстрактом прополиса».

Результаты выполненной работы используются в учебном процессе кафедры фармации ГБОУ ВПО «Южно-Уральского государственного медицинского университета» МЗ РФ, г. Челябинск (Акт о внедрении от 30.08.2014г.); кафедры

фармации ФГБОУ ВПО Бурятский государственный университет, г. Улан-Удэ (Акт о внедрении от 17.12.2014г.); кафедры фармацевтической технологии с курсом биотехнологии ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет МЗ РФ, г. Уфа (Акт о внедрении от 25.12.2014г.); кафедры акушерства и гинекологии № 3 ГБОУ ВПО Башкирский государственный медицинский университет МЗ РФ, г. Уфа (Акт о внедрении от 25.12.2014г.).

Методология и методы исследования

В диссертационном исследовании использованы инструментальные, технологические, биофармацевтические, физико-химические, микробиологические и статистические методы анализа.

Методология диссертационной работы основывается на технологических и биофармацевтических исследований при разработке составов, технологии и методов контроля мягких лекарственных форм.

Положения, выносимые на защиту

1. Результаты исследований по обоснованию составов и технологии получения акушерской мази «Мазь с экстрактом прополиса, трутневым расплодом пчел, маточным молочком и экстрактом ламинарии для подготовки шейки матки к родам» (Патент РФ №2496507); гинекологических капсул «Гинекологические капсулы (овули) для комплексного лечения послеабортного эндометрита» (патент №2553353);

2. Результаты разработки и оптимизации методик определения подлинности метронидазола и сульфадимезина методом хромато-масс-спектрометрии, количественного определения входящих действующих веществ в состав лекарственных форм методом спектрофотометрии;

3. Результаты определения показателей качества и стабильности разработанных составов мази «Мазь с экстрактом прополиса, трутневым расплодом пчел, маточным молочком и экстрактом ламинарии для подготовки шейки матки к родам», гинекологических капсул «Капсулы с метронидазолом, сульфадимезином и экстрактом прополиса»;

4. Результаты определения антиоксидантной активности мази капсул методом хемилюминесценции.

5. Проекты ФСП на лекарственные средства в форме мази и капсул (применяемых в акушерско-гинекологической практике) с экстрактом прополиса.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность полученных результатов подтверждается благодаря инструментальным, технологическим, биофармацевтическим, физико-химическим, инструментальным и микробиологическим методам анализа.

Основные положения диссертационной работы обсуждались на научно-практической конференции «Пути развития пчеловодства в России через успешный опыт регионов России, стран СНГ и дальнего зарубежья» (Ярославль, 2011 г.). Международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (Москва, 2011, 2012 г.). Здоровье семьи — XXI век: Материалы XVI Международной научной конференции (Венгрия, Будапешт, 2012 г.).На Республиканской конференции молодых ученых Республики Башкортостан «Вопросы теоретической и практической медицины» (Уфа, 2012-2014гг). Proceedings of the 1st international academic conference Applied and Fundamental Studies hosted by the Publishing House «Science and Innovation Center», and the International Journal of Advanced Studies (St. Louis, Missouri, USA, 2012). Ha Всероссийской молодёжной конференции «Фармакологическая коррекция процессов жизнедеятельности. Доклинические и клинические исследования новых лекарственных препаратов» (Уфа, 2012 г.). На первой научной практической конференции молодых ученых медиков «Инновационные технологии в медицине XXI Века», Научный центр сердечно-сосудистой хирургии им. Бакулева А.Н. РАМН (Москва, 2012 г.). На научно-практической конференции молодых ученых и студентов «У.М.Н.И.К.» БГМУ (Уфа, 2012-2014 гг.).На Всероссийской конференции 5-6 октября 2012 «Успехи апитерапии» (г.Рыбное, 2012). На Международной научно-практической конференции «Образование и наука: современное состояние и перспективы развития» (Тамбов, 2013 г.). На Всероссийской научно-методической конференции с международным участием, посвященной 95-летию Иркутского Государственного медицинского университета (Иркутск, 2014 г.).

Публикации и вклад автора в разработку работы

Автором выбрано научное направление исследований, сформулирована цель и задачи, обоснован выбор методов их решения. Лично проведены исследования, соответствующие поставленной задаче, с последующим комплексным анализом полученных в процессе исследований результатов. Автором представлено научное обоснование и разработаны составы новых лекарственных средств, осуществлена аналитическая и статистическая обработка полученных результатов, сформулированы выводы. С учетом результатов экспериментально-теоретических исследований впервые разработаны технологические схемы создания и производства акушерской мази и мягких вагинальных капсул.

По теме диссертации опубликовано 22 научные работы в том числе, 9 научных статей в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, получено 3 патента на изобретение.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно -исследовательских работ ГБОУ ВПО БГМУ Минздрава России по проблеме «Фармакология и фармация». Номер гос. регистрации 01200507996. Направлением проблемной комиссии по фармации и фармакологии, а также в рамках программы Академии наук Республики Башкортостан, отделения медицинских наук «Изыскание и изучение новых лекарственных средств» по теме: «Экспериментально-теоретическое обоснование технологии получения мази и капсул с экстрактом прополиса для акушерско-гинекологической практики».

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Исследования диссертационной работы соответствуют паспорту специальности 14.04.01 - Технология получения лекарств, а именно: пункту 1 -исследование теоретических основ фармацевтической технологии, валидации, управление рисками, перенос технологий с этапа фармацевтической разработки в серийное производство, пункту 3 - разработка технологий получения субстанции и готовых лекарственных форм; пункту 4 - исследования по изучению особенностей технологии получения готовых лекарственных форм из различных видов субстанций, сырья и вспомогательных веществ, пункту 6 - исследование биофармацевтических аспектов в технологии получения лекарственных средств их дизайн и изучение факторов, влияющих на биодоступность.

Объем и стру1сгура диссертации

Диссертационная работа изложена на 161 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, двух глав экспериментальных исследований, общих выводов, приложений и библиографии.

Работа иллюстрирована 43 таблицами и 39 рисунками.

Библиографический указатель включает 164 источника литературы, из них 26 иностранных авторов.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Во введении обоснована актуальность проблемы, сформулированы цели и задачи исследования, охарактеризована научная новизна и практическая значимость полученных результатов.

В первой главе, посвященной обзору литературы, приведены данные об аспектах создания лекарственных средств. Приведенный в обзоре арсенал лекарственных средств невелик, и основные усилия исследователей направлены на новые методы лечения воспалительных заболеваний женской половой сферы, а также средств для подготовки шейки матки к родам. Поиск литературной информации направлен на разработку новых лекарственных средств с использованием

современных вспомогательных веществ и известных антимикробных активных компонентов. Проанализированы современные аспекты применения экстракта ламинарии и продуктов пчеловодств, а именно: трутневого и маточного молочка и экстракта прополиса. Проведен анализ применения хемилюминесценции по исследованию свободно-радикального окисления в разработке лекарственных средств.

Во второй главе изложены объекты исследования и методики экспериментов. В качестве объектов исследования использовали сырье и вспомогательные вещества, по показателям качества соответствующие требованиям ГФ XII, ФС или НД (ГОСТ, ТУ).

Аналитическое оборудование включало: весы лабораторные ВЛТЭ - 150; весы аналитические ВЛР - 200; рН-метр 121 и рН - метр 150 М для измерения рН; термостат ТС - 80 М-2; ERWEKA ZT 221; спектрофотометр марки СФ-56 и «HEWLETTPACKARD 8452А»; фотоэлектроколориметр марки КФК-2-УХЛ-4.2; газожндкостной хроматограф AGILENT-6890; масс селективный детектор AGILENT 5979 N.

Идентификацию компонентов в лекарственных формах осуществляли методом ТСХ с использованием пластин марки «Silufo!».

Микроскопические исследования проводили с использованием микроскопа Биолам с фотокамерой Olimpus 46.

Реологические исследования на вискозиметрах «Reotestn», РВ 8.

Регистрацию сверхслабого свечения проводили на приборе «Хемилюминомер ХЛМ-003».

Статистическую обработку результатов осуществляли согласно ГФ XI.

Глава 3. Разработка состава, технологии и нормирование качества вагинальных капсул, содержащих метронидазол, сульфадимезин и масляный экстракт прополиса для комплексного лечения острого и хронического эндометрита

В результате исследований подобран оптимальный состав и технология приготовления вагинальных капсул, содержащих метронидазол, сульфадимезин и ЭП, изучены физико-химические и технологические свойства субстанций (ГФ XII изд. ОФС 42-0074-07 «Фармацевтические субстанции», с.484) и ЭП масляного. В результате технологических исследований (форма и размер частиц, фракционный состав, сыпучесть, насыпная масса, угол естественного откоса) субстанций и сочетание метронидазола, сульфадимезина показали неудовлетворительные свойства при введении их в ЭГ1 15%, а именно, адгезию, в процессе хранения, поэтому субстанции были подвергнуты процессу грануляции, впоследствии микрогранулы

были введены в масляный ЭП, и полученным наполнителем были заполнены капсулы.

В состав микрогранул разрабатываемого нами наполнителя входят лекарственные вещества: метронидазол, сульфадимезин и вспомогательные вещества: крахмал и глюкоза в различных соотношениях, увлажнитель - ПВП, пленкообразователь - 5% раствор ПВС.

Содержание микрогранул в одной капсуле: метронидазол - 0,01 г, сульфадимезин - 0,05 г. Количество вспомогательных веществ составило 1:1 к действующим, т.е. 0,06 г. При выборе вспомогательных веществ для получения микрогранул использовались наполнители, крахмал и глюкоза, в различных соотношениях и гранулирующие жидкости ПВП 5%, ГЭЦ 0,25%; МЦ 3%.

Полученные микрогранулы, покрывали растворимой оболочкой 5% ПВС, устойчивой в кислой и нейтральной среде, что позволяет использовать их в качестве дисперсной фазы для приготовления вагинальных капсул с метронидазолом и сульфадимезином.

Для разработки состава мягкой желатиновой капсулы овальной формы емкостью 1,2-1,5 г использовали комбинации вспомогательных веществ (таблица 1).

Таблица 1 - Составы капсул

Составы Ингредиенты, г

№ Желатин Глицерин Диметикон Вода очищенная

1 10,0 5,0 0,75 9,25

2 5,0 10,0 0,75 9,25

3 2,5 7,5 0,75 14,25

4 5,0 10,0 1,0 9,0

Составы готовили по общепринятой технологии производства капсул способом погружения [Чуешов В.И., 2002]. Качество капсул оценивали по внешнему виду, целостности оболочки. Состав № 2 легко снимается с оливы, оболочка эластичная, мягкая, при хранении остается неизменной, и может использоваться для дальнейшего заполнения капсул наполнителем, включающего смесь лекарственных веществ в сочетании со вспомогательными веществами. В состав данного наполнителя в качестве дисперсной фазы включены разработанные микрогранулы с метронидазолом и сульфадимезином, а состав дисперсионной среды был выбран экспериментально. Для выбора оптимальной жидкой дисперсионной среды исследовали растворы следующих составов: масляный ЭП 15%; водный раствор крахмала 10% с масляным ЭП 15% (1:1) и водный раствор метшщеллюлозы 3% с масляным ЭП 15% (1:1). Количество дисперсионной среды рассчитывали, исходя из удобства дозирования в дальнейшем применении (1 мл на 1 капсулу). Изучены основные технологические характеристики капсул (таблица 2).

Таблица 2 - Технологические свойства капсул

Технологические свойства ЭП 15% масляный МЦЗ%иЭП 15% масляный(1:1) Крахмал 10% и Э/7 масляный 15% (1:1)

Текучесть ++ + +

Равномерность распределения ++ + +

Расслоение при длительном стоянии - ++ +

Легкость распределения после расслаивания + - +

Загустевание при стоянии - - ++

Деформация оболочки капсул при введении наполнителя + ++

Примечание: - неудовлетворительный показатель, + удовлетворительный показатель, ++ положительный показатель

Таким образом, определена оптимальная дисперсионная среда для капсул - ЭП 15% масляный. Впервые разработан оптимальный состав и технология приготовления вагинальных капсул, содержащих метронидазол, сульфадимезин и ЭП для комплексного лечения острого и хронического эндометрита (таблица 3).

Таблица 3 — Состав вагинальных мягких капсул

Состав капсул Количество, г Концентраг(ия, г/мл

Метронидазол 0,01 г 0,01 г/мл

Сульфадимезин 0,05 г 0,05 г/мл

Глюкоза 0,04 г 0,04 г/мл

Крахмал 0,02 г 0,02 г/мл

ПВП 5% 0,07 г 0,07 г/мл

ПВС 5% 0,07 г 0,07 г/мл

Масляный ЭП 15% 1,0 г 1,0 г/мл

Желатин 0,2 г 0,2 г/мл

Глицерин 0,4 г 0,4 г/мл

Диметикон 0,04 г 0,04 г/мл

Вода очищенная 0,3 г 0,3 г/мл

На основании проведенных исследований разработана технологическая схема получения капсул с метронидазолом, сульфадимезином и ЭП, рисунок 1.

ВР 1.1 Приготовление дез.средств

ВР 1.2 Подготовка оборудования

ВР 1.3 Подготовка помещений

ВР 1.4 Подготовка персонала

ВР 1.5 Получение воды очищенной

ВР 2.1 Подготовка порошковой массы для приготовления микрогранул

ВР 2.1.1 Отвешивание порошков

ВР 2.1.2 Измельчение и смешивание порошков

ВР 2.2 Подготовка раствора увлажнителя

ВР 2.3 Подготовка ингредиентов для получения оболочки капсул

ВР-1

ВР-2

ТП3.1 Увлажнение порошковой массы

ТП 3.2 Протирание увлажненной массы через сито

ТПЗ.З Сушка микрогранул

ТП 3.2 Покрытие микрогранул пленкообразователем

ТП4.1 Ситовой анализ гранулята

ТП 5.1 ТП 5.2 Введение микрогранул в состав ДС

1 омогенизация наполнителя

ТП 5.3 Получение капсул

ТП5.4 Заполнение капсул наполнителем с микрогранулами

УМ07.1 Фасовка в банки из стекломассы

УМ072 Маркировка банок с капсулами

тп-з

ТП-5

Вспомогательные работы

Отходы

Подготовка сырья и материалов

Механические потери

Получение гранулята

ТП-4

Механические потери

Стандартизация гранулята

Получение капсул с наполнителем из микрогранул

ТП-6

Оценка качества капсул

УМО-7

Упаковка и маркировка готовых капсул

Готовый продукт

На склад

Механические потери

Рисунок 1 Технологическая схема получения мягких капсул с микрогранулами метронидазола, сульфадимезина и ЭП

Для определения биологической доступности капсул использовали тест «Растворение», согласно методике испытаний в нормативной документации ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». Для определения растворимости разработанных капсул была экспериментально подобрана модельная система - вода очищенная, подкисленная уксусной кислотой до рН = 5,0 (рН влагалищной среды соответствует 5,0), при автоматическом нагреве водяной бани 37±0,5°С, на полуавтоматической системе растворения ЕИЛУЕКА марки гт 221 «Качающийся цилиндр», возвратно-поступательными движениями цилиндров с капсулами, при расстоянии 9,9-10,1 см, отбор проб производили вручную через каждую временную точку с последующим количественным определением действующих веществ, рисунок 2.

Время растворения, минуты

Рисунок 2 Растворимость капсул с метроиидазолом, сульфадимезином и ЭП в

модельной системе

Как видно из рисунка 2, начало высвобождения метронидазола из капсул наблюдалось на 2-3 минуте (на второй минуте разрыв капсулыюй оболочки) и полное высвобождение препарата к 8 минуте, а полное растворение капсулыюй оболочки отмечено на 10-11 минуте.

Для стандартизации мягких капсул, содержащих метронидазол, сульфадимезин и масляный ЭП, разработали и валидировали методики количественного определения компонентов лекарственной формы, предварительно изучив спектры поглощения PCO метронидазола и сульфадимезина. Измерения проводились на спектрофотометре марки СФ-56. Для идентификации флавоноидов в экстракте прополиса предварительно проводили определение методом тонкослойной хроматографии на хроматографической пластинке марки «Silufol UV254" с тонким слоем сорбента. На основании полученных данных установили, что во всех системах растворителей проявляется пятно, которое по интенсивности окраски и величине Rf совпадает с пятном PCO рутина, что свидетельствует о присутствии флавоноидных соединений.

Разработку норм качества полученных вагинальных капсул проводили в соответствии с требованиями ГФ XI и ОСТ 91500.05.001-00 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения». По результатам микробиологических исследований капсулы с метронидазолом, сульфадимезином и экстрактом прополиса соответствуют требованиям Государственной Фармакопеи.

Значительный интерес представляет изучение антибактериальной активности капсул. Определение чувствительности микроорганизмов осуществлялось диско-диффузным методом [МУК 4.2.1890-04]. Установлено, что капсулы проявляют антибактериальную активность, как против грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов.

Результаты исследований, приведенных в таблице 4, свидетельствуют о стабильности хранения капсул, содержащих метронидазол, сульфадимезин и экстракт прополиса в контурно ячейковой упаковке из ПВХ и стеклянной банке с пластмассовой навинчивающейся крышкой, как в условиях холодильной камеры, так и при комнатной температуре.

Таблица 4 - Стабильность капсул в процессе хранения, + 20°С

Срок хранения, месяц, дата, № анализа Показатели качества

Органолепти- ческие свойства Средняя масса Однородность Растворение, мин. Содержание метро-нидазола, г Содержание сульфадимезина, г Содержание флаво-ноидов (рутин), г

0, 26.11.12г. 20098 Капсулы желтого цвета, продолговатой овальной формы с гладкой поверхностью 2,2 ±0,01 Оболочка капсул однородная, наполнитель не однородный, содержит микрогранулы 11,13 ±2 0,012 ±0,002 0,050 ±0,040 0,262 ±0,032

6, 27.05.13г. 20056 » 2,2 ±0,01 » 11,13 ±2 0,012 ±0,002 0,050 ±0,014 0,262 ±0,030

12, 27.11.13г. 20013 » 2,2 ±0,01 » 11,14 ±2 0,011 ±0,002 0,049 ±0,012 0,262 ±0,016

18, 27.05.14г. 20075 » 2,2 ±001 » 12,03 ±3 0,011 ±0,002 0,048 ±0,035 0,261 ±0,025

24, 27.11.14г. 20867 » 2,2 ±0,01 » 12,42 ±1 0,011 ±0,001 0,048 ±0,015 0,250 ±0,018

27, 27.05.15г. 20035 » 2,2 ±0,01 » 15,67 ±2 0,011 ±0,001 0,048 ±0,002 0,249 ±0,031

В течение срока наблюдения все показатели качества существенно не менялись, на хроматограммах дополнительных пятен не обнаружено. Соответственно, капсулы целесообразно хранить в течение двух лет.

С использованием метода хемилюминесценции установлена способность капсул снижать окислительную активность свободных радикалов в модельной среде на 95%, что сравнимо с действием известного антиоксиданта мексидола, использовавшегося как препарата сравнения. Таким образом, установлено, что в модельных системах активных форм кислорода и перекисного окисления липидов, исследуемые капсулы проявили антиоксидантные свойства.

Глава 4. Технологические исследования по разработке состава, технологии получения и методов анализа мази с маточным молочком, трутневым расплодом пчел, ЭП и экстрактом ламинарии

Исследования направлены на разработку лекарственной формы в виде мази с трутневым расплодом пчел, маточным молочком, экстрактом прополиса и экстрактом ламинарии, для подготовки шейки матки к родам для интравагиналыюго применения. В маточном молочке содержатся витамины группы В и 22 аминокислоты и микроэлементы. Трутневый гомогенат отличается большим количеством функциональные групп ферментов, сульфгидрильных групп, а также гормонов -тестостероидов, прогестерона и эстрадиола, не являясь при этом гормонозаменителем [Иойриш Н.П., 1976, Лудянский Э.А., 1994]. Ламинария по литературным данным [Зузук Б.М., Куцик Р.В., 2004] не одно столетие использовалась для подготовки к родам в виде палочек ламинарии или тампонов с измельченными водорослями. Основным составным веществом ламинарии является полисахарид альгиновая кислота. В экстракте содержатся также аминокислоты, которые входят в состав эластичных волокон кожи и влияют на смягчение шейки матки.

Для определения состава мази с маточным молочком, трутневым расплодом, ЭП и экстрактом ламинарии изучено семь мазевых композиций (таблица 5).

Выбор оптимального сочетания основы и лекарственных веществ проводили, оценивая внешний вид мазей, их намазываемость, а также опираясь на показатели кинетики высвобождения полученных мазей, согласно определению фармацевтической доступности методом тонкослойной хроматографии (ТСХ).

Фармацевтическую доступность in vitro действующих веществ из мазевых композиций № 5,6 определяли методом тонкослойной хроматографии. Наилучшая система растворителей с последующим проявлением в УФ свете, смесь этилацетата, этанола и аммиака (17:2:1). На основании экспериментальных данных по изучению фармацевтической доступности на выбранной системе растворителей были исследованы все семь изучаемых составов. Лучшей композицией была мазевая

основа № 6, содержащая ГЭЦ, кремофор, лутрол и воду очищенную, с добавлением действующих веществ: маточное молочко, трутневый гомогенат, ЭП и экстракт ламинарии.

Таблица 5 - Составы основ, используемых для приготовления 5% мази с маточным молочком, трутневым расплодом, ЭП и экстрактом ламинарии

№ основы Ингредиенты, г Внешний вид Намазываемость

Вазелин Ланолин Лутрол Твин 80 Эмульгатор Т-2 Кремофор ЯН - 40 Сорбитанолеат 1 Пентол 1 Эмульгатор - № 1 Глицерин ССМА ГЭЦ 1 Вода очищенная 1

1 60,0 10,0 10,0 До 100,0 | Однородная +

2 47,5 2,5 Неоднородная, комочки -

3 28,0 2,0 Однородная, плотной консистенции +

4 10,0 8,0 10,0 Однородная, но со временем расслаивается -

5 5,0 1,0 Неоднородная

6 2,0 1,0 5,0 Однородная, глянцевая, мягкой консистенции + +

7 35,0 5,0 4,0 Неоднородная -

Примечание: - намазываемость неудовлетворительная, + хорошо намазывается ++ очень легко намазывается

Таким образом, впервые разработан оптимальный состав мазевой композиции и технологическая схема получения мази с маточным молочком, трутневым расплодом, ЭП и экстрактом ламинарии (рисунок 3).

BP 1.1 Приготовление дез.средств

BP 1.2 Подготовка оборудования

BP 1.3 Подготовка помещений

BP 1.4 Подготовка персонала

BP 1.5 Получение воды очищенной

BP 2.1 Мойка, сушка посуды

BP 2.2 Взвешивание действующих веществ

BP 2.3 Взвешивание вспомогательных веществ

ТП3.1 Получение основы

ТП3.2 Введение в основу действующих веществ

ТПЗ.З Гомогенизация мази

УМО Фасовка мази

УМО Упаковка готовой продукции

ВР-1

ВР-2

ТП-3

Вспомогательные работы

Отходы

Подготовка сырья и материалов

Механические потери

Получение мази

Механические потери

ТП-4 Оценка качества мази

УМО-5 Фасовка и упаковка готовой продукции

/

Готовый продукт

На склад

Механические потери

Рисунок 3 Технологическая схема получения мази с маточным молочком, трутневым расплодом, ЭП и экстрактом ламинарии

Для определения влияния мази при нанесении на слизистую в опытах in vitro использовали методику стекания мази в модельной среде имитирующей влагалищное отделяемое [Пат. 2149399. 2000]. В качестве имитации цервикальной жидкости (ЦЖ) влагалищного отделяемого, взят раствор метилцеллюлозы 3%. Исследованиям подвергались образцы вагинальных мазей применяемых в II и 111 триместрах

беременности: Клиндамицин крем, Метрогил вагинальный гель, Ионолгель (таблица 6).

Таблица 6 - Сравнительные исследования разработанной мази и вагинальных препаратов в сочетании с имитацией ЦЖ 3% МЦ в модельных опытах in vitro

Препарат испытаний Масса навески Время распределения, МИНУТЫ Площадь полного распределения, см2 Приме чание

Разработанная мазь 3,0 30 16,25±2,5 +

Клиндамицин крем 3,0 45 13,69±1,56 _

Метрогил вагинальный гель 3,0 30 18,49±1,15 +

Ионолгель 3,0 30 15,53±1,27 +

Примечание: + образец мази однородный; - образец мази не однородный.

Как видно из таблицы 6, мазь с маточным молочком, трутневым расплодом, ЭП и экстрактом ламинарии не уступает по показателям площади распределения препаратам в сравнительных исследованиях, в сочетании с имитацией ЦЖ 3% МЦ в опытах in vitro.

Для стандартизации мази, содержащей маточное молочко, трутневый гомогенат, ЭП и экстракт ламинарии, разработали и валидировали методики количественного определения. Первым этапом было исследование полисахаридного состава экстракта ламинарии. Измерения проводились на спектрофотометре марки СФ-56. Содержание аминокислот в трутневом гомогенате и маточном молочке определяли методом тонкослойной хроматографии. В связи с этим нами была изучена возможность использования спектрофотометрии на основе реакции с нингидрином для суммарного количественного определения аминокислот. Пересчет вели на кислоту глутаминовую.

Лекарственный препарат стабилен в течение 24 месяцев хранения в алюминиевых тубах от 0 до 20 °С (таблица 7).

По результатам исследований антимикробной активности установлено, что мазь с маточным молочком, трутневым расплодом, ЭП и экстрактом ламинарии проявляют антибактериальную активность, как против грамположительных, так и грамотрицательных микроорганизмов.

Таблица 7 — Стабильность мази с маточным молочком, трутневым расплодом, экстрактом прополиса и экстрактом ламинарии

Срок хранения месяц, дата, № анализа

Показатели качества 0, 20.10.11г. 201011 6, 20.04.12 200412 12, 20.10.12 201012 18, 20.04.13 200415 24, 21.10.13 201013 27, 21.04.14 210414

Органолепти- ческие свойства: - внешний вид - цвет - запах Мазь желтого цвета, однородная по консистенции со специфическим запахом продуктов пчеловодства » » » » »

рН водного извлечения 5,5 5,45 5,4 5,4 5,4 5,4

Подлинность ЭП спиртового Цветная реакция с солями алюминия хлорида, желто-зеленое окрашивание » » » » »

Масса, г 100,0 100,0 100,0 100,0 99,9 99,8

Количественное содержание флавоновдов и других фенольных соединений, в пересчете на рутин, % не менее 0,1415±0,17 0,1408 ±0,24 0,1401 ±0,24 0,1397 ±0,24 0,1395 ±0,24 0,1389 ±0,25

Микробиологическая чистота Не более 10^ бактерий и 102 грибов, отсутствие патогенной флоры » » » » »

С использованием метола хемилюминесценции мазь проявила антиоксидантные свойства, снижая светосумму свечения на 77%, что сравнимо с действием известного антиоксиданта мексидола, использовавшегося как препарат

сравнения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

1. Обоснована технология получения лекарственных средств с экстрактом прополиса в виде капсул для гинекологической практики и мази для акушерской практики с учетом технологических свойств действующих веществ, вспомогательных веществ в результате теоретических, технологических, физико-химических, аналитических исследований.

2. Изучено влияние вспомогательных вешеств на показатели качества лекарственных форм в виде капсул и мази.

3. Разработаны технологические схемы получения вагинальных лекарственных форм, содержащих капсулы с метронидазолом, сульфадимезином и экстрактом прополиса и мази с маточным молочком, трутневым гомогенатом, экстрактом прополиса и экстрактом ламинарии.

4. Изучена фармацевтическая доступность действующих веществ из разработанных лекарственных форм: капсул и мази - в зависимости от содержания и природы вспомогательных веществ для мази с использованием модифицированного метода ТСХ, для капсул - тест «Растворение» в опытах in vitro.

5. Разработаны методики качественного (ТСХ) и количественного (ФЭК, СПФ, ХМСПФ) анализа лекарственных форм, необходимых для проведения стандартизации.

6. Показана преимущественная способность маточного молочка, трутневого расплода пчел, экстракта ламинарии в сочетании с экстрактом прополиса, а также метронидазола, сульфадимезина в сочетании с экстрактом прополиса взаимодействовать с различными типами радикалов и снижать хемилюминесценцию модельных систем, связанных с перекисным окислением липидов и генерацией активных форм кислорода. Определены оптимальные условия и сроки хранения разработанных капсул и мази, которые составили для каждой лекарственной формы 2 года.

7. Разработаны проекты фармакопейных статей и лабораторные регламенты на разработанные лекарственные формы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации Статьи в рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК:

1) Шикова, Ю.В. Ситуационный анализ потребительского рынка лекарственных средств, применяемых в гинекологии / Ю.В. Шикова, С.Н. Ивакина, A.B. Епифанова, H.A. Шиков, С.Б. Бахтиярова, Р.А Зарипов, В.В. Петрова // Традиционная медицина -2011 - № 5-е. 417-421.

2) Шикова, Ю.В. Определение оптимальной мазевой композиции с продуктами пчеловодства с помощью метода математического планирования / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, A.B. Епифанова, Е.В. Симонян, В.В. Петрова // Вестник Воронежского государственного университета. Серия: химия, биология, фармация- 2013. - № 2 - с. 181-185.

3) Шикова, Ю.В. Анализ современного состояния рынка лекарственных препаратов, применяемых в гинекологии / Ю.В. Шикова, С.Н.Ивакина, В.А. Лиходед, A.B. Епифанова, H.A. Шиков, С.Б. Бахтиярова, P.A. Зарипов, В.В. Петрова // Традиционная медицина - 2012. - №5 - с. 14-17.

4) Обоснование применения продуктов пчеловодства в гинекологической практике / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, В.Н. Радутный, A.B. Епифанова, H.A. Шиков, В.В. Петрова // Рецензируемый научно-практический журнал. Мать и дитя в Кузбассе. Спец. Вып.№1 , №4(51) 2012 -С. 195-196.

5) Шикова, Ю.В. Сравнительное изучение реологических свойств мази на эмульсионной и гелевой основе / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, А.И. Булгакова, A.B. Лиходед, A.B. Епифанова, В.В. Петрова, Е.Ф. Юничева // Медицинский альманах -2013.-№2 (26).-с. 194-196.

6) Шикова, Ю.В. Влияние продуктов пчеловодства на процесс образования активных форм кислорода. Возможность их применения в составе лекарственных форм / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, P.P. Фархутдинов, Е.В. Симонян, ЮЛ. Баймурзина, А.Г. Нэвес да Силва, A.B. Епифанова, Е.В. Елова, В.В. Петрова // Медицинский вестник Башкортостана - 2013. -т.8. - № 6. - с. 151-153

7) Шикова, Ю.В. Аспекты научно-инновационного направления кафедры фармацевтической технологии в разработке составов и технологии лекарственных средств / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, Ф.Х. Кильдияров, З.Р. Кадырова, М.В. Мельников, В.В. Петрова // Вестник Башкирского государственного медицинского университета. Том 1., №2, 2012г., -с. 267-274.

8) Шикова, Ю.В. Изучение аминокислотного состава экстракта большой восковой моли и гомогената трутневого расплода / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, Е.В. Симонян, A.B. Епифанова, Е.А. Евсельева, О.Н. Меренкова, В.В. Петрова ,7 Вестник Воронежского государственного университета. Серия:химия, биология, фармация.2014,№3, Июль-сентябрь. -С.133-136.

9) Шикова Ю.В. Средства вагинального применения для профилактики и лечения нарушений экосистемы женских урогениталиев / Г.В. Аюпова, A.A. Федотова, K.P. Бондаренко, А.Р. Мавзютов, A.M. Ишемгулов, Ю.В. Шикова, Е.Д. Батырова, В.В. Петрова //Научный журнал «Известия Самарского научного центра РАН, Экология и здоровье матери и ребенка, - 2012, том 14, №5(2) с.315-319.

Патенты:

10) Шикова, Ю.В. Способ комплексного лечения неспецифических воспалительных заболеваний женской половой сферы / Ю.В. Шикова, Т.А. Лиходед, В.А. Лиходед, A.B. Епифанова, С.Н. Ивакина, А.Н. Шиков, С.Б. Бахтиярова, P.A. Зарипов, В.В. Петрова // Патент на изобретение № 2481102 Зарег. В Госреестре РФ 10 мая 2013 г.

11) Шикова, Ю.В. Мазь с экстрактом прополиса, трутневым расплодом пчел, маточным молочком и экстрактом ламинарии для подготовки шейки матки к родам / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, И.В.Сахаутдинова, H.A. Шиков, Ю.Л. Баймурзина, С.Б.

Бахтиярова, P.A. Зарипов, B.B. Петрова // Патент па изобретение № 2496507 Зарег. в Госреестре РФ 27 октября 2013 г.

12) Щикова, Ю.В. Гинекологические капсулы (овули) для комплексного лечения послеабортного эндометрита / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, В.В. Петрова, Е.В. Симонян, H.A. Шиков, С.Б. Бахтиярова, P.A. Зарипов, // Патент на изобретение № 2553353 Зарег. в Госреестре РФ 18 мая 2015г.

Материалы научно-практических конференций:

13) Шикова, Ю.В. Определение антибактериальной активности мази, содержащей продукты пчеловодства / Ю.В Шикова., Т.А. Лиходед, А.Г. Нэвес да Силва, A.B. Епифанова, С.Б. Бахтиярова, P.A. Зарипов В.В. Петрова // Материалы международной научно-практической конференции «Пути развития пчеловодства в России через успешный опыт регионов России, стран СНГ и дальнего зарубежья» -Ярославль, 2011. - с. 178-179.

14) Шикова, Ю.В. Выбор состава основы мази для акушерской практики / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, В.Н. Радутный, A.B. Епифанова, H.A. Шиков, A.B. Браженко, З.Р. Кадырова, С.Б. Бахтиярова, P.A. Зарипов, В.В. Петрова // Сборник Здоровье семьи — XXI век: Материалы XVI Международной научной конференции - Ч. II. -Пермь: ИПК «ОТ и ДО», 2012. — с.166-168.

15) Епифанова, A.B. Определение антиоксидантной активности продуктов пчеловодства в составе мягких лекарственных форм / А.Г.Нэвес да Силва, A.B. Епифанова, Ю.Л. Баймурзина В.В. Петрова // Материалы 77-ой республиканской научной конференции студентов и молодых ученых «Вопросы теоретической и практической медицины» - Уфа, 2012 - апрель, с. 202-204.

16) Шикова, Ю.В. Development of structure complex suppositories for treatment of intestinal inflammatory diseases / Y.V. Shikova, V.A. Likhoded, A.V. Epifanova, A.G. Neves da Silva, N.A. Shikov, S.B. Bakhtiyarova, R.A. Zarypov V.V. Petrova // Proceedings of the 1st international academic conference Applied and Fundamental Studieshosted by the Publishing House «Science and Innovation Center», and the International Journal of Advanced Studies,October 27-28, 2012St. Louis, Missouri, USA, p.66 - 72

17) Шикова, Ю.В. Роль современных вспомогательных веществ в производстве мягких лекарственных форм / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, A.B. Епифанова, В.В. Петрова, А.Г. Нэвес да Силва, Е.Ф. Юничева // Сборник научных трудов по материалам Международной научно-практической конференции «Образование и наука: современное состояние и перспективы развития»- Тамбов, 2013 - 150-151.

18) Шикова, Ю.В. Разработка состава и технологии вагинальной мази / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, И.В. Сахаутдинова, H.A. Шиков, В.В. Петрова // Материалы

Всероссийской молодёжной конференции «Фармакологическая коррекция процессов жизнедеятельности. Доклинические и клинические исследования новых лекарственных препаратов» 8-10 июля 2012 г. - Уфа, 2012. с.172-174

19) Шикова, Ю.В. Разработка состава и технологии мази с продуктами пчеловодства и экстрактом ламинарии / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, С.Б. Бахтиярова, P.A. Зарипов, В.В. Петрова // Материалы 16 Всероссийской конференции 5-6 октября 2012 «Успехи апитерапии» г.Рыбное. 2012. с.42-43.

20) Шикова, Ю.В. Разработка состава и технологии гинекологических лекарственных средств / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, A.B. Епифанова, H.A. Шиков, С.Б. Бахтиярова, P.A. Зарипов, В.В. Петрова // Всероссийская научно-методическая конференция с международным участием. Сборник научно-методических трудов. Иркутск ИГМУ-2014-С. 172-173.

21) Чегурова, А.К. Количественное определение белка в лиофилизированном маточном молочке / А.К. Чегурова, A.C. Заяц, Е.В. Симонян, Ю.В. Шикова, A.B. Епифанова, В.В. Петрова // IV межрегиональная научно-практическая конференция с международным участием «Проблемы фармацевтической науки и практики», -Владикавказ - 2014. - 19-21.

22) Шикова, Ю.В. К вопросу разработки составов лекарственных средств инравагинального применения / Ю.В. Шикова, В.А. Лиходед, В.В. Петрова // Ежемесячный научный медицинский журнал Интер-медикал, - 2014, №3 — с. 134-136.

Подписано в печать 22.10.2015 г. Усл. печ. л. 1,5. Формат 60*84/16 Тираж 120 экз. Заказ № 012210 450080, Уфа, ул. Менделеева, 140/1. Отпечатано в типографии ООО «Владиаль», тел. (347) 222-09-03