Автореферат и диссертация по медицине (14.03.04) на тему:Экспериментальная оценка эффективности применения пептидных препаратов при отравлении этиловым спиртом

На правах рукописи

ХАЛЮТИН Денис Александрович

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ ПЕПТИДНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ОТРАВЛЕНИИ ЭТИЛОВЫМ СПИРТОМ

14.03.04 - Токсикология

14.03.06 - Фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

г 9 ИЮЛ 2015

005570958

Санкт-Петербург, 2015

005570958

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном военном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации

Научные руководители:

Гребенюк Александр Николаевич - доктор медицинских наук профессор, профессор кафедры военной токсикологии и медицинской защиты ФГБВОУ. ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова» МО РФ Рейнюк Владимир Леонидович - доктор медицинских наук доцент, профессор кафедры военной токсикологии и медицинской защиты ФГБВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова»

Официальные оппоненты:

Афанасьев Василий Владимирович — доктор медицинских наук профессор, профессор кафедры скорой медицинской помощи ГБОУ ВПО «СевероЗападный государственный медицинский университет имени И.И. Мечникова»

Оковитый Сергей Владимирович - доктор медицинских наук профессор, заведующий кафедрой фармакологии и клинической фармакологии ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия»

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки «Институт токсикологии Федерального медико-биологического агентства».

Защита диссертации состоится 2015 года в

часов на заседании диссертационного совета Д 215.002.11 на базе Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова и на сайте http://www.vmeda-mil.ru.

Автореферат разослан «^0» СЗ] |_ 2015 г.

Ученый секретарь диссертационного сов^ доктор медицинских наук доцент

/Язенок Аркадий Витальевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Отравления этанолом и его суррогатами часто встречаются как на территории Российской Федерации, так и в зарубежных странах [Лужников Е.А. и др., 2008; Zaridze D. et al., 2009]. В последнее десятилетие в России ежегодно регистрируется от 20 до 45 тыс. смертельных случаев от отравления алкоголем, часто связанных с групповыми и массовыми интоксикациями [Курсов C.B. и др., 2012]. Отравления этанолом и его суррогатами получили широкое распространение и на территории зарубежных стран: только за короткий период в 2011—2012 гг. жертвами массовых алкогольных отравлений стали 470 человек, из них с летальным исходом в Чехии - 27 человек, в Словакии - 17 человек, в Эквадоре - 21 человек [Гасанов И.И. и др., 2013]. В США от отравления алкоголем ежегодно умирает более 2200 человек [McCarthy M., 2015; Каппу D. et al., 2015].

Основным действием спиртов на организм человека является нейротоксическое и гепатотоксическое действие. Поэтому фармакологическая коррекция этих нарушений может осуществляться препаратами, обладающими нейро- и гепатотропным эффектами.

В современной терапии неотложных состояний, связанных с употреблением алкоголя, широко используются средства с нейрометаболической активностью - ГАМК-ергические, серотонинергические, дофаминергические, холинергические модуляторы и модификаторы метаболизма спиртов [Бонитенко Е.Ю. и др., 2009; Шилов В.В. и др., 2012; Johnson В.А. 2004]. В лечении алкогольных интоксикаций также применяют ноотропы и антигипоксанты, которые оказывают нейропротекторное, а именно церебропротекторное действие, а также стимулируют неспецифическую резистентность организма [Бонитенко Ю.Ю., 2005; Ливанов Г.А. и др., 2012; Vaglenova J. et al., 2001]. Однако препараты этих групп не могут в полной мере решить проблемы эффективного восстановления функций центральной нервной системы (ЦНС), нарушенных вследствие алкогольной интоксикации [Александров М.В., 2002; Walker В.М., 2010; Garcia-Moreno L. et al., 2012; Irwin С., 2013]. В связи с этим, поиск новых групп препаратов и расширение спектра их применения в области лечения острых тяжелых отравлений этанолом остается актуальной проблемой современной токсикологии и фармакологии.

Степень разработанности темы диссертационного исследования. Имеющиеся в настоящее время лекарственные средства, в том числе антидоты, не решают в полной мере проблемы оказания помощи при острых крайне тяжелых отравлениях этанолом [Маркизова Н.Ф. и др., 2004; Бонитенко Е.Ю., 2013]. Необходимость улучшения фармакологического обеспечения таких пострадавших по-прежнему не утратила своей актуальности, так как несвоевременное проведение лечебных мероприятий приводит к развитию ранних осложнений, отдаленных последствий и неблагоприятных исходов отравлений [Лужников Е.А: и др., 2014; Bae K.Y., 2012].

В основе существующего в настоящее время арсенала фармакологических средств для терапии острых алкогольных интоксикаций основное место занимают препараты, действующие на ведущие звенья патогенеза острых отравлений спиртами [Шилов В.В. и др., 2001; Машанов А.В. и др., 2008; Попова Е.А. и др., 2014]. Ряд отечественных и зарубежных исследователей отмечают перспективность использования для этих целей препаратов пептидной природы, обладающих нейропротекторным эффектом, снижающих выраженность и продолжительность нейротоксических нарушений, появлявшихся после острого периода алкогольной интоксикации, характеризующихся высокой активностью при использовании малых доз препаратов, отсутствием выраженных побочных явлений при применении терапевтических доз, феноменов привыкания и отмены при относительно длительном курсе лечения [Рохлина М.Л. и др., 2002; Шабанов П.Д., 2008; Sewald N. et al., 2002; Petrov A., 2007]. В частности, В .А. Башариным (2011) было установлено, что семакс, введенный интраназально за 3 ч до начала интоксикации этанолом в дозе 0,8 ЛД50, снижает летальность, ускоряет восстановление неврологических и вегетативных показателей лабораторных животных. Показано также, что орексин А и орексин Б снижают продолжительность потери рефлексов в коматозном состоянии, вызванном острым алкогольным отравлением, путем увеличения кортикальной активности через активацию гистаминергической, норадренергической и серотонинергической систем [Jia X. et al., 2012]. Установлено также, что пероральное введение пептида морского коллагена до и после острой интоксикации этанолом у самок крыс улучшало координацию движений животных и способствовало ускорению биотрансформации этанола [Liang J. et al., 2014]. В работах Д.С. Лисицкого с соавт. (2014) обоснована возможность использования пептидного препарата ноопепта, обладающего ноотропной и нейромодулирующей активностью, в качестве средства фармакологической коррекции нейротоксических поражений как последствий острого отравления этанолом.

В последние годы разработано значительное число новых пептидных препаратов, продемонстрировавших в эксперименте выраженную нейро- и гепатопротекторную активность, таких как кортаген, пинеапон, селанк, глутоксим, моликсан и др. [Шабанов П.Д. и др., 2009; Vilenskii D.A. et al., 2007]. Однако оценка их эффективности в качестве средств профилактики и терапии острых тяжелых отравлений спиртами до настоящего времени не осуществлена, что и послужило основанием для проведения настоящей работы.

Цель исследования: Экспериментальное обоснование применения пептидных препаратов при острых тяжелых отравлениях этиловым спиртом.

Задачи исследования:

1. Оценить влияние фармакологических препаратов пептидной и непептидной природы на течение и исход острой интоксикации этанолом в дозах, вызывающих тяжелую степень отравления у крыс, выбрать наиболее эффективные препараты и схемы их введения.

2. Изучить влияние моликсана, семакса и комбинации моликсана с семаксом на поведенческие реакции, обучение, память крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом.

3. Установить эффекты комбинации моликсана с семаксом в отношении биохимических показателей сыворотки крови, системы глутатиона и перекисного окисления липидов в тканях печени и головного мозга крыс при острой интоксикации, вызванной введением этанола в дозе 1,5 ЛД50.

4. Выявить особенности морфологической структуры печени и головного мозга у крыс с острой крайне тяжелой интоксикацией этанолом в условиях лечебно-профилактического применения моликсана и семакса.

5. Оценить влияние комбинации моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме введения на течение и исход острой тяжёлой интоксикации крыс, вызванной введением метанола, изопропанола, н-бутанола и этиленгликоля в дозе 1,5 ЛД50.

Научная новизна исследования. Проведена оценка эффективности пептидных препаратов селанка, семакса, бестима, глутоксима, моликсана, комбинации моликсана с семаксом в качестве средств фармакологической коррекции нейротоксических и гепатотоксических поражений как последствий острого отравления этанолом.

Установлено, что в условиях острой тяжелой интоксикации этанолом наибольшей эффективностью по показателям выживаемости, неврологического статуса, поддержанию температуры и частоты дыхательных движений у отравленных крыс среди изученных пептидных препаратов обладают моликсан, семакс и комбинация моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме их применения. Расчетные значения индекса защиты моликсана составили 1,94, семакса - 1,94, а комбинации моликсана с семаксом -2,0.

Показано, что острое пероральное воздействие этанола в дозе 1,5 ЛД50 вызывает нарушение функций ЦНС, которое проявляется нарушением памяти, обучения, поведения и двигательных функций отравленных крыс и регистрируется не менее 14 сут. Применение комбинации моликсана с семаксом позволяет улучшить показатели общей двигательной активности, пространственной ориентации и исследовательской активности, способствует восстановлению моторики (координации движений), нормализации процессов памяти и обучения.

Выявлено, что использование комбинации моликсана с семаксом позволяет нормализовать динамику биохимических показателей белкового, углеводного и жирового обменов, маркеров цитолиза в периферической крови отравленных этанолом крыс. Показано, что содержание восстановленного глутатиона в тканях печени и головного мозга у животных, подвергнутых воздействию 1,5 ЛД50 этанола, при лечебно-профилактическом применении этих пептидных препаратов было более высоким, а уровень малонового диапьдегида более низким, чем у животных группы сравнения (отравленных этанолом, но не получавших фармакологических средств).

Продемонстрировано защитное действие комбинации моликсана с семаксом на морфологическую структуру печени и головного мозга крыс, подвергшихся острому тяжелому отравлению этанолом.

Установлено, что при остром крайне тяжелом отравлении метанолом, н-бутанолом и этиленгликолем изученные пептидные препараты не оказывали влияния на выживаемость крыс. В тоже время при отравлении изопропанолом в дозе 1,5 ЛД50 применение моликсана и семакса позволяло увеличить выживаемость отравленных животных.

Сформулированы и научно обоснованы возможные механизмы нейро- и гепатопротекторного действия комбинации моликсана с семаксом, связанные со способностью пептидных препаратов оказывать позитивное влияние на морфологическую структуру печени и головного мозга, на систему глутатиона и перекисного окисления липидов. Фармакологические эффекты изученных пептидных препаратов реализуются в повышении выживаемости отравленных крыс, уменьшении выраженности неврологических проявлений и снижении степени тяжести интоксикации, ускорении восстановления функций ЦНС после перенесенного острого тяжелого отравления этанолом.

Теоретическая и практическая значимость. В результате проведенного исследования научно обоснована целесообразность применения комбинации моликсана с семаксом в качестве средств лечения острых тяжелых отравлений этанолом. Показано, что применение моликсана (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг) с семаксом (интраназально в дозе 3 мг/кг) за 1 ч до и сразу после перорального введения этанола способствует увеличению выживаемости и средней продолжительности жизни отравленных животных, снижению выраженности нарушений функций ЦНС, системы глутатиона и перекисного окисления липидов, а также морфологической структуры тканей печени и головного мозга.

Практическая значимость работы заключается в экспериментальном обосновании возможности использования моликсана и семакса в качестве перспективных средств лечения острых крайне тяжелых отравлений этанолом. Проведена апробация различных схем применения пептидных препаратов для защиты организма от острого воздействия высоких доз этанола.

Полученные данные об эффективности применения пептидных препаратов при отравлении этанолом и возможных механизмах реализации нейро- и гепатопротекторного эффекта моликсана с семаксом позволяют рекомендовать дальнейшее экспериментальное изучение этих фармакологических средств при различных угрожающих жизни состояниях.

Методология и методы исследования. Экспериментальное исследование проводилось на базе кафедры военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова.

Работа выполнена на 1256 белых беспородных крысах массой 180-220 г разводки питомника лабораторных животных «Рапполово» (пос. Рапполово Ленинградской обл.). На проведение исследования получено разрешение

локального независимого Этического комитета при Военно-медицинской академии им. С.М. Кирова (протокол № 161 от 21.04.2015 г.).

В исследовании применялись:

- спирты: этанол в дозах 0,75 ЛД50, 1,0 ЛД50, 1,5 ЛД50, 1,75 ЛД50 и 2 ЛД50, метанол, н-бутанол, изопропанол и этиленгликоль в дозе 1,5ЛД50;

- фармакологические препараты: семакс, моликсан, гептрал, инозин, глутоксим, селанк, бестим;

- четыре схемы применения препаратов: профилактическая - однократно за 1 ч до введения этанола; лечебно-профилактическая - за 1 ч до и сразу после введения этанола; раннее лечение - сразу после введения этанола, а затем один раз в день в течение 2-х последующих сут; отсроченное лечение - через 30 мин после введения этанола, а затем один раз в день в течение 2-х последующих сут.

Изучение эффективности пептидных препартов, применяемых при остром крайне тяжелом отравлении спиртами, проходило в несколько этапов. Эффективность применения фармакологических препаратов при остром крайне тяжелом отравлении этанолом оценивали по показателям 3-х сут выживаемости, средней продолжительности жизни (СПЖ), состоянию неврологического статуса, частоты дыхательных движений и температуры тела отравленных этанолом животных. На следующем этапе исследовали влияние моликсана и семакса при лечебно-профилактической схеме введения на поведенческие реакции, обучение и память крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД50, после чего оценивали эффективность их применения на основные биохимические показатели сыворотки крови, маркеры перекисного окисления липидов, системы глутатиона в тканях головного мозга и печени крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД50. Впоследствии исследовали влияние комбинации моликсана с семаксом на патоморфологические показатели тканей головного мозга и печени крыс после воздействия этанола в дозе 1,5 ЛД50. На ' последнем этапе изучали влияние моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме введения на выживаемость крыс после воздействия метанола, изопропанола, н-бутанола и этиленгликоля в дозах 1,5 ЛД50.

Моделирование острого тяжелого алкогольного отравления проводили с использованием этанола, изопропанола, н-бутанола, метанола, этиленгликоля. В качестве токсикометрического параметра спирта определяли его среднесмертельную дозу, поскольку она представляет собой наиболее точную количественную характеристику токсичности вещества с минимальным значением 95% доверительного интервала и несомненным оцениваемым эффектом (гибель животного) [Куценко С.А., 2004]. ЛД5о вычисляли предварительно табличным экспресс-методом по В.Б. Прозоровскому (1994).

Для моделирования острой тяжелой алкогольной интоксикации использовали 40% этанол, который вводили внутрижелудочно при помощи зонда в дозе ЛД50 (8 г/кг), 1,5 ЛД50 (12 г/кг), 1,75 ЛД50 (14 г/кг) и в дозе 2 ЛД5о (16 г/кг). В связй с большим объемом вводимого раствора указанную дозу делили поровну на два введения через 15 мин [Курсов C.B., 2012]. Другие спирты также

вводили внутрижелудочно при помощи зонда в дозе 1,5 ЛД50: метанол - 8,25 г/кг, изопропанол — 7,65 г/кг, бутанол-1 -3 г/кг, этиленгликоль - 16,9 г/кг.

Фармакологическая коррекция проводилась с использованием препаратов: бестим (интраназально в дозе 3 мг/кг), гептрал (внутрибрюшинно в дозе 35 мг/кг), глутоксим (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), инозин (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), моликсан (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), селанк 0,15% (интраназально в дозе 3 мг/кг), семакс 1 % (интраназально в дозе 3 мг/кг).

У животных после воздействия токсиканта оценивали: выживаемость, среднюю продолжительность жизни, частоту дыхательных движений (ЧДД) и температуру тела. Выживаемость оценивали при 3-х суточном наблюдении и выражали ее в процентах (%) по отношению к общему числу животных в группе. Частоту дыхательных движений оценивали визуально по количеству дыханий за 1 мин. Для определения температуры тела использовали электронный инфракрасный медицинский термометр фирмы AND (модель DT — 635). Датчик термометра помещали в наружное слуховое отверстие на 2-3 с и снимали показатели с дисплея через 1, 2 и 3 ч после введения токсиканта.

Экспертную оценку неврологического статуса проводили путём определения степени угнетения функционирования ЦНС: 1) физиологическая норма, 2) оглушение, 3) сопор, 4) кома 1 (поверхностная), 5) кома 2 (глубокая), 6) кома 3 (терминальная) по методике. В целом подобная градация соответствует состояниям, выделяемым в клинике у человека [Бонитенко Е.Ю. и др., 2010].

Состояние процессов памяти и обучения исследовали с помощью методов условной реакции активного и пассивного избегания (УРАИ и УРПИ) [Кругликов Р.И., 1981; Буреш Я.И. и др., 1991]. Методику «вращающейся стержень» использовали для оценки равновесия и степени нарушения координации движений [Миронов А.Н., 2012; Хабриев Р.У., 2013]. Двигательную активность изучали с помощью методики «открытое поле» [Буреш Я.И. и др., 1991]. Физическую выносливость оценивали с помощью методики «вертикальный стержень» [Meyer O.A. et al., 1979]. Скорость принятия решения, способность к пространственной ориентации и исследовательскую активность исследовали с помощью метода «крестообразный лабиринт» [Буреш Я.И. и др., 1991].

Оценку концентрации мочевины, общего белка, креатинина, глюкозы, холестерина, а также активности щелочной фосфатазы, аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и лактатдегидрогеназы в сыворотке крови крыс проводили на биохимическом анализаторе «BS-120» (Mindray, Китай) с помощью набора кассет реактивов «Ольвекс» (Россия).

Концентрацию восстановленного глутатиона в гомогенатах исследуемых тканей определяли с использованием 5,5-дитио-бис(-2-нитробензойной) кислоты (ДТНБ) по методике G.L. Ellman (1959) в модификации, заключавшейся в осаждении белка 20% раствором сульфосалициловой кислоты. Концентрацию малонового диальдегида (МДА) определяли по методу М. Uchiyama (1978).

Через 1 ч, 3 ч, 1 сут и 3 сут наблюдения выжившие животные были подвергнуты эвтаназии с помощью медицинского эфира и вскрытию. Было

проведено макроскопическое описание головного мозга и печени животных. Кроме того, проводили гистологическое исследование тканей, для чего после вскрытия головной мозг и печень крыс извлекали и фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, проводили через спирты и запивали в парафин по стандартной методике приготовления гистологических препаратов [Меркулов Г.А., 1969]. Производили ленточные срезы головного мозга и печени. Срезы окрашивали гематоксилином и эозином. Изготовленные препараты изучали в светооптическом микроскопе Leica (Германия) при 200-, 400- и 600-кратном увеличении.

Полученные в ходе экспериментальных исследований данные были обработаны в программах «Excel for Windows», «Statistica 6,0» с расчетом среднего значения, ошибки средней и среднего квадратического отклонения. С целью выбора метода анализа взаимосвязи показателей (параметрические или непараметрические методы), исходные количественные характеристики были проверены на соответствие нормальному распределению с использованием тестов Колмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка и графических методов (гистограмм). Оценку различий средних значений данных при распределениях, близких к нормальным, проводили параметрическим методом с использованием t-критерия Стьюдента. Оценку различий данных, полученных при анализе выборок малого объема, проводили непараметрическим методом с использованием U-критерия Манна-Уитни. Вероятность р<0,05 и выше считали достаточной для вывода о статистической значимости различий полученных данных. Средняя величина относительных показателей и ее ошибка определялись с помощью таблиц процентов и их ошибок по B.C. Генесу (1967). Достоверность различий средних значений показателей выживаемости погибших животных оценивали с использованием точного метода Фишера.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Применение пептидных препаратов моликсан и семакс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом у крыс увеличивает выживаемость, снижает степень тяжести угнетения центральной нервной системы животных, способствует поддержанию ими температуры тела и частоты дыхания.

2. Фармакотерапия острых крайне тяжелых отравлений этанолом путем лечебно-профилактического применения комбинации моликсана с семаксом уменьшает выраженность биохимических и морфологических изменений печени и головного мозга, сокращает сроки восстановления животных после перенесенной интоксикации.

Степень достоверности и апробация результатов. Степень достоверности определяется достаточным количеством экспериментальных животных, использованных в исследовании, рандомизацией и формированием групп сравнения и контроля, адекватными, токсикологическими и фармакологическими моделями и методами исследования, длительными сроками наблюдения и корректными методами статистической обработки.

Результаты проведённых исследований были доложены и обсуждены на: III и IV Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с

международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, 2013, 2014); IV съезде токсикологов России (Москва, 2013); Международной научно-практической конференции по военной медицине (Санкт-Петербург, 2013); Всероссийской научной конференции с международным участием «Фармакологическая нейропротекция», посвященной 90-летию Отдела нейрофармакологии им. C.B. Аничкова Института экспериментальной медицины СЗО РАМН (Санкт-Петербург, 2013); Всероссийской научной конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации» (Санкт-Петербург, 2013); Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 90-летию со дня рождения академика АМН СССР A.B. Вальдмана «Инновации в фармакологии: от теории к практике» (Санкт-Петербург, 2014); IV съезде военных врачей медико-профилактического профиля «Обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия военнослужащих и населения в современных условиях» (Санкт-Петербург, 2014).

Реализация результатов исследования. Полученные теоретические и практические результаты реализованы в учебном процессе кафедры военной токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова.

В процессе выполнения работы оформлено и принято к использованию в Военно-медицинской академии 3 рационализаторских предложения (№ 13705/7 от 01.11.2013, № 13706/7 от 01.11.2013, № 13707/7 от 01.11.2013).

Связь темы диссертации с плановой тематикой научно-исследовательской работы учреждения. Исследование выполнялось в соответствии с плановой тематикой научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии: тема НИР № VMA.02.04.02.1315/0056, шифр «Контръярус».

Публикации. По теме диссертационного исследования опубликовано 19 научных работ, из них 5 статей в рецензируемых научных журналах и изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для опубликования основных научных результатов диссертаций на соискание ученых степеней доктора и кандидата наук.

Личный вклад автора. Автором проведён сбор и анализ научной литературы по теме диссертационного исследования, сформулированы цель и задачи исследований, определены объекты и объём работы, проведён поиск методов и их обоснование для решения поставленных задач. Проведён основной эксперимент по моделированию острого отравления этанолом, а также фармакологической коррекции этого состояния у животных (белых крыс). Выполнено формирование базы данных и осуществлена обработка полученных результатов, проведено их обобщение и обсуждение, выполнено оформление диссертации, подготовлены публикации по теме диссертации. Доля участия автора в получении и накоплении результатов - 100 %, в статистической обработке - 100 %.

Структура и объём диссертации. Диссертация изложена на 179 страницах машинописного текста, включает 29 таблиц, 7 рисунков. Состоит из введения, четырёх глав (обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследования), выводов, практических рекомендаций и библиографического списка литературы, включающего 220 источников (142 - на русском языке и 78 - на иностранных языках).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

На первом этапе в качестве изучаемых средств фармакологической коррекции острой крайне тяжелой интоксикации этанолом использовали семакс, селанк, бестим, глутоксим, инозин, моликсан, гептрал. Эффективность препаратов оценивали путем изучения выживаемости, неврологического статуса и некоторых витальных функций (частоты дыханий и температуры тела) крыс.

Установлено, что в условиях острой тяжелой алкогольной интоксикации, изучаемые пептидные и непептидные препараты в различной степени защищали отравленных животных.

Так, этанол в дозе 1,5 ЛД50 вызывал гибель 83% крыс в течение 3 сут (табл. 1). При применении препаратов за 1 ч до введения токсиканта наиболее выраженным защитным действием обладал моликсан и комбинация моликсана с семаксом. Применение этих препаратов позволяло увеличить выживаемость отравленных животных в 5-6 раз по сравнению с контролем. Применение гептрала также способствовало значимому повышению выживаемости крыс. Применение пептидного препарата глутоксима и непептидного средства инозина сопровождалось тенденцией к повышению выживаемости отравленных животных, а использование селанка и бестима было малоэффективно.

Введение этанола приводило к снижению температуры тела животных по сравнению с интактными на 15% (табл. 2). Снижение температуры тела на фоне острого крайне тяжелого отравления этанолом происходило и в группах с фармакологической коррекцией. Необходимо отметить, что менее всего, по сравнению с интактными, температура тела снижалась у животных, получавших семакс, моликсан и комбинацию моликсана с семаксом (в среднем на 7%). В группах с применением глутоксима, инозина, селанка, и бестима этот показатель в среднем составил 14%, как и в группе контроля.

При сравнении частоты дыханий животных в контрольной и интактной группах было установлено, что частота дыханий у отравленных этанолом крыс была в 2,1 раза меньше, чем у интактных животных (табл. 2). При этом лечебно-профилактическое введение моликсана (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), семакса (интраназально в дозе 3 мг/кг) и их комбинации позволяло сохранять отравленным этанолом крысам близкую к нормальным показателям температуру тела и частоту дыхательных движений.

Таблица 1 - Влияние фармакологических препаратов на выживаемость крыс при острой крайне тяжёлой интоксикации этанолом в дозе 1,5 ЛД50 при 3 сут наблюдении, абс. (%)

Препараты Схема введения препарата

За 1 ч до этанола За 1 ч до и сразу после этанола Сразу после этанола Через 0,5 ч после этанола

Количество животных

в терминальной коме выживших в терминальной коме выживших в терминальной коме выживших в терминальной коме выживших

Этанол 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17± 17) 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17±17)

Моликсан 1(17±17)* 5(83±17)* 3(50±22) 5(83±17)* 4(67±21) 5(83±17)* 3(50±22) 3(50±22)

Семакс 3(50±22) 4(67±21) 2(33±21) 5(83±17)* 4(67±21) 3(50±22) 3(50±22) 3(50±22)

Моликсан + Семакс 2(33±21) 5(83±17)* 2(33±21) 6(100-17)* 4(67±21) 2(33±21) 3(50±22) 5(83±17)*

Гептрал 3(50±22) 5(83±17)* 3(50±22) 5(83±17)* 4(67±21) 3(50±22) 5(83±17) 1(17±17)

Глутоксим 4(67±21) 4(67±21) 4(67±21) 3(50±22) 5(83±17) 2(33±21) 5(83±17) 2(33±21)

Инозин 3(50±22) 3(50±22) 3(50±22) 3(50±22) 3(50±22) 4(67±21) 3(50±22) 2(33±21)

Селанк 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17±17)

Бестим 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17±17) 5(83±17) 1(17±17)

Примечание: - * - различия с группой контроля по точному критерию Фишера значимы при р<0,05; в каждой группе п=6.

Таблица 2 - Влияние фармакологических препаратов на частоту дыхательных движений и температуру тела крыс через 1 ч после начала острой крайне тяжёлой интоксикации этанолом в дозе 1,5 ЛД50

Препарат Схема введения препарата

За 1 ч до этанола За 1 ч до и сразу после этанола Сразу после этанола Через 0,5 ч после этанола

чдц за 1 мин Температура тела, С чдц за 1 мин Температура тела, °С чдц за 1 мин Температ ура тела, °С чдд за 1 мин Температу ра тела, °С

Интактные 127±4,1 38,1±0,2 127*4,1 38,1*0,2 127*4,1 38,1±0,2 127*4,1 38,1*0,2

Этанол 59*1,1" 32,4*0,5" 59*1,1" 32,4*0,5" 59*1,1" 32,4*0,5* 59±1,1" 32,4*0,5"

Моликсан 94*1,4"' 34,8*0,3"' 92,6*1,7*' 34,8± 1,0*' 83*1,2*" 35*0,4*" 72,5*1,5*' 33,5*0,4"

Семакс 86*1,2"' 35,0*0,2"' 80,6*0,8" * 35,4*0,1"' 97,3*1,7"' 35,3*0,3"' 65*1,34*' 34±0,2*'

Моликсан + Семакс 87*2,1"' 35,1*0,2"' 90*2,7"' 35,5*0,2"' 86*2,3*' 35*0,1*' 66*1,7"' 34,1*0,1*'

Гептрал 79*2,3"' 33,6*0,4" 64,8*1,7"' 34,8*0,3" 69*1,5*' 34,8*0,2*' 62±1,5" 32,6*0,3"

Глутоксим 69*3,3"* 33,Ш,4" 65,4*1,4"" 33,8*0,6" 68*1,9*' 33,6*1,2" 60*2,4" 32,1*1,7"

Инозин 62.4*2,6" 32,1±),7* 68,4±],3"* 32,8±1,6" 70*2,7*" 33,8*0,9* 58*1,3" 31,9*0,8"

Селанк 63,7±5,3# 32,3*0,5" 66,9*7,3" 33,5*0,6" 63,1*5,5" 33,1 ±0,2" 62,3*4,3* 32,1*0,5"

Бестим 61,6*2,4" 32,7*0,6* 62,1*5,3" 33,8*0,5" 64,1*6,4" 33,9*0,3* 56,3*4,1* 34,1*0,5*

Примечания: 1 - # - различия (по 11-критерию Манна-Уитни) по сравнению с группой интактных животных значимы при р<0,05; 2 -* - различия (по и-критерию Манна-Уитни) по сравнению с группой этанол значимы при р<0,05; в каждой группе п=6.

Наиболее благоприятное влияние на неврологический статус крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом в дозе 1,5 ЛД50 оказало применение препаратов при лечебно-профилактической схемах введения. Семакс, моликсан, комбинация семакса с моликсаном минимум в 2 раза увеличивали время наступления оглушения, сопора и поверхностной комы. Эти результаты значимо отличались не только от контрольной группы, но и от группы с введением гептрала. Подобные данные, характеризующие нейропротекторную активность, были получены ранее для семакса в работе В .А. Башарина (2011).

При расчёте индексов защиты моликсана, семакса, комбинации моликсана с семаксом, как средств профилактики и лечения острых крайне тяжёлых отравлений этанолом установлено, что наиболее выраженным защитным эффектом обладали моликсан и комбинация моликсана с семаксом. Наибольшее значение индекса защиты было установлено при профилактическом (1,94) и лечебно-профилактическом (2,0) применении. При этом среднесмертельная доза этанола в экспериментальных группах возрастала в 2 раза в случае лечебно-профилактического применения комбинации моликсана с семаксом (табл. 3).

Таблица 3 - Расчётные значения индекса защиты моликсана, семакса и комбинации моликсана с семаксом при остром отравлении крыс этанолом

Схема введения препарата Препараты ЛД50, г/кг ИЗ

За 1 ч до этанола Этанол 7,0±1,9 -

Моликсан 13,6±0,7* 1,94±0,65

Семакс 11,8±1,2 1,69±0,65

Моликсан + Семакс 13,5±0,7 1,94±0,65

За 1 ч до и сразу после этанола Этанол 7,0± 1,9 -

Моликсан 13,5±0,7* 1,94+0,65

Семакс 13,5±0,7 1,94±0,65

Моликсан + Семакс 14,0±0,2 2,0±0,60

Сразу после этанола Этанол 7,0±1,9 -

Моликсан 13,3±0,7 1,9±0,63

Семакс 9,6±1,4 1,38±0,59

Моликсан + Семакс 11,4± 1,2 1,62±0,63

Через 0,5 ч после этанола Этанол 7,0± 1,9 -

Моликсан 12,0±3,4 1,73±0,97

Семакс 9,0±2,0 1,28±0,64

Моликсан + Семакс 13,0±,07 1,85±0,62

Примечание: - * - различия (по 11-критерию Манна-Уитни) с группой этанол значимы при Р<0,05. В каждой группе п=6.

На следующем этапе исследования проводилась оценка высшей нервной деятельности крыс на фоне острого крайне тяжелого отравления этанолом с использованием методик УРАИ плаванием, УРПИ, вращающийся стержень и др.

Установлено, что пероральное введение этанола в дозе 1,5 ЛД50 вызывало нарушение памяти, процессов обучения и моторики у крыс в течение двух недель от начала интоксикации. Подобные результаты были получены в работе Д.С. Лисицкого и соавт. (2014). При этом семакс и моликсан при их комбинированном применении улучшали перечисленные показатели, начиная с 7 сут от начала интоксикации, и сокращали сроки восстановления нарушенных функций ЦНС крыс в среднем в 2 раза (рис. 1, 2).

2 сут 5 сут 7 сут 14 сут

- ♦ -Интактяые —ш ■ Этанол (Э) --А--Э + Моликсан * Семакс

Рисунок 1 - Влияние комбинации моликсана и семакса на изменение латентного периода УРАИ плавания у предварительно необученных крыс после острого тяжелого отравления этанолом в дозе 1,5 ЛД50, с.

Примечание: - * - различия (по 1-критерию Стьюдента) по сравнению с интактной группой; - # - по сравнению с группой этанол, значимы при р<0,05; в каждой группе п=7.

О сут 2 сут 5 сут 7 сут 14 с\т ВИятактиые □ Этанол (Э)

■ Э + Моликсан + Семакс

2 сут 5 сут 7 а Интактные о Этанол (Э) ■ Э + Моликсан

сут 14 сут

Семакс

Рисунок 2 - Влияние комбинации моликсана и семакса на изменение латентного периода УРПИ в тесте «Черно-белая камера» (А) и время удержания на вращающемся стержне (Б) крыс после острого тяжелого отравления этанолом в дозе 1,5 ЛД5!Ь с.

Примечание: - * - различия (по и-критерию Манна-Уитни) по сравнению с интактной группой; - # - по сравнению с группой этанол, значимы при р<0,05; в каждой группе п=7.

На следующем этапе исследования определяли биохимические показатели сыворотки крови через 3 ч, 1 сут и 3 сут после введения этанола в дозе 1,5 ЛД50.

Установлено, что острое крайне тяжелое отравление этанолом сопровождалось изменениями содержания общего белка, холестерина, глюкозы, активности аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы в сыворотке крови отравленных животных. Снижение уровня глюкозы при остром крайне тяжелом отравлении этанолом отмечалось в работе A.B. Машанова (2013). Применение комбинации моликсана с семаксом позволяло нормализовать динамику общего содержания белка, холестерина, глюкозы, активность аланинаминотрансферазы,

аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в периферической крови отравленных этанолом крыс.

Проведенное исследование позволило установить, что острое крайне тяжелое отравление этанолом сопровождалось изменениями содержания восстановленного глутатиона в тканях головного мозга и печени отравленных животных, в зависимости от времени, прошедшего после введения этанола. Выраженные нарушения обмена глутатиона отмечались как в тканях печени, так и в тканях головного мозга. При этом применение препаратов пептидной природы оказывало положительное влияние на динамику концентрации восстановленного глутатиона в тканях отравленных животных. Острое крайне тяжелое отравление этанолом сопровождалось активацией процессов перекисного окисления липидов, так как в тканях головного мозга и печени отмечалось повышение концентрации МДА. По мнению С.И. Колесникова и соавт. (2012) острое отравление этанолом сопровождается развитием окислительного стресса у экспериментальных животных, который выражается в активации процессов перикисного окисления липидов и снижении уровня факторов системы антиоксидантной защиты, что подтверждается экспериментальными данными нашей работы (рис. 3, 4).

15

10

3 ч 1сут

□ Интактная

□ Этанол (Э)

и з + Моликсаи +

3 сут

Семаке

3 ч 1 сут 0'Интактная □ Этанол (Э) ■ Э + Моликсан -i

Семакс

А Б

Рисунок 3 - Влияние моликсана и семакса на содержание восстановленного глутатиона в печени (А) и головном мозге (Б) крыс через 3 ч, 1 сут, 3 сут после острого тяжелого отравления этанолом в дозе 1,5 ЛД50. мкмолъ/г ткани.

Примечание: - * - различия (по ^критерию Стьюдента) по сравнению с интактной группой; -# - по сравнению с группой этанол, значимы при р<0,05.

3 ч 1 еут а Интакшая □ Этанол (Э) ■ Э + Моликсан

л сут

Семакс

20

10

3 ч 1 сут ШИктактная □ Этанол (Э) ■ Э + Моликсан ■

3 сут

Семакс

..........А................................................................Б

Рисунок 4 - Влияние моликсана и семакса на содержание малонового диальдегида в печени (А) и головном мозге (Б) крыс через 3 ч, 1 сут, 3 сут после острого тяжелого отравления этанолом в дозе 1,5 ЛД50, мкмоль/г ткани.

Примечание: - * - различия (по (-критерию Стьюдента) по сравнению с интактнои группой; - # - по сравнению с группой этанол, значимы при р<0,05.

Таким образом, применение комбинации моликсана с семаксом при лечебно-профилактической схеме введения увеличивало содержание восстановленного глутатиона и снижало интенсивность процессов пероксидации липидов в тканях животных, отравленных этанолом в дозе 1,5 ЛД50.

Проведенное морфологическое исследование показало, что действие этанола на печень соответствует острому токсическому гепатиту. Сочетанное применение моликсана с семаксом производило положительный эффект на морфологическую структуру тканей печени, что проявлялось снижением интенсивности и распространенности процессов повреждения и нарастанием компенсаторно-приспособительных проявлений в паренхиме печени. Характер морфологических изменений в печени на фоне острого отравления спиртами соответствует данным, полученным в работе В.В. Бенеманского и соавт. (2008).

Введение этанола в дозе 1,5 ЛД50 вызывало повышение проницаемости сосудов микроциркуляторного русла гемато-энцефалического барьера, что отражало начальные признаки их повреждения. На препаратах головного мозга крыс в группах при лечебно-профилактическом введении веществ определялось неравномерно выраженное полнокровие капилляров, явления стаза, фокусы отека интимы сосудов микроциркуляторного русла с неравномерно выраженным слабо базофильным окрашиванием и перикапиллярный отек.

На последнем этапе работы было установлено, что значимые отличия (р<0,05) по критерию выживаемости отравленных крыс при сочетанном применении моликсана с семаксом были получены только при отравлении изопропанолом- В то же время, применение этих препаратов не влияло на показатели выживаемости при отравлении метанолом, этиленгликолем и н-бутанолом в дозах 1,5 ЛД5о-

Совокупность полученных результатов показала, что наиболее вероятными механизмами действия комбинации моликсана с семаксом являются: устранение окислительного стресса (снижение активации процессов перекисного окисления липидов и стимуляция системы антиоксидантной защиты), который, как известно, наблюдается при остром отравлении этанолом [Колесников С.И. и др., 2012; Курсов C.B. и др., 2012], активацией энергетического обмена (достоверное повышение уровня глюкозы в сыворотке крови леченных животных), нейропротекторное действие (синтез регуляторов роста и дифференцировки нервной ткани и трофического фактора роста нейрона, а также стимулированием выработки цАМФ), что свойственно для препаратов из группы нейропептидов [Шабанов П.Д., 2008; Головко А.И. и др., 2011; Jia X. et al., 2012], гепатопротекторное действие (ингибирование цитолиза гепатоцитов, разрешение воспалительного процесса при поражениях клеток печени этиловым спиртом, а также опосредованное влияние на метаболизм, процессы пролиферации, дифференцировки и апоптоза клеток печени, способствуя восстановлению нормальной структуры печеночной ткани, нормализация концентрации маркеров цитолиза и печеночных ферментов) [Антушевич А.Е. и др., 2005].

Таким образом, в выполненном исследовании показана эффективность сочетания пептидных препаратов моликсан и семакс. Комбинация веществ, одно из которых инициирует каскад процессов, направленных на защиту клеток нервной системы, а второе соединение позволяет обеспечить гепатопротекторный эффект, может рассматриваться как перспективное направление в терапии острых отравлений этанолом как можно в более ранние сроки и сразу после контакта с этанолом, а не только в период реабилитации.

Проведенные нами исследования свидетельствуют о перспективности дальнейшего изучения препаратов пептидной природы для разработки новых комбинированных схем профилактики и ранней патогенетической терапии острого крайне тяжелого отравления спиртами. Кроме того, полученные нами данные о повышении выживаемости отравленных животных при профилактическом применении пептидных препаратов свидетельствуют о целесообразности продолжения изучения возможных механизмов нейро- и гепатопротекторного действия этих препаратов.

ВЫВОДЫ

1. В условиях острой тяжелой алкогольной интоксикации, вызванной пероральным введением этанола, выживаемость отравленных крыс наиболее эффективно повышали пептидные препараты моликсан (на 83%) и семакс (на 67%), а также препарат непептидной природы гептрал (на 83%). Применение пептидного препарата глутоксима и непептидного средства инозина сопровождалось тенденцией к повышению выживаемости отравленных животных, а использование селанка и бестима не оказывало влияния на течение и исход острой интоксикации этанолом в дозах, вызывающих тяжелую степень отравления у крыс.

2. Этанол в дозах 1,0 ЛД5а и 1,5 ЛД50 значимо снижал температуру тела и частоту дыхательных движений, угнетал функции ЦНС у отравленных животных. Лечебно-профилактическое введение моликсана (внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг), семакса (интраназально в дозе 3 мг/кг) и их комбинации позволяло сохранять отравленным этанолом крысам близкую к нормальным показателям температуру тела и частоту дыхательных движений, у них позже наступало угнетение функций ЦНС, а степень угнетения была менее выражена.

3. Наиболее эффективной схемой применения пептидных препаратов в условиях острой интоксикации этанолом в дозах, вызывающих тяжелую степень отравления у крыс, была лечебно-профилактическая: за 1 ч до и сразу после перорального введения токсиканта. В условиях комбинированного применения моликсана с семаксом индекс защиты лечебно-профилактической схемы введения составлял 2,0; профилактической схемы — 1,94; схемы раннего лечения — 1,62; схемы отсроченного лечения - 1,85.

4. Пероральное введение этанола в дозе 1,5 ЛД50 вызывало нарушение общей двигательной активности, пространственной ориентации и исследовательской активности, моторики (координации движений), процессов памяти и обучения в течение 14 сут от начала интоксикации. Комбинированное лечебно-профилактическое применение моликсана с семаксом позволяло улучшить перечисленные показатели, начиная с 7 сут от начала интоксикации, и сократить сроки восстановления нарушенных функций ЦНС крыс в среднем в 2 раза.

5. Применение комбинации моликсана с семаксом позволяло нормализовать динамику общего содержания белка, холестерина, глюкозы, активность аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы и щелочной фосфатазы в периферической крови отравленных этанолом крыс. На 1 сут интоксикации содержание восстановленного глутатиона в тканях печени и головного мозга у животных, подвергнутых воздействию 1,5 ЛД50 этанола, при лечебно-профилактическом применении моликсана с семаксом было в среднем на 20% выше, а уровень малонового диальдегида - на 73% ниже, чем у животных контрольной группы, получавших вместо пептидных препаратов физиологический раствор.

6. Воздействие этанола в дозе 1,5 ЛД50 вызывало повреждение ткани печени в виде мелкокапельной жировой, зернистой дистрофии к концу 1 сут и гидропической дистрофии на 3 сут, что соответствовало морфологической картине острого токсического гепатита. В головном мозге отравленных этанолом животных регистрировали полнокровие капилляров, явления стаза, фокусы отека интимы сосудов микроциркуляторного русла с неравномерно выраженным слабо базофильным окрашиванием, перикапиллярный отек. Комбинированное лечебно-профилактическое применение моликсана с семаксом позволяло снизить интенсивность и распространенность дистрофических процессов в ткани печени, а также уменьшить степень выраженности нарушений микроциркуляции головного мозга у отравленных этанолом животных.

7. Лечебно-профилактическое применение комбинации моликсана с семаксом статистически значимо увеличивало выживаемость животных при остром тяжелом отравлении изопропанолом и не влияло на показатели выживаемости при отравлении метанолом, этиленгликолем и н-бутанолом в дозах 1,5 ЛД50.

8. Вероятный механизм защитного действия фармакологических препаратов моликсана с семаксом при острой тяжёлой интоксикации этанолом связан с устранением окислительного стресса, активацией энергетического обмена, нейро- и гепатопротекторным действием, что подтверждается биохимическими и морфологическими показателями.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Выявленная в экспериментах на мелких лабораторных животных (крысах) эффективность комбинированного применения моликсана с семаксом в условиях острой интоксикации этанолом позволяет рекомендовать дальнейшее исследование этих пептидных препаратов на других биологических моделях в качестве перспективных средств профилактики и лечения отравлений, вызванных нейро- и гепатотоксикантами.

2. Полученные данные об эффективности применения пептидных препаратов при отравлении этанолом позволяют рекомендовать дальнейшее экспериментальное изучение этих фармакологических средств при различных критических состояниях организма, сопровождающихся нарушением функций ЦНС.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Халютин, Д.А. Влияние интраназального или внутрибрюшинного применения моликсана на течение и исход острого тяжелого отравления этанолом / Д.А. Халютин, А.Н. Гребешок, В.Л. Рейнюк [и др.] // Матер. Всерос. науч. конф. с междунар. участием «Фармакологическая нейропротекция». -СПб., 2013.-С. 143.

2. Халютин, Д.А. Оценка эффективности моликсана при острой этанольной интоксикации по критерию выживаемости / Д.А. Халютин, P.A. Чумаченко, П.Г. Толкач [и др.] // Сб. матер. III Всерос. науч. конф. студентов и аспирантов с междунар. участием «Молодая фармация - потенциал будущего». - СПб., 2013. - С. 216-217.

3. Халютин, Д.А. Влияние семакса на исход острого отравления этанолом / Д.А. Халютин, P.A. Чумаченко, П.Г. Толкач [и др.] // Сборник материалов III Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с междунар. участием «Молодая фармация — потенциал будущего». — СПб., 2013. -С. 217.

4. Халютин, Д.А. Влияние совместного применения моликсана и семакса на выживаемость крыс при острой этанольной интоксикации / Д.А. Халютин, P.A. Чумаченко, П.Г. Толкач [и др.] // Сб. матер. III Всерос. науч. конф. студентов и аспирантов с междунар. участием «Молодая фармация -потенциал будущего». — СПб., 2013. - С. 218.

5. Халютин, Д.А. Сравнительная эффективность интраназального и внутрибрюшинного применения моликсана в терапии острого крайне тяжелого отравления этанолом / Д.А. Халютин, А.Н. Гребенюк, В.Л. Рейнюк // Сб. матер. I Всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием «Инновации в здоровье нации». -СПб., 2013.-С. 244-245.

6. Халютин, Д.А. Эффективность применения моликсана при остром тяжелом отравлении этанолом / Д.А. Халютин, В.Л. Рейнюк, А.Н. Гребенюк [и др.] // Сб. тез. докл. Междунар. науч.-практ. конф. по военной медицине. -СПб., 2013.-С. 206-207.

7. Башарин В.А. Нейропептиды в терапии токсических ком / В.А. Башарин, А.Н. Гребенюк, Н.Ф. Маркизова, Д.А. Халютин // Сб. тез. докл. Междунар. науч.-практ. конф. по военной медицине. - СПб., 2013. - С. 115-116.

8. Халютин, Д. А. Эффективность гепатопротектора с пептидным компонентом при остром тяжелом отравлении этанолом / Д.А. Халютин // Сб. тр. IV Всерос. съезда токсикологов с междунар. участием. - Москва, 2013. - С. 585586.

9. Халютин, Д.А. Моделирование острого крайне тяжелого отравления этанолом в экспериментах на крысах / Д.А. Халютин, В.А. Башарин, В.Л. Рейнюк [й др.] // Сб. матер. Всерос. конф. с междунар. участием, посвященной 90-летию со дня рождения академика АМН СССР A.B. Вальдмана «Инновации в фармакологии: от теории к практике». - СПб., 2014. - С. 184-185.

10. Гребенюк, А.Н. Эффективность нейропептнда и гепатоиротекторов пептидной и пепептидной природы в терапии острых крайне тяжелых отравлений этиловым спиртом / А.Н. Гребенюк, В.Л. Рейнюк, А.Е. Антушевич, Д.А. Халютин [и др.] // Вестник Российской Военно-медицинской академии. -2014. -№ 1.-С. 136-141.

11. Халютин, Д.А. Влияние гепатопротекторов пептидной и нептидной природы на выживаемость и неврологический статус крыс при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом / Д.А. Халютин // Сб. матер. IV Всерос. науч. конф. студентов и аспирантов с междунар. участием «Молодая фармация — потенциал будущего». - СПб., 2014. - С. 579-582.

12. Халютин, Д.А. Влияние гепатопротекторов пептидной и непептидной природы на витальные функции крыс при острых крайне тяжелых отравлениях этиловым спиртом / Д.А. Халютин, A.M. Маркосян, A.A. Ховпачев // Сб. матер. IV Всерос. науч. конф. студентов и аспирантов с междунар. участием «Молодая фармация - потенциал будущего». - СПб., 2014. - С. 576579.

13. Гребенюк, А.Н. Эффективность гепатопротектора с пептидным компонентом моликсана при острой крайне тяжелой интоксикации этанолом / А.Н. Гребенюк, В.Л. Рейнюк, А.Е. Антушевич, Д.А. Халютин [и др.] // Токсикологический вестник. — 2014. - № 4. — С. 12-19.

14. Гребенюк, А.Н. Применение фармакологических препаратов пептидной природы в лечении острых крайне тяжелых отравлений этиловым спиртом / А.Н. Гребенюк, В.Л. Рейнюк, А.Е. Антушевич, Д.А. Халютин // Сб.

науч. статей II интернет-конференции с междунар. участием «Актуальные проблемы военной и экстремальной медицины». - Гомель, 2014. - С. 203-212.

15. Гребенюк, А.Н. Экспериментальная оценка нейротоксических эффектов этанола и их коррекция пептидными препаратами /

A.Н. Гребенюк, В.Л. Рейнюк, Д.А. Халютин [и др.] // Медико-биологические и социально-психологические проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. - 2014. - № 3. - С. 70-77.

16. Халютин, Д.А. Использование препаратов пептидной природы при профилактике и лечении профессиональных заболеваний, связанных с воздействием неэлектролитов / Д.А. Халютин // Сб. матер. IV Съезда военных врачей медико-профилактического профиля «Обеспечение санитарно-эпидемиологического благополучия военнослужащих и населения в современных условиях». - СПб., 2014. - С. 148.

17. Гребенюк, А.Н. Оценка эффективности пептидных препаратов в качестве средств коррекции нарушений функций центральной нервной системы, вызванных высокими дозами этанола / А.Н. Гребенюк,

B.Л. Рейнюк, Д.А. Халютин [и др.] // Вестник Российской Военно-медицинской академии. - 2014. - № 3. - С. 145-149.

18. Гребенюк, А.Н. Сравнительная оценка эффективности пептидных препаратов при острых тяжелых отравлениях этанолом /

A.Н. Гребенюк, В.Л. Рейнюк, А.Е. Антушевич, Д.А. Халютин [и др.] // Токсикологический вестник. — 2014. - № 6. - С. 15-22.

19. Рейнюк, В.Л. Изучение защитного действия новых синтетических нейропептидов при остром отравлении этанолом / В.Л. Рейнюк, A.A. Ховпачев,

B.А. Мясников, A.A. Колобов, Д.А. Халютин // Medline.ru. - 2015. - Т. 16. -

C. 371-382.

ГАМК ДТНБ ИЗ

АлАТ АсАТ

вг

ЛД5о ЛДГ

лп

МДА

СПЖ

ТБК

УРАИ

УРПИ

ЧДД

цнс

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

аланинаминотрансфераза аспартатаминотрансфераза восстановленный глутатион гамма-аминомасляная кислота 5,5-дитио-бис (2-нитробензойная кислота) индекс защиты среднелеталъная доза лактатдегидрогеназа латентный период малоновый диальдегид средняя продолжительность жизни 2-тиобарбитуровая кислота условная реакция активного избегания условная реакция пассивного избегания частота дыхательных движений центральная нервная система

Подписано в печать 03.07..15 Формат 60x84/16

Обьем 1 п.л. Тираж 100 экз. Заказ №551

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6.