Автореферат и диссертация по медицине (14.00.20) на тему:Эколого-генетические последствия воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов

На правах рукописи

УМНОВА

Наталия Владимировна

ЭКОЛОГО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОСЛЕДСТВИЯ ВОЗДЕЙСТВИЯ ДИОКСИНСОДЕРЖАЩИХ ЭКОТОКСИКАНТОВ

14.00.20 — токсикология 03.00.15 — генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1307

Работа выполнена в Тропическом отделении Института проблем экологии н эволюции им. А. Н. Северцова Российской Академии наук (г. Москва) и в Военно-медицинской академии.

Научные консудьтан т ы: академик РАМН доктор медицинских наук профессор Софронов Г. А., доктор медицинских наук Румак В. С.

седании диссертационного совета ДР 106.03.11 в Военно-медицинской академии по адресу: 194044, С.-Петербург, ул. Лебедева, 6.

С диссертацией можно ознакомиться а библиотеке Военно-медицинской академии.

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Воробцова И. Е., доктор медицинских наук Худолей В. В., доктор медицинских наук профессор Ливанов Г. А.

Ведущая организация --- Институт токсикологии МЗ РФ.

Защита диссертации состоится 27 мая 1997 г. в

час. на за-

Автореферат разослан «_» апреля 1997 г.

Ученый секретарь диссертационного совета профессор

И. Г. Чурсин

Актуальность проблемы. Неблагополучие среды обитания по химическим факторам как правило приводит к снижению уровня здоровья населения, к ухудшению демографических показателей. Источником нарушений в существующем демографическом балансе могут быть как генетически закрепленные изменения, так и модификационые изменения гомеостаза, ведущие к увеличению заболеваемости и смертности. Эти положения определяют актуальность медико-генетических исследований генотоксичности' соединений, загрязняющих среду обитания человека, и прогнозирования на их основе реакции населения на эти воздействия.

Вместе с тем, исследователи вынуждены констатировать многообразие неоднозначных заключений об экотоксикологической опасности регионов для населения. Одной из принципиальных причин этих противоречий следует признать отсутствие адекватных задачам исследования методологических решеннй по проблеме эколого-генеткческой эпидемиологии, и, соответственно, отсутствие адекватных реальным ситуациям данных об эколого-генетических последствиях.

Эколого-генетические исследования подразумевают не только изучение реакции человеческого организма на различные потенциально опасные факторы окружающей среды и объяснение различной чувствительности отдельных людей к их действию [Brewer, 1971], но и анализ индивидуальных особенностей адаптации к окружающей среде. Это связано с тем, что эффективность выработанных на протяжении веков адаптивных реакций человека генетически обусловлена [Motulsky et al., 1978], во многом зависит от адекватности этих особенностей конкретным для данной популяции природным условиям среды обитания и нарушается при их изменениях.

В экотоксикологически неблагоприятных по диоксину регионах у людей формируется особое патологическое состояние, определяемое как синдром отдаленных медицинских последствий [Румак, 1993]. Он проявляется многоуровневыми, полиморфными, структурными и функциональными изменениями в жизненноважных системах организма,

снижением его резервных возможностей и угнетением специфических защитных реакций. Все эти признаки выявлены, идентифицированы и охарактеризованы при исследовании населения южно-вьетнамской провинции, четверть века назад загрязненной применением экотоксикантов, содержащих диоксин ("Оранжевый агент", ОА). Помимо известных клинических проявлений, для отдаленных медицинских последствий воздействия даже малых количеств диоксинов характерны разнообразные субклинические, часто скрытые дизадаптационные эффекты, которые определяют медицински значимое ухудшение здоровья, нарушения развития и могут быть соотнесены с повреждением генетических структур.

Вместе с тем, не решен основной вопрос о механизмах, участвующих в формировании патологических изменений, о роли хронических процессов и/или генетических событий. Это, естественно, ставит исследователей перед принципиально новой проблемой - эколого-генетической храктеристики эффекта отдаленных последствий. Настоящая проблема тесно сопряжена с экотоксикологией диоксина и включает задачи выявления, исследования и характеристики отдаленных последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов на генетические структуры различных людей.

Известно [Румак и др., 1995; Антонюк, 1995], что влияние диоксиноподобных соединений способствует сокращению периодов онтогенеза с потерей десятков лет благополучной жизни на весь срок жизни человека. Адекватной моделью исследования этих закономерностей, наравне с популяционными, организменными и системными уровнями, могут служить клеточный и внутриклеточный уровни. Именно поэтому наши исследования предусматривали многоуровневый подход: цитогенетические параметры рассматривались нами как основа для анализа особенностей воздействия диоксина; системные изменения на уровне клеточных популяций - для характеристики медико-биологической значимости возникающих

перестроек и идентификации отдаленных медицинских последствий; нарушения в репродуктивной функции изучались с целью выяснения медицинской и демографической значимости этих эффектов.

Зависимость биологически активных свойств диоксина от экзогенных и эндогенных факторов, высокая вариабельность в индивидуальной чувствительности определили особую значимость учета особенностей и закономерностей формирования эколого-генетических последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов. Невозможность сделать это ка основе простого суммирования имеющихся разработок по токсикологической генетике и генетической токсикологии, потребовала разработки принципиально новых решений проблемы оценки ожидаемого эффекта. С точки зрения теории - необходимо было разработать алгоритм и принципы исследований популяционных групп, которые испытывают повреждения от малоизученных химических экотоксикантов, подобных диоксинсодержащему экотоксиколопгческому фактору (ДЭФ), сформированному на исследуемой территории Вьетнама в результате применения Оранжевого агента. Важно было соотнести возможности проявления как действия самого ДЭФ на генетический аппарат, так и особенностей реализации этого воздействия на фоне индивидуальных генетических характеристик человека, функциональных и морфо-физиологических особенностей организма.

Цель настоящего исследования состояла в научном обосновании алгоритма и принципов выявления эколого-генетических эффектов отдаленных медико-биологических последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов на население, в разработке путей и методов их выявления, изучения и характеристики. Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

сравнительной генетической характеристики населения в исследуемых регионах с различными уровнями загрязнения ДЭФ;

обоснования алгоритма сравнительной медико-генетической характеристики двух селитебных регионов;

- анализа состояния репродуктивной функции семей, проживающих в районах с различным уровнем воздействия экотоксикантов;

- изучения цитотенетических показателей и особенностей изменений и/или нарушений хромосомного аппарата у людей с различной степенью воздействия ДЭФ;

изучения взаимосвязей эффектов, наблюдаемых на внутриклеточном, популяционно-клеточном, организменном и популяционном уровнях с состоянием здоровья и характеристиками экспозиции.

В задачи исследования также входило выяснение общих закономерностей генетического ответа соматических клеток человека и комплекса медико-биологических показателей синдрома отдаленных последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов включая состояние репродуктивной функции.

В результате исследований обоснованы следующие научные положения, которые выносятся на защиту:

1. Проявление специфической эколого-генетической активности диоксин-содержащего экотоксикологического фактора (ДЭФ), сформировавшегося во Вьетнаме на территории, загрязненной в результате крупномасштабного применения хлорфеноксигербицидов (Оранжевого агента, ОА). Эколого-генетическая активность ОА и/или ДЭФ обусловлена уникальными биологически активными свойствами диоксина и выявляется у людей с разной степенью экспозиции.

2. Характеристика эколого-генетических эффектов на различных уровнях их формирования - от хромосомного до субпопуляционного. Показано, что эколого-генетические последствия являются составной частью многоуровневых изменений гомеостаза, приводящих к отдаленным медико-биологическим последствиям воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов.

3. Алгоритм эколого-генетических исследований. Он позволяет выявлять эколого-генетические последствия воздействия

диоксинсодержащих экотоксикантбв на разных уровнях и может быть применен для обследования больших групп населения, проживающих на загрязненных территориях.

4. Среди механизмов формируемых эколого-генетических последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантоп наиболее вероятны отклонения характеристик генетического гомеостаза, обусловленные как особенностями генетической структуры организма, так и дизадаптапиошшми изменениями в результате исчерпания резервных возможностей клеток, а также первичными повреждениями (за счет повышенной индукции свободно-радикальных процессов в организме).

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований

впервые разработан и • апробирован алгоритм эколого-генетических

исследований отдаленных медицинских последствий воздействия ДЭФ,

который позволяет выявлять, изучать и характеризовать последствия

воздействия на разных структурных уровнях - от хромосомного и

клеточного до популяционного; на репрезентативном материале,

отвечающем задачам работы, получена эколого-генеттпеская

характеристика эффекта отдаленных медицинских последствий

воздействия ДЭФ; разработан и апробирован методический подход,

позволяющий на уровне клетки диагностировать доклинические эффекты

(дизадапгогенные изменения) после воздействия диоксинсодержащих

экотоксикантов; показано различие чувствительности внешнесредовой

компоненты показателя частоты СХО у людей с разной степенью контакта

с ДЭФ, а также корреляция наблюдаемых изменений цитогенетических

показателей с общими сдвигами медико-биологических показателей в

выделенных "группах риска" с повышенной чувствительностью к

воздействию экотоксических факторов. Показано снижение уровня

внешнесредовой компоненты СХО в группе лиц, подвергавшихся прямым

контактам с Оранжевым агентом, что отражает механизмы дизадаптации

и/или компенсаторной адаптации к повреждениям, вызываемым сдвигами

гомеостаза в результате отдаленных медико-биологических последствий. гьньа,

Дизадаптаиионные изменения в клетках подтверждены наличием большой квоты клеток с фрагментацией хроматина на начальной стадии алоптоза.

Практическая значимость исследования связана с его основными задачами и заключается в получении исходных данных для практических Рекомендаций по эколого-генетической эпидемиологии. Полученные результаты реализованы в ходе комплексных иследований на территории Вьетнама и используются при градации селитебных районов. На основании полученных эколого-генетических характеристик эффекта отдаленных медицинских последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов возможно выделить показатели вероятности поражения систем и органов индивидума - на уровне соматических и половых клеток; определить индивидуальную чувствительность людей к данному экотоксиканту - во избежание привлечения людей с повышенной чувствительностью к воздействию изучаемого соединения к работам, связанным с его производством и применением.

Результаты исследований представлены для реализации при определении безопасных уровней диоксинсодержащих экотоксикантов, при прогнозировании отдаленных последствий поражения токсичными факторами при несчастных случаях, авариях и экологических катастрофах. Кроме того, анализ имеющихся материалов позволяет говорить о возможности индивидуальной коррекции наблюдаемых на уровне клеток изменений и дает основание для применения адаптогенных и антимутагенных препаратов - в частности, у людей с большей вероятностью появления наследственных аномалий в соматических или половых клетках (живущих и/или работающих в условиях хронической экспозиции).

Для определения путей научно-практической реализации этих исследований рассматриваемые особенности воздействия изучены с учетом взаимосвязей между уровнями ДЭФ и эколого-генетическими эффектами для человека. Настоящие исследования позволили спрогнозировать отдаленные последствия подобных воздействий, а также

заложили основу для скрининга больших популяиионных групп в районах загрязнения ДЭФ. Это позволяет проводить мониторинг не только отдельных патологических состояний и наследственных заболеваний, но и выявлять вновь возникающие аномалии и нозологии.

Важно подчеркнуть практическую значимость этих работ для решения вопросов, сформулированных в Федеральной Целевой Программе "Защита окружающей природной среды и населения от диоксинов и диоксиноподобных токсикантов на 1996-1997 годы", утвержденной постановлением Правительства РФ от 5 ноября 1995 г. (№ 1102). Все это непосредственно касается больших контингентов людей, которые могут оказаться под воздействием диоксина и ДЭФ в условиях повышенного содержания в среде промутагенных и/или проканцерогенных соединений. Значимость исследований определяется разработкой проблемы во Вьетнаме по прошествии более чем 20 лет с момента воздействия Оранжевого агента. Этот срок обеспечивает условия для проявления многих отдаленных медико-биологических последствий такого воздействия.

Работа выполнена в рамках программы исследований Тропического Отделения Института проблем экологии и эволюции РАН. Непосредственные исследования проводились во Вьетнаме на базе Совместного Российско-Вьетнамкого Тропического центра РАН и Министерства науки, технологии и экологии СРВ (Межправительственное соглашение, 1987 г.). начиная с 1989 года по программам и рекомендациям РАН (ранее АН СССР), МО РФ (УНХВ, ВМедА).

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались на V Всесоюзном совещании по структуре и функциям хромосом (Пущино, 1985); V Всесоюзном биохимическом съезде (Киев, 1986); V и VI съезде ВОГиС им. Н.И.Вавилова (Москва, 1987, Минск, 1992), Всесоюзном симпозиуме "Объем и методы генотоксической оценки и побочных эффектов биологически активных веществ (Ленинград, 1989), на 2-м Совещании по антимутагенным препаратам (Минск, 1993), на

г>

Международном симпозиуме по жень-шеню (Сеул, 1993), на международных конференциях по проблеме "Диоксин" (1991 - C1RA, 1993 - Австрия, 1994 - Япония, 1995 - Канада), 2-м Международном симпозиуме по проблеме "Применение гербицидов в военных целях. Отдаленные последствия воздействия на природу и человека" (1993 г.), на заседаниях Комитета ¡0-80 (СРВ), на научной сессии РАМН "Химия и здоровье" (Москва, 1994), на Межведомственных совещаниях в Тропическом центре (Ханой, 02.1996; Хошимин, 04.1996). По материалам диссертации опубликовано 38 печатных работ.

Структура диссертации. Диссертация состоит из введения и 4 глав, где представлены обзор литературы и описание собственных исследований; содержит 337 страниц текста, 32 таблицы и 13 рисунков. Список литературы включает 154 русских и 477 иностранных названий.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Введение. Во введедении обоснована актуальность исследований, выполненных на загрязненных Оранжевым агентом территориях, для решения проблемы эколого-генетических последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов, сформулированы цели и задачи диссертационной работы. Необходимость анализа воздействия факторов окружающей среды на человеческое сообщество с учетом генетически обусловленных реакций особенно важна при загрязнении диоксином -стойким химическим веществом, способным долгие годы сохраняться в объектах ■ окружающей среды и проявляющим уникальные гормоноподобные, диерегуляторные и дисадаптогенные свойства. Продолжающееся хроническое поступление диоксинов в организм жителей Южного Вьетнама и проявление медико-биологических последствий на разных структурных уровнях не только при остром воздействии, но и в отдаленный по времени период - все эти положения

сформировали необходимость характеристики эколого-генетических последствий воздействия днохсинсодержащих соединений на население.

1. Современные представления о механизмах формирования медико-геиетичсских эффектов отдаленных медицинских последствий воздействия диоксина. Очевидно, что большая часть населения планеты так или иначе подвергается воздействию диоксинов. Следовательно потенциальному риску подлежат большие и генетически разнородные популяции с вероятным полиморфизмом по АЪ-рецептору и различными ответными реакциями на воздействие. Различия в чувствительности к диоксину могут отражать не только генетическую вариабельность по АЬ-рецептору, но могут быть следствием различия в каких-либо других компонентах полигенного ответа на диоксин. Определенная генетическая предрасположенность может также способствовать специфичности ответа. Во всяком случае, механизм действия диоксина свидетельствует об участии генетических структур во всем многообразии реакций организма в ответ на проявление биологически активных свойств этого соединения. Следует особо подчеркнуть значение вариабельности реакций на диоксин, так как именно сейчас осознана необходимость и начался этап изучения взаимосвязей между генетическими и внешнесредовыми факторами, которые оказывают влияние на индивидуальную чувствительность к диоксину.

Аналитическое обобщение клинических и экспериментальных наблюдений по проблеме эколого-генетических последствий воздействия диоксинсодержаших экотоксикаитов в аспекте современах представлений о механизмах реализации биологически активных свойств диоксина позволили сформулировать суждение о вероятности возникновения в экологически неблагополучных районах многоуровневых клинически и патогенетически значимых эффектов. Их возникновение важно соотнести не только с воздействием лиоксинсодержащих экотоксикантов, но и с

комплексом гено- и фенотипических особенностей изучаемой популяции, местоспешгфическими характеристиками природной среды обитания.

Чаще всего эколого-генетические реакции определяются комплексным ответом нескольких генов, хотя могут быть и результатом экспрессии отдельных мутантных генов. Так, на молекулярном уровне вариабельность индивидуальных реакций, в том числе адаптивных, будет определяться наследственными признаками - лолиморфностью генов, присутствием того или иного аллеля, а также мутациями. Хромосомные перестройки также внесут свой вклад в генетические особенности и генетический полиморфизм.

Генетический полиморфизм любой популяции проявляется широкой нормой реакции организмов, что позволяет выживать большему числу особей. Максимальной жизнеспособностью среди генетически полиморфной популяции обладают индивидумы, хорошо адаптированные к условиям среды обитания, а аномальные ответные реакции на воздействие агентов любой природы выявляются у людей со значительными отклонениями генетических показателей от модальных значений распределения. Наши исследования продемонстрировали сужение границ "нормы" для большинства проанализированных показателей и позволили выявить отклонения фенотипических признаков у значительного процента людей из групп риска экспозиции.

Именно поэтому, воздействие экотоксикантов военного назначения, как это было на территории южного Вьетнама, представляет собой серьезную опасность с точки зрения реакции тех особей в популяции, жизнесопособность которых проявляется лишь в ограниченных пределах и требует значительных энергетических затрат для адаптации в условиях меняющейся среды. На практике это скажется в ослаблении защитных свойств организма и в более высоком уровне заболеваемости, в том числе новообразованиями, а также, вероятно, смертности среди таких людей. На исследуемой нами территории это тем более актуально, поскольку интенсивное использование пестицидов в сельском хозяйстве

предполагает усиление внешнесредовых воздействий на организм проживающих здесь людей, метаболические процессы в организме которых достаточно сильно изменены в результате предыдущего воздействия Оранжевого агента.

Таким образом, теоретические рассуждения обязывают нас предусматривать возможность генетических последствий воздействия диоксинсодержаших экотоксикантов. Вместе с тем, неоднозначные, а в ряде случаев взаимоисключающие выводы об генетической опасности диоксина потребовали критического пересмотра методологических аспектов этой проблемы. Мы полагали, что одной из причин разногласий может быть недоучет значимости многофакторного влияния естественных для жизнедеятельности человека природных условий на специфику реализации биологически активных свойств диоксина.

2. Обоснование путей и методов решения проблемы эколого-генетической характеристики населения. Разрешение такой сложной проблемы предусматривало выбор адекватного объекта исследований и формирование соответствующей методологии.

Изучение перспектив получения исходной информации для разработки настоящей проблемы убедило нас в том, что население Южного Вьетнама, в годы войны пострадавшее от военного применения OA и в настоящее время проживающее на этой территории, яшмется наиболее адекватной моделью. В настоящее время общепризнано, что именно во Вьетнаме в результате проведения операции "Ranch Hand" сложились условия, драматически напоминающие хорошо спланированный эксперимент по изучению отдаленных медицинских последствий острого воздействия диоксинсодержаших

хлорофеноксигербицидов и длительного хронического воздействия ДЭФ.

Необходимость формирования основ эколого-генетических исследований эффекта воздействия как экотоксикантов содержащих диоксин, так и совокупности локально возникающих под их влиянием 3*

ДЭФ возникла уже на самых ранних этапах исследования во Вьетнаме. Причем важное значение имело не только теоретическое обоснование принципов исследования популяционных групп, которые сталкиваются с новым классом химических воздействий, подобных ДЭФ, но и соотнесение возможностей проявления воздействия как самого ДЭФ на генетический аппарат, так и особенностей реализации этого воздействия на фоне индивидуальных генетических характеристик человека, функциональных и морфо-физиологических особенностей организма.

Поставленные задачи прогнозирования отдаленных последствий воздействия диоксинов и создания системы скрининга больших популяционных групп в районах воздействия ДЭФ (диоксинсодержащего экотоксикологического фактора) решались путем проведения специализированных, в том числе и разработанных нами, эпидемиологических, медико-генетических и цитогенетических исследований. Схема исследований представлена на рис.1. Последовательность исследований включает общее эпидемиологическое обследование населения, вычленение выборки для медико-генетического анализа, проведение генетико-токсикологических и токсико-генетичеких исследований среди выбранных групп населения.

В качестве объекта исследований было выбрано сельское население Южного Вьетнама, проживающее на территории провинции Шонгбе, обработанной лиоксинсодержащими гербицидами во время Второй Индокитайской войны (1962-1971 гг.). Населенные пункты для проведения исследований выбирались на основании анализа литературных данных и фактических материалов об экотоксикологической ситуации на юге Вьетнама.

Настоящее исследование опиралось на дифференцировку людей по группам риска экспозиции (ГРЭ) [Румак 1993; Позняков и др., 1993], куда были заложены сведения о выраженности специфичных для воздействия диоксина симптомо-комплексов. Такие группы были сформированы в результате комплексных, многоуровневых исследований всех изменений в

I Этап - Эколого-генетическая характеристика экотоксикологической _ситуации в районах проведения исследований_

I. Характеристика химических факторов на исследуемой территории

| Токсины | | Мутагены | | Канцерогены | | Терзтогены [

2. Демографическая и генеалогическая характеристики населения Сравнимые макропризнаки

Количественные характеристики населенных пунктов

Количественные характеристики семей

Национальный признак

Генеалогия

Демографический прирост

Оседлость

Вид трудовой деятельности

Вид питания

Уровень жизни

II Этап - Генетико-токсикологические исследования

Регистрация факта воздействия и его характеристика

Характеристика индивидуальной чувствительности

Характеристика состояния репродуктивной функции

II] Этап - Токсиколого-генетические исследования

Цитогенетические исследования на клетках разных ростков (СХО, МЯ, хиазмы, апоптоз)

Характеристика индивидуальной чувствительности, сопоставление с другими показателями гомеостаза

| IV Этап - Заключение об эколого-генетических последствиях эффекта [

Рис. 1. Структурно-логическая схема исследований на территории Южного Вьетнама, загрязненной диоксинсодержащими соединениями (1989-1995 гг.).

к з.

состоянии здоровья и гомеостаза при широком спектре возможных вариантов экотоксикологических нагрузок.

Фактический материал получен способом анкетирования, в котором автор принимал непосредственное участие с начала исследований. Эпидемиологическая анкета содержала сведения об отклонениях в состоянии различных систем (дыхательной, сердечно-сосудистой, костно-мышечной, пищеварительной, моче-выделительной, кожи, органов зрения), а также сведения о наличии вредных привычек и некоторых особенностей анамнеза. В медико-генетическую анкету вносились дополнительные сведения, касающиеся состояния репродуктивной функции, а также вопросы для генеалогического анализа семейных связей и вероятной патологии у родственников пробанда.

Уровни воздействия экотоксикологического фактора для каждой группы оценены [Румак и др., 1991-1996; Позняков и др., 1993-1996; Антонюк, 1995] с помощью интегральных индексов отдаленной экспозиции токсиканта, представляющих собой медицинские эквиваленты токсической дозы по первичным реакциям и вторичным системным реакцияорганизма.

Среди населения южного Вьетнама выделены три группы риска экспозиции: ГРЭ I - проживающие на незаряженной территории и никогда не контактировавшие с Оранжевым агентом; ГРЭ II -проживающие на зараженной в ходе операции Рэнч Хэнд территории (деревня Бинь Ми, провинции Шонгбе), но не подвергавшиеся прямому воздействию Оранжевого агента; ГРЭ III - проживающие на зараженной в ходе операции Рэнч Хэнд территории (деревня Бинь Ми) и подвергавшиеся прямому воздействию Оранжевого агента.

Сравнительными когортными исследованиями принципиально различимых по экспозиции с диоксинсодержащими экотоксикантами выборок людей установлены общие многоуровневые медицински значимые особенности в диагностируемых проявлениях эффекта отдаленных медицинских, последствий. Кроме того, наблюдаются:

изменение частот встречаемости индивидуумов с определенными величинами исследуемых показателей; возникновение принципиально новых эффектов, специфичных для диоксинзависимых состояний; формирование новых, отличных от определяемой "нормы", устойчивых корреляционных связей между функционально сопряженными характеристиками гомеостаза.

Формирование субклинических компонентов синдрома отдаленных медицинских последствий оказалось возможным связать с реализацией гормоноподобной дисрегуляторной и дизадаптогенной активности диоксина и рассматривать как промежуточный уровень патогенеза индукции медицински значимой патологии. При возникновении комплекса субклинических компонент синдрома отдаленных медицинских последствий наравне с биохимическими и гормональными перестройками, значимая роль принадлежит возникающим в их следствии дизадаптацношшм изменениям и, в частности, исчерпанию резервных возможностей биологических систем.

В процессе клинических и лабораторных исследований установлено, что после реализации биологически активных свойств диоксина организм переходит на иной уровень функционирования, при котором биологические системы способны адекватно отвечать лишь на незначительные нагрузки. При экстремальных воздействиях профили отклика систем организма приобретают отличающийся, часто медицински значимый, характер.

Фенотипические изменения, выраженные в смене профилей гомеостаза либо отдельных его характеристик, наблюдаются в загрязненном районе у определенной (иногда большой) части популяции, что подразумевает генетическую обусловленность этих реакций. Вместе с -тем, такие сдвиги очевидны и ведут к неадекватным ответным реакциям даже при слабых экспериментальных нагрузках. Кроме того, такие

изменения могут иметь очень большое значение для всей популяции, так И*

как свидетельствуют о вероятности нарушений гомеостаза под влиянием фоновых (местоспецифических) факторов.

Все изменения состояния здоровья у людей, имевших контакт с диоксинсодержащими соединениями, безусловно определяют желательность и необходимость периодических наблюдений за состоянием здоровья. Прежде всего это связано с вероятностью повышения степени риска возникновения опухолей. Однако такая ситуация непосредственно касается только того человека, у которого отмечены такие изменения. Вместе с тем, популяционные эпидемиологические исследования обязательно должны учитывать и вероятность воздействия оцениваемого фактора риска, как на собственно возможность появления следующих поколений, так и на состояние здоровья этих будущих поколений.

3. Эколого-геиетическая характеристика населения в деревнях южновьетнамских провинций с разной степенью загрязнения диоксинсодержащими экотоксикантами. Наши исследования начинались со срезового анализа популяций в загрязненном и контрольном районах, так как эколого-гентические исследования невозможны без первоначального эпидемиологического анализа, как основы характеристики населения. Разработанный нами и апробированный в СРВ алгоритм исследования предусматривал проведение работ, результаты которых рассмотрены ниже, и проходил в несколько этапов:

1. Анкетирование и первичное медицинское обследование людей в населенных пунктах контрольного и загрязненного районов с последующим подразделением населения деревни по степени контакта с химическими веществами на группы риска экспозиции;

2. Медико-генетическое анкетирование жителей с зафиксированными при первичном обследовании отклонениями функциональных характеристик репродуктивной функции и анализ полученных сведений;

3. Генеалогический анализ семей с патологическими исходами беременности и родов;

4. Клнншсо-лабораторные исследования, включающие развернутое медицинское обследование . и анализ биологического материала цитогенетическими методами (соматические и, по возможности, половые клетки);

5. Создание компьютерных баз данных "Reproduction", "SCE", "MN".

6. Статистическая обработка полученных материалов с помощью пакетов прикладных программ "Excel, v.5.0", "Statgraphics, v.3.0", "Statistica, v.4.3" и их анализ.

7. Заключение об эколого-генетических последствиях влияния диоксинсодержащих экотоксикантов на население сельских районов.

В начале наших исследований среди предполагавшихся эколого-генетических последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов можно было выделить канцерогенез, тератогенез и нарушения репродуктивной функции, в основе которых могли быть, либо не быть генетические нарушения.

Провести изучение канцерогенных последствий среди жителей Южного Вьетнама не представлялось возможным из-за региональных особенностей системы здравоохранения Вьетнама и необходимости скрининга огромных выборок в популяциях с учетом динамики этих изменений и смертности за послевоенные годы.

Несмотря на то, что тератогенные события также достаточно редки и не всегда фиксируются из-за весьма значительного числа выкидышей и родов в домашних условиях, мы остановились на анализе патологии репродуктивной функции в семьях, так как в деревне число беременностей в среднем на одну женщину все еще остается достаточно высоким (5-6 беременностей в возрасте 35-40 лет и до 10 за весь репродуктивный период). Это позволило получить достаточно представительные выборки.

Важно подчеркнуть, что работы по изучению генетических последствий являлись составной частью комплексных медико-

биологических исследований Отдаленных медицинских последствий химического воздействия США во Вьетнаме. Данное обстоятельство открывало перспективу дифференциальной диагностики генетических эффектов в комплексе с другими показателями. Это также позволило провести анализ показателей состояния репродуктивной функции, морфологических и цитогенетических показателей клеток разных ростков на основании стратификации обследованных жителей не только по группам риска, но и с учетом многих сопутствующих и вмешивающихся факторов. Кроме того, эколого-генетические последствия были выявлены и изучены среди четко выбранных и охарактеризованных групп риска экспозиции, что повышает в целом значимость полученных заключений о специфичности наблюдаемых эффектов.

3.1. Состояние репродуктивной функции. После завершения первичных эпидемиологических исследований, выявления диоксина как приоритетного экотоксиканта и анализа данных о первичном заражении региона Оранжевым агентом внимание было сосредоточено на анализе медико-генетических характеристик семей из основных групп риска. Фактически, проведенные нами исследования представляли собой мониторинг выделенных групп населения с точки зрения выявления возможных генетических последствий в "группах повышенного риска".

. Углубленный медико-генетический анализ, проведенный в ряду семей с нарушениями процессов беременности и родов, а также в здоровых семьях, позволил выявить определенные отличия, наблюдаемые в этих группах семей. Спектр нарушений репродуктивной функции оказался сходным в разных населенных пунктах, специфических типов поражений выявлено не было (табл. 1). Однако наблюдались различия в целом -между контрольным и загрязненым районом (рис.2).

Таблица 1. Встречаемость патологии репродуктивной функции в Группах Риска Экспозиции в двух деревнях на территории Южного Вьетнама, N=1116. возраст 20-60). Оценка методом непараметрической статистики, Хи-квадрат)

А. Без стратификации по возрасту 1а пь IIIе р" PK p"c

Число обследованных семей 541 438 137

Врожденные аномалии 9 И 6 ns ris 0.0535

Спонтанные аборты, един. 114 109 47 ns 0.0304* 0.0011*

Спонтанные аборты, повт. 35 33 16 ns ns 0.0389*

Мертворождения, един. 30 36 17 ns ns 0.0047**

Мертворожденна, повт. 3 6 5 ns 0.0891 0.0027**

Б. Возрастная группа 20-30 Г 11 IIIе pab P°c

Число обследованных семей 176 153 15

Врожденные аномалии 1 0 0 ns nd ns

Спонтанные аборты, един. 20 25 4 ns ns 0.0861

Спонтанные аборты, повт. 0 6 1 0.008** ns 0.0006**

Мертворождения, един. 1 6 0 0.0355* ns ns

Мертворождения, повт. 0 1 0 ns ns nd

В. Возрастная группа 31-50 Г 11ь IIIе Раь p" p*

Число обследованных семей 247 248 74

Врожденные аномалии 5 10 3 ns ns ns

Спонтанные аборты, един. 59 73 24 ns ns ns

Спонтанные аборты, повт. 16 23 7 ns ns ns

Мертворождения, един. 15 22 6 ns ns ns

Мертворождения, повт. 1 51 Г ns ns ns

Г. Возрастная группа 51-60 Г II IIIе pao p" pac

Число обследованных семей 118 37 48

Врожденные аномалии 3 1 3 ns ns ns

Спонтанные аборты, един. 35 И 19 ns ns ns

Спонтанные аборты, повт. 19 4 8 ns ns ns

Мертворождения, един. 14 8 11 ns ns 0.0711

Мертворождения, повт. 2 0 4 ns 0.0721 0.0378*

ab - сравнение ГРЭ I и ГРЭ И; ас - сравнение ГРЭ I и ГРЭ III; be - сравнение ГРЭ Н и ГРЭ III

в*

Гинекологические заболевания

250

Врожденные пороки развития

Пузырный занос 1

Еоматнческая патология

Осложнения беременности

\ —• - ГРЭ 1

Мертворождения Спонтанные аборты -»- ГРЭII

_ГРЭ Ш

Рис. 2. Относительная частота встречаемости патологии репродуктивной функции на 1 женщину в Группах риска экспозиции (ГРЭ). За 100% принят уровень для контрольного района (ГРЭ ])

В основном такие отличия сводились к следующим показателям: в загрязненной ДЭФ деревне увеличивается процент женщин с патологией репродуктивной функции; наблюдается возрастание числа детей с пороками развития, а также числа мертворождений. Небольшое увеличение уровня спонтанных абортов вероятно не имеет столь существенного значения, так как в отдельных деревнях контрольного района наблюдали сходные уровни этого типа патологии.

Величины относительной частоты патологии репродуктивной функции для семей из контрольного района, рассчитанные с учетом количества беременностей на 1 женщину, составили: 35-45 случаев спонтанных абортов на 1000 беременностей, 5-7 случаев мертворождений и 1-2 случая врожденных пороков развития на 1000 родов. Относительные частоты патологии репродуктивной функции в семьях, проживающих в загрязненном диоксином районе, составили: для спонтанных абортов - 48 случаев на 1000 беременностей, для мертворождений - 10 случаев на 1000 родов, для врожденных пороков развития - 4-6 случаев на 1000 родов. Вместе с тем, при учете этих показателей относительно степени

экспозиции оказалось, что частота спонтанных абортов у женщин с прямыми прошлыми контактами с Оранжевым агентом возростает до 65 на 1000 беременностей.

Кроме того, расчет этих показателей для группы молодых женшин, родившихся в деревне Бинь Ми в годы войны и сразу после нее, свидетельствует о вероятности еще более высокой частоты патологических исходов - до 84 случаев спонтанных абортов на 1000 беременностей, 20 случаев мертворождений на 5000 родов, 14 случаев врожденных пороков на 1000 родов. Эти величины могли бы быть зарегистрированы на исследуемой территории в случае, если бы не применялись меры по ограничению рождаемости (согласно Политике планирования семьи, проводимой в СРВ с 1972 г.). Среди обследованных нами молодых женшин до 80% в настоящее время применяют средства контрацепции.

На территории загрязненного дефолиантами района установлено снижение процента женщин с нормальным физиологическим циклом, жалобы значительного числа женщин на нарушения регулярности менструаций, на наличие гинекологических заболеваний, на хроническое течение воспалительных заболеваний. Наибольшая разрегулированность циклов наблюдается среди родившихся после 1960 года женшин без очевидных пока репродуктивных нарушений. Среди этой же группы наблюдается задержка полового созревания - лишь 10.5% женшин имеют раннее (до 16 лет) менархе (против 37% в контрольном районе), у остальных же срок полового созревания затягивается на 3-5 лет.

Наряду с другим)! факторами эти особенности физиологических процессов могут служить показателями общего ослабления организма жителей данного района, свидетельством чему могут быть повышенная эмбриональная гибель и осложнения течения беременности, недонашивание беременности, а также более серьезные аномалии развития. В среднем примерно у 30% женщин встречаются осложнения беременности, причем чаще всего это связано либо с угрозой выкидыша, либо с гипотрофией и гипоксией плода. В группе женщин до 30 лет из б

ГРЭ III отмечена значимая связь частоты спонтанных абортов с общим состоянием здоровья, выраженным через индекс состояния здоровья (IHS) (р=0.002). Для контрольного района такая связь наблюдается только для более старых женщин (31-50, р=0.02).

В основе патологии репродукции могут быть и более серьезные аномалии - нарушения формирования гамет, образования зиготы, имплантации эмбриона и развития плода. На любом из этих этапов могут возникать изменения в силу внутренних (определяемых наследственными задатками) или внешних причин. Поскольку возникновение любой патологии или признака всегда есть результат взаимодействия наследственного предрасположения и влияния внешней среды, поэтому заключение о значимом возрастании патологии в репродуктивной функции после воздействия ОА и/или ДЭФ и задачи нашей работы потребовали углубления исследований с целью выяснения значимости местоспецифических фено- и гено- составляющих в формировании наблюдаемого эффекта.

Проведенный нами анализ родословных и сведений о наличии или отсутствии признаков патологии в восходящих поколениях позволил получить характеристику субпопуляций коренных жителей деревень из провинции Шонгбе (на примере деревни Бинь Ми) и переселенцев из северных провинций. На основании имеющихся материалов отклонено предположение о наследственном характере отмеченных случаев врожденной патологии, так как в результате наших исследований родословных семей из нескольких деревень контрольного района и деревни Бинь Ми не было получено свидетельств возможной наследственной передачи патологичесих признаков.

Отсутствие таких свидетельств побудило нас провести анализ других возможных причин, способных повлиять на различия в частоте ^встречаемости патологии в загрязненном и интактном районах. Наряду с другими, мы проанализировали 2 возможные причины: ослабление

организма матери; возможные нарушения во внутриутробном развитии, а также комбинация этих причин.

Характеристика состояния здоровья (по интегральному показателю состояния здоровья - Шй) женщин из разных групп риска с различными проявлениями нарушений в репродуктивной функции представлена на рис.3. Оказалось, что с ростом степени экспозиции в группах риска наблюдается и ухудшение состояния здоровья (выраженное через процентный прирост 1Ш). Выше уже приводились свидетельства ассоциативной связи признаков патологии репродуктивной функции и общего ослабления организма матери. Анализ этих данных позволил нам сделать вывод, что перечисленные причины способны внести вклад в патологические исходы беременности, однако только этими причинами нельзя обленить всю картину наблюдаемых аномальных проявлений.

200 150 ® 100. 50

о

13 Контроль ЯГРЭ I

агрэ п

□ ГРЭ III

Рис. 3. Вклад ухудшения состояния здоровья в патологию репродуктивной функции в группах риска экспозиции (возраст 31-50 лет). За контрольную точку отсчета (100%) принято значение индекса состояния здоровья (ШБ) у женщин из контрольного района без признаков патологи репродуктивной функции

У людей, проживающих в условиях различного воздействия диоксннсодержащих экотоксикологических факторов, формируются

вариабельные характеристики гомеостаза и функциональные нарушения на разных уровнях (вплоть до молекулярного), обусловленные как их генетической структурой, так и разной степенью воздействия факторов среды. Очевидно, что такие сдвиги способны вызывать функционально-структурные изменения на хромосомном уровне, равно как и быть следствием таких изменений.

Процессы, регулирующие основные механизмы жизнедеятельности (биотрансформации, транскрипции, синтеза белков и др.) участвуют в реализации биологически активных свойств диоксина и, более того, непосредственно задействованы в метаболических превращениях промутагенных и проканцерогенных соединений. Последствием отклонений функциональных характеристик процессов, опосредуемых такими механизмами, могут оказаться нарушения процессов поддержания стабильности генетического аппарата. Кроме того, напряжение резервных возможностей клетки за счет усиления активности репарации и синтеза необходимых соединений de novo может приводить к быстрому исчерпанию резервных возможностей клетки. Именно эти процессы, по нашему мнению, приводят к дизалаптогенным проявлениям в ответ на воздействие диоксина.

Конечной целью исследований генетического риска является не только регистрация факта неблагоприятных последствий, но и определение величины риска влияния потенциально генотоксичного фактора на зародышевые клетки человека. Решение такой задачи наиболее полно может быть достигнуто путем цитогенетического анализа (аберраций хромосом, СХО, микроядра), так как его результаты позволяют получать количественные величины. Кроме того, проявление хромосомных аномалий в соматических клетках свидетельствует о возможности их возникновения в генеративных клетках.

3.2. Изучение особенностей цитогелетических показателей.

Современная наука не располагает однозначными подходами и методами

прямой экстраполяции данных с организмеиного на генетический или молекулярно-генетический уровень и наоборот. Вместе с тем, есть подход - аналнз частоты сестринских хроматидных обменов (СХО) - который позволяет дифференцировать внешнесредовую и генетическую детерминированность наблюдаемых фенотипических проявлений и при последовательном усложнении модели приблизиться к эти параллелям.

В качестве показателей сдвигов клеточного гомеостаза в группах риска воздействия экотоксикантов мы рассматривали качественные и количественные характеристики реакции хромосомного материала клеток периферической крови. Причем показателем генетического воздействия считали долю от спонтанного уровня СХО, обусловленную в основном воздействием внешнесредовых факторов (вСХО), и долю клеток с повышенным числом обменов (КВЧО), индексирующую степень "переживземости" такого рода повреждений и их участие в обшей структуре распределения СХО по клеткам.

Принципиальная разница между ГРЭ II и ГРЭ III выявлена именно по уровню вСХО (р<0.01), причем доля этих обусловленных внешнесредовыми факторами СХО составила 41.45 ± 2.37% в ГРЭ II, а в группе ГРЭ III - 26.78 + 2.78% (Табл.2., р<0.001). Учитывая, что в группе из контрольного района эта доля была около 20% можно говорить о продолжающемся воздействии экотоксических факторов среды обитания на системы, поддерживающие стабильность генетических структур.

Большая реакционная способность этих систем и/или их подверженность воздействиям факторов среды у жителей, не попавших под прямое влияние ОА, свидетельствует, с одной стороны, о биологической активности ДЭФ, как потенциального промотора мутагенных и/или канцерогенных процессов в организме людей, отнесенных к ГРЭ II (рис.4); с другой стороны - о вероятности формирования компенсаторных и адаптивных механизмов в клетках людей с прямым контактом с ОА в прошлом. О последнем, в частности, может косвенно свидетельствовать замедление клеточного цикла

лимфоцитов у людей из ГРЭ III (р=0.04), скорее всего, отражающее работу систем репарации возникающих повреждений на фоне исчерпания резервных возможностей клетки.

Таблица 2. Частота сестринских хроматидных обменов (СХО) в лимфоцитах периферической крови людей из различных групп риска экспозиции с диоксинсодержащим экотоксикологическим фактором (ДЭФ) (провинция Song Be, южный Вьетнам), (Average ± S.E.M.)

Индексы Группы риска экспозиции Р+

1 II III

Число клеток 1000 1700 1600

Число человек 10 17 16

Индекс пролиферации (ИП), 72 ч 1.82 ± 0.08 1.81 ± 0.05 1.63 ± 0.05* 0.047

ИП, 96 ч 1.56 ± 0.05 1.43 ± 0.04 1.47 ± 0.04 0.159

Частота клеток с аберрациями 1 на 2000 20-40 на 2000 0.055

Спонтанные СХО (сСХО), 72 ч 5.95 ± 0.37 7.42 ± 0.373 6.23 ± 0.30* 0.016

Генетические СХО (гСХО), 96 ч 4.69 ± 0.31 4.30 ± 0.25 4.50 ± 0.16 0.550

Внешнесредовые СХО (вСХО) 1.26 ± 0.20 3.11 ± 0.28ь 1.74 ± 0.27** 0.0001

Доля вСХО, % 20.81 ± 3.06 41.45 ± 2.37b 26.78 ± 2.78** 0.0000

КВЧО, 72 ч 2.60 ± 0.94 6.94 ± 1.20Ь 2.81 ± 0.73** 0.0052

КВЧО (%), 72 ч 6.50 ± 2.36 17.35 ± 3.0|Ь 7.13 ± 1.83** 0.0053

КВЧО, 96 ч 3.80 + 1.14 2.71 ± 0.78 ■ 3.44 ± 0.70 0.6540

КВЧО (%), 96 ч 9.65 ± 2.82 6.76 ± 1.95 8.59 ± 1.75 0.6296

I - жители контрольной деревни; II - жители деревни Binh Му с косвенным контактом с Оранжевым агнетом (ОА) и хронической экспозицией ДЭФ; III -жители деревни Binh Му с прямым контактом с ОА в прошлом и хронической экспозицией ДЭФ; вСХО - разница между спонтанным и генетическим уровнями СХО, фиксируемыми в 72- и 96-часовыми культурами, отражающая в основном влияние внешнесредовых факторов; КВЧО - клетки с высоким числом СХО (клет./точку).

+ - Однофакторная ANOVA, уровень достоверности; * - р<0.05, при сравнении с уровнем в ГРЭ II; **•- р<0.01, при сравнении с уровнем в ГРЭ 11; а - р<0.05, при сравнении с контролем; b - р<0.01, при сравнении с контролем.

Судя по тому, что в ГРЭ II уровень лимфоцитарных клеток с повышенным числом обменов (КВЧО) более чем вдвое превышал таковой в группах людей как из контрольного района, а их доля превышала 17% -в ответной реакции клеток этих людей на внешнесредовые факторы большую роль играет именно повышенная дестабилизация генетических структур.

Контакт с пестицидами: Контакт с пестицидами: нет есть

ГРЭ

Рис.4. Прирост внешнесредовых СХО в зависимости от интенсивности воздействия экотоксикантов в Группах риска экспозиции (ГРЭ) с учетом курения и контакта с пестицидами

У обследованных нами во Вьетнаме людей наблюдаются сдвиги показателей гомеостаза на уровне взаимоотношений между цитогенетическимн параметрами и показателями иммунного статуса (табл.3). Если в контрольной группе наблюдалась положительная корреляция между частотой спонтанных СХО (сСХО) и процентным содержанием всех Т-клеток и Т-хелперов, то у людей из загрязненного района эта связь ке только ослабляется, но и меняется на ассоциацию с процентным содержанием Т-супрессоров. Причем, эта связь положительна в группе людей, подвергающихся воздействию только ДЭФ, но отрицательна в

группе тех, кто подвергался прямому воздействию ОА. Достоверная связь сСХО с фагоцитарным индексом отмечена для людей с прямым прошлым контактом с ОА (р<0.05), практически полностью отсутствующая в контрольной группе. Следует отметить, что в контрольной группе для гСХО наблюдается тесная отрицательная связь с уровнем IgA (г=-0.57), а для вСХО (внешнесредовых СХО) - с уровнем ^М (г=-0.60). Эти тенденции совершенно теряются в группах людей, проживающих на территории загрязненного района. При этом в группе людей с прямым контактом наблюдается возникновение отрицательной связи доли вСХО с уровнем (г=-0.48).

Наблюдаемые на уровне корреляционных взаимоотношений сдвиги ассоциативных связей с величинами фагоцитарного индекса в группах риска - значимая корреляция для гСХО и сСХО в клетках людей, подвергающихся воздействию ДЭФ, и практически полное ее отсутствие для контрольных клеточных культур - может свидетельствовать о неадекватной реакции клеточного звена иммунитета у людей из загрязненного района, в частности, работы их переписных систем. Это может отражать и высокую продукцию перекисных радикалов, что, в свою очередь, способно приводить к повышеным количествам первичных повреждений в клетках. Подтверждением этому могут служить корреляционные взаимосвязи процентного содержания КВЧО и нейтрофилов, изменявшиеся от отрицательно направленных в контрольной группе до статистически значимых положительных в группе с прямым контактом в прошлом (р=0.02).

Выявленная в культурах из контрольного района положительная связь гСХО с индексом пролиферации (ИП) лимфоцитов полностью отсутствовала в других группах риска. Направленность корреляционных связей ИП и доли внешнесредовых СХО изменялась от отрицательной в контрольной группе до положительной в группе с прямой экспозицией.

Таблица 3. Корреляции между цитогенетическими и иммунологическими показателями у жителей провинции Шонгбе.

Спонтанные СХО (сСХО) Генетические СХО (гСХО) Внешнесредовые СХО (вСХО) Доля вСХО, % !

ГРУППЫ РИСКА ЭКСПОЗИЦИИ I II III I II III I II III I II III

Клеток в анализе п=1000 п=1700 п=1600 11=1000 п=1700 п=1600 п=1000 п=1700 п= 1600 п=1000 п=1700 0.29 п=1600 -0.17

Лимфоциты, % -0.07 -0.32 -0.47 -0.14 -0.5 -0.33 0.09 0.01 -0.33 0.1

Т-лимфоциты, % 0.62 0.19 0.19 0.31 0.26 -0.26 0.69 0.02 0.35 0.56 -0.08 0.35

Т-хеллеры, % 0.56 -0.09 0.35 0.39 -0.1 0.01 0.44 -0.03 0.36 0.27 0.07 0.25

Т-супрессоры, % -0.0 Г 0.48 -0.34 0.01 0.58 -0.44 -0.03 0.12 -0.12 0.02 -0.2 0.09

¡Фагоцит, индекс 0.19 0.51 0.32 0.07 0.65 0.25 0.24 0.1 0.22 0.24 -0.21 0.11

ЦИК терм. 0.4 0.28 0.05 0.29 0.29 0.22 0.3 0.11 -0.06 0.16 -0.08 -0.18

^ -0.37 -0.2 -0.03 -0.57 -0.25 0.05 0.17 -0.04 -0.06 0.37 0.09 -0.14

ш -0.23 -0.33 -0.19 0.11 -0.39 -0.1 -0.6 -0.09 -0.15 -0.55 0.08 -0.07

до -0.35 -0.23 -0.18 -0.39 -0.26 0.32 -0.06 -0.07 -0.37 0.07 0.06 -0.48

сСХО \ \ \ 0.84* 0.65* 0.45 0.58 0.75** 0.83** 0.22 0.3 0.64*

гСХО 0.84* 0.65* 0.45 \ \ \ 0.04 -0.03 -0.12 -0.33 -0.53 -0.35

вСХО 0.58 0.75** | 0.83** 0.04 -0.03 -0.12 \ \ \ 0.92** 0.85*** 0.94***

Доля вСХО 0.22 0.3 0.64* -0.33 -0.53 -0.35 0.92** 0.85*** 0.94*** \ \ \ |

ИП, 72 час 0.47 -0.09 0.47 0.63 J -0.09 0.09 -0.08 -0.03 0.44 -0.29 0.03 0.37

ИП, 96 час 0.36 0.35 0.09 0.46 0.56 0.68* -0.03 -0.03 1 -0.32 -0.17 -0.31 -0.43

КВЧО, 72 час 0.91** 0.94*** 0.92*** 0.69 0.49 | 0.43 0.65 0.80** 0.76** 0.31 0.4 0.57

КВЧО, 72 час, % 0.91" 0.94*** 0.91*** 0.69 0.49 1 0.43 0.65 -0.09 0.80** 0.75** 0.31 0.4 0.56

КВЧО, 96 час 0.69 0.56 0.3 0.90** 0.94***|0.89*** -0.08 -0.22 -0.4 -0.54 -0.39

¡КВЧО, 96 час,% 0.67 0.56 0.3 0.89** 0.94***||0.89*** -0.12 -0.08 -0.22 -0.42 -0.54 -0.39

Рамка - р<0.05; * - р<0.01; ** - р<0.001; *** - р<0.0001; жирный шрифт - тенденция значимой корреляции;

ИП - индекс пролиферации = [(1М!+2М2+ЗМЗ)/.Ю0]; КВЧО - клетки с высоким числом обменов (>12 СХО для 72 часа

фиксации, > 7 СХО для 96 часа фиксации).

С нашей точки зрения, показанное в настоящей работе изменение корреляционных взаимоотношений между показателями иммунитета и цитогенетическими параметрами лимфоцитов в группах риска экспозиции (ОА и/или ДЭФ) может отражать участие перестроек хромосомных стуктур предшественников иммунокомпетентных клеток в проявлении их функциональной активности.

Таким образом показано, что на территории Южного Вьетнама сложился комплекс содержащих диоксин средовых факторов, способных изменять внутри- и межклеточные взаимодействия, нарушать стабильность наследственных структур. Это проявляется возрастанием доли внешнесредовых СХО и является, скорее всего, следствием увеличения числа первичных повреждений ДНК. При этом наблюдается повышенная чувствительность к действию ДЭФ лимфоцитов людей с меньшими сроками проживания на загрязненной территории, что предполагает меньшую их защищенность от такого рода воздействий. В то же время, изменения процессов дифференцировки лимфоцитов и перестройка их пролиферативных возможностей, свидетельствующие о затронутое™ стволовых клеток у тех, кто подвергался прямому воздействию ОА, предполагают компенсаторное проявление адаптивных способностей организма в ответ на диерегулирующее и дизадаптогенное действие диоксина.

Эти заключения потребовали выяснения медико-биологической значимости наблюдаемых изменений частоты СХО в ГРЭ. Для последующего анализа мы выбрали микроядерный тест, как наиболее доступный при скрининге популяций и позволяющий быстро получить результаты при массовых заборах материала. Кроме того, тест позволяет анализировать морфологические особенности структуры ядра и дифференцированно оценивать типы ядерных повреждений, включая фрагментацию хроматина на начальных стадиях апоптозных изменений клетки.

В результате анализа эпителиоцитов слизистой ротовой полости 94 женщин в тех же самых деревнях провинции Шонгбе были выявлены и описаны микроядра четырех морфологических типов. Показано, что у жителей деревни Бинь Ми в клетках слизистой ротовой полости наблюдается значимое повышение частоты встречаемости клеток с нарушениями хроматиновых структур во всех возрастных группах (р<0.01).

Результаты микроядерного теста подтвердили данные о нарушении цитогенетических характеристик у населения ранее обработанных диоксином провинций Вьетнама (табл.4) и дали дополнительную системную информацию о затронутое™ отдельных стволовых клеток, которые в силу имеющихся аномалий и истощения способности к самовосстановлению не способны дать начала новым поколениям клеток без функциональных отклонений.

Таблица 4. Встречаемость людей с высокими показателями цитогенетических параметров (на примере культивируемых лимфоцитов (А) и эпителиоцитов слизистой ротовой полости (В)) в группах риска экспозиции

Параметры Группы риска экспозиции р#

I а П в II! с рав рвс рас

А) вСХО* => 1.28 /клетку 5/10 ~17/17 11/16 0.003 0.02 гк

А) % КВЧО**, >11% 2/10 11/17 3/16 0.031 0.008 пв

В) клетки с фрагментиро-ванным хроматином, > 34 /1000 3/47 11/47 0.021

В) клетки с двумя крупными ядрами, > 5 /1000 0/47 9/47 0.0013

В) клетки с аномальной морфологией ядра, > 32 /1000 11/47 23/47 0.018

*- вСХО - внешнесредовые СХО;

** - КВЧО - клетки с высоким числом обменов

9 - непараметрическая статистика (хи-квадрат)

С нашей точки зрения, "накопление" в эпителиальных клетках слизистой ротовой полости микроядерных образований может отражать процессы деструкции клеток и, в частности, хроматина в результате истощения их резервных возможностей. У жителей загрязненной деревни отмечено также наличие большого числа клеток с фрагментацией хроматина на начальных стадиях апоптоза. Эти признаки деградации также могут свидетельствовать о нарушениях не только функциональных характеристик проанализированных клеток, но и о вероятности повреждений стволовых клеток разных тканевых ростков у жителей загрязненной деревни.

Это подтверждается результатами анализа изменений на уровне эритроцитарных показателей, а также нарушений процессов кератинизашш эпидермиса. Так, среди жителей Бинь Ми значительно увеличен процент людей с низким содержанием количества эритроцитов -свыше 30% обследованных жителей имело менее чем 4 млн/мм3. В контрольном районе таких было всего около 4%. Соответственно, было снижено содержание гемоглобина, а также железа в плазме [Кожевникова и др., 1992]. В момент обследования у 20% жителей загрязненной деревни, имевших за 20 лет до этого прямой контакт с Оранжевым агентом, диагностированы хлоракнеподобные изменения типа комедонов, а также интенсивное ороговение отдельных участков кожи, сухость и чрезмерное слущивание эпидермиса [Пантелеев и др., 1991].

Вывод, который можно сделать на основании цитогенетического анализа клеток разных ростков, свидетельствует о формировании поломок, значимых с точки зрения медико-биологических послествий, так как именно они могут быть в основе наблюдаемых генетических эффектов.

Воздействие более 20 лет назад на женщин феноксигербицида ОА, содержащего диоксин, привело к общей дисрегуляции и дизадаптации организма и к нарушениям клеточных структур и их функциональных возможностей. Прежде всего, истощение резервных возможностей организма на разных уровнях - от клеток до систем органов - проявляется

невозможностью поддерживать нормальный гомеостаз и восстанавливать повреждаемые в процессе жизнедеятельности структуры. За сохранение жизнедеятельности клеткам приходится расплачиваться утратой какой-то части своих функций. В первую очередь, теряются способности специализированных реакций (например, антителообразование), в дальнейшем происходит перевод метаболических процессов на другие биохимические пути с преобладанием реакций микросомного и перекнсного окисления и накоплением свободных радикалов. В свою очередь, это ведет к повышению вероятности процессов мутагенеза и канцерогенеза.

Мы считаем, что имеются все основания говорить о серьезной затронутое™ под влиянием ОА и ДЭФ ростковых клеток, утрачивающих у обследованных нами людей способности к самовосстановлению, в результате чего не только изменяются функциональные характеристики продуцируемых клеточных поколений, но и усиливаются аутоиммунные процессы против клеток, подлежащих самодеградации. У жителей загрязненной деревни происходит, с нашей точки зрения, сдвиг естественных возрастных изменений в сторону более молодых людей.

Эти заключения потребовали изучения значимости эффекта как системного, так и с точки зрения обеспечения функциональной активности клеток.

Особую роль в реакции на воздействие экзогенного фактора играют генетические и физиологические особенности данной особи, в частности, иммунореактивность, уровень совершенства которой может в значительной мере изменить последствия воздействия на генетические структуры организма. Вместе с . тем, следует подчеркнуть, что цигогенетические поражения иммунокомпетентных клеток приводят к иммунодепрессии и ослаблению системы иммунного надзора за цитогенетическим постоянством организма.

Морфологические и функциональные изменения клеток разных ростков (лимфоциты, эритроциты, кератиноциты, эпителиошиы слизистой), а также появление тироксинопатии и инсулинопатии наряду с другими изменениями гомеостаза, показанными в наших комплексных исследованиях, не только подтверждают системный характер реализации биологически активных свойств диоксина, но и могут рассматриваться как свидетельство патогенного действия на стволовые клетки, в результате которого происходят последующие нарушения дифференцлровки и/или элиминация несущих нарушения клеток. Выход нуклеопротеидных комплексов из разрушенных клеток в кровоток способствует выработке антител к собственной ДНК и усилению аутоиммунных процессов, на фоне которых окажутся более выраженными процессы мутагенеза и канцерогенеза.

Таким образом, наблюдаемые нами изменения представленности субпопуляций лимфоидных клеток в совокупности с увеличением частоты эпителиоцитов с фрагментированным хроматином также свидетельствуют о системном характере повреждений, а сдвиг этих показателей в сторону более молодого возраста может отражать процессы преждевременного старения людей, проживающих на загрязненной территории. Подтверждение нашим данным можно найти в разработках [Антонюк, 1995], полученных на контингентах из тех же деревень Южного Вьетнама.

Токсичность ТХДД и его биоизоаналогов подразумевает его связывание со специфичными для ТХДЦ рецепторами ароматических углеводородов (А11-рецепторами), взаимодействие этого комплекса с хроматином и безусловное проявление плейоторпного ответа. Вместе с тем, согласно современным представлениям, в проявлении токсчиности ТХДЦ важную роль может играть окислительный шок.

Следует заметить, что после воздействия ОА у жителей загрязненных районов сформировалось достаточно устойчивое состояние иммунодефицита с переводом комплексных защитных реакций на более древнюю ступень - фагоцитоз. Однако для организма это грозит

повышением индукции свободных радикалов кислорода (СРК) и увеличением спонтанного мутирования за счет индукции цепных реакций перекисного окисления липидов (ПОЛ).

Высказанная когда-то Л.А.Тиуновым гипотеза об участии ПОЛ в механизме токсичности ТХДД находит новое подтверждение и в работах [Кунцевич и др., 1994], свидетельствующих, что ТХДД способствует развитию в биологических системах цепных окислительных реакций свободнорадикального типа и что наиболее подходящим субстратом для них являются липиды.

Об этом же свидетельствуют результаты анализа [Т$уг1оУ е1 а1., 1992] индекса индуцибельности бенз[а]пиренгидроксилазы, отражающего функциональные свойства микросомальной системы лимфоцитов. Оказалось, что в ГРЭ III увеличено количество людей с повышенной способностью лимфоцитов реагировать на нагрузку и показано, что в изучаемой субпопуляции диоксинсодержащим экотоксикологическим фактором сформированы индивидуумы, предрасположенные к гипериндукции активности бенз[а]пиренгидроксилазы. Кроме того, строгая корреляция между базальным уровнем бенз[а]пиренгидроксилазы в лимфоцитах у жителей деревни Бинь Ми и активностью изоформы цитохрома Р-450, катализирующей образование гидроксиантипирина в печени, свидетельствует о системном характере эффектов соединений, индуцирующих цитохром Р-450 1А1.

По нашему мнению перечисленные выше механизмы находятся в основе полифункциональной патологии диоксина как для взрослых, так и для плода. Типичными признаками отравлений ТХДД являются дистрофические изменения, некробиозы и некрозы клеток печени, почек, головного мозга, сердечной мышцы, эндокринных органов, а также атрофия лимфоидной ткани, геморрагии и общее истощение организма, выраженные в большей или меньшей степени в зависимости от дозы

и/или длительности экспозиции. Большая часть этих процессов так или иначе связана с гибелью клеток и их элиминацией.

Мы не ставили перед собой задачу обсуждения вопросов экстраполяции получаемых данных на индукцию сходных процессов в зародышевых клетках. Вместе с тем, в наших исследованиях проявилась достаточно интересная закономерность. Зарегистрированные нами изменения цитогенетических показателей выявлялись различными методами на разных типах клеток человека, подтерждены изменениями хромосомных характеристик в мейотических клетках прямокрылых [Воигакоу е1 а1., 1993], а также совпадают с проявлениями повышенного уровня отклонений состояния репродуктивной функции у молодых женщин (рождения после 1961 г.) в загрязненном районе.

Принимая во внимание все изложенное выше отметим, что плод может испытывать двойное- вредное воздействие: а) через дестабилизированный организм матери; б) через прямое действие диоксина, который попадает трансплацентарно. Это особенно опасно, так как клетки плода находятся в стадии интенсивной дифференцировки. После рождения вредное влияние модет оказывать молоко матери, где при сравнительном исследовании биосред оказывается больше всего диоксина.

По нашему мнению диоксины отличает способность индуцировать не только широкий спектр клинических симптомов и признаков интоксикации, но и способность вызывать долгоживущие, рецидивирующие и/или отдаленные патологические состояния, которые проявляются спустя десятилетия после начала воздействия. В настоящее время становится очевидным, что к отдаленным медицинским последствиям воздействия диоксинсодержащих соединений относятся не только такие заболевания как саркома мягких тканей, не-Ходжкинская лимфома, лимфогрануломатоз (болезнь Ходжкина), хлоракне, острая кожная порфирия, опухоли органов дыхания, множественная миелома, рак предстательной железы, аутоиммунные дисфункции (отдельные

факты), но, в первую очередь, иммунологические, эндокринологические, нейрофизиологические, биохимические и цитогенетические эффекты, нарушения женской репродуктивной функции, пренатального и постнатального развития детей.

Кроме того, для отдаленных медицинских последствий воздействия даже микроколичеств диоксинов характерны разнообразные субклинические, часто скрытые дизадаптационные эффекты, которые определяют медицински значимое ухудшение здоровья, нарушения нормального развития, снижение умственной и физической работоспособности и создают предпосылки для возникновения в экспонированных популяциях различных заболеваний другой химической и не химической этиологии.

На основании проведенных на территории Вьетнама исследований и выявленных общих биологических закономерностей формирования сдвигов гомеосгаза у людей с разной степенью воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов показано, что на загрязненной территории формируется проявляющий эколого-генетическую активность диоксинсодержащий экотоксическяй фактор - ДЭФ. Эколого-генетическое действие ДЭФ характеризуется: - сдвигами медико-генетических показателей, регистрируемых среди когортных групп с разной степенью контакта с ДЭФ; - изменениями в состоянии хромосомного аппарата в клетках людей, подвергающихся воздействию ДЭФ.

Наблюдаемые эколого-генетические эффекты отдаленных последствий воздействия диоксина хорошо коррелирует с наблюдаемыми изменениями гомеостаза на разных уровнях (лимфоцитарная система, иммунный ответ, морфологические изменения кожных покровов, репродуктивная система, активность микросомных ферментов, метаболизм порфиринов и витаминов). Кроме того, методами кластерного анализа показаны изменения связи между цитогенетическими показателями и индексом состояния здоровья (1Ш) у людей из разных групп риска

экспозиции (рис.5.). Если у жителей контрольного района связь между 1HS и характеристиками клеточной активности достаточно далека, то в ГРЗ II с IHS связан кластер пролиферативной активности клеток и уже эти показатели связаны с проявлением повышенной рекомбиногенной активности соматических клеток. У людей из ГРЭ III интегральный показатель состояния здоровья больше связан с генетической компонентой клеточного ответа (г=0.946). Это позволяет полагать формирование новых уровней функциональной взаимосвязи в структуре гомеостаза людей из загрязненного района.

Разработаны основы эколого-генетических исследований населения. Они предусматривают проведение сравнительных исследований с целью получения эколого-генетической характеристики эффекта отдаленных медицинских последствий применения экотоксикантов на хромосомном, клеточном, организменном и популяционном уровне. Последовательность исследований включает общее эпидемиологическое обследование населения, вычленение выборки для медико-генетического анализа, проведение гекетико-токсикологических и токсико-генетичеких исследований среди выбранных групп населения.

Закономерности наблюдаемых на цитогенетическом уровне изменений выявляются при использовании специальных методических приемов и с применением нагрузочных тестов, и свидетельствуют о существенно большей чувствительности наследственного аппарата людей из загрязненного ДЭФ района, а также позволяют разграничивать людей, имеющих разные уровни индивидуальной чувствительности к воздействию подобных экотоксикантов.

А.

ГРЭ I Полтя связь I-Рмпоп г

О 0.2 04 06 OS I 1.2 И !.6 1.8

ИП72 11П96 КВЧ022 КБЧО% IHS

ь-

Б.

d Q.2 04 06 0.8 I 12 1.4 1.6 1.8

Расстояние

ГРЭИ Полна« с&язь I-Pearson i

0.3 0.5 0.7 0.9 1.1 13 1.5 J.7 1.9

И Л 72 ИП9& HIS КВЧ072 КВЧ096

D-

и

г

В.

0.3 0.5 0.7 0.9 М 1.3 1.5 1.7 1.9

Расстояние

ГРЭ ш Полная связь т

0 0.2 04 0.6 0.8 I 1.2 5.4 1.6 1.8

ИП72---■

КВЧО'2---1

-1

КВЧ096 -' }

ms------

0.2 0.4 0.6 0.8 1 1.2 1.4 1.6 1.8

Расстояние

Рис. 5. Результаты кластерного анализа связи показателей состояния здоровья и активности клетки (по Пирсону) в группах риска экспозиции: ИП - индекс пролиферации; КВЧО - клетки с высоким числом СХО; ШБ -интегральный показатель состояния здоровья

Научно-практическая реализация проводимых исследований подразумевает возможность прогнозирования отдаленных последствий воздействия диоксина и\или ДЭФ на основе скрининга больших популяционных групп в районах химических загрязнений.

Для населения Российской Федерации эта проблема составляет насущную необходимость, в связи с чем среди целей Федеральной целевой программы РФ от 5 ноября 1995 г. № 1102 помимо сокращения техногенного загрязнения природной среды диоксинами и диоксиноподобными токсикантами и минимизации их вредного воздействия на здоровье населения на территории РФ, провозглашены также разработка и создание системы социально-медицинских мероприятий по диагностике, профилактике и реабилитации здоровья населения.

Очевидно, что полностью избежать контакта человека с такими соединениями (к которым можно отнести также полихлорированные бифенилы, фурановые соединения, бактериальные токсины и т.п.) практически нереально, поэтому в современных условиях на первый план выходят паллиативные методы защиты населения: выявление индивидуумов с повышенной чувствительностью (например, к хлорированным бифенилам) и профилактика непосредственных и отдаленных эффектов путем ограничения контакта, введение специфических диет или даже медикаментозной или симптоматической профилактики (под строгим медицинским контролем).

ВЫВОДЫ

1. Научно обоснована актуальность решения проблемы эколого-генетической характеристики эффекта отдаленных медицинских последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов и охарактеризована патогенетическая значимость реализации биологически активных свойств диоксина при формировании эколого-генетических эффектов его экспозиции.

Показано, что после прямого полиапликационного воздействия на вьетнамское население диоксинсодержащих хлорфеноксигербицидов (Оранжевый агент, ОА, с плотностью применения 28 л/га и уровнем примеси 2,3,7,8-ТХДД от 3 до 50 ррш) и/или последующего контакта людей на протяжении жизненного цикла с местоспецифическим (сформировавшимся на зараженных территориях) диоксинсодержащим экотоксикологическим фактором (ДЭФ, остаточные уровни 2,3,7,8-ТХДД в пищевых продуктах/объектах природной среды около 70-814 нг/кг в годы войны и 0,2-0,9 (до 32, шах) нг/кг в настоящее время) возникают специфические м едико-биологически значимые эколого-генетические последствия.

2. Эколого-генетическая активность диоксинсодержащих экотоксикантов характеризуется:

- нарушениями медико-генетических характеристик: увеличением частоты встречаемости патологии репродуктивной функции, возрастанием числа детей с пороками развития (до 15 против 3 на 1000 родов в контроле), а также числа мертворождений (до 10-15 против 5-8 на 1000). Для молодых женщин, родившихся в годы войны и сразу после нее, вероятность частоты патологических исходов беременности значимо возрастает по сравнению с довоенным поколением;

- ослаблением функционального состояния оргзнизма, которое у женщин выражается в задержке на 3-5 лет наступления половой зрелости и нарушениях периодичности циклов (к 40% женщин), в отклонениях течения процессов беременности и родов с вероятностью ослабления функционального состояния рождающегося поколения;

изменениями в хромосомном аппарате клеток людей, подвергающихся воздействию ДЭФ: дестабилизацией и аномальным функционированием хромосомного аппарата; фрагментацией хроматина, как ранним проявлением апоптозной элиминации клеток.

3. Эколого-генетические последствия должны рассматриваться как составная часть многоуровневых изменений гомеостаза. Комплексными исследованиями- связей показателей характеристики эколого-генетических последствий с изменениями в лимфоцитарной системе, иммунном статусе, репродуктивной функции, в активности микросомньгх ферментов, метаболизме порфиринов и витаминов, а также с морфологическими изменениями кожных покровов в группах риска (с равновеликими уровнями экспозиции ОА и/или ДЭФ) установлено, . что у людей формируются новые вариабельные, многоуровневые характеристики

гомеостаза и возникают функциональные изменения, обусловленные как их генетической структурой, так и разной степенью воздействия факторов природной среды.

4. Разработан алгоритм эколого-генетических исследований населения. Он позволяет проводить сравнительный анализ и получать эколого-генетические характеристики эффекта отдаленных медицинских последствий контакта с диоксинсодержащими экотоксикантами на хромосомном, клеточном, организменном и популяционном уровне. Последовательность исследований включает общее эпидемиологическое обследование населения с целью формирования групп риска экспозиции, выделение среди групп риска выборки для медико-генетического анализа, проведение генетико-токсикологических и токсико-генетичеких исследований среди выбранных субпопуляций.

5. Системными исследованиями клеточных популяций установлены существенные изменения чувствительности к антропогенным нагрузкам клеток людей, экспонированных ОА и/или ДЭФ. Объективным маркером таких изменений (на примере лимфоцитарных клеток) является прирост доли сестринских хроматидных обменов (СХО), определяемой внешнесредовыми воздействиями.

Реализация эффекта на уровне присутствия в кровяном русле значительного числа лимфоцитов с повышенной частотой СХО (до 42% лимфоцитов), гипохромных эритроцитов, а также высокой частоты встречаемости эпителиоцитов слизистой ротовой полости с фрагментацией хроматина и другими аномалиями ядра может свидетельствовать о большей вероятности поражения систем и органов у экспонированных людей по сравнению с людьми, не имевшими контактов с ДЭФ, и о возможности передачи таких изменений в клеточных поколениях.

6. На цитогенетическом уровне выявлена специфическая дизадаптационная активность ДЭФ и продемонстрирован существенный вклад дизадаптационных изменений в дестабилизацию хромосомного аппарата жителей загрязненных районов.

Рассмотрена и представлена последовательность дизадаптационных изменений наследственного аппарата - от соматических рекомбинационных перестроек и образования микроядерных структур до ядерно-морфологических аномалий и фрагментации хроматина с переводом клетки к программируемой гибели (апоптозу).

Показано, что закономерности дизадаптационных изменений на уровне клетки выявляются при использовании специальных методических

приемов, что подразумевает разработку и применение нагрузочных тестов в практике эколого-генетических исследований населения загрязненных экотоксикантами районов.

7. Выявленные цитогенетические и ядерно-морфологические изменения позволяют разграничивать людей, имеющих разные уровни индивидуальной чувствительности к воздействию ДЭФ и/или других экотоксикологических факторов и могут быть реализованы в практике санитарно-гигиенических мероприятий.

8. Результаты, полученные при изучении эколого-генетических аспектов воздействия диоксинсодержащих экотоксикологических факторов на человека, позволяют создавать основы для разработки профилактических мер защиты населения от воздействия подобных факторов на наследственность. Для коррекции наблюдаемых изменений (в том числе хромосомной нестабильности) предлагается использовать адаптогенные и антимутагенные (антиоксидантные) препараты естественного происхождения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Активность эксцизионной репарации ДНК в лимфоцитах периферической крови у здоровых людей, при некоторых заболеваниях и их лечении. Тез. докл. на 5-м Всес. биохии. съезде //Киев: Наука. - 1986. - С. 287-288 (совм. с Москалевой Е.Ю., Порошенко Г.Г., Илюшиной H.A. и др.).

2. Участие процессов репарации ДНК в изменении частоты сестринских хроматидных обменов (СХО) при воспалительных заболеваниях //БЭБиМ. -1986, № 12. - С. 743-745 (совм. с Москалевой Е.Ю., Порошенко Г.Г., Илюшиной H.A. и др.).

3. Зависимость частоты сестринских хроматидных обменов от способности клеток репарировать повреждения ДНК. Тез. докл. на 5-м съезде ВОГиС. //М.: ВОГиС. - 1987. - С. 117-118 (совм. с Москалевой Е.Ю., Порошенко Г.Г., Илюшиной H.A. и др.).

4. Влияние природных биологически активных соединений на частоту сестринских хроматидных обменов в лимфоцитах периферической крови человека. Деп. ВИНИТИ, 3156-В от 12-05-S9 //М.: ВИНИТИ. - 1989. - 10 с. (совм. с Порошенко Г.Г., Осадчим В.Д., Смирновой Н.И. и др.).

5. Оценка генотоксичности кукумариозида в краткосрочных тест-системах. В кн.: Объем и методы генотоксической оценки и побочных эффектов

биологически активных веществ //J1. - 1989. - С. 91-92 (совм. с Танирбергеновым Б.Т., Шаровой Л.В.- и Др.).

6. Изучение возможности использования природных биологически активных соединений для снижения частоты спонтанных и индуцированных перестроек хромосом В кн.: Объем и методы генотоксической оценки и побочных эффектов биологически активных веществ //Л. - 1989. - С. 95-96 (совм. с Порошенко Г.Г., Смирновой Н.И., Мичуриной Т.Л.).

7. Антимутагенные свойства биоженьшеня. В кн.: Тр. ВНИИ биотехнологии //М. - 1990. - Т.1. - С. 88-91 (совм. с Мичуриной Т.Л., Смирновой Н.И., Порошенко Г.Г.).

8. Антимутагенное действие ЮС-15. В кн.: Тр. ВНИИ биотехнологии //М. -1990. - Т.1. - С. 92-95 (совм. с Порошенко Г.Г., Приходько А.З., Асташкиным Е.И.).

9. Изучение мутагенных и антимутагенных свойств разных образцов мумие. В кн.: Методич. и методол. пробл. генет. //Томск. - 1990. - С. 143-149 (совм. с Абилевым С.К., Смирновой Н.И., Порошенко Г.Г.).

10. Изучение антимутагенных свойств биоженьшеня на клетках млекопитающих и Erlich ascitis//БЭБиМ. - 1991. - №5. - С. 507-509 (совм. с Мичуриной Т.Л., Смирновой Н И., Александровой И.В., Порошенко Г.Г.).

11. Предварительные результаты анатиза нарушений репродуктивной функции у жителей южного Вьетнама, проживающих на территориях с разной степенью загрязнения экотоксикантами, Тез. докл. на Конф. Всес. Токсикол. об-ва //Л. - 1991. (совм. с Бураковым В.В., Румаком B.C.). - С. 122.

12. Cytogenetic Study of Peripheral Blood Lymphocytes in the South Vietnam Population Living in the Villages with Different Spraying History with Agent Orange //Organohaiogen Compounds (USA). - 1991. - p. 250 (with Bourakov V., Huynh T. Kim Chi, N. Q. An, Roumak V.).

13. Цитогенетические исследования лимфоцитов периферической крови жителей южного Вьетнама, проживающих в деревнях с различной степенью загрязнения диоксином. Сб. "Тропцентр-91" //М.: Юнифир. - 1992. - с. 290294 (совм. с Бураковым В.В., Х.Т. Ким Чи, Н.К. Ан, Румаком B.C.)

14. Assessment of exposure to Agent Orange and related health outcomes in rural South Vietnamese Communities. 11-nd Eur. Conf. on Ecotoxicology, Netherlands. Abstr. book //Amsterdam. - 1992 (with Roumak V., Poznyakov S., An N.Q., Thu T.X., Sofronov G.A., Kountzevitch A.D.).

15. 2,3,7,8-Тетрахлордибензо-п-диоксин - гормоноподобный сулерэкотоксикант. I. Молекулярные, клеточные и системные механизмы биологического действия //Ж. Экол. Химии. - 1993. - N 3. - с. 189-199 (совм. с Позняковым

С.П., Румаком B.C., Нгуен Куок Ан, Чан Суан Тху, Софроновым Г.А., Кунцевичем А.Д.).

16. 2,3,7,8-Тетрахлордибензо-п-диоксин - гормоноподобный суперэкотоксикант. II. Некоторые методологические проблемы экотоксикологии диоксина //Ж. Экол. Химии. - 1993. - N 3. - с. 200-212 (совм. с Позняковым С.П., Румаком B.C., Нгуен Куок Ан, Чан Суан Тху, Софроновым Г.А., Кунцевичем А.Д.).

17. Genetico-Toxicologica! Studies in the South Vietnam. I. Sister Chromatid Exchanges Frequencies in Cultured Peripheral Blood Lymphocytes of Song Be

' Province Inhabitants. "Herbicides in War: The Long Term Effects on Man and Nature", 2nd Intn. Symp., 15-18 November, 1993, Hanoi, Vietnam. Scientific Reports //Hanoi. - 1994. - pp. 387-392 (with Huynh Thi Kim Chi, Nguyen Quok An, Roumak V.S.).

18. Genetico-Toxicological Studies in the South Vietnam. 2. Preliminary Results on the SCE Induced by Mitomycin С in the Lymphocytes of South Vietnamese Peasants In Vitro //Ibid. - p. 392-393 (with Nguyen Quok An, Roumak V.S.).

19. Genetico-Toxicologica! Studies in the South Vietnam. 3. Reproductive Function Disturbances in the South Vietnam Rural Inhabitants //Ibid. - p. 394-397 (with Huynh Thi Kim Chi, Nguyen Quok An, Roumak V.S.).

20. Meiotic Disturbances in Locustes from Regions of South Vietnam Treated by Agent Orange "Herbicides in War: The Long Term Effects on Man and Nature", 2nd Intn. Symp., 15-18 November, 1993, Hanoi, Vietnam. Abstr. book //Hanoi. -¡993. - p. 229-231 (with Bourakov V.V., Roumak V.S.).

21. Перспектива разработки методов выявления и характеристики субклинических компонент синдрома отдаленных медицинских последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов //Ж. Экол. Химии. - 1994. - направлено в печать (совм. с Румаком B.C., Позняковым С.П., Софроновым Г.А.).

22. Применение гербицидов в военных целях. Отдаленные последствия воздействия на природу и человека //Ж. Экол. Химии. - 1994. - 3, N 1. - с. 85-S7 (совм. с Софроновым ГА., Румаком B.C.).

23. Генотоксикологические исследования отдаленных медицинских последствий воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов в южном Вьетнаме. Цитогенетические параметры культивированных лимфоцитов периферической крови у сельских жителей //Ж. Экол. Химии. - 1994. - в печати (совм. с Румаком B.C., Софроновым Г.А.).

24. Исследование взаимосвязи между цитогенетическими параметрами культивируемых лимфоцитов и показателями иммунитета при проявлении синдрома отдаленных медицинских последствий у людей, подвергшихся в

прошлом воздействию Оранжевого агента. "Химия и здоровье", 2 сессия РАМН //Москва. - 1994, стенд, сообщение.

25. Изменения цитогенетических показателей лимфоцитов человека при непрямом контакте с Оранжевым агентом на загрязненных территориях в южном Вьетнаме /Дам же, стенд, сообщение (совм. с Кожевниковой Г.Н., Румаком B.C.).

26. Разработка подхода к экогенетической оценке отдаленных медико-биологических последствий воздействия диоксинсодержаших экотоксикантов //Там же, стенд, сообщение (совм. с Румаком B.C., Софроновым Г.А.).

27. Цитогенетические исследования отдаленных медико-биологических последствий воздействия диоксинсодержаших экотоксикантов в южном Вьетнаме //Там же, стенд, сообщение.

2S. Disadaptive effects in humans after exposure to chemicals containing dioxin //Organohalogen Compounds (Japan). - 1994. - v. 21. - pp. 379-381 (with Roumak V.S., Poznyakov S.P., An N.Q., Sofronov G.A.).

29. Method for revealing and characterizing the cytogenetical component of the long term medical consequences of the dioxin containing chemicals application //Organohalogen Compounds (Japan). - 1994. - v. 21. - pp. 369-372 (with Roumak V.S.).

30. Alterations in human lymphocytes cytogenetic parameters after indirect contacts with Agent Orange on the contaminated territories //Organohalogen Compounds (Japan). - 1994. - v. 21. -pp. 365-36B (with Nguyen Quoc An, Roumak V.S.).

31. The relationships between lymphocytes growth rates, sister chromatid exchanges (SCE) and immunity parameters in persons with manifestation of Agent Orange long-term medical consequences syndrome //Organohalogen Compounds (Japan). - 1994. - v. 21. - pp. 373-377 (with Nguyen Quoc An, Roumak V.S.).

32. Genetico-toxicological studies of dioxin-containing ecotoxicants long-term health consequences in the South Vietnam. Cytogenetic parameters of cultured peripheral blood lymphocytes of rural inhabitants //Organohalogen Compounds (Japan). -1994. - v. 21. - pp. 383-388 (with Roumak V.S., Huynh Thi Kim Chi, Nguyen Quoc An).

33. Изучение антимутагенности биоженьшеня //Известия РАН, Сер. биол. -1994. - 1. - С. 48-55 (совм. с Салиховой Р.А., Фоминой М.М., Порошенко ГГ.).

34. Development of Ecogenetic Aspects for the Assay' of Long-Term Medico-Biological Consequences of the Agent Orange Exposure //Organohalogen

Compounds (Canada). - 1995. - v.25. - pp. 155-159 (with Roumak V.S., Nguyen Quok An, Sofronov G.A.).

35. Application of Micronucleus Test for Indication of the Environmental Factors Clastogenic Activity on the Territory of Song Be Province (South Vietnam) //Organohalogen Compounds (Canada). - 1995. - v.25. - pp. 131-135 (with Zhuleova L.Yu., Huynh Thi Kim Chi, Roumak V.S.).

36. Registration of Micronuclei in the Human Buccal Mucosa Cells on the South Vietnam Territory //Organohalogen Compounds (Canada). - 1995. - v.25. - pp. 125-130 (with Zhuleova L.Yu., Huynh Т.К. Chi, Hoang A. Tuyet, Roumak V.S.).

37. Изменения распределения типов повреждений ядра в клетках жителей Южного Вьетнама при воздействии диоксинсодержащих факторов окружающей среды //Генетика. - 1995. - направлено в печать (совм. с Жулевой Л.Ю., Румаком B.C.).

38. Регистрация микроялер в слушивающихся клетках слизистой ротовой полости человека на территории Южного Вьетнама //Генетика. - 1995. -направлено в печать (совм. с Жулевой Л.Ю., Румаком B.C.).

39. The experience of investigations on ecotoxicologic pressure on rural population of South Vietnamese in the region sprayed with Agent Orange //Organohalogen Compounds (Austria). - I996.-V.30,- PP.8S-90.(with Roumak V.S., Poznyakov S.P., Sofronov G.A.).

40. Retrospective epidemiological data on reproductive events registered in South Vietnam villages //Organohalogen Compounds (Austria). - 1996. - V30.-P.340-343. (with Huynh Thi Kim Chi, Roumak V.S.).

ríónmVimo к печати Ьк;п.

Формат 6<) xH4'/it_0(п.см н.д.З_~

'lujio»p;ujMi* ИМсдЛ