Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Диагностика специфической сенсибилизации и функционального состояния мембран лейкоцитов при аллергических заболеваниях у детей с использованием флуоресцентных зондов

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

ЛЕНИНГРАДСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ ПЕДИАТРИЧЕСКИЙ Л\ЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КИРИЛЛОВ

Михаил Александрович

УДК: 616.155.3-07:616-056.3-053.2:547.6

ДИАГНОСТИКА СПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЕНСИБИЛИЗАЦИИ И ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЯХ У ДЕТЕЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ФЛУОРЕСЦЕНТНЫХ ЗОНДОВ

14.00.09 — ПЕДИАТРИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ЛЕНИНГРАД 1991

)

Работа выполнена на кафедре детских болезней № 3 Ленинградского ордена Трудового Красного Знамени педиатрического медицинского института и в аллергологическом отделении детской городской больницы № 1 Ленинграда.

Научный руководитель — доктор медицинских наук, профессор И. М. ВОРОНЦОВ.

Официальные оппоненты:

¡заслуженный деятель науки РСФСР, доктор медицинских наук, профессор К. М. СЕРГЕЕВА;

доктор медицинских наук, профессор А. В. ПАПАЯН.

Ведущее учреждение: ВНИИ пульмонологии МЗ СССР.

Защита состоится « 1992 г. в часов на

заседании специализированного'ученого совета К.084.12.02 Ленинградского ордена Трудового Красного Знамени педиатрического медицинского института (¡94100, Ленинград, ул. Литовская, д. 2).

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке института.

Автореферат разослан «

ЪО »с^Рк&^-г т£ г.

Ученый секретарь специализированного совета,

доцент А. Я. ТРУБИНА

Актуальность проблемы. Аллергические заболевания занимают одно из ведущих мест среди проблем современной медицины. По дан-рт.жмьЮЗ по распространенности они находятся на третьем месте. Значительно распространена аллергическая патология и среди детой (Сгудениккн М.Я., Соколова Т.С., 1986). Главной задачей аллерго-диагностики является поиск причинно-значимых аллергенов, поскольку элкминационные мероприятия занимают ведущее место среди других методов лечения. Традиционные методы аллергодиагностики - провокационные пробы - имеют множество противопоказаний, а иногда представляют опасность для здоровья и даже жизни больного. Поэтому лабораторные методы аллергодиагностики, практически не имешие противопоказаний, нередко выступают на первый план при обследовании детей с аллергическими заболеваниями.

Несомненный практический интерес представляет выявление с помощью лабораторных методов аллергодиагностики причинно-значимых аллергенов, а также подбор в лабораторных условиях оптимальной терапии для каждого больного.

В последнее время широко развивается учение о конституционально обусловленных основах аллергических реакций, связанных со строе:;1,тем и состоянием клеточных мембран (Вельтищев Ю.Е., Святки-на О.Б., 1983; Нагоне I et al, 1986; Plaut Ы. et al, 1986). В связи с этим большой интерес представляет изучение в лабораторных условиях характера реагирования клеточных мембран на неспецифические раздражители у здоровых и детей с аллергическими заболеваниями.

Цель работы: разработать комплексный флуоресцентный метод выявления аллергических конституционально обусловленных мембранных особенностей лейкоцитов периферической крови, а также лабораторных тестов определения спектра сенсибилизации у детей с аллергическими заболеваниями.

Для решения поставленной цели решались следующие задачи:

1. Разработать флуоресцентные методики определения функционального состояния клеточных мембран и концентрации ионов кальция в цитоплазме клеток периферической крови.

2. Исследовать зависимость полученных результатов от возраста больных, их пола, отягощенной по аллергическим заболеваниям наследственности, клинических проявлений заболевания, периода заболевания, доказанности причинно-значимых аллергенов по результатам анамнеза и провокационных проб.

3. Составить рекомендации по внедрению разработанных мето-

дик в комплексный план обследования больных детей в условиях специализированных аллергологичаских отделений и диспансеров.

Научная новизна и практическая ценность работа. Впервые разработаны оригинальные лабораторные флуоресцентные методики определения конституционально обусловленных мембранных особенностей и чувствительности клеток периферической крови к неспецифическим раздражителям - ацзтилхолину и гистамину - с помощью мембранного зонда МБА (A.c. № 1380732) и к аллергенам цутен определения изменения концентрации внутриклеточных ионов кальция (A.c. № 1691751).

Выявлены закономерности, отражающие связь частоты положительных результатов лабораторных методов диагностики аллергических заболеваний, а также их интенсивности, с отягощенностью семейного анамнеза, периодом заболевания, клиническими проявлениями респираторного аллергоза и пищевой аллергии.

Вышеизложенное позволяет в значительной мере повысить результативность лабораторного обследования детей с аллергическими заболеваниями, а также определять по степени чувствительности клеточных мембран к неспецифическим раздражителям этиопатогенети-ческие механизмы этих заболеваний.

Апробация и внедрение результатов. Основные положения работы доложены по заседании кафедры детских болезней № 3 Ленинградского ордена Трудового Красного Знамени педиатрического медицинского института в 1991 г.

По материалам диссертации опубликовано 2 статьи, гзэисы на Всесоюзной конференции, поданы 2 заявки на изобретение, по которым получены авторские свидетельства.

Результаты работы внедрены в практику аллергологического отделения и диспансера детской городской больницы № I и в практику межрайонных аллергологических кабинетов Ленинграда.

Основные теоретические положения, практические рекомендации и выводы использованы в учебном процессе при преподавании цикла аллергологии студентам 6 курса ЖМИ, а также при чтении лекций слушателям Щ£ ЛШИ.

Основные положения, выносимые на защиту:

I. Предложенные нами способы диагностики аллергии с немощью определения повышения концентрации внутриклеточных ионов кальция и изменения функционального состояния мембран лейкоцитов периферической крови на аллергены и медиаторы анафилаксии могут быть использованы при лабораторной диагностике аллергических заболе-

ванкй.

2. Определение сенсибилизации организма к ппаевым аллергенам и медиаторам анафилаксии цутем измерения содержания внутриклеточного кальция на зависит от механизма иммунного ответа, по которому развивается эта реакция.

3. Выявление конституционально обусловленных мембранных особенностей с помощью флуоресцентного зонда МВД позволяет говорить о различных зтиопатогенегических механизмах аллергических заболеваний, которые'обуславливает назначение оптимальной терапии для каждого больного.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, 5 глав, выводов и практических рекомендаций. Работа изложена на 142 страницах машинописи, из которых основной текст изложен на 78 страницах. Диссертация иллюстрирована 28 таблицами и 3 рисунками. Библиографический указатель включает 100 отечественных и 173 зарубежных источника.

Материалы и методы исследования. Работа выполнена в период с 1988 по 1991 гг. на базе адлергоцентра детской городской больницы № I, клиники детских болезней № 3 ЛПШ и института Цитологии АН СССР.

Клинико-аллергологические и лабораторные методы применялись при обследовании 199 детей в возрасте от 7 мес, до 15 лет с различными клиническими проявлениями пищевой аллергии и респираторного аллергоза. Контрольная группа состояла из 61 ребенка, поступивших в больницу для проведения плановых хирургических операций или находящихся там по поводу неврологических или гематологических заболеваний и не имевших ни б анамнезе, ни на момент обслудования проявлений аллергических заболеваний.

Для выявления причинио-значимых аллергенов кроме обшеприня-тях методов (сбор анамнеза, анализ пищевых дневников, проведение элиминационно-провокациовдше проб и ингаляционных провокационных проб, постановка скерификационных и вцутрикогшях проб с аллергенами, постановка ЕА-Бо;, ШБ0! и реакции дегрануляция тучных клеток крысы) применялись следующие виды исследований:

1) определение функционального состояния мембран лейкоцитов периферической крови в ответ на действие аллергенов и неспецифических раздражителей с помоиьга флуоресцентного зонда МБА. (метод предложен нами, авторское свидетельство № 1380732);

2) изменение содержания внутриклеточного кальция в лейкоцитах периферической крови, определяемого флуоресцентным красите-

лем Q-uia-2A.M, после их инкубации с аллергенами и медиаторами анафилаксии (метод предложен нами, авторское свидетельство № I69I75I).

Использование лейкоцитов в качестве клеток - мишеней аллергических реакций ±а vitro правомочно, так как по данным ряда исследователей цитофильный JgS обнаружен на 75% эозинофилов и нейтрофилов больных бронхиальной астмой с гиперэозинофилией и повышенным уровнем сывороточного JgB (Deasaint J.-P., Oapron A., 1988j Leritz et ai, 1987)0 На этих клетках показано, что связывание ¿"б® - рецепторов на поверхностной мембране активирует серин-протеазу, фосфолипазу С, ыетилтрансферазы и аденилатциклазы, приводя к инициации цикла фосфотидилиноэитола и транзитному повышению метилирования фосфолипидоз и увеличению внутриклеточного цАМФ. Мобилизация внутриклеточного кальция - решающий сигнал для опосредованной J&S - активации - обнаруживается спустя 5 секунд после провокации аллергеном и является самым ранним внутриклеточным событием.

Анализ полученных данных проведен с помощью методов вариационной статистики. Достоверность различий оценивали с применением параметрических и непараметрических критериев.

Результаты исследования и обсуждение.

Обследовано 199 детей в возраст? от 7 мес. до 15 лет (в возрасте до 3-х лет - II человек, от 3 до 7 лет - 46 человек, от 7 до 10 лет - 61 человек и старше 10 лет - 81 человек). Среди обследованных было 118 мальчиков и 81 девочка. Для обследования отбирались дети с клиническими проявлениями пищевой аллергии с указаниями в анамнезе на непереносимость одного или нескольких следующих пищевых продуктов: коровьего молока, белка куриного яйца или рыбы, а также дети с респираторным аллергозом с указаниями в анамнезе на возникновение обострения заболевания в ответ на действие неспецифических раздражителей - холодного воздуха, резких запахов, физической нагрузки, отрицательных эмоций и т.д. Отягощенная аллергическими заболеваниями наследственность отмечена у 65,3% детей, патологическое течение беременности у матерей больных -в 33,7%, патологическое течение родов - в 3,5%, недоношенность -в 7,1%, раннее искусственное вскармливание - в 64,3f0.

Распределение обследованных детей по нозоологическим формам респираторного аллергоза представлено ниже. Несмотря на преобладание атопической формы заболевания, паторецепторный механизм встречался у 89 детей (52,6%) с аллергическими поражениями дыха-

тельных путей.

Распределение детей по формам респираторного аллергоза:

1. Бронх, астма, атоническая - 44 чел.

2. Еронх. астма, атоническая +• паторецепторная - 77 чел.

3. Аллерг. трахесбронхит, атонический - 36 чэл.

4. Аллерг. трахеобронхит, атонический +

+ паторецепт. - чел.

5. Поллиноз, риноконьюнктивальный синдром - 21 чел.

Среди обследованных детей проявления пищевой аллергии отмечались у 113 человек (об,®): поражения кожи - у 68 детей, поражение кожи и жачудочно-кишечного тракта - у 19 детей, проявления пищевой аллергии в анамнезе - у 26 детей. У 67 детей поражение * кожи проявлялось нейродермитом, у 17 человек - экземой, у 3 человек - отеками Квинке. Поражение органов зкелуцочно-кишечного тракта проявлялось гастродуоденитш у 12 детей (у 6 из них отмечалась также дискшезия келчевыводяших путей), гастритом - у 3 детей, диспептическими нарушениями - У 4 детей. Диагноз поражения органов желудочно-кишечного тракта был подтвержден инструментальными методами (фиброгастродуоденоскопия, желудочное и дуоденальное зондирования) у 15 детей, у остальных диагноз ставился на основании анамнеза и ¡шшкко-лабораторного исследования.. Цужно подчеркнуть, что гиподиагноегика поражений органов желудочно-кшеч-ного тракта, а, возможно, и других органов и систем, обусловлена несовершенством применявшихся методов обследования и установившимися стереотипами постановки диагноза. Так, у части больных, у которых поражение кожи фигурировало в диагнозе как единственное проявление пищевой аллергии, при лабораторном обследовании выявлены нарушения мочевого осадка и/или копрогратаы, которые в большинстве случаев исчезали при переводе ребенка на гилоаллергенную диету без применения медикаментозных методов лечения.

Ингаляционные провокационные пробы с медиаторами анафилаксии - ацетилхолином и гистаминоы - бши проведены у 74 детей. Положительные реакции на ацетилхолш отмечались у 34 детей (17,3$), на гистамин - у 19 дегей (9,5%). В момент проведения ингаляционных провокационных проб все обследованные находились в состоянии ремиссии и не получали бронхорасширяших препаратов. Проба на физическую нагрузку, проведенная на велоэргометре, была положительная у 2 детей (.1%).

Реакция дегрануляции тучных клеток крысы с аллергенами коровьего молока, белка куриного яйца и трески проводилась у 69 де-

тей с пищевой аллергией. Чаее всего встречалась сенсибилизация к белку куриного яйца - в 76,8% и трески - в 7а,А%, сенсибилизация к аллергену коровьего молока отмечалась в 66,рдзг (использовались наборы шведской $ирмы "ФАДЕБАС") с пишевыми аллергенами был поставлен у 25 детей: положительная реакция на аллерген коровьего молока отмечалась в 28$, на белок куриного яйца - в 48$, на треску - в 52%. Уровень общего о^в , оцененный с помощью МВТ , был повышен у 81 ребенка из 103 обследованных (возрастные нормы приводятся в руководстве к набору для определения сывороточного ¿еВ ).

При обследовании детей с аллергическими заболеваниями большее внимание уделялось старшей возрастной группе (дети старше трех лет составили 94,5$ ср^си обследованных больных). У маленьких детей при относительно узком круге получаемых продуктов выявить причинно-следственные связи между приемами определенного вида пиши и возникновением клинических симптомов ее непереносимости в большинстве случаев затруднения не вызывает в отличие от старших детей, спектр пишевой сенсибилизации у которых гораздо более широк. Учитывая, что повышенная реактивность на неспецифические раздражители появляется, как правило, в результате развития аллергического заболевания, в возрасте до трех лет нам почти не встретилось детей с паторецепторньм механизмом заболевания.

В таблицах I и 2 представлена частота положительных результатов лабораторных методов диагностики пишевой сенсибилизации и повышенной чувствительности клеток периферической крова к неспецифическим раздражителям у детей без аллергических заболеваний, а также у детей с доказанной провокационными пробами непереносимостью молока, белка куриного яйца, рыбы и у детей с пагорецеп-торной формой респираторного аллергоэа.

Показана высокая специфичность теста определения изменения содержания внутриклеточного кальция в гранулоцитах периферической крови при определении сенсибилизации к пишевым аллергенам: частота положительных результатов на аллерген коровьего молока составила 91,7%, белка куриного яйца - 90,5%, трески - 88,9%. С помощью мембранного зонда МВД. нам не удалось получить достоверных различий в частоте положительных реакций на пищевые аллергены между группами детей с пишевой аллергией и контрольной группой детей. Результаты, полученные другими исследователями (Косников В.В., 198&) при использовании флуоресцентного зонда ДСМ, когда удалось зарегистрировать изменения мембран лейкоцитов после их

Различия в частоте положительных результатов лабораторных тестов .диагностики гошевой сенсибилизации у больных с доказанной пищевой аллергией и у детей без пишевой

аллергии

Название реакции

Аллерген, с которым проводилось исследование

коровье молоко

белок куриного яйца

2

треска

Изменение содержания внутриклеточного кальция

12

91,7%

18

5,6%

42

90,5%

43

4,76

р <0,001

р< 0,001

27

88,9% р с 0,01

28

Изменение (функционального состояния клеточных мембран

3

66,7%

4

25%

15

33,3^

29 3155

р> 0,05

р> 0,05

742,9£ •0,05

Условные обозначения: I - дети с доказанной провокационными пробами пииевой аллергией к данному аллергену; 2 - дети без пищевой аллергии (контрольная группа); к - количество обследованных; ч - частота положительных результатов,

контакта с аллергенами, позволяют предположить, что зонд МВД, относящийся к "первому поколению" мембранных зондов, способен зарегистрировать только значительные изменения фосфалипидного состава цитоплазм этической мембраны, в то время как аллергены не вызывают такой массивной реакции. По-видимсму, использование синтезированных в последнее время незаряженных флуоресцентных зондов, к которым относится ДСМ и риодипин (Белевич Г.В. и др., 1989), позволит рекомендовать метод флуоресцентных зондов для диагностики спектров сенсибилизации у больных с аллергическими заболеваниями.

Определение чувствительности ¡слеток периферической крови к пищевым аллергенам и медиаторам анафилаксии, произведенное путем измерения содержания внутриклеточного кальция, а также определение повышенной чувствительности этих клеток к неспецифиче-скш раздражителя!.?, обнаруженное с помощью флуоресцентного мемб-

2

5

Таблица 2

Различия в частоте положительных результатов лабораторных тестов диагностики неспецифической гиперреактивности клеточных мембран у детей с паторецепторной формой респираторного аллергоза и у детей без аллергических

заболеваний

Название реакции Медиаторы анафилаксии

ацетилхолин гистамин

I 2 I 2

Изменение содержания внутриклеточного кальция к ч 47 83% Р ^ 45 4,4% 0,001 44 88,6% р ^ 45 6,7?6 0,001

Изменение функционального состояния клеточных мембран к ч 24 83,3% Р 40 7,5% 0,001 25 56% Р ^ 40 7,5% 0,001

Условные обозначения: I - дети с паторецепторной формой респираторного аллергоза; 2 - дети без аллергических заболеваний (контрольная группа); к - количество обследованных; ч - частота положительных результатов.

ранного зонда, оказались достаточно специфичными, о чем можно судить по высокой достоверности различий в частоте положительных результатов реакций у детей с аллергическими заболеваниями и у детей контрольной группы (во всех случаях р 0,001).

Проведенные исследования не позволили выявить достоверных различий в частоте и интенсивности положительных результатов используемых тестов в зависимости от пола, возраста больных, а также отягощенной по аллергическим заболеваниям наследственности, что позволяет говорить о высокой универсальности предложенных нами методов. Однако, резкоположительные реакции (30% и более) на пишевые аллергены и медиаторы анафилаксии, полученные при исследовании содержания внутриклеточного кальция, достоверно чаше встречались у мальчиков (р ^ 0,04).

При обследовании детей с аллергическими заболеваниями с помощью измерения содержания внутриклеточного кальция в ответ на действие медиаторов анафилаксии нами выявлено достоверное увеличение частоты резкоположительных реакций во время обострения рес-

пираторного аллергоза, что согласуется с данными ряда исследователей (Парцалис Е.М., 1983; Терлецкая Р.Н., Зубовский Т.А., 1986; Biscatrey A.B. et а1,1985 ). В то же время методом флуоресцентных зондов не обнаружено различий в частоте и интенсивности положительных реакций на ацетилхолин и гистамин в разные периоды заболевания. По-видимому, некоторые клеточные реакции, имеющие место при патологических состояниях, способны только к качествен-нш изменениям, а некоторые - и к количественным, по сравнению со здоровыми детьми.

При проведении исследований у детей с наличием паторецептор-ной формы респираторного аллергоза при указаниях в анамнезе на реакции на неспецифические раздражители нами были получены две группы больных, у которых используемые лабораторные методы выявили реакцию только на один из медиаторов анафилаксии. Большее количество этих детей обследовано в период ремиссии (р <£ 0,001). В группе с положительной реакцией на ацетилхолин чаше представлены дети с отягощенной по материнской линии наследственностью (р 0,02), в анамнезе у этих детей преобладают сведения об обострении заболевания при физической нагрузке (р 0,04). У детей с полоиительной реакцией на гистамин достоверных различий по анамнестическим реакциям на неспецифические раздражители получено не было.

Многие исследователи отмечают взаимосвязь клинических проявлений пишевой аллергии и результатов лабораторных методов диагностики пишевой сенсибилизации (Захидов Ю.В. и др., 1986; Студе-никин М.Я., Соколова Г.С., 1986). Обследованные нами больные были разбиты на две группы в зависимости от локализации клинических проявлений пищевой аллергии: I - поражение коки; 2 - поранение кожи и ЖКТ. Почти все дети имели сопутствующий респираторный аллергоз, обусловленный битовой и/или пыльцевой сенсибилизацией. Выявлено достоверное увеличение частоты положительных реакций по увеличению концентрации внутриклеточного кальция с интенсивностью 20-29% на аллерген белка куриного яйца у детей с сочетанным поражением кожи и ЖТ. На аллергены коровьего молока и трески таких различий получено не было, что позволяет предположить в последних случаях наличие другого механизма реагирования.

При сравнении частоты положительных реакций по содержанию внутриклеточного кальция на аллерген белка куриного яйца и медиаторы анафилаксии от уровня обшего Jg3 нами были выявлены следующие закономерности (см.таблицу 3):

Таблица 3

Взаимосвязь положительных реакций грацулоцитов периферической крови на аллергены и лимфоцитов на медиаторы анафилаксии с уровнем общего ^в

Раздражитель Больные с нормальным уровнем JgE Больные с повышенным уровнем JgSi Достоверность различий

Белок куриного яйца 3/13х II/18 р ^ 0,001

Ацегилхолин 6/9 11/31 р 0,05

Гистамин 6/9 11/31 р 0,05

х - знаменатель - общее количество больных; числитель - количество больных с положительными реакциями.

1) положительные реакции на аллерген достоверно чаще встречаются у детей с повышенным уровнем обшего JgS ;

2) положительные реакции на медиаторы анафилаксии достоверно чаше встречаются у детей с нормальным уровнем общего JgB .

Приведенные данные еще раз подчеркивают наличие гетерогенности этиопатогенетическкх механизмов аллергических заболеваний.

Повышение содержания внутриклеточного кальция в ответ на действие специфических и неспецифических раздражителей в лейкоцитах периферической крови отмечено не только в среде, содержащей ионы кальция, но к в бескальциевой среде (таблица 4), что свидетельствует о вовлечении в ответ на стимулы не только трансмембранного потока кальция, но и его мобилизации из внутриклеточных депо (митохондрий, саркоплазматического ретикулума и т.д.), что отмечалось и в литературе (Гущин 'Л.С., Зебрев А.И., 1987; Ishisaka Ш. et al, 1987). Появление положительных реакций на различные стимулы в бескальщевой среде при отрицательных результатах в среде, содержащей калыдай, не совсем понятно, но есть экспериментальные работы, в которых показано, что удаление мембранных ионов кальция с тучных клеток повышает их чувствительность к различным активаторам (Гущин И.С., Зебрев А.И., 1987).

Ншш данные свидетельствуют о том, что кальциевому гомеоста-зу принадлежит одно из ведунах мест в возникновении и реализации патогенетических механизмов аллергических заболеваний. Под воздействием аллергенов происходят изменения на клеточном уровне, которые характеризуютск повышением трансмембранного потока каль-

Таблица 4

Сопоставление частоты положительных реакций лейкоцитов периферической крови на аллергены и медиаторы анафилаксии при проведении исследований в кальциевой и бескальциевой средах

Раздракитель

аллерген ацетилхолин гистамин

+к/+шх 11/1 6/2 8/3

+К/-Ш П/Ю 6/4 8/5

-К/-Ш 15/9 11/9 8/7

-К/+Ш 15/6 11/2 8/1

х - К - кальциевая среда; Ж - бескальциевая среда; (+) -полгантельная реакция; (-) - отрицательная реакция.

ция и его мобилизацией из внутриклеточных депо. Увеличение содержания внутриклеточного кальция не сопровоидается адекватным его выходом из клетки. Одновременно с повышением интрацеялшярной концентрации ионов кальция изменяется уровень циклических нукле-отидов, и как компенсаторный процесс в условиях избытка ионизированного кальция происходит уменьшение количества и снижение функциональной активности В -адренорецепторов (Чучалин А.Г., 1987). Синдром гиперреактивности различных органов и тканей, характерный для аллергических заболеваний, также имеет материальный субстрат, который раскрывается в дисбалансе кальциевого го-меостаза, что показано нами на лимфоцитах периферической крови при их инкубации с медиаторами анафилаксии.

Разработка лабораторных методов диагностики реакций на неспецифические раздражители вызывает большой интерес исследователей и практических врачей еше и потому, что имеются данные, согласно которым положительные реакции на неспецифические раздражители у больных с аллергическими заболеваниями не ограничиваются, дыхательнши путями, а характерны для многих органов и тканей (Нелепа м.,1. вЪ а1, 1982). Наши данные подтверждают эти предполо-. жения, так как при-исследовании реакции лимфоцитов периферической крови на ацетилхолин и гистамин с помощью мембранного зонда выявлены значительные различия в частоте положительных реакций у больных с респираторным аллергозоы с нормальными анализами мочи и больных с салурией: положительная реакция на ацетилхолин выявлена

соответственно у 68,4% и 10больных (р ¿1 0,006); реакция на гистамин - у 42,1% и 10056 больных (р 0,001), что еще раз подтверждает возможность существования повышенной реактивности на неспецифические раздражители многих органов и тканей больных аллергическими заболеваниями, а также и больных с другой патологией, гак как повышенная реактивность на неспецифические раздражители является одной из причин нестабильности клеточных мембран, что макет наблюдаться при заболевании почек у детей (Наумова В.И., Ситников В.П., 1987).

Таким образа/, предлагаемый для использования в повседневной аллергологической практике комплекс флуоресцентных методов лабораторной диагностики аллергических реакций на аллергены и медиаторы анафилаксии и состоящий из реакции определения изменения концентрации внутриклеточного кальция с помощью красителя 0.и1д-2А15 и функционального состояния мембран лейкоцитов периферической крови с помощью мембранного зонда, достаточно прост, информативен и доступен для внедрения в специализированной лаборатории.

ВЫВОДЫ

1. Предложенные нами тесты лабораторной диагностики аллергических заболеваний (определения изменения содержания внутриклеточного кальция и определения функционального состояния клеточных мембран) достаточно просты и доступны для использования в аллергологической лаборатории.

2. Использование реакции определения изменения содержания внутриклеточного кальция позволяет выявить пклевую сенсибилизации к основным пищевым аллергенам (молоко, яйцо, рыба) с частотой более 88,9%, а повышенную чувствительность к медиаторам анафилаксии - с частотой более-83%.

3. Определение функционального состояния клеточных мембран с помощь» флуоресцентного зонда позволяет выявить их гиперреактивность на ацетилхолин в 83%, на гистамин - в 56$.

4. Выявлена зависимость частоты положительных результатов лабораторных методов диагностики аллергических заболеваний от периода заболевания (учащение и увеличение интенсивности в период обострения), клинических проявлений пищевой аллергии (возрастание частоты положительных: результатов у детей с сочетаниям поранением кожи и желудочно-кишечного тракта).

о. Лабораторные методы диагностики аллергических заботева-

ний могут быть использованы для прогнозирования реакций на неспецифические раздражители и на пишевые продукты, с которыми ребенок ранее непосредственно не контактировал.

6. Повышение содержания внутриклеточного кальция под влиянием пишевых аллергенов чаща регистрировалось у больных с повышен-ныл уровнем JgB , а под влиянием медиаторов анафилаксии - у больных с нормальным уровнем JgB , что говорит об универсальности кальциевого ответа при разных механизмах аллергической реакции.

7. Положительные реакции изменения содержания внутриклеточного кальция на аллергены и медиаторы анафилаксии зарегистрированы как в кальциевой, так и в бескальциевой среде, что свидетельствует о вовлечении в ответ на стимул внутриклеточных депо кальция.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

К использованию в практике могут быть рекомендованы:

1. Способ диагностики аллергии к аллергенам и медиаторам анафилаксии с помошью определения увеличения концентрации внутриклеточного кальция в лейкоцитах периферической крови.

2. Способ диагностики повышенной реактивности мембран лимфоцитов периферической крови к ацегилхолину и гистамину с пшошью флуоресцентного зонда.

3. Использование лабораторных методов диагностики для прогнозирования повышенной реактивности клеток и реакций на те аллергены, с которыми ребенок ранее непосредственно не контактировал.

Список научных работ по теме диссертации:

1. Способ определения реакции больного аллергическим заболеванием на неспецифичеснке раздрешгаели. A.C. fi 1380732 // Б.И. - 1988. - № 10. (в соавт. с Воронцовым И.М., Нишевой Е.С., Розановым Й.М.).

2. Изучение содержания внутриклеточного кальция с помощью Квина-2 у детей с аллергическими заболеваниями /У Люминесцентный анализ в медицине и его аппаратурное обеспечение. Тезисы докладов Всесоюзной конференции. - Рига, 1988. - С. 88-89. (в соавт. с Нишевой Е.С., Розановым D.M.).

3. Регистрация содержания свободного кальция в лейкоцитах периферической крови при аллергических заболеваниях у детей // Цитология. - 1990. - § 10, - С. 1023-1025. (в соавт. с Нишевой

E.G.Розанова ЮЛ.).

4. Использование люминесцентной микроскопии для решения актуальных проблем аллергологии JJ Люминесцентный анализ в медико-биологических исследованиях. Сборник научных статей. - Рига,

1990. - С.40-43. (в cosJBT. с Нииевой Е.С., Розановым Ю.М.).

5. Способ диагностики аллергии. A.c. № I69I75I // Б.И. -

1991. - № 426. (в соавт. с Воронцовым И.М., Нишевой Е.С., Розановым Ю.М.).

6. Диагностика аллергии и реакций на медиаторы анафилаксии с помощью измерения внутриклеточного кальщя // Вопросы охраны материнства и детства. - 1991. - № 5. - С.33-36. (в соавт. с Нишевой Е.С.),

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДСМ - 4-/П-диметилалмностирил/-1-мегилпиридиний

ШКТ - желудочно-кишечный тракт

МБА - 3-метоксибензантрон

Jg - иммуноглобулин

MSI - радиоаллергосорбентный•тест

EIST - радиоиммуносорбентннй тест

iIoдnиcaнo к печати . Заказ /д'З/

формат бумаги 60x84 1/16, /¿?печ.л. Бесплатно.

Ш - 3 "Ленуприздага". 191104 Ленинград, Литейный пр., дом № 55.