Автореферат и диссертация по медицине (14.00.05) на тему:Диагностическое значение кристаллических структур биологических жидкостей в клинике внутренних болезней

ОГР

с л %

V \ а и •1 и

.. . . НА ПРАВАХ РУКОПИСИ

ШАТОХИНА Светлана Николаевна

УДК[548.56+616—008.8 + 612.014.462]—07

ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ КРИСТАЛЛИЧЕСКИХ СТРУКТУР БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЕЙ В КЛИНИКЕ ВНУТРЕННИХ БОЛЕЗНЕЙ

14.00.05.— Внутренние болезни

14.00.46.— Клиническая лабораторная диагностика

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1995 г.

Работа выполнена в Московском областном научно-исследовательском клиническом институте им. М. Ф. Владимирского

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ

академик РАМН, .профессор, докт. мед. наук В. Н. Шабалин

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

чл.-корр. РАМН, профессор, докт. мед. наук Н. А. Мухин профессор, докт. мед. наук А. С. Мелентьев

профессор, докт. мед. наук А. А. Подколзин

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ — Научно-исследовательский

институт физико-химической медицины МЗМП РФ

Защита состоится . . . 0.1.■ . . . 199 £ г. в. /З...час. на заседании диссертационного Совета Д 084.08.01 в Московском медицинском стоматологическом институте (ул. Долгоруковская, д. 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института (ул. Вучетича, 10-а).

Автореферат разослан . ...... 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета доктор медицинских наук,

профессор Л. Л. Кириченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Вопросы разработки и совершенствования лабораторных методов исследования биологических жидкостей человека занимают ведущее место в решении проблем диагностики различных патологических состояний. Данные современных исследований свидетельствуют о том, что первичные изменения, связанные с действием патогенного фактора на организм возникают, прежде всего, на молекулярном уровне.

В биологических жидкостях происходят постоянные колебания молекулярного состава и меняется характер взаимодействия различных компонентов как в физиологических, так и в экстремальных и патологических состояниях. Такие изменения являются наиболее информативными при исследовании гомеостаза молекулярного уровня и могут служить основой для диагностики ранних стадий различных заболеваний.

Одним из направлений в разработке новых, доступных для практической лаборатории диагностических методов является исследование структур биологических жидкостей, которые образуются при переходе их в твердое состояние в процессе кристаллизации.

В настоящее время используются различные подходы к изучению структур твердой фазы биожидкостей с целью получения диагностической информации (А.М.Сазонов и соавт., 1985; В.Ы.Лисиенко и соавт., 1989; Л.В.Савина, 1993; В.С.Веселова, 1993; Я.Л.Габинс-кий и соавт., 1994; Л.А.Мороз и соавт., 1994). Однако основная часть полученных данных остается на уровне описания отдельных феноменов без выявления их ассоциативных связей с теми или иными патологическими отклонениями. Не изучены также закономерности процесса кристаллизации биологических жидкостей, не определены четкие критерии упорядоченности структуры в исследумых

стандартных моделях, не прослежена взаимосвязь параметров и характеристик структурной организации биожидкости с данными ее химического состава и лабораторно-клиническими показателями.

Накопление знаний в области молекулярной биологии, биофизики, синергетики, открытие жидкокристаллического состояния вещества основных сред организма дает принципиально новые возможности к изучению и оценке структур твердой фазы биологических жидкостей человека.

Цель работы. Разработка методов диагностики патологических процессов организма человека на основе патогномоничных особенностей структур твердой фазы биологических жидкостей.

Задачи работы.

1. Изучение закономерностей образования структур биологической жидкости при ее самоорганизации;

2. Исследование взаимосвязи параметров и характеристик структур твердой фазы биожидкости с данными ее химического состава;

3. Изучение особенностей структурной организации биологических жидкостей, возникающих при различных нарушениях гомеос-таза;

4. Разработка новых методов лабораторной диагностики и мониторинга патологических процессов на основе специфических особенностей структур твердой фазы биологических жидкостей;

Для решения поставленных задач были использованы методы кристаллографии, поляризационно-оптической микроскопии, рентге-носпектрального микроанализа, рентгенодифракционного анализа, клинико-инструментальные и лабораторные исследования. Достоверность полученных результатов определяли методами вариационной статистики с использованием критерия Ь по таблице Стьюдента.

Научная новизна:

- разработано новое направление в области лабораторной диагностики патологических состояний на основе исследования структур твердой фазы биологических жидкостей;

- установлено, что формообразование структур твердой фазы биологических жидкостей обусловлено динамикой концентрационных взаимодействий в системе "вода - минеральные вещества - органические соединения";

- разработаны способы качественного и количественного определения белка в биологических жидкостях по структурным параметрам их твердой фазы;

- выявлены нарушения структурообразования твердой фазы мочи больных уролитиазом, на основе которых впервые разработан патогенетический метод диагностики мочекаменной болезни;

- установлено, что с помощью углубленного сравнительного анализа химического состава структурных зон исследуемого образца мочи можно определять вид камнеобразующих солей у больных уролитиазом;

- установлено, что текстуры биожидкостей, образующиеся в оптической ячейке в процессе медленного структурирования, могут характеризовать состояние гомеостаза организма;

- разработана предварительная классификация текстур биожидкостей по морфологическим признакам, позволяющая оценивать состояние гомеостаза (физиологический, адаптационный, декомпенси-рованный);

- показано, что текстуры биожидкостей являются высокозависимыми от изменений химического состава внутренней среды организма, служат маркерами общей реакции организма на внешние химические и физические воздействия случайного и направленного

(лечебного) характера, отражают нарушения, происходящие на различных стадиях развития патологического процесса.

Практическая ценность работы.

Впервые разработаны и использованы в клинической лабораторной практике следующие диагностические методы:'

1. Скрининговый метод выявления протеинурии и глюкозурии (A.C. 1573425 СССР);

2. Способ количественного определения белка в биологических жидкостях (A.c. 1681182 СССР);

3. Способ диагностики калькулезного пиелонефрита (положительное решение на выдачу патента РФ по заявке N 4858034/14);

4. Способ прогнозирования развития мочекаменной болезни (положительное решение на выдачу патента РФ по заявке N 4873890/14);

5. Способ определения степени активности процесса камнеоб-разования у больных уролитиаэом (положительное решение на выдачу патента РФ по заявке N 5059948/14);

6. Способ определения вида камнеобразующих солей мочи у больных мочекаменной болезнью (положительное решение на выдачу патента РФ по заявке N 5065432);

7. Способ оценки состояния гомеостаза организма по морфологической характеристике текстур, образующихся в процессе медленного структурирования биожидкости в оптической ячейке (Патент 2007716 РФ).

Основные положения, вынесенные на защиту:

1. Структуры твердой фазы биологических жидкостей образуются в соответствии с определенными закономерностями, они коррелятивно связаны с формированием и характером течения патологического процесса и несут в себе важную информацию, имеющую цен-

- б -

ность для клинической диагностики;

2. Уролитиаз вызывает характерные изменения в порядке образования определенных структурных зон мочи, эти изменения являются четким диагностическим признаком заболевания и могут служить основой мониторинга больного и определения эффективности применяемого терапевтического комплекса;

3. Морфологические параметры анизотропных структур биологической жидкости отчетливо и быстро реагируют на изменения ее химического состава и могут быть использованы для оценки состояния гомеостаза организма.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на П всероссийском съезде эндокринологов 22-25 октября 1991 г. в г.Челябинске, международной научной конференции "Актуальные проблемы экологической хронобиологии и хрономедицины" 22-24 ноября 1994 г. в г.Екатеринбурге, итоговой научно-практической конференции Московского областного научно-исследовательского клинического института им.М.Ф.Владимирского 19 декабря 1994 г. в г. Москве, У Российском съезде специалистов по лабораторной диагностике 24-26 мая 1995 г. в г.Москве, международной конференции в сотрудничестве со Всемирной Организацией Здравоохранения "Общество, стресс и здоровье" 27 июня - 2 июля 1995 г. в г. Москве, 2-м симпозиуме "Неинвазивные методы диагностики" 31 октября - 2 ноября 1995 г. в г.Москве.

В соответствии с указанием Министерства здравоохранения Российской Федерации N 357-У от 01.12.93 г. проведена апробация новых методов ранней диагностики уролитиаза в НИИ урологии Минздравмедпрома РФ в январе-марте 1994 г. (г.Москва) и НИИ педиатрии и детскбй хирургии Минздравмедпрома РФ в январе-марте 1994 г. (г.Москва).

Публикации. По материалам диссертации имеется 25 научных публикаций, из них 8 авторских свидетельств на изобретения (положительных решений на выдачу авторского свидетельства), патент США, положительное решение о выдаче Европатента. •

Структура и объем диссертации.

Диссертация написана в виде монографии и занимает 226 страниц машинописного текста, состоит из двух частей, 10 глав, заключения и выводов. Первая часть (1 и 2 главы) диссертации посвящена анализу данных литературы о кристаллографически* методах исследования в медицине и современных концепциях самоорганизации биологической жидкости. Во П части работы представлены материал и методы исследования (глава 3), разработка моделей образования зональных структур биологических жидкостей (глава 4), характеристика зональных структур при кристаллизации цереброспинальной жидкости, сыворотки крови, мочи (главы 5,6), разработка методических подходов к диагностике уролитиаза на основе кристаллографических исследований и практические рекомендации (главы 7-9), данные о значении морфологических особенностей текстур биологических жидкостей в оценке гомеостаза (глава 10), заключение и выводы.

Список использованной литературы представлен 157 источниками, из них 111 отечественных и 45 иностранных. Диссертация содержит 18 таблиц и 53 рисунков.

ОБЪЕКТ, МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе были обследованы контингенты практически здоровых лиц и больных различными заболеваниями:

- практически здоровые лица - 1138 человек,

- больные - под наблюдением находилось 1086 человек (из них

в динамике лечения - 244).

Материалом исследования являлись различные виды биологической жидкости: цереброспинальная, слезная, цельная кровь, сыворотка крови, моча.

В работе были использованы следующие методы исследований:

- кристаллизация биожидкосги ровным слоем в чашке Петри -биологическую жидкость - нативную или в виде смеси с физиологическим раствором хлористого натрия в объёме 10 мл вносили в чашку Петри и высушивали при температуре 18-25°С в течение 10-12 часов, оставляя чашку открытой. Кристаллические структуры наблюдали под малым увеличением биологического микроскопа Р-13, Р-15 фирмы "ЛОМО" (Ленинград);

- кристаллизация биологической жидкости на наклонной плоскости - отличие от предыдущего способа состояло в создании наклона чашки Петри при высушивании исследуемого материала с тем, чтобы разница в высоте двух противоположных сторон чашки составляла 2-3 мм;

- кристаллизация биологической жидкости в тонком слое на стекле - каплю нативной жидкости или смеси с физиологическим раствором хлористого натрия наносили на поверхность предметного стекла и распределяли концом пипетки до тонкого слоя. Высушивание проводили при комнатной температуре;

- кристаллизация биологической жидкости в капле на открытой поверхности - биологическую жидкость - нативную или в виде смеси с растворами неорганических солей, альбумина, глюкозы и т.д. наносили в количестве 0,02 мл на поверхность предметного стекла или на токопроводящую подложку из алюминия (для последующего проведения рентгеноспектрального микроанализа) в виде капли. Высушивание проводили при комнатных условиях при температуре

18-25°С.

Рентгеноспектральный микроанализ. Исследование структуры и состава высушенных образцов мочи, а также определение компонентов мочевых камней выполняли на приборе "Camebax" фирмы "Сате-са" (Франция), представляющем собой микроанализатор, снабжённый оптическим (х400) и электронным сканирующим (до х 4000) микроскопами.

Рентгеноструктурный анализ фазового состава высушенных образцов мочи и почечных камней больных уролитиазом проводили на рентгеновском дифрактометре ДРОН-3 отечественного производства (НПО "Буревестник").

Поляризационно-оптическую микроскопию образцов биологической жидкости в оптических ячейках проводили на микроскопе МБИ-15 ("ЛОМО",Ленинград) и поляризационном микроскопе "Poli-var" с выводом объекта изображения на экран ("Reichert-Jung", Австрия). Оптическая ячейка представляла собой пространство между специально обработанными предметным и покровным стеклами, в которое помещали исследуемый материал в количестве 0,02 мл.

Достоверность исследований состава камнеобразующих солей мочи составу формирующегося в организме больного мочевого камня определяли ретроспективно при его выделении (самостоятельном или при оперативном вмешательстве).

Статистическую достоверность полученных результатов определяли с использованием критерия t по таблице Стьюдента (B.C. Бессмертный, 1968; Д.Сепетлиев, 1968).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В настоящей работе при изучении структурирования биологических жидкостей нами была определена "стандартная модель", с помощью которой исследовались наиболее показательные морфологи-

ческие признаки, характеризующие основные закономерности образования структур, сходные с общими явлениями самоорганизации, имеющей место в природе. В качестве такой модели мы приняли каплю биожидкости, высушенную на открытой поверхности. При этом выявляются основные зоны кристаллизации биожидкости, соответствующие определенным стадиям кристаллизации при переходе ее в твердую фазу: центральная зона - зона кристаллических моноструктур, промежуточная зона - зона смешанных кристаллических структур, краевая зона - аморфная (некристаллическая). Исследование структуры различных видов биожидкости в каждой из стадий кристаллизации позволяет определить их специфические особенности и проследить за сгруктурообразованием как в норме, так и при развитии патологического процесса в организме.

Согласно нашим теоретическим представлениям формирование зон в ограниченном объеме биожидкости, имеющем форму, близкую к полусфере осуществляется следующим образом. Испарение жидкости происходит равномерно по всей открытой поверхности капли. В силу того, что полусфера имеет разную толщину слоя в центре и на периферии, в исследуемой капле при испарении воды происходит неравномерное изменение концентрации растворенных веществ. А именно - концентрация в тонких (периферических) отделах возрастает более быстрыми темпами по сравнению с центральной (толстой) частью капли. При данных изменениях начинают проявлять себя осмотические и онкотические силы. В связи с тем, что мощность осмотических сил на два порядка выше онкотических, соли начинают более быстро перемещаться к центру капли, в сторону зоны меньшей концентрации растворенных веществ. В борьбе за оставшуюся воду соли "выдавливают" органические вещества на периферию капли. В результате, после высыхания капли биологической

- и -

жидкости, в ее твердой фазе количественное содержание солей повышается от периферии к центру, а количественное распределение органических веществ имеет обратный порядок.

Зональные структуры образцов сыворотки крови, цереброспинальной жидкости, мочи. Исходя из основных закономерностей формирования зон в капле биожидкости, мы установили, что структурирование сыворотки крови и цереброспинальной жидкости при их высушивании обусловлено конкурентными взаимодействиями онкоти-ческих и осмотических сил в борьбе за прогрессивно уменьшающиеся объемы воды. Детальное изучение такого взаимодействия позволило нам разработать и впервые предложить зональный способ определения концентрации белка в цереброспинальной жидкости и сыворотке крови. Способ заключается в определении соотношения ширины краевой аморфной зоны образца (измеренной с помощью окуляра со шкалой) и диаметра высушенной капли. Зональный метод количественного определения белка в биологических жидкостях чрезвычайно прост в постановке, не требует специальных реактивов и может быть использован в широкой медицинской практике.

Исследование зональных структур высушенных образцов мочи при нормальных показателях ее состава, с наличием белка, глюкозы или при сочетании их одновременно показало, что они имеют 3 четкие структурные характеристики, определяемые визуально. Эти данные легли в основу скринингового метода отбора "патологических" образцов мочи при массовых обследованиях. Метод является простым в исполнении, не требует каких-либо реактивов и аппаратуры, для чтения результатов необходим элементарный навык.

С помощью разработанного нами зонального метода в ряде случаев, при структурировании капли мочи больных с протеинурией,

было установлено нарушение закономерностей процесса кристаллизации. Это нарушение состояло в том. что при наличии белка в моче краевая аморфная (белковая) зона в высушенной капле - отсутствовала и вся поверхность капли была равномерно покрыта кристаллами солей. Анализ полученных результатов позволил установить, что выявленная аномальная кристаллизация солей в краевой (белковой) зоне высушенной капли у больных с протеинурией связана с мочекаменной болезнью. Наши дальнейшие действия были направлены на разработку методов диагностики уролитиаза и определения степени активности мочекаменной болезни.

Для того, чтобы разработать метод выявления патологической кристаллизации солей в образце мочи, не содержащей белок, мы провели ряд экспериментальных исследований, направленных на поиски соответствующего белкового компонента, адекватного по своим характеристикам структурированию белка в моче больных с протеинурией.

В задачи разработки метода входили:

- определение вида белка для получения образца с наличием четкой краевой аморфной зоны;

- определение порогового соотношения смеси "моча+белок", характеризующего у обследуемого наличие патологической кристаллизации солей в образце мочи;

- определение оптимального температурного режима при высушивании капли мочи, содержащей белок;

- определение оптимального срока учета результатов структурирования образца.

Первоначально мы изучили образование зональных структур физиологического раствора ИаС2, 50 образцов мочи, не содержащей белок, больных с активной стадией уролитиаза в смеси с не-

сколькими растворами, содержащими белок - альбумин, казеин, глобулин. Наиболее чёткая по прозрачности и структурированию краевая аморфная зона в образцах смеси при макроскопическом исследовании была получена с раствором альбумина.

Взяв в качестве матричного раствора 10Х-ный раствор альбумина, провели поиск пороговой концентрации альбумина в моче, с помощью которой можно было бы выявить патологическую кристаллизацию солей в белковой зоне. Для этого исследовали мочу 20 лиц с мочекаменной болезнью, т.е. с химическим составом и данными микроскопии осадка состояния нормы. К моче обследуемых добавляли ЮХ-раствор альбумина в следующих соотношениях: 1:1, 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 6:1, 7:1, 8:1, 9:1, 10:1 соответственно, после чего готовили стандартные образцы (капли) смеси всех указанных разведений на подложке.

В группе больных мочекаменной болезнью полная кристаллизация образца смеси "моча+альбумин" наблюдалась у всех 20 человек в соотношении 4:1 (концентрация альбумина в смеси составила 2,5 г/л). Таким образом, в результате проведенных исследований в качестве белкового компонента нами был выбран альбумин, его концентрация 2,5 г/л была принята нами за стандартную и использована во всех дальнейших исследованиях.

Наши исследования по оценке влияния температуры на образование краевой аморфной зоны в каплях мочи больных с протеину-рией показали зависимость срока перераспределения слоев биожидкости до начала кристаллизации. В связи с этим, нами были проведены исследования характера кристаллизации образцов мочи со стандартной примесью альбумина при различных температурах. В дальнейшем, выбранный температурный режим: 18-25°С нами был принят за стандартный.

*

Следующий этап исследований заключался в определении оптимального срока оценки окончания структурирования образца. С этой целью образование зональных структур учитывали спустя 40 минут, 2. 4, 24 и 48 часов. Было установлено, что оптимальным сроком для чтения результатов кристаллизации образцов "мо-ча+альбумин" является 18 - 24 часа, т.к. лишь по истечении суток структура образца стабилизируется.

В результате проведенных исследований нами разработан метод диагностики ранней стадии мочекаменной болезни при отсутствии протеинурии. Метод включает:

- определение белка в моче (белок отсутствует);

- приготовление смеси "моча + 107. раствор альбумина" в соотношении 4:1 соответственно;

- нанесение капли смеси на подложку и высушивание в стандартных условиях;

- учет результатов структурирования через 18 - 24 часа после нанесения капли смеси для высушивания.

При исследовании образцов мочи с целью диагностики уроли-тиаза было установлено, что характер кристаллизации солей в краевой аморфной зоне высушенных капель имеет отличительные особенности в ряде случаев. Эти отличия заключались в различной степени насыщения кристаллами солей краевой зоны образца. Так, в одних случаях насыщение кристаллами солей было равномерным как по центру, гак и по периферии: поверхность образца имела вид полностью закристаллизованной. В других - краевая аморфная зона определялась, однако в ней либо присутствовали конгломераты кристаллов солей, идущие едиными тяжами от центра и до самого края образца, либо располагались единичные мелкие кристаллы, обнаруживаемые при визуальном просмотре. В третьих

- краевая аморфная зона была гипернасыщена кристаллами солей в сравнении с центральной зоной образца.

Для установления взаимосвязи характера кристаллизации солей в краевой аморфной зоне со степенью активности процесса камнеобразования при уролитиазе исследованы образцы мочи 223 больных с патологической кристаллизацией солей в краевой аморфной зоне.

Распределение образцов мочи с различной степенью насыщения кристаллами солей в краевой зоне у 223 больных представлено в таблице 1.

Таблица 1

Данные распределения обоазцов мочи с различной степенью насыщения кристаллами солей в белковой зоне у 223 лиц с наличием процесса камнеобразования в почках

Всего лиц Кристаллизация солей в белковой зоне образца мочи

чрезмерная равномерная по всему образцу в виде конгломератов в виде единичных кристаллов

223 1 65 101 50

1007. 3,17. 29,27. 45,37. 22,43:

Из данных таблицы 8 видно, что образцы мочи 223 человек с выявленным процессом камнеобразования в почках имели различную степень насыщения кристаллами солей в краевой белковой зоне образца. Преимущественно отмечались образцы с характером кристаллизации солей в белковой зоне в виде конгломератов (45,32 исследованных образцов). Достаточно часто встречалась равномерная кристаллизация по всему образцу, а также в виде единичных кристаллов. Гтернасьвценность кристаллами солей краевой

зоны отмечалась редко.

Следующим этапом исследований явилось сопоставление клинических данных обследования больных с характером кристаллизации солей в краевой зоне образца с целью возможности установления степени активности процесса камнеобразования в мочевых путях.

При обследовании 7 больных, в образцах мочи которых отмечали чрезмерную кристаллизацию солей в краевой аморфной зоне, камни в почках и мочевых путях не были обнаружены. Однако у этих больных имелись выраженные признаки нарушения оттока мочи из почки (аденома предстательной железы, стриктура мочеточника и лоханочно-мочеточникового соустья, стриктуры мочеиспускательного канала) и все они нуждались в срочном хирургическом вмешательстве. .

Установленный факт не является противоречием в отношении причастности патологической кристаллизации солей мочи, содержащей белок, к уролитиазу. Достаточно известно, что одним из патогенетических факторов камнеобразования является стаз мочи, вызванный нарушением её циркуляции в результате механических препятствий оттока мочи. Следовательно, острое нарушение оттока мочи у 7 больных является провоцирующим фактором мочекаменной болезни, что, в частности отражается на характере структурирования краевой зоны образца, и проявляется в гипернасьпцен-ности ее кристаллами солей. Вместе с тем, ввиду краткосрочности состояния острого нарушения оттока мочи у данных больных, камни в почках у них не успели образоваться. Однако при сохранении такого патологического состояния они могут сформироваться достаточно быстро.

Из 65 больных, в образцах мочи которых отмечали равномерную кристаллизацию солей по всей поверхности, у 55 был уста-

новлен диагноз мочекаменной болезни, осложненной присоединением воспалительного процесса в почках (хронический калькулезный пиелонефрит в стадии обострения, до начала антибиотикотера-пии). У остальных 10 больных также ранее были выявлены камни в почках, но болезнь протекала без осложнений и клинический анализ мочи соответствовал показателям нормы. Следовательно, в 55 случаях имел место воспалительный процесс в мочевых путях, который являлся провоцирующим фактором высокой активности процесса камнеобразования. В остальных 10 случаях причиной высокой активности камнеобразования могли быть иные причины. Таким образом, равномерная кристаллизация солей по всему образцу свидетельствовала о наличии у больного высокой степени активности уролитиаза.

Из 101 больного, в образцах мочи которых отмечали конгломераты кристаллов солей в краевой аморфной зоне, данные клинического обследования показали следующие результаты:

1) у 44 больных диагностирована мочекаменная болезнь, осложненная камнеобразованием и воспалительным процессом в почках (хронический калькулезный пиелонефрит) и в период обследования больные принимали антибиотикотерапию;

2) у 38 больных диагностирована мочекаменная болезнь, протекавшая без каких-либо осложнений;

3) у 19 лиц диагноз.мочекаменной болезни ранее не был установлен, камней в почках и мочевых путях не обнаружено.

Следовательно, кристаллизация солей в краевой аморфной зоне образца мочи в виде конгломератов характеризовала менее выраженную клинику активности уролитиаза, по сравнению с предыдущим описанием и могла свидетельствовать скорее об умеренной активности камнеобразования.

Из 50 больных, в образцах мочи которых отмечали единичные кристаллы в краевой аморфной зоне, 28 человек заканчивали курс антибиотикотерапии по поводу хронического калькулезного пиелонефрита, 9 человек имели камни в почках (неинфицированные), а у 13 камни в почках и мочевых путях не были обнаружены. Если судить о клиническом течении уролитиаза только по группе больных хроническим кзлькулезным пиелонефритом, то в период окончания адекватной антибиотикотерапии болезнь переходит в стадию ремиссии, что относится к слабой активности камнеобразования и, соответственно, характерному структурированию краевой аморфной зоны образцов мочи в виде единичных кристаллов солей.

С целью установления корреляции степени активности процесса камнеобразования со степенью насыщения кристаллами краевой зоны образца, мы провели наблюдение за камнеобразованием у 79 больных уролитиаэом в динамике. Сроки наблюдения составляли от 6 месяцев до 5 лет. Исследование образцов мочи проводили периодически, от 1 раза в неделю до 1 раза в месяц. В группу наблюдения вошли 22 больных калькулёзным пиелонефритом (из 65), 25 больных уролитиаэом без сопутствующего воспалительного процесса в почках (из 101), а также 19 больных (из 101 с патологической кристаллизацией солей в виде конгломератов) и 13 больных (из 50 с патологической кристаллизацией солей в виде единичных кристаллов), у которых на момент исследования камни в почках не были обнаружены.

Результаты наших исследований показали, что у всех 22 больных калькулёзным пиелонефритом образцы мочи имели вид полностью закристаллизованных практически за весь период наблюдения. Формирование новых камней или увеличение в размерах ранее сформированных происходило в течение 1-3 месяцев. У 25 больных уролитиаэом с наличием неинфицированных камней и характе-

ром кристаллизации солей в краевой зоне образца в виде конгломератов, формирование новых камней или увеличение в размерах ранее сформированных происходило за более длительные сроки -6 - 12 месяцев. У 32 больных, у которых камни в почках и мочевых путях на момент исследования не были обнаружены, но зональным методом был диагностирован уролигиаз, образование конкрементов в почках было отмечено у 18 больных спустя 1,5 -3 года, а у остальных 14 человек отмечалось периодическое выделение большого количества солей с мочой.

Таким образом, проведенные нами исследования образцов мочи с различной степенью насыщения кристаллами солей в белковой зоне у больных уролитиазом в динамике наблюдения и сопоставления с данными клинического обследования показали коррелятивную связь между степенью насыщения кристаллами солей в белковой зоне образца мочи и активностью камнеобразования в почках у этих больных. Следовательно, степень насыщенности кристаллами солей в краевой аморфной зоне образца мочи патогномонично степени активности камнеобразования в почках и мочевых путях больного уролитиазом. Мы считаем целесообразным выделить следующую градацию степени активности камнеобразования по виду краевой аморфной зоны образца мочи:

- чрезмерная кристаллизация солей в краевой аморфной зоне образца мочи по сравнению с центральной зоной соответствует резко выраженной степени активности процесса камнеобразования;

- равномерная кристаллизация солей по всему образцу соответствует выраженной степени активности камнеобразования;

- кристаллизация солей мочи в виде конгломератов в краевой аморфной зоне образца соответствует умеренной степени активности камнеобразования;

- кристаллизация солей мочи в виде единичных кристаллов в краевой аморфной зоне образца соответствует слабой степени активности камнеобразования в мочевых путях больного уролитиа-зом.

Апробация зональных методов диагностики уролитиаза при исследовании мочи 720 рабочих и служащих металлургического завода показала достаточно четкие результаты и возможность использования методов при проведении массовых обследований.

Таким образом, на основании открытого нами феномена патологической кристаллизации солей мочи в белковой зоне разработан:

- зональный метод диагностики уролитиаза, позволяющий определить заболевание на доклинической стадии его развития;

- зональный метод определения степени активности мочекаменной болезни.

С помощью данных методов выявлены определённые биоритмы активности уролитиаза, связанные с наличием сопутствующей патологии, изменением диеты, сезонными периодами года.

Данные методы позволяют также оценить эффективность проводимого лечения и обеспечить своевременную, направленную профилактику активизации процесса камнеобразования у больных уроли-тиазом.

Установленный нами феномен патологической кристаллизации свидетельствует о том, что соли мочи больных уролитиазом способны кристаллизоваться в белковой зоне. Необходимо было выяснить, какие именно соли мочи приобретают способность к кристаллизации в белковой зоне и как они соотносятся с солями, участвующими в формировании мочевых камней. Для этого нужно было произвести качественный и количественный анализ состава

солей, кристаллизованных в белковой (краевой) зоне образца и сопоставить эти показатели с аналогичными данными центральной зоны, а также с солями, полученными непосредственно из почечного камня данного больного.

С этой целью за основу исследования нами был взят метод рентгеноспектрального микроанализа (РСМД), позволяющий проводить локальное определение элементного состава в зонах образца мочи. Нами отработаны параметры, с помощью которых можно применить данный метод для исследования высуиенной капли биожидкости (мочи), в частности, в качестве электропроводимой подложки - алюминиевая фольга; определение спектра химических элементов, необходимого для анализа распределения их в образце по зонам; некоторые физические параметры для проведения исследований.

Мы установили, что в образцах мочи с патологической кристаллизацией солей содержание химических элементов в центральной и краевой зонах в основном различно. В дальнейшем, при сопоставлении данных распределения химических элементов в центральной и краевой зонах образца мочи с результатами определения элементного состава поверхностного слоя мочевого камня этого же больного, выделенного при оперативном вмешательстве или при самостоятельном отхождении, была показана возможность установления вида камнеобразующих солей по исследованию образца мочи в активной стадии уролитиаза. Так, у 10 больных уролитиазом при исследовании образцов мочи камнеобразующей солью являлся окса-лат кальция, у 18 - ураты и у 16 в камнеобразовании участвовали фосфатно-кальциевые соединения. Все случаи верифицированы при исследовании состава поверхностного слоя почечных (мочевых) камней.

В качестве примера приводим данные исследования образцов мочи трех больных с различным видом формирующегося почечного камня. В табл.2 приводится элементный состав (в единицах интенсивности - ЕИ) краевой и центральной зон образца мочи больного Л., в котором преобладание кальция в краевой зоне по сравнению с центральной составило более, чем в 5 раз. Следовательно, в состав камнеобразующих солей входит элемент кальций. Заключение об участии в камнеобразовании именно оксалата кальция, а не карбоната кальция сделано нами на основании параллельных исследований фагового состава образцов мочи при помощи рентгеност-руктурного анализа.

Таблица 2

Данные содержания химических элементов больного Я. в краевой и центральной зонах образца мочи в активной стадии уролитиаза

Зона Содержание элементов (в ЕИ)

Ма Р 5 С1 К Са 1п

краевая (а) 28,1 - 12,8 5,0 33,2 10,3 10,2 - -

центральная (б.) 27,3 1,2 9,2 7,8 35,8 16,7 1,9 - -

Данные исследования образцов мочи больного К. с камнеобра-зованием из уратов представлены в таблице 3. Из них следует, что при наличии патологической кристаллизации солей в белковой зоне образца мочи, преобладания в содержании каких-либо химических элементов в краевой зоне нет. В то же время известно, что прибором не определяются такие элементы, как С, N. О и Н, а уратные камни состоят именно из этих элементов. Следовательно,

Таблица 3

Данные содержания химических элементов больного К. в краевой и центральной зонах образца мочи в активной стадии уролитиаза

Зона Содержание элементов (в ЕИ)

N3 мг р Б С1 К Са гп Б1

краевая (а) 24,6 1.1 7,6 5,5 50,4 8,2 - - -

центральная (б) 27,4 - 6,2 6,8 47,4 11,8 - - -

у данного больного патологическая кристаллизация солей в краевой (белковой) зоне образца может происходить за счет таких элементов, как С, Н, N и О. И действительно, анализ фазового состава выделенного впоследствии почечного камня показал, что он имеет монофазу из мочевой кислоты: Сб^МдОз. Таким образом, почечный камень больного К. был сформирован из мочевой кислоты и являлся однородным по составу.

В таблице 4 представлены данные содержания химических элементов в краевой и центральной зонах образца мочи больной М. Отмечено явное преобладание содержания в краевой зоне двух элементов: фосфора (почти в 3 раза) и кальция (более, чем в 5 раз). Повышено по краю образца и содержание элементов: серы, калия и магния. Таким образом, по сравнительным данным рентге-носпектрального микроанализа состава зон образца мочи камнеоб-разующими элементами являются Са, Р, Б, К и Мй. Результаты рентгеноспектрального микроанализа поверхностного слоя камня, извлеченного у больной М. из ткани почек показали,

Таблица 4

Данные содержания химических элементов больной М. в краевой и центральной зонах образца мочи в активной стадии уролитиаза

Зона Содержание элементов (в ЕИ)

№ Мд Р С1 К Са 1п

краевая (а) 13,6 2,3 28,5 5,6 15,7 13,3 20,5 - -

центральная(б) 30,2 2,1 9,7 1,9 46,6 5,5 3,9 - -

что он включает содержание следующих элементов: Са - 73,7 ЕИ, Р - 24,9 ЕИ, Мд - 0,6 ЕИ. При рентгеноструктурном исследовании были определены следующие фазы мочевого камня: основные - стру-вит (МеНР04.бНаО) и гидроксилапатит (Са5(Р04)э0Н), в виде примесей - флуорапатит (СавРСРО^з) и МгКРС^.бНгО.

Следовательно, при сравнительном исследовании содержания химических элементов в краевой и центральной зонах образца мочи больных уролитиазом в активной стадии и выявлении преобладания элементов фосфора и кальция в краевой зоне образца - судят о фосфатно-кальциевом составе формирующегося или уже сформированного конкремента в мочевых путях.

Таким образом, данные наших исследований показали, что по результатам анализа содержания химических элементов в краевой и центральной зонах образцов мочи больных уролитиазом в активной стадии можно определить элементы камнеобразующих солей. Практическая ценность получения такой информации заключается в том, что у больного уролитиазом ещё до формирования почечного камня можно определить вид камнеобразующих солей и

своевременно предпринять ряд профилактических и лечебных мероприятий для предупреждения развития осложнений заболевания (образования камня в почках, присоединения воспалительного процесса и др).

Известно, что у некоторых больных уролитиазом на определенных стадиях болезни состав камнеобразующих солей может изменяться. В связи с этим представлялось важным установить возможность определения факта смены вида камнеобразующих солей. С этой целью мы провели наблюдение в динамике за элементным составом камнеобразующих солей мочи у 32 больных уролитиазом. Сроки наблюдения за больными составили от 3 месяцев до 5 лет.

Для определения состава химических элементов отбирали образцы мочи больных,- полученные в разные периоды течения болезни. Предварительные исследования элементного состава солей мочи в образцах на подложке из алюминия показали, что данные содержания химических элементов по мере высушивания образца не изменяются при сопоставлении с соответствующими данными в дублирующих образцах через 1, 6 и 12 месяцев хранения. В связи с этим проводили одномоментное исследование нескольких образцов мочи от каждого больного уролитиазом, полученные в разные периоды течения болезни.

Всего нами выявлена смена камнеобразующих солей у 5 из 32 наблюдаемых нами больных уролитиазом. У всех 5 больных вначале формирование камней происходило за счет уратов. Проводимая терапия, направленная на предупреждение воспалительных процессов, а также диета, обедненная животными белками привела к смене камнеобразующих солей. У всех больных произошла замена уратного камнеобразования на фосфатно-кальциевое.

Следовательно, исследование состава камнеобразующих элементов образца мочи больного уролитиазом позволяет следить за динамикой камнеобразования в каждом конкретном случае. Это позволяет объективно и в довольно короткие сроки оценить эффективность назначенного комплекса терапевтических мероприятий и скоррегировать лечение с целью остановки процесса камнеобразования у больного уролитиазом.

Для практического применения системы методов диагностики уролитиаза и мониторинга за состоянием больных мочекаменной болезнью нами разработана специальная гест-карта, с помощью которой можно провести поэтапное исследование образцов мочи пациента, включая определение состава камнеобразующих солей мочи.

Таким образом, разработанный нами комплекс методов исследования мочи практически здоровых людей и больных уролитиазом на специальных индивидуальных тест-картах имеет большое диагностическое значение, так как позволяет:

- диагностировать процесс камнеобразования в почках или мочевых путях обследуемого, т.е. диагностировать мочекаменную болезнь на ранних стадиях, до развития осложнений в виде формирования почечных камней, присоединения воспалительного процесса в почках и ряда других;

- установить степень активности камнеобразования, в том числе для оценки эффективности применяемого комплексного лечения больным уролитиазом;

- определить состав камнеобразующих солей, что позволяет клиницисту назначить лечение направленного характера, т.е. с учетом вида формирующегося почечного камня;

- установить благоприятный период для удаления камня из организма больного (профилактика рецидивного камнеобразования);

- наблюдать течение мочекаменной болезни у каждого конкретного больного с целью разработки программы индивидуальной профилактики камнеобразования.

Морфологическая характеристика текстур биологических жидкостей при их структурировании в оптической ячейке. Одной из основ структурно-функционального баланса биожидкости, подчиняющегося сложным механизмам гомеостаза, является особая молекулярная структура, спонтанно образующаяся из амфифильных биологических молекул в водной среде. Нарушения, в этой структуре связаны с рядом биохимических изменений биожидкости, вызывающих функциональные расстройства и возникновение заболеваний (или являющиеся их следствием). Регистрировать нарушения в этой молекулярной структуре означает диагностировать патологический процесс на самой ранней, т.е. доклинической стадии развития. Аналогия молекулярной структуры биологической жидкости с жидкокристаллическими средами позволяет использовать оптические методы, применяемые для исследования таких сред. Молекулярные агрегаты, которые образуются в биожидкости, также обладают анизотропией свойств, дихроизмом, двулучепреломлением и оптической активностью. В то же время биожидкость не является однородным жидким кристаллом, а представляет собой сложную дисперсную систему, содержащую агрегаты липидов, белков и других биомолекул с жидкокристаллическим упорядочением.

Способность к кристаллизации как низко-, так и высокомолекулярных веществ различна и зависит не только от структуры молекул и межмолекулярных связей, но и характера окружающей сре-

ды. При изменении вязкости среды, появлении в ней избыточного количества продуктов незавершенного метаболизма, элементов деградации тканей, иммунных комплексов и других патологических образований создаются условия для развития "аномальных" кристаллов.

Принимая во внимание информационное значение приведенных данных для биологии и медицины, мы использовали морфологический метод оценки текстур, образующихся в биологической жидкости в процессе медленного испарения воды в оптической ячейке в норме и при различных патологических процессах в организме человека, с целью:

1) определения закономерностей кристаллизации биологических жидкостей в норме;

2) выяснения коррелятивных связей специфических изменений кристаллизации с конкретными патологическими процессами.

Нами изучены текстуры 3400 образцов различных видов биологической жидкости: сыворотки крови (2000), цельной крови (800), цереброспинальной (400) и слезной (200).

Данные поляризационно-оптического исследования показали, что имеются определенные отличия в образовании текстур биохид-костей, которые получены от практически здоровых лиц и больных различными заболеваниями. Наиболее четко мы проследили за образованием текстур сыворотки крови доноров и больных хроническими заболеваниями органов дыхания, пищеварения, с эндокринной патологией, онкологическими заболеваниями с Ш-1У стадией злокачественного роста.

Мы установили, что образование текстур различных видов биологической жидкости (кровь, слезная, цереброспинальная) происходит по единым закономерностям. В условиях нормы для каждого

вида биожидкости существует определенный набор текстур, при наличии патологического процесса состав текстур биожидкости меняется качественно и количественно. Нами разработана предварительная классификация текстур биожидкостей, по которой тестуры нормы мы обозначили как базисные, а текстуры, характеризующие состояние гомеостаза организма как адаптационное, декомпенсиро-ванное - вторичные, вторичные с признаками атипии, атипичные и состояние аморфизации.

Нами показано, что при заболеваниях, сопровождающихся адаптационными изменениями механизмов гомеостаза отмечается появление вторичных текстур, т.е. текстур, преобразованных из базисных, либо новых, в норме не встречающихся (игольчатые, веерные, полиморфные). При заболеваниях, сопровождающихся выраженными нарушениями механизмов гомеостаза отмечается появление различной цветовой гаммы в текстурах в отличие от монохромных базисных форм.

Нами установлено состояние угнетенного структурирования в Сиожидкости, т.е. состояния, когда текстуры в образце формируются с большим опозданием (в 2-3 раза дольше, чем обычно) или не образуются вообще (состояние аморфизации). Угнетение структурирования отмечается у больных при заболеваниях, сопровождающихся выраженным нарушением механизмов гомеостаза.

Для практического использования оценки состава текстур сыворотки крови в каждом конкретном случае нами предложено определять процентный состав базисных, вторичных, вторичных с признаками атипии, атипичных текстур и состояния аморфизации. Например: Б(10)В(75)ВА(5)А(10) означает, что при анализе 4-6 дублирующих образцов сыворотки крови состав текстур у больного следующий: базисные - 10%, вторичные - 75Х, вторичные с приз-

- 30 -

наками атипии - 57., атипичные - 10£.

В таблице 5 приведены данные распределения различных комбинаций текстур в сыворотке крови практически здоровых лиц и двух

Таблица 5

Характеристика распределения текстур в образцах сыворотки крови здоровых лиц и больных в зависимости от характера и тяжести заболевания

Группа Всего лиц Число лиц с выделенной комбинацией текстур"

Б Б+В Б+ВА Б+В+А Аморфиз.

0 (здоровые -доноры) 140 1007. 121 86* 19 147. 0 0 0

I (больные хроничес. заболев.) 67 100* 10 157. Р<0,001 47 707. Р<0,001 1 27. Р<0,001 5 77. Р<0,05 4 67. Р<0,05

II (онкологические больные) 192 1007. 10 57. Р<0,001 10 57. Р<0,001 62 327. Р<0,001 90 477. Р<0,001 20 117. Р<0,001

л - состав текстур: В - базисные, Б+В - базисные + вторичные, Б+ВА - базисные + вторичные с признаками атипии, Б+в+А - базисные + вторичные + атипичные;

групп больных в зависимости от характера и тяжести заболеваний до начала лечения. В первую группу вошли больные с хроническими заболеваниями органов дыхания, органов пищеварения, больные с эндокринной патологией (болезнь Иценко-Кушинга, синдром Стей-

на-Левенталя). Вторую группу составили онкологические больные с Ш - 1У стадией злокачественного роста.

Из данных таблицу видно, что в группе практически здоровых лиц состав текстур сыворотки крови в 86% исследованных образцов был представлен базисными и лишь в 14Х - базисными в сочетании с вторичными.

В группе больных хроническими заболеваниями органов дыхания, органов пищеварения и с эндокринной патологией 707. образцов сыворотки крови имели в своем составе комбинацию текстур, состоящую из базисных и вторичных.

В группе онкологических больных 777. образцов сыворотки крови имели в своем составе две комбинации текстур: базисные + вторичные + атипичные (477.) и базисные + вторичные с признаками атипии (32*).

При сравнении частоты встречаемости различных типов текстур и их комбинаций в группе практически здоровых лиц с группой больных хроническими заболеваниями и с группой онкологических больных выявлены достоверные различия (табл. 5).

В целях изучения коррелятивных связей изменений характера структурообразования в крови в процессе терапии были проведены наблюдения за образованием текстур сыворотки крови наблюдаемых групп в динамике. Все больные получали комбинированное лечение. В том числе больные хроническим гастритом и язвенной болезнью желудка получали медикаментозную терапию, больные с эндокринной патологией прошли курс ультрафиолетового облучения, больные с хроническими воспалительными заболеваниями органов дыхания - курс лазеротерапии, онкологические больные получали лучевую терапию.

На рис. 1 показано процентное соотношение состава текстур сыворотки крови в двух сравниваемых группах больных до и после лечения.

Из представленных данных видно, что в группе больных хроническими заболеваниями после окончания лечения состав текстур изменился. Так, не выявлено образцов сыворотки крови с комбинацией текстур: базисные + вторичные с признаками атипии, базисные + вторичные + атипичные. В образцах сыворотки крови после лечения больных не выявлено состояния аморфизации. Вместе с тем, достоверно возросло процентное содержание образцов с наличием базисных текстур: 42% вместо 15Х до начала лечения. После лечения отмечается уменьшение процентного содержания комбинации текстур: базисные + вторичные (597. вместо 70Х до лечения). Результаты проведенных исследований состава текстур сыворотки крови этой группы больных свидетельствуют об эффективности проведенного лечения. Эти результаты совпали с данными клинических наблюдений.

В группе онкологических больных наблюдается иная картина. После лечения не выявлено достоверного уменьшения состава комбинаций текстур: базисные + вторичные + атипичные (43Х вместо 477. до лечения). Процентное содержание образцов с состоянием аморфизации практически осталось на прежнем уровне, что и до лечения (102 вместо И7. до лечения). Достоверно возросло процентное содержание комбинаций текстур: базисные + вторичные с признаками атипии (48* вместо 327. до лечения) и базисные + вторичные (127. вместо 5Х до лечения). После лечения отмечается отсутствие образцов с наличием только базисных текстур сыворотки крови.

5)

Б*-Б Б-гВА

Тс- кетуры

лиорг;:зАш:н

В+8А Текстуры

В+В+А АМОРТИЗАЦИЯ 1

РИС. 1.

Процентное соотношение состава текстур сыворотки крови больных хроническими заболеваниями (а) и злокачественными новообразованиями Ш-1У ст. (б) до и после лечения.

Текстуры: Б - базисные, В - вторичные, ВА - вторичные с признаками атипии, А - атипичные.

Следовательно, изменения характера структурирования в образцах сыворотки крови больных коррелируют с клинической картиной заболевания и, в целом, достоверно соответствуют его тяжести.

Таким образом, структуры твердой фазы биологических жидкостей при медленном высушивании их в оптической ячейке имеют большое диагностическое значение. Доступность поляризацион-но-оптического метода изучения текстур биожидкости в оптической ячейке позволяет использовать его при массовых профилактических осмотрах, т.к. с его помощью можно достаточно четко дифференцировать практически здоровых лиц (имеющих сбалансированный гомеостаз) и людей с различными видами патологии. Метод позволяет оценить эффективность лечения, а также прогнозировать течение и исход заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Разработано новое направление в лабораторной диагностике, основанное на изучении специфики структурных параметров твердой фазы биологических жидкостей, характер которой определяется их химическим составом, тесно взаимосвязанным с особенностями течения физиологических и патологических процессов в организме.

2. Биологическая жидкость является самоорганизующейся системой, имеет внутреннюю программу фазового перехода, которая определяет закономерности процесса кристаллизации, в частности, образование специфических зон кристаллизации и дифференцировку формы кристаллических образований при переходе в твердую фазу в процессе высыхания. Материальными носителями данной программы являются органические и минеральные вещества, растворенные в биологической жидкости.

3. Зоны кристаллизации и формы анизотропных структур твердой фазы биологических жидкостей несут в себе информацию о состоянии гомеостаза, виде и активности патологических процессов, протекающих в организме.

4. Классифицированы физиологические и патологические морфо-типы анизотропных структур сыворотки крови, выявлено наличие отчетливых коррелятивных связей между положительным клиническим эффектом проводимой терапии и нормализацией данных структур у больных хроническими заболеваниями органов дыхания, пищеварения, с эндокринной и онкопатологией.

5. На основе сравнительного анализа зональных структур мочи разработан комплекс диагностических методов, позволяющий выявлять мочекаменную болезнь (как в клинической, так и в доклинической фазе ее развития), устанавливать активность камнеобразо-вания и состав камнеобразующих химических структур, дифференцировать пиелонефрит калькулезного и некалькулезного происхождения, проводить динамическое наблюдение за эффективностью комплексного лечения и определять направления его корректировки.

6. Разработан скрининговый экспресс-метод количественного определения белка в биологических жидкостях, основанный на исследовании их структурной организации в твердой фазе. Метод не требует специального оборудования, технически прост, проводится в микрообъемах, что обеспечивает его широкую доступность для учреждений практического здравоохранения.

V. Разработанное направление в области лабораторной диагностики внутренних болезней может служить основой для создания новых высокочувствительных методов, позволяющих выявлять патологические отклонения в широком диапазоне их качественных, количественных и временных характеристик.

- 36 -

Практические рекомендации

1. Рекомендовано использовать кристаллографические методы исследования биологических жидкостей в медицинской практике, позволяющие определять гиперпротеинемию, протеинурию, глюкозу-рию, а также диагностировать мочекаменную болезнь на доклинической стадии. Методы технически просты, отличаются высокой экономичностью и широко доступны для клинических лабораторий системы практического здравоохранения.

2. Впервые для клинической практики предложен метод оценки активности мочекаменной болезни, эффективности лекарственной и диетотерапии, позволяющий ' проводить динамическую коррекцию лечебных программ больных уролитиазом.

3. Предложен метод выявления лекарственных средств, вызывающих активизацию мочекаменной болезни или ее подавление.

4. Даны рекомендации по установлению периода мочекаменной болезни, оптимального для проведения литотрипсии и определению параметров ударной волны, наиболее эффективных для разрушения камня в зависимости от солевого состава его поверхностного слоя.

5. Предложен метод определения камнеобразующих солей при уролитиазе опосредованно путем исследования зон кристаллографической картины сухой капли мочи методом рентгеноспектрального микроанализа.

6. Предложена классификация кристаллических текстур крови, динамика изменения состава которых позволяет оценивать тяжесть заболевания, эффективность лечения и прогнозировать исход патологического процесса.

7. При малых количествах цереброспинальной жидкости, получаемой для диагностических целей, метод кристаллографического анализа является единственным широко доступным методом, позволяющим определить концентрацию белка.

- 37 -Внедрение в практику

Изданы методические рекомендации:

"Скрининговые методы исследования содержания белка и глюкозы в биологических жидкостях", 1990;

"Жидкокристаллические и кристаллические структуры в диагностике опухолей головного мозга", 1991;

"Кристаллические структуры крови в норме и при патологии", 1992;

"Система ранней диагностики мочекаменной болезни и мониторинга больных уролитиазом", 1995 (в печати).

Результаты исследований в настоящее время используются:

- в научных исследованиях отдела экспериментальной гематологии Нт клинической и экспериментальной иммунологии;

- в практической работе клинико-диагностической лаборатории МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского;

- в практической работе клинических лабораторий ЛПУ Московской области.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Скрининговые методы исследования содержания белка и глюкозы в биологических жидкостях.// Метод, рекомендации МЗ РСФСР; 1990 (соавт. В.Н.Шабалин, И.Л.Теодор, М.П.Выборов и ДР.).

2. Структурно-оптические показатели крови при синдроме склерокистозных яичников.//В сб.Тез.докл. П Всероссийского съезда эндокринологов-Челябинск-1991-с.283-284 (соавт.С.А.Макеев, С.А.Яковлев). ф

3. Жидкокристаллические и кристаллические структуры в ди-

агностике опухолей головного мозга.// Метод, рекомендации МЗ РСФСР; 1991 (соавт. В.К.Жестовский, С.А.Яковлев).

4. Роль кристаллографии в оценке эффективности лечения больных с дефектами свода черепа// В сб. науч. тр. ин-та повышения квалиф. руковод. работников и специалистов.-Химки, 1991.-Вып.5.-С.87-89.

5. Структурно-оптические параметры спинномозговой жидкости у больных с опухолями головного мозга// В сб. науч. тр. ин-та повышения квалиф. руковод. работников и специалистов.-Химки,

1991.-Вып.5.-С.89-91.

6. Динамика показателей перекисного окисления липидов, кристаллического и жидкокристаллического состояния структур крови при лазерной терапии больных с гнойными заболеваниями лёгких и плевры. //Лазеры в медицинской практике: Тезисы П конф.• Московского региона с международным участием.-Видное.,

1992.-С.194./соавт. И.Б.Лапрун, В.И.Щербина, Э.А.Гукасян).

7. Кристаллические структуры крови в норме и при патологии// Метод, рекомендации МЗ РСФСР; 1992 (соавт. В.Н.Шабалин, С.А.Яковлев).

8. Биокристаллические структуры и биоритмы// Актуальные проблемы экологической хронобиологии и хрономедицины: Тез. докл. междунар. науч. конф.-Екатеринбург, 1994.-С.205-210 (соавт. В.Н.Шабалин).

9. Значение новых скрининговых методов исследования мочи для оценки влияния экологических факторов на обмен веществ у детей// Экология детства: социальные и медицинские проблемы: Тез. докл. Всерос. науч. конф.-С.Петербург, 1994.-С.38-39 (соавт. В.Н.Шабалин).

10. Поляризационно-оптическая микроскопия слезы в диагностике проникающих ранений роговицы.//В сб. Тез.докл. У1 съезда офтальмологов России-Москва-1994-с.ЗГ/ (соавт. Г.Л.Прокофьева, В.П.Можерекков, С.А.Яковлев, Л.О.Назарова, С.Г.Сергушев, Л.Я. Абакумова).

11. Диагностическое значение структур твердой фазы сыворотки крови.//В сб. Тез.докл. У Российского съезда специалистов по лабораторной диагностике-Москва-1995-ч.П-с.309-310 (соавт. В.Н. Шабалин).

12. Способ количественного определения белка в биологической жидкости.//В сб. Тез.докл. У Российского съезда специалистов по лабораторной диагностике-Москва-1995-ч.П-с.312 (соавт. Г.А.Вай-нштейн, Г.Н.Свистунова).

13. Character of Blood Crystallisation as an Integral Index of Organism Homeostasis //Physical Chemical Biol. Med., 1995, V.2, N. 1, p.37-49 (with V.H.Shabalin, S.A.Yakovlev).

14. The structure of solid phase of human biological fluids under stress. /Society, stress and health. An Int. conf. in collaboration with World Health Organization, Moscow, Russia, 1995, p.30 (with V.N.Shaballn).

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ исследования содержащих белок образцов мочи. Авторское свидетельство на изобретение 1573425 (1988). Опубл.

23.06.90, Бюл. ц23.

2. Способ определения белка в биологической жидкости. Авторское свидетельство на изобретение 1681182 (1988). Опубл.

30.09.91, Бюл. n 36.

3. Способ диагностики злокачественных эпителиальных новообразований кожи. Авторское свидетельство на изобретение 1745047 (1987).

4. Способ диагностики пиелонефрита. Заявка на изобретение (1990). Положительное решение. ¡¡ШПвШП ¡vZObbBl1!.

5. Способ прогнозирования мочекаменной болезни. Заявка на изобретение (1990). Положительное решение. flQJTJGU/n л/

6. Способ определения степени активности уролитиаза. Заявка на изобретение (1992). Положительное решение.

7. Способ определения состава солей мочи при уролитиазе. Заявка на изобретение (1992). Положительное решение.

8. Methods for diagnosis of complex urolithiasis and prognosis of urolithiasis. Междунар.заявка PCT/SU91/00140 G 01 H 33/68. Заявлено 09.07.91; опубл. PCT Gazette-section 1, н 05/92, Int. Publication Number: WO 92/02821, 20.02.92.

9. Method for determining llthogenesis activity rate and urlna llthogenetlc salts content In urolithiasis. Междунар.заявка PCT/RU 93/00105 G 01 м 33/493. Заявлено 06.05.93; опубл. PCT Gazette, Int. Publication Number: WO 93/ 23753, 25.11.93.

10. Способ оценки состояния гомеостаза организма. Пат. ц 2007716 РФ (1994). Заявлено 28.07.91.

11. Methods of diagnosing complicated urolithiasis and predicting urolithiasis/ United States Patent n 5,366,899. Date of Patent: Nov.22, 1994.