Автореферат и диссертация по медицине (14.03.03) на тему:Биологические свойства десневой жидкости в патогенезе хронических генерализованных гингивита и пародонтита

на правах рукописи

ДОМАНОВА ЕЛЕНА ТОВЬЕВНА

БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ДЕСНЕВОЙ ЖИДКОСТИ В ПАТОГЕНЕЗЕ ХРОНИЧЕСКИХ ГЕНЕРАЛИЗОВАННЫХ ГИНГИВИТА И ПАРОДОНТИТА

14.03.03 - Патологическая физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата наук

1 8 НАР 2015

005560712

Чита-2015

005560712

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Читинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской федерации.

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор Цыбиков Намжил Нанзатович Официальные оппоненты:

Шилов Сергей Николаевич - доктор медицинских наук, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Новосибирский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, доцент кафедры патологической физиологии и клинической патофизиологии.

Молоков Владислав Дмитриевич - профессор, доктор медицинских наук, Заслуженный врач Российской Федерации, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, заведующий кафедрой терапевтический стоматологии.

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова" Министерства здравоохранения Российской Федерации

г. Москва.

Защита состоится" Я¿¿41/3 2015 года _ на заседании

диссертационного совета Д.208.118.01 при ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (672000, г. Чита, ул. Горького, 39а)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения Российской Федерации (672090, г. Чита, ул. Горького, 39а) и на сайте: http://chitgшa.n^nauЫzashcЫta-dissertatsij?task==item.view&id=22

Автореферат разослан

2 7. ¿>2. 10/5-

дата

Ученый секретарь

диссертационного совета Д.208.118.01

д.м.н., профессор И.Н. Гаймоленко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема заболеваний пародонта является актуальной в стоматологии. Эпидемиологическая распространенность гингивита и пародонтита колеблется в пределах 60%, превалируя над другими стоматологическими заболеваниями, и с возрастом увеличивается до 75% (Янушевич О.О., 2008, Осипова М.В., 2012, EkeP.I., 2012).

На сегодняшний день нет общепринятого взгляда на патофизиологию воспалительных заболеваний пародонта. Важную роль в их развитии отводят местным факторам иммунитета и микрофлоре полости рта. Воспаление начинается с бороздкового эпителия и эпителиального прикрепления. Ведущим компонентом патогенеза является зубодесневая жидкость. Это уникальная структура, функционально хорошо приспособленная к постоянному присутствию бактерий и их продуктов. В ее состав входят: 95-97% нейтрофилов, от 1 до 2% лимфоцитов, от 2 до 3% моноцитов; компоненты системы комплимента и гемостаза; биологически активные вещества, продуцируемые клетками и флорой. В норме активность биологически активных веществ в дес-невой жидкости невелика, но она меняется при развитии воспаления в пародонте. Если адаптационные резервы автономного иммунитета дес-невой бороздки находятся в стабильно активном состоянии, то повреждающий эффект микроорганизмов либо вообще не реализуется, либо сводится к минимуму, ограничиваясь поверхностным воспалением тканей пародонта. В ответ на бактериальный эндотоксин осуществляется массивный выброс цитокинов из клеток врожденного и адаптивного иммунитета, направленных не только на защиту пародонта, но и на повреждение самой ткани. Вызванное разрушение поддерживает очаг воспаления, со временем приобретающий хронический характер, часто рецидивирующий (Зайратьянц О.В, 2007, Bascones А., 2005).

Степень разработанности темы исследовании. В патогенезе воспалительных заболеваний пародонта (ВЗП) доминирующую роль играет частичное или полное вытеснение непатогенных видов микрофлоры и усиленное размножение бактерий не свойственных для здоровой биопленки полости рта. (Захаров, A.A., 2007). Эпите-лиоциты, при контакте с патогенными микроорганизмами, экспрес-сируют рецепторы для миграции клеток врожденного и адаптивного иммунитета и синтезируют ряд цитокинов, обладающих свойствами хемоаттракгантов (Цепов Л.М., 2009). Привлеченные клетки

уничтожают внедрившиеся патогенные микроорганизмы, происходит мощный выброс активных веществ, направленных не только на защиту пародонта, но и на повреждение самой ткани (Van Dyke Т.Е., 2013). Повышение концентрации провоспалительных цитокинов в первую очередь повреждает эндотелий сосудов (Игнатов М.Ю., 2010). При этом высвобождаются соединения, усиливающие гемостаз и активирующие фибринолиз (Беликов П.П., 1990). В свою очередь, уровень биологически активных веществ контролируется аутоантителами (аАТ) (Кузник Б.И., Цыбиков H.H., 1982-20Игл). Однако, характер взаимодействия факторов защиты определяющих хроническое течение гингивита и пародонтита изучен не достаточно. Необходимо ответить: дисбаланс каких компонентов, поддерживает очаг воспаления в хронической стадии заболевания. Становится очевидным, что разработка данной проблемы является актуальной, с точки зрения, установления важных звеньев патогенеза. Решение данной задачи раскроет перспективы повышения эффективности лечения ВЗП.

Цель исследования:

Исследовать гемостатические и иммунные свойства десневой жидкости при развитии хронических генерализованных гингивита и пародонтита.

Задачи исследования:

1. Изучить коагулогические и фибринолитические свойства десневой жидкости здоровых людей, больных хроническим гингивитом и содержимого пародонтального кармана при пародонтите, а также оценить экспрессию тканевого фактора в клетках десневой жидкости.

2. Исследовать содержание интерлейкинов: IL-lß, IL-6, IL-8, TNF-а, рецепторного антагониста к интерлейкину-1 ß, а-дефензинов, белка теплового шока-70, эндотелина-1 и аутоантител к ним в десневой и ротовой жидкости, сыворотке крови у здоровых, больных хроническим гингивитом и пародонтитом.

3. Определить лимфоцитарно-тромбоцитарную агрегацию, фагоцитарную активность нейтрофилов донорской крови под влиянием десневой жидкости здоровых, пациентов с хроническим гингивитом и содержимого пародонтального кармана при пародоптите.

Научная новизна:

Показано, что десневая жидкость здоровых активирует фиб-рннолиз, однако у больных хроническим гингивитом и пародонтитом лизис фибрина тормозится.

Доказано, что нейтрофилы и эпителиальные клетки десневой жидкости здоровых, больных хроническим гингивитом и иародон-титом экспрессируют тканевой фактор, который визуализируется иммуноцитохимическим методом.

Установлено, что в десневой и ротовой жидкости здоровых, больных хроническим генерализованным гингивитом и пародонти-том содержится рецепторный антагонист к интерлейкину-1 р, белок теплового шока-70, а-дефензины, уровень которых возрастает в десневой жидкости при воспалительных заболеваниях пародонта.

Впервые доказано содержание аАТ к интерлейкину-1 р, белку теплового шока-70, а-дефензинам в десневой, ротовой жидкостях и сыворотки крови, уровень которых возрастал при воспалительных заболеваниях тканей пародонтального комплекса.

Выявлены корреляционные взаимодействия между 1Ь-1 р, -6, -Б, ТЬТ-а и коагулогическими свойствами десневой жидкости, свидетельствующие о важной роли гемостатического потенциала в патогенезе хронического воспаления пародонта.

Впервые обнаружено, что десневая жидкость стимулирует лим-фоцитарно-тромбоцитарное розеткообразование и фагоцитарную активность нейтрофилов, особенно при хроническом гингивите, в то время как, при хроническом пародонтите снижается интенсивность образования лимфоцитарно-тромбоцитарных агрегатов и фагоцитарная способность нейтрофилов.

Теоретическая и практическая значимость работы: Результаты исследования позволяют уточнить патогенез хронического гингивита и пародонтита с участием мозаики про- и про-тивоспалительных цитокинов, эндотелина, белка теплового шока-70, а-дефензинов, гемостатического и, фибринолитического потенциалов десневой жидкости, динамики аутоантител к биологическим веществам и прогнозировать течение заболеваний. Внедрение результатов исследования: Полученные результаты внедрены в учебный процесс на кафедрах патологической физиологии, стоматологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава".

Методология и методы исследования: Этическая экспертиза диссертационного исследования проведена на заседании ЛЭК от 6.11.2009 г. (протокол № 2).

В рамках нашего исследования было проведено обследование 45 человек: 15 - практически здоровых (Н-норма); 15 пациентов с хроническим генерализованным гингивитом средней степени тяжести стадия ремиссии (ХГ); 15 - с хроническим генерализованным пародонтитом средней степени тяжести стадия ремиссии (ХП). Средний возраст в клинической группе 35 лет. В 100% случаев диагнозы были подтверждены рентгеновским исследованием - одон-топародонтограмма и системой индексов. Группа (Н) являлась донором крови в проведении контрольных исследований - (К) для оценки влияния десневой жидкости на гемостаз, фагоцитоз и лим-фоцитарно-тромбоцитарную адгезию.

Объектом исследования были биологические жидкости: содержимое десневой борозды (СДБ) - десневая жидкость здоровых людей, пациентов с диагнозом хронический гингивит и содержимое пародонтального кармана (СПК) больных пародонтитом, получали утром до приема пищи и чистки зубов путем аспирации содержимого борозды или кармана по методу Робустовой Т.Г., (1990). Сбор материала проводили 5 раз в течение одних суток.

Ротовую жидкость получали утром до приема пищи и чистки зубов без стимуляции слюнных желез в пластиковые пробирки.

Кровь забиралась утром, натощак от здоровых доноров пунк-ционным методом из локтевой вены в количестве 5мл в пластиковые пробирки. Сыворотка крови.

Критерии включения в исследование: больные в возрасте от 20 до 45 лет с диагнозом хронический генерализованный гингивит степени тяжести, стадия ремиссии и хронический генерализованный пародонтит средней степени тяжести, стадия ремиссии.

Критерии исключения из клинической группы: беременность; острые воспалительные реакции в полости рта; ортодонти-ческие конструкции; выраженные зубочелюстные аномалии; острые и хронические воспалительные заболевания в стадии обострения; гематологические заболевания.

Состояние тканей пародонта оценивали по клиническим методикам: жалобы больных, анамнез основного заболевания, профессиональные вредности, сопутствующие заболевания. При объективном осмотре фиксировали зубную формулу, индекс КПУ, определяли состояние прикуса, прикрепление уздечек, состояние десен (цвет, отечность, кровоточивость), наличие мягких и твердых зуб-

ных отложений, и патологическую подвижность зубов. Проводили рентгеновское исследование. Гигиеническое состояние полости рта определяли по индексу OHI-S (Green, Vermilion,I960), воспаление тканей пародонта - папиллярно-маргинально-альвеолярный индеек

- РМА (Parma С., 1960), ИК - степень кровоточивости по Н. Mullemann и S.Son (1971), ПИ - степень деструкции по A. Russel (1956), измеряли глубину пародонтальных карманов (ВОЗ, 1990). Клиническое состояние тканей пародонта оценивали с помощью пробы Шиллера-Писарева.

Критерии включения в группы "К" - контроль и "Н" -норма: отсутствие объективных признаков воспаления тканей пародонта; сохраненные зубные ряды и ортогнатический прикус.

Критерии исключения из групп "К" - контроль и "Н" -норма: беременность; острые воспалительные реакции в полости рта; ортодонтические конструкции; выраженные зубочелюстные аномалии; острые и хронические воспалительные заболевания в стадии обострения; гематологические заболевания.

Лабораторные методы исследования

Фагоцитарная активность нейтрофилов периферической крови оценивали по методу Фрейдлин И.С., (1976) в модификации. Нейтрофилы выделяли из донорской крови. Инкубировали с СДБ или СПК (кроме пробирки "К" - контроль), центрифугировали, окрашивали по Романовскому - Гимзе. Подсчитывали фагоцитарное число (ФЧ) - количество тест-объектов, поглощенных одним нейт-рофилом, фагоцитарный индекс (ФИ-%) - процент клеток, вступивших в реакцию фагоцитоза к общему числу.

Оценка лимфоцнтарно-тромбоцитарной адгезии проводилась в модификации. Гепаринизированную кровь здоровых доноров инкубировали с СДБ или СПК (кроме пробирки "К" - контроль), далее по стандартному методу Ю.А. Витковского и соавт. (1999). Подсчитывали лимфоцитарно-тромбоцигарный индекс (J1TA И %)

- процент лимфоцитов, вступивших в реакцию адгезии с тромбоцитами к общему числу лимфоцитов. Лимфоцитарно-тромбоцитар-ное число (J1TA Ч п=) - количество тромбоцитов, участвующих в адгезии с одним лимфоцитом.

Определение интерлейкипов, а-дефензнна,белка теплового шока -70,эндотелина-1. по методу ИФА, набор реагентов ТОО "Вектор-Бест" (г. Новосибирск).

Определение аутоантител к интерлейкину lß, а-дефен-зину, и белку теплового шока - 70 по методу ИФА (ТОО Вектор Бест г. Новосибирск) общепринятым методом.

Для оценки гемостаза использовали нитратную тест-плазму от здоровых доноров. Определяли: время рекальцификации (Bp) (Bergerhof, Roka 1954), каолиновое время (КВр) (Баркаган З.С., 2001) в модификации. В 100 мкл тест-гшазмы здоровых доноров вносили СДБ или СПК, инкубировали, далее проводили стандартный гест. Эуглобулиновый фибринолиз (ЭуФ) (Kowarzyk Н. и Buiuk L. 1954), хагеманзависимый (каолиновый) фибринолиз (ХгФ) (Ве-ремеенко К.Н. 1978) в модификации. СДБ или СПК вносили после осаждения эуглобулиновой фракции тест-плазмы, что позволяет выявить ингибиторы в биологических средах больных ВЗП.

Иммуноцитохимическое исследование тканевого фактора биотин-стрептавидиновым иммунопероксидазным методом с мышиными моноклональными антителами к тканевому фактору человека - TF (TF9-10H10) производства Santa Cruz biotechnology (USA)

Статистическая обработка полученных данных проводилась с применением пакета прикладной программы "BIOSTAT" и STATISTICA® версии 6.0, StatSoftlnc., (USA). При сравнении групп использовался U - критерий Манна-Уитни. Различия считали значимыми при р<0,05. Результаты исследования представлены как Ме± SD и 25 и 75 процентили. Корреляционный анализ проводили по методу Спирмена.

Апробация основных положений работы: Результаты работы доложены на региональной научно-практической конференции (г. Улан-Удэ 2009г), краевой научно-практической конференции "Актуальные вопросы стоматологии" (г. Чита 20 Юг), 1 межрегиональной научно-практической конференции врачей - стоматологов Федерального Сибирского Округа (г. Чита 2011г), всероссийской научно-практической конференции с международным участием (г. Новосибирск 2012г), всероссийской научно-практической конференции с международным участием "Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины" (г. Чита 2013г), III научно-практической конференции с международным участием "Человек: здоровье, медицина, экология" (г. Хайиань 2013г), международной научно-практической конференции "Проблемы современной медицины: актуальные вопросы" (г. Красноярск 2014г)

Публикации: по материалам диссертации опубликовано 11 работ, из них 4 статьи в ведущих рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.

Объем и структура работы: Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций, иллюстрирована 14 таблицами, 11 рисунками. Указатель литературы включает 203 источника, из которых 103 отечественных, 100 зарубежных.

Положения выносимые на защиту:

1. В содержимом десневой борозды у здоровых и в большей степени у больных хроническим гингивитом и пародонтитом регистрируются тромбогенные соединения стимулирующие реакции фибриноообразования донорской тест плазмы. Десневая жидкость здоровых и особенно больных хроническим гингивитом и пародонтитом тормозит эуглобулиновый и хагсманзависимый фибринолиз. Нейтрофилы и эпителиоцигы десневой жидкости здоровых и больных экспрессируют тканевой фактор.

2. При воспалительных заболеваниях пародонта в десневой, ротовой жидкостях и сыворотке крови, выявлена высокая концентрация ин-терлейкинов: 1Ь-1(3,1Ь-6,1Ь-8, фактора некроза опухолей-а, рецеп-торного антагониста к интерлейкину-1р, а-дефензинов, белка теплового шока-70, эндотелина-1 и аутоантител к ним, играющих значительную роль в патогенезе хронических заболеваний десны.

3. Десневая жидкость здоровых, больных хроническим гингивитом и пародонтитом активирирует образование лимфоцитарно-тром-боцитарных агрегатов и фагоцитарную активность нейтрофилов донорской крови в большей степени у пациентов с хроническим гингивитом.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСЛЕДОВАНИЙ Коагулогические и фибринолнтические свойства содержимого десневой борозды здоровых, больных хроническим генерализованным гингивитом и содержимого пародонталь-ного кармана при хроническом генерализованном народон-тите. Предварительная инкубация тест-плазмы полученной от здоровых доноров с содержимым десневой борозды (СДБ) исследуе-

мых лиц без ВЗП, приводит к сокращению времени рекальцифика-ции (Вр), добавление каолина (КВр) дает максимальную активацию контактной фазы свертывания в сравнении с контролем - "К" (р<0,05) (Табл. 1).

Таблица 1

Коагулогические и фибринолитические свойства десневой жидкости здоровых, пациентов хроническим гингивитом и содержимого пародонтального кармана больных хроническим пародонтитом

\leiSD (25,00 и 75,00) К- контроль Н - норма ХГ - хронический гингивит ХП-хроничес-кий пародонтит

Вр (сек) 153,4±5,8 (148,5- 156,8) 132,7+4,7 (127,3 - 136,2)* 110,0+6,6 (104,8- 114,0)*; ** 93,6±5,6 (90,4 - 97,0) *; ***

Шр (сек) 121,0+6,4 (114,0- 124,9) 107,3±5,8 (102,7- 110,7)* 95,3±7,4 (90,2- 102,0) *; ** 82,5+6,3 (75,2 - 88,5) *; ***

ЭуФ (мин) 220,0125,1 (200,0 - 225,0) 150,0±18,8 (140,0- 165,0)* 280,0±20,4 (260,0 - 290,0) ** 340,0+20,4 (320,0 - 350,0) *; **.

ХгФ (мин) 12,3±1,5 (10,3- 13,3) 6,0+1,2 (5,3 - 7,6)*05 19,3±1,9 (18,3-21,0) *. ** 27,6+3,0 (25,6 - 30,6) *;

Примечание: (и-тест) статистически значимых отличий: * - по сравнению с контролем при (р<0,05); **- уровень отличий между нормой, хроническим гингивитом и хроническим пародонтитом (р<0,05); ***- между хроническим гингивитом и хроническим пародонтитом (р<0,05).

Стимуляция реакции рекальцификации тест-плазмы доноров с СДБ больных с ВЗП, приводит к выраженному укорочению времени коагуляции, как у пациентов с хроническим генерализованным гингивитом (ХГ) и, в особенной степени, у больных хроническим генерализованным пародонтитом (ХП) по сравнению с "К" и "Н" - нормой (р<0,05). Данное обстоятельство предполагает наличие активатора коагуляции в десневой жидкости и СПК у пациентов с ВЗП.

Инкубация осажденной эуглобулиновой фракции тест-плазмы с СДБ и СПК приводит к значительному торможению времени растворения фибринового сгустка. В случае, когда СДБ или СПК до-

бавляли к плазме после осаждения эуглобулиновой фракции, время растворения фибринового сгустка значительно тормозилось, как в тесте эуглобулинзависимого и хагеманзависимого фибрино-лиза. Для сравнения в "К", время ЭуФ составило 220,0 мин., ХгФ - 12,3 мин.

Полученные данные свидетельствуют, что СДБ и С ПК содержат антифибринолитический фактор, возможно содержащийся в клетках.

При изучении иммунноцитохимических препаратов зубодесне-вой жидкости здоровых, пациентов с гингивитом отчетливо видно, что тканевой фактор выявляется в цитоплазме нейтрофилов, а у больных ХП и в эпителиальных клетках.

Таким образом, хронические воспалительные заболевания гингивит и пародонтит характеризуются слабой фибринолитической активностью и склонностью к гиперкоагуляции. Данное обстоятельство ведет к метаболическим нарушениями в тканях пародонта и формирует "порочный круг" в патогенезе ВЗП.

Воспалительные заболевания пародонта сопровождаются резким повышением уровня провоспалительных цитокинов 1Г-1 р, -6, -8, Т^-а (Рис. 1). Для определения патогенетических взаимосвязей цитокинов и показателей гемостаза проведен корреляционный анализ. У здоровых пациентов активность фибринолиза и коагуляции плазмы зависит от 1Ь-8 в СДБ, что подтверждается положительными корреляционными связями. Повышение концентрации 1Ь-1Р у больных с ХГ оказывает прямое влияние цитокина на гиперкоагуляцию и снижение фибринолитической активности. Увеличение продукции ТОТ-а при ХП способствует развитию тромбозов, что подтверждается умеренной корреляционной связью с показателями гемостаза. При воспалении высокие концентрации 1Ь-6 активируют продукцию белков острой фазы (БОФ) (Кузник Б.И., 1989). Корреляционный анализ подтверждает опосредованное влияние 1Ь-6 на ингибирование фибринолиза и активацию свертывания крови при ХГ и ХП.

Увеличение концентрации цитокинов 1Ь-6,1Ь-8, Т№"-а, 1Ь-1 р в десневой борозде и пародонтальном кармане больных с ВЗП, сопровождается гиперкоагуляцей и депрессией фибринолиза, что определяет хроническое течение и ведет к прогрессированию воспалительного процесса.

Здоровый пародонт

Хронический гингивит

Рисунок 1. Уровень интерлейкинов в десневой жидкости здоровых, больных хроническим генерализованным гингивитом и в содержимом паро-донтального кармана при хроническом генерализованном пародонтите Примечание: (Ь'-тест) статистически значимых отличий: * - но сравнению со здоровым пародонтом при (р<0,05); ** - между хроническим гингивитом и пародонтигом (р<0,05)

Содержание интерлейкина 1Ь1р, аутоантител и !Ь-Ша у здоровых и при воспалительных заболеваниях пародонта. У

здоровых лиц содержание 1Ь-1р в РЖ выше, чем в СДБ (р<0,05), что отражает местную генерацию интерлейкина клетками, контактирующими с микрофлорой полости рта. В тоже время отмечается высокий уровень П_-1в СДБ по сравнению с РЖ (р<0,05) и сывороткой (р<0,05) (Табл. 2). Данное обстоятельство является сдерживающим моментом присутствия 1Ь-1 р в СДБ. Следует заметить, что уровень аутоантител (аАТ) класса з1§А в РЖ находится в следовых значениях, что позволяет 1Ь-1р поддерживать оптимальный уровень микрофлоры в полости рта. В сыворотке концентрация цитокина ниже, чем в СДБ (р<0,05) и РЖ (р<0,05), чтобы избежать развития системного воспаления.

При ХГ повышенная концентрация 1Ы р в СДБ отражает работу цитокина, как инициатора воспалительного процесса. В тоже время высокие значения 1Ь-1 Ка сдерживают интенсивность воспаления, что, возможно, определяет хроническое течение заболевания. В РЖ содержание 1Ь-1Р регистрируется на высоком уровне, что объясняется

Таблица 2

Уровень 1Ь-1р, аутоантител и 1Ь-1Яа здоровых и при воспалительных заболеваниях пародонта

Me ±SD (25,00 и 75,0Ü) Здоровый пародонт Хронический гингивит Хронический пародонтит

Уровень IL-ip (пг/мл)

СДБиСПК 23,0 ±4,9 (28,0-19,3) 56,9± 19,8 (48,3-59,9)* 97,6±166,5 (84,2-130,7)*; **

Ротовая жидюсть 60,5± 11,8 (47,6-68,2)*** 48,9± 13,0 (41,3-58,3)*; *** 87,0± 32,8 (61,4-96,2)*

Сыворотка 17,6+3,6 (13,0-20,0)****; ***** 28,615,3 (24,3-40,3)**** 37,8± 19,1 (30,2-59,0)*; **

Уровень аутоантител к IL-ip (единицы оптической плотности)

СДБ и СПК (аутоантитсла класса slgA) 0,141 + 0,21 (0,08-0,15) 0,119+0,25 (0,08-0,365) 0,108+0,03 (0,09 - 0,12)

Ротовая жидаисть (аутоалтнтела кчасса slgA) 0,09±0,03 (0,07-0,10) 0,176+0,10 (0,10-0,29)* 0,096± 0,04 (0,07-0,16)

Сыворотка (аутоантитела кчасса IgG) 0,292± 0,68 (0,14-0,90)****; ***** 0,892+ 0,62 (0,34-1,19)****; ***** 1,008+0,83 (0,19-1,52)****; *****

Содержание IL-Ша (пг/мл)

СДВ и СПК 6391,01197,8 (6289,0-6614,0) 6448,0±352,5 (5804,0-6539,0) 5097,0±2098,1 (1204,0-6019,0)*; **

Ротовая жидюсть 252,0±59,5 (230,8-282,5)*** 1570,011657,0 (1356,0-1974,0)*; **,* 4904,011718,1 (2558,0-5413,0)*; **

Сыворотка 1395,0±2555,5 (980,1-6001,0)****; ***** 2439,011942,8 (1348,0-2812,0)**** 2903,0±2015,7 (2690,0-6254,0)

Примечание: (и-тест) статистически значимых отличий: * - по сравнению со здоровым пародонтом при (р<0,05); ** - между хроническим гингивитом и пародонтитом (р<0,05); *** - между содержимым десневой борозды и ротовой жидкостью (р<0,05); ****- между содержимым десневой борозды и сывороткой (р<0,05); *****- между ротовой ж1Шкостыо и сывороткой (р<0,05)

активностью местного иммунитета полости рга, к тому же концентрация 1Ь-1Иа ниже, чем в С ДБ (р<0,05) и сыворотке, что дает цитоки-

ну 1Ь-1р значительную свободу действий. Но аАТ класса sIgA, все же ограничивают полноту действий цитокина, сдерживая интенсивность воспаления на уровне хронического, но не острого воспаления. Так же отмечается значительное содержание 1Ь-1Яа и повышенный уровень аАТ класса в^.дем РЖ (р<0,05) и СДБ (р<0,05).

Умеренные корреляционные связи между 1Ь-1р и и аутоанти-телами класса з^А, все же ограничивают полноту действий цитокина, сдерживая интенсивность воспаления на уровне хронического (Табл. 2). В сыворотке содержание 1Ь-1р находится в низших значениях по сравнению с СДБ (р<0,05) и РЖ (р<0,05), в совокупности с этим достаточно высокий уровень 1Ь-1Ыа в сравнении с РЖ (р<0,05) и аутоантител класса ^С в отличие от его уровня в СДБ (р<0,05) и РЖ (р<0,05), являются блокирующим фактором для 1Ь-1р, что подтверждается умеренным« корреляционными отношениями цитокина и аутоантител.

Хронический пародонтит характеризуется значительным содержанием 1Ь-1р как в СПК, так и в РЖ и СВ по сравнению со здоровыми (р <0,05) и ХГ (р,<0,05). Данное обстоятельство отражает интенсивный воспалительный процесс. Уровень аутоантител резко увеличивался в СВ по сравнению с СПК (р<0,05) и РЖ (р<0,05), что является сдерживающим компонентом в развитии системного воспаления. Концентрация 1Ь-Ша выше в СДБ гингивита, чем в СПК пародонтита (р<0,05), что указывает на истощение количества антагониста, вследствие хронического течения заболевания.

Таким образом, содержание 1Ь-1р при хронических воспалительных заболеваниях гингивит и пародонтит контролируется ре-цепторным антоганистом и аутоантителами к нему. Ограничивают полноту действий цитокина, сдерживая интенсивность воспаления на уровне хронического, но не острого.

Уровень а-дефензина н аутоантител к нему в ротовой жидкости, сыворотке, десневой жидкости здоровых, больных хроническим генерализованным гингивитом и содержимом пародонталыюго кармана при хроническом генерализованном пародонтите. Выявлено, что у лиц со здоровым паро-донтсм в СДБ наблюдается высокая концентрация а-дефензина (НЫР-а), что обеспечивает достаточный потенциал защиты (Рис. 2). Установлены прямолинейные корреляционные связи между Ил-8 (21,61пг/ мл) и дефензином, отражающие влияние хемокина на уровень пептида в десневой борозде. Уровень аутоантител выявленных в содержи-

мом десневой борозды несколько выше, чем у ХГ, но меньше XII (р<0,05). ААТ регулируют активность Н№-а в десневой жидкости, не допуская развития восналения, и, в тоже время, поддерживают определенный уровень свободных молекул для участия в иммунном ответе. Данное обстоятельство подтверждается корреляционной связью аАТ с НЫР-сх. В ротовой жидкости уровень НМР-а здорового пародонта в 9 раз ниже, чем в десневой. Концентрация дефензина в СВ у пациентов без ВЗП коррелировала с уровнем аАТ класса ^О, что является необходимым во избежание системного воспаления. а-Дефензин (НМР-а)

Десневая жидкость

Ротовая жидкость

Сыворотка

ШЗдоровый пародонт □ Хронический гингивит В Хронический пародонтит___________

Аутоантитела к НЫР-а

Десневая жидкость

Ротовая жидкость

Сыворотка

Рисунок 2. Уровень а-дефензина (НОТ-а) и аутоантител у здоровых и при воспалительных заболеваниях пародонта.

При хроническом гингивите содержание дефензинов в СДБ несколько снижается по сравнению со здоровыми (р<0,05), но оста-

ется значительным, количество аАт снижено, что дает возможность НИР-а активно участвовать в иммунном ответе. При ХГ и в большей степени при ХП содержание пептида в РЖ повышается, что отражает активность местного иммунитета и характеризует его интенсивность в борьбе с патогенной микрофлорой.

Уровень аАТ класса sIgA этих нозологических групп регистрировался на низших значениях, что в свою очередь позволяет функционировать ШЧР-а в полном объеме.

Хронический пародонтит характеризуется малой концентрацией дефензина в СПК в сравнении со здоровыми (р<0,05) и больными гингивитом (р<0,05). Возможно, вследствие потребления пептида в ходе воспалительной реакции или по причине уменьшения ИЛ-8 (42,39 пг/мл) по сравнению с ХГ (р<0,05), или вследствие активного синтеза аутоантител, блокирующих активность а-дефензина.

В сыворотке как при гингивите, так и пародонтите содержание а-дефензинов увеличивается. Содержание аАТ класса значительно выше при ХП по сравнению со здоровыми (р<0,05) и ХГ, что является блокирующим эффектом работы пептида и предполагает защитный механизм от его разрушающего действия на системном уровне, сохраняя воспалительный процесс стабильно хроническим.

Таким образом, уровень НЫР-а наглядно отражает иммунный потенциал полости рта при ВЗП. Аутоантитела к а-дефензину и хемокин Ил-8 способны регулировать концентрацию пептида у лиц со здоровым пародонтом и пациентов с хроническим гингивитом.

Уровень белков теплового шока - 70 и аутоантител к нему в ротовой жидкости, сыворотке, содержимом десне-вой борозды здоровых, больных хроническим генерализованным гингивитом и содержимом пародонтального кармана при хроническом генерализованном пародонтите.

У здоровых лиц уровень Н8Р - 70 регистрировался в СДБ и РЖ, причем содержание в РЖ было несколько выше (р<0,05), чем в десневой борозде, что объясняется большим количеством контактной микрофлоры и необходимостью поддерживать оптимальный уровень микроэкологии полости рта (Рис. 3). В свою очередь концентрация аАТ класса sIgA определялась в высоких значениях как в РЖ, так и в СДБ. Данное обстоятельство подтверждается умеренной корреляционной связью между ШР - 70 в СДБ и уровнем аАТ класса ь'^Л, что на наш взгляд, свидетельствует о динамичном равновесии регулируемого гомеостаза организма. В сыворотке

крови у пациентов без ВЗП белок теплового шока не обнаруживался, но о присутствии шаперона говорит наличие аАТ класса ч^А.

При хроническом гингивите высокие значения ШР - 70 регистрировались в СДБ и несколько снижались в РЖ (р<0,05), уровень аАТ наблюдался в значительных концентрациях в РЖ (р<0,05) по сравнению с СДБ. В сыворотке крови пациентов с ХГ регистрируется слабая концентрация шаперона. Содержание аАТ ниже при ХГ по сравнению со здоровыми (р<0,05) и ХП, что позволяет функционировать НБР - 70 в полном объеме.

Белок теплового шока НБР-ТО

пг/мл Десневая Ротовая Сыворотка

__жидкость_жидкость__________

ШЗдоровый пародонт □ Хронический гингивит

НХронический пародонтит

Аутоантитела к Н5Р-70

Десневая Ротовая Сыворотка

ед.оп.п "

жидкость жидкость

Рисунок 3. Уровень белков теплового шока НБР - 70 и аутоантител у здоровых и при воспалительных заболеваниях пародонта.

Хронический пародонтит знаменуется подъемом уровня Н5Р - 70 в РЖ. Но высокое содержание аАТ класса sIgA к шаперону тормозит про-воспалительную деятельность белка. Данный факт отражает хроническое течение воспалительного процесса, что подтверждается умеренной корреляционной связью. В СПК содержание ШР - 70 и аАТ класса sIgA снижено по сравнению с РЖ (р2<0,05), что связано с потреблением белка в ходе реакции воспаления. Регистрировались корреляционные связи между Н8Р - 70 и аАТ, что подтверждает блокирующий механизм последних в отношении белка. В сыворотке концентрация НБР -70 уменьшалась по сравнению ХГ (р<0,05), уровень аАТ класса ^О был значительно выше, чем у лиц без ВЗП (р<0,05) и при ХГ (р<0,05).

Таким образом, высокое содержание аутоантител снижает активность НБР - 70, сохраняя воспалительный процесс стабильно хроническим.

Уровень эндотелина-1 в ротовой жидкости, сыворотке, содержимом десиевой борозды здоровых, больных хроническим генерализованным гингивитом и содержимом пародонтального кармана при хроническом генерализованном пародонтите. Уровень ЭТ-1 в десневой жидкости и СПК возрастает в группах больных ХГ и значительно при ХП, по сравнению с показателями группы здоровых (Рис. 4). Поскольку ЭТ-1 действует преимущественно местно, то повышенное образования данного пептида характеризует состояние мик-роциркуляторного русла и является критерием тяжести заболевания. В ротовой жидкости при пародонтите наблюдается более высокая концентрация ЭТ-1 по сравнению со здоровыми и пациентами с ХГ. В сыворотке выявлено обратное значение; при хроническим гингивите уровень ЭТ-1 возрастал, но снижался у пациентов с пародонтитом.

Внутри нозологических групп содержание ЭТ-1 распределялось следующим образом. У пациентов со здоровым пародонтом уровень пептида выше в СВ, по сравнению с РЖ (р<0,05) и СДБ. Это объясняется внутрисосудистой эндотелиальной секрецией ЭТ-1 при отсутствии воспаления. У больных с ХГ концентрация пептида в СВ и СДБ была значимо выше, чем в РЖ, что объясняется локализацией альтеративного процесса в области зубодесневой бороздки и маргинального уровня десны. При ХП уровень ЭТ-1 значительно увеличивался в РЖ, а в содержимом пародонтального кармана и сыворотке было практически одинаковым.

Высокая концентрация эндотелина при заболеваниях пародон-та вызывает стойкую вазоконстрикцию и ведет к метаболически-

ми нарушениями в тканях и формирует "порочный круг" в механизмах развития этой патологии.

пг/мл Десневая Ротовая Сыворотка

жидкость жидкость

ШЗдоровый пародонт □ Хронический гингивит Ш Хронический пародонтит____________

Рисунок 4. Уровень ЭТ-1 у здоровых и при воспалительных заболеваниях пародонта

Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия в норме и при хронических генерализованных гингивите и пародонтите. В тесте ЛТА десневая жидкость здоровых пациентов способствовала образованию агрегатов. Так, процент лимфоцитов участвующих в адгезии с тромбоцитами (ЛТА индекс) составил 26,3%, число кровяных пластинок на одном лимфоците (ЛТА число) - 3,4. При стимуляции реакции адгезии СДБ больных с ХГ наблюдалась высокая активность клеток. ЛТА и достиг 40,0 %, ЛТАч - 5,2. В случае с ХП способность к розеткообразованию снижалась: индекс ЛТА 32,0 %, число ЛТА -2,7. Вследствие этого, нарушается миграция лимфоцитов в очаг повреждения и снижается местный иммунный потенциал.

Предлагаемый тест лимфоцитарно-тромбоцитарных взаимодействий характеризует состояние местного иммунитета полости рта. Снижение активности лимфоцитарно-тромбоцитарной адгезии предполагает хроническое течение заболеваний пародонта

Фагоцитарная активность нейтрофилов в норме и при хронических генерализованных гингивите и пародонтите. Предварительная инкубация нейтрофильных лейкоцитов доноров с десневой жидкостью здоровых приводит к повышению поглотительной активности, что

проявляется увеличением числа фагоцитированных латексных частиц (Ф число) -4,0 и процента клеток вступивших в реакцию фагоцитоза (Ф индекс) -25,5. Данный сдвиг предполагает присутствие веществ, способных активировать фагоцитоз. При ХГ в большей степени возрастает фагоцитарная активность: число тест-объектов, поглощенных одним нейт-рофилом - 6,8, процент активных клеток, участвующих в фагоцитозе составил 52,3%. Это указывает на стимуляцию "покоящихся" нейтрофилов появлением БАВ из очага воспаления. Однако СПК больных при хроническом пародонтите теряют активирующую способность: Фи снизился до 39,2%, а Фч уменьшилось до 2,8. Очевидно, при развитии хронического воспаления продуцируются вещества, угнетающие фагоцитоз.

Слабая фагоцитарная активность клеток при хроническом пародонтите, указывает на несостоятельность противомикробной защиты в полости рта, что объясняет длительное хроническое течение заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Десневая жидкость здоровых и особенно больных хроническим генерализованным пародонтитом ускоряет реакции фибринооб-разования и ингибирует фибринолиз донорской плазмы.

2. В десневой и ротовой жидкостях, сыворотке крови у больных хроническим генерализованным гингивитом и пародонтитом повышается уровень интерлейкинов-1 р, -б, -8 фактора некроза опу-холей-р, рецепторного антагониста к интерлейкину-1 р, а-дефен-зинов, белка теплового шока-70, эндотелии-1. Максимальное содержание интерлейкина-1 р, -6, фактора некроза: опухолей-а регистрируется в смывах пародонтального кармана, а интерлейки-на-8 в десневой жидкости больных гингивитом. Концентрация белков теплового шока-70 выше в десневой жидкости пациентов с хроническим генерализованным гингивитом.

3. Уровень аутоантител в десневой и ротовой жидкостях к а-дефензи-нам, белку теплового шока-70 увеличивается при хроническом генерализованном пародонтите. Чем выше уровень антигена, тем больше концентрация аутоантител, что отражает иммуностимулирующий эффект исследуемых биологических соединений.

4. Под влиянием десневой жидкости усиливается образование лим-фоцитарно-тромбоцитарных агрегатов и активируется фагоцитарная активность нейтрофилов донорской крови, что особенно выражено у больных хроническим гингивитом.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Публикации в ведущих научных рецензируемых журналах, определенных ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации:

1. Игнатов, М.Ю. Уровень цитокниов, эндотелина-1 и аутоан-тител к ним в сыворотке крови, ротовой и десневой жидкостях у здоровых людей (военнослужащих) [Электронный ресурс] / М.Ю. Игнатов, Е.Т. Доманова, Е.Ю. Масло // Забайкальский медицинский вестник. - 2010. - № 1. - С.12-13. - Режим доступа: htt // medacadcm.chita.ru/zmv.

2. Доманова, Е.Т. Иммунная регуляция системы гемостаза при воспалительных заболеваниях пародонта / Е.Т. Дома-нова, H.H. Цыбиков, В.В. Зобнин // Кубанский научный медицинский вестник. - 2011. - № 4 (127). - С. 65 - 69.

3. Доманова, Е.Т. Фибринолитическая активность а-дефен-зинов при хронических заболеваниях пародонта / Е.Т. Доманова, H.H. Цыбиков, В.В. Зобнин // Сибирский медицинский журнал. - 2011. - № 7. - С. 29-31.

4. Свойства десневой жидкости при остром гингивите и хроническом пародонтите / H.H. Цыбиков, [и др.] // Российский стоматологический журнал. - 2012. - № 1 - С. 40-42 (соавторы: Е.Т. Доманова, В.В. Зобнин, М.Ю. Игнатов, Е.Ю. Масло, Н.В. Исакова).

Публикации в прочих изданиях:

5. Лимфоциторно-тромбоцитарная адгезия как тест дифференциальной диагностики катарального гингивита и пародонтита / Е.Т. Доманова, [и др.] // Достижения и перспективы развития стоматологии в регионе : материалы региональной науч.-практ. конф. -Улан-Удэ : Изд-во ГУЗ РЦМП МЗ РБ, 2009. - С. 165-168. (соавт: Л.Р. Судакова, В.В. Зобнин, H.H. Цыбиков)

6. Активность нейтрофилов, инкубируемых с ротовой и десневой жидкостями при воспалительных заболеваниях челюстно-лице-вой области / М.Ю. Игнатов, [и др.] // Забайкальский медицинский вестник. - 2010. - № 1. - С. 14-16. Е.Т. (соавт: Доманова, Е.Ю. Масло, H.H. Цыбиков)

7. Лимфоцитарно-тромбоцитарная адгезия и уровень эндотелина-1 у больных катаральным гингивитом и хроническим пародонтитом / H.H. Цыбиков, [и др.] // Забайкальский медицинский вестник. - 2010.

- № 2. - С. 7-9. Е.Т. (соавт: Е.Т. Доманова, М.Ю. Игнатов, Е.Ю. Масло)

8. Патогенетические аспекты протрессирования хронического гингивита в пародонтит / Е.Т. Доманова, [и др.] // Материалы науч,-практ. конф., посвящ. 50-летию Стоматологической поликлиники №1. - Улан-Удэ, 2011. - С. 65-71. (соавт: В.В. Зобнин, Н.Н. Цыбиков, JI.P. Судакова)

9. Доманова, Е.Т. Уровень а-дефензинов и аутоантител к ним при хронических заболеваниях пародонта / Е. Т. Доманова, Н. Н. Цыбиков, В.В. Зобнин // Материалы 1 межрегион, науч.-практ. конф. врачей - стоматологов Федерального Сибирского Округа. - Чита, 2011.- С. 58-60.

10. Доманова Е.Т. Регуляция патогенеза хронических заболеваний пародонта аутоантителамик а-дефензинам / Е.Т. Доманова, Н.Н. Цыбиков, В.В. Зобнин // Академический журнал Западной Сибири. - 2013 - № 3(46), Т 9. - С. 74-75.

11. Domanova, Е.Т. Autoimmune regulation of pathogenesis of chronic gingivitis and periodontal disease / E.T. Domanova, V.V. Zobnin, S.N. Solovyov /V The Way of Science International scientific journal.

- 2014. - Vol. II, № 9. - P. 104-106.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

aAT

ВЗП

ИГ

Л ТА

СВ

СДБ

СПК

РЖ

ХГ

хп

slgA

- аутоантитела

- воспалительные заболевания пародонта

- индекс гигиены

- лимфоцитарно-тромбоцйтарная адгезия

- сыворотка

- содержимое десиевой борозды

- содержимое пародонтального кармана

- ротовая жидкость

- хронический гингивит

- хронический пародонтит

- секреторный иммуноглобулин А

- интерлейкины - 1 р,-6,-8

- рецепторный антагонист интерлейкина 1р

- человеческий нейтрофильный пептид сх-дефензин

- белок теплового шока -70 кДа

- фактор некроза опухолей-а

IL-ip, -6, -8

lL-IRa

HNP-а

HSP-70

TNF-а

Лицензия ИД №03077 от 23.10.00. Подписано в печать 24.02.2015. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Roman Формат 60 х 84 '/1б. Усл. печ. л. 1,0 Тираж 100. Заказ № 28/2015.

Отпечатано в редакционно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул. Горького, 39-а.