Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Атерогенность сывороточного липопротеида (а) и его роль как генетического маркера в диагностике ишемической болезни сердца

РГ6 OA

- ft пит 1996 министерство здравоохранения и "" о w»' мепипинпкпй прпмиппрннпсти рпгпи

медицинской промышленности россии новосибирский медицинский институт

На правах рукописи удк 616.12-005.4-056.7-074

ТИХОНОВ Александр Виленович

атерогенность сывороточного липопротеида(а) и его роль как генетического маркера в диагностике ишемической болезни сердца

14.00.06 Кардиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

новосибирск.1996

- г -

Работа выполнена в Центральной научно-исследовательской лаборатории Новосибирского Медицинского Института и в Институте терапии СО РАМН (директор - академик РАМН Никитин Ю.П.).

Научный консультант : академик РАМН Никитин Ю. П.

Офицальные оппоненты : доктор медицинских наук, профессор Николаева А.А. доктор медицинских наук, профессор Феденков В. И. член-корр.доктор медицинских наук, профессор Пузырев В. П.

Ведущее учреждение :Томский НИИ Кардиологии

Защита диссертации состоится ох. 1996 Г.

в .час.на заседании диссертационного Совета (Д.084.52.01) при Новосибирском Медицинском Институте по адресу: Красный проспект. 52.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НМИ.

Автореферат разослан " " ............. 1996 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета доктор медицинских наук

Шпагина Л.А.

введение.

Актуальность проблемы. Одной из наиболее острых проблем современной медицины является лечение болезней сосудов сердца, на долю которых приходится половина смертей в развитых странах. Среди болезней сердечно-сосудистой системы наиболее распространены атеросклероз и его осложнения,такие как ишемическая болезнь сердца (ИБС), инфаркт миокарда (ИМ) и инсульт. По заключению Всемирной организации здравоохранения, заболеваемость ИБС и ИМ в настоящее время приняла характер эпидемии. Отмечено, что в индустриальных и развивающихся странах мира заболеваемость атеросклерозом в последние годы увеличилась почти в 2 раза, и даже наблюдается"омоложение": не редкость в наши дни ИМ в возрасте 20-30 лет.а в возрасте 40-50 лет это стало обычным явлением (Хо-муло, 1982).

Поскольку во всех странах Европы ИБС остается ведущей причиной смертности и преждевременной потери трудоспособности мужчин в возрасте около 45 лет и женщин около 60 лет,,эта болезнь остается главной заботой кардиологов, медицины и социальной службы всех стран Европы (Pyorala,Backer,Graham. 1994).

Одной из ведущих причин развития атеросклероза в настоящее время считается нарушение липопротеидного обмена и связанное с этим повышение в крови концентрации липопротеидов низкой и очень низкой плотности. Близок к липопротеидам низкой плотности класс Лп(а). физиологическая роль которого в последние годы усиленно изучается.

Липопротеиды плазмы крови- сложные надмолекулярные соединения липидов и белков. Белковые компоненты липопротеидов. апопро-теины. определяют их способность связывать и транспортировать липиды. Липиды циркулируют в крови в форме липопротеидов. Основная масса белков класса Лп(а) (35% пула) представлена комплексом апоВ100/апо(а) с соотношением 2:1. Благодаря наличию такой специфической структуры, Лп(а), наряду с ЛПНП. приобретает способность связывать ХС и переносить его в сосудистую стенку. Лп(а) содержит два белка, апоВЮО и ano(а), расположенных на поверхности сферической частицы и связаных между собой ковалентно ди-сульфидными мостиками. Ano(а)- белок, состоящий из 4529 аминокислотных остатков (Utermann, 1989). апоВЮО содержит 4536 остатка (Yang. Chen. 1986). Одним из негативных свойств апоВ100/апо(а)

является способность образовывать агрегаты, особенно при высокой концентрации их в крови. Такие агрегаты могут быть причиной риска ИБС.

Лп(а) был открыт Каре Берг (Berg,l963), и первоначально он был представлен как качественный признак. В 1987 году Utermann с соавт. с помощью электрофореза в полиакриламидном геле с последующим иммуноблотингом. открыли и описали 6 (F, В. S1.S2, S3.S4,0) фенотипов апо(а). различающихся по молекулярному весу. Обнаружено. что концентрация Лп(а) изменяется в соответствии с фенотипом апо(а). Эти данные важны, поскольку повышенный риск ИБС связан с высокой концентрацией Лп(а). Установлено, что уровень Лп(а) в плазме крови больше либо равном 25-30 мг/дл является фактором риска развития ИБС. Возможно, это обусловлено двумя причинами: тем,что у лиц Лп(а+) наблюдается повышенный уровень общего холестерина. или это связано с атерогенностью самого Лп(а) (Walton. Valente,1976). Предположение об атерогенной роли Лп(а) получено в работах Harpel с соавт.(1992), обнаруживший Лп(а) в пораженных атеросклерозом участках сосудистой стенке, где они были локализованы вместе с ЛПНП и фибрином. Важным компонентом частицы Лп(а) является ХС и его эфиры (до 45% общего пула).

Несмотря на интенсивные исследования последних лет разных свойств Лп(а). остаются слабо разработанными клинические аспекты использования этого генетического маркера. Думается, что представленные выше сведения диктуют необходимость комплексного подхода к изучению возможности использования Лп(а) в качестве генетического маркера возможного диагноза развития ИБС.

Совокупность приведенных аргументов свидетельствует об актуальности и практической важности изучения количественного уровня концентрации Лп(а) в плазме крови человека с помощью специфических антител для выявления генетической предрасположенности к атеросклерозу.

Цель исследования- Изучение роли количественного уровня Лп(а) в плазме крови, как важного генетического маркера-для разработки концепции патогенеза атеросклероза.

Задачи исследования.

1.Экспериментально разработать методику получения гетероим-мунных моноспецифических антисывороток для определения количественного уровня Лп(а) плазмы крови человека;

2.Провести скрининг населения г.Новосибирска, коренных жителей Чукотки и Горного Алтая с помощью полученных антисывороток и сравнить особенности распределения разных уровней Лп(а) у больных ИБС и лиц того же возраста без ИБС среди различных этнических групп населения Западной Сибири и Чукотки;

3. Провести сравнительное изучение особенностей биохимических показателей липидного обмена среди больных ИБС и лиц того же возраста без ИБС с разным уровнем Лп(а) в плазме крови;

4.Изучить корреляцию количественных уровней Лп(а) с частотой развития атеросклероза и некоторыми факторами риска развития ИБС;

5. Определить концепцию и возможности метода определения количественного уровня Лп(а) при анализе корреляции последнего с частотой развития ИБС.

Для решения поставленных задач был использован комплекс современных иммунологических, иммунохимических, иммуногенетических и биохимических методов исследования и гибридомная технология получения антисывороток.

Объект исследования.Репрезентативные выборки из этнических популяций и неорганизованного населения Сибири и Крайнего Севера- мужчины 24- 59 лет. отобранные и обследованные по методике разработанной в ВОЗ.

Основные положения, выносимые на зашту.

1.Получение гетероиммунных антисывороток к Лп(а) и другим липопротеидам плазмы крови человека с использованием нового вида лабораторных - минисвиней является наиболее перспективным.

2.Уровень концентрации Лп(а) плазмы крови у этнических популяций Сибири и Крайнего Севера от 0 до 80 мг/дл. Повышенная изменчивость значений уровня концентрации Лп(а) сопровождается смещением кривой распределения в вариационном ряду влево, что указывает на тенденцию организма образовывать и сохранять в повышенном количестве вариации с более низким уровнем концентрации Лп(а) плазмы крови.

3. Уровень холестерина в крови также связан с концентрацией Лп(а) в плазме крови. Так при концентрации Лп(а) 5 мг/дл среди лиц без ИБС уровень общего ХС составлял 4,7-5 ммоль/л и 5,2-6 ммоль/л среди лиц с ИБС. При концентрации Лп(а) свыше 30 мг/дл уровень общего ХС был на 20% выше (Р<0.001).

4. Во всех возрастных периодах встречались лица как с высокими, так и с низкими уровнями концентрации Лп(а) в крови. Из 6055 практически здоровых жителей г.Новосибирска, имевших уровень Лп(а) 13,8 мг/дл, 73% составляли лица в возрасте 30-34 лет. Среди больных ИБС в этом возрасте уровень 13,8 мл/дл встречался в 2 раза реже.

5. У больных ИБС уровень концентрации Лп(а) плазмы крови прямо пропорционально ассоциирован с риском развития заболевания.

Научная новизна.Впервые разработана методика использования минисвиней- нового вида лабораторных животных, выведенные в нашей стране, в том числе и для изучения иммуногенетических особенностей атерогенных классов липопротеидов плазмы крови человека. Разработана схема иммунизации, определен возраст животных и установлена доза антигена, наиболее эффективные для получения гетероиммунных антисывороток.

Впервые в нашей стране изучен количественный уровень концентрации Лп(а) плазмы крови в различных этнических популяциях Сибири и Крайнего севера. Исследованы проживающие в разных экстремальных условиях близкие этнические группы населения (чукчи прибрежные и тундровые) и в одинаковых условиях- разные группы населения (коренные жители Чукотки и пришлое население из европейской части страны, а также чукчи и эскимосы).

Впервые изучена частота и особенности распределения уровней концентрации Лп(а) плазмы крови у больных ИБС и лиц того же возраста без ИБС. Определена сопряженность различных уровней концентрации Лп(а) плазмы крови с развитием ИБС и некоторыми факторами риска этого заболевания. Отмечен достоверно более высокий уровень концентрации Лп(а) в крови у больных ИБС с наличием ги-перхолестеринемии по сравнению с больными, имеющими нормальный уровень липидов. Показана возможность использования показателя уровня концентрации Лп(а) плазмы крови в качестве прогностического теста.

Теоретическое и практическое значение. Результаты, полученные в настоящем исследовании, имеют определенное теоретическое и практическое значение, поскольку расширяют представление о патогенезе атеросклероза и ИБС. Полученные результаты дают основу для утверждения, что Лп(а) является дополнительным фактором риска ИБС. Это дает возможность дифференцированного подхода к выявлению, профилактике и лечению ИБС в конкретных условиях Сибири. Чукотки и Горного Алтая. Высокая чувствительность и специфичность метода определения количественного уровня Лп(а) в отношении ИБС указывают на возможность использования этого теста в клинической диагностике ИБС и в прогностических целях.

Разработан метод получения гетероиммунных антисывороток к ли-попротеидам человека на мини-свиньях, а также использование метода радиальной иммунодиффузии на пластинах с 0,5% гелем агарозы с полимеризованными в нем антителами к Лп(а), так как этот метод наиболее доступен для клинических лабораторий, что позволяет использовать метод количественного определения концентрации Лп(а) в широкой практической работе.

Полученные результаты в отношении полиморфизма липопротеидов могут быть использованы в экспериментальной разработке новых им-муногенетических методов раннего прогноза атеросклероза и ИБС.

Апробация работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на: Всесоюз. конф. "Биологическая характеристика лабораторных животных и экстраполяция на человека экспериментальных данных" (Москва, 1980); Всесоюз. конф. "Особенности патологии коренного и пришлого населения в условиях Крайнего Севера" (Красноярск, 1981); III Всесоюз. конф. по адаптации человека в разных климато-географических и производственных условиях (Ашхабад. 1981); Симпозиуме"Популяционная генетика человека"(Москва, 1983); I Всесоюз. съезде медицинских генетиков(Киев.1984); Междунар. конф. по профилактической кардиологии (Москва,1985); VI-th Intern. Symposlum on clrculatlon health (Anchorage, 1985); Науч. конф. "Биохимия-медицине" (Ленинград. 1989); IX Intern. Congress on Circumpolar Health (Reykjavik, 1993); 3-rd Intern. Conf. on Preventlve Cardlology (Norway.1993); Научно-практической конф. "Актуальные проблемы охраны здоровья малочисленных народов Севера" (Красноярск,1993); Всероссийской конф. "Кар-

диология : успехи, проблемы и задачи" (Санкт- Петербург.1993); Конф. "Актуальные вопросы профилактики неинфекционных заболеваний" (Москва. 1993); Научно-практических конф. врачей Новосибирска "Новые методы диагностики, лечения и профилактики заболеваний" (Новосибирск,1993,1994); Научных конф. Института терапии СО РАМН (Новосибирск,1991,1992,1993, 1994); Xth Intern. Symposium on Atherosclerosis (Montreal, 1994); Meeting of the working Group Epidemiology and Prevention of the European Society of Cardiology. Venice.1994); Межрегион, конф. (Тюмень. 1994); Всероссийской учредит, конф. геронтологов и гериартров (С.-Петербург.1994);III межрегиональной конф. общества мед. генетиков (Москва,1994);VI симп. по биохимии липидов (С.-Петербург, 1994); I Съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск. 1995).

Публикации. Основные положения диссертации отражены в 60 печатных опубликованных работах, в т.ч. в 9 статьях в центральных журналах и в одном зарубежном, 10 в трудах международных симпозиумов, 9 Всероссийских и 9 межрегиональных и региональных конференций. 3 рацпредложениях.

Настоящая работа является частью комплексного исследования аспектов патогенеза атеросклероза и ишемической болезни сердца, проводимого в Институте терапии СО РАМН и в ЦНИЛ НМИ под руководством академика Никитина Ю.П.

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 176 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав, обсуждения и выводов. Работа иллюстрирована 16 рисунками и 28 таблицами. Прилагаемый список цитируемой литературы содержит библиографические сведения о 301 отечественной и 357 иностранных публикациях.

Материал диссертации собран, обработан и проанализирован лично автором. Сбор материала проведен в ходе 6 комплексных экспедиций на Чукотку и Горный Алтай, а также в клинике и при скрининге одного из районов г.Новосибирска по программе ВОЗ"МОНИКА". Все серологические, иммунохимические исследования и часть биохимических исследований (в лаборатории биохимии атеросклероза ВКНЦ РАМН) также выполнены автором.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ.

В главе "Обзор литературы" приведены данные о полиморфизме липорпотеидов плазмы крови человека; представлены сведения о Лп(а), его месте в системе ЛП, физико-химическая характеристика, гетерогенность, особенности структуры и метаболизма, антиген-ность и атерогенность. Обобщены результаты тридцатилетних исследований более 30 лабораторий мира.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Работа проведена в 3 этапа. На первом этапе получены гетеро-иммунные антисыворотки к Лп(а). В качестве реципиента выбраны отечественные мини-свиньи, селекции Института цитологии и генетики СО РАМН. Выбор этих животных определяется тем.■ что у свиней сердечно-сосудистая система и липидный обмен по многим параметрам сходны с соответствующими показателями у человека. Для отработки схемы иммунизации предприняты специальные опыты. Изучение возрастных особенностей липидного обмена у мини-свиней проведено на 99 животных в экспериментальном хозяйстве СО РАМН. Забор крови проводили в 2,6,12,18,24.30 и 42-месячном возрасте животных. Исследование проводили преимущественно на самцах. Кровь брали у животных после 18 часов голодания в утренние часы из яремной вены в пробирки с ЭДТА(1 мг/мл). Плазму крови отсасывали после центрифугирования проб в течение 20 минут при 1500 оборотах в минуту не позднее, чем через 2 часа после взятия крови. В образцах определяли содержание общего ХС. ТГ.ХС фракций липопротеидов.

Для получения гетероиммунных антисывороток были отобраны 20 мини-свиней при живой массе тела 18-20 кг. в возрасте 6 месяцев. Проведено 2 серии иммунизации животных. Антиген вводили трехкратно. Образование антител стимулировали, добавляя к антигену полный адьювант Фрейнда. В качестве антигена вводили фракцию ЛПНП плазмы крови человека, полученную путем препаративного ультрацентрифугирования донорской крови по методу Нагуе1(1955). Ультрацентрифугирование проводили в течение 18-24 часов в градиенте плотности 1,019-1,063 г/мл раствора солей ИаС1 и КВг. В пределах той же плотности полученные фракции ЛПНП очищали дважды

рецентрифугированием с последующим диализом. Однородность полученного антигена проверяли на чистоту диск-электрофорезом в ПААГ и электрофорезом в геле агарозы.

Идентификацию антител в полученных антисыворотках проводили гистохимическим окрашиванием пластин с иммунопреципитинами. Им-мунохимическое исследование проводили методом двойной иммунодиф-фузии по Оухтерлони в 1.5% агаре Дифко в микроварианте на предметных стеклах по В.Цветкову (1968).

На 2 этапе работы изучали с помощью полученных антисывороток особенности полиморфизма по Лп(а). Обследованы представители нескольких этнических групп населения Чукотки и Горного Алтая в экспедициях 1980.1981.1982,1988 и 1992 гг., жители одного из районов г.Новосибирска по программе ВОЗ "МОНИКА" (967 мужчин в возрасте 24-64 лет. среди которых было 129 больных ИБС и 838 практически здоровых). Обследовали коренное население (491 человек) в поселках Чукотки, добиваясь 80% охвата населения. В условиях экспедиции все обследования выполняли сотрудники Института терапии, прошедшие специальную подготовку в Институте профилактической кардиологии ВКНЦ РАМН.

Кровь для исследования брали натощак из локтевой вены ваку-тейнерами.. После центрифугирования плазму крови отсасывали в отдельные пробирки, замораживали и хранили при -20°С.

Реакцию радиальной иммунодиффузии проводили по методу Манчи-ни (1965) в микроварианте на предметных стеклах в геле агарозы. Для получения эластичного и устойчивого геля использовали агаро-зу фирмы Дифко в концентрации 1-1.5%. которую готовили на 0.1 М веронал-мединаловом буфере при рН=8.6 с добавлением полиэтиленг-ликоля (6000 МВ) и мертиолята 1:10000 (в качестве антисептика). Антитела вносили при температуре не выше 48°С.

Калибровочную кривую для определения уровня Лп(а) строили с помощью антигена из плазмы крови донора - носителя Лп(а). При построении кривой использовали квадрат диаметра преципитата как функцию концентрации антигена.

Биохимические исследования плазмы крови выполнены в • лаборатории биохимии атеросклероза ВКНЦ РАМН (зав.- Е.Н.Герасимова в 1981- 85 гг.) ив лаборатории кафедры терапии ФУВ НОТКЗМИ (зав. -Ю.П.Никитин). Содержание общего ХС. ХС ЛПНП и ТГ определяли на автоанализаторе АА-П фирмы "Техникон" по методам, принятым в ли-

- и -

пидных клиниках России и США с выполнением соответствующей программы внешнего и внутреннего контроля качества.

Результаты исследований обрабатывали методом вариационной статистики с привлечением методов корреляции, тетрахорического коэффициента связи (сопряженности), критерия соответствия Пирсона (X и-квадрат) и др. (Сепетлиев, 1968;Урбах. 1969; Рокитский.1973).

На 3 этапе разработан метод получения антител, подобран метод определения количественного уровня концентрации Лп(а) плазмы крови. Проведено изучение особенностей биоразнообразия Лп(а) среди популяций Западной Сибири и Крайнего Севера.

Математическую обработку данных проводили на IBM PC в Институте экономики и организации промышленного производства СО РАН с использованием стандартного пакета программ статистического анализа СОМИ и оригинальных программ для анализа и вычисления некоторых показателей, как корреляция, сопряженность.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I. ГЕТЕРОИММУННЫЕ АНТИСЫВОРОТКИ К Лп(а) ЧЕЛОВЕКА

1.1. Мини-свиньи- реципиенты для получения гетероиммунных антисывороток к липопротеидам плазмы крови человека.

Выбор нового вида лабораторных животных мини-свиней в качестве реципиентов был сделан, чтобы приблизить условия антите-лообразования к таковым у человека. При этом имелось в виду испытать возможность использования этих животных в качестве источника большого количества сывороток-реагентов. По сравнению с другими лабораторными животными свиньи являются наиболее адекватной моделью для изучения атеросклероза.

Изучены возрастные особенности биохимических показателей ли-пидного обмена у свиней, что позволило определить оптимальный возраст животных, массу их тела и дозу антигена. Установлено, что наиболее благоприятными для использования мини-свиней отечественной селекции в качестве реципиентов при иммунизации их липопротеидами плазмы крови человека являются животные в возрасте 6 месяцев и старше с живой массой тела 16-20 кг.

Для получения оптимального положительного иммунного ответа

наиболее эффективна доза антигена 0,5-1 мг ЛП плазмы крови (в пересчете на белок) на 1 кг массы тела животного, при условии, что общая масса антигена составляет не менее 16-20 мг. Иммунизацию целесообразно проводить в заушные и паховые лимфатические узлы по схеме : первая иммунизация с адьювантом Фрейнда, через 21 день - вторая и еще через 7 дней - третья, после которой через 7 дней - забор крови и при необходимости реиммунизация.

1.2. Идентификация, специфичность и чувствительность гетероим-мунных антисывороток.

Таблица 1

Проверка идентичности гетероиммунных антисывороток к Лп(а).

Анги-сыворотка Число полос преципитации Число полос преципитации 0 1 Критерий соответствия и вероятность

X и-квадрат Р

Антисывооотка ОЗ(минисибс)

953 0 1 28 10 6 70 52.39 0, 001

1001 0 1 26 12 5 71 48,94 0, 001

Антисыворотка 1001

953 0 1 23 8 6 77 53, 36 0,001

Примечание: Нулевая гипотеза - неидентичность

выявляемых антигенов (К - (2-1)х(2-1) = 1

Рэг при с^ = 1- 3.8; 6,6; 10,8

Получены и изучены по специфичности 3 антисыворотки к Лп(а). Сыворотки идентифицировали и изучили их специфичность постановкой реакции преципитации с плазмой практически здоровых лиц и

больных ИБС. Слияние свободных концов линий дуг иммунопреципита-ции указывало на антигенную идентичность антисывороток. Изучение генетической связи антигенов, выявляемых антисыворотками проведено по методу Пирсона (табл. 1).

Чувствительность (а/а+с) полученных ПКА находилась на уровне 67,6-82,4%. Специфичность (d/b+d) была также высокой и составляла 81,3-87,5%. Высокая генетическая чувствительность и иммунологическая специфичность ПКА указывает на надежность их использования в клинической диагностике.

Популяционный анализ с помощью иммунодиффузии подтвердил, что все три антисыворотки содержат одинаковые антитела, т.к. эмпирическое значение критерия соответствия 1 и-квадрат во всех случаях с высокой достоверностью превысило теоретически ожидаемое (PCO,001).

1.3. МКА - новое поколение иммунодиагностических препаратов.

МКА, продуцируемые гибридомами, в отличие от обычных антисывороток, характеризуются фиксированной специфичностью. Впервые получены клоны, продуцирующие МКА In vitro и In vivo против Jin(а) плазмы крови человека. Клоны МК12-6. МК35-3, МК37-7, МК41-1 и МК93-1 оказались наиболее перспективными (табл.2). Они были селекционированы, паспортизированы и сейчас находятся в коллекции Института терапии СО РАМН. Каждый из 5 клонов реагировал с делипидированным Лп(а). но не реагировал с ЛПНП. Аффинные константы для связывания с ano(а) варьировали от О,8*10"8М"1 до 1,5Х10"8М"1. Клоны использованы для наработки реагентов с ан-ти-Лп(а) и антиапо(а). Образцы заморожены и отправлены на хранение для будущей работы с ними.

2. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УРОВЕНЬ И ГЕНЕТИКА Лп(а) ПЛАЗМЫ КРОВИ.

2.1. Лп(а) - количественный, генетически детерминированный

признак.

Различные модели были предложены, чтобы объяснить наследуемость уровня концентрации Лп(а). Большинство исследователей соглашается на существовании- одного главного гена для высокого уровня концентрации Лп (а) (Singet al.. 1974; Isellus et al..

1981; Hasstedt et al.. 1983). Morton с коллегами (1985) и Hass-tedt & Williams (1986) предположили, что уровень концентрации Лп(а) контролируется тремя аллелями, обозначенные LpA. LpB и LpO. И наконец Utermann с коллегами(1987) применил метод вес-терн-иммуноблотинга. используя в качестве зонда специфические антитела, и установил размер гетерогенности Лп(а)- гликопротеи-на. контролирующий количественный уровень генетического полиморфизма Лп(а).

Апо(а) не только является маркером Лп(а), но и играет важную роль в определении размера и электрофоретической подвижности частицы Лп(a) (Eaton.Fless. et al..1987).

Ген ano(а) расположен в длинном плече 6 хромосомы вблизи локализации гена плазминогена (Frank et al.,1988; Llndhal et al..1989). Ano(а) контролируется единичным локусом гена, который кодирует несколько аллелей ano(а) - изоформы различных размеров.

2.2. Биоразнообразие распределения уровня концентрации Лп(а) в обследованных популяциях.

В обследованных группах уровень концентрации Лп(а) колебался от О до 80 мг/дл. Причем нулевая концентрация в популяции жителей Сибири была отмечена у 58% от всех обследованных, т.е. среди лиц без ИБС 60% и лиц с ИБС - 45%; среди жителей Чукотки - 53%.

Как видно из представленных данных, модальный класс был отмечен среди лиц без ИБС на уровне 14 мг/дл - 60% всех обследованных, а среди лиц с ИБС - 16,4 мг/дл (63% обследованных). Постмодальный квантиль среди лиц без ИБС составлял 27,5% всех случаев (при среднем уровне 40,9 мг/дл). Медиана составляла 20,6 мг/дл у жителей г. Новосибирска и 28 мг/дл у коренных жителей Чукотки. Среди лиц с ИБС постмодальный класс составил 31% всех обследованных (при среднем уровне 48 мг/дл).

Среди лиц с ИБС уровень концентрации 71-75 мг/дл был отмечен в 2.8% случаев, тогда как среди лиц без ИБС только 1 человек имел такой уровень концентрации Лп(а). Уровень 55-65 мг/дл был отмечен у 8,4% больных ИБС. а среди практически здоровых- всего у 1-2 человек.

Уровень концентрации Лп(а) плазмы крови имеет значительные колебания: у чукчей прибрежных диапазон колебания был 3,5- 75,5

мг/дл. что указывает на значительное фенотипическое разнообразие в этой популяции. Распределение уровня Лп(а) у них, как и у жителей г.Новосибирска, было асимметричным со смещением моды влево вариационного ряда и имеет форму пирамиды с расширенным основанием. Это характерно для большинства популяций Западной Европы и Америки (Loscalso et al.,1990). У эскимосов и чукчей тундровых распределение было ближе к нормальному, гауссовскому.

Уровень концентрации Лп(а) плазмы крови более 30 мг/дл был достоверно выше среди больных ИБС во всех обследованных популяциях (Р<0,001). У практически здоровых чукчей прибрежных он составил 40.4%. а среди больных- 57.155 (Р<0.001). У эскимосов и чукчей тундровых эти показатели были соответственно- 27,5- 43% и 36,2- 50%.

Таблица 2

Распределение уровней концентрации Лп(а) плазмы крови в связи с возрастом среди жителей г.Новосибирска без ИБС.

Группа Возраст, лет

п 30- -34 40- -44 50- -54 60- -64

1 2 1 2 1 2 1 2

п 196 77 43 35 41

Лп(а-) 96 - 48. 1 - 39.6 - 49.0 - 61, 0

Лп(а+) 100 - 51,9 - 60.4 - 51.0 - 39,0

<Моды 9 8,1 12,5 8,9 7.8 8.6 5.6 8,4 6,2

Мода 51 13.8 60,0 16.4 53.8 17,3 44,4 18,8 31,3

>Моды 40 30.8 27,5 33.7 38,5 38,0 50.0 38,7 62,5

В среднем 100 17,8 100 24.2 100 27,2 100 30,6 100

Примечание: 1 - средний уровень концентрации Лп(а).мг/дл 2 - доля. %

Проведенное изучение количественного уровня Лп(а) плазмы крови свидетельствует о том, что уровень концентрации Лп(а) ас-

социирован с заболеванием ИБС и может служить патогенетическим маркером заболевания в популяциях жителей Сибири и среди коренных жителей Чукотки. Уровень концентрации Лп(а) плазмы крови имеет значительные колебания, ему свойствено фенотипическое разнообразие распределения уровня по вариационному ряду в разных популяциях.

2.3. Возрастные особенности.

Рассмотрено влияние возраста на уровень концентрации Лп(а) плазмы крови с двух позиций: при одинаковом уровне концентрации Лп(а) (например, 14 мг/дл- модальный класс у жителей г.Новосибирска) и при одинаковом возрасте (например 30-34 года или 40-59 лет) (табл.2).

Наиболее часто встречается уровень Лп(а) в пределах 11- 20 мг/дл: так среди жителей г.Новосибирска он составил 14 мг/дл. Наибольшую долю среди них составляли лица в возрасте 30- 34 года (60%). а при уровне концентрации Лп(а) 8.1 мг/дл их процентная доля составила всего 12.5%. В возрасте 60- 64 года лица с 18.8 мг/дл составляли 31,3%, а с уровнем выше 30 мг/дл- 62.5%. В возрасте 55- 64 лет уровень 14 мг/дл был отмечен у 42%, а остальные 56% имели концентрацию более чем в 2 раза выше (29 мг/дл).

Установлено, что во всех возрастных группах встречались лица как с низкими, так и с высокими уровнями концентрации Лп(а) плазмы крови, а также, что в одной возрастной категории (30-34 года и 55-65 лет) встречались лица с разными уровнями концентрации Лп(а). но в разном соотношении (табл.2).

2.4. Риск развития ИБС : корреляция с уровнем концентрации Лп(а) плазмы крови.

Для выяснения возможности использования Лп(а) в качестве одного из диагностических тестов при ишемической болезни- сердца было проведено сравнительное изучение частоты встречаемости этого фактора среди больных ИБС и среди практически здоровых лиц в отношении этого заболевания.

Риск развития ИБС находится в тесной связи с уровнем кон-

центрации Лп(а) плазмы крови. В группе лиц с нулевой концентрацией (ниже 5 мг/дл) риск развития ИБС был минимальным во всех изученных популяциях: среди жителей г.Новосибирска он составил 8%. а среди коренных жителей Чукотки- 9%. (табл.3).

Наиболее многочисленную группу среди обследованных жителей г.Новосибирска (60%) составили лица с концентрацией Лп(а) плазмы крови 14 мг/дл, а у коренных жителей Чукотки- 15,6 мг/дл. Риск развития ИБС составил соответственно 18% и 25%.

С повышением уровня концентрации Лп(а) в крови, риск развития ИБС возрастал, достигая максимума при уровне Лп(а) выше 30 мг/дл. Так при уровне концентрации 31 мг/дл у жителей г.Новосибирска риск составил 19%, а у коренных жителей Чукотки- 30%.

Таблица 3

Частота развития ИБС и концентрация Лп(а) плазмы крови. (мужчины в возрасте 18-59 лет)

Группа Жители г. Новосибирска^ п=967 Коренные жители Чукотки П=319

1 2 (1 3 1 2 а 3

Лп(а-) - 8.1+0. 8 - - - 9,0+1,2 - -

Лп(а+) 20,6 14.8+1,4 6,7 0,91 28.1 28,8+1, 8 19,8 0,73

<Моды 8.9 8,9+3,0 0,8 0.76 9.4 12.9+1,6 3,9 0.62

Мода 13,8 18,1+1.7 10,0 1.64 15,6 25,1+2. 8 16,1 1.07

>Моды 31,2 19.1+2, 2 11,0 1.55 32,4 30,2+2, 7 21,2 1,82

В среднем 20,6 13,3+0,8 5,2 - 28.1 15.4+0,9 6,4 -

Примечание: 1 - средний уровень концентрации, мг/дл

2 - риск развития ИБС, %

3 - концентрация Лп(а) на 1% риска, мг/дл Сравнение сделано с нулевой группой. Достоверность колебалась от 0,05 до 0.001

Риск развития ИБС у разных народностей, населяющих Чукотку колеблется от 12 до 26%. Наиболее высокой он был среди чукчей тундровых-26%, а самый низкий- среди эскимосов-12%.

Анализ полученных данных показывает, что среди лиц с уровнем Лп(а) 14 и 30 мг/дл по сравнению с нулевой группой выявлена высокая корреляционная зависимость распространенности ИБС и факторов ее риска, подтвержденная достоверным значением X. и-квадрат. Среди лиц с нулевым уровнем Лп(а) также была определена корреляционная зависимость.однако не по всем этим показателям(табл.4,5)

2.5. Уровень Лп(а) плазмы крови и липидный обмен.

К липопротеидам относят белково-липидные комплексы с разными свойствами и функциями. Белковые компоненты липопротеидов- апоп-ротеины определяют их способность связывать и переносить липиды. Все липиды плазмы крови циркулируют в форме липопротеидов.

Состояние липидного обмена и его нарушение привлекают особенно большое внимание при патогенезе атеросклероза, поскольку установлено, что липопротеидам в липидном обмене принадлежит ведущая роль (Климов и др.,1978). Роль разных классов липопротеидов различна: ЛПНП и ЛПОНП, рассматриваются как атерогенные.а ЛПВП - как антиатерогенные, через них реализуется обмен ХС, в котором также участвует Лп(а) (Томпсон, 1990). В норме у человека в плазме крови содержится 3,88-5,17 ммоль/л холестерина, а 6,98 ммоль/л холестерина считается верхней границей риска развития атеросклероза.

Обмен триглицеридов осуществляется с помощью транспортных форм хиломикронов, ЛПНП и ЛПОНП, а также в форме гидролиза триглицеридов, свободных жирных кислот и глицерина. В норме у человека в плазме крови содержится 1,35-1,69 ммоль/л триглицеридов, а 2,26 ммоль/л - верхняя граница риска развития атеросклероза.

Одним из основных факторов риска развития ИБС считают гипер-липопротеидемию (ГЛП), которая может сопровождаться повышением уровня холестерина (ГХС) или триглицеридов (ГТГ). или одновременно двух этих компонентов плазмы крови.

Таблица 4 Степень связи наличия Лп(а) и ИБС в обследованных популяциях. (Возраст 30-59 лет)

Группа п Наличие 1 2 Р 3 4

Лп(а). мг/дл ИБС

+ -

Жители г. Новосибирска 384 30 26 118 0,203 15,76 0,001 66,7 65,8

0 13 227

Коренные жители Чукотки 319 30 33 145 0,178 8,77 0,01 71,7 46,9

0 13 128

Чукчи прибрежные: мужчины 127 18,8 10 48 0,178 3,84 0,05 76,9 57,9

0 3 65

женщины 79 18,8 8 24 0,155 4, 13 0,05 72,7 64,7

0 3 44

Эскимосы 74 30 6 27 0,165 2, 02 н.д. 66,7 58,5

16,4 3 38

Примечание: а

1 - коэффициент связи

2 - критерий соответствия

3 - чувствительность, % (а/а+с)

4 - специфичность, % (й/Ь+й)

Был проведен анализ взаимосвязи этого фактора у здоровых лиц в отношении ИБС и больных этим заболеванием с разными показателями липидного обмена, которые сами являются основными факторами риска ИБС. Уровень атерогенных липопротеидов (ЛПНП, ЛПОНП) у лиц с уровнем концентрации Лп(а) 14 и 30 мг/дл был достоверно выше, чем у лиц с нулевым уровнем по всем обследованным группам (табл. 6).

Сравнительный анализ биохимических показателей липидного обмена у представителей разных народностей, населяющих Чукотку,

также показал достоверные различия в содержании общего ХС, ХС ЛПНП и ТГ у лиц с уровнем концентрации Лп(а) 14 и 30 мг/дл в сравнении с нулевой группой. Между отдельными популяциями не было выявлено каких-либо существенных различий в уровне показателей липидного обмена (табл.6).

Таким образом, высокая чувствительность Лп(а), а также высокая специфичность в отношении ИБС и наличия хотя бы одного из факторов риска ее развития (69,8 и 69.6% ) показывают существенную прогностическую значимость высокого уровня Лп(а) при развитии ИБС.

Таблица 5

Степень связи наличия разного уровня Лп(а). ИБС и некоторых Факторов ее риска.

Факторы Лп(а), мг/дл 1 2 Р 3 4

30 0

ИБС + 33 14 78 127 0.199 16,05 0.001 70.2 62.0

ГХС + 49 84 95 125 0.346 33,2 0.001 86,0 56.8

ГТР + 14 23 39 201 0.187 7,81 0.01 37,8 83.8

гипо-а -хс + 16 16 37 208 0. 284 18,01 0, 001 50,0 84,9

Гипер-р ХС + 20 33 44 210 0. 377 11,07 0,001 37,7 82,6

Наличие хотя бы 1 фактора + 64 28 80 105 0,284 17.01 0,001 69,6 56,8

Примечание: см. примечание к табл.4

Таблица 6

Биохимические показатели липидного обмена у больных ИБС и лиц без ИБС с разными уровнями концентрации Лп(а) плазмы крови. (Жители г.Новосибирска)

1 Группа Холестерин, ммоль/л ТГ. ммоль/л

общий ЛПВП ЛПНП ЛПОНП

13,8 без ИБС 5,68+0,18 1.31±0,1 4,09+0,01 0, 28+0.1 1,40+0,03

с ИБС 6,30+0.22 1.27+0.1 4,72+0.15 0.31+0.1 1,56+0,07

ú 0,62* 0,04 0,63** 0.03 0.16*

30 без ИБС 6,21+0,2 1.45+0,05 4,49+0,06 0. 27+0. 04 1,35+0.11

с ИБС 6, 83+0.2 1,22+0.03 5,17+0, 2 0.44+0, 07 2,21+0.16

й 0,62** 0.23** 0,68** 0.17* 0,86***

0 без ИБС 4. 93+0.03 1.41+0/03 3. 27+0, 02 0.25+0,03 1.27+0,08

с ИБС 5. 05+0.05 1.46+0,1 3,38+0,04 0,21+0.02 1,05+0.05

й 0.12* 0.05 0, 11 0,04 0,22*

Примечание: 1 - уровень концентрации Лп(а) плазмы крови, мг/дл 2 - средний возраст, лет *)Р=0,05 ; **)Р=0,01; ***)Р=0,001

ОБСУЖДЕНИЕ

Большое социально-медицинское значение растущей опасности сердечно-сосудистых заболеваний вызвало во всем мире широкий поток исследований многообразных причин этих патологий. Среди других научных поисков способов диагностики и прогнозирования ИБС делаются попытки использовать иммунологические методы, в частности, получить антисыворотки к различным липопротеидным компонентам (Walton,1974; Dahlen et al..1975; Scherz et al..1979; Никитина, 1980). Учитывая определенное сходство липидного обмена у

человека и домашней свиньи, мы попытались получить гетероиммун-ные антисыворотки к отдельным классам липопротеидов больных ИБС путем иммунизации первых отечественных мини-свиней, нового вида лабороторных животных, выведенных для медико-биологического моделирования.

При изучении возрастных особенностей и биохимических показателей липидного обмена было установлено время получения у мини-свиней эффективного иммуного ответа на липопротеиды человека. Это позволило нам с помощью указанного вида лабораторных животных впервые провести работу по получению и исследованию гетеро-иммунных антисывороток к ЛПНП человека. Изучение полученных антисывороток при обследовании больных ИБС и лиц без ИБС показало их высокую специфичность и чувствительность.

Было проведено широкое иммуногенетическое и генетико-популя-ционное изучение Лп(а). Это оказалось возможным благодаря созданию впервые в нашей стране гетероиммунных антисывороток к Лп(а)-системе липопротеидов. Для изучения уровня концентрации Лп(а) плазмы крови был использован классический метод иммунодиф-фузии по Manclnl.

Полученные нами данные по изучению частоты Лп(а) в разных популяциях позволяют высказать предположение, что высокая частота этого липопротеида более свойственна коренному населению, проживающему в экстремальных климатических регионах азиатской части континента. Возможно также, что это связано с преобладанием в их питании таких пищевых компонентов, как мясо животных и морского зверя, животные жиры. На это косвенно указывает сопоставление с данными, полученными при изучении индейцев Лабрадора, основную часть питания которых составляют продукты растительного происхождения. Частота Лп(а) у них составляла лишь 1.755 (Berg,1965).

Анализ корреляции ИБС с наличием в крови Лп(а+) показал, что между ними существует сопряженность и граница значения оценки ее находится в пределах достоверности.

Увеличение или снижение уровня концентрации Лп(а) плазмы крови сопровождается аналогичным увеличением или снижением риска развития ИБС. Если оно происходит на низких уровнях (от 0 до 14 или 18.8 мг/дл). риск заболевания мог быть изменен в пределах 10% (с 8.1 до 18,1%). На более высоких уровнях (например, при

повышении с 17,3 до 34,1 мг/дл) происходит увеличение риска развития ИБС в 2,2 раза (с 11,4 до 25%).

Представляет интерес и тот факт, что чувствительность определения Лп(а) преципитацией и специфичность этого метода в отношении ИБС практически мало отличается от определения показателей нарушений липидного обмена. Среди больных ИБС 67-93% лиц оказалось позитивными по Лп(а), а также 38-96% всех лиц с факторами риска развития ИБС (гиперхолестеринемия. гипертриглицеридемия. гипер-р-холестеринемия, гипо-а-холестеринемия) имели Лп(а). Среди лиц без ИБС 52-65% не имели Лп(а), а среди лиц без факторов риска ИБС - 56-86%.

Высокая чувствительность и специфичность при определении Лп(а) в плазме крови больных ИБС и предрасположенных к этому заболеванию, установленные с помощью тетрахорического коэффициента сопряженности, указывают на возможность прогностической значимости этого фактора в отношении развития ИБС. Среди больных ИБС лица Лп(а+) составляли 67-83%, а риск заболевания для них доходит до 95%. Учет этого иммунологически определяемого признака при обследовании населения может- способствовать своевременному выделению лиц, имеющих наследственную предрасположенность к ИБС.

ВЫВОДЫ

1. Получены антисыворотки к Лп(а) плазмы крови человека. В качестве реципиентов был использован новый вид лабораторных животных -миниатюрные свиньи (минисибс). Это приблизило процесс антителообразования к условиям изоиммунизации и способствовало получению более чувствительных и специфичных антисывороток в большом количестве. Антисыворотки прошли иммунологическую проверку и подтвердили свою специфичность и надежность при титре 1:128- 1:256.

2. Наиболее перспективным для условий клинических лабораторий следует считать метод радиальной иммунодиффузии (РИД), позволяющий надежно и быстро определить уровень концентрации Лп(а) плазмы крови. Анализ целесообразно проводить на предметных стеклах, залитых гелем агарозы с полимеризованными в нем антителами. Рассчет уровня концентрации Лп(а) плазмы кропи производится по калибровочной кривой.

3. Концентрация Лп(а) плазмы крови колебалась от 0 до 80 мг/дл. В популяции жителей Западной Сибири нулевая группа составляла 58%, среди коренных жителей Чукотки - 53%. В изучаемых популяциях выявлена тенденция организма образовывать и сохранять у большинства лиц (модальный класс) вариации с более низким уровнем Лп(а) в крови. Среди коренных жителей Чукотки чаще встречались лица с уровнями Лп(а) 15,5 и 18 мг/дл. Средний уровень (медиана) Лп(а) в крови обследованных жителей г.Новосибирска составил 20.6 мг/дл, а у коренных жителей - 28 мг/дл.

4. Уровень концентрации липопротеида(а) плазмы крови достоверно ассоциирован с риском развития ИБС и нарушением липидного обмена. Распределение лиц с разными уровнями Лп(а) в крови характеризовалось растянутым вариационным рядом со смещенным модальным классом влево. Кривая распределения имела форму пирамиды с расширенным основанием, динамика распределения была асимметрична.

5. Во всех возрастных периодах встречались лица как с высокими. так и с низкими уровнями концентрации Лп(а) в крови. Из 60% практически здоровых жителей г.Новосибирска, имевших уровень Лп(а) 13,8 мг/дл, 73% составляли лица в возрасте 30-34 лет. Среди больных ИБС в этом возрасте в 2 раза реже встречались лица с уровнем концентрации Лп(а) 13,8 мг/дл, но значительно чаще такой уровень наблюдался в возрасте 40 лет и старше. В 30 лет группа лиц уровнем Лп(а) 8 мг/дл составляла 12.5%, 13.8 мг/дл - 60% и 31 мг/дл - 27,5%. В возрасте 60 лет соотношение было соответственно 8: 29,5 и 62,5%.

6. Уровень биохимических показателей липидного обмена у больных ИБС с уровнем концентрации Лп(а) 13,8-30 мг/дл по содержанию общего холестерина, холестерина ЛПНП и триглицеридов был выше, чем у лиц с минимальным содержанием Лп(а) и лиц Лп(аО) (Р<0,001). Уровень атерогенных липопротеидов ЛПНП и ЛПОНП у лиц с концентрацией Лп(а) 13,8 и 30 мг/дл был достоверно выше, чем в нулевой группе, а уровень ЛПВП был, напротив, достоверно ниже. С возрастом содержание в крови ОХС изменялось в основном за счет атерогенных классов липопротеидов, способных транспортировать ХС в сосудистую стенку. ХС ЛПВП в обследованных популяциях находился на уровне 1,34-1,52 ммоль/л, что составляло 22-30% общего пула ХС в плазме крови.

7. Метод определения Лп(а) в крови имеет высокую чувствительность и специфичность в отношении ИБС. Среди больных ИБС и лиц с наличием в крови факторов риска этого заболевания 67-93% имели уровень концентрации Лп(а) 13,8 мг/дл и выше, а в крови лиц без ИБС и наличия факторов ее риска у 52-86% Лп(а) отсутствовал или присутствовал в минимальных концентрациях (5-8,3 мг/дл).

8. Лп(а) - одна из атерогенных форм липопротеидов. Аналогично ЛПНП Лп(а) играет роль в метаболизме холестерина, транспортируя его из кровеносного русла в сосудистую стенку. Уровень ОХС, ХС ЛПНП во всех обследованных популяциях связан с уровнем концентрации Лп(а) плазмы крови: при 30 мг/дл он достоверно выше, чем при 13.8 мг/дл. а при нулевой концентрации- достоверно ниже.

9. Анализ взаимосвязи частоты развития ИБС и уровня концентрации Лп(а) в плазме крови показал, что липопротеид(а) можно использовать с высокой надежностью в клинической диагностике в качестве одного из прогностических тестов заболевания ИБС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

1. При клинических и популяционных обследованиях населения целесообразно проводить определение содержания в плазме крови Лп(а). Лиц Лп(а+) (при концентрации выше 25-30 мг/дл), особенно, имеющих отягощенную наследственность в отношении ИБС, следует относить в группу повышенного риска для осуществления за ними тщательного постоянного наблюдения.

2. Определение уровня концентрации Лп(а) следует проводить методом радиальной иммунодиффузии по Мапс1п1 с использованием гетероиммунных антисывороток к Лп (а), полимеризованных в геле агарозы, с последующим замером диаметра диффузии, позволяющим сравнительно просто осуществлять рассчет уровня концентрации по калибровочной кривой.

3. Для получения антисывороток к Лп(а) может быть использована разработанная нами схема иммунизации минисвиней. Использование нового вида лабораторных животных позволяет максимально приблизить процесс антителообразования к наблюдаемому у человека, поскольку у этих видов имеется много сходных особенностей в липидном обмене. Существенным обстоятельством является также возможность получения специфических антиснвороток одномоментно в значительных объемах.

Список основных публикаций автора по теме диссертации

1. Гетерогенность липопротеидов низкой плотности, возможная связь с атеросклерозом и использование как диагностического теста // В кн.: Атеросклероз, ИБС: диагностика и реабилитация больных (Науч. тр.НГМИ),Новосибирск.-1979- Т.102 с.35-39.

2. Возрастные особенности липидного обмена у мини-свиней (объекта модельных исследований атеросклероза). // В кн.: Биологическая характеристика лабораторных животных и экстраполяция на человека экспериментальных данных. (Матер. Всес.конф.), М. -1980- с. 21-22.

3. Выявление ишемической болезни сердца и артериальной гипертен-зии при профилактическом обследовании мужчин 30-59 летнего возраста из числа коренных и пришлых жителей Чукотки.// Бюлл.СО АМН СССР, 1982- N 6,с.13-16. (в соавторстве)

4. Ишемическая болезнь сердца: Ьр(а)-липопротеид дополнительный фактор риска.// Тез.докл.конф. молодых ученых СО АМН СССР, Новосибирск. -1983- с. 144-145.

5. Генетические маркеры ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда в популяциях коренных жителей Чукотки. //В кн. :Попу-ляционная генетика человека. (тез.Всес.симп.) М.,1983,с.9-10 (в соавторстве)

6. Питание как фактор риска ИБС у коренного и пришлого населения Чукотки. // В кн.: Ранняя диагностика и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний. (тез.Всес.конф.). Новосибирск, -1983- т.2, с. 165- 166..(в соавторстве)

7. Изучение вклада генетических и средовых факторов в подверженность ИБС у коренных жителей Чукотки и Горного Алтая.//В кн.: Ранняя диагностика и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний. (тез.Всес.конф.), Новосибирск,-1983- т.2, с. 254- 255. (в соавторстве)

8. Липопротеиды низкой плотности (Ьр(а)-липопротеид) и предрасположенность к ишемической болезни сердца.//Автореф. дис.. канд. мед. наук. Новосибирск. -1983- 17 с.

9. О некоторых методах диагностики ишемической болезни сердца. //В кн.: Некоторые особенности заболеваний терапевтического профиля среди коренного и пришлого населения Чукотки. (Тез. докл. науч. -практ. конф. ) Анадырь,- 1984, с. 82- 84.

10. Использование специфического Lp(а)- липопротеида как дополнительного маркера в диагностике ишемической болезни сердца. //жур. "Кардиология",т.XXIV М.Медицина, 1984, N2, с. 29-32. (в соавторстве)

11.Питание и факторы риска ишемической болезни сердца у мужчин Чукотского автономного округа, //жур."Кардиология", т. XXIV М. Медицина, 1984. N 4. с.62-67. (в соавторстве)

12. Специфический Lp(а)-липопротеид, как дополнительного фактор риска ишемической болезни сердца. // Тез.докл.Междун. конф. по профил. кардиологии. Москва, 1985, с. 238.

13. Особенности питания и распространенность факторов риска ИБС среди жителей Чукотки. // Тез.докл.Междун.конф. по профил. кардиологии, Москва, 1985, с. 112. (в соавторстве)

14.Study of genetic and envlromental factors in predisposition to IHD among native and newcomlng population In Chukotka.//B кн.: The 6-th Intern. Symposium on circulation health. Anchorage, 1985, p.18. (with co-authors)

15. Адаптационные возможности организма и иммунологические маркеры прогноза развития патологии на индивидуальном и популяци-онном уровнях. //В кн.: Актуальные вопросы адаптации человека к климато-географическим условиям и первичная профилактика, (тез. докл. Всесоюз.конф.), Новосибирск. 1986, т. 2, с. 54-56.

16.распространенность трех аллотипов Lp(a)- системы липопротеидов-дополнительного маркера ИБС. //В кн.: Эпидемиология и профилактика заболеваний терапевтического профиля. Новосибирск, 1987, ч. 1, с. 139 -140.

17.Использование иммуногенетических и гормональных исследований в диагностике нарушений сердечнососудистой системы у лиц разных профессий, //в кн.: Механизмы повреждения и регуляции восстановительных процессов, (тез.докл.школы-конф.молодых ученых), Новосибирск. 1988, с.96. (в соавторстве)

18.Иммуногенетические и гормональные исследования в диагностике нарушений сердечно-сосудистой системы у лиц разных профессии. //В кн. .-Профессиональная патология в восточных регионах страны и вопросы диспансеризации работающих (тез. докл. науч. -практ.конф.).Новокузнецк,1988, с. 167-168. (в соавторстве)

19. К вопросу о гормональной реализации наследственной предрасположенности к атеросклерозу в условиях воздействия производственных вибраций.//В кн.: Биохимия- медицине, (тез.докл.научн. конф.), Ленинград.1988, с.187-188. (в соавторстве)

20.Иммунологически распознаваемая гетерогенность липопротеидов плазмы крови в изучении патогенеза ишемической болезни сердца. //В кн.: Атеросклероз и липидный обмен. (Науч.тр.НМИ), Новосибирск, 1989, т.134, с.49-53. (в соавторстве)

21.Serum Lp(a) lipoprotein levels In Chukotka natives and Siberian population.//В кн.: 3rd Intern. Conf. on preventive cardiology. Norway. Oslo.1993.[P499] (with co-authors)

22.Peculiarity and distribution on different concentration level of llpoproteln(a) in population of Chukotka.//Abstracts: IX Inter.Congr.on Circumpolar Health, Reykjavik, 1993, D3/21.

23. Уровень концентрации Лп(а) плазмы крови как индикатор доля диагноза и профилактики предрасположенности к ишемической болезни сердца и сосудистых заболеваний ЦНС.//В кн.: Новые методы диагностики, лечения и профилактики заболеваний. Тез.док. науч. - прак. конф. Новосибирск, 1993, с. 106-107 (в соавторстве)

24.Эффективность лечения глирофармом больных с гиперлипопротеи-демией.//В кн.: Новые методы диагностики, лечения и профилактики заболеваний. Тез.док.науч.- прак. конф. Новосибирск, 1993, с.111 (в соавторстве)

25.Липопротеид(а): количественный уровень и его клиническое использование у коренных жителей Крайнего Севера. //В кн.: Актуальные проблемы охраны здоровья малочисленных народов Севера, (тез.докл.науч.-практ. конф.) Красноярск. 1993, с. 69-70 (в соавторстве)

26.Особенности распределения уровня Лп(а) плазмы крови среди здоровых и больных ИБС жителей Зап.Сибири.//В кн.: Кардиология. успехи, проблемы и задачи, (тез. докл.Всерос.конф.) С.-Петербург. 1993, с.191-192.

27. Динамика распределения количественного уровня Лп (а) -генетического маркера риска развития ИБС и ЦВЗ.//В кн.: Актуальные вопросы профилактики неинфекц. заболеваний (тез. докл.науч.-практ. конф.), Москва, 1993.(в соавторстве).

28. Региональные распределения уровня концентрации Лп(а) плазмы крови в популяциях Западной Сибири и Чукотки - фактора риска кардиоваскулярных и цереброваскулярных заболеваний //В кн.: Актуальные вопросы профилактики неинфекционных заболеваний. (тез. докл.науч.-практ. конф. с междун. участием) Москва, 1993, т.1. с.87.(в соавторстве).

29. Количественный уровень Лп(а) плазмы крови у жителей Западной Сибири.//ж.Бюллетень СО РАМН Новосибирск, 1993.N3 с.82-88.

30. Особенности распределения концентраций Лп(а) среди пожилых жителей г.Новосибирска больных ИБС.// Материалы II съезда ге-рантологов и гериатров Украины. Киев. 1994

31. Особенности распределения концентрации липопротеидов низкой плотности и показателей липидного обмена среди пожилых жителей Чукотки и Западной Сибири, //ж.Цитология, 1994 т.36, N7, С. 754-755

32.Белково- липидный комплекс Лп(а) плазмы крови: химический состав, уровень распределения среди населения Западной Сибири

•и Чукотки.// Материалы VI симп. по биохимии липидов. (сб.тр.института биохимии РАН),(тез.докл.)С.-Петербург, 1994, С. 102-103.

33. Особенности распределения концентрации Лп(а) среди жителей г. Новосибирска больных ИБС и ЦВЗ.// Тез. докл. науч.-практ. конф. врачей. Новосибирск. 1994 (в соавторстве).

34.Роль генетического маркера Лп(а) в диагностике атеросклероза.// Тез. докл.межрегион, конф. общества мед. генетиков. Мед. генет,науч. центр РАМН. М..1994

35.Lp(a) levels and lschaeml-c heart disease In urban, rural and coastal populations in Siberia.//В кн.: Xth Intern. Symp. on Atherosclerosis. Canada. Montreal.1994, N129. n. PT-77.

36.Lipids profile and antioxidant vitamins In urban Siberian population.//Acta cardiológica. Intern. J. of cardiology, 1994, v.XLIX. n.4,p. 400-402.(with co-authors).

37. Lipid spectrum and antioxidant vitamins in urban Siberian population. //В кн.: Meeting of the working Group Epidemiology and Prevention of the European Society of Cardiology.1994, Venice, Italy, n.59 (with co-authors).

38. Concentration levels of serum llpoprotein(a) In Chukotka natives. //В кн.: Circumpolar health 93. Artie Medical Research vol.53, pp.604-606. 1994 (with co-authors).

39. Количественный уровень Лп(а) плазмы крови в диагностике ИБС. //В кн.: Тез. докл. II Конгресса кардиологов Центральной Азии. Алматы. 1995. с.67-68.

40. Биоразнообразие уровня Лп(а) плазмы крови и риск развития ИБС. // В кн.: Тезисные доклады II Съезда физиологов Сибири и Дальнего Востока. Новосибирск. 1995, N513. т. 2, с. 433.

41. Современные биохимические и молекулярно- генетические показатели в диагностике нарушений липидного обмена.// В кн.:Тез.док. V Российск.съезд специалистов по лабораторной диагностике, Москва. 1995, с.54-55 (в соавторстве).

42. Особенности распределения разного уровня концентрации липоп-ротеида(а) в популяции Сибири, //отправлено в ж. Кардиология" в 1995 г.(в соавторстве).

43. Анализ корреляции наследственной предрасположенности к ише-мической болезни сердца с помощью генетических маркеров уровня концентрации Лп(а) плазмы крови, //отправлено в ж.'Генетика" в 1995 г.(в соавторстве).

44. Определение количественного уровня Лп(а) плазмы крови методом двойной радиальной иммунодиффузии в геле агарозы с полимери-зованными в нем антителами.//Положительное решение на заявку N142 от 01.12.1991. Заявка принята к использованию в Институте терапии СО РАМН.

45. Схема иммунизации мышей с целью получения МКА к Лп(а) плазмы крови человека.//Положительное решение на заявку N143 от 01.12.1991. Заявка принята к использованию в Институте терапии СО РАМН.

46.Приготовление специфических гетероиммунных антисывороток к Лп(а) - генетическому маркеру атеросклероза, путем использования в качестве реципиентов мини-свиней. //Положительное решение на заявку N144 от 01.12.1991. Заявка принята к использованию в Институте терапии СО РАМН.

Подписано в печать Печ.листов тираж 100 экз.

Зак. Форм.бум. Типография