Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Антиоксидантная активность фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, при токсическом поражении печени

На правах рукописи

ЦАРЕВА АННА АЛЕКСАНДРОВНА

АНТИОКСИДАНТНАЯ АКТИВНОСТЬ ФИТОПРЕПАРАТОВ, СОДЕРЖАЩИХ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ

14.00.25 — фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на сонскаш!е ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа-2007

еЧ

лу

003065082

Работа выполнена на кафедре фармакологии

Государственного образовательного учреждения

высшего профессионального образования

«Самарский государственный медицинский университет»

Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Кулагин Олег Львович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук,

профессор Ларионов Леонид Петрович

доктор медицинских наук,

профессор Сибиряк Сергей Владимирович

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию

г- ">

Защита состоится <о »О'с ¿сс/с /I у 2007 года в _часов на заседании

диссертационного совета Д - 208.006.03 при Государственном образовательном учреждении высшего' профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3

С диссертацией можно ознакомиться в научной медицинской библиотеке Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию по адресу: 450000, г. Уфа, ул. Ленина, 3

1

Автореферат разослан « 3 » ЧЛ-и '■-ил^и/и 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Мирсаева Г.Х.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. На печень современного человека действует большое количество экотоксинов, среди которых отмечен и ряд лекарственных препаратов. В результате патология печени и ее токсические поражения занимают одно га первых мест среди заболеваний органов пищеварения. В общей сложности 15-30% населения страдает заболеваниями печени и нуждается в медицинской помощи.

В патогенезе нарушений функций печени важную роль играет увеличение уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ). Повышение уровня ПОЛ, а также содержания высокоактивных форм молекулы кислорода приводит к оксидативному стрессу, при котором нарушаются структура и функции клеточных мембран и патологически изменяются функции клеток, в том числе и гепатоцитов. Уровень ПОЛ зависит не только от уровня свободных радикалов, но и от функции противоперекисной защиты. Ферменты супероксидцисмутаза, глугатионпероксидаза, каталаза являются основными ферментами в антиоксидантной системе организма.

Перспективным источником биологически активных соединений с антиоксидангными свойствами, к числу которых относятся фенилпропаноиды, являются лекарственные растеши. Фенилпропаноиды широко распространены в растительном мире, но лишь в последнее время они стали предметом пристального внимания исследователей. Многие растения, содержащие фенилпропаноиды, недостаточно изучены и в будущем могут оказаться прекрасным растительным сырьем для фармакологической промышленности. Некоторые фитопрепараты, содержащие фенилпропаноиды, давно и успешно применяются в медицинской практике. Несмотря на это, требуется дополнительного изучение данных препаратов в плане расширения спектра их применения. Таким образом, актуальность данной работы обусловлена необходимостью выявления растений, содержащих биологически активные соединения с антиоксидангными и гепатопротекторными свойствами, в частности

фенилпропаноиды, и изучения механизмов действия препаратов, созданных на их основе, что позволило бы внедрить в медицинскую практику эффективные лекарственные средства.

Цель исследования. Цель работы - изучение влияния фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, на уровень перекисного окисления липидов и функции антиоксидантных систем при токсическом поражении печени.

Задачи исследования.

1. Изучить интенсивность перекисного окисления липидов, активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в гомогенате печени крыс при токсическом поражении четыреххлористым углеродом и при токсическом поражении четыреххлористым углеродом и одновременном введении этилового спирта.

2. Исследовать влияние на эти процессы препаратов эхинацеи пурпурной настойки, настойки «Эх1шацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки и выяснить возможность снижения уровня перекисного окисления липидов в ткани печени крыс при ее токсическом поражении.

3. Изучить и сравнить влияние препаратов, созданных на основе родиолы розовой, на функцию антиоксидантных систем в гомогенате печени крыс на фоне токсического гепатита и определить возможные точки приложения гепатопротекторного действия этих препаратов.

4. Исследовать и сравнить влияние фитопрепаратов, созданных на основе лимонника китайского, на уровень малонового диальдегида и активность ферментов супероксиддисмугаза, катал аза и глутатионпероксидаза в гомогенате печени крыс.

5. Оценить воздействие перечисленных фитопрепаратов на отдельные звенья аитиоксидантной защиты для выявления возможности дифференцированного влияния на активность супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в ткани печени на фоне токсического гепатита.

6. Определить эффективность изучаемых фитопрепаратов путем сравнения с препаратом карсил.

Научная новизна. Впервые установлено, что при применении препаратов родиолы экстракта сухого, родиолы розовой настойки и розавина достоверно снижается уровень малонового диальдегида. Наряду со снижением перекисного окисления липидов, родиолы розовой настойка достаточно эффективно повышает активность супероксиддисмутазы, а розавин - катал азы и супероксиддисмутазы.

Впервые выявлено увеличение активности фермента глутатионпероксидазы печени под влиянием препаратов, созданных на основе эхинацеи пурпурной: настойки эхинацеи пурпурной и настойки «Эхинацея ГаленоФарм», что является одним из механизмов гепатопротекторного действия этих препаратов.

Впервые показано снижение уровня малонового диальдегида при токсическом поражении печени под действием настойки мелиссы лекарственной, что говорит об антиоксидантных свойствах данного фитопрепарата.

Впервые изучены в сравнении антиоксидантные и гепатопротекторные свойства препаратов, изготовленных на основе лимонника китайского: лимонника настойки 40%-ной, лимонника настойки 70%-ной, СОг экстракта лимонника и сока лимонника и выявлено дифференцированное влияние данных препаратов на уровень активности ферментов супероксидцисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы.

Практическая значимость. Создана основа для последующей разработки новых лекарственных средств с антиоксидантной активностью на основе сырья эхинацеи пурпурной, лимонника китайского и родиолы розовой. Рекомендовано расширить показания к применению препарата настойки «Эхинацея ГаленоФарм» при гепатитах в качестве гепатопротекторного средства. Результаты работы внедрены в учебный и научный процесс и используются на кафедре фармакологии и кафедре

фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета.

Положения, выносимые на защиту.

1. Результаты изучения гепатопротекторной активности фитопрепаратов эхинацеи пурпурной настойки, настойки «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки и выяснения возможности снижения уровня перекисного окисления липидов в ткани печени крыс при ее токсическом поражении.

2. Результаты изучения антиоксид антной активности препаратов, созданных на основе родиолы розовой: родиолы экстракт сухой, родиолы розовой настойка, розавин, родиолы экстракт жидкий.

3. Результаты исследования уровня гепатопротекторной активности препаратов, созданных на основе лимонника китайского: лимонника настойка 40%-ная, лимонника настойка 70%-ная, СОг экстракт лимонника, сок лимонника.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Государственная регистрация №012001053332) и Республиканской программы «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профессиональных учреждений в рыночных условиях» по теме «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (Государственной регистрации № 01990005277).

Апробация работы н публикации. Материалы работы доложены и обсуждены на XXV межрегиональном съезде врачей «Управление качеством здравоохранения через новации» (Самара - Тольятти, 2005), на XIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006),

на IV международной конференции «Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы» (Минск, 2006), на XXXIX итоговой научно-практической конференции научно-педагогического состава Самарского военно-медицинского института (Самара, 2006), на XXIII International Conference on Poliphenols (Winnipeg-Canada, 2006).

Апробация состоялась 18 июня 2007 г. на межкафедральном коллоквиуме фармацевтического факультета СамГМУ.

Основное содержание работы опубликовано в 9 научных трудах, в том числе 1 статья в издании, определенном ВАК.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 177 страницах машинописного текста, содержит 68 таблиц, 16 диаграмм. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (глава 1), описания объектов и методов исследования (глава 2), описания результатов собственных исследований (глава 3), обсуждения результатов собственных исследований (глава 4), общих выводов и списка литературы, включающего 221 источник, из них 66 - на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследовашш. В качестве объектов исследования служили фармакопейные препараты го корневищ «Элеутерококка экстракт жидкий» и семян лимонника китайского «Лимонника настойка», фитопрепараты: настойка травы эхинацеи пурпурной [Echinacea purpurea (L.) Moench.], настойка корневищ родиолы розовой (Rhodiola rosea L.), сухой экстракт родиолы розовой, настойка коры сирени обыкновенной (Syringa vulgaris L.), настойка травы мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), С02-экстракт («Схизатон») из семян лимонника китайского Schizandra chinensis Bail, и сок лимонника, настойка лимонника на 70%-ном спирте, аптечный препарат «Эхинацея ГаленоФарм», а также индивидуальное соединение - розавин. В качестве препарата сравнения был использован аптечный препарат карсил.

Выделение и анализ фитопрепаратов и индивидуальных фенилпропаноидов

В качестве объектов исследования служили фармакопейные препараты «Элеутерококка экстракт жидкий» из корневищ элеутерококка и «Лимонника настойка», изготовленная из семян лимонника китайского, фитопрепараты: настойка травы эхинацеи пурпурной [Echinacea purpurea (L.) Moench.], настойка корневищ родиолы розовой ([Rhodiola rosea L.), сухой экстракт родиолы розовой, настойка коры сирени обыкновенной (Syringa vulgaris L.), настойка травы мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L.), С02-экстракг («Схизатон») из семян лимонника китайского Schizandra chinensis Bail, и сок лимонника, настойка лимонника на 70%-ном спирте, аптечный препарат «Эхинацея ГаленоФарм», а также индивидуальное соединение — розавин.

Фитопрепараты были изготовлены на кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии СамГМУ под руководством профессора В.А. Куркина. Рандомизированное исследование ангиоксидантной активности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, осуществляли на белых лабораторных крысах обоего пола массой 200-260 граммов. В опытах были использованы 19 групп крыс по 10 ппук в каждой. В эксперименте были задействованы половозрелые крысы одного года рождения с целью сведения к минимуму возрастных различий активности ферментов. Крысы находились на обычном рационе вивария, были размещены в стандартных пластиковых клетках в помещении с температурой воздуха 18-25 °С. Животные были вовлечены в эксперимент одновременно, что исключает влияние внешних температурных, климатических и иных факторов на разницу активности ферментов у опытных и контрольных групп животных. Во время эксперимента доступ крыс к воде и корму был свободным. Все эксперименты выполнялись в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных».

Для воспроизведения токсического повреждения печени нами был выбран четыреххлористый углерод, при хроническом отравлении которым

наблюдаются увеличение печени, повышение уровня трансаминаз и прямого и непрямого билирубина в крови, увеличение уровня перекисного окисления липидов. Фитопрепараты, содержащие фенштропаноиды, вводились опытным крысам внутрижелудочно через зонд ежедневно в течение 6-ти дней одновременно с введением четыреххлористого углерода.

Настойки мелиссы, родиолы розовой, эхинацеи пурпурной, лимонника, лимонника на 70%-ном спирте, сирени, «Эхинацея ГаленоФарм», а также экстракт элеутерококка жидкий, экстракт родиолы жидкий вводились в дозе 150 мг/кг массы тела животного. СОг экстракт лимонника вводился в дозе 5 мг/кг массы тела, розавин - 25 мг/кг массы тела животного.

Контрольной группе крыс вводился ежедневно в течение 6-ти дней 50%-ный масляный раствор четыреххлористого углерода. Была задействована интакгная группа крыс, а также группа крыс, получавшая наряду с четыреххлористым углеродом 40%-ный спирт в дозе 0,2 мл/кг, в 10 раз разбавленный водой. На седьмой день крысы забивались, у них удалялась печень. Крысы забивались в соответствии с этическими нормами под эфирным наркозом методом декапитации. После извлечения печень промывалась холодным физиологическим раствором и сразу замораживалась в сосуде с твердой углекислотой («сухим льдом») при температуре -70 - -80 °С. Затем из ткани печени крыс готовился гомогенат для проведения анализа на содержание малонового альдегида (МДА), а также определения активности супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГП) и катал азы. Гомогенат готовился механическим измельчением ткани печени массой 1 грамм с 5 мл фосфатного буфера (рН=7,4) со скоростью 5000 об/мин в сосуде с двойными стенками, постоянно охлаждаемом проточной водой.

Определение конечного продукта перекисного окисления липидов -малонового диальдегида осуществлялось на основе принципа, предложенного Стальной И.Д., Гаришвили Т.Г. (1977) в модификация Коробейниковой О.Н. (1989), в соответствии с которым при высокой

температуре в кислой среде МДА реагирует с тиобарбитуровой кислотой, образуя окрашенный триметиновый комплекс с максимумом поглощения при длине волны 532 нм, который и регистрируется фотометрически.

Определение активности каталазы основано на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс (Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Т., 1988).

Определение активности супероксиддисмутазы (СОД) - фермента, инакгивирующего супероксидные радикалы и уменьшающего интенсивность переьсисного окисления липидов, определялась по методу, описанному B.C. Гуревичем и др. (1990). В основе данного метода лежит определение степени ингибирования восстановления тетразолия шгграсинего в присутствии НАДН и феназинметасульфата.

Определение активности глутатнонперокспдазы (ГП) осуществлялась в соответствии со следующей методикой, предложенной Мойным В.М. (1986). В основе метода лежит определение скорости окисления глутатиона в присутствии гидроперекиси третичного бутила.

Все данные активности ферментов и уровня перекисного окисления липидов рассчитывались на содержание белка. Этот расчет был необходим для унификации результатов опытов, поскольку содержание белка в гомогенате отличалось в отдельных пробах.

Определение белка в печеночной ткани производилось микробиуретовым методом.

Полученные данные являлись выборками из генеральных совокупностей с нормальным распределением. Для статистической обработки данных нами был применен однофакторный дисперсионный анализ. Для статистического анализа средних выборок был использован t-критерий с поправкой Бонферонни.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Проведенное нами исследование показало, что при отравлении

четыреххлорисгым углеродом возникают значительные изменения функции печени, которые могут быть минимизированы применением фитопрепаратов с гепатопротекгорными свойствами.

ТАБЛИЦА 1 - Влияние четыреххлорпстого углерода и 40%-ного этилового спирта на активность ферментов и уровень ПОЛ

№ п/п Вводимые вещества Малоновый диальдепш, нМоль на мг белка печени Активность супероксиддисмутазы, АЕДнамг белка печенн Активность каталазы, нМоль/с на мг белка печени Активность глутатионпероксидазы, нМоль/мин на мг белка печени

1 Интактные 11,28 ±2,03 1,205 ±0,186 0,074 ±0.010 1,57 ±0.41

2 ССЦ 25,11±1,95 р<0,05 0,750 ±0,105 р<:0,05 0,059 ± 0,013 р<0,05 1,01 ±0,37 р<0,01

3 ССЦ+ 40%-ный спирт этиловый 25,27 ± 2,06 р<0,05 0,795 ±0,171 р<0,05 0,062 ±0,011 р<0,05 1,19 ±0,34 р<0,05

Из таблицы 1 видно, что при интоксикации четыреххлористым углеродом в дозе 2,0 г/кг в печени статистически достоверно повышаются процессы перекисного окисления липидов и снижается активность ферментов каталазы, глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы.

По нашим данным, СС14 в сочетании с 40%-ным этиловым спиртом в дозе 0,2 мл/кг, в 10 раз разбавленным водой, также вызывает тяжелое поражение печени, поэтому применение спирта в качестве растворителя не изменяет картину антиоксидантного, гепатопротекторного действия фитопрепаратов.

В качестве препарата сравнения при анализе гепатопротекторной активности исследованных нами фитопрепаратов был применен карсил, который достоверно снижает уровень малонового диальдегида в 1,4 раза и повышает активность супероксиддисмутазы в 1,8 раз (таблица 2).

ТАБЛИЦА 2 - Влияние фитопрепаратов на активность ферментов н уровень ПОЛ

№ п/п Вводимые вещества Малоновый диальдегид, нМоль на мг белка печени Активность супероксид-дисмутазы, АЕД на мг белка печени Активность каггалазы, нМоль/с на мг белка печени Активность глутатионпероксидазы, нМоль/мин на мг белка печени

1 Контроль (ССЦ) Карсил 26,29 ± 3,09 0,720 ±0,310 0.057 ±0,014 1,12±0Д5

19,28 ±2,39 р<0,01 1,280 ± 0,340 р<0,01 0,067 ±0,022 р>0,05 1,41 ±0,49 р>0,05

2 Контроль (ССЦ+спирт) ССЦ + эхинацеи пурпурной настойка 25,27 ±2,06 0,795 ±0,171 0,063 ±0,011 1,19 ±0,34

18,51 ±2,87 р<0,01 0,854 ±0,292 р>0,05 0,066 ±0,017 ¡¿0,05 1,64 ±0,29 р<0,01

3 Контроль (ССЦ + спирт ССЦ + «Эхинацея ГаленоФарм» 24,74 ± 2,07 0,810 ±0,147 0,058 ±0,014 1,11 ±0,44

20,78 ±2,83 р<0,01 0,843 ±0^67 р>0,05 0,065 ±0,018 р>0,05 1,66 ±0,46 р<0,05

4 Контроль (ССЦ+ спирт) ССЦ + элеутерококка экстракт жидкий 24,74 ±2,07 0,810 ±0,146 0,058 ±0,014 1,11 ±0,44

23,54 ±1,79 р>0,05 0,876 ±0,282 .рХ>,05 0,064 ±0,023 р>0,05 1.23 ±0,58 р>0,05

5 Контроль (ССЦ) ССЦ + сирени настойка 25,11 ±1,96 0,750 ±0,105 0,059 ±0,013 1,01 ±0,37

20,54 ±3,65 р>0,05 0,821 ±0,224 рХ),05 0,070 ±0,017 р>0,05 1,06 ±0,46 р>0,05

6 Контроль (ССЦ+ спирт) ССЦ + мелиссы настойка 25,27 ±2,06 0,795 ±0,171 0,063*0,011 1,19 ±0,34

17,17 ±3,03 р<0,01 0,972 ±0,180 р>0,05 0,063 ±0,010 рМ),05 U6±0,40 £>0,05

Из таблицы 2 видно, что выраженной гепатопротекторной активностью обладают фитопрепараты, изготовленные из эхинацеи пурпурной. Настойка эхинацеи пурпурной в дозе 150 мкл/кг, как и препарат «Эхинацея ГаленоФарм» в той же дозировке, достоверно снижают уровень малонового диальдегида и повышают активность глутатионпероксидазы. Достоверных

изменений в активности супероксиддисмутазы и катал азы не выявлено, но можно отметить тенденцию к повышению активности этих ферментов. Таким образом, статистически достоверное повышение активности глутатионпероксидазы и понижение уровня малонового диальдегида в гомогенате тканей печени, обнаруженное на фоне токсического поражения печени, может свидетельствовать о способности настойки эхинацеи и настойки «Эхинацея ГаленоФарм» увеличивать уровень антиперекисной защиты и улучшать функцию мембран гепатоцитов.

Эхинацеи пурпурной настойка, так же как и карсил, снижает уровень малонового диальдегида в 1,4 раза. В отличие от карсила, настойка эхинацеи проявляет только тенденцию к увеличению уровня супероксиддисмутазы, но достоверно повышает уровень глутатионпероксидазы в 1,4 раза.

Фитопрепарат «Эхинацея ГаленоФарм» аналогичным образом влияет на уровень перекисного окисления липидов и активность глутатионпероксидазы, повышая ее активность в 1,5 раза. Уровень малонового диальдегида снижается в 1,2 раза.

Поскольку- эхинацеи пурпурной настойка и фитопрепарат «Эхинацея ГаленоФарм» снижают уровень малонового диальдегида, повышают активность глутатионпероксидазы и проявляют тенденцию к повышению активности супероксиддисмутазы на фоне интоксикации четыреххлористым углеродом, считаем возможным рекомендовать дальнейшее изучение гепатопротекторной активности данных фитопрепаратов и расширение показаний к их применению в медицинской практике в качестве гепатопротекторных лекарственных средств.

Настойка мелиссы в дозе 150 мкл/кг с такой же статистической достоверностью, как и препараты, изготовленные из эхинацеи пурпурной, снижает уровень перекисного окисления липидов, но, в отличие от них, не влияет на активность ферментов противоперекисной защиты.

Достоверное влияние на уровень перекисного окисления липидов делает фитопрепараты, изготовленные на основе мелиссы, весьма перспективными в плане гепатопротекторного и антиоксидантного влияния.

Элеутерококка экстракт жидкий в дозе 150 мкл/кг и сирени настойка в дозе 150 мкл/кг выраженным влиянием на уровень малонового диальдегида и активность супероксиддисмутазы, каггалазы и глутатионпероксидазы не обладают. Несмотря на хорошие адаптогенные свойства, которые обусловлены содержанием в сырье фенилпропаноидов, основным из которых является сирингин (Куркин В.А. и соавт., 2005), эти препараты тем не менее не могут быть рекомендованы в качестве гепатопротекторов.

В таблице 3 представлены данные о влиянии на уровень малонового диальдегида и активность ферментов фитопрепаратов, изготовленных на основе родиолы розовой.

Из четырех исследованных препаратов только у родиолы экстракта жидкого, вводимого в дозе 150 мкл/кг, не выявлено воздействие на уровень малонового диальдегида и активность ферментов супероксиддисмутазы, катал азы и глутатионпероксидазы. Родиолы экстракт сухой в дозе 150 мкл/кг, родиолы розовой настойка в дозе 150 мкл/кг и розавин в дозе 25 мг/кг достоверно снижают уровень малонового диальдегида. Наряду со снижением уровня малонового диальдегида розавин статистически достоверно повышает уровень катал азы и супероксиддисмутазы и по своей активности превосходит остальные препараты, приготовленные на основе родиолы розовой. Это свидетельствует о хорошей перспективе использования в медицинской практике именно эсеенциального фенилпропаноида, который и обусловливает достоверную эффективность остальных препаратов этой группы. Есть все основания считать, что повышение активности супероксиддисмутазы при введении родиолы розовой настойки крысам, отравленным четыреххлористым углеродом, в сочетании с понижением уровня малонового диальдегида, свидетельствует о наличии у данных препаратов выраженных гепатопротекторных свойств.

ТАБЛИЦА 3 • Влияние фитопрепаратов па активпость ферментов н уровень ПОЛ

№ п/п Вводимые вещества Малоновый диальдегид, нМоль на мг белка печени Активность супероксиддисмутазы, АЕД на мг белка печени Активность катализы, нМоль/с на мг белка печени Активность глутатион- пероксидазы, нМоль/мин на мг белка печени

1 Контроль (ССЦ) 26,29 ± 3,09 0,720 ±0,310 0.057 ±0,014 1,12 ±0,25

Карсил 19,2« ±2,39 р<0,01 1,280 ±0,340 р<0,01 0,067 ±0,022 р>0,05 1,41 ±0,49 р>0,05

2 Контроль (ССЦ) 26,06± 3,40 1,161 ±0,292 0,064 ± 0,014 0,89 ± 0,32

ССЦ + родиолы экстракт сухой 19,45± 3,20 р<0,01 1,179 ±0,400 р>0,05 0,060 ± 0,017 р>0,05 0,86 ± 0,38 р>0,05

3 Контроль (ССЦ+ спирт) 25,27 ±2,06 0,795 ±0,171 0,063 ±0,011 1,19 ±0,34

ССЦ + родиолы розовой настойка 19,50± 5,30 р<0,01 1,062 ±0,265 р<0,05 0,067 ± 0,017 р>0,05 1,30 ±0,51 р>0,05

4 Контроль (ССЦ) 26,06 ± 3,40 1,161 ±0,292 0,064 ± 0,014 0,89 ± 0,32

ССЦ + розавин 20,24 ± 2,02 р<0,01 1,533 ±0,261 р<0,05 0,103 ± 0,027 р<0,01 1,14 ±0,33 р>0,05

5 Контроль (ССЦ) 25,11 ± 1,96 0,750 ±0,105 0,059 ± 0,013 1,01 ± 0,37

ССЦ + родиолы экстракт жидкий 20,67 ± 3,44 р>0,05 0,907 ± 0,231 р>0,05 0,070 ± 0,017 р>0,05 0,97 ± 0,41 р>0,05

Как и карсил, родиолы розовой настойка и розавин достоверно снижают уровень малонового диальдепща (в 1,3 раза), что примерно соответствует снижению уровня малонового диальдепща в группе животных, получавших карсил, на фоне интоксикации четыреххлористым углеродом (1,4 раза). При этом и родиолы розовой настойка, и розавин достоверно повышают активность супероксиддисмутазы, но в меньшей степени, чем карсил (в 1,3 раза). Несмотря на то, что розавин в меньшей степени, чем карсил, влияет на уровень малонового диальдепща и активность супероксиддисмуты, при его

применении статистически достоверно, в отличие от карсила, повышается активность и второго фермента противоперекисной защиты — каггалазы (в 1,6 раза). Исходя из полученных данных мы можем сделать вывод о возможности применения фитопрепаратов, изготовленных из родиолы розовой, в качестве гепатопротекторных лекарственных средств. Также мы можем предположить, что эссенциальные вещества, а именно розавин, способны оказывать более выраженное гепатопротекторное действие, нежели фитопрепараты, которые уступают им по концентрации розавина.

Препараты, изготовленные на основе лимонника китайского, также обладают выраженными гепато протекторными свойствами (таблица 4). Лимонника настойка 70%-ная и сок лимонника достоверно и несколько меньше, чем карсил, снижают уровень малонового диальдегида (в 1,2 раза) и повышают активность супероксиддисмутазы (в 1,4 раза). Так же, как в случае с розавином, лимонника настойка 70%-ная статистически достоверно повышает уровень катал азы (в 1,2 раза). Карсил активность катал азы не изменяет.

Настойка лимонника китайского на 40%-ном этиловом спирте в дозе 150 мкл/кг статистически достоверно снижает уровень малонового диальдегида и проявляет тенденцию к повышению активности ферментов противоперекисной защиты. 70%-ная настойка лимонника в дозе 150 мкл/кг статистически достоверно снижает уровень перекисного окисления липидов и повышает активность ферментов антиперекисной защиты катал азы и супероксиддисмутазы, не изменяя активности глутатионпероксидазы.

С02 экстракт лимонника в дозе 5 мг/кг статистически достоверно повышает активность катал азы и проявляет тенденцию к повышению активности ферментов супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы, но в то же время снижение уровня перекисного окисления липидов не является достоверным.

Сок лимонника в дозе 150 мкл/кг статистически значимо снижает уровень перекисного окисления липидов и повышает активность фермента супероксиддисмутазы. Незначительное повышение активности ферментов каталазы и глутатионпероксидазы не является статистически достоверным.

Можно отметить, что все исследованные препараты на основе лимонника китайского обладают антиоксидантными свойствами за счет влияния на уровень перекисного окисления липидов и активность ферментов противоперекисной защиты.

ТАБЛИЦА 4 - Влияние фитопрепаратов па активность ферментов и уровень ПОЛ

№ п/п Вводимые вещества Малоновый диальдегид, нМоль на мг белка печени Активность супероксвд-дисмутазы, АЕДнамг белка печени Активность каталазы, нМоль/с на мг белка печени Активность глуппион- пероксидазы, нМоль/мин на мг белка печени

1 Контроль (ССЦ) Карсил 26,29 ±3,09 0,720 ±0,310 0.057 ±0,014 1,12 ±0,25

19,28 ± 2,39 р<0,01 1,280 ±0,340 р<0,01 0,067 ±0,022 рХ),05 1,41 ±0,49 р>0,05

2 Контроль (ССЦ+ спирт) ССЦ + лимонника настойка 40%-ная 24,74± 2,07 ' 0,810± 0,147 0,058± 0,014 1,11 ±0,44

19,60± 4,00 р<0,05 0,966 ± 0,134 р>0,05 0,065 ±0,010 р>0,05 1,2510,58 р>0,05

3 Контроль (ССЦ) ССЦ + лимонника настойка 70%-ная 25,11± 1,96 0,750 ±0,105 0,059 ±0,013 1,01 ± 0,37

20,48± 4,38 р<0,05 1,086± 0,115 р<0,05 0,072 ±0,012 р<0,05 1,02 ±0,52 р>0,05

4 Контроль (ССЦ) ССЦ + СОг экстракт лимонника 28,06 ± 3,40 1,161 ± 0,292 0,064 ± 0,014 0,89 ±0,32

25,97± 5,03 р>0,05 1,212 ±0,241 р>0,05 0,098 ± 0,030 р<0,05 1,16±0,31 р>0,05

5 Контроль (ССЦ) ССЦ + сок лимонника 25,45 ± 3,18 1,161 ±0,502 0,059± 0,013 1,45 ±0,11

20,93 ± 2,69 р<0,01 1,656 ±0,466 р<0,05 0,062 ±0,016 р>0,05 1,46 ± 0,40 р>0,05

Результаты исследования антиоксидантной активности фитопрепаратов на основе лимонника китайского указывают на то, что именно 70%-ная настойка лимонника обладает наиболее выраженной фармакологической активностью. Несколько слабее действует препарат сока лимонника. Оба препарата достоверно снижают уровень малонового диальдегида и повышают активность супероксиддисмутазы. Но в отличие от сока настойка лимонника повышает активность катал азы, что, безусловно, свидетельствует о лучшей способности этого препарата защищать ткани от окислительного стресса.

Различия в фармакологической активности 70%-ной настойки и сока лимонника можно объяснить различием в составе исходного сырья, взятого для их получения, а именно: 70%-ная настойка готовится из семян, где уровень а - токоферола изначально высок, а в соке, приготовленном из плодов лимонника, очевидно, преобладают кверцетин и ретинол. Наличие фенилпропаноидов и в семенах, и в плодах лимонника доказано. Видимо, имеют значение различия в концентрации и эффективности реализации гепатопротекторных механизмов разных компонентов, обеспечивающих различные виды синергизма.

Нами не отмечалось достоверного влияния на фермент глутатионпероксидазу, тем не менее можно говорить о тенденции к повышению активности этого фермента.

Данные, полученные нами в ходе исследований, могут служить основанием для расширения показаний к применению препаратов, изготовленных на основе лимонника китайского. Два из изученных препаратов, а именно: сок лимонника и 70%-ная настойка лимонника проявляют наибольшую антиоксидантную активность, достоверно снижая уровень малонового диальдегида и повышая активность ферментов антиперекисной защиты - супероксиддисмутазы. Кроме того, 70%-ная настойка лимонника статистически достоверно повышает активность

каталазы. Полученные нами данные позволяют говорить об эффективности этих фитопрепаратов в качестве гепатопротекторов.

При сравнении исследуемых нами фитопрепаратов с карсилом было установлено, что все они в меньшей степени снижают уровень малонового диальдегида. Повышение активности важнейшего фермента противоперекисной защиты - супероксиддисмутазы хотя и достаточно выражено, но несколько ниже, чем на фоне применения карсила.

Тем не менее в отличие от карсила розавин и лимонника настойка 70%-ная способны повышать уровень активности не только супероксиддисмутазы, но и еще одного фермента противоперекисной защиты - каталазы, что делает их весьма перспективными в плане применения в качестве гепатопротекторных средств. Будущие клинические исследования вполне могут показать, что розавин и настойка лимонника 70%-ная обладают более мощными по сравнению с карсилом гепатопротекгорными свойствами.

Мы полагаем, что чистый (эссенциалышй) фенилпропаноид розавин и 70%-ная настойка ■ лимонника тормозят процесс перекисного окисления липидов и улучшают структуру и функции фосфолипидного слоя мембран гепатоцитов.

Проведенные нами исследования позволяют также расширить показания к применению препаратов на основе родиолы розовой, поскольку указывают на гепатопротекторные свойства фитопрепаратов, изготовленных из этого растения.

ВЫВОДЫ

1.При интоксикации четыреххлористым углеродом в ткани печени статистически достоверно повышается перекисное окисление липидов и снижается антиоксидантная защита, что проявляется в уменьшении активности ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы.

2. Отравление чегыреххлористым углеродом с одновременным введением 40%-ного этилового спирта приводит к аналогичным изменениям функции печени, которые также выражаются в увеличении уровня ПОЛ и снижении активности ферментов противоперекисной защиты.

3. Фитопрепараты, изготовленные на основе эхинацеи пурпурной: настойка эхинацеи пурпурной и настойка «Эхинацея ГаленоФарм» в дозе 150 мкл/кг достоверно снижают уровень малонового диальдегвда и повышают активность глутатионпероксидазы, что можно считать одним из возможных механизмов антиоксидантного действия препаратов. Достоверных изменений в активности супероксиддисмутазы и катал азы не выявлено, но прослеживается тенденция к повышению активности этих ферментов. Как и карсил, препараты эхинацеи снижают уровень малонового диальдегида, но в отличие от него повышают активность глутатионпероксидазы, что делает их весьма перспективными для дальнейшего изучения и применения в качестве гепатопротекторных лекарственных средств.

4. Настойка мелиссы в дозе 150 мкл/кг статистически достоверно снижает уровень перекисного окисления липидов и проявляет тенденцию к повышению активности супероксиддисмутазы, что может считаться одним из возможных механизмов антиоксидантного действия препарата.

5. Фитопрепараты, полученные на основе родиолы розовой: родиолы экстракт сухой, родиолы розовой настойка в дозе 150 мкл/кг, розавин в дозе 25 от/кг статистически достоверно снижают уровень перекисного окисления липидов. Кроме того, розавин повышает активность ферментов супероксиддисмутазы и каталазы, а родиолы розовой настойка -супероксиддисмутазы, что можно считать возможными механизмами антиоксидантного действия препаратов.

6. Фитопрепараты лимонника китайского: настойка лимонника китайского на 40%-ном этиловом спирте, настойка лимонника на 70%-ном этиловом спирте и сок лимонника в дозе 150 мкл/кг статистически достоверно снижают уровень малонового диальдегида. Настойка лимонника

на 70%-ном этиловом спирте и СОг экстракт лимонника в дозе 5 мг/кг статистически достоверно повышают активность катал азы. Сок лимонника и настойка лимонника на 70%-ном этиловом спирте статистически достоверно повышают активность супероксиддисмутазы, что можно считать возможными механизмами антиоксцдантного действия фитопрепаратов на основе лимонника китайского.

7. В отличие от карсила розавин и лимонника настойка 70%-ная повышают уровень активности не только супероксиддисмутазы, но и каталазы, что делает их весьма перспективными в плане применения в качестве гепатопротекторных лекарственных средств.

8. Элеутерококка экстракт жидкий и сирени настойка не влияют на уровень малонового диальдегида и активность ферментов противоперекисной защиты, что делает их неперспективными в плане применения в качестве гепатопротекторных лекарственных средств.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1.. Кулагин, О.Л. Экологические аспекты изучения фитопрепаратов в опытах на животных в условиях токсического воздействия / О.Л. Кулагин, Е.В. Кантария, Н.С. Додонов, A.A. Царева // Экология и здоровье человека. X всероссийский конгресс 11-13 октября 2005 года, г. Самара.

2. Кулагин, ОЛ. Применение гепатопротекторных препаратов растительного происхождения при экспериментальном токсическом поражении печени / ОЛ. Кулагин, Е.В. Кантария, Н.С. Додонов, А.А.Царева // Управление качеством здравоохранения через новации. Материалы XXV межрегионального съезда врачей. Самара - Тольятти, 24 ноября 2005 года. С. 239-242.

3. Кулагин, О.Л. Фармакологические особенности влияния гепатопротекторных препаратов растительного происхождения на перекисное окисление липидов при токсическом поражении печени / О.Л. Кулагин, Н.С. Додонов, A.A. Царева // Современные проблемы фармакологии и фармации. 18-19 мая 2005 года, г. Новосибирск, 2005.

4. Кулагин, O.JI. Ферментативная активность гепатоцитов в опытах на животных при токсическом воздействии / O.JI. Кулагин, Н.С. Додонов,

A.А. Царева // XIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Сборник материалов конгресса (тезисы докладов), г. Москва, 3-7 апреля 2006 года. С. 547.

5. Кур кип, В.А. Исследование антиоксидантной активности некоторых фитопрепаратов, содержащих флавоноиды и фенилпропаноиды /

B.А. Куркин, О Л. Кулагин, Н.С. Додонов, А.А. Царева, Е.В. Авдеева // Медико-социальная экология личности: состояние и перспективы. Материалы IV международной конференции 7-8 апреля 2006 г., Минск. -

C. 118-121.

6. Куркин, В.А. Phytochemical and pharmacological investigation of some plants containing flavonoids / В.А. Куркин, ОЛ.Кулагин, Н.С. Додонов,

A.А.Царева, Е.В.Авдеева, А.В. Дубшцев и др. // Polyphenols Communications August 22-25, 2006. Winnipeg, Manitoba, Canada, 2006. -P. 513-514.

7. Кулагин, O.JI. Экологические аспекты изучения фитопрепаратов в опытах на животных в условиях токсического воздействия / О.Л. Кулагин, Е.В. Кантария, Н.С. Додонов, А.А. Царева // «Актуальные вопросы военной медицины». Сборник тезисов и статей XXXIX итоговой научно-практической конференции научно-педагогического состава Самарского военно-медицинского института. Самара: СамВМИ, 2006. - С. 179-181.

8. Царева, А.А. Применение препарата «Эхинацея ГаленоФарм» при хроническом тонзиллите /А.А. Царева, В.А. Куркин, А.В. Жестков, О.Л.Кулагин // Российский аллергологический журнал. Приложение 1. Труды XIII конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». — 2007. — №3. - С. 237.

9. Кулагин, ОЛ. Антиоксидантная активность некоторых фитопрепаратов, содержащих флавоноиды и фенилпропаноиды ! О.Л. Кулагин,

B.А. Куркин, Н.С. Додонов, А.А. Царева и др. // Фармация. - 2007. - №2. -С. 26-31.

Подписано в печать 21.08.07. Тираж 100 экз. Заказ № 36. Бумага ксероксная. Печать оперативная. Объем -1,5 усл. п. л. Формат 60 х 84/16

Отпечатано в типографии ООО «Инсома-пресс» ул. Сов. Армии, 217 тел.: 926-07-51

Актуальность темы

Ответной реакцией организма на стремительно меняющиеся условия жизни является состояние, получившее название окислительный стресс. Концепция стресса, основоположником которой является канадский ученый -профессор Ганс Селье (1907 - 1982г.г.), развита в многочисленных работах отечественных и зарубежных ученых (Okuda Т et. al., 1989 - 1993; Чучалин А.Г., - 2000). Под окислительным стрессом понимается индуцируемое вредными факторами окружающей среды усиление окислительных реакций в органах и тканях, сопровождающееся увеличением концентрации свободнорадикальных форм метаболитов, нарушающих сложившиеся в процессе эволюции синхронные процессы обмена веществ и энергии. (Ярмоненко С.П., 1997). Воздействие экологических факторов на здоровье человека в последние десятилетия все больше привлекает внимание ученых самых разных специальностей. Этому способствует распространение эндемических заболеваний, так называемых «урбанатов», которые провоцируются техногенным загрязнением биосферы большим количеством химических соединений, поступающих с промышленными отходами, выхлопными газами автотранспорта, бытовым мусором, ядохимикатами и др. (Родкина P.A., Давидян Л.Ю., Целкович JI.C., 2001). В связи с вышесказанным становится понятной актуальность выявления биологически активных соединений, позволяющих минимизировать воздействия вредных факторов окружающей среды на организм человека, тем самым предохраняя его от развития целого ряда заболеваний.

Наиболее остро в настоящее время встал вопрос о заболеваниях органов пищеварения, в особенности, - печени. В общей сложности 15-30% населения страдает заболеваниями печени и нуждается в медицинской помощи (JI.P. Королева, 1995 г.). Широкая распространенность острых и хронических заболеваний печени, ранняя инвалидизация лиц трудоспособного возраста ставят поражения печени на одно из первых мест среди заболеваний желудочно-кишечного тракта. Печень - один из главных органов с более чем 70-ю функциями, при этом выполняемые печенью функции барьера между кишечником и кровотоком делают ее особенно чувствительной к токсическим повреждениям. Ксенобиотики могут оказывать на печень токсическое воздействие, приводящее к гепатиту, фиброзу и циррозу. Как чужеродные, токсическое действие на печень оказывают и некоторые лекарственные препараты. Отмечено, что доля гепатотоксических реакций, вызванных лекарствами, в общем числе составляет 15% (Rosso М., Galan Ко J., Shrestha R. et. al., 2004).

В патогенезе нарушений функций печени важную роль играет увеличение уровня перекисного окисления липидов (ПОЛ). В условиях нормы в крови и тканях определяется низкий уровень ПОЛ. Повышение уровня ПОЛ, а так же содержания высокоактивных форм молекулы кислорода приводит к оксидативному стрессу, при котором нарушаются» клеточные мембраны и патологически изменяются функции клеток, в том числе и гепатоцитов. (Абрамова Ж.И., Оксенгендлер Г.И., 1985; Барабой В.А. и др., 1992; Козлов Ю.П., 1973; Signal P.K. et al., 1988). Однако уровень-ПОЛ зависит не только от уровня свободных радикалов, но и от функции противоперекисной защиты. Во многих исследованиях установлено, что такими антиоксидантными системами в организме являются ферменты супероксиддисмутаза глутатионпероксидаза, каталаза (Буртенян Н.Д., Герасимова O.A. и др. 1997; Виноградова Л.Ф. 1997; Куркин В.А. 2006; Лебедев A.A. 1995 и др.). Возможность лечения поражений печени антиоксидантными средствами в настоящее время широко исследуется, причем особое внимание ученых привлекают фенольные соединения (Куркин В.А., Евстратова Р.И., Запесочная Г.Г., 1991), среди которых наиболее активно изучаются фенилпропаноиды и флавоноиды.

Патологические изменения печени отражаются на всех органах и системах органов, провоцируя возникновение заболеваний различной нозологии (Полякова С.Д. и Машкова Т.А., 1997). В связи с этим важную роль играет поиск лекарственных веществ с гепатопротекторными свойствами.

Перспективным источником биологически активных соединений с антиоксидантными свойствами считаются лекарственные растения. Синтетические и природные антиоксиданты, относясь к различным классам химических соединений, тем не менее, обладают одним общим свойством -способностью тормозить реакции окисления. Но в плане характера воздействия ' на организм, лекарственные средства растительного происхождения имеют ряд преимуществ перед синтетическими аналогами. Мягкий и, в ряде случаев, выраженный терапевтический эффект фитопрепаратов объясняется тем, что в них, наряду с основными биологически активными соединениями, содержатся сопутствующие вещества, которые могут обогащать, усиливать или пролонгировать фармакологическое действие и в дополнение к этому понижать токсичность используемых лекарственных препаратов (Авдеева Е.В., 2006). В' химическом отношении структура препаратов природного происхождения крайне близка к структуре метаболитов, вырабатываемых организмом человека, что обусловлено его эволюционной адаптацией и, соответственно, широко доступна воздействию его ферментативных систем. В результате организм способен не только перерабатывать и усваивать биогенные природные соединения, но при необходимости эффективно их обезвреживать (Моай1 Я., Раигоп Я. 1993). Это делает лекарственные препараты на основе растительного сырья не только эффективными, но и достаточно безопасными.

Фенилпропаноиды широко встречаются.в растительном мире, но лишь в последнее время они стали предметом пристального внимания исследователей. Многие растения, содержащие фенилпропаноиды, недостаточно изучены и могут оказаться в будущем прекрасным растительным сырьем для фармакологической промышленности. Те же препараты на основе растительного сырья, содержащего фенилпропаноиды, которые давно и успешно применяются в медицинской практике, требуют дополнительного изучения в плане расширения спектра их применения. Таким образом, актуальность данной работы обусловлена необходимостью выявления растений, содержащих биологически активные соединения с антиоксидантными и гепатопротекторными свойствами, в частности, фенилпропаноиды, и глубокого изучения механизмов действия препаратов, созданных на их основе, что позволило бы внедрить в медицинскую практику эффективные лекарственные средства, не оказывающие на организм человека токсического действия, которое характерно для лекарств, созданных на основе синтетического сырья.

Цель работы - изучение влияния фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, на уровень перекисного окисления липидов и функции антиоксидантных систем при токсическом поражении печени.

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. Изучить интенсивность перекисного окисления липидов, активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в гомогенате печени при токсическом поражении четыреххлористым углеродом в дозе 2,0 г/кг и при токсическом поражении четыреххлористым углеродом и одновременном введении этилового спирта в дозе 0,2 мл/кг.

2. Изучить влияние на эти процессы препаратов эхиноцеи пурпурной настойки, настойки «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки, и выяснить возможность снижения уровня перекисного окисления липидов в ткани печени крыс при ее токсическом поражении.

3. Изучить и сравнить влияние препаратов, созданных на основе родиолы розовой: родиолы экстракт сухой, родиолы экстракт жидкий, родиолы розовой настойка, розавин на функцию антиоксидантных систем в гомогенате печени крыс на фоне токсического гепатита и определить возможные точки приложения гепатозащитного действия этих препаратов.

4. Изучить и сравнить влияние фитопрепаратов, созданных на основе лимонника китайского: лимонника настойка 70%, лимонника настойка 40% ССЬ экстракт лимонника, сок лимонника на уровень малонового диальдегида и активность ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в гомогенате печени крыс.

5. Оценить воздействие перечисленных фитопрепаратов на отдельные звенья антиоксидантной защиты для выявления возможности дифференцированного влияния на активность супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы в ткани печени на фоне токсического гепатита.

6. Оценить эффективность изучаемых фитопрепаратов путем сравнения с препаратом карсил.

Научная новизна исследования.

Впервые установлено, что при применении препаратов родиолы экстракта сухого, родиолы розовой настойки и розавина достоверно снижается уровень малонового диальдегида, и то, что наряду со снижением перекисного окисления липидов, родиолы розовой настойка достаточно эффективно повышает активность супероксиддисмутазы, а розавин -каталазы и супероксиддисмутазы.

Впервые выявлено увеличение активности фермента глутатионпероксидазы печени под влиянием препаратов, созданных на основе эхинацеи пурпурной: настойки эхинацеи пурпурной, и настойки «Эхинацея ГаленоФарм», что является одним из механизмов гепатопротекторного действия этих препаратов.

Впервые показано снижение малонового диальдегида при токсическом поражении печени под действием настойки мелиссы лекарственной, что говорит об антиоксидантных свойствах данного фитопрепарата.

Впервые изучены в сравнении антиоксидантные и гепатопротекторные свойства препаратов, изготовленных на основе лимонника китайского: лимонника настойки 40%, лимонника настойки 70%, СОг экстракта лимонника и сока лимонника и выявлено дифференцированное влияние данных препаратов на уровень активности ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы.

Впервые проведено сравнение наиболее эффективных фитопрепаратов с карсилом. Установлено, что при применении розавина и сока лимонника активность одного из основных ферментов противоперекисной защиты - каталазы - повышается больше, чем при применении карсила.

Практическая значимость работы.

Создана основа для последующей разработки новых лекарственных средств с антиоксидантной активностью на основе сырья эхинацеи пурпурной, лимонника китайского и родиолы розовой. Рекомендовано расширить показания к применению препарата настойки «Эхинацея ГаленоФарм» при гепатитах в качестве гепатопротекторного средства. Результаты работы внедрены в учебный и научный процессы и используются на кафедре фармакологии и кафедре фармакогнозии с ботаникой и основами фитотерапии Самарского государственного медицинского университета. Положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения гепатопротекторной активности фитопрепаратов эхинацеи пурпурной настойки, настойки «Эхинацея ГаленоФарм», элеутерококка экстракта жидкого, сирени настойки, мелиссы настойки, и выяснения возможности снижения уровня перекисного окисления липидов в ткани печени при ее токсическом поражении.

2. Результаты изучения антиоксидантной активности препаратов, созданных на основе родиолы розовой: родиолы экстракт сухой, родиолы розовой настойка, розавин, родиолы экстракт жидкий.

3. Результаты исследования гепатопротекторной активности препаратов, созданных на основе лимонника китайского: лимонника настойка 40%, лимонника настойка 70%, СО2 экстракт лимонника, сок лимонника.

4. Результаты сравнения эхинацеи пурпурной настойки, «Эхинацеи ГаленоФарм», розавина, родиолы розовой настойки, СО2 экстракта лимонника и сока лимонника с препаратом карсил.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно — исследовательских работ Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет и Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (Государственная регистрация № 012001053332) и Республиканской программы «Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно -профессиональных учреждений в рыночных условиях» по теме «Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепатопротекторного действия» (№ Государственной регистрации 01990005277).

Глава 5. ВЫВОДЫ.

1. При интоксикации четыреххлористым углеродом в ткани печени статистически достоверно повышается перекисное окисление липидов, и снижается антиоксидантная защита, что проявляется в уменьшении активности ферментов супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы.

2. Отравление четыреххлористым углеродом с одновременным введением 40% этилового спирта приводит к аналогичным изменениям функции печени, которые так же выражаются в увеличении уровня ПОЛ и снижении активности ферментов противоперекисной защиты.

3. Фитопрепараты, изготовленные на основе эхинацеи пурпурной: настойка эхинацеи пурпурной и настойка «Эхинацея ГаленоФарм» в дозе 150 мкл/кг достоверно снижают уровень малонового диальдегида и повышают активность глутатионпероксидазы, что можно считать одним из возможных механизмов антиоксидантного действия препаратов. Достоверных изменений в активности супероксиддисмутазы и каталазы не выявлено, но выявляется тенденция к повышению активности этих ферментов. Как и карсил, препараты эхинацеи снижают уровень малонового диальдегида, но в очличае от него повышают активность глутатионпероксидазы, что что делает их весьма перспективными для дальнейшего изучения и применения в качестве гепатопротекторных лекарственных средств.

4. Настойка мелиссы в дозе 150 мкл/кг статистически достоверно снижает уровень перекисного окисления липидов и проявляет тенденцию к повышению активности супероксиддисмутазы, что может считается одним из возможных механизмов антиоксидантного действия препарата.

5. Фитопрепараты, полученные на основе родиолы розовой: родиолы экстракт сухой, родиолы розовой настойка в дозе 150 мкл/кг, розавин в дозе 25 мг/кг статистически достоверно снижают уровень перекисного окисления липидов. Кроме того, розавин повышает активность ферментов супероксиддисмутазы и каталазы, а родиолы розовой настойка — супероксиддисмутазы, что можно считать возможными механизмами антиоксидантного действия препаратов. Как и карсил,

6. Фитопрепараты лимонника китайского: настойка лимонника китайского на 40% этиловом спирте, настойка лимонника на 70% этиловом спирте и сок лимонника в дозе 150 мкл/кг статистически достоверно снижают уровень малонового диальдегида. Настойка лимонника на 70%) этиловом спирте и С02 экстракт лимонника в дозе 5 мг/кг статистически достоверно повышают активность каталазы. Сок лимонника ' и настойка лимонника на 70%) этиловом спирте статистически достоверно повышают активность супероксиддисмутазы, что можно считать возможными механизмами антиоксидантного действия фитопрепаратов на основе лимонника китайского.

7. В отличие от карсил а розавин и лимонника настойка 70%) повышают уровень активности не только супероксиддисмутазы, но и каталазы, что делает их весьма перспективными в плане применения в качестве гепатопротекторных лекарственных средств.

8. Элеутерококка экстракт жидкий и сирени настойка не влияют на уровень малонового диальдегида и активность ферментов противоперекисной защиты, что делает их не перспективными в плане применения в качестве гепатопротекторных лекарственных средств.