Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Лекарственные растения, содержащие фенилпропаноиды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов

АВТОРЕФЕРАТ
Лекарственные растения, содержащие фенилпропаноиды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов - тема автореферата по фармакологии
Авдеева, Елена Владимировна Пятигорск 2007 г.
Ученая степень
доктора фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Лекарственные растения, содержащие фенилпропаноиды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов

АВДЕЕВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

1

ооз

Пятигорск - 2007

003160953

АВДЕЕВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

15.00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Пятигорск - 2007

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный консультант: - доктор фармацевтических наук,

профессор Куркин Владимир Александрович

Официальные оппоненты: - доктор фармацевтических наук,

профессор Челомбитько Вячеслав Александрович

- доктор фармацевтических наук,

профессор Бубенчикова Валентина Николаевна

- доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Геннадий Иванович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ»

Защита диссертации состоится " 6 " ноября 2007 г в /У часов на заседании диссертационного совета Д 208 069 01 при государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава»

Автореферат разослан " "2У " _2007_г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор ^ Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Научные исследования, проведенные по теме диссертационной работы, посвящены расширению спектра представлений о фенилпропаноидах (ароматические соединения в основном фенольной природы, содержащие в структуре один или несколько Се - Сз - фрагментов), как о самостоятельном классе биологически активных природных соединений, перспективных для создания на их основе гепатопро-текгорных и иммуно модулирующих лекарственных средств

Актуальность. В ассортименте гепатопротекторных и иммуномодулирующих лекарственных средств значительное место занимают фитопрепараты, использующиеся для лечения целого ряда заболеваний, обусловленных или имеющих следствием ослабление эндогенной антиоксидантной защиты, вторичные иммунодефи-цитные состояния, соответствующие сдвиги в системе гомеостаза При анализе ситуации на современном фармацевтическом рынке РФ, с одной стороны, для указанных фармакотерапевтических групп очевиден перевес в пользу дорогостоящих импортных препаратов (в том числе на основе расторопши пятнистой, эхинацеи пурпурной, мелиссы лекарственной), с другой, - не в полней мере реализован потенциал используемых растений, что сказывается на эффективности выпускаемых лекарственных препаратов Последнее обстоятельство, как правило, связано с некорректным выбором целевой группы веществ, с недостаточно полными данными по составу и физико-химическим свойствам извлекаемых соединений, и, соответственно, нерациональной технологией их получения, а на этапе оценки качества продукции -с отсутствием объективных и унифицированных методик анализа. Комплекс обсуждаемых проблем для ряда лекарственных растений, на наш взгляд, замыкается на недооценке значимости фенилпропаноидов как в плане стандартизации сырья и лекарственных препаратов, так и в отношении трактовки вклада данных соединений в фармакологическую активность

К моменту начала собственных исследований в литературе в недостаточной мере были освещены в сравнительном плане фотохимические и аналитические аспекты изучения фенилпропаноидов, не было сформировано цельное представление о них, как о самостоятельном классе биологически активных соединений (БАС) с

позиций зависимостей в ряду химическая структура - фармакологическое действие В частности, тонизирующая и адаптогенная активность препаратов родиолы розовой (экстракт жидкий) связывались только с содержанием простых фенольных соединений - салидрозида и его агликона тирозола. При создании препаратов рас-торогапи пятнистой (карсил, легалон, силимар, силибор, силибинин ) отечественные и зарубежные ученые ориентировались на получение и использование в качестве лекарственной субстанции силимарина - очищенной суммы трех доминирующих флаволигнанов растения Однако известно, что все флаволигнаны (описано более 20) обладают гепатопротекторной активностью, а нативный комплекс соединений, по результатам наших исследований, - превосходит силимарин по влиянию на ферментативные и неферментативные звенья антиоксидантной защиты. Ценное лекарственное растение мелисса лекарственная рассматривалась преимущественно с позиций седативной активности терпеноидного комплекса, тогда как фенольные соединения (фенилпропаноиды и флавоноиды) в аспекте решения вопросов стандартизации и разработки лекарственных препаратов, глубоко не исследовалась На сегодняшний день в отечественной нормативной документации (НД) заложено определение экстрактивных веществ и разрешен к применению только настой (за рубежом мелисса входит в состав более 300 лекарственных препаратов) Существует и ряд других примеров, иллюстрирующих необходимость дальнейших исследований в выбранном направлении.

В этой связи представляется целесообразным пересмотр подходов к использованию известных лекарственных растений и поиску новых сырьевых источников с позиции содержания в них фенилпропаноидов В частности, социально значимой является разработка эффективных и безопасных импортозамещающих препаратов с гепатопротекторным и иммуномодулирующим действием. В свою очередь, создание качественной продукции требует решения ряда вопросов1 систематизация и восполнение неполных, иногда противоречивых данных по содержанию фенилпропаноидов в ЛРС, определение ведущей и анализируемой группы БАС в отношении рассматриваемого класса, разработка на этой основе объективных и унифицированных методик анализа растительного сырья и лекарственных препаратов, совершенствование НД

Таким образом, исследования по теме диссертации являются актуальными для современной фармации

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является комплексное исследование ряда лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды, как перспективных сырьевых источников для получения гепатопротекторных и имму-номодулирующих препаратов

Для достижения этой цели решались следующие задачи

1 Обоснование выделения фенилпропаноидов в самостоятельный класс биологически активных природных соединений.

2 Разработка подходов к поиску перспективных сырьевых источников на основе данных по химическому составу ЛРС, и в частности, по содержанию соединений фенилпропаноидной природы

3 Развитие концепции определения ведущей группы БАС в отношении соединений фенилпропаноидной природы для эффективного решения проблем стандартизации

4. Формирование принципов разработки стандартных образцов веществ фенилпропаноидной природы, способов их получения и изучения показателей качества

5. Поиск оптимальных технологических решений при получении лекарственных препаратов, содержащих в качестве целевых веществ фенилпропаноиды

6. Обоснование использования ЛРС, содержащего фенилпропаноиды, для получения иммуномодулирующих, антиоксидантных и гепатопротекторных препаратов на основе выявления зависимостей в ряду «химическая структура соединения -биологическая активность» и «компонентный состав - фармакологическое действие»

7 Разработка нормативной документации (либо внесение изменений в имеющуюся НД) на изучаемые виды лекарственного растительного сырья, стандартные образцы веществ и фитопрепараты. Научная новизна. Разработана концепция оценки перспективности лекарственных растений как сырьевых источников для получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов, а также эффективных технологических подходов с точки зрения содержания фенилпропаноидов и возможности их получения

На основании химических, физико-химических и фармакологических исследований доказано, что фенилпропаноиды являются самостоятельной группой природных БАС. Данные сравнительного изучения структуры и физико-химических свойств фенилпропаноидных соединений, выделенных из расторопши пятнистой, родиолы розовой, сирени обыкновенной, элеутерококка колючего, мелиссы лекарственной, эхинацеи пурпурной, позволили охарактеризовать группы производных коричных спиртов и коричных кислот по структурным особенностям, спектральным, хроматографическим и другим параметрам Это послужило основой разработки единых подходов к обнаружению данных соединений в ЛРС и решению проблемы стандартизации.

На основе данных по химическому составу изучаемых видов ЛРС и с учетом подтвержденного (в ряде случаев - впервые выявленного) спектра фармакологической активности фенилпропаноидов обосновано их выделение в качестве ведущей группы и анализируемой группы БАС в стандартизации сырья и лекарственных препаратов из изучаемых растений

По результатам структурных исследований и установлению физико-химических констант, с учетом данных по уровню содержания БАС в сырье и их диагностическому значению предложены подходы к разработке веществ — стандартов фенилпропаноидной природы В частности, обосновано использование силиби-на, розавина, сирингина в качестве ГСО и разработаны их показатели качества (по разделам описание, растворимость, подлинность, удельный показатель поглощения, температура плавления, угол вращения, содержание примесей, потеря в массе при высушивании), включенные в нормативную документацию

Для класса фенилпропаноидов даны рекомендации по получению веществ -стандартов, заключающиеся для кристаллических соединений на основе коричных спиртов (ГСО силибина, розавина, сирингина) в препаративном хроматографиче-ском разделении водно-спиртовых извлечений из сырья в варианте колоночной адсорбционной хроматографии и рехроматографии на силикагеле и полиамиде с последующей кристаллизацией и перекристаллизацией из соответствующих растворителей, в случае некристаллических соединений (PCO цикориевая и розмариновая кислота) - целесообразно дополнительное использование сефадекса LH-20

При разработке высокоэффективных гепатопротекторных и иммуномодули-рукяцих фитопрепаратов на основе изучаемых видов растений предложено ориентироваться на извлечение нативного комплекса соединений и считать целевой группой БАС фенилпропаноиды и их производные (лигнаны, неолигнаны, флаво-лигнаны и др) Предложены оригинальные технологические способы получения экстракционных препаратов на основе ЛРС расторопнш пятнистой, родиолы розовой, эхинацеи пурпурной, мелиссы лекарственной и некоторых других растений (Патенты РФ на изобретения № 2102999, № 2133620, № 2134584, № 2139724, № 2155071, № 2209063, № 2139722, № 2147223, № 2155054, № 2185843).

Детальное изучение структуры индивидуальных фенилпропаноидных соединений, выделенных из рассматриваемых видов ЛРС, и соотнесение вклада производных коричных спиртов и коричных кислот как группы в целом, так и для отдельных (доминирующих) представителей в формирование фармакологической активности позволили выявить некоторые аспекты в зависимости «компонентный состав — фармакологическое действие» и «химическая структура соединения - биологическая активность» Для всех изученных фитосубстанций и индивидуальных соединений фенилпропаноидной природы установлено антиоксидантное и иммуномодули-рующее действие При этом лидером по антиоксидантной активности являются флаволигнаны расторопши пятнистой, а по влиянию на иммунный ответ - фенилпропаноиды эхинацеи пурпурной Спектр нейротропной активности фенилпропа-ноидов различен для производных коричных спиртов и производных гидроксико-ричных кислот- в частности, первая группа, представленная гликозидами коричного, и-кумарового и синапового спирта, обладает выраженными тонизирующими свойствами, тогда как для второй группы (производные кофейной кислоты) - они не характерны. Установленный характер фармакологической активности доказывает целесообразность использования новых фитопрепаратов с целью усиления адаптационных возможностей, повышения неспецифической и специфической (иммунной) сопротивляемости организма и позволяет варьировать стратегию назначения фитопрепаратов с учетом выявленных особенностей.

Практическая значимость. Объем выполненных исследований доказывает приоритетность оценки вклада фенилпропаноидов при создании гепатопротектор-

ных и иммуномодулирующих фитопрепаратов и решении вопросов стандартизации как уже известных растений, так и при поиске новых сырьевых источников

На основе сложившегося системного подхода к изучению и использованию ЛРС, содержащего фенилпропаноиды, разработаны эффективные иммуномодули-рующие и гепатопротекторные препараты, обладающие также нейротропными и адаптогенными свойствами "Эхинацеи пурпурной настойка", "Эхинацеи экстракт жидкий", "Родиолы розовой настойка", "Расторошпи экстракт жидкий", комплексный препарат "Силибохол", "Мелиссы настойка", "Мелиссы экстракт жидкий", "Сирени настойка", а также лекарственные формы на их основе (сироп и фитоплен-ка)

Результаты фотохимических исследований и, в частности, изучение физико-химических свойств индивидуальных соединений - производных коричных спиртов и коричных кислот позволили в соответствии с современными требованиями подойти к обоснованию аналитических подходов в решении проблемы стандартизации изучаемых видов ЛРС и лекарственных препаратов на их основе Разработаны объективные и унифицированные методики качественного и количественного анализа с применением ТСХ, ВЭЖХ, УФ-спектрометрии и использованием стандартных образцов веществ фенилпропаноидной природы

- контроль качества сырья и лекарственных препаратов на основе родиолы розовой, элеутерококка колючего и сирени обыкновенной предложено проводить по доминирующей группе БАС - циннамилгликозидам с использованием ГСО роза-вина для сырья и фитопрепаратов р розовой и ГСО сирингина (элеутерозид В) для сырья и лекарственных препаратов элеутерококка и сирени качественный ТСХ — анализ и количественное определение розавина и сирингина методами хроматоепектрофотометрии и ВЭЖХ.

- в нормативную документацию на сырье и лекарственные препараты эхинацеи пурпурной и мелиссы лекарственной включено качественное и количественное определение содержания производных кофейной кислоты ТСХ-анализ и спек-трофотометрическое определение суммы фенилпропаноидов в пересчете на ци-кориевую и розмариновую кислоты соответственно;

- для плодов расторопши пятнистой (нативных и обезжиренных) и лекарственного препарата «Экстракт расторопши жидкий» разработаны методики качественного и количественного определения содержания флаволигнанов с использованием ГСО силибина, который также предложен в качестве вещества-стандарта для анализа комплексного лекарственного препарата «Силибохол» (составная часть препарата - лекарственная субстанция «экстракт расторопши жидкий»), качественная оценка проводится с помощью ТСХ-анализа и подтверждается характерным УФ-спектром, количественное определение предусматривает прямое спек-трофотометрическое определение суммы флаволигнанов (для «Сшгабохола» -флавоноидов) в пересчете на силибин, для сырья и монопрепаратов расторопши -дополнительно ВЭЖХ-анализ

Результаты внедрения. Разработана и утверждена следующая нормативная документация ФС 42-0072-01 "Силибин - стандартный образец", ФС 42-0071-01 "Розавин - стандартный образец", вошедшие в Государственный реестр лекарственных средств РФ (2004 г); материалы исследований ранее были использованы при подготовке ВФС 42-2088-92 "Сирингин - стандартный образец", ВФС 42-3380-99 «Плоды расторопши пятнистой», ВФС 42-3334-99 «Родиолы розовой настойка», ВФС 42-3382-99 «Эхинацеи пурпурной настойка», ВФС 42-3381-99 «Расторопши экстракт жидкий» Включены в действующую НД "Изменение № 1 к ФС 75 Государственной фармакопеи XI издания "Корневища и корни родиолы розовой", "Изменение № 1 к ФС "Экстракт родиолы жидкий", а также подготовлен и передан на рассмотрение в Фармакопейный Государственный комитет проект «Изменение № 1 к ФС 42-3645-98 «Трава мелиссы лекарственной» Приняты к рассмотрению в Научном центре экспертизы и государственного контроля лекарственных средств проект ФС «Расторопши плоды», проект ФС «Родиолы розовой корневища и корни», проект ФС «Сирени кора» и проект изменений и дополнений к ВФС 42-2371-94 «Трава эхинацеи пурпурной» для включения в ХП издание Российской государственной фармакопеи, а также проекты ФСП на лекарственные препараты «Силибохол», «Расторопши настойка», «Эхинацеи экстракт жидкий», «Мелиссы настойка»

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 50 научных работах, 10 патентах на изобретение РФ, 4-х учебно-методических пособиях и монографии «Фенилпропаноиды лекарственных растений»

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на различных региональных, Всесоюзных, Всероссийских и международных конференциях, в том числе на I Международном симпозиуме "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования" (Пущино, 1995), на II - XI Международной научно-практической конференции "Экология и здоровье человека" (Самара, 1995 - 2006 гг), на П, Ш, X Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1996, 1997, 2004 гг.), на 2-ом Национальном конгрессе Российской Ассоциации Аллергологов и Клинических Иммунологов (РААКИ) (Москва, 1998), на 8-ой Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2003), на 2-ом Международном симпозиуме по химии природных соединений (Турция, 1996), на 22-ой Международной конференции по полифенольным соединениям (Финляндия, 2004)

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава» (№ Гос. регистрации 01200202299), с Республиканскими программами Минздравсоцразвития РФ "Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях" по теме "Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепа-топротекторного действия" (№ Гос. регистрации 01990005277) и «Создание и стандартизация фитопрепаратов на основе фенилпропаноидов и флавоноидов» (№ Государственной регистрации 01990007536), а также в рамках основных научных проблем Межведомственного Научного Совета по биотехнологии РАМН по направлению ПК 28 01 "Разработка новых лекарственных средств с помощью современных методов и создание биомедицинской технологии коррекции состояний организма"

Положения, выдвигаемые на защиту:

1 Обоснование выделения фенилпропаноидов в самостоятельный класс природных биологически активных соединений на основании данных структурных исследований, изучения физико-химических свойств, биологической активности.

2 Теоретическое и экспериментальное обоснование рассмотрения лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды в качестве доминирующей группы соединений (одной из доминирующих), как перспективных сырьевых источников для получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов

3 Результаты исследований фенилпропаноидов как ведущей и анализируемой группы БАС в оценке показателей качества сырья и фитопрепаратов, пути решения проблемы стандартизации с позиций унификации методик качественного и количественного анализа и использования веществ - стандартов

4 Принципы разработки веществ - стандартов фенялпропаноидной природы, относящихся к группам коричных спиртов (ГСО силибин, розавин, сирингин) и коричных кислот (PCO розмариновая и цикориевая кислота), подходы к способам получения, изучению показателей качества и методам их оценки

5 Данные по разработке рациональной технологии получения экстракционных (галеновых) препаратов на основе рассмотрения фенилпропаноидов и их производных в качестве целевой группы веществ (на примере способов получения и стандартизации фитопрепаратов «Расторопши экстракт жидкий», «Силибохол», «Ро-диолы розовой настойка», «Эхинацеи пурпурной настойка», «Мелиссы настойка»)

6 Результаты изучения зависимости в ряду «химическая структура - фармакологический эффект» для класса фенилпропаноидов как основа создания эффективных гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов

7 Подходы к разработке и совершенствованию нормативной документации на ЛРС и лекарственные препараты, содержащие фенилпропаноиды.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 288 страницах машинописного текста, содержит 37 таблиц, 35 рисунков, список литературы, включающий 311 ссылок, в том числе 158 - на иностранных языках Диссертация состоит из введения, 6 глав, выводов и приложений

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования служило ЛРС, содержащее фенилпропаноиды плоды расторошпи пятнистой [Silybum marianum (L ) Gaertn ], трава эхинацеи пурпурной [Echinacea purpurea (L) Moench.], корневища и корни родиолы розовой (Rhodiola rosea L) и других видов {Rhodiola species), трава мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L), кора сирени обыкновенной (Syringa vulgaris L) и некоторые другие виды Указанное сырье соответствовало требованиям действующей НД Объектами исследования также являлись выделенные из данных видов ЛРС индивидуальные соединения, стандартные образцы веществ (силибин, розавин, сирингин, цикорие-вая и розмариновая кислоты), разработанные лекарственные препараты "Эхинацеи пурпурной настойка", "Эхинацеи экстракт жидкий", "Родиолы розовой настойка", "Расторошпи экстракт жидкий", комплексный препарат "Силибохол", "Мелиссы настойка", "Мелиссы экстракт жидкий", "Сирени настойка", а также препараты сравнения при проведении фармакологических исследований

Фотохимические исследования проведены с использованием традиционных и современных инструментальных физико-химических методов адсорбционная колоночная (КХ) и тонкослойная хроматография (ТСХ), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), спектрофотометрия, масс-спектрометрия, спектроскопия ядерного магнитного резонанса ('Н-ЯМР), исследование поведения выделенных соединений в процессе нагрева проведено с использованием дифференциального термического анализа (ДТА), дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) и дериватотермографии (ДТГ)

Аналитические исследования по разработке методик качественного и количественного анализа сырья и лекарственных препаратов проведены с использованием методов ТСХ-анализа, ВЭЖХ, спектрофотометрии, хроматоспектрофотометрии

Для выполнения технологической части работы были использованы методы экстракции мацерация, ремацерация, перколяция, реперколяция и их модифицированные варианты.

Медико-биологический блок исследований включал исследования по оценке безопасности лекарственных препаратов и изучению специфической фармакологической активности, выполненные в соответствии с рекомендациями Фармакологического Государственного комитета Минздравсоцразвития РФ В частности, анти-оксидантная и гепатопротекторная активность изучалась на модели острого гепатита, вызванного тетрахлорметаном (Венгеровский А И , Саратиков А С, 1987). Пере-кисное окисление липидов определено по концентрации малонового диальдегида (Коробейникова О.Н, 1989), влияние на ферментативное звено определено по активности супероксиддисмутазы (Гуревич В.С и др, 1990) и каталазы (Королюк М А и др, 1988) Иммунотропные свойства фитопрепаратов и фенилпропаноидов изучались в отношении оценки влияния на фагоцитарную активность нейтророфи-лов и макрофагов, на клеточное (в варианте воспроизведения реакции гиперчувствительности замедленного типа) и гуморальное (путем определения числа и функционирования антителообразующих клеток методом локального гемолиза) звено иммунитета (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Москва, 2000,2005) Спектр нейротропной активности был определен в нескольких направлениях гипногенные/антигипногенные свойства - по методике потенцирования снотворного эффекта барбитуратов и хлоралгидрата (Воронина Т А., Середенин С.Б., 2000), актопротекторные свойства - в тесте принудительного плавания мышей с грузом (Воронина Т А, Середенин С Б, 2000), ориентировочно-исследовательская реакция - в установке «открытое поле» (Буреш Я, 1991, Маркель A JI, 1988), обучение и память - по выработке условной реакции пассивного избегания (Бородкин Ю С , 1986), ноотропное действие в варианте церебропротективной активности - по влиянию на амнезию, вызванную максимальным электросудорожным шоком (Воронина Т А, Островская Р У, 1998), ан-ксиолитическая активность - в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» (Pellow S , File S Е , 1986) и «конфликтная ситуация» (Vogel J, 1971), антидепрессивная активность - в тесте отчаяния (Воронина Т А, Середенин С Б , 2000)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 Разработка стандартных образцов веществ Фенилпропаноидной природы

В результате фотохимических исследований сырья указанных видов лекарственных растений было выделено и охарактеризовано более 40 индивидуальных веществ, относящихся к фенилпропаноидам, простым фенольным соединениям, фла-воноидам, флаволигнанам и терпенам. Данные по химическому составу изученных видов ЛРС позволили выявить доминирующие и диагностические вещества растений, причем некоторые из них были предложены в качестве веществ-стандартов

Результаты исследований по выделению и очистке веществ, установлению структуры и физико-химических констант были нами применены при разработке четырех Государственных стандартных образцов сирингина (элеутерозид В), роза-вина, триандрина и силибина, для которых далее приводятся способы получения ГСО силибина и ГСО сирингина, а также для изучения некристаллических соединений - розмариновой кислоты и цикориевой кислоты, использованных в качестве рабочих стандартных образцов

Обсуждая результаты изучения веществ-стандартов фенилпропаноидной природы, необходимо коснуться некоторых общих параметров, как в плане сложившихся методологических подходов к изучению соединений, так и ряда физико-химических свойств, в целом характеризующих данный класс БАС

Основополагающей характеристикой изученных соединений является принадлежность к двум основным группам фенилпропаноидов. 1 - производные коричных спиртов сирингин - глюкозид синапового спирта, розавин - вицианозид коричного спирта, силибин - флаволигнан на основе кониферюювого спирта (флавоноидная часть представлена таксифолином) - соединения кристаллические, предложены в качестве ГСО, 2 - производные гидроксикоричных кислот, в частности, кофейной кислоты цикориевая и розмариновая кислоты - соединения аморфные, предложены в качестве PCO

Учитывая, что наиболее перспективными для разработки ГСО являются производные коричных спиртов, углубленному изучению в сравнительном плане подверглись соединения данной подгруппы и, в частности, силибин, сирингин и роза-

вин. Для них проанализированы наиболее, на наш взгляд, информативные в плане установления структуры 'Н-ЯМР-спектры соединений и их ацетилированных производных, характеризующиеся наличием сигналов резонанса ароматических и алифатических протонов фенилпропанового фрагмента (Сб-С3-) и гликозидных остатков у сирингина и розавина (рис. 4, 6 и 8) Важной подтверждающей характеристикой являются данные масс-спектров, в которых обнаруживаются фрагменты с m/z 134, 115, 92, 78, характерные для коричного спирта (розавин), 180, 162, 137 и 121 -для кониферилового спирта (силибин), 210, 182, 167, 149 - для синапового спирта (сирингин) Кроме того, нами также учитывался характер УФ-спектров как исходных, так и с ионизирующими и комплексообразующими добавками, и результаты химических превращений Ряд выявленных параметров включен в НД (табл 2).

В хроматографическом поведении изучаемых веществ наблюдается много общего, что было нами использовано при выделении и разделении индивидуальных соединений из сырья, разработке способов получения веществ-стандартов, использовании методов ТСХ-анализа и обращено-фазовой ВЭЖХ для оценки качества сырья, лекарственных препаратов и соответствующих ГСО и PCO веществ

При сравнительном исследовании показана высокая специфичность и хорошая межлабораторная воспроизводимость ТСХ-анализа на пластинках "Силуфол УФ 254" и "Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ" в системе хлороформ-метанол-вода (26'14.3) для полярных производных фениппропаноидов - основных действующих веществ видов рода родиола (розавин), сирени обыкновенной и элеутерококка колючего (в обоих случаях сирингин) Для флаволигнанов расторопши, имеющих принципиально иной углеродный скелет, наиболее эффективное разделение достигается в неполярной системе циклогексан-ацетонитрил (6.4), при этом в качестве свидетеля используется ГСО силибина Указанные условия проведения ТСХ заложены в НД на вещества - стандарты как основной вариант определения их чистоты (табл 2)

УФ-спекгры фенилпропаноидов являются достаточно характерными и позволяют определить природу вещества, что заложено в разделы «Подлинность» соответствующих нормативных документов С близостью спектральных свойств связана и определенная универсальность в наших подходах к анализу ЛРС и лекарственных

препаратов, содержащих феиилпропаноиды, как для группы производных на основе

коричных спиртов, так и на основе коричных кислот (рис 1 2) А

200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 Рисунок 1 - УФ - спектры спиртовых растворов PCO розмариновой кислоты (1) и PCO цикориевой кислоты (2)

Рисунок 2 - УФ-спектр спиртовых растворов ГСО розавина (1), ГСО сирингина (2) и ГСО силибина (3)

В частности, УФ-спектры соединений, содержащих остаток гидроксикоричных кислот (цикориевая, розмариновая, хлорогеновая, эхинакозид), имеют практически те же максимумы поглощения (рис 1), что и свободные гидроксикоричные кисло-

ты например, 227, 242, 290 и 330 нм в случае кофейной кислоты УФ-спектры коричных спиртов, лигнанов - агликонов (сирингарезинол, схизандрин, изосхизанд-рин), а также их гликозидов (элеутерозиды В и D, ларицирезинол-4-0-(3-В-глюкопи-ранозид) имеют интенсивные максимумы поглощения в области 250-280 нм (рис 2) В частности, основной максимум поглощения розавина - 252 нм, сирингина - 266 нм Определяемый в максимуме УФ-спектров 0,0008 % спиртовых растворов ГСО удельный показатель поглощения (г/Г:) служит характеристикой индивидуальности веществ и заложен в НД Спектр поглощения в УФ-области флаволигнанов расто-ропши отличен от фенилпропаноидных соединений, как таковых (построенных только на основе фенилпропанового фрагмента), и в основном определяется флаво-ноидной составляющей единственный максимум при 289 ± 1 нм, характерный для большинства флаволигнанов расторопши, указывает на флаваноноловую природу соединений В НД также заложено определение E¡* в максимуме УФ-спектра

Изучение поведения ГСО веществ при нагреве проводилось с использованием таких современных инструментальных методов анализа, как ДТА, ДСК, ДТГ Основанием для привлечения нами метода ДТА явилась необходимость объективного и точного определения таких характеристик, как температуры фазовых переходов веществ, установление наличия и формы связи влаги, определение чистоты образцов Метод ДСК был привлечен для уточнения количества химически связанной влаги по теплотам отщепления воды. ДТГ использовался для изучения термолиза корневищ родиолы розовой, а также для подтверждения эндоэффектов дегидратации и плавления, а также явлений полиморфизма и разложения образцов Результаты обработки серии термограмм образцов соединений приведены в табл 1

Таблица 1 - Данные термического анализа стандартных образцов веществ

Объект Процесс

Дегидратация Плавление Окисление (в атмосфере воздуха) Разложение

ГСО силибин 52 °С 162 °С 260 °С 267 "С

ГСО розавин — 182 °С 269 °С 295 °С

ГСО сирингин 111 °С 190 °С 231 °С 260 °С

Результирующие данные по установлению структуры обсуждаемых ГСО и установленные физико-химические константы, включенные в соответствующую нормативную документацию, представлены в сводной таблице 2

Таблица 2 - Сравнительная характеристика разработанных ГСО веществ

Характеристика, показатель кач-вг ГСО силибин (ФС 42-0072-01) ГСО розавин (ФС 42-0071-01) ГСО сирингин (ВФС 42-2088-92)

Химическая структура он Ь Ьсна Мм 482 НО он М м. 428,4 оона gteo^J^ ^оХД^^он Мм 390,4

Состав С25Н22О10 С20Н28О10 С17Н24О9 *н2о

Описание Белый мелкокристаллический порошок Белый мелкокристаллический порошок Белый мелкокристаллический порошок

'Н-ЯМР- спектр 200 МГц, d-ацетон: 11,70 с, 8-7,2 м, 5,96 д, 5,10 д, 5,00 д, 4,60 д, 4,1-4,2 м, 3,3-3,8 м, 3,85 с 200 МГц, С5В5Ы: 7.47 2 м, 6 82 д, 6 5 дт, 4 9 д, 4 87 д, 4.90 м, 4.65 дд, 4 55-3.95 м, 3.7 кв 100 МГц, C5D5N: 5, м.д.: 6 88 с, 6 65 д, 6.60 дг, 4.7-4 1 м, 3.76 с

Растворимость Мало растворим в ацетоне, практически нерастворим в спирте 95 % и в воде Умеренно растворим в воде, мало растворим в спирте 70%, практически нерастворим в спирте 95% Мало и медленно растворим в воде, очень мало и медленно растворим в 95 % спирте.

Подлинность 1) с Zn + HCl малин окрашив.; 2) с H2SO4 (конц.) желтое окраш., 3)рис ИК-спеюра 4) рис УФ-спекгра Хтаах288 ±1 нм 1) с Н2804 - сиреневое окраш; 2) рис УФ-спектра Хщ«252нм 1) с H2SO4 - синее окрашивание, 2) рис УФ-спектра Я^их 221 нм и 266 нм.

Удельный показатель поглощения 445 - 475 при длине волны 288 нм 437-477 при длине волны 252 нм 415 - 455 при длине волны 266 нм

Т-ра плавления 162-165 °С 171 - 173 °С 190-192 °С

Углы вращения [а] п + 10,8 0 (ацетон) [а]® - 56.5° (ХЛФ, метанол 1.1) [а] о - 18 0 (вода)

Посторонние примеси ТСХ: 50мкг, "Silufol UV-254", циклогексан — ацетонитрил (6*4), одно с Rf «0,8 ТСХ. 30 мкг, "БйиМ ЦУ-254", Хлф-МеОН-Н20 (26 14 3), одно пятно с Кг »0,4 ТСХ- 25 мкг, "Silufol UV-254", Хлф-Ме0Н-Н20 (26 14.3) одно пятно с Rf »0,42

Потеря в массе при высушивании не должна превышать 1,0 % не должна превышать 1,0% не должна превышать 5,0 %

2 Изучение химического состава растительного сырья и разработка спосо-

бов получения стандартных образцов веществ Фенилпропаноидной структуры 2.1 Б'йуЬит тапапит (Ь.) СаеНп.

При препаративном хроматографическом разделении этанольного экстракта из плодов расторопши пятнистой (нативных и обезжиренных в ходе производства жирного масла хладоном-12 или методом холодного прессования) с использованием колоночной адсорбционной хроматографии на силикагеле и с последующим ре-хроматографированием на полиамиде выделены доминирующие флаволигнаньг си-

либин, 2,3-дегидросилибин, силидианин, силикристин

Рисунок 3 - Схема выделения флаволигнанов расторопши и получения ГСО силибина

Предложен способ выделения ГСО силибина, позволяющий достигнуть выход до 75 %, а также выделить и очистить 2,3-дегидросилибин, силидианин и силикри-стин (рис 3)

ГСО силибин представляет собой белые кристаллы, С25Н22О10 (М+ 482), Т пл. 164-166 °С, [а]и + 10,8 (ацетон), УФ-спектр. Л^ 288, 325 (пл) нм

ОН О ССН5

1ХО сшибки

-тр-. «

т-п-

М

т

Рисунок 4 - 'Н-ЯМР спектр ГСО силибина в с!-ацетоне 'Н-ЯМР-спектр силибина в дейтероацетоне при 50 0 (200 МГц)- 11,70 (с, 5-ОН), 6,8-7,2 (м, бН-Аг), 5,96 (д, 2Н, 2 Гц, Н-6,8), 5,10 (д, 12 Гц, Н-2), 5,00 (д, 8 Гц, НА), 4,60 (д, 12 Гц, Н-3), 4,1-4,2 (м, Нв), 3,3-3,8 (м, Нси Нв), 3,85 (с, ЗН, СНэО) (рис 4)

Результаты изучения некоторых показателей качества, вошедших в ВФС 423383-99, а после, в уточненной редакции, в ФС 42-0072-01 «Силибин - стандартный образец», представлены в табл 2

Наработанные по предложенной схеме получения (рис 3) образцы ГСО силибина, отвечающие нормативным требованиям, использовались нами для решения проблемы химической стандартизации сырья и лекарственных препаратов расто-ропши пятнистой «Качественные реакции» (подлинность) - ТСХ-анализ в предложенных условиях и характерный УФ-спектр (рис 2), «Количественное определение» - прямое спектрофотометрическое определение при 289 нм суммы флаволиг-

нанов (для настойки и экстракта жидкого расторопши) или суммы флавоноидов (для комплексного препарата «Силибохол») в пересчете на силибин

По предложенной схеме (рис 3) из указанных образцов сырья выделены доминирующие флаволигнаны силибин, силидианин и силикристин, а также 2,3-дегидросилибин, который впервые описан для расторопши пятнистой, культивируемый в России и странах СНГ Ранее данное соединение выделялось из плодов расторопши пятнистой индийскими учеными (Bandopadhyay et al, 1972), а потом было получено путем дегидрирования природного силибина японскими и немецкими учеными (Takemoto et al, 1975 Wagner et al, 1976).

_L

.Ji.

T

I 3

1 PPH

Рисунок 5 - 'Н-ЯМР спектр 2,3 - дегидросилибина в с1- ацетоне 'Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (200 МГц) 12,15 (с, 5-ОН), 9,74 (уш с, 7-ОН), 7,87 (д, 2,1 Гц, Н-21), 7,17 (дд, 8,3 и 2,1 Гц, Н-61), 7,8-6,9 (м, 4Н-Аг), 6,60 (д, 2,1 Гц, Н-8), 6,28 (д, 2,1 Гц, Н-6), 5,06 (д, 8,06 Гц, На), 4,24 (м, Нв), 3,88 (с, ЗН, СНзО), 3,80 (дд, 12,5 и 3,5 Гц, Не), 3,55 (дд, 12,5 и 4,3 и Гц, Нп) (рис. 5)

Выделение данного соединения имеет важное практическое значение, поскольку при сравнительном исследовании антиоксидантных свойств индивидуальных соединений - производных фенилпропаноидов на модели острого токсического гепатита, вызванного тетрахлорметаном, было подтверждено не только наличие гепато-

протекторной активности, характерной для всех флаволигнанов, но и установлена наибольшая антиокислительная активность у 2,3-дегидросилибина (превосходит силибин по влиянию на уровень накопления МДА на 14 %) Это показывает целесообразность пересмотра подходов по извлечению очищенной суммы трех доминирующих флаволигнанов - силимариновой смеси (силибин, силидианин, силикри-стин) Доказательством тому служит выявленная высокая гепатопротекторная активность «Расторопши экстракта жидкого» и «Расторопши настойки», содержащих весь природный комплекс соединений флаволигнановой природы, превосходящая таковую у очищенной суммы флаволигнанов (силибинин) Данное обстоятельство помимо вклада 2,3-дегидросилибина, по всей видимости, можно связать и с сона-правленным (синергетйческим) действием компонентов всего нативного комплекса соединений фенольной природы (флаволигнаны + флавоноиды) В то же время интересной представляется и перспектива создания водорастворимых лекарственных форм (в т ч. для инъекций) на основе 2,3-дегидросилибина и других индивидуальных флаволигнанов

С целью развития направления по комплексной переработке сырья (заготовлено на промышленных плантациях специализированного государственного унитарного предприятия «Сергиевский», Самарская обл) в настоящей работе в сравнительном аспекте изучены образцы нативного и обезжиренного сырья методом холодного прессования (ЗАО «Самаралектравы», п Антоновка, Самарская обл) и экстракционным методом (ЗАО «Золотой корень», г Самара).

Оценка содержания флаволигнанов в видах сырья, а также в полученных из них экстракционных (галеновых) препаратах «Расторопши экстракт жидкий» и «Расторопши настойка» проведена с использованием ранее разработанных для нативных плодов методик качественного анализа с использованием ТСХ и характерного УФ-спектра и количественного определения флаволигнанов методом ВЭЖХ-анализа

(относительная ошибка среднего результата (£) в 11 независимых определениях составляет 3,87 % при доверительной вероятности 95 % здесь и далее) и спектрофо-

тометрии (е 5,18 %)

Установлено, что шрот и жом плодов имеют ряд преимуществ перед необезжи-ренным сырьем более высокое содержание флаволигнанов, а также большие сроки хранения (минимизирован процесс прогоркания жирного масла), меньшая загрязненность аппаратов Самое высокое содержание флаволигнанов определено при использовании оптимального экстрагента (80 % спирт этиловый) в извлечениях из сырья, обезжиренного методом экстракции хладоном-12 (табл 3)

Таблица 3 - Анализ нативных и обезжиренных плодов расторошпи

Сырье Содержание суммы флаволигнанов (спектрофотометрия),% Содержание флаволигнанов (ВЭЖХ), %

Плоды нативные 2,62 сили- силиди- силикри-бин анин стин

0,64 0,38 1,24 2=2,26

Плоды обезжиренные (метод холод прессования) 2,71 0,67 0,40 1,25 1=2,32

Плоды обезжиренные (метод экстракционный) 2,82 0,71 0,42 1,27 £=2,40

Определены нижние пределы содержания суммы флаволигнанов для необез-жиренных цельных и измельченных плодов не менее 2,4 %, для обезжиренных измельченных плодов не менее 2,6 % и заложены нами в ВФС 42-3380-99 «Плоды расторопши пятнистой» для нативных плодов и в проект ФС «Расторопши пятнистой плоды», распространяющийся на цельные и измельченные (включая порошок) нативные и обезжиренные плоды Соответствие содержания флаволигнанов данным параметрам позволяет использовать все исследуемые виды ЛРС для производства предложенных лекарственных препаратов

2.2 Rhodiola species

В ходе ранее проведенных исследований было показано, что наряду с салидро-зидом и его агликоном тирозолом определяющий вклад в обсуждаемый спектр активности лекарственных препаратов р розовой (золотой корень) вносит доминирующий фенилпропаноид растения - розавин, который был предложен в качестве ГСО для анализа сырья и «Настойки родиолы розовой» (ВФС 42-3435-99)

Розавин по химической структуре является циннамил-0-(6-O-a-L-арабинопиранозил)-Р-В-глюкопиранозидом, представляет собой белые кристаллы, C20H2gOi0, Тпл 171-173 °С, УФ-спектр- 252 нм. Спектр ПМР в d-пиридине (м д ) 7 2-7 4 (м, 5 Аг-Н), 6 82 (д, 16 Гц, Не), 6.5 (дг, 6 и 16 Гц, Нв), 4 94 (д, 7 Гц, Н-Г), 4 87 (д, 6 Гц, H-l"), 4 66-4 98 (м, 2НА), 3 95-4 55 (м, ЮН Сахаров), 3 7 (кв, 2 и 13 Гц, Н-5"е) (рис 6)

SA>-U OH OH

1 H"e Н-Г I

1 н-в, L 1 H-iZ i

и i Щ JU i ...................

........i.........i.........i.........i.........! .........41.........i.........i-........im......

.__ '

Рисунок 6 - Н-ЯМР-спектр розавина в ¿-пиридине На этапе изучения физико-химических свойств розавина нами были исследованы спектральные свойства, хроматографическое поведение, установлены температуры отщепления кристаллизационной воды, плавления, окисления, разложения Эти и другие уточненные показатели качества вошли в ФС 42-0071-01 «Розавин -стандартный образец» (табл 2)

Образцы ГСО розавина, полученные нами в соответствии с авторским свидетельством на способ получения розавина (А с 1168254 11 (СССР) были использованы для стандартизации сырья дикорастущих и культивируемых растений и фитопрепаратов р розовой Практическим выходом данного направления послужила разработка проекта ФС «Родиолы розовой корневища и корни» и ВФС 42-3334-99 "Родиолы розовой настойка", в которые включены методика качественного ТСХ-анализа и методики количественного хроматоспектрофотометрического определения розавина (в 7,4%) при длине волны 252 нм (рис 2) и ВЭЖХ-анализа (£ 5,3%)

С целью поиска новых сырьевых источников для получения лекарственных препаратов аналогичных р. розовой и расширения сырьевой базы растений рода Юю<11о1а Ь проведено сравнительное исследование химического состава корневищ и корней р розовой с сырьем некоторых других видов р линейнолистной (.ШоЛо1а Ьпеап/оЬа Вопвв ), интродуцированной в Санкт-Петербург, и р иремельской (Юг ¡гетеЬса Вогаз), интродуцированной в Башкирии, и дикорастущих экземпляров При этом был сделан акцент на изучении химического состава сырья, хемотакса-ции, и в особенности, - на обнаружение циннамилгликозидов, в частности - розавина, как соединения в основном, на наш взгляд, обусловливающего широкий спектр активности лекарственных препаратов р розовой Установлено, что розавин, доминирующий в р розовой, и другие циннамилгликозиды в следовых количествах содержатся только в дикорастущих образцах р иремельской, тогда как для всех изученных образцов характерно содержание фенилэтаноидных соединений Данный факт объясняет и литературные данные по нейротропной активности спирто-водных извлечений изучаемых видов родиолы В результате наших исследований для р. линейнолистной и р иремельской подтвержден только тонизирующий спектр активности Салидрозид и тирозол, содержащиеся в значительных количествах во всех изучаемых видах, вносят свой вклад в стимулирующие свойства извлечений из них, тогда как только лекарственные препараты родиолы розовой (изучены экстракт и настойка) обладают анксиолитической, актопротекторной, антидепрессивной, це-ребропротекторной активностью и другими ценными свойствами

2.3 Syrmga vulgaris L.

В ходе фотохимических исследований было установлено, что в коре сирени обыкновенной, произрастающей на территории Поволжского региона, компонентный состав аналогичен таковому для ранее исследованных образцов сырья, заготовленных в Московской области Оптимизирован способ получения ГСО сирингина (А с 1522480 (СССР), предложенного для оценки качества сырья и лекарственных препаратов элеутерококка колючего и коры сирени

Измельченная кора сирени обыкновенной после экстракции этанолом

Экстракция , ,80%F.tQH(t)

Извлечение, содержащее целевой продукт - сирингин

Упаривание

Колонка № 1 (силикагель, ХЛФ ЕЮН или ХЛФ МеОН)

Элюирование

Фракции, содержащие сирингин (ХЛФ ЕЮН 91 9 или ХЛФ МеОН 92 8)

Упаривание

Кристаллизация

Технический сирингин Растворение в H?Q ft\

Фильтрация

Стеклянный фильтр со слоем полиамида

Рисунок 7 - Схема получения ГСО сирингина ГСО сирингин представляет собой игольчатые кристаллы белого цвета, С17Н24О9, Т пл 190- 192 °С, УФ-спектр Хтт 266 нм 'Н-ЯМР спектр сирингина в

дейтеропиридине (100 МГц, м д )• 6 88 (д,16 Гц, Н-7), 6 86 (с, Н-2,6), 6 60 (дг, 6 и 16 Гц. Н-8), 6 65 (д,7 Гц, Н-1'), 4 1-4 7 (м, 2Н-9 + 6Н глюкозы), 3 76 (с, 6Н, 2 СНэО) (рис 8)

Рисунок 8 - 'Н-ЯМР спектр сирингина в пиридине

Результаты изучения физико-химических констант сирингина, характеризующих данный стандарт с позиций подлинности, чистоты и других параметров, ранее были использованы при разработке ВФС 42-2088-92

С использованием полученных серий стандартного образца разработаны методики анализа нового тонизирующего и адаптогенного препарата «Сирени настойка», а также пересмотрены разделы «Качественный анализ» и «Количественное определение» для проекта ФС «Сирени кора», принятого к рассмотрению в Научном центре экспертизы и государственного контроля лекарственных средств для включения в XII издание Российской Государственной фармакопеи При этом для качественной оценки сырья и лекарственного препарата предложено обнаружение сирингина методом ТСХ-анализа при облучении УФ-светом при 254 нм и обработке хроматограммы 16 % раствором кислоты серной, а количественный анализ предусматривает определение содержания сирингина методами ВЭЖХ (8 3,36 %) или

хроматоспектрофотометрии при 266 нм (8 4,25 %) с использованием в обоих случаях ГСО сирингина (рис 2)

2.4 Echinacea purpurea (L.) Moench.

В результате фотохимического изучения травы эхинацеи пурпурной выделены и идентифицированы 4 индивидуальных фенилпропаноидных соединения кофейная кислота, цикориевая кислота (2,3-дикофеилвинная кислота), феруловая кислота, эхинакозид Для цикориевой кислоты, представляющей наибольший интерес в плане стандартизации сырья и лекарственных препаратов эхинацеи пурпурной, разработаны оптимальные условия хроматографического обнаружения и идентификации, а также изучены возможности ее применения в качестве РСО в анализе сырья и лекарственных препаратов «Эхинацеи настойка» и «Эхинацеи экстракт жидкий» Предложен способ получения стандартного образца цикориевой кислоты с выходом 60 % (рис 9)

Соединение представляет собой аморфное вещество, С22Н18012, УФ-спектр 280 пл, Хшах 330 нм (рис 1), [ ос ]D25 + 374° (МеОН) 'Н-ЛМР-спектр в d-метаноле (100 МГц, м д ) 7 53 (дд, 16 Гц, 2Н-7',7"), 7 03 (дд, 2Н-2',2"), 6 86 (дд, 1 7 и 8 2 Гц, 2Н-6',6"), 6 75 (дд, 8,2 Гц, 2Н-5',5"), 6 23 (дд, 15,9 Гц, 2Н-8',8"), 5,63 (уш с, 2Н-2,3) (рис 9)

Полученные по предлагаемой схеме (рис. 10) образцы цикориевой кислоты в качестве PCO были использованы при разработке методов анализа травы эхинацеи пурпурной, результатом чего явились наши предложения по внесению изменений в

разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение» действующей НД и решение проблемы стандартизации экстракционных препаратов эхинацеи настойки и экстракта жидкого. Качественный анализ предусматривает ТСХ- обнаружение цикориевой кислоты, количественный анализ - прямое спектрофотометриче-ское определение суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на цикориевую кислоту по удельному показателю поглощения =782) при 330 нм (е 4,22 %)

Рисунок 10 - Схема получения РСО цикориевой кислоты

2.5 Melissa officinalis L.

При изучении химического состава сырья мелиссы лекарственной ранее были выделены и идентифицированы фенилпропаноиды розмариновая кислота и ее этиловый эфир, а также кофейная кислота, в последующем хлорогеновая кислота, впервые описанная для растений, произрастающих на территории СНГ Результаты фотохимических исследований нашли применение при разработке методов анализа ЛРС и лекарственных препаратов мелиссы При этом предложено стандартизацию проводить не только по эфирному маслу (в соответствии с требованиями DAB 10 и 11) или экстрактивным веществам (ФС 42-3645-98), но и по содержанию фенилпро-паноидов и, в частности, по доминирующей в траве розмариновой кислоте (рис 11)

Соединение представляет собой светло-желтое аморфное вещество, Ci8H1606, УФ-спектр Кж 235, 242, 299 пл, 327 нм 'Н-ЯМР-спектр в d-ацетоне- 7 43 (д, 15 9 Гц, Н-7), 7 02 (д, 1.7 Гц, Н-2), 6 92 (дд, 1 7 и 8 2 Гц, Н-6), 6 77 (д, 8.2 Гц Н-5), 6 73 (д, 1 8 Гц, Н-2'), 6.66 (д, 8 06 Гц, Н-5'), 6 57 (дц, 1 8 и 8 06 Гц, Н-6'), 6 19 (д, 15 9 Гц Н-8), 5 04 (кв, 4 и 8 6 Гц, Н-8'), 2,95 (т, 8 6 Гц, Н-7')

Оптимизирован способ получения розмариновой кислоты - стандарта с выходом 70 % Полученные по предлагаемой схеме (рис. 12) образцы розмариновой кислоты в качестве PCO были использованы при разработке методов анализа сырья -травы м лекарственной, результатом чего явились наши предложения по внесению

изменений по разделам «Качественные реакции» и «Количественное определение» в действующую нормативную документацию ФС 42-3645-98, и решении проблемы стандартизации настойки и экстракта жидкого Во всех указанных случаях в соответствии с принципом унификации методик для качественной оценки используется ТСХ-обнаружение розмариновой кислоты, а количественное определение предусматривает спектрофотометрическое определение (в 5,20 %) суммы гидроксико-ричных кислот в пересчете на розмариновую кислоту (рис 1) при 326 нм (Е{* =500)

Элюирование

Элюирование , ^ХЛФ'МеОН, 90 10, 88 12

Фракции, обогащенные розмариновой кислотой

Упаривание

Техническая розмариновая кислота Растворение в Н2С^ |

Колонка № 3 (сефадекс Ш-20, Н20)

Фильтрату Упаривание

Рисунок 12 - Схема получения РСО розмариновой кислоты

3 Разработка способов получения и стандартизация

лекарственных препаратов на основе Фенилпропаноидов

С позиций рассмотрения фенилпропаноидов и их производных в качестве целевой группы БАС были приготовлены образцы настоек и экстрактов жидких из изучаемых видов JIPC. Оптимальные технологические параметры установлены при варьировании концентраций экстрагента - водного этанола, измельченности сырья, времени настаивания или перколирования с использованием различных методов мацерации, дробной мацерации (бисмацерации), дробной мацерации и ремацерации с делением сырья на равные части, перколяции, реперколяции как в их традиционном лабораторном исполнении, так и в модифицированных вариантах (включение стадии термической экстракции) Разработанные варианты модификации методов ремацерации (для настоек) и реперколяции (для экстракта расторопши жидкого), заключающиеся в комбинации с термическим настаиванием или перколированием, при сравнении с традиционными схемами получения, показали преимущества новых подходов по критерию - эффективность экстракции для разработанных схем она составила 75-85 % (у традиционных схем - 60-70 %) При этом рекомендуемая температура для всех видов сырья. 60 °С в производственных условиях, 70 °С в лабораторных условиях (нагрев на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 0,5 ч)

Приведенные результаты анализа по показателю содержания БАС с использованием разработанных методик в настойках и экстрактах (табл 4), подтверждают целесообразность использования температурного фактора для получения продукции высокого качества, стабильной при хранении

Наряду с оценкой содержания БАС в фитопрепаратах стандартизация проводилась и по другим показателям на соответствие требованиям ГФ XI, вып 2, стр 148 (для настоек) и требованиям ГФ XI, вып 2, стр 160 (для экстрактов) Показана их стабильность при хранении, установлены сроки годности 2 года для всех разработанных лекарственных препаратов

Все разработанные способы получения настоек и экстрактов защищены патентами РФ на изобретение и были использованы при разработке лабораторных регла-

ментов на получение новых фитопрепаратов, а также были положены в основу проектов соответствующих опытно-промышленных регламентов

Таблица 4 - Содержание БАС в образцах разработанных

лекарственных препаратов, полученных различными методами

Препарат Методы получения Содержание БАС, %

Расгоропши экстракт жидкий 1 1 Сумма фла-волигнанов

Перколяция 1,33 ±0,05

Реперколяция по Чулкову 1,52 ±0,03

Модифицированная реперколяция с заменой термической стадии на нетермическую 1,55 ±0,03

Модифицированная реперколяция с включением заключительной термической стадии, предшествующей разгрузке перколятора (предложенная схема) 1,61 ±0,02

Силибохол Сумма флавоноидов

Реперколяция по Чулкову (просилибохол - 1) + мацерация (просилибохол—2) 1,53 ±0,02

Реперколяция по Чулкову (просилибохол - 1) + перколяция (просилибохол - 2) 1,58 ± 0,03

Предложенная схема' модифицированная реперколяция (просилибохол - 1) + модифицированная бисмацера-ция: вторая экстракция термическая (просилибохол - 2) 1,60 ±0,05

Родиолы розовой настойка 1 5 Розавин

Мацерация 0,18 ±0,02

Перколяция 0,22 ± 0,02

Дробная мацерация с делением сырья и экстрагента на равные части (без термической стадии) 0,23 ± 0,03

Модифицированная ремацерация с включением заключительной термической стадии (предложенная схема) 0,25 ± 0,03

Эхинацеи пурпурной настойка 1:5 Сумма фенил-пропаноидов

Мацерация 0,53 ± 0,02

Перколяция 0,58 ± 0,03

Модифицированная ремацерация с включением заключительной термической стадии (предложенная схема) 0,60 ±0,02

Мелиссы настойка 1:5 Сумма фенил-пропаноидов

Мацерация 0,43 ± 0,02

Перколяция 0,53 ±0,04

Модифицированная ремацерация с включением заключительной термической стадии (предложенная схема) 0,57 ±0,05

4 Обоснование использования разработанных лекарственных препаратов в

медицинской практике

В соответствии с Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Москва, 2000,2005) изучена острая и хроническая токсичность и специфическая фармакологическая активность новых лекарственных препаратов на базе кафедры фармакологии (Лебедев А А, Дубищев А В), кафедры общей и клинической микробиологии, иммунологии и аллергологии (Жестков А В ) и иммунологического отдела ЦНИЛ СамГМУ (Лимарева Л В )

4.1 Исследование острой и хронической токсичности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды

Результаты исследований, выполненные на 44 белых беспородных мышах и 36 крысах обоего пола, а также 48 крысах-самках линии ^К^аг, показали, что изучаемые лекарственные препараты относятся к группе малотоксичных веществ, не вызывают отсроченной гибели животных и нарушений жизненно важных функций организма. ЬБ50 для настоек родиолы розовой, эхинацеи, мелиссы составила 15000 мг/кг, для экстрактов расторопши, эхинацеи и комплексного препарата «Силибо-хол» - 20000 мг/кг Данные показатели и были использованы для расчета доз вводимых фитопрепаратов на этапе изучения специфической фармакологической активности

При изучении хронической токсичности животные (по 3 опытные группы на каждый лекарственный препарат, каждая их которых включала по 10 беспородных крыс-самок и 5 морских свинок-самок) находились под наблюдением 60 дней При этом никаких негативных сдвигов в картине крови, поведении, состоянии животных не отмечено

4.2 Изучение зависимости фармакологических эффектов от химической

структуры фенилпропаноидов

Зависимости «компонентный состав - фармакологическое действие» и «химическая структура - биологическая активность» разработанных фитопрепаратов и индивидуальных доминирующих фенилпропаноидов были изучены в трех основных направлениях антиоксидантная и гепатопротекторная активность, иммуномо-дулирующее действие и нейротропные свойства.

Таблица 5 - Сравнительное изучение фитопрепаратов и индивидуальных фенилпро-паноидов на некоторые параметры острого токсического поражения печени

тетрахлорметаном (М±т, п = 11 в каждой группе)

№ Группы Вариант опыта МДА нМ/мг белка сод АЕД/мг белка Катал аза нМ Н202/мг белка в сек

1. Крысы, получавшие ССЦ (контроль) 0,71+0,05 1,51+0,38 2,38+0,07

2 Крысы, получавшие легалон и ССЦ 0,48+0,03 р< 0,001 6,17+1,77 р < 0,02 10,77+0,38 р < 0,001

3 Крысы, получавшие экстракт расторопши и ССЦ 0,24+0,01 р < 0,001 7,55+0,48 р < 0,001 9,76+1,39 р < 0,001

4. Крысы, получавшие силибохол и ССЦ 0,29+0,01 р < 0,001 6,79+0,46 р < 0,02 8,62+1,34 р < 0,001

5 Крысы, получавшие силибин и ССЦ 0,34+0,03 р< 0,001 5,96+0,49 р < 0,001 8,86+0,82 р < 0,001

6. Крысы, получавшие 2,3-дегидросилибин и ССЦ 0,30+0,02 р < 0,001 6,05+0,48 р < 0,001 8,72+0,91 р < 0,001

7 Крысы, получавшие силидианин и ССЦ 0,36+0,02 р < 0,001 6,10+0,50 р < 0,05 8,54+0,76 р < 0,001

8 Крысы, получавшие силикристин и ССЦ 0,40+0,03 р < 0,001 6,14+0,47 р < 0,001 8,69+0,85 р < 0,001

9 Крысы, получавшие цикориевую кислоту и ССЦ 0,42±0,03 р< 0,001 2,33+0,21 р < 0,001 4,76+0,44 р < 0,001

10 Крысы, получавшие элеутерозид Б и ССЦ 0,45±0,04 р < 0,001 3,07+0,28 р < 0,05 4,46+0,39 р< 0,001

11 Крысы, получавшие сирингин и ССЦ 0,48±0,04 р < 0,05 3,18+0,30 р < 0,001 4,58+0,37 р < 0,05

12 Крысы, получавшие розмариновую кислоту и ССЦ 0,50+0,06 р < 0,005 2,46+0,15 р < 0,02 4,18+0,34 р < 0,005

13 Крысы, получавшие кофейную кислоту и ССЦ 0,51+0,07 р < 0,005 2,25+0,17 р < 0,001 4,61+0,42 р < 0,001

14 Крысы, получавшие розавин и ССЦ 0,56+0,07 р < 0,005 2,21+0,19 р< 0,001 4,37+0,38 р < 0,002

В частности, при изучении антиоксидантного действия фенилпропаноидов на модели токсического гепатита, вызванного тетрахлорметаном (табл 5), установлены преимущества в антиокислительных свойствах у соединений, содержащих наибольшее количество ароматических ОН- и ОСН3 - групп (доноров протонов), гли-козилирование и наличие спиртовой или карбоксильной группы в пропановом фрагменте достоверного значения не имели Для соединений флаволигнановой природы (силибин, силидианин, силикристин, 2,3-дегидросилибин) выявлена высокая активность по всему спектру антиоксидантных свойств, антиокислительное действие, активация ферментативного звена эндогенной антиоксидантной защиты на примере супероксиддисмутазы и каталазы, уменьшение накопления продуктов ПОЛ, малонового диальдегида Данное обстоятельство, на наш взгляд, связано с наличием сопряженной системы двойных связей (более длинная цепочка по сравнению с простыми фенилпропаноидами и лигнанами) и наличия карбонильной группы в флавоноидной составляющей молекулы Одним из доказательств тому служит выявленная высокая антиокислительная активность 2,3-дегидросилибина, превосходящая таковую у силибина Антиоксидантные свойства флаволигнанов является важной составляющей гепатопротекторного действия лекарственных препаратов расторопши пятнистой

В отношении иммунотропных свойств при изучении фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов, клеточного (в варианте воспроизведения реакции гиперчувствительности замедленного типа) и гуморального (путем определения числа и функционирования антителообразующих клеток методом локального гемолиза) звена статистически значимых отличий в зависимости характера воздействия от структуры фенилпропаноида (коричные спирты или кислоты, простые или сложные фенилпропаноиды, гликозилирование и место гликозилирования и т д ) не выявлено Для всех изученных фитосубстанций отмечено наличие иммуномодулирующего влияния на клеточное и гуморальное звено иммунитета, фагоцитоз, лидером при этом среди изученных растений является эхинацея пурпурная (рис 13) , что, по всей видимости, связано с разнообразным представительством диеновых коньюгатов кофейной кислоты в сочетании с высоким содержанием полисахаридного комплекса (иммуностимулирующие свойства)

Рисунок 13 - Сравнительная оценка иммуномодулирующей активности фитопрепаратов на основе фенилпропаноидов и индивидуальных соединений

□ Фагоцитарная активность

/

.<г Л

УЛ

Ш Н/.ияии:' на клеточное звено

кммушггета (реакция ] З Г -индуктивная фаза)

□ В.': кнн не на

|туморалыюе звено

иммунитета (увеличение числа АОК)

Нейротропная активность разработанных лекарственных препаратов и индивидуальных вещсстз - фенилпропаноидов изучалась в следующих направлениях: определение гипногенной и антнгипногенной активности, ноотропной активности, влияние на физическую работоспособность и выносливость, на поведение животных в открытом пространстве, на показатели обучения, на формирование памяти, а также выявление ан к си о логических свойств и антидепрессивной активности. В частности показано (табл. 6), что наиболее перспективными в плане создания тонизирующих и адаптогенных средств являются растения, содержащие производные коричных спиртов (р. розовая, сирень обыкновенная, элеутерококк колючий и др.). Их гликозиды (цнннамилгликозиды) проявляют более выраженную биологическую активность по сравнению с соответствующими агликонами, а последние, в свою очередь, более активны, чем коричные кислоты и их производные, включая гликозили-рованные аналоги, для которых не характерны стимулирующие свойства.

Таблица 6 - Результаты изучения нейротропной активности некоторых фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды

Объект Анти-гипно-генное Тони-зи-рую-щее Актопротек-торное: работоспособность /выносливость Ориентировочно-исследоват реакция Цереб-ропро-тектор-ное Анксио лити-ческое Анти-депрес сивное

Родиола розовая +++ +++ +/+++ + мм- 1 1 1 1 +++

Эхинацея пурпурная 44- ++ +++/++ + + - -н-

Расторопша пятнистая 0 - -/0 - 0 - 0

Мелисса лекарственная - 0 0/0 0 0 +-Н- 0

Элеутерококк колючий ++ ++ +/++++ ++ ++ ++ ++++

Сирень обыкновенная ++++ ++ + +++ ++ ++

Лимонник китайский ++ ++ +++ 4+ + +

Ива корзиночная +++ + +++/-Н- 1 1 1 1 +++ 0 0

Примечание наличие и выраженность действия отмечены соответствующим количеством «+»; отсутствие действия обозначено знаком «О», противоположное действие обозначено знаком «-» Таким образом, результаты диссертационных исследований являются научно-методологической основой рационального использования лекарственных растений, содержащих в качестве основной группы БАС фенилпропаноиды, открывают новые пути в целенаправленном поиске перспективных сырьевых источников для создания отечественных импортозамещающих фитопрепаратов с гепатопротекторными и иммуномодулирующими свойствами. Внедрение их в медицинскую практику позволит расширить возможности лечебно-профилактических мероприятий по поводу целого ряда заболеваний, характеризующихся нарушениями со стороны антиокси-дантной защиты и иммунной системы

39

ВЫВОДЫ

1 На основании изучения структуры, физико-химических и химических свойств, характера фармакологической активности расширен спектр представлений о фе-нилпропаноидах и доказана целесообразность выделения их в самостоятельный класс природных биологически активных соединений

2 Теоретически и экспериментально обосновано изучение и использование пяти видов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды, как перспективных сырьевых источников для получения гепатопротекторных и иммуномодули-рующих препаратов

3 Фенилпропаноиды рассмотрены как ведущая и анализируемая группа соединений для ЛРС и экстракционных (галеновых) препаратов расторопши пятнистой, родиолы розовой, эхинацеи пурпурной, сирени обыкновенной и как анализируемая группа - для мелиссы лекарственной, что позволило обосновать выбор аналитических методов при стандартизации ЛРС и фитопрепаратов, предложить новые или усовершенствовать имеющиеся подходы к стандартизации с позиции унификации методик анализа.

4 Разработаны методики качественного и количественного анализа фенилпропаноидов в изучаемых объектах оценку доброкачественности сырья родиолы розовой и сирени обыкновенной предложено проводить по содержанию доминирующих циннамилгликозидов розавина и сирингина методами хроматоспектрофо-тометрии (при доверительной вероятности 95 % 8 7,40 % - р розовая, 8 4,25 %

- с обыкновенная) и ВЭЖХ-анализа (8 5 30 % - р розовая, 8 3,36 % - с обыкновенная), содержание флаволигнанов в плодах расторопши пятнистой устанавливается в варианте прямой спектрофотометрии в пересчете на силибин (8 5,18 %) или методом ВЭЖХ-анализа (8 3,87 %), сырье эхинацеи пурпурной и мелиссы лекарственной анализируется путем прямого спектрофотометрического определения суммы гидроксикоричных кислот в пересчете соответственно на цикорие-риевую (8 4,22 %) или розмариновую кислоту (8 5,20 %) с использованием Е|*.

5 Выявлены доминирующие и диагностические БАС в изученных видах ЛРС, что явилось основанием для использования некоторых из охарактеризованных соединений в качестве веществ - стандартов в анализе сырья и лекарственных пре-

паратов расторопши пятнистой (ГСО силибин), родиолы розовой (ГСО розавин), сирени обыкновенной и элеутерококка колючего (ГСО сирингин), мелиссы лекарственной (PCO розмариновая кислота), эхинацеи пурпурной (PCO цикорие-вая кислота)

6 Разработаны подходы к способам выделения и очистки ГСО фенилпротаноид-ной природы (силибин, розавин, сирингин), основанные на сочетании экстракционных методов и адсорбционной колоночной хроматографии на полиамиде и силикагеле с последующей кристаллизацией и перекристаллизацией, что обеспечивает 75 % - 85 % выход и 99,5 % содержание индивидуального вещества.

7 Проведено сравнительное изучение физико-химических свойств и выработаны единые принципы к разработке показателей качества веществ-стандартов фе-нилпропаноидной природы и их оценке, что нашло отражение в нормативной документации на ГСО силибин, розавин, сирингин.

8 Экспериментально обоснована рациональная технология получения экстракционных (галеновых) препаратов на основе изученных видов ЛРС с позиции рассмотрения фенилпропаноидов в качестве целевой группы и предложено включение стадии термической экстракции при 60 °С -70 °С, обеспечивающей 80 % выход БАС, в результате чего разработаны оптимальные способы получения для «Расторопши экстракта жидкого» - метод модифицированной реперколяции, для «Эхинацеи пурпурной настойки», «Родиолы розовой настойки», «Мелиссы настойки» - метод модифицированной ремацерации с делением сырья на равные части

9 На основании результатов изучения антиоксидантных и иммуномодулирующих свойств новых фитопрепаратов и индивидуальных соединений фенилпропано-идной природы выявлены зависимости в ряду «компонентный состав - фармакологическое действие» и «химическая структура - биологическая активность». Установлено, что указанный спектр активности характерен для всех предложенных лекарственных препаратов и определяется содержанием соединений фенил-пропаноидной природы

10 Установлено, что наиболее выраженной гепатопротекторной активностью в отношении влияния на неферментативные и ферментативные звенья антиокси-

дантной защиты обладают флаволигианы расторошпи пятнистой, а наиболее значимое иммуномодулирующее действие в отношении клеточного и гуморального звена иммунитета характерно для фенилпропаноидов эхинацеи пурпурной

11 Выявлены различия по спектру стимулирующих, актопротекторных и анксио-литических свойств фенилпропаноидов выраженную тонизирующую активность проявляют лекарственные препараты, содержащие гликозиды коричных спиртов (родиола розовая, сирень обыкновенная, элеутерококк колючий и др), менее активны их агликоны, производные гидроксикоричных кислот (мелисса лекарственная) тонизирующей активностью не обладают

12 Включены в Государственный реестр лекарственных средств РФ (2004 г) вещества-стандарты силибин и розавин, разработаны и утверждены на Федеральном уровне четыре ВФС на плоды и экстракт расторопши, настойки родиолы розовой и эхинацеи пурпурной, включены в действующую НД предложенные изменения по качественной оценке сырья и экстракта жидкого родиолы розовой, приняты к рассмотрению в Научном центре экспертизы и государственного контроля лекарственных средств пять нормативных документов, касающихся изменений и дополнений к действующей НД на два вида ЛРС - на траву эхинацеи пурпурной и траву мелиссы лекарственной, а также три проекта ФС на сырье родиолы розовой, расторопши пятнистой, сирени обыкновенной

Список ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1 Термический анализ корневищ родиолы розовой // Фармация - 1992 - Т 41, № 1 - С 67-69 (соавт В А Куркин, Г Е Штер, А С Космынин)

2 Фотохимическое исследование лекарственных растений родов родиола, тополь, ива, расторопша, одуванчик, содержащих флавоновды // Современные аспекты изучения лекарственных растений Научные труды Всесоюз. НИИ фармации -Москва, 1995. - Т XXXTV - С 151-157 (соавт. В А Куркин, Г.Г Запесочная, В Б Браславский и др)

3 Химическое исследование травы Melissa officinalis // Химия природ соедин -1995 - № 2 - С. 318-320 (соавт В А. Куркин, Т В Куркина, Г Г Запесочная и др)

4. Количественное определение силибина и суммы флаволигнанов в плодах Silybum marianum (L ) Gaerta II Растительные ресурсы - 1996. - T 32, вып 3 - С 80-87 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, М Ф Сенцов и др )

5 Контроль качества экстракта расторопши жидкого // Фармацевтическая наука и практика в новых социально-экономических условиях. Научные труды Всесоюз. НИИ фармации - Москва, 1997 - Т XXXVI, ч.2 - С 88-95 (соавт В.А Куркин, Г Г Запесочная, М Ф Сенцов и др)

6 Новые препараты на основе плодов расторопши пятнистой // Международный журнал по иммунореабилитации - 1998 - N 8 - С. 12 (соавт В.А. Куркин, А А Лебедев, Г Г Запесочная и др).

7 Плоды расторопши пятнистой - перспективный источник антиоксидантов // V Международная конференция «Биоантиоксидант» Тезисы докладов — Москва, 1998 -С 53-54 (соавт В А Куркин, А А Лебедев, В В Косарев и др)

8 Иммуномодулирующее действие настойки эхинацеи пурпурной // 2-й Национальный конгресс Российской Ассоциации Аллергологов и Клинических Иммунологов «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии». Сборник трудов - Москва, 1998 - С 279 (соавт А В Жестков, В.В Косарев, В А Куркин и др)

9, Исследования по созданию иммуномодулирующего лекарственного средства на основе коры сирени // V Всероссийская научно-практическая конференция серии «Экология и здоровье человека» «Здоровый образ жизни - системный подход» Тезисы докладов - Самара, 1998 - С 119-121 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, Л А Онучакидр)

10 Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L ) Moench // Растительные ресурсы - 1998 - Т. 34. -Вып 2 - С 81-85 (соавт В.А Куркин, О И Авдеева, П Г Мизина)

11 Качественный и количественный анализ сырья и настойки Melissa officinalis L // Растительные ресурсы -1999 -Т 35 - Вып 3 - С 116-121 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, 3 В Болтабекова)

12.Фенилпропаноиды лекарственных растений создание и стандартизация фитопрепаратов // Химия, технология, медицина Труды Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений - Москва, 2000 - С 136-142 (соавт. Г Г Запесочная, В А Куркин)

13 Возможности использования фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, в качестве иммуномодуляторов // Межвузовская научно-практическая конферен-

ция, посвященная 85-летию высшего образования на Урале «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования итоги и перспективы» Материалы конференции -Пермь,2001 -С 89-90

14 Перспективы создания иммуномодулирующих фитопрепаратов // Всероссийская конференция «Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики» Материалы конференции. - Курск, 2001.-С.191-192.

15 Эхинацея пурпурная — перспективный источник экопротекторов // VII Всероссийский конгресс «Экология и здоровье человека» Труды конгресса - Самара, 2001 —С 7-8 (соавт В А Куркин, А В Жесткое, Л В Лимарева)

16 Антиоксидантные свойства комплексного гепатопротекторного лекарственного препарата силибохол // Растительные ресурсы - 2001 - Т 37 - Вып. 2 - С 69-74 (соавт А А. Лебедев, Е А Батаков, В.А. Куркин и др )

17 Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе флаволигнанов плодов расторопши пятнистой // VIII Всероссийский симпозиум по молекулярной жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу Тезисы докладов -М., 2001 - С 59 (соавт Р А Минахметов, Л А Онучак, В.А Куркин и др.)

18 Сирень обыкновенная - перспективный источник иммуномодулирующих и адаптогенных лекарственных средств // IV Международный симпозиум «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования»: Труды симпозиума -Москва, 2001 -С 519-521 (соавт. В А Куркин, ГГ. Запесочная, ИЮ Климова и др ).

19 Иммунная система и иммунокорректоры (учебное пособие) - Самара ООО «Офорт», 2003 - 176 с (соавт В А. Куркин, Н.Л Акимова, В Н Ежков)

20 Фитохимические и технологические аспекты разработки комплексного гепатопротекторного средства «Силибохол» // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Специальный выпуск "Химия и химическая технология" - Самара, 2003 -С 149-154 (В А Куркин, Г Г. Запесочная, А В Волоцуева идр)

21.Фитохимическое изучение и химическая стандартизация сырья и препаратов эхинацеи пурпурной // Известия Самарского научного центра Российской академии наук Специальный выпуск "Химия и химическая технология" - Самара, 2003 -С 124-127

22 Влияние антиоксидантов растительного происхождения на иммунную систему человека // IX Всероссийский Конгресс «Экология и здоровье человека» Материалы конгресса. - Самара, 2004. - С. 159-163 (соавт. В А Куркин, Г Г Запесочная, И Ю. Климова)

23 Фенилпропаноиды как биологически активные соединения и Стандартные образцы лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов // II Всероссийский съезд фармацевтических работников- Материалы съезда - Сочи, 2005 - С 93-95 (соавт В А. Куркин, Г Г Запесочная, В Н Ежков)

24 Фенилпропаноиды лекарственных растений (монография) - Самара ООО «Офорт», 2005 - 120 с (соавт В.А. Куркин, Г Г Запесочная, В Н Ежков)

25 Гепатопротекторные свойства фенилпропаноидов и их производных // X Всероссийский Конгресс «Экология и здоровье человека» Материалы конгресса - Самара, 2005 -С 89-96.

26 Разработка государственных стандартных образцов веществ фенилпропаноидной природы // Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006. - № 1, Т 4 - С 143-146 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная)

27 Разработка технологии получения и методов стандартизации галеновых препаратов на основе плодов расторогапи пятнистой (обзор) // Фармация — 2006 - № 6 -С. 43-45

28 Стандартизация некоторых видов лекарственного растительного сырья и препаратов, содержащих коричные кислоты // Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 100-летию со дня рождения проф. Л.Н Березнегов-ской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» Материалы конференции - Томск, 2006 - С. 207-211 (соавт В.А Куркин, Г Г Запесочная)

29 Разработка фитопрепаратов - адаптогенов на основе фенилпропаноидов с позиций выявления зависимости «структура соединения — нейротропный эффект» // XI Всероссийский Конгресс «Экология и здоровье человека»: Материалы конгресса -Самара, 2006 - С 7-12 (соавт В А. Куркин).

30 Разработка способов получения и стандартизация галеновых препаратов на основе фенилпропаноидов // Ш Всероссийская конференция «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». Сборник материалов (в 3 кн ) - Барнаул, 2007 - Кн 2 - С 240-244

31 Иммуномодулирующие фитопрепараты спрос и предложение // Ремедиум, 2007 - № 3 - С 26-28 (соавт В.А Куркин)

32 Патент РФ № 2102999 на изобретение «Способ получения экстракта растороп-ши пятнистой» А 61 К 35/78 Бюл № 3 от 27 01 98 г (соавт В А Куркин, А А Лебедев, Г Г Запесочная и др)

33 Патент РФ № 2129873 на изобретение «Способ получения масла расторопши пятнистой, обладающего ранозаживляющей активностью» А61К35/78 С11В 1/10 Бюл № 13 от 10 07 99 г (соавт. Е В Ахтемиров, В А. Куркин, А А Лебедев, идр)

34 Патент РФ № 2133620 на изобретение «Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью». А 61 К 35/78. Бюл. № 21 от 27.07 99 г (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, Г. А Маковецкая и др )

35 Патент РФ № 2134584 на изобретение «Способ получения иммуномодулирую-щего препарата «Настойка эхинацеи пурпурной». А 61 К 35/78 Бюл № 23 от 20 08.99 г (соавтв В А. Куркин, В В. Косарев, О.И Авдеева и др )

36 Патент РФ № 2139722 на изобретение «Средство "Силибохол" для лечения гепатитов и способ его получения» А 61 К 35/78 Бюл № 29 от 20 10.99 г. (соавт В А Куркин, А А Лебедев, Г Г Запесочная)

37 Патент РФ № 2139724 на изобретение «Способ получения экстракта из обезжиренных плодов расторопши пятнистой» А 61 К 35/78 Бюл № 29 от 20.10 99 г (соавт В.А Куркин, А А Лебедев, Г Г. Запесочная и др.).

38 Патент РФ № 2155054 на изобретение «Лекарственный сбор для лечения пиелонефрита» А 61 К 35/78 Бюл. № 24 от 27 08 2000 г (соавт. В.А Куркин, Г А Маковецкая, Е С Гасилинаидр)

39 Патент РФ № 2155071 на изобретение «Способ получения лекарственной фотопленки» А 61 К 35/78. Бюл № 24 от 27.08 2000 г (соавт П Г Мизина, В А Кур-кин, В В Косарев и др)

40 Патент РФ № 2102999 на изобретение «Способ лечения заболеваний печени и желчевыводящих путей» А 61 К 35/78 Бюл № 21 от 27 07 2002 г (совт JI.JI Попова, А А Суздальцев, В А Куркин и др)

41 Патент РФ № 2209063 на изобретение «Способ получения вещества, обладающего антиоксидантным действием» А 61 К 35/78. Бюл № 21 от 27 07 2003 г (соавт В А Куркин, А А Лебедев, Г.Г Запесочная и др)

42 Phenylpropanoids of some medicinal plants // Second International symposium on the chemistry of natural compaund Abstracts of SCNC - Turkey, 1996 -P 319 (соавт

V A Kurkm, G G Zapesochnaya и др)

43 The study of immunotropic activity of the Echinacea purpurea tincture's // Archives of Pharmacology Abstracts of ХШ International Congress of Pharmacology - Germany, 1998 - V 358. - N 1. - P 482 (соавт A V. Zhestkov, V V Kosarev, V A Kurkm и др )

44 The new possibilities of the use of Silybum marianum (L) Gaertn Fruits // XIX International Conference on Polyphenols «Polyphenols Communications 98» - Lille (France), 1998 -V 1 - P. 29-30 (соавт. V A Kurkin, A A Lebedev, GG Zapesochnaya и др.)

45 The comparative study of neurotropic activity of the some phenylpropanoids // Archives of Pharmacology Abstracts of ХШ4 International Congress of Pharmacology - Germany, 1998 -V 358 -N 1 - P 498 (соавт VA Kurkm, G G Zapesochnaya,

V N Ezhkov и др)

46.The immunotropic activity of "Tmctura Echmaceae purpureae" preparation // Allergy -Belgium, 1999 - S 52 - V 54 - P. 102 (соавт VV. Kosarev, AV Zhestkov,

V A Kurkm)

47 Polyphenols Melissa officinalis L И XXI International Conference on Polyphenols «Polyphenols communication 2002». - Morocco, 2002 - P 517-518 (соавт V A. Kurkin, G G Zapesochnaya, Z V. Boltabekova)

48 The new possibilities m the standardization of some medicinal plants containing the flavonoids // XXII International Conference on Polyphenols «Polyphenols communication 2004» - Helsinki, 2004 -P 621-622 (соавт VA Kurkin, GG Zapesochnaya, VB Braslavsky и др)

49 Phenylpropanoids of the medicinal plants are perspective sources of neurotropic phy-topreparations // ХХШ International Conference on Polyphenols - Canada, 2006 - P 53-54 (соавт VA Kurkin, A V Dubishchev, IN Titova и др)

50 Phytochemical and pharmacological investigation of the some medicinal plants containing the flavonoids // ХХ1П International Conference on Polyphenols - Canada, 2006.-P 513-514 (соавт VA Kurkm, A V Dubishchev, О L Kulagm и др)

Автор выражает глубокую благодарность доктору химических наук, профессору Гертруде Григорьевне Запесочной за постоянную, неоценимую помощь при выполнении и оформлении диссертации

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Подписано к печати « 5» Об 2007 г Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать оперативная Уел печ л 2,0 Тираж 100 экз Заказ № 972

Отпечатано в типографии ООО «ОФОРТ» 443080, г Самара, ул Революционная, 70, литера П Тел 372-00-56,372-00-57

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ» 357532, г. Пятигорск, пр Калинина, 11

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Подписано к печати « 5» 06 2007 г Формат 60x84/16 Бумага офсетная Печать оперативная Уел печ л. 2,0 Тираж 100 экз. Заказ № 972

Отпечатано в типографии ООО «ОФОРТ» 443080, г Самара, ул Революционная, 70, литера П Тел 372-00-%, 372-00-57

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» 357532, г. Пятигорск, пр Калинина, 11