Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Лекарственные растения, содержащие фенилпропаноиды, как источник получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов

АВДЕЕВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

1

ооз

Пятигорск - 2007

003160953

АВДЕЕВА ЕЛЕНА ВЛАДИМИРОВНА

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

15.00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Пятигорск - 2007

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный консультант: - доктор фармацевтических наук,

профессор Куркин Владимир Александрович

Официальные оппоненты: - доктор фармацевтических наук,

профессор Челомбитько Вячеслав Александрович

- доктор фармацевтических наук,

профессор Бубенчикова Валентина Николаевна

- доктор фармацевтических наук, профессор Молчанов Геннадий Иванович

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию РФ»

Защита диссертации состоится " 6 " ноября 2007 г в /У часов на заседании диссертационного совета Д 208 069 01 при государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава»

Автореферат разослан " "2У " _2007_г

Ученый секретарь диссертационного совета доктор фармацевтических наук, профессор ^ Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Научные исследования, проведенные по теме диссертационной работы, посвящены расширению спектра представлений о фенилпропаноидах (ароматические соединения в основном фенольной природы, содержащие в структуре один или несколько Се - Сз - фрагментов), как о самостоятельном классе биологически активных природных соединений, перспективных для создания на их основе гепатопро-текгорных и иммуно модулирующих лекарственных средств

Актуальность. В ассортименте гепатопротекторных и иммуномодулирующих лекарственных средств значительное место занимают фитопрепараты, использующиеся для лечения целого ряда заболеваний, обусловленных или имеющих следствием ослабление эндогенной антиоксидантной защиты, вторичные иммунодефи-цитные состояния, соответствующие сдвиги в системе гомеостаза При анализе ситуации на современном фармацевтическом рынке РФ, с одной стороны, для указанных фармакотерапевтических групп очевиден перевес в пользу дорогостоящих импортных препаратов (в том числе на основе расторопши пятнистой, эхинацеи пурпурной, мелиссы лекарственной), с другой, - не в полней мере реализован потенциал используемых растений, что сказывается на эффективности выпускаемых лекарственных препаратов Последнее обстоятельство, как правило, связано с некорректным выбором целевой группы веществ, с недостаточно полными данными по составу и физико-химическим свойствам извлекаемых соединений, и, соответственно, нерациональной технологией их получения, а на этапе оценки качества продукции -с отсутствием объективных и унифицированных методик анализа. Комплекс обсуждаемых проблем для ряда лекарственных растений, на наш взгляд, замыкается на недооценке значимости фенилпропаноидов как в плане стандартизации сырья и лекарственных препаратов, так и в отношении трактовки вклада данных соединений в фармакологическую активность

К моменту начала собственных исследований в литературе в недостаточной мере были освещены в сравнительном плане фотохимические и аналитические аспекты изучения фенилпропаноидов, не было сформировано цельное представление о них, как о самостоятельном классе биологически активных соединений (БАС) с

позиций зависимостей в ряду химическая структура - фармакологическое действие В частности, тонизирующая и адаптогенная активность препаратов родиолы розовой (экстракт жидкий) связывались только с содержанием простых фенольных соединений - салидрозида и его агликона тирозола. При создании препаратов рас-торогапи пятнистой (карсил, легалон, силимар, силибор, силибинин ) отечественные и зарубежные ученые ориентировались на получение и использование в качестве лекарственной субстанции силимарина - очищенной суммы трех доминирующих флаволигнанов растения Однако известно, что все флаволигнаны (описано более 20) обладают гепатопротекторной активностью, а нативный комплекс соединений, по результатам наших исследований, - превосходит силимарин по влиянию на ферментативные и неферментативные звенья антиоксидантной защиты. Ценное лекарственное растение мелисса лекарственная рассматривалась преимущественно с позиций седативной активности терпеноидного комплекса, тогда как фенольные соединения (фенилпропаноиды и флавоноиды) в аспекте решения вопросов стандартизации и разработки лекарственных препаратов, глубоко не исследовалась На сегодняшний день в отечественной нормативной документации (НД) заложено определение экстрактивных веществ и разрешен к применению только настой (за рубежом мелисса входит в состав более 300 лекарственных препаратов) Существует и ряд других примеров, иллюстрирующих необходимость дальнейших исследований в выбранном направлении.

В этой связи представляется целесообразным пересмотр подходов к использованию известных лекарственных растений и поиску новых сырьевых источников с позиции содержания в них фенилпропаноидов В частности, социально значимой является разработка эффективных и безопасных импортозамещающих препаратов с гепатопротекторным и иммуномодулирующим действием. В свою очередь, создание качественной продукции требует решения ряда вопросов1 систематизация и восполнение неполных, иногда противоречивых данных по содержанию фенилпропаноидов в ЛРС, определение ведущей и анализируемой группы БАС в отношении рассматриваемого класса, разработка на этой основе объективных и унифицированных методик анализа растительного сырья и лекарственных препаратов, совершенствование НД

Таким образом, исследования по теме диссертации являются актуальными для современной фармации

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является комплексное исследование ряда лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды, как перспективных сырьевых источников для получения гепатопротекторных и имму-номодулирующих препаратов

Для достижения этой цели решались следующие задачи

1 Обоснование выделения фенилпропаноидов в самостоятельный класс биологически активных природных соединений.

2 Разработка подходов к поиску перспективных сырьевых источников на основе данных по химическому составу ЛРС, и в частности, по содержанию соединений фенилпропаноидной природы

3 Развитие концепции определения ведущей группы БАС в отношении соединений фенилпропаноидной природы для эффективного решения проблем стандартизации

4. Формирование принципов разработки стандартных образцов веществ фенилпропаноидной природы, способов их получения и изучения показателей качества

5. Поиск оптимальных технологических решений при получении лекарственных препаратов, содержащих в качестве целевых веществ фенилпропаноиды

6. Обоснование использования ЛРС, содержащего фенилпропаноиды, для получения иммуномодулирующих, антиоксидантных и гепатопротекторных препаратов на основе выявления зависимостей в ряду «химическая структура соединения -биологическая активность» и «компонентный состав - фармакологическое действие»

7 Разработка нормативной документации (либо внесение изменений в имеющуюся НД) на изучаемые виды лекарственного растительного сырья, стандартные образцы веществ и фитопрепараты. Научная новизна. Разработана концепция оценки перспективности лекарственных растений как сырьевых источников для получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов, а также эффективных технологических подходов с точки зрения содержания фенилпропаноидов и возможности их получения

На основании химических, физико-химических и фармакологических исследований доказано, что фенилпропаноиды являются самостоятельной группой природных БАС. Данные сравнительного изучения структуры и физико-химических свойств фенилпропаноидных соединений, выделенных из расторопши пятнистой, родиолы розовой, сирени обыкновенной, элеутерококка колючего, мелиссы лекарственной, эхинацеи пурпурной, позволили охарактеризовать группы производных коричных спиртов и коричных кислот по структурным особенностям, спектральным, хроматографическим и другим параметрам Это послужило основой разработки единых подходов к обнаружению данных соединений в ЛРС и решению проблемы стандартизации.

На основе данных по химическому составу изучаемых видов ЛРС и с учетом подтвержденного (в ряде случаев - впервые выявленного) спектра фармакологической активности фенилпропаноидов обосновано их выделение в качестве ведущей группы и анализируемой группы БАС в стандартизации сырья и лекарственных препаратов из изучаемых растений

По результатам структурных исследований и установлению физико-химических констант, с учетом данных по уровню содержания БАС в сырье и их диагностическому значению предложены подходы к разработке веществ — стандартов фенилпропаноидной природы В частности, обосновано использование силиби-на, розавина, сирингина в качестве ГСО и разработаны их показатели качества (по разделам описание, растворимость, подлинность, удельный показатель поглощения, температура плавления, угол вращения, содержание примесей, потеря в массе при высушивании), включенные в нормативную документацию

Для класса фенилпропаноидов даны рекомендации по получению веществ -стандартов, заключающиеся для кристаллических соединений на основе коричных спиртов (ГСО силибина, розавина, сирингина) в препаративном хроматографиче-ском разделении водно-спиртовых извлечений из сырья в варианте колоночной адсорбционной хроматографии и рехроматографии на силикагеле и полиамиде с последующей кристаллизацией и перекристаллизацией из соответствующих растворителей, в случае некристаллических соединений (PCO цикориевая и розмариновая кислота) - целесообразно дополнительное использование сефадекса LH-20

При разработке высокоэффективных гепатопротекторных и иммуномодули-рукяцих фитопрепаратов на основе изучаемых видов растений предложено ориентироваться на извлечение нативного комплекса соединений и считать целевой группой БАС фенилпропаноиды и их производные (лигнаны, неолигнаны, флаво-лигнаны и др) Предложены оригинальные технологические способы получения экстракционных препаратов на основе ЛРС расторопнш пятнистой, родиолы розовой, эхинацеи пурпурной, мелиссы лекарственной и некоторых других растений (Патенты РФ на изобретения № 2102999, № 2133620, № 2134584, № 2139724, № 2155071, № 2209063, № 2139722, № 2147223, № 2155054, № 2185843).

Детальное изучение структуры индивидуальных фенилпропаноидных соединений, выделенных из рассматриваемых видов ЛРС, и соотнесение вклада производных коричных спиртов и коричных кислот как группы в целом, так и для отдельных (доминирующих) представителей в формирование фармакологической активности позволили выявить некоторые аспекты в зависимости «компонентный состав — фармакологическое действие» и «химическая структура соединения - биологическая активность» Для всех изученных фитосубстанций и индивидуальных соединений фенилпропаноидной природы установлено антиоксидантное и иммуномодули-рующее действие При этом лидером по антиоксидантной активности являются флаволигнаны расторопши пятнистой, а по влиянию на иммунный ответ - фенилпропаноиды эхинацеи пурпурной Спектр нейротропной активности фенилпропа-ноидов различен для производных коричных спиртов и производных гидроксико-ричных кислот- в частности, первая группа, представленная гликозидами коричного, и-кумарового и синапового спирта, обладает выраженными тонизирующими свойствами, тогда как для второй группы (производные кофейной кислоты) - они не характерны. Установленный характер фармакологической активности доказывает целесообразность использования новых фитопрепаратов с целью усиления адаптационных возможностей, повышения неспецифической и специфической (иммунной) сопротивляемости организма и позволяет варьировать стратегию назначения фитопрепаратов с учетом выявленных особенностей.

Практическая значимость. Объем выполненных исследований доказывает приоритетность оценки вклада фенилпропаноидов при создании гепатопротектор-

ных и иммуномодулирующих фитопрепаратов и решении вопросов стандартизации как уже известных растений, так и при поиске новых сырьевых источников

На основе сложившегося системного подхода к изучению и использованию ЛРС, содержащего фенилпропаноиды, разработаны эффективные иммуномодули-рующие и гепатопротекторные препараты, обладающие также нейротропными и адаптогенными свойствами "Эхинацеи пурпурной настойка", "Эхинацеи экстракт жидкий", "Родиолы розовой настойка", "Расторошпи экстракт жидкий", комплексный препарат "Силибохол", "Мелиссы настойка", "Мелиссы экстракт жидкий", "Сирени настойка", а также лекарственные формы на их основе (сироп и фитоплен-ка)

Результаты фотохимических исследований и, в частности, изучение физико-химических свойств индивидуальных соединений - производных коричных спиртов и коричных кислот позволили в соответствии с современными требованиями подойти к обоснованию аналитических подходов в решении проблемы стандартизации изучаемых видов ЛРС и лекарственных препаратов на их основе Разработаны объективные и унифицированные методики качественного и количественного анализа с применением ТСХ, ВЭЖХ, УФ-спектрометрии и использованием стандартных образцов веществ фенилпропаноидной природы

- контроль качества сырья и лекарственных препаратов на основе родиолы розовой, элеутерококка колючего и сирени обыкновенной предложено проводить по доминирующей группе БАС - циннамилгликозидам с использованием ГСО роза-вина для сырья и фитопрепаратов р розовой и ГСО сирингина (элеутерозид В) для сырья и лекарственных препаратов элеутерококка и сирени качественный ТСХ — анализ и количественное определение розавина и сирингина методами хроматоепектрофотометрии и ВЭЖХ.

- в нормативную документацию на сырье и лекарственные препараты эхинацеи пурпурной и мелиссы лекарственной включено качественное и количественное определение содержания производных кофейной кислоты ТСХ-анализ и спек-трофотометрическое определение суммы фенилпропаноидов в пересчете на ци-кориевую и розмариновую кислоты соответственно;

- для плодов расторопши пятнистой (нативных и обезжиренных) и лекарственного препарата «Экстракт расторопши жидкий» разработаны методики качественного и количественного определения содержания флаволигнанов с использованием ГСО силибина, который также предложен в качестве вещества-стандарта для анализа комплексного лекарственного препарата «Силибохол» (составная часть препарата - лекарственная субстанция «экстракт расторопши жидкий»), качественная оценка проводится с помощью ТСХ-анализа и подтверждается характерным УФ-спектром, количественное определение предусматривает прямое спек-трофотометрическое определение суммы флаволигнанов (для «Сшгабохола» -флавоноидов) в пересчете на силибин, для сырья и монопрепаратов расторопши -дополнительно ВЭЖХ-анализ

Результаты внедрения. Разработана и утверждена следующая нормативная документация ФС 42-0072-01 "Силибин - стандартный образец", ФС 42-0071-01 "Розавин - стандартный образец", вошедшие в Государственный реестр лекарственных средств РФ (2004 г); материалы исследований ранее были использованы при подготовке ВФС 42-2088-92 "Сирингин - стандартный образец", ВФС 42-3380-99 «Плоды расторопши пятнистой», ВФС 42-3334-99 «Родиолы розовой настойка», ВФС 42-3382-99 «Эхинацеи пурпурной настойка», ВФС 42-3381-99 «Расторопши экстракт жидкий» Включены в действующую НД "Изменение № 1 к ФС 75 Государственной фармакопеи XI издания "Корневища и корни родиолы розовой", "Изменение № 1 к ФС "Экстракт родиолы жидкий", а также подготовлен и передан на рассмотрение в Фармакопейный Государственный комитет проект «Изменение № 1 к ФС 42-3645-98 «Трава мелиссы лекарственной» Приняты к рассмотрению в Научном центре экспертизы и государственного контроля лекарственных средств проект ФС «Расторопши плоды», проект ФС «Родиолы розовой корневища и корни», проект ФС «Сирени кора» и проект изменений и дополнений к ВФС 42-2371-94 «Трава эхинацеи пурпурной» для включения в ХП издание Российской государственной фармакопеи, а также проекты ФСП на лекарственные препараты «Силибохол», «Расторопши настойка», «Эхинацеи экстракт жидкий», «Мелиссы настойка»

Публикации. Основное содержание диссертации опубликовано в 50 научных работах, 10 патентах на изобретение РФ, 4-х учебно-методических пособиях и монографии «Фенилпропаноиды лекарственных растений»

Апробация работы. Материалы работы доложены и обсуждены на различных региональных, Всесоюзных, Всероссийских и международных конференциях, в том числе на I Международном симпозиуме "Новые и нетрадиционные растения и перспективы их практического использования" (Пущино, 1995), на II - XI Международной научно-практической конференции "Экология и здоровье человека" (Самара, 1995 - 2006 гг), на П, Ш, X Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 1996, 1997, 2004 гг.), на 2-ом Национальном конгрессе Российской Ассоциации Аллергологов и Клинических Иммунологов (РААКИ) (Москва, 1998), на 8-ой Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2003), на 2-ом Международном симпозиуме по химии природных соединений (Турция, 1996), на 22-ой Международной конференции по полифенольным соединениям (Финляндия, 2004)

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтической науки. Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава» (№ Гос. регистрации 01200202299), с Республиканскими программами Минздравсоцразвития РФ "Совершенствование лекарственного обеспечения населения и лечебно-профилактических учреждений в рыночных условиях" по теме "Создание лекарственных средств природного происхождения антимикробного, адаптогенного и гепа-топротекторного действия" (№ Гос. регистрации 01990005277) и «Создание и стандартизация фитопрепаратов на основе фенилпропаноидов и флавоноидов» (№ Государственной регистрации 01990007536), а также в рамках основных научных проблем Межведомственного Научного Совета по биотехнологии РАМН по направлению ПК 28 01 "Разработка новых лекарственных средств с помощью современных методов и создание биомедицинской технологии коррекции состояний организма"

Положения, выдвигаемые на защиту:

1 Обоснование выделения фенилпропаноидов в самостоятельный класс природных биологически активных соединений на основании данных структурных исследований, изучения физико-химических свойств, биологической активности.

2 Теоретическое и экспериментальное обоснование рассмотрения лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды в качестве доминирующей группы соединений (одной из доминирующих), как перспективных сырьевых источников для получения гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов

3 Результаты исследований фенилпропаноидов как ведущей и анализируемой группы БАС в оценке показателей качества сырья и фитопрепаратов, пути решения проблемы стандартизации с позиций унификации методик качественного и количественного анализа и использования веществ - стандартов

4 Принципы разработки веществ - стандартов фенялпропаноидной природы, относящихся к группам коричных спиртов (ГСО силибин, розавин, сирингин) и коричных кислот (PCO розмариновая и цикориевая кислота), подходы к способам получения, изучению показателей качества и методам их оценки

5 Данные по разработке рациональной технологии получения экстракционных (галеновых) препаратов на основе рассмотрения фенилпропаноидов и их производных в качестве целевой группы веществ (на примере способов получения и стандартизации фитопрепаратов «Расторопши экстракт жидкий», «Силибохол», «Ро-диолы розовой настойка», «Эхинацеи пурпурной настойка», «Мелиссы настойка»)

6 Результаты изучения зависимости в ряду «химическая структура - фармакологический эффект» для класса фенилпропаноидов как основа создания эффективных гепатопротекторных и иммуномодулирующих препаратов

7 Подходы к разработке и совершенствованию нормативной документации на ЛРС и лекарственные препараты, содержащие фенилпропаноиды.

Объем и структура работы. Диссертационная работа изложена на 288 страницах машинописного текста, содержит 37 таблиц, 35 рисунков, список литературы, включающий 311 ссылок, в том числе 158 - на иностранных языках Диссертация состоит из введения, 6 глав, выводов и приложений

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования служило ЛРС, содержащее фенилпропаноиды плоды расторошпи пятнистой [Silybum marianum (L ) Gaertn ], трава эхинацеи пурпурной [Echinacea purpurea (L) Moench.], корневища и корни родиолы розовой (Rhodiola rosea L) и других видов {Rhodiola species), трава мелиссы лекарственной (Melissa officinalis L), кора сирени обыкновенной (Syringa vulgaris L) и некоторые другие виды Указанное сырье соответствовало требованиям действующей НД Объектами исследования также являлись выделенные из данных видов ЛРС индивидуальные соединения, стандартные образцы веществ (силибин, розавин, сирингин, цикорие-вая и розмариновая кислоты), разработанные лекарственные препараты "Эхинацеи пурпурной настойка", "Эхинацеи экстракт жидкий", "Родиолы розовой настойка", "Расторошпи экстракт жидкий", комплексный препарат "Силибохол", "Мелиссы настойка", "Мелиссы экстракт жидкий", "Сирени настойка", а также препараты сравнения при проведении фармакологических исследований

Фотохимические исследования проведены с использованием традиционных и современных инструментальных физико-химических методов адсорбционная колоночная (КХ) и тонкослойная хроматография (ТСХ), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), спектрофотометрия, масс-спектрометрия, спектроскопия ядерного магнитного резонанса ('Н-ЯМР), исследование поведения выделенных соединений в процессе нагрева проведено с использованием дифференциального термического анализа (ДТА), дифференциальной сканирующей калориметрии (ДСК) и дериватотермографии (ДТГ)

Аналитические исследования по разработке методик качественного и количественного анализа сырья и лекарственных препаратов проведены с использованием методов ТСХ-анализа, ВЭЖХ, спектрофотометрии, хроматоспектрофотометрии

Для выполнения технологической части работы были использованы методы экстракции мацерация, ремацерация, перколяция, реперколяция и их модифицированные варианты.

Медико-биологический блок исследований включал исследования по оценке безопасности лекарственных препаратов и изучению специфической фармакологической активности, выполненные в соответствии с рекомендациями Фармакологического Государственного комитета Минздравсоцразвития РФ В частности, анти-оксидантная и гепатопротекторная активность изучалась на модели острого гепатита, вызванного тетрахлорметаном (Венгеровский А И , Саратиков А С, 1987). Пере-кисное окисление липидов определено по концентрации малонового диальдегида (Коробейникова О.Н, 1989), влияние на ферментативное звено определено по активности супероксиддисмутазы (Гуревич В.С и др, 1990) и каталазы (Королюк М А и др, 1988) Иммунотропные свойства фитопрепаратов и фенилпропаноидов изучались в отношении оценки влияния на фагоцитарную активность нейтророфи-лов и макрофагов, на клеточное (в варианте воспроизведения реакции гиперчувствительности замедленного типа) и гуморальное (путем определения числа и функционирования антителообразующих клеток методом локального гемолиза) звено иммунитета (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, Москва, 2000,2005) Спектр нейротропной активности был определен в нескольких направлениях гипногенные/антигипногенные свойства - по методике потенцирования снотворного эффекта барбитуратов и хлоралгидрата (Воронина Т А., Середенин С.Б., 2000), актопротекторные свойства - в тесте принудительного плавания мышей с грузом (Воронина Т А, Середенин С Б, 2000), ориентировочно-исследовательская реакция - в установке «открытое поле» (Буреш Я, 1991, Маркель A JI, 1988), обучение и память - по выработке условной реакции пассивного избегания (Бородкин Ю С , 1986), ноотропное действие в варианте церебропротективной активности - по влиянию на амнезию, вызванную максимальным электросудорожным шоком (Воронина Т А, Островская Р У, 1998), ан-ксиолитическая активность - в тестах «приподнятый крестообразный лабиринт» (Pellow S , File S Е , 1986) и «конфликтная ситуация» (Vogel J, 1971), антидепрессивная активность - в тесте отчаяния (Воронина Т А, Середенин С Б , 2000)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 Разработка стандартных образцов веществ Фенилпропаноидной природы

В результате фотохимических исследований сырья указанных видов лекарственных растений было выделено и охарактеризовано более 40 индивидуальных веществ, относящихся к фенилпропаноидам, простым фенольным соединениям, фла-воноидам, флаволигнанам и терпенам. Данные по химическому составу изученных видов ЛРС позволили выявить доминирующие и диагностические вещества растений, причем некоторые из них были предложены в качестве веществ-стандартов

Результаты исследований по выделению и очистке веществ, установлению структуры и физико-химических констант были нами применены при разработке четырех Государственных стандартных образцов сирингина (элеутерозид В), роза-вина, триандрина и силибина, для которых далее приводятся способы получения ГСО силибина и ГСО сирингина, а также для изучения некристаллических соединений - розмариновой кислоты и цикориевой кислоты, использованных в качестве рабочих стандартных образцов

Обсуждая результаты изучения веществ-стандартов фенилпропаноидной природы, необходимо коснуться некоторых общих параметров, как в плане сложившихся методологических подходов к изучению соединений, так и ряда физико-химических свойств, в целом характеризующих данный класс БАС

Основополагающей характеристикой изученных соединений является принадлежность к двум основным группам фенилпропаноидов. 1 - производные коричных спиртов сирингин - глюкозид синапового спирта, розавин - вицианозид коричного спирта, силибин - флаволигнан на основе кониферюювого спирта (флавоноидная часть представлена таксифолином) - соединения кристаллические, предложены в качестве ГСО, 2 - производные гидроксикоричных кислот, в частности, кофейной кислоты цикориевая и розмариновая кислоты - соединения аморфные, предложены в качестве PCO

Учитывая, что наиболее перспективными для разработки ГСО являются производные коричных спиртов, углубленному изучению в сравнительном плане подверглись соединения данной подгруппы и, в частности, силибин, сирингин и роза-

вин. Для них проанализированы наиболее, на наш взгляд, информативные в плане установления структуры 'Н-ЯМР-спектры соединений и их ацетилированных производных, характеризующиеся наличием сигналов резонанса ароматических и алифатических протонов фенилпропанового фрагмента (Сб-С3-) и гликозидных остатков у сирингина и розавина (рис. 4, 6 и 8) Важной подтверждающей характеристикой являются данные масс-спектров, в которых обнаруживаются фрагменты с m/z 134, 115, 92, 78, характерные для коричного спирта (розавин), 180, 162, 137 и 121 -для кониферилового спирта (силибин), 210, 182, 167, 149 - для синапового спирта (сирингин) Кроме того, нами также учитывался характер УФ-спектров как исходных, так и с ионизирующими и комплексообразующими добавками, и результаты химических превращений Ряд выявленных параметров включен в НД (табл 2).

В хроматографическом поведении изучаемых веществ наблюдается много общего, что было нами использовано при выделении и разделении индивидуальных соединений из сырья, разработке способов получения веществ-стандартов, использовании методов ТСХ-анализа и обращено-фазовой ВЭЖХ для оценки качества сырья, лекарственных препаратов и соответствующих ГСО и PCO веществ

При сравнительном исследовании показана высокая специфичность и хорошая межлабораторная воспроизводимость ТСХ-анализа на пластинках "Силуфол УФ 254" и "Сорбфил ПТСХ-П-А-УФ" в системе хлороформ-метанол-вода (26'14.3) для полярных производных фениппропаноидов - основных действующих веществ видов рода родиола (розавин), сирени обыкновенной и элеутерококка колючего (в обоих случаях сирингин) Для флаволигнанов расторопши, имеющих принципиально иной углеродный скелет, наиболее эффективное разделение достигается в неполярной системе циклогексан-ацетонитрил (6.4), при этом в качестве свидетеля используется ГСО силибина Указанные условия проведения ТСХ заложены в НД на вещества - стандарты как основной вариант определения их чистоты (табл 2)

УФ-спекгры фенилпропаноидов являются достаточно характерными и позволяют определить природу вещества, что заложено в разделы «Подлинность» соответствующих нормативных документов С близостью спектральных свойств связана и определенная универсальность в наших подходах к анализу ЛРС и лекарственных

препаратов, содержащих феиилпропаноиды, как для группы производных на основе

коричных спиртов, так и на основе коричных кислот (рис 1 2) А

200 210 220 230 240 250 260 270 280 290 300 310 320 330 340 350 360 Рисунок 1 - УФ - спектры спиртовых растворов PCO розмариновой кислоты (1) и PCO цикориевой кислоты (2)

Рисунок 2 - УФ-спектр спиртовых растворов ГСО розавина (1), ГСО сирингина (2) и ГСО силибина (3)

В частности, УФ-спектры соединений, содержащих остаток гидроксикоричных кислот (цикориевая, розмариновая, хлорогеновая, эхинакозид), имеют практически те же максимумы поглощения (рис 1), что и свободные гидроксикоричные кисло-

ты например, 227, 242, 290 и 330 нм в случае кофейной кислоты УФ-спектры коричных спиртов, лигнанов - агликонов (сирингарезинол, схизандрин, изосхизанд-рин), а также их гликозидов (элеутерозиды В и D, ларицирезинол-4-0-(3-В-глюкопи-ранозид) имеют интенсивные максимумы поглощения в области 250-280 нм (рис 2) В частности, основной максимум поглощения розавина - 252 нм, сирингина - 266 нм Определяемый в максимуме УФ-спектров 0,0008 % спиртовых растворов ГСО удельный показатель поглощения (г/Г:) служит характеристикой индивидуальности веществ и заложен в НД Спектр поглощения в УФ-области флаволигнанов расто-ропши отличен от фенилпропаноидных соединений, как таковых (построенных только на основе фенилпропанового фрагмента), и в основном определяется флаво-ноидной составляющей единственный максимум при 289 ± 1 нм, характерный для большинства флаволигнанов расторопши, указывает на флаваноноловую природу соединений В НД также заложено определение E¡* в максимуме УФ-спектра

Изучение поведения ГСО веществ при нагреве проводилось с использованием таких современных инструментальных методов анализа, как ДТА, ДСК, ДТГ Основанием для привлечения нами метода ДТА явилась необходимость объективного и точного определения таких характеристик, как температуры фазовых переходов веществ, установление наличия и формы связи влаги, определение чистоты образцов Метод ДСК был привлечен для уточнения количества химически связанной влаги по теплотам отщепления воды. ДТГ использовался для изучения термолиза корневищ родиолы розовой, а также для подтверждения эндоэффектов дегидратации и плавления, а также явлений полиморфизма и разложения образцов Результаты обработки серии термограмм образцов соединений приведены в табл 1

Таблица 1 - Данные термического анализа стандартных образцов веществ

Объект Процесс

Дегидратация Плавление Окисление (в атмосфере воздуха) Разложение

ГСО силибин 52 °С 162 °С 260 °С 267 "С

ГСО розавин — 182 °С 269 °С 295 °С

ГСО сирингин 111 °С 190 °С 231 °С 260 °С

Результирующие данные по установлению структуры обсуждаемых ГСО и установленные физико-химические константы, включенные в соответствующую нормативную документацию, представлены в сводной таблице 2

Таблица 2 - Сравнительная характеристика разработанных ГСО веществ

Характеристика, показатель кач-вг ГСО силибин (ФС 42-0072-01) ГСО розавин (ФС 42-0071-01) ГСО сирингин (ВФС 42-2088-92)

Химическая структура он Ь Ьсна Мм 482 НО он М м. 428,4 оона gteo^J^ ^оХД^^он Мм 390,4

Состав С25Н22О10 С20Н28О10 С17Н24О9 *н2о

Описание Белый мелкокристаллический порошок Белый мелкокристаллический порошок Белый мелкокристаллический порошок

'Н-ЯМР- спектр 200 МГц, d-ацетон: 11,70 с, 8-7,2 м, 5,96 д, 5,10 д, 5,00 д, 4,60 д, 4,1-4,2 м, 3,3-3,8 м, 3,85 с 200 МГц, С5В5Ы: 7.47 2 м, 6 82 д, 6 5 дт, 4 9 д, 4 87 д, 4.90 м, 4.65 дд, 4 55-3.95 м, 3.7 кв 100 МГц, C5D5N: 5, м.д.: 6 88 с, 6 65 д, 6.60 дг, 4.7-4 1 м, 3.76 с

Растворимость Мало растворим в ацетоне, практически нерастворим в спирте 95 % и в воде Умеренно растворим в воде, мало растворим в спирте 70%, практически нерастворим в спирте 95% Мало и медленно растворим в воде, очень мало и медленно растворим в 95 % спирте.

Подлинность 1) с Zn + HCl малин окрашив.; 2) с H2SO4 (конц.) желтое окраш., 3)рис ИК-спеюра 4) рис УФ-спекгра Хтаах288 ±1 нм 1) с Н2804 - сиреневое окраш; 2) рис УФ-спектра Хщ«252нм 1) с H2SO4 - синее окрашивание, 2) рис УФ-спектра Я^их 221 нм и 266 нм.

Удельный показатель поглощения 445 - 475 при длине волны 288 нм 437-477 при длине волны 252 нм 415 - 455 при длине волны 266 нм

Т-ра плавления 162-165 °С 171 - 173 °С 190-192 °С

Углы вращения [а] п + 10,8 0 (ацетон) [а]® - 56.5° (ХЛФ, метанол 1.1) [а] о - 18 0 (вода)

Посторонние примеси ТСХ: 50мкг, "Silufol UV-254", циклогексан — ацетонитрил (6*4), одно с Rf «0,8 ТСХ. 30 мкг, "БйиМ ЦУ-254", Хлф-МеОН-Н20 (26 14 3), одно пятно с Кг »0,4 ТСХ- 25 мкг, "Silufol UV-254", Хлф-Ме0Н-Н20 (26 14.3) одно пятно с Rf »0,42

Потеря в массе при высушивании не должна превышать 1,0 % не должна превышать 1,0% не должна превышать 5,0 %

2 Изучение химического состава растительного сырья и разработка спосо-

бов получения стандартных образцов веществ Фенилпропаноидной структуры 2.1 Б'йуЬит тапапит (Ь.) СаеНп.

При препаративном хроматографическом разделении этанольного экстракта из плодов расторопши пятнистой (нативных и обезжиренных в ходе производства жирного масла хладоном-12 или методом холодного прессования) с использованием колоночной адсорбционной хроматографии на силикагеле и с последующим ре-хроматографированием на полиамиде выделены доминирующие флаволигнаньг си-

либин, 2,3-дегидросилибин, силидианин, силикристин

Рисунок 3 - Схема выделения флаволигнанов расторопши и получения ГСО силибина

Предложен способ выделения ГСО силибина, позволяющий достигнуть выход до 75 %, а также выделить и очистить 2,3-дегидросилибин, силидианин и силикри-стин (рис 3)

ГСО силибин представляет собой белые кристаллы, С25Н22О10 (М+ 482), Т пл. 164-166 °С, [а]и + 10,8 (ацетон), УФ-спектр. Л^ 288, 325 (пл) нм

ОН О ССН5

1ХО сшибки

-тр-. «

т-п-

М

т

Рисунок 4 - 'Н-ЯМР спектр ГСО силибина в с!-ацетоне 'Н-ЯМР-спектр силибина в дейтероацетоне при 50 0 (200 МГц)- 11,70 (с, 5-ОН), 6,8-7,2 (м, бН-Аг), 5,96 (д, 2Н, 2 Гц, Н-6,8), 5,10 (д, 12 Гц, Н-2), 5,00 (д, 8 Гц, НА), 4,60 (д, 12 Гц, Н-3), 4,1-4,2 (м, Нв), 3,3-3,8 (м, Нси Нв), 3,85 (с, ЗН, СНэО) (рис 4)

Результаты изучения некоторых показателей качества, вошедших в ВФС 423383-99, а после, в уточненной редакции, в ФС 42-0072-01 «Силибин - стандартный образец», представлены в табл 2

Наработанные по предложенной схеме получения (рис 3) образцы ГСО силибина, отвечающие нормативным требованиям, использовались нами для решения проблемы химической стандартизации сырья и лекарственных препаратов расто-ропши пятнистой «Качественные реакции» (подлинность) - ТСХ-анализ в предложенных условиях и характерный УФ-спектр (рис 2), «Количественное определение» - прямое спектрофотометрическое определение при 289 нм суммы флаволиг-

нанов (для настойки и экстракта жидкого расторопши) или суммы флавоноидов (для комплексного препарата «Силибохол») в пересчете на силибин

По предложенной схеме (рис 3) из указанных образцов сырья выделены доминирующие флаволигнаны силибин, силидианин и силикристин, а также 2,3-дегидросилибин, который впервые описан для расторопши пятнистой, культивируемый в России и странах СНГ Ранее данное соединение выделялось из плодов расторопши пятнистой индийскими учеными (Bandopadhyay et al, 1972), а потом было получено путем дегидрирования природного силибина японскими и немецкими учеными (Takemoto et al, 1975 Wagner et al, 1976).

_L

.Ji.

T

I 3

1 PPH

Рисунок 5 - 'Н-ЯМР спектр 2,3 - дегидросилибина в с1- ацетоне 'Н-ЯМР-спектр в дейтероацетоне (200 МГц) 12,15 (с, 5-ОН), 9,74 (уш с, 7-ОН), 7,87 (д, 2,1 Гц, Н-21), 7,17 (дд, 8,3 и 2,1 Гц, Н-61), 7,8-6,9 (м, 4Н-Аг), 6,60 (д, 2,1 Гц, Н-8), 6,28 (д, 2,1 Гц, Н-6), 5,06 (д, 8,06 Гц, На), 4,24 (м, Нв), 3,88 (с, ЗН, СНзО), 3,80 (дд, 12,5 и 3,5 Гц, Не), 3,55 (дд, 12,5 и 4,3 и Гц, Нп) (рис. 5)

Выделение данного соединения имеет важное практическое значение, поскольку при сравнительном исследовании антиоксидантных свойств индивидуальных соединений - производных фенилпропаноидов на модели острого токсического гепатита, вызванного тетрахлорметаном, было подтверждено не только наличие гепато-

протекторной активности, характерной для всех флаволигнанов, но и установлена наибольшая антиокислительная активность у 2,3-дегидросилибина (превосходит силибин по влиянию на уровень накопления МДА на 14 %) Это показывает целесообразность пересмотра подходов по извлечению очищенной суммы трех доминирующих флаволигнанов - силимариновой смеси (силибин, силидианин, силикри-стин) Доказательством тому служит выявленная высокая гепатопротекторная активность «Расторопши экстракта жидкого» и «Расторопши настойки», содержащих весь природный комплекс соединений флаволигнановой природы, превосходящая таковую у очищенной суммы флаволигнанов (силибинин) Данное обстоятельство помимо вклада 2,3-дегидросилибина, по всей видимости, можно связать и с сона-правленным (синергетйческим) действием компонентов всего нативного комплекса соединений фенольной природы (флаволигнаны + флавоноиды) В то же время интересной представляется и перспектива создания водорастворимых лекарственных форм (в т ч. для инъекций) на основе 2,3-дегидросилибина и других индивидуальных флаволигнанов

С целью развития направления по комплексной переработке сырья (заготовлено на промышленных плантациях специализированного государственного унитарного предприятия «Сергиевский», Самарская обл) в настоящей работе в сравнительном аспекте изучены образцы нативного и обезжиренного сырья методом холодного прессования (ЗАО «Самаралектравы», п Антоновка, Самарская обл) и экстракционным методом (ЗАО «Золотой корень», г Самара).

Оценка содержания флаволигнанов в видах сырья, а также в полученных из них экстракционных (галеновых) препаратах «Расторопши экстракт жидкий» и «Расторопши настойка» проведена с использованием ранее разработанных для нативных плодов методик качественного анализа с использованием ТСХ и характерного УФ-спектра и количественного определения флаволигнанов методом ВЭЖХ-анализа

(относительная ошибка среднего результата (£) в 11 независимых определениях составляет 3,87 % при доверительной вероятности 95 % здесь и далее) и спектрофо-

тометрии (е 5,18 %)

Установлено, что шрот и жом плодов имеют ряд преимуществ перед необезжи-ренным сырьем более высокое содержание флаволигнанов, а также большие сроки хранения (минимизирован процесс прогоркания жирного масла), меньшая загрязненность аппаратов Самое высокое содержание флаволигнанов определено при использовании оптимального экстрагента (80 % спирт этиловый) в извлечениях из сырья, обезжиренного методом экстракции хладоном-12 (табл 3)

Таблица 3 - Анализ нативных и обезжиренных плодов расторошпи

Сырье Содержание суммы флаволигнанов (спектрофотометрия),% Содержание флаволигнанов (ВЭЖХ), %

Плоды нативные 2,62 сили- силиди- силикри-бин анин стин

0,64 0,38 1,24 2=2,26

Плоды обезжиренные (метод холод прессования) 2,71 0,67 0,40 1,25 1=2,32

Плоды обезжиренные (метод экстракционный) 2,82 0,71 0,42 1,27 £=2,40

Определены нижние пределы содержания суммы флаволигнанов для необез-жиренных цельных и измельченных плодов не менее 2,4 %, для обезжиренных измельченных плодов не менее 2,6 % и заложены нами в ВФС 42-3380-99 «Плоды расторопши пятнистой» для нативных плодов и в проект ФС «Расторопши пятнистой плоды», распространяющийся на цельные и измельченные (включая порошок) нативные и обезжиренные плоды Соответствие содержания флаволигнанов данным параметрам позволяет использовать все исследуемые виды ЛРС для производства предложенных лекарственных препаратов

2.2 Rhodiola species

В ходе ранее проведенных исследований было показано, что наряду с салидро-зидом и его агликоном тирозолом определяющий вклад в обсуждаемый спектр активности лекарственных препаратов р розовой (золотой корень) вносит доминирующий фенилпропаноид растения - розавин, который был предложен в качестве ГСО для анализа сырья и «Настойки родиолы розовой» (ВФС 42-3435-99)

Розавин по химической структуре является циннамил-0-(6-O-a-L-арабинопиранозил)-Р-В-глюкопиранозидом, представляет собой белые кристаллы, C20H2gOi0, Тпл 171-173 °С, УФ-спектр- 252 нм. Спектр ПМР в d-пиридине (м д ) 7 2-7 4 (м, 5 Аг-Н), 6 82 (д, 16 Гц, Не), 6.5 (дг, 6 и 16 Гц, Нв), 4 94 (д, 7 Гц, Н-Г), 4 87 (д, 6 Гц, H-l"), 4 66-4 98 (м, 2НА), 3 95-4 55 (м, ЮН Сахаров), 3 7 (кв, 2 и 13 Гц, Н-5"е) (рис 6)

SA>-U OH OH

1 H"e Н-Г I

1 н-в, L 1 H-iZ i

и i Щ JU i ...................

........i.........i.........i.........i.........! .........41.........i.........i-........im......

.__ '

Рисунок 6 - Н-ЯМР-спектр розавина в ¿-пиридине На этапе изучения физико-химических свойств розавина нами были исследованы спектральные свойства, хроматографическое поведение, установлены температуры отщепления кристаллизационной воды, плавления, окисления, разложения Эти и другие уточненные показатели качества вошли в ФС 42-0071-01 «Розавин -стандартный образец» (табл 2)

Образцы ГСО розавина, полученные нами в соответствии с авторским свидетельством на способ получения розавина (А с 1168254 11 (СССР) были использованы для стандартизации сырья дикорастущих и культивируемых растений и фитопрепаратов р розовой Практическим выходом данного направления послужила разработка проекта ФС «Родиолы розовой корневища и корни» и ВФС 42-3334-99 "Родиолы розовой настойка", в которые включены методика качественного ТСХ-анализа и методики количественного хроматоспектрофотометрического определения розавина (в 7,4%) при длине волны 252 нм (рис 2) и ВЭЖХ-анализа (£ 5,3%)

С целью поиска новых сырьевых источников для получения лекарственных препаратов аналогичных р. розовой и расширения сырьевой базы растений рода Юю<11о1а Ь проведено сравнительное исследование химического состава корневищ и корней р розовой с сырьем некоторых других видов р линейнолистной (.ШоЛо1а Ьпеап/оЬа Вопвв ), интродуцированной в Санкт-Петербург, и р иремельской (Юг ¡гетеЬса Вогаз), интродуцированной в Башкирии, и дикорастущих экземпляров При этом был сделан акцент на изучении химического состава сырья, хемотакса-ции, и в особенности, - на обнаружение циннамилгликозидов, в частности - розавина, как соединения в основном, на наш взгляд, обусловливающего широкий спектр активности лекарственных препаратов р розовой Установлено, что розавин, доминирующий в р розовой, и другие циннамилгликозиды в следовых количествах содержатся только в дикорастущих образцах р иремельской, тогда как для всех изученных образцов характерно содержание фенилэтаноидных соединений Данный факт объясняет и литературные данные по нейротропной активности спирто-водных извлечений изучаемых видов родиолы В результате наших исследований для р. линейнолистной и р иремельской подтвержден только тонизирующий спектр активности Салидрозид и тирозол, содержащиеся в значительных количествах во всех изучаемых видах, вносят свой вклад в стимулирующие свойства извлечений из них, тогда как только лекарственные препараты родиолы розовой (изучены экстракт и настойка) обладают анксиолитической, актопротекторной, антидепрессивной, це-ребропротекторной активностью и другими ценными свойствами

2.3 Syrmga vulgaris L.

В ходе фотохимических исследований было установлено, что в коре сирени обыкновенной, произрастающей на территории Поволжского региона, компонентный состав аналогичен таковому для ранее исследованных образцов сырья, заготовленных в Московской области Оптимизирован способ получения ГСО сирингина (А с 1522480 (СССР), предложенного для оценки качества сырья и лекарственных препаратов элеутерококка колючего и коры сирени

Измельченная кора сирени обыкновенной после экстракции этанолом

Экстракция , ,80%F.tQH(t)

Извлечение, содержащее целевой продукт - сирингин

Упаривание

Колонка № 1 (силикагель, ХЛФ ЕЮН или ХЛФ МеОН)

Элюирование

Фракции, содержащие сирингин (ХЛФ ЕЮН 91 9 или ХЛФ МеОН 92 8)

Упаривание

Кристаллизация

Технический сирингин Растворение в H?Q ft\

Фильтрация

Стеклянный фильтр со слоем полиамида

Рисунок 7 - Схема получения ГСО сирингина ГСО сирингин представляет собой игольчатые кристаллы белого цвета, С17Н24О9, Т пл 190- 192 °С, УФ-спектр Хтт 266 нм 'Н-ЯМР спектр сирингина в

дейтеропиридине (100 МГц, м д )• 6 88 (д,16 Гц, Н-7), 6 86 (с, Н-2,6), 6 60 (дг, 6 и 16 Гц. Н-8), 6 65 (д,7 Гц, Н-1'), 4 1-4 7 (м, 2Н-9 + 6Н глюкозы), 3 76 (с, 6Н, 2 СНэО) (рис 8)

Рисунок 8 - 'Н-ЯМР спектр сирингина в пиридине

Результаты изучения физико-химических констант сирингина, характеризующих данный стандарт с позиций подлинности, чистоты и других параметров, ранее были использованы при разработке ВФС 42-2088-92

С использованием полученных серий стандартного образца разработаны методики анализа нового тонизирующего и адаптогенного препарата «Сирени настойка», а также пересмотрены разделы «Качественный анализ» и «Количественное определение» для проекта ФС «Сирени кора», принятого к рассмотрению в Научном центре экспертизы и государственного контроля лекарственных средств для включения в XII издание Российской Государственной фармакопеи При этом для качественной оценки сырья и лекарственного препарата предложено обнаружение сирингина методом ТСХ-анализа при облучении УФ-светом при 254 нм и обработке хроматограммы 16 % раствором кислоты серной, а количественный анализ предусматривает определение содержания сирингина методами ВЭЖХ (8 3,36 %) или

хроматоспектрофотометрии при 266 нм (8 4,25 %) с использованием в обоих случаях ГСО сирингина (рис 2)

2.4 Echinacea purpurea (L.) Moench.

В результате фотохимического изучения травы эхинацеи пурпурной выделены и идентифицированы 4 индивидуальных фенилпропаноидных соединения кофейная кислота, цикориевая кислота (2,3-дикофеилвинная кислота), феруловая кислота, эхинакозид Для цикориевой кислоты, представляющей наибольший интерес в плане стандартизации сырья и лекарственных препаратов эхинацеи пурпурной, разработаны оптимальные условия хроматографического обнаружения и идентификации, а также изучены возможности ее применения в качестве РСО в анализе сырья и лекарственных препаратов «Эхинацеи настойка» и «Эхинацеи экстракт жидкий» Предложен способ получения стандартного образца цикориевой кислоты с выходом 60 % (рис 9)

Соединение представляет собой аморфное вещество, С22Н18012, УФ-спектр 280 пл, Хшах 330 нм (рис 1), [ ос ]D25 + 374° (МеОН) 'Н-ЛМР-спектр в d-метаноле (100 МГц, м д ) 7 53 (дд, 16 Гц, 2Н-7',7"), 7 03 (дд, 2Н-2',2"), 6 86 (дд, 1 7 и 8 2 Гц, 2Н-6',6"), 6 75 (дд, 8,2 Гц, 2Н-5',5"), 6 23 (дд, 15,9 Гц, 2Н-8',8"), 5,63 (уш с, 2Н-2,3) (рис 9)

Полученные по предлагаемой схеме (рис. 10) образцы цикориевой кислоты в качестве PCO были использованы при разработке методов анализа травы эхинацеи пурпурной, результатом чего явились наши предложения по внесению изменений в

разделы «Качественные реакции» и «Количественное определение» действующей НД и решение проблемы стандартизации экстракционных препаратов эхинацеи настойки и экстракта жидкого. Качественный анализ предусматривает ТСХ- обнаружение цикориевой кислоты, количественный анализ - прямое спектрофотометриче-ское определение суммы гидроксикоричных кислот в пересчете на цикориевую кислоту по удельному показателю поглощения =782) при 330 нм (е 4,22 %)

Рисунок 10 - Схема получения РСО цикориевой кислоты

2.5 Melissa officinalis L.

При изучении химического состава сырья мелиссы лекарственной ранее были выделены и идентифицированы фенилпропаноиды розмариновая кислота и ее этиловый эфир, а также кофейная кислота, в последующем хлорогеновая кислота, впервые описанная для растений, произрастающих на территории СНГ Результаты фотохимических исследований нашли применение при разработке методов анализа ЛРС и лекарственных препаратов мелиссы При этом предложено стандартизацию проводить не только по эфирному маслу (в соответствии с требованиями DAB 10 и 11) или экстрактивным веществам (ФС 42-3645-98), но и по содержанию фенилпро-паноидов и, в частности, по доминирующей в траве розмариновой кислоте (рис 11)

Соединение представляет собой светло-желтое аморфное вещество, Ci8H1606, УФ-спектр Кж 235, 242, 299 пл, 327 нм 'Н-ЯМР-спектр в d-ацетоне- 7 43 (д, 15 9 Гц, Н-7), 7 02 (д, 1.7 Гц, Н-2), 6 92 (дд, 1 7 и 8 2 Гц, Н-6), 6 77 (д, 8.2 Гц Н-5), 6 73 (д, 1 8 Гц, Н-2'), 6.66 (д, 8 06 Гц, Н-5'), 6 57 (дц, 1 8 и 8 06 Гц, Н-6'), 6 19 (д, 15 9 Гц Н-8), 5 04 (кв, 4 и 8 6 Гц, Н-8'), 2,95 (т, 8 6 Гц, Н-7')

Оптимизирован способ получения розмариновой кислоты - стандарта с выходом 70 % Полученные по предлагаемой схеме (рис. 12) образцы розмариновой кислоты в качестве PCO были использованы при разработке методов анализа сырья -травы м лекарственной, результатом чего явились наши предложения по внесению

изменений по разделам «Качественные реакции» и «Количественное определение» в действующую нормативную документацию ФС 42-3645-98, и решении проблемы стандартизации настойки и экстракта жидкого Во всех указанных случаях в соответствии с принципом унификации методик для качественной оценки используется ТСХ-обнаружение розмариновой кислоты, а количественное определение предусматривает спектрофотометрическое определение (в 5,20 %) суммы гидроксико-ричных кислот в пересчете на розмариновую кислоту (рис 1) при 326 нм (Е{* =500)

Элюирование

Элюирование , ^ХЛФ'МеОН, 90 10, 88 12

Фракции, обогащенные розмариновой кислотой

Упаривание

Техническая розмариновая кислота Растворение в Н2С^ |

Колонка № 3 (сефадекс Ш-20, Н20)

Фильтрату Упаривание

Рисунок 12 - Схема получения РСО розмариновой кислоты

3 Разработка способов получения и стандартизация

лекарственных препаратов на основе Фенилпропаноидов

С позиций рассмотрения фенилпропаноидов и их производных в качестве целевой группы БАС были приготовлены образцы настоек и экстрактов жидких из изучаемых видов JIPC. Оптимальные технологические параметры установлены при варьировании концентраций экстрагента - водного этанола, измельченности сырья, времени настаивания или перколирования с использованием различных методов мацерации, дробной мацерации (бисмацерации), дробной мацерации и ремацерации с делением сырья на равные части, перколяции, реперколяции как в их традиционном лабораторном исполнении, так и в модифицированных вариантах (включение стадии термической экстракции) Разработанные варианты модификации методов ремацерации (для настоек) и реперколяции (для экстракта расторопши жидкого), заключающиеся в комбинации с термическим настаиванием или перколированием, при сравнении с традиционными схемами получения, показали преимущества новых подходов по критерию - эффективность экстракции для разработанных схем она составила 75-85 % (у традиционных схем - 60-70 %) При этом рекомендуемая температура для всех видов сырья. 60 °С в производственных условиях, 70 °С в лабораторных условиях (нагрев на кипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 0,5 ч)

Приведенные результаты анализа по показателю содержания БАС с использованием разработанных методик в настойках и экстрактах (табл 4), подтверждают целесообразность использования температурного фактора для получения продукции высокого качества, стабильной при хранении

Наряду с оценкой содержания БАС в фитопрепаратах стандартизация проводилась и по другим показателям на соответствие требованиям ГФ XI, вып 2, стр 148 (для настоек) и требованиям ГФ XI, вып 2, стр 160 (для экстрактов) Показана их стабильность при хранении, установлены сроки годности 2 года для всех разработанных лекарственных препаратов

Все разработанные способы получения настоек и экстрактов защищены патентами РФ на изобретение и были использованы при разработке лабораторных регла-

ментов на получение новых фитопрепаратов, а также были положены в основу проектов соответствующих опытно-промышленных регламентов

Таблица 4 - Содержание БАС в образцах разработанных

лекарственных препаратов, полученных различными методами

Препарат Методы получения Содержание БАС, %

Расгоропши экстракт жидкий 1 1 Сумма фла-волигнанов

Перколяция 1,33 ±0,05

Реперколяция по Чулкову 1,52 ±0,03

Модифицированная реперколяция с заменой термической стадии на нетермическую 1,55 ±0,03

Модифицированная реперколяция с включением заключительной термической стадии, предшествующей разгрузке перколятора (предложенная схема) 1,61 ±0,02

Силибохол Сумма флавоноидов

Реперколяция по Чулкову (просилибохол - 1) + мацерация (просилибохол—2) 1,53 ±0,02

Реперколяция по Чулкову (просилибохол - 1) + перколяция (просилибохол - 2) 1,58 ± 0,03

Предложенная схема' модифицированная реперколяция (просилибохол - 1) + модифицированная бисмацера-ция: вторая экстракция термическая (просилибохол - 2) 1,60 ±0,05

Родиолы розовой настойка 1 5 Розавин

Мацерация 0,18 ±0,02

Перколяция 0,22 ± 0,02

Дробная мацерация с делением сырья и экстрагента на равные части (без термической стадии) 0,23 ± 0,03

Модифицированная ремацерация с включением заключительной термической стадии (предложенная схема) 0,25 ± 0,03

Эхинацеи пурпурной настойка 1:5 Сумма фенил-пропаноидов

Мацерация 0,53 ± 0,02

Перколяция 0,58 ± 0,03

Модифицированная ремацерация с включением заключительной термической стадии (предложенная схема) 0,60 ±0,02

Мелиссы настойка 1:5 Сумма фенил-пропаноидов

Мацерация 0,43 ± 0,02

Перколяция 0,53 ±0,04

Модифицированная ремацерация с включением заключительной термической стадии (предложенная схема) 0,57 ±0,05

4 Обоснование использования разработанных лекарственных препаратов в

медицинской практике

В соответствии с Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (Москва, 2000,2005) изучена острая и хроническая токсичность и специфическая фармакологическая активность новых лекарственных препаратов на базе кафедры фармакологии (Лебедев А А, Дубищев А В), кафедры общей и клинической микробиологии, иммунологии и аллергологии (Жестков А В ) и иммунологического отдела ЦНИЛ СамГМУ (Лимарева Л В )

4.1 Исследование острой и хронической токсичности фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды

Результаты исследований, выполненные на 44 белых беспородных мышах и 36 крысах обоего пола, а также 48 крысах-самках линии ^К^аг, показали, что изучаемые лекарственные препараты относятся к группе малотоксичных веществ, не вызывают отсроченной гибели животных и нарушений жизненно важных функций организма. ЬБ50 для настоек родиолы розовой, эхинацеи, мелиссы составила 15000 мг/кг, для экстрактов расторопши, эхинацеи и комплексного препарата «Силибо-хол» - 20000 мг/кг Данные показатели и были использованы для расчета доз вводимых фитопрепаратов на этапе изучения специфической фармакологической активности

При изучении хронической токсичности животные (по 3 опытные группы на каждый лекарственный препарат, каждая их которых включала по 10 беспородных крыс-самок и 5 морских свинок-самок) находились под наблюдением 60 дней При этом никаких негативных сдвигов в картине крови, поведении, состоянии животных не отмечено

4.2 Изучение зависимости фармакологических эффектов от химической

структуры фенилпропаноидов

Зависимости «компонентный состав - фармакологическое действие» и «химическая структура - биологическая активность» разработанных фитопрепаратов и индивидуальных доминирующих фенилпропаноидов были изучены в трех основных направлениях антиоксидантная и гепатопротекторная активность, иммуномо-дулирующее действие и нейротропные свойства.

Таблица 5 - Сравнительное изучение фитопрепаратов и индивидуальных фенилпро-паноидов на некоторые параметры острого токсического поражения печени

тетрахлорметаном (М±т, п = 11 в каждой группе)

№ Группы Вариант опыта МДА нМ/мг белка сод АЕД/мг белка Катал аза нМ Н202/мг белка в сек

1. Крысы, получавшие ССЦ (контроль) 0,71+0,05 1,51+0,38 2,38+0,07

2 Крысы, получавшие легалон и ССЦ 0,48+0,03 р< 0,001 6,17+1,77 р < 0,02 10,77+0,38 р < 0,001

3 Крысы, получавшие экстракт расторопши и ССЦ 0,24+0,01 р < 0,001 7,55+0,48 р < 0,001 9,76+1,39 р < 0,001

4. Крысы, получавшие силибохол и ССЦ 0,29+0,01 р < 0,001 6,79+0,46 р < 0,02 8,62+1,34 р < 0,001

5 Крысы, получавшие силибин и ССЦ 0,34+0,03 р< 0,001 5,96+0,49 р < 0,001 8,86+0,82 р < 0,001

6. Крысы, получавшие 2,3-дегидросилибин и ССЦ 0,30+0,02 р < 0,001 6,05+0,48 р < 0,001 8,72+0,91 р < 0,001

7 Крысы, получавшие силидианин и ССЦ 0,36+0,02 р < 0,001 6,10+0,50 р < 0,05 8,54+0,76 р < 0,001

8 Крысы, получавшие силикристин и ССЦ 0,40+0,03 р < 0,001 6,14+0,47 р < 0,001 8,69+0,85 р < 0,001

9 Крысы, получавшие цикориевую кислоту и ССЦ 0,42±0,03 р< 0,001 2,33+0,21 р < 0,001 4,76+0,44 р < 0,001

10 Крысы, получавшие элеутерозид Б и ССЦ 0,45±0,04 р < 0,001 3,07+0,28 р < 0,05 4,46+0,39 р< 0,001

11 Крысы, получавшие сирингин и ССЦ 0,48±0,04 р < 0,05 3,18+0,30 р < 0,001 4,58+0,37 р < 0,05

12 Крысы, получавшие розмариновую кислоту и ССЦ 0,50+0,06 р < 0,005 2,46+0,15 р < 0,02 4,18+0,34 р < 0,005

13 Крысы, получавшие кофейную кислоту и ССЦ 0,51+0,07 р < 0,005 2,25+0,17 р < 0,001 4,61+0,42 р < 0,001

14 Крысы, получавшие розавин и ССЦ 0,56+0,07 р < 0,005 2,21+0,19 р< 0,001 4,37+0,38 р < 0,002

В частности, при изучении антиоксидантного действия фенилпропаноидов на модели токсического гепатита, вызванного тетрахлорметаном (табл 5), установлены преимущества в антиокислительных свойствах у соединений, содержащих наибольшее количество ароматических ОН- и ОСН3 - групп (доноров протонов), гли-козилирование и наличие спиртовой или карбоксильной группы в пропановом фрагменте достоверного значения не имели Для соединений флаволигнановой природы (силибин, силидианин, силикристин, 2,3-дегидросилибин) выявлена высокая активность по всему спектру антиоксидантных свойств, антиокислительное действие, активация ферментативного звена эндогенной антиоксидантной защиты на примере супероксиддисмутазы и каталазы, уменьшение накопления продуктов ПОЛ, малонового диальдегида Данное обстоятельство, на наш взгляд, связано с наличием сопряженной системы двойных связей (более длинная цепочка по сравнению с простыми фенилпропаноидами и лигнанами) и наличия карбонильной группы в флавоноидной составляющей молекулы Одним из доказательств тому служит выявленная высокая антиокислительная активность 2,3-дегидросилибина, превосходящая таковую у силибина Антиоксидантные свойства флаволигнанов является важной составляющей гепатопротекторного действия лекарственных препаратов расторопши пятнистой

В отношении иммунотропных свойств при изучении фагоцитарной активности нейтрофилов и макрофагов, клеточного (в варианте воспроизведения реакции гиперчувствительности замедленного типа) и гуморального (путем определения числа и функционирования антителообразующих клеток методом локального гемолиза) звена статистически значимых отличий в зависимости характера воздействия от структуры фенилпропаноида (коричные спирты или кислоты, простые или сложные фенилпропаноиды, гликозилирование и место гликозилирования и т д ) не выявлено Для всех изученных фитосубстанций отмечено наличие иммуномодулирующего влияния на клеточное и гуморальное звено иммунитета, фагоцитоз, лидером при этом среди изученных растений является эхинацея пурпурная (рис 13) , что, по всей видимости, связано с разнообразным представительством диеновых коньюгатов кофейной кислоты в сочетании с высоким содержанием полисахаридного комплекса (иммуностимулирующие свойства)

Рисунок 13 - Сравнительная оценка иммуномодулирующей активности фитопрепаратов на основе фенилпропаноидов и индивидуальных соединений

□ Фагоцитарная активность

/

.<г Л

УЛ

Ш Н/.ияии:' на клеточное звено

кммушггета (реакция ] З Г -индуктивная фаза)

□ В.': кнн не на

|туморалыюе звено

иммунитета (увеличение числа АОК)

Нейротропная активность разработанных лекарственных препаратов и индивидуальных вещсстз - фенилпропаноидов изучалась в следующих направлениях: определение гипногенной и антнгипногенной активности, ноотропной активности, влияние на физическую работоспособность и выносливость, на поведение животных в открытом пространстве, на показатели обучения, на формирование памяти, а также выявление ан к си о логических свойств и антидепрессивной активности. В частности показано (табл. 6), что наиболее перспективными в плане создания тонизирующих и адаптогенных средств являются растения, содержащие производные коричных спиртов (р. розовая, сирень обыкновенная, элеутерококк колючий и др.). Их гликозиды (цнннамилгликозиды) проявляют более выраженную биологическую активность по сравнению с соответствующими агликонами, а последние, в свою очередь, более активны, чем коричные кислоты и их производные, включая гликозили-рованные аналоги, для которых не характерны стимулирующие свойства.

Таблица 6 - Результаты изучения нейротропной активности некоторых фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды

Объект Анти-гипно-генное Тони-зи-рую-щее Актопротек-торное: работоспособность /выносливость Ориентировочно-исследоват реакция Цереб-ропро-тектор-ное Анксио лити-ческое Анти-депрес сивное

Родиола розовая +++ +++ +/+++ + мм- 1 1 1 1 +++

Эхинацея пурпурная 44- ++ +++/++ + + - -н-

Расторопша пятнистая 0 - -/0 - 0 - 0

Мелисса лекарственная - 0 0/0 0 0 +-Н- 0

Элеутерококк колючий ++ ++ +/++++ ++ ++ ++ ++++

Сирень обыкновенная ++++ ++ + +++ ++ ++

Лимонник китайский ++ ++ +++ 4+ + +

Ива корзиночная +++ + +++/-Н- 1 1 1 1 +++ 0 0

Примечание наличие и выраженность действия отмечены соответствующим количеством «+»; отсутствие действия обозначено знаком «О», противоположное действие обозначено знаком «-» Таким образом, результаты диссертационных исследований являются научно-методологической основой рационального использования лекарственных растений, содержащих в качестве основной группы БАС фенилпропаноиды, открывают новые пути в целенаправленном поиске перспективных сырьевых источников для создания отечественных импортозамещающих фитопрепаратов с гепатопротекторными и иммуномодулирующими свойствами. Внедрение их в медицинскую практику позволит расширить возможности лечебно-профилактических мероприятий по поводу целого ряда заболеваний, характеризующихся нарушениями со стороны антиокси-дантной защиты и иммунной системы

39

ВЫВОДЫ

1 На основании изучения структуры, физико-химических и химических свойств, характера фармакологической активности расширен спектр представлений о фе-нилпропаноидах и доказана целесообразность выделения их в самостоятельный класс природных биологически активных соединений

2 Теоретически и экспериментально обосновано изучение и использование пяти видов лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды, как перспективных сырьевых источников для получения гепатопротекторных и иммуномодули-рующих препаратов

3 Фенилпропаноиды рассмотрены как ведущая и анализируемая группа соединений для ЛРС и экстракционных (галеновых) препаратов расторопши пятнистой, родиолы розовой, эхинацеи пурпурной, сирени обыкновенной и как анализируемая группа - для мелиссы лекарственной, что позволило обосновать выбор аналитических методов при стандартизации ЛРС и фитопрепаратов, предложить новые или усовершенствовать имеющиеся подходы к стандартизации с позиции унификации методик анализа.

4 Разработаны методики качественного и количественного анализа фенилпропаноидов в изучаемых объектах оценку доброкачественности сырья родиолы розовой и сирени обыкновенной предложено проводить по содержанию доминирующих циннамилгликозидов розавина и сирингина методами хроматоспектрофо-тометрии (при доверительной вероятности 95 % 8 7,40 % - р розовая, 8 4,25 %

- с обыкновенная) и ВЭЖХ-анализа (8 5 30 % - р розовая, 8 3,36 % - с обыкновенная), содержание флаволигнанов в плодах расторопши пятнистой устанавливается в варианте прямой спектрофотометрии в пересчете на силибин (8 5,18 %) или методом ВЭЖХ-анализа (8 3,87 %), сырье эхинацеи пурпурной и мелиссы лекарственной анализируется путем прямого спектрофотометрического определения суммы гидроксикоричных кислот в пересчете соответственно на цикорие-риевую (8 4,22 %) или розмариновую кислоту (8 5,20 %) с использованием Е|*.

5 Выявлены доминирующие и диагностические БАС в изученных видах ЛРС, что явилось основанием для использования некоторых из охарактеризованных соединений в качестве веществ - стандартов в анализе сырья и лекарственных пре-

паратов расторопши пятнистой (ГСО силибин), родиолы розовой (ГСО розавин), сирени обыкновенной и элеутерококка колючего (ГСО сирингин), мелиссы лекарственной (PCO розмариновая кислота), эхинацеи пурпурной (PCO цикорие-вая кислота)

6 Разработаны подходы к способам выделения и очистки ГСО фенилпротаноид-ной природы (силибин, розавин, сирингин), основанные на сочетании экстракционных методов и адсорбционной колоночной хроматографии на полиамиде и силикагеле с последующей кристаллизацией и перекристаллизацией, что обеспечивает 75 % - 85 % выход и 99,5 % содержание индивидуального вещества.

7 Проведено сравнительное изучение физико-химических свойств и выработаны единые принципы к разработке показателей качества веществ-стандартов фе-нилпропаноидной природы и их оценке, что нашло отражение в нормативной документации на ГСО силибин, розавин, сирингин.

8 Экспериментально обоснована рациональная технология получения экстракционных (галеновых) препаратов на основе изученных видов ЛРС с позиции рассмотрения фенилпропаноидов в качестве целевой группы и предложено включение стадии термической экстракции при 60 °С -70 °С, обеспечивающей 80 % выход БАС, в результате чего разработаны оптимальные способы получения для «Расторопши экстракта жидкого» - метод модифицированной реперколяции, для «Эхинацеи пурпурной настойки», «Родиолы розовой настойки», «Мелиссы настойки» - метод модифицированной ремацерации с делением сырья на равные части

9 На основании результатов изучения антиоксидантных и иммуномодулирующих свойств новых фитопрепаратов и индивидуальных соединений фенилпропано-идной природы выявлены зависимости в ряду «компонентный состав - фармакологическое действие» и «химическая структура - биологическая активность». Установлено, что указанный спектр активности характерен для всех предложенных лекарственных препаратов и определяется содержанием соединений фенил-пропаноидной природы

10 Установлено, что наиболее выраженной гепатопротекторной активностью в отношении влияния на неферментативные и ферментативные звенья антиокси-

дантной защиты обладают флаволигианы расторошпи пятнистой, а наиболее значимое иммуномодулирующее действие в отношении клеточного и гуморального звена иммунитета характерно для фенилпропаноидов эхинацеи пурпурной

11 Выявлены различия по спектру стимулирующих, актопротекторных и анксио-литических свойств фенилпропаноидов выраженную тонизирующую активность проявляют лекарственные препараты, содержащие гликозиды коричных спиртов (родиола розовая, сирень обыкновенная, элеутерококк колючий и др), менее активны их агликоны, производные гидроксикоричных кислот (мелисса лекарственная) тонизирующей активностью не обладают

12 Включены в Государственный реестр лекарственных средств РФ (2004 г) вещества-стандарты силибин и розавин, разработаны и утверждены на Федеральном уровне четыре ВФС на плоды и экстракт расторопши, настойки родиолы розовой и эхинацеи пурпурной, включены в действующую НД предложенные изменения по качественной оценке сырья и экстракта жидкого родиолы розовой, приняты к рассмотрению в Научном центре экспертизы и государственного контроля лекарственных средств пять нормативных документов, касающихся изменений и дополнений к действующей НД на два вида ЛРС - на траву эхинацеи пурпурной и траву мелиссы лекарственной, а также три проекта ФС на сырье родиолы розовой, расторопши пятнистой, сирени обыкновенной

Список ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1 Термический анализ корневищ родиолы розовой // Фармация - 1992 - Т 41, № 1 - С 67-69 (соавт В А Куркин, Г Е Штер, А С Космынин)

2 Фотохимическое исследование лекарственных растений родов родиола, тополь, ива, расторопша, одуванчик, содержащих флавоновды // Современные аспекты изучения лекарственных растений Научные труды Всесоюз. НИИ фармации -Москва, 1995. - Т XXXTV - С 151-157 (соавт. В А Куркин, Г.Г Запесочная, В Б Браславский и др)

3 Химическое исследование травы Melissa officinalis // Химия природ соедин -1995 - № 2 - С. 318-320 (соавт В А. Куркин, Т В Куркина, Г Г Запесочная и др)

4. Количественное определение силибина и суммы флаволигнанов в плодах Silybum marianum (L ) Gaerta II Растительные ресурсы - 1996. - T 32, вып 3 - С 80-87 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, М Ф Сенцов и др )

5 Контроль качества экстракта расторопши жидкого // Фармацевтическая наука и практика в новых социально-экономических условиях. Научные труды Всесоюз. НИИ фармации - Москва, 1997 - Т XXXVI, ч.2 - С 88-95 (соавт В.А Куркин, Г Г Запесочная, М Ф Сенцов и др)

6 Новые препараты на основе плодов расторопши пятнистой // Международный журнал по иммунореабилитации - 1998 - N 8 - С. 12 (соавт В.А. Куркин, А А Лебедев, Г Г Запесочная и др).

7 Плоды расторопши пятнистой - перспективный источник антиоксидантов // V Международная конференция «Биоантиоксидант» Тезисы докладов — Москва, 1998 -С 53-54 (соавт В А Куркин, А А Лебедев, В В Косарев и др)

8 Иммуномодулирующее действие настойки эхинацеи пурпурной // 2-й Национальный конгресс Российской Ассоциации Аллергологов и Клинических Иммунологов «Современные проблемы аллергологии, клинической иммунологии и иммунофармакологии». Сборник трудов - Москва, 1998 - С 279 (соавт А В Жестков, В.В Косарев, В А Куркин и др)

9, Исследования по созданию иммуномодулирующего лекарственного средства на основе коры сирени // V Всероссийская научно-практическая конференция серии «Экология и здоровье человека» «Здоровый образ жизни - системный подход» Тезисы докладов - Самара, 1998 - С 119-121 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, Л А Онучакидр)

10 Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L ) Moench // Растительные ресурсы - 1998 - Т. 34. -Вып 2 - С 81-85 (соавт В.А Куркин, О И Авдеева, П Г Мизина)

11 Качественный и количественный анализ сырья и настойки Melissa officinalis L // Растительные ресурсы -1999 -Т 35 - Вып 3 - С 116-121 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, 3 В Болтабекова)

12.Фенилпропаноиды лекарственных растений создание и стандартизация фитопрепаратов // Химия, технология, медицина Труды Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений - Москва, 2000 - С 136-142 (соавт. Г Г Запесочная, В А Куркин)

13 Возможности использования фитопрепаратов, содержащих фенилпропаноиды, в качестве иммуномодуляторов // Межвузовская научно-практическая конферен-

ция, посвященная 85-летию высшего образования на Урале «Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования итоги и перспективы» Материалы конференции -Пермь,2001 -С 89-90

14 Перспективы создания иммуномодулирующих фитопрепаратов // Всероссийская конференция «Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики» Материалы конференции. - Курск, 2001.-С.191-192.

15 Эхинацея пурпурная — перспективный источник экопротекторов // VII Всероссийский конгресс «Экология и здоровье человека» Труды конгресса - Самара, 2001 —С 7-8 (соавт В А Куркин, А В Жесткое, Л В Лимарева)

16 Антиоксидантные свойства комплексного гепатопротекторного лекарственного препарата силибохол // Растительные ресурсы - 2001 - Т 37 - Вып. 2 - С 69-74 (соавт А А. Лебедев, Е А Батаков, В.А. Куркин и др )

17 Высокоэффективная жидкостная хроматография в анализе флаволигнанов плодов расторопши пятнистой // VIII Всероссийский симпозиум по молекулярной жидкостной хроматографии и капиллярному электрофорезу Тезисы докладов -М., 2001 - С 59 (соавт Р А Минахметов, Л А Онучак, В.А Куркин и др.)

18 Сирень обыкновенная - перспективный источник иммуномодулирующих и адаптогенных лекарственных средств // IV Международный симпозиум «Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования»: Труды симпозиума -Москва, 2001 -С 519-521 (соавт. В А Куркин, ГГ. Запесочная, ИЮ Климова и др ).

19 Иммунная система и иммунокорректоры (учебное пособие) - Самара ООО «Офорт», 2003 - 176 с (соавт В А. Куркин, Н.Л Акимова, В Н Ежков)

20 Фитохимические и технологические аспекты разработки комплексного гепатопротекторного средства «Силибохол» // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Специальный выпуск "Химия и химическая технология" - Самара, 2003 -С 149-154 (В А Куркин, Г Г. Запесочная, А В Волоцуева идр)

21.Фитохимическое изучение и химическая стандартизация сырья и препаратов эхинацеи пурпурной // Известия Самарского научного центра Российской академии наук Специальный выпуск "Химия и химическая технология" - Самара, 2003 -С 124-127

22 Влияние антиоксидантов растительного происхождения на иммунную систему человека // IX Всероссийский Конгресс «Экология и здоровье человека» Материалы конгресса. - Самара, 2004. - С. 159-163 (соавт. В А Куркин, Г Г Запесочная, И Ю. Климова)

23 Фенилпропаноиды как биологически активные соединения и Стандартные образцы лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов // II Всероссийский съезд фармацевтических работников- Материалы съезда - Сочи, 2005 - С 93-95 (соавт В А. Куркин, Г Г Запесочная, В Н Ежков)

24 Фенилпропаноиды лекарственных растений (монография) - Самара ООО «Офорт», 2005 - 120 с (соавт В.А. Куркин, Г Г Запесочная, В Н Ежков)

25 Гепатопротекторные свойства фенилпропаноидов и их производных // X Всероссийский Конгресс «Экология и здоровье человека» Материалы конгресса - Самара, 2005 -С 89-96.

26 Разработка государственных стандартных образцов веществ фенилпропаноидной природы // Медицинский вестник Башкортостана - Уфа, 2006. - № 1, Т 4 - С 143-146 (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная)

27 Разработка технологии получения и методов стандартизации галеновых препаратов на основе плодов расторогапи пятнистой (обзор) // Фармация — 2006 - № 6 -С. 43-45

28 Стандартизация некоторых видов лекарственного растительного сырья и препаратов, содержащих коричные кислоты // Всероссийская научно-практическая конференция, посвященная 100-летию со дня рождения проф. Л.Н Березнегов-ской «Новые достижения в создании лекарственных средств растительного происхождения» Материалы конференции - Томск, 2006 - С. 207-211 (соавт В.А Куркин, Г Г Запесочная)

29 Разработка фитопрепаратов - адаптогенов на основе фенилпропаноидов с позиций выявления зависимости «структура соединения — нейротропный эффект» // XI Всероссийский Конгресс «Экология и здоровье человека»: Материалы конгресса -Самара, 2006 - С 7-12 (соавт В А. Куркин).

30 Разработка способов получения и стандартизация галеновых препаратов на основе фенилпропаноидов // Ш Всероссийская конференция «Новые достижения в химии и химической технологии растительного сырья». Сборник материалов (в 3 кн ) - Барнаул, 2007 - Кн 2 - С 240-244

31 Иммуномодулирующие фитопрепараты спрос и предложение // Ремедиум, 2007 - № 3 - С 26-28 (соавт В.А Куркин)

32 Патент РФ № 2102999 на изобретение «Способ получения экстракта растороп-ши пятнистой» А 61 К 35/78 Бюл № 3 от 27 01 98 г (соавт В А Куркин, А А Лебедев, Г Г Запесочная и др)

33 Патент РФ № 2129873 на изобретение «Способ получения масла расторопши пятнистой, обладающего ранозаживляющей активностью» А61К35/78 С11В 1/10 Бюл № 13 от 10 07 99 г (соавт. Е В Ахтемиров, В А. Куркин, А А Лебедев, идр)

34 Патент РФ № 2133620 на изобретение «Способ получения средства, обладающего иммуномодулирующей активностью». А 61 К 35/78. Бюл. № 21 от 27.07 99 г (соавт В А Куркин, Г Г Запесочная, Г. А Маковецкая и др )

35 Патент РФ № 2134584 на изобретение «Способ получения иммуномодулирую-щего препарата «Настойка эхинацеи пурпурной». А 61 К 35/78 Бюл № 23 от 20 08.99 г (соавтв В А. Куркин, В В. Косарев, О.И Авдеева и др )

36 Патент РФ № 2139722 на изобретение «Средство "Силибохол" для лечения гепатитов и способ его получения» А 61 К 35/78 Бюл № 29 от 20 10.99 г. (соавт В А Куркин, А А Лебедев, Г Г Запесочная)

37 Патент РФ № 2139724 на изобретение «Способ получения экстракта из обезжиренных плодов расторопши пятнистой» А 61 К 35/78 Бюл № 29 от 20.10 99 г (соавт В.А Куркин, А А Лебедев, Г Г. Запесочная и др.).

38 Патент РФ № 2155054 на изобретение «Лекарственный сбор для лечения пиелонефрита» А 61 К 35/78 Бюл. № 24 от 27 08 2000 г (соавт. В.А Куркин, Г А Маковецкая, Е С Гасилинаидр)

39 Патент РФ № 2155071 на изобретение «Способ получения лекарственной фотопленки» А 61 К 35/78. Бюл № 24 от 27.08 2000 г (соавт П Г Мизина, В А Кур-кин, В В Косарев и др)

40 Патент РФ № 2102999 на изобретение «Способ лечения заболеваний печени и желчевыводящих путей» А 61 К 35/78 Бюл № 21 от 27 07 2002 г (совт JI.JI Попова, А А Суздальцев, В А Куркин и др)

41 Патент РФ № 2209063 на изобретение «Способ получения вещества, обладающего антиоксидантным действием» А 61 К 35/78. Бюл № 21 от 27 07 2003 г (соавт В А Куркин, А А Лебедев, Г.Г Запесочная и др)

42 Phenylpropanoids of some medicinal plants // Second International symposium on the chemistry of natural compaund Abstracts of SCNC - Turkey, 1996 -P 319 (соавт

V A Kurkm, G G Zapesochnaya и др)

43 The study of immunotropic activity of the Echinacea purpurea tincture's // Archives of Pharmacology Abstracts of ХШ International Congress of Pharmacology - Germany, 1998 - V 358. - N 1. - P 482 (соавт A V. Zhestkov, V V Kosarev, V A Kurkm и др )

44 The new possibilities of the use of Silybum marianum (L) Gaertn Fruits // XIX International Conference on Polyphenols «Polyphenols Communications 98» - Lille (France), 1998 -V 1 - P. 29-30 (соавт. V A Kurkin, A A Lebedev, GG Zapesochnaya и др.)

45 The comparative study of neurotropic activity of the some phenylpropanoids // Archives of Pharmacology Abstracts of ХШ4 International Congress of Pharmacology - Germany, 1998 -V 358 -N 1 - P 498 (соавт VA Kurkm, G G Zapesochnaya,

V N Ezhkov и др)

46.The immunotropic activity of "Tmctura Echmaceae purpureae" preparation // Allergy -Belgium, 1999 - S 52 - V 54 - P. 102 (соавт VV. Kosarev, AV Zhestkov,

V A Kurkm)

47 Polyphenols Melissa officinalis L И XXI International Conference on Polyphenols «Polyphenols communication 2002». - Morocco, 2002 - P 517-518 (соавт V A. Kurkin, G G Zapesochnaya, Z V. Boltabekova)

48 The new possibilities m the standardization of some medicinal plants containing the flavonoids // XXII International Conference on Polyphenols «Polyphenols communication 2004» - Helsinki, 2004 -P 621-622 (соавт VA Kurkin, GG Zapesochnaya, VB Braslavsky и др)

49 Phenylpropanoids of the medicinal plants are perspective sources of neurotropic phy-topreparations // ХХШ International Conference on Polyphenols - Canada, 2006 - P 53-54 (соавт VA Kurkin, A V Dubishchev, IN Titova и др)

50 Phytochemical and pharmacological investigation of the some medicinal plants containing the flavonoids // ХХ1П International Conference on Polyphenols - Canada, 2006.-P 513-514 (соавт VA Kurkm, A V Dubishchev, О L Kulagm и др)

Автор выражает глубокую благодарность доктору химических наук, профессору Гертруде Григорьевне Запесочной за постоянную, неоценимую помощь при выполнении и оформлении диссертации

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Подписано к печати « 5» Об 2007 г Формат 60x84/16 Бумага офсетная. Печать оперативная Уел печ л 2,0 Тираж 100 экз Заказ № 972

Отпечатано в типографии ООО «ОФОРТ» 443080, г Самара, ул Революционная, 70, литера П Тел 372-00-56,372-00-57

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ АКАДЕМИЯ ФЕДЕРАЛЬНОГО АГЕНТСТВА ПО ЗДРАВООХРАНЕНИЮ И СОЦИАЛЬНОМУ РАЗВИТИЮ» 357532, г. Пятигорск, пр Калинина, 11

ЛЕКАРСТВЕННЫЕ РАСТЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФЕНИЛПРОПАНОИДЫ, КАК ИСТОЧНИК ПОЛУЧЕНИЯ ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫХ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИХ ПРЕПАРАТОВ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Подписано к печати « 5» 06 2007 г Формат 60x84/16 Бумага офсетная Печать оперативная Уел печ л. 2,0 Тираж 100 экз. Заказ № 972

Отпечатано в типографии ООО «ОФОРТ» 443080, г Самара, ул Революционная, 70, литера П Тел 372-00-%, 372-00-57

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» 357532, г. Пятигорск, пр Калинина, 11