Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Антиаритмические свойства и токсикологическая характеристика функционально замещенных аминоамидов, аминоэфиров и аминоамидоэфиров гетероалифатического ряда

На правах рукописи

ВАСИЛЬЕВА Галина Анатольевна

АНТИАРИТМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ФУНКЦИОНАЛЬНО ЗАМЕЩЕННЫХ АМИНОАМИДОВ, АМИНОЭФИРОВ И АМИНОАМИДОЭФИРОВ ГЕТЕРОАЛИФАТИЧЕСКОГО РЯДА

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

5 л г> -5 УК?

МОСКВА-2012

005020206

005020206

Работа выполнена в ФГБУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс»

Минздравсоцразвития РФ

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук, профессор АРЗАМАСЦЕВ Евгений Вениаминович Официальные оппоненты:

ЯСНЕЦОВ Владимир Викторович, доктор медицинских наук, профессор, заведующий лабораторией экспериментальной и клинической фармакологии Федерального государственног бюджетного учреждения науки Государственный научный центр РФ - Институт медико биологических проблем РАН

СТАРОДУБЦЕВ Алексей Константинович, доктор медицинских наук, профессор, заместитель директора Центра клинической фармакологии ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздравсоцразвития РФ

Ведущая организация:

ГБОУ ВПО Российский национальный исследовательский медицинский университет имени Н.И. Пирогова Минздравсоцразвития РФ

Защита диссертации состоится «/£» Я 2012 г. на заседании Диссертационного совета

Д 208.040.13 при ГБОУ ВПО Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова Минздравсоцразвития РФ (119991, Москва, ул. М. Трубецкая, д. 8, стр. 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Первого Московского государственного медицинского университета имени И М. Сеченова (Москва, 117998, Нахимовский проспект, 49).

Автореферат разослан « К ^¿¿^у^п^- 2012 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета Д 208.040.13

Доктор медицинских наук, профессор АРХИПОВ Владимир Владимирович

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

ктуальность проблемы.

В настоящее время антиаригмнческая фармакотерапия является основным методом лечения арушений сердечного ритма в широкой медицинской практике (Фогорс Р.Н., 2009). Обзор ее овременного состояния показывает, что известные и широко применяемые в медицинской ракгике средства для профилактики и лечения нарушений сердечного ритма — хинидин, овокаинамид, пропранолол, амиодарон, соталол, верапамил и др., могут в определенных условиях казывать кардиотоксическое, проаритмогенное действие (Бобров В.А., Крупновицкая И.Г.,1991; ощицын В.Л.,1993; Алперт Дж.,Фрейсис Г., 1994). Возможность развития аритмогенного ффекта, по данным Сметнева А С. и соавт. (1993), г1рез (1988), Оог§е1ез А. е1 а1.(1992), составляет коло 10% для большинства антиаритмических средств и чаще встречается у больных с сердечной едостаточностью в стадии декомпенсации и нарушениями функции левого желудочка, т.е. в тех инических ситуациях, когда аритмии возникают наиболее часто и требуется незамедлительная тиаритмическая терапия.

Вместе с тем, несмотря на постоянно растущие возможности современной медицины, роблемы эффективного и безопасного лечения разнообразных нарушений сердечного ритма и егодня пока еще далеки от решения. Это свидетельствуют о необходимости создания препаратов с ниверсальными механизмами антиаритмического действия, обладающих при этом пецифической активностью в отношении конкретных видов аритмий (\Voosley К.Ь. е! а1., 1984; аверина Н.В., 1986; Машковский М.Д. и соавт., 1995). Возможности их профилактики и лечения граничены либо недостаточной эффективностью используемых препаратов, либо наличием у них яда нежелательных побочных эффектов (Голицын С.П., Савельев И.В., Бокалов С.А., 1998; ощицын В.Л., 1993,1999; Кушаковский М.С., 1998).

В настоящее время отличительными особенностями разработки и создания лекарственных •редств для профилактики и лечения нарушений сердечного ритма является широкое «пользование соединений различных химических классов, ранее не являвшихся традиционными для азработки антиаритмических препаратов (Яхонтов Л.Н., Либерман С.С.,1985; Толстиков Г.А., орисова Е.Я. и соавт., 1991; Кукес В.Г., Стародубцев А.К., 2003).

Одним из направлений дм разработки антиаритмиков нового поколения является синтез новых героалифатических функционально замещенных аминов (Борисова Е.Я., Г.А.Толстиков и соавт., 1991; Дородникова Е.В., 1992;. Афанасьева Е. Ю., Арзамасцев Е. В., Борисова Е. Я., 2007; елоусов Ю.Б., Кукес В.Г. и др., 2009). Изучение антиаритмических свойств, токсикологических арактеристик, взаимосвязи структура-активность и других особенностей впервые интезированных соединений данных классов химических веществ представляет несомненный аучный и практический интерес для современной клинической фармакологии и кардиологии.

Цели и задачи исследования. Целями настоящей работы являлось изучение антиаритмических свойств, фармакологическая и токсикологическая характеристика впервые синтезированных функционально замещенных аминоамидов, аминоэфиров и аминоамидоэфиров; выявление наиболее активных соединений, перспективных для разработки на их основе антиаритмических лекарственных средств.

Для достижения этих целей были поставлены следующие задачи:

- На модели аконитиновой аритмии у крыс провести первичную оценку антиаритмических свойств изучаемых веществ.

- Определить характер зависимости между химическим строением, токсичностью и антиаритмической активностью соединений.

- Отобрать наиболее эффективные и наименее токсичные соединения, перспективные для дальнейшего изучения.

- Исследовать особенности антиаритмического действия отобранных веществ на различных моделях нарушения сердечного ритма, изучить зависимость их эффектов от дозы и способов введения. Сравнить их активность с действием известных антиаритмических средств,

- Изучить фармакодинамику и провести первичную оценку токсичности и мутагенности наиболее активных соединений, перспективных для создания лекарственных средств и лечения нарушений сердечного ритма.

Научная новизна. Впервые проведено изучение антиаритмических свойств и токсичности 28 оригинальных функционально замещенных аминоамидов, аминоэфиров и аминоамидоэфиров. Получены данные о зависимости между химическим строением, антиаритмической активностью и токсичностью в ряду изучаемых соединений. Установлена роль различных групп и некоторых особенностей химического строения соединений в проявлении их антиаритмического действия и токсичности, что позволило провести направленный синтез веществ с выраженными антиаритмическими свойствами и низкой токсичностью.

Среди впервые синтезированных и изученных веществ выявлены соединения, обладающие высокой антиаритмической активностью, сравнимой, а в ряде случаев и превосходящей активность известных средств для профилактики и лечения нарушений сердечного ритма.

Выявлено 3 оригинальных соединения с условными шифрами Б-46, Б-50 и Б-104, которые имеют высокий антиаритмический индекс (АИ=ЛД5о/ЕД5о), превосходящий аналогичный показатель амиодарона на модели аконитиновой аритмии в 4 раза, и перспективных для создания на их основе лекарственных средств для профилактики и лечения нарушений сердечного ритма.

Выявленные активные вещества являются малотоксичными при однократном введении лабораторным животным, хорошо переносятся при повторном назначении, не обладают мутагенностью.

Научно-практическая ценность работы. Экспериментально показана возможность создания а основе выявленных активных соединений новых высоко эффективных лекарственных средств ля лечения нарушений сердечного ритма. В результате изучения зависимости «структура-ктивность» обоснована перспективность дальнейшего направлешюго синтеза соединений в казанном классе веществ с целью поиска и создания новых высокоэффективных и 1алотоксичных антиаритмических препаратов.

Результаты проведенных исследований расширяют представления о биологической активности казанных соединений, а установленные закономерности в свете проблемы «структура-ктивность» используются в Московском государственном университете тонких имических технологий им. М.В.Ломоносова для направленного синтеза новых биологически тивных веществ.

Отобршшые в результате фармакологических и токсикологических исследований соединения -46, Б-50 и Б-104, обладают выраженными антиаритмическими свойствами, высоким ггиаритмическим индексом и представляют большой практический интерес для разработки на х основе новых лекарственных средств для профилактики и лечения нарушений сердечного итма.

Апробация работы.

Основные положения диссертации были представлены и доложены на XV, XVII, XVIII оссийских национальных конгрессах «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2008г., 2010г., 011г.), на 2-ой Международной научно-практической конференции «Информация о екарственных средствах - качественному использованию лекарств», (Казань, 15-16 октября 010г.). Протокол апробации № 5 от 17 октября 2011г. в лаборатории лекарственной токсикологии ИИ экспериментальной кардиологии ФГБУ «Российский кардиологический научно-1роизводственный комплекс» Минздравсоцразвия РФ.

Личный вклад автора.

Автору принадлежит ведущая роль в выборе направления исследования, анализ и бобщение полученных результатов.

Вклад автора является определяющим и заключается в непосредственном участии на всех тапах исследования: от экспериментальных исследований на лабораторных животных новых первые синтезированных аминов до обсуждения и формулировки результатов в научных бликациях и докладах.

Полученные данные дают возможность рекомендовать изученные соединения для альнейшего исследования и разработки на их основе новых лекарственных препаратов для

применения в клинической практике.

Научные публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ. Из них: 4 статьи в журналах, рекомендованных ВАК России.

Положения, выносимые на защиту:

Функционально замещенные аминоамиды, аминоэфиры и аминоамидоэфиры являются оригинальными соединениями, обладающими выраженными антиаритмическими свойствами.

Характеристика программы скрининга антиаритмических средств, основанная на использовании аконитиновой модели аритмии у крыс, стандартных препаратов сравнения, предварительной токсикологической оценке изучаемых соединений и определении антиаритмических индексов.

Анализ установленных закономерностей между химическим строением, токсичностью и антиаритмической активностью изучаемых веществ.

Особенности антиаритмического действия наиболее активных соединений на различных моделях нарушения сердечного ритма у лабораторных животных.

Фармакологические свойства и токсикологическая характеристика отобранных соединений, перспективных для разработки на их основе новых эффективных и малотоксичных антиаритмических средств.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 161 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 5 глав с изложением проведенных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, научно-практических рекомендаций, списка литературы.

Библиография включает 260 литературных источников, из которых 164 отечественных и 96 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 19 рисунками и 36 таблицами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследований. Исследование антиаритмических свойств изучаемых соединений проведено в соответствии с методическими рекомендациями по экспериментальному (доклиническому) изучению препаратов, предлагаемых для клинических испытаний в качестве средств профилактики и лечения нарушений сердечного ритма (Каверина Н.В. и др., 2005).

Было исследовано 28 оригинальных соединений, являющихся функционально замещенными аминоамидами, аминоэфирами и аминоамидоэфирами, синтезированных на кафедре органической химии Московского государственного университета тонких химических технологий им. М.В.Ломоносова под руководством доктора химических наук, профессора Е.Я. Борисовой1. Строение этих соединений и их чистота контролировались ИК-, 'КЯМР -спектроскопией,

1 Выражаю глубокую благодарность д,.х.н., профессору Е.Я.Борисовой за предоставленные для исследований химические соединения и постоянные консультации при установлении зависимостей структура-токсичность, сгруктура-антиаритмическая активность.

1етодами химического и элементного анализов, методами хроматографии в тонком слое и азожидкостной.

Эксперименты проведены на 930 мышах линии BALB/c (самцы и самки, масса тела 18-22г), 760 рысах Wistar (самцы и самки, масса тела 180-240 г) и 34 кроликах Шиншилла (самцы и самки, асса тела 2,5-3,5кг). Животных получали из ГНЦ Биомедтехнологий РАМН. Они имели етеринарный сертификат качества и состояния здоровья. Подопытных животных содержали в -оответствии со стандартными требованиями, общепринятыми для доклинических исследований, се манипуляции, причиняющие животным боль, за исключением исследования показателей строй токсичности, проводили под наркозом (уретаи, в/брюшишю в дозе 850 мг/кг).

Для оценки перспективности и целесообразности разработки на основе исследуемых еществ было проведено изучение их эффективности на различных моделях аритмий в сравнении с пвестными антиаритмиками, зарегистрированными в России и широко применяющимися в инической практике: кордароном (амиодарон), «Sanofi-synthelabo» (Франция); обзиданом пропроналол), «ISIS PHARMA» (Германия); новокаинамидом (прокаинамид), «Органика» Россия); изоитшюм (верапамил), «Эбботт ГмбХ» (Германия); лидокашюм, <Мосхимфармпрепараты» (Россия).

Исследованию антиаритмических свойств оригинальных, впервые синтезированных соединений предшествовало изучение их острой токсичности при однократном в/б введении мышам (самцы и самки, масса тела 18-22г) с предварительным определением показателей ориентировочных ЛД50 методом Deichman, Le Blanc (1943) и последующим установлением точных показателей токсикометрии ЛДю, ЛД^, ЛД50 ± m и ЛД84 на группах мышей методом пробит-анализа по Литчфилду и Уилкоксону.

Для первичной оценки антиаритмических свойств соединений использовали аконитиновую модель аритмии у крыс, вызванную внутривенным введением наркотизированным уретаном (850мг/кг, в/б) крысам Wistar аконитина гидробромида в дозах 40,0 - 50,0 мкг/кг (с учетом сезонной чувствительности). Регистрацию нарушений сердечной деятельности и оценку антиаритмической активности изучаемых веществ проводили по ЭКГ. Запись осуществляли во II стандартном отведении с помощью электрокардиографа «ЭК1Т-ОЗМ2» (Россия), при скорости записи 25 мм/сек и калибровке 10 мм/мВ, на 1, 2, 5, 10, 15, 30 и далее каждые 15 минут в течение 120 минут после в/в введения препаратов и аконитина. Исследуемые соединения в дозах 1/10-1/100 от ЛД50(для мышей при в/б введении) и препараты сравнения вводили в/в за 5-7 мин до введения аконитина.

Эффективность антиаритмического действия изучаемых соединений оценивали по величине латентного периода, по продолжительности аритмии или ее предотвращешно. В дальнейшем антиаритмические свойства отобранных наиболее активных соединений изучали при различных

способах введения и дозах на моделях нарушения сердечного ритма, вызванных хлористым бармен в дозах 4мг/кг в/в (кроликам) и 25мг/кг (крысам), хлористым кальцием в дозах 200-220мг/кг в/ (крысам). При этом оценку эффективности антиаритмического действия изучаемых соединений препаратов сравнения проводили по антиаритмическому индексу (ЛД5о/ЕД5о) и индексу Шнейдера Брокка (ЛДш/ЕДто). Эффективные дозы (ЕД50, ЕД90) устанавливали методом пробит-анализа п Литчфилду и Уилкоксону.

Хлоридбариевую аритмию в опытах на интактных кроликах моделировали его медленным ( течение 20 сек) в/в введением в дозе 4 мг/кг. После возникновения аритмии на фоне введен аритмогена через 2 мин в/в вводили отобранные изучаемые соединения и препараты сравнения. По длительности аритмии и проценту животных, у которых восстанавливался синусовый ритм, т.е. по возвращении ЭКГ к исходной, оценивали эффективность антиаритмического действия исследуемых веществ.

Хлоридкальциевую аритмию у наркотизированных уретаном (850 мг/кг в/б) крыс Wistar (самцы, масса тела 180-200 г) вызывали в/в введением хлорида кальция в зависимости от сезона в дозах 200 - 220 мг/кг. Отобранные наиболее активные изучаемые вещества и препарат сравнения изоптин (в дозах 1,0; 3,0 и 4,5 мг/кг) вводили в/в за 2-3 мин до введения СаС12. По частоте возникновения фибрилляции и выживаемости крыс в опытной и контрольной группах оценивали антиаритмическую активность исследуемых веществ.

При изучении фармакодинамики активных по антиаритмическому действию соединений оценка влияния на параметры ЭКГ проведена на бодрствующих кроликах Шиншилла (самцы и самки, масса тела 2,5 - 3,0 кг) при записи ЭКГ во II стандартном отведении. Изучаемые вещества вводили в/в в краевую вену животных в виде свежеприготовленных водных растворов (дистиллированная вода для инъекций) в диапазоне доз: ЕД50 (на аконитиновой аритмии у крыс) -1/10 ЛД50 (для мышей при в/б введении). После этого (через 5 мин) начинали запись ЭКГ, по результатам которой оценивали влияние соединений на функциональное состояние сердечнососудистой системы.

Для изучения влияния отобранных соединений на центральную нервную систему применяли метод анализаторов. Опыты проведены на мышах линии BALB/c (масса тела 18-22г). При этом были использованы этанол (14мг/кг 40%) и уретан (1500мг/кг), оказывающие влияние на тормозные процессы и угнетающие процессы возбуждения в ЦНС.

Эффективность действия изучаемых соединений на ЦНС оценивали по показателям продолжительности периода бокового положения животных (сон, наркоз). Окончанием бокового положения считался момент, когда у животных восстанавливался рефлекс переворачивания (трехразовая проба).

Исследование влияния изучаемых веществ на судорожные процессы изучали на фоне введения 1-холшюмиметика ареколшш (за счет его возбуждающего действия на М-холинорецепторы юзенцефалического отдела ретикулярной формации) и психостимулирующего вещества гармииа вызывает гиперкинезы, связанные с воздействием на средний мозг и кору больших полушарий) Закусов В.В., 1978; Машковский М.Д., 1993). В группе контроля у животных определяли лительиость гиперкинезов при п/к введении ареколина в дозе 25мг/кг и гармина в дозе 10мг/кг. лияние судорожных ядов на фоне действия исследуемых веществ при их в/б введении также 1зучапи в дозах 1/10 ЛД50 (для мышей) при введении за 30 мин до назначения анализаторов.

Исследование влияния отобранных активных веществ на функциональное состояние почек роводили на крысах Wistar (масса тела 200-250г) в условиях водной нагрузки (Берхин Е.Б., 1964). а 12-16 часов до начала эксперимента животных лишали корма, потребление воды не граничивали. Опыты проводили в помещении с относительно постоянной температурой воздуха 22°С. Водную нагрузку (водопроводная вода 25-27 С) вводили крысам в желудок при помощи зонда в объеме 5% от массы тела животного. Изучаемые вещества вводили в/б в дозах 1/10 ЛД50 (для мышей при в/б введении) сразу после водной нагрузки. В контрольной группе животные получали только водную нагрузку. Подсчет количества выделенной мочи проводили каждый час на протяжении 5 часов.

Оценка мутагенной активности веществ проведена методом учета способности вещества индуцировать генные мутации у индикаторных микроорганизмов в системе метаболической активации in vitro и без системы метаболической активации. Использован чашечный метод учета мутаций, предложенный Ames B.N. et al (1972, 1984) в модификации, описанной в «Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (Москва, 2005г.).

В качестве индикаторных микроорганизмов использовали ауксотрофные по гистидину штаммы Salmonella typhimurium ТА98, ТА100, ТА1537. О наличии мутагенного действия препарата судили по индукции обратных мутаций от ауксотрофности по гистидину к прототрофности. Оценку результатов проводили по алгоритму, приведенному в "Методических рекомендациях по применению теста Эймса Salmonella/микросомы" (Фонштейн JIM., Абилев С.К., и др, 1983).

Достоверность результатов при проведении всех экспериментальных исследований обеспечивалась достаточным количеством животных в контрольных и подопытных группах и подтверждалась статистически при помощи t критерия Стыодента. Различия считались достоверными при р<0,05. Статистическую обработку всех полученных результатов проводили с использованием пакета статистических программ (MS Office® «Excel 2007», «StatSoft Statistica v.6.0»).

Результаты исследований и их обсуждение.

1. Химическое строение изучаемых соединений.

На исследование были представлены оригинальные впервые синтезированные функционально замещенные соединения трех классов химических веществ аминоамидов, аминоэфиров и аминоамидоэфиров гетероалифатического ряда в виде гидрохлоридов с различными заместителями в аминной и ацильной группах, а также с переменной длиной гетероалифатической цепи между активными группами молекулы соединений общей формулы:

, ^ Г

я1 о-сн-сн- ХСН2СН2Ж2 НС1

где X = О, т1; я1 = Н, я2 С=0;

и2= Н, СбН5, С6Н5СН2, С6Н5ОСН2, 2,4-СІ2С6Н3ОСН2; Я3 = 114=Н; К3+Я4=(СН2)4;

т2 = М(СН3)2, К(С2Н5)2, N

О.

N О N ЫСН3

Классификация и количество соединений 3-х классов изучаемых химических веществ представлены в таблице 1.

Таблица 1. Классификация и количество изучаемых функционально замещенных аминоэфиров,

Классы и ряды изучаемых веществ Количество исследованных соединений

I Гндрохлориды аминоэфиров: А. Циклогексанового ряда 5

Б. Оксиэтиленового ряда. 7

II Гидрохлориды амипоамидов и амнноспиртов: А. Циклогексанового ряда 6

III Гидрохлориды аминоамидоэфиров: А. Циклогексанового ряда 10

Всего: 28

2. Токсикологическая характеристика внутрибрюшинном введении мышам.

соединении

при

однократном

Исследование токсичности изучаемых веществ при однократном в/б введении проведено на мышах линии ВАЬВ/с (самцы и самки, масса тела 18-22г). На первом этапе, на ограниченном количестве мышей 6-7 с использованием метода Дейхмана и Лебланка, находили показатели

10

риентировочных средних смертельных доз. На втором этапе исследований в развернутом ксперименте на группах мышей, состоявших из 5-6 животных, методом пробит-анализа по 1итчфилду и Уилкоксону определяли точные параметры токсикометрии (ЛДш, ЛД16, ЛД50 ± т, 1Дв4, ЛД90) изучаемых соединений. Как показали проведенные исследования, большинство изучаемых веществ оказались малотоксичными при однократном в/б введении мышам линии BALB/c. При этом показатели ЛД50 колебались в широком диапазоне доз и составляли 180 - 3900 мг/кг. Сравнение токсичности изучаемых соединений по параметрам ЛД50 показало, что аминоэфиры оксиэтиленового ряда (I Б) являются менее токсичными чем аминоэфиры циклогексанового (I А), а аминоамидоэфиры (III) менее токсичны чем аминоэфиры (I) и аминоамиды (II).

Изучение токсичности этих веществ в зависимости от их химического строения показало, что токсичность соединений зависит: от химического строения углеродной цепи, соединяющей функциональные группы, в молекуле веществ, от строения заместителей у аминного атома азота и уменьшается в ряду пиперидино > диэтиламино > морфолино, а также от строения ацильной группы.

Химическое строение и токсичность при однократном введении мышам лшпш BALB/c этих, наиболее активных соединений, отобранных для дальнейшего изучения, представлены в таблице 2.

Та6лица2. Химическое строение и показатели токсичности для мышей линии BALB/c при

однократном в/б введении наиболее активных соединений.

Шифр Химическое строение, название Показатели токсичности, мг/кг

ЛДю ЛД16 ЛД5о±т ЛД84

Б-104 XI » ОСИ2 С (OCH2CH2)2N(C2H5)2 C1 НС1 2-[2-(Ы,Ы-диэтиламиноэтокси)этил]-2,4-дихлорфеноксиацетата гидрохлорид 155 170 232±32 315

Б-46 ОС -C1 CH2Ph Ы-[2-(т/7£7»с)-гидроксидиклогексил]-Н-Г2-(Ы-пиперидино)этил1фенилацетамида гидрохлорид 220 226 25Ш2 281

Б-50 Ч, С С Н 2О Р h С9. с с н 2о Ph СН2СН 2N' )> Н С 1 ^[2-(/я/ияг)-феноксиацетоксициклогексил]-Ы-[2-(К-пиперидино)этил1феноксиацетамида гидрохлорид 358 370 410±20 460

Анализ полученных данных при изучении токсичности впервые синтезированных функционально замещенных аминов позволил определить влияние различных заместителей в молекуле этих веществ на показатели токсичности при однократном в/б введении мышам линии ВАЬВ/с и обоснованно выбрать диапазон доз для первичной оценки их антиаритмических свойств и дальнейшего фармакологического изучения.

3. Антиаритмические свойства изучаемых веществ и анализ зависимости антиаритмического действия от химического строения исследуемых соединений.

По результатам скрининга на аконитиновой модели у крыс установлено, что отличия в антиаритмической активности изучаемых веществ и препаратов сравнения являются не только количественными, но и качественными. Так, при использовании средней эффективной или значительно ее превышающих доз лидокаина отмечалась кратковременность его антиаритмического действия и было характерным возобновление аритмии, вследствие чего необходимо было повторное введение лидокаина для устранения развившейся вновь аритмии. При назначении исследуемых веществ подобного эффекта не наблюдалось.

Направленный синтез веществ в рядах функционально замещенных аминоамидов и аминоэфиров позволил проследить влияние функциональных групп и различных заместителей на антиаритмическую активность изучаемых соединений. Прослеживалось также влияние химического строения ацильного остатка в амидной и сложноэфирной группах на эффективность антиаритмического действия соединений.

В ряду аминоэфиров, аминоамидов и аминоамидоэфиров производные феноксиуксусной (2,4-дихлорфеноксиуксусной) кислоты оказались эффективнее производных бензойной кислоты.

Установлено, что антиаритмические свойства аминоэфиров, аминоамидов и аминоамидоэфиров зависят от строения аминогруппы и уменьшаются в ряду Ж^Ню (пиперидино) > ЩСгЩг (диэтиламино) > ЫСЛО (морфолино).

4. Исследование особенностей аитиаритмического действия наиболее активных соединений на различных моделях аритмии у крыс

На аконитиновой модели аритмии у наркотизированных крыс \Vistar при скрининге среди функционально замещенных аминов была установлена высокая антиаритмическая активность у соединений Б-104 (I), Б-46 (II) и Б-50 (П1). При этом средние эффективные дозы по антиаритмическому действию (ЕД50) этих веществ составляли соответственно 0,92мг/кг, 1,10мг/кг и 1,85мг/кг, а антиаритмические индексы (АИ=ЬП5(/Е05п) были равны 252; 228 и 225 (табл.3).

Как видно из таблицы 3 все три изученных соединения превосходили по показателям АИ (ЦЭ50/П050) препараты сравнения амиодарон в 3,4-4 раза, пропрапалол, лидокаин и новокаинамида в 7-9 раз. У соединений Б-104, Б-46 и Б-50 величина индекса Шнейдера-Брокка

»ставила 87; 52,4 и 34 соответственно, что в 1,6-4 раза превышает данный показатель у наиболее ффективного из препаратов сравнения — амиодарона. Эффективность антиаритмическон активности изучаемых соединений по индексу Шнейдера-Брокка превосходила все другие препараты сравнения в 4,4-11,2 раза.

Таблица 3. Сравнительная эффективность антиаршимического действия исследуемых соединений и антиаритмических средств на модели аконитиновой аритмии у крыс.

Шифр Показатели токсичности для мышей при в/б введении Показатели эффективности антиаритмического действия

ЬЭш, мг/кг ПЗго, мг/кг ЕО50, мг/кг мг/кг АИ= Ь050/Е05о Индекс Шнейдера-Брокка ЬОю/ЕЭад

Б-104 155 232 0,92 1,78 252 87

Б-46 220 251 1,1 4,2 228 52,4

Б-50 358 410 1,85 10,5 225 34

Препараты сравнения

Амиодарон 281 430 6,5 13.4 66 21

Пропранолол 56 85 3 7.2 28 7,8

Лидокаин 104 145 5 9 29 11,5

Новокаинамид 210 300 8 20 37,5 10,5

При определении срсднеэффективиых доз исследуемых соединений было отмечено, что профилактическое введение веществ Б-104, Б-46 и Б-50 в относительно невысоких дозах (1,5-3,5мг/кг) полностью предотвращает развитие аритмии после введения аритмогена на аконитиновой модели у крыс. Введение соединений Б-104 и Б-46 в испытанных дозах 2,5 и 3,5мг/кг на фоне нарушений сердечного ритма, вызванных введением аконитина в дозе 40 мкг/кг, блокировало аритмию у 33% (препарат Б-104) и 22% (препарат Б-46) подопытных животных. Эти соединения снимали возникавшие тяжелые аритмии в указанных дозах на 15-45 мин введения аритмогена в 67% и 75% случаев соответственно. Соединение Б-50 в дозе 2,5мг/кг снимало развитие аритмии в 60% случаев, но не предотвращало их возникновение.

При исследовании антиаритмического действия соединения Б-50 при в/ж введении на модели аконитиновой аритмии у крыс \Vistar установлено, что оно сохраняет свои антиаритмические свойства и при данном способе введении. Под влиянием изучаемого препарата отмечалось более легкое течение аконитиновой аритмии, уменьшение ее длительности и увеличение выживаемости животных (табл. 4). В опытах при в/ж введении этого вещества ЕД50 составляла менее 20мг/кг.

Таблица 4. Эффективность антиаритмического действия соединения Б-50 при в/ж введении на модели аконитиновой аритмии у крыс Ш5(аг.

Шифр Кол-во животных Испытан ные дозы, мг/кг Продолжительность аритмии, мин Выживаемость, % ЕО50, мг/кг

контроль 10 — 103±22 0 —

Б-50 10 40 62± 11 100 20

10 20 53± 10 83 <20

Изучение антиаритмических свойств отобранных при скрининге соединений на модели желудочковых нарушений сердечного ритма, вызванных введением бария хлорида крысам \Vistar показало, что наиболее выраженной антиаритмической активностью на модели хлорид бариевой аритмии обладает соединение Б-104 и превышал АИ (Ц35о/Е05о) препарата сравнения амиодарона в 1,8 раза. Показатель ЕД50 для Б-104 составил всего 1,5 мг/кг. Соединение Б-46, в свою очередь, не уступает по величине АИ препарату сравнения - амиодарону, что доказывает его высокую эффективность антиаритмического действия. Однако, при введении вещества Б-46 время до восстановления ритма было большим по сравнению с амиодроном (табл.5).

Таблица 5. Сравнительная эффективность антиаритмического действия исследуемых соединений и препарата сравнения амиодарона на модели желудочковых нарушений

у крыс, вызванных хлористым барием в дозе 25мг/кг.

Исследуемые вещества 1Х>5о для мышей при в/б введении, мг/кг Антиаритмическая активность

Е05О, мг/кг АИ = П)5о/Е05О

Б-104 232 1,5 159

Б-46 251 2,7 93

Амиодарон 430 5 86

Исследование антиаритмических свойств отобранных при скрининге соединений на модели нарушений сердечного ритма, вызванных хлористым барием у интактных кроликов Шиншилла (самцы, самки, масса 2,7 - 3,4 кг) показало, что изучаемые соединения Б-104 и Б-46 демонстрируют выраженную антиаритмическую активность при их введении как с профилактической, так и с лечебной целью. Вещество Б-104 при назначении с лечебной целью в дозе 2,0мг/кг снимает развившуюся аритмию в 50% случаев, а соединение Б-46 в дозе 2,7мг/кг не только снимает развившуюся аритмию, но и предотвращает ее развитие в 50% случаев при назначении с профилактической целью в дозе 1,5мг/кг (таблица 6).

Нарушения ритма сердца у кроликов при в/в введении хлорида бария в дозе 4мг/кг были сходными с аритмиями у крыс на фоне введения хлорида бария в дозе 25мг/кг.

Таблица 6. Сравнительная эффективность антиаритмического действия исследуемых соединений и препаратов сравнения на модели хлорид бариевой аритмии у _интактных кроликов, вызванной ВаСЬ в дозе 4мг/кг._

Шифр Профилактическое действие Лечебное действие

ЕД50, мг/кг Длительность аритмии, мин ЕДзо, мг/кг Длительность аритмии, мин

Б-104 1,2 7,1 ±2,2 2,0 15,1±1,4

Б-46 1,5 14,6±3,1 2,7 25,5±2,8

Амиодарон 5,0 25,4±4,5 4,0 34,2±3,2

Контроль 45,3±3,7 45,3±3,7

ЭКГ- картина нарушений ритма сердечных сокращений у кроликов под влиянием хлорида бария в дозе 4 мг/кг характеризовалась более легким течением. При этом отмечалось снижение числа животных с фибрилляцией желудочков и их гибели до 15%. Соединения Б-104 и Б-46 характеризовались более низкими показателями ЕД50 и существенным сокращением продолжительности аритмии при их профилактическом и лечебном назначении по сравнению с амиодароном.

На модели хлорид кальциевой аритмии у наркотизированных уретаном (850 мг/кг в/б) крыс Wistar (самцы и самки, масса 200 - 230г) была проведена оценка антиаритмических свойств отобранных соединений при их профилактическом в/в введении в различных дозах. Исследуемые вещества вводили за 5 минут до введения хлорида кальция.

Установлено, что соединения Б-104 и Б-46 при профилактическом введении заметно ослабляют тяжесть нарушений сердечного ритма в минимальных испытанных дозах, но не предотвращают гибели животных. У вещества Б-46 с увеличением дозы усиливался проаритмогенный эффект, который приводил к заметному снижению выживаемости животных. Более выраженный антиаритмический эффект изучаемых соединений отмечался на легкой модели хлорид кальциевой аритмии при использовании аритмогена в дозе 200 мг/кг.. Выявлено, что изучаемые соединения проявляют антиаритмическую активность, сопоставимую с использованным препаратом сравнения - изоптином, и могут не только предотвращать гибель животных при введении их с лечебной целью, но и приводят к более быстрому восстановлению ритма на 5-15 минутах при введении вещества Б-46 в дозе 2,5мг/кг и на 1-5минутах при введении вещества Б-104 в дозе 1 мг/кг.

Доказано, что изучаемые вещества обладают выраженными антиаритмическими свойствами на модели хлорид кальциевой аритмии у крыс. По эффективности антиаритмического действия на данной модели аритмии изучаемые соединения рядов 1Б и IIA не уступают по эффективности антагонисту кальция - изоптину.

5. Изучение фармакодипамикії соединений, обладающих выраженными антиаритмнческнмп свойствами.

5.1. Изучение влияния соединений на параметры ЭКГ.

При изучении влияния исследуемых веществ на параметры ЭКГ у 20 интактных бодрствующих кроликов Шиншилла (самцы и самки, масса 2,5 - 3,7 кг) после в/в введения изучаемых соединений в диапазоне испытанных доз (0,92-9,20 мг/кг Б-104 и 1,1-5,5 мг/кг Б-46) препарат Б-104 не вызывал существенных изменений ЭКГ и частоты сердечных сокращений, в то время как при введении соединения Б-46 с увеличением дозы наблюдались кратковременные (2-5мин) изменения параметров ЭКГ.

5.2. Изучение влияния соединений на ЦНС.

При изучении действия отобранных соединений на функциональное состояние ЦНС были использованы в качестве анализаторов этанол 40% 14 мл/кг и уретан 1500 мг/кг, влияющие в указанных дозах на тормозные процессы и способствующие их иррадиации. Исследуемые вещества вводили в/б группам мышей линии ВАЬВ/с (по 10 животных в группе, самцы с массой тела 18-20г) в дозах 1/10 от ЛД50 (для мышей при этом же способе введения). Анализаторы вводили также в/б через 15 мин после введения испытуемых веществ. Животные контрольной группы получали в/б только анализаторы (табл. 7).

Таблица 7. Влияние изучаемых соединений на продолжительность действия уретана

Исследуемые соединения Испытанные дозы (мг/кг) Наркотические вещества

Уретан 1500 мг/кг Этанол 14мл/кг 40%

Б-104 23 195,17 ± 14,76 179,50 ±41,68

Б-46 25 263,10 ±40,57 139,17 ±21,43

Контроль - 337,80 ±27,13 177,40 ±11,27

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что введение соединения Б-104 приводило к достоверному по сравнению с контролем (р<0.05) уменьшению продолжительности наркотического действия уретана. Под влиянием соединения Б-46 снижение длительности наркотического сна, вызванного уретаном, было недостоверным. Соединения Б-104 и Б-46 не оказывали существенного влияния в испытанных дозах на продолжительность наркотического сна, вызвашюго этанолом.

Исследование антиконвульсивных свойств изучаемых соединений было проведено при назначении судорожных ядов. Анализаторы гармин и ареколин вводили мышам подкожно в виде 0.1 % растворов в дозах 10 и 25 мг/кг, соответственно. Изучаемые вещества Б-104 и Б-46 вводили через 1-3 мин после инъекции анализатора в/б в дозе 1/10 от ЛД50 (для мышей при

в/б введении). Контрольные животные получали подкожно только анализаторы ареколип или гармин. Противоеудорожную активность соединений оценивали по продолжительности клонико-тонических судорог, вызванных ареколином, и гиперкинезов при назначении гармина.

По результатам проведенных исследований установлено, что соединение Б-104 достоверно увеличивало продолжительность судорог, вызванных введением ареколина до 122,5 ± 6,42 мин по I сравнению с группой контроля, в которой продолжительность судорожного периода составляли 77,5 ± 10,70 мин (рис. 1). Введение соединения Б-104 на фоне действия гармина продлевало период судорожного возбуждения до 105,83 ± 12,06 мин, в то время как в контрольной группе длительность гиперкинезов составляла 66,5 ± 3,34 мин (рис. 2). В свою очередь, соединение Б-46 в испытанной дозе достоверно уменьшало процессы возбуждения на фоне введения ареколина по сравнению с контролем до 58,67 ± 2,42 мин и существенно не влияло на длительность гиперкинезов на фоне действия гармина и составило 73,33 ± 2,03 мин, что видно из рисунков 1 и 2.

Рисунок 1. Влияние исследуемых соединений на продолжительность гиперкинезов, вызванных _ ____ареколином (мин).

150

Рисунок 2. Влияние исследуемых соединений на продолжительность гиперкинезов, вызванных

гармином (мин).

ш Гармин ■ 5 104

ВБ-16

Исследование влияния изучаемых соединений на апоморфиновую жевательную стереотипию проведено на мышах линии ВАЬВ/с при в/б введении апоморфина, стимулирующего дофаминовые рецепторы пусковой зоны, в дозе 2мг/кг. Изучаемые вещества вводили группам мышей (по 10 животных в каждой, самцы, масса тела 18-22 г) в/б в дозах 1/10 от ЛД5о (для мышей при в/б введении) за 30 минут до введения апоморфина. Контрольные животные получали в/б только анализатор в испытанной дозе 2 мг/кг (табл. 8).

Таблица 8. Влияние исследуемых веществ на продолжительность жевательной стереотипии _ _у мыгией линии ВАЬВ/с вызванной апоморфином в дозе 2 мг/кг.

Исследуемые вещества Испытанные доза (мг/кг) Продолжительность жевательной стереотипии после введения апоморфина 2 мг/кг в/бр

Б-104 23 30,60 ± 5,23

Б-46 25 32,30 ±4,14

Контроль - 35,40 ± 5,02

Установлено, что, по сравнению с контролем, изучаемые соединения в испытанных дозах 1/10 ЛД50 (для мышей при в/б введении) существенно не влияют на продолжительность жевательной стереотипии, вызванной апоморфином.

5.2.1. Изучение влияния соединений на функциональное состояние почек. Изучение влияния соединений на функциональное состояние почек выполнены на 30 крысах линии Wistar (самцы, масса 180-200г), которые были разделены на 3 группы, по 10 крыс в каждой: 1 — контроль (водопроводная вода), 2 - Б-104, 3 - Б-46. Дозы изучаемых веществ составляли: Б-104 - 23мг/кг и Б-46 - 25мг/кг (рис. 3).

Рисунок 3. Влияние исследуемых соединений на функциональное состояние почек крыс Wistar

в условиях водной нагрузки.

itTZ^^^--~---—--^^-----—--ZL___ZT

I

Под влиянием соединения Б-104 в испытанной дозе наблюдалось статистически достоверное (р<0,05), по сравнению с контролем, торможение диуреза в 1-й час после водной нагрузки. В последующие 2-й и 3-й часы проведения исследований отмечалось компенсаторное увеличение диуреза, а так же его увеличение почти в 2 раза, по сравнению с контролем, в течение 5-го часа. Суммарный диурез за 2-й и 3-й час проведения пробы у подопытных животных этой группы составил 65-70% от введенного объема воды, за 5-й час 20% . Суммарный диурез за 5 часов наблюдения составил в среднем 92,8 % к общему объему введенной жидкости. Под влиянием соединения Б-46 в испытанной дозе отмечалось максимальное увеличение диуреза только в течение 2-го часа проведения пробы с водной нагрузкой и составило 50-55%. За 3-й час выделение составило

около 20% от общего введения. В 1-й, 4-й и 5-й часы исследования мочеотделение было минимальным и составило по 7-9% от введенного объема воды. При этом суммарный диурез за 5 часов наблюдения составлял в среднем 97,2 % к общему объему введенной жидкости (рис. 3).

Таким образом, выявлено, что изучаемые соединения в высоких дозах (1/10 ЛД50 для мышей при в/б введении) могут оказывать заметное влияние на функциональное состояние почек у крыс в условиях водной нагрузки, но не влияют, по сравнению с контролем, на показатели суммарного 5-часового диуреза.

6. Исследование токсичности и некоторых параметров токсикокинетики наиболее активных соединений.

Для оценки токсичности изучаемых соединений при различных способах их однократного введения (в/б и в/м) были выполнены на 2 видах лабораторных животных: 120 мышах линии ВАЬВ/с (самцы и самки, масса тела 18-22г) и 70 крысах \Vistar (самцы и самки, масса тела 220250г) (табл. 9).

Таблица 9. Показатели токсичности соединений при однократном введении __мышам ВАЬВ/с и крысам 1У151аг_

Исследуемые вещества Показатели токсичности, мг/кг

Самцы Самки

1Л)10 ІЛ316 Ь050±т 1X184 1Л)10 ІЛ316 Ь050±т Ю84

Внутрибрюшинно, мыши линии ВАЬВ/с

Б-104 155 170 232 ±32 315 168 187 244 ± 24 331

Б-46 220 226 251 ± 12 281 232 241 263 ± 17 298

Внутримышечно, мыши линии ВАЬВ/с

Б-104 165 178 246 ±27 329 188 193 260 ±31 344

Б-46 231 250 289 ±34 317 263 284 309 ±42 356

Внутрибрюшинно, крысы \Vistar

Б-104 149 161 223 ±26 304 178 191 223 ±22 310

Б-46 201 218 243 ± 15 272 220 234 251 ±13 279

Изучение токсичности исследуемых соединений для самцов и самок мышей линии ВАІ.В/с (при в/б и в/м способах введения) и крыс \Vistar (при в/б введении) не выявило существенных различий в чувствительности мышей и крыс к токсическому действию соединений в зависимости от вида и пола животных.

Исследование переносимости препаратов Б-46 и Б-104 при 3-х дневном в/б введении и препарата Б-50 при введении в желудок проведено на 40 крысах \Vistar (самцы, масса тела 250290г), разделенных на 4 группы: по 10 животных в каждой. I группа - контроль, II - препарат Б-46 в дозе 295 мг/кг (10-кратная предполагаемая суточная доза), III группа - препарат Б - 104 - 345 мг/кг (10-кратная предполагаемая суточная доза), IV группа - препарат Б -50- 477 мг/кг (10-кратная предполагаемая суточная доза).

Результаты показали, что исследуемые активные вещества не оказывают негативного влияния на общее состояние и поведение крыс. При этом было установлено, что в/б введение исследуемых препаратов Б-104 и Б-46 в испытанных дозах не вызывает статистически значимых изменений гематологических показателей по сравнению с контролем и фоновыми данными. У крыс, получавших препарат Б-50 в течение 3-х дней, отмечалось достоверно значимое снижение гемоглобина, по сравнению с контролем и исходными параметрами. При сравнении комплексных патоморфологических данных после эвтаназии крыс, получавших препарат, с данными контрольных животных, изменений в органах и тканях, как при макро-, так и при микроскопическом исследовании не выявлено.

Исследование переносимости исследуемых веществ при их однократном в/в введении в дозах равных 1/10 ЛД50 (для мышей линии BALB/c при в/б введении) Б-104 (23мг/кг) и Б-46 (25мг/кг) проведены на 10 бодрствующих кроликах Шиншилла (2 группы по 5 животных в каждой: самцы, массой 2,7 кг - 3,5кг). Сравнение количества форменных элементов крови (эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов), уровня гемоглобина и биохимических показателей сыворотки крови (общий белок, глюкоза, билирубин, щелочная фосфатаза, лактатдегидрогеназа, аспартат- и аланинаминотрансфераза, мочевина, креатинин,) до начала эксперимента, а также через 4 и 24 часа после в/в введения, свидетельствует о хорошей переносимости соединений Б-46 и Б-104. В испытанных дозах при однократном в/в введении кроликам они не влияли на их общее состояние и поведение, на гематологические показатели и, по данным биохимических тестов, на функциональное состояние основных органов и систем организма подопытных животных.

При исследовании некоторых параметров токсикокинетики соединений Б-104 и Б-46 использовали метод элиминации токсического эффекта, основанный на ослаблении токсического действия изучаемых веществ со временем или при их повторном введении (Давыдов Б.И., 1971). Эксперименты проведены на 200 мышах линии BALB/c (самцы, масса тела 18-22г) при в/б введении исследуемых веществ Б-104 и Б-46. Полученные результаты показали, что уровни остаточных доз соединений Б-104 и Б-46, соответствующий Т0>5, для интактных мышей составили 3,70 и 6,09 часа соответственно. К 15-му часу в организме мышей после введения Б-104 и Б-46 остается лишь 0,1% и 0,4% от введенной дозы соответственно.

При оценке мутагенной активности соединений Б-46 и Б-104, обладающих выраженными антиаритмическими свойствами, с использованием чашечного метода учета генных мутаций -тест Эймса (Ames B.N. et al 1972,1984) установлено, что они не обладают мутагенным действием.

Таким образом, подводя итоги по поиску новых препаратов для профилактики и лечения нарушений сердечного ритма среди функционально замещенных аминоэфиров (I), аминоамидов (И) и аминоамидоэфиров (III) гетероалифатического ряда, следует отметить, что выявленные при скрининге наиболее активные соединения обладают выраженными антиаритмическими

свойствами не уступающими, а в ряде случаев и превосходящими по эффективности такие препараты сравнения, как амиодарон, пропранолол, лидокаин, новокаинамид и изоптин. Проведенные исследования показали, что изученные вещества Б-104 и Б-46 малотоксичны и не обладают мутагенными свойствами. Поэтому, они могут рассматриваться в качестве потенциальных веществ, перспективных для разработки на их основе лекарственных средств для профилактики и лечения нарушений сердечного ритма.

Следует отметить, что соединение Б-50 не было подробно исследовано в связи с его недостаточной растворимостью в воде, и требует дальнейшей доработки в связи с высокой антиаритмической активностью и перспективностью этого вещества для создания на его основе новых лекарственных форм.

ВЫВОДЫ.

1. Впервые синтезированные функционально замещенные аминоамиды, аминоэфиры и аминоамидоэфиры (всего 28 соединений) являются малотоксичными, многие из которых обладают выраженными антиаритмическими свойствами, сопоставимыми, а в ряде случаев превосходящими по активности известные и часто применяющиеся в медицинской практике лекарственные средства.

2. Токсичность изучаемых соединений зависит от химического строения углеродной цепи, соединяющей функциональные группы молекулы веществ, от строения заместителей у аминного атома азота, уменьшаясь в ряду пиперидино > диэтиламино > морфолино, а также от строения ацильной группы, расположения в ней фенильного радикала.

3. Установлено, что высокими антиаритмическими свойствами обладают аминоэфиры оксиэтиленового ряда, аминоамиды и аминоамидоэфиры циклогексанового ряда, причем вещества с дихлорфеноксиацетатным и феноксиацетатным фрагментами активнее производных бензойной кислоты. Наличие пиперидинового фрагмента в качестве аминогруппы обеспечивает соединениям более высокую антиарнтмическую активность по сравнению с морфолиновыми фрагментами.

4. Отобранные при скрининге наиболее активные соединения показали выраженную антиаритмическую активность, как при назначении с профилактической, так и с лечебной целью. Соединения Б-46, Б-50 и Б-104 - высокоэффективны и малотоксичны, не уступают, а в некоторых случаях и превосходят по показателям АИ ([^Пц/ЕОзо) и индекса Шнейдера-Брокка ([^Бн/НО./,) эффективность препаратов сравнения (амиодарон, пропранолол, лидокаин, новокаинамид и изоптин), что делает их наиболее перспективными для разработки на их основе новых лекарственных препаратов.

5. Соединения Б-104 и Б-46 в испытанных дозах 1/10 ЛД50 (для мышей при в/б введении) существенно не влияют на продолжительность наркотического сна, на длительность

гиперкинезов и на продолжительность жевательной стереотипии. Соединение Б-104 достоверно (р<0,05) уменьшает продолжительность наркотического действия уретана по сравнению с контролем, а соединение Б-46 в достоверно (р<0,05) уменьшает процессы возбуждения на фоне введения ареколина.

6. Выраженные антиаритмические свойства, низкая токсичность и хорошая переносимость, отсутствие мутагенных свойств в тесте Эймса, результаты исследований токсикокинетики и ряда фармакологических свойств свидетельствуют о целесообразности разработки на основе соединений Б-46 и Б-104 новых высокоэффективных лекарственных средств для профилактики и лечения нарушений сердечного ритма. Практические рекомендации

1. Высокая антиаритмическая активность отобранных соединений, наблюдаемая при внутривенном и внутрижелудочном способах введения, выдвигает необходимость разработки соответствующих лекарственных форм соединений для указанных способов их применения.

2. Выявленные закономерности зависимости «структура-активность» должны быть одними из ведущих приоритетов при оценке перспективности дальнейшего направленного синтеза соединений в указанном классе веществ с целью поиска и создания, новых высоко эффективных и малотоксичных антиаритмических препаратов.

3. Учитывая перспективность соединения Б-50, в связи с доказанной в эксперименте высокой антиаритмической активностью и малой токсичностью, но недостаточную растворимость в воде, целесообразно продолжить его дальнейшее исследование и возможное применение ограничить пероральными лекарственными формами.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ву Хонг Шон, Борисова Н.Ю., Афанасьева Е.Ю., Фомичева Г.А., Колобова Т.П., Борисова Е.Я. Синтез и свойства (±) транс-2-диаминаминоциклогексанолов // Вестник МИТХТ-2008-№2-с. 89-93.

2. Фомичева Г.А., Афанасьева Е.Ю., Зверев Д.М., Ву Хонг Шон, Арзамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я. Новые гетероалифатические функционально замещенные амины для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний // XV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»- Москва, 2008г. - с.719.

3. Афанасьева Е.Ю., Фомичева Г.А., Арзамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я. Анализ первичной оценки антиаритмической активности и токсикологическая характеристика новых карбоциклических аминоамидов и аминоэфиров // XV Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»- Москва, 2008г. - с.582.

4. Фомичева ГЛ., Афанасьева Е Ю., Зверев Д.М., Арзамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я. Исследование антиаритмической активности впервые синтезированных гетероалифатических аминоамидов на различных моделях аритмии // XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»- Москва, 2010г. - с.735-736.

5. Фомичева ГЛ., Афанасьева Е.Ю., Зверев Д.М., Арзамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я. Сравнительная антиаритмическая активность впервые синтезированных

22

гетероалифатических аминоэфиров и аминоамидов на различных моделях аритмии // XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»- Москва, 2010г.- с. 736.

6. Фомичева Г.А., Афанасьева Е.Ю., Зверев Д.М., Арзамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я. Токсичность и антиаритмическая активность гетероалифатических аминоамидов // XVII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство»- Москва, 2010г.-с.736-737.

7. Зверев Д.М., Борисова Е.Я., Колобова Т.П., Фомичева Г.А., Афанасьева Е.Ю., Арзамасцев Е.В. Синтез и биологическое действие (±)-транс-2[2-(диалкиламино)этокси]циклогексанолов и их сложных эфиров. Вестник МИТХТ, т.5, №6 (21), 2010г. - с.32-35.

8. Зверев Д.М., Борисова Е.Я., Фомичева Г.А., Афанасьева Е Ю. Стереоселективньш сннтез биологически активных аминоэфиров циклогексанового ряда. // Тезисы докладов Всероссийской молодежной конференции-школы «Идеи и наследие А.Е. Фаворского в органической и металлоорганической химии XXI века» (Санкт-Петербург, 23-26 марта 2010г.) - с.243-244.

9. Борисова Е.Я., Арзамасцев Е.В., Афанасьева Е.Ю., Борисова Н.Ю., Фомичева Г.А., Зверев Д.М. Токсикологическая характеристика новых функционально N -замещенных аминов // Тезисы докладов Научно-практической конференции «Современные аналитические задачи определения наркотиков, лекарственных средств и других компонентов в различных матрицах». (Москва, 20 мая 2010г.) - с.305.

10. Мохаммед А.Х., Зверев Д.М., Фомичева Г.А.Л Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я., Арзамасцев Е.В. Гетероалифатические аминоэфиры. Синтез и изучение взаимосвязи структура-активность//ХШ Международная научно-техническая конференция «Наукоемкие химические технологии». (Суздаль, 29 июня- 02 июля 2010г.) - с.137-138.

11. Афанасьева Е.Ю., Фомичева Г.А. Исследование №замещенных аминов, перспективных для создания новых антиаритмических средств. Спец. выпуск журнала «Клиническая фармакология и терапия», 2010г., №6, с.62-64.

12. Фомичева Г.А., Афанасьева Е Ю., Зверев Д.М., Борисова Е.Я., Арзамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Черкашин М.И., Соханенкова А.Е. Токсикологическая характеристика новых функционально Ы-замещенных аминов. // Микроэлементы в медицине. - М. - Т. 11, Вып. 11 (3-4)-2010г. - с 75-78.

13. Борисова Е.Я., Зверев Д. М., Фомичева ГЛ., Афанасьева ЕЮ., Борисова Н.Ю., Арзамасцев Е.В., Чсркашии М.И. Лнтиаритмики нового поколения класса функционально замещенных аминов. // Микроэлементы в медицине. - М. - Т. 11, Вып. 11 (3-4). - 2010г. -с. 79-83.

14. Афанасьева Е.Ю., Фомичева ГЛ., Азамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я. Исследование антиаритмической активности Ы-ЗАМЕЩЕННЫХ АМИНОВ // XVIII Российский национальный конгресс «Человек и лекарство» - Москва, 2011г. - с. 415-416.

15. Васильева ГЛ., Афанасьева Е.Ю., Зверев Д.Н., Арзамасцев Е.В., Борисова Н.Ю., Борисова Е.Я.. Антиаритмические свойства впервые синтезированных гетероалифатических аминов по результатам скрининга на модели аконитиновой аритмии у крыс \У18ТАК.. // Материалы II ежегодной научно-практической конференции с международным участием «Инновационные медицинские технологии в области неврологии и смежных медицинских специальностей». Москва 21 декабря 2011г. - с. 73-75.

16. Васильева ГЛ., Афанасьева Е.Ю., Арзамасцев Е.В., Борисова Е.Я., Иванова А.И. Современные антиаритмические средства.//Журнал «Врач». - М - №3,2012г. - с. 36-38.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

АИ - антиаритмический индекс (терапевтический индекс)

Б-46, Б-50, Б-104 - условные шифры изучаемых веществ

В/б - внутрибрюшинно

В/в - внутривенно

В/ж - внутрижелудочно

В/м - внутримышечно

ЕД50 или ЕОъо - среднеэффективная доза

ИК-спектрометрия - инфракрасная спектрометрия

ЛД50 или ЬВ5о - среднелетальная доза

ЛД50/ЕД50 или Ш5о/Е05о- антиаритмический индекс (терапевтический индекс)

ЛДш/ЕДм. - индекс Шнейдера-Брокка

То,5 - время полувыведения

ЦНС - центральная нервная система

ЭКГ - электрокардиография

'НЯМР-спектроскопия - ядерномагнитнорезонансная спектроскопия

Подписано в печать 12.03.2012г. Тираж 100 экз. Заказ № 494 Отпечатано в типографии «ДЦ «Каретный Двор»» 101000, Москва, Лубянский пр., д.21, стр.5-5а Тел.:(495)621-70-09 www.allaprint.ru