Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Анализ цитоморфологических последствий радиационного воздействия на фоне дистиреоидных

На правах рукописи

РГБ ОД

/ ^ ОКТ 1ЭЗЭ

Иодсшва Наталья Валерьевна

АНАЛИЗ ЦИТОМОР^ОЛОПШЕСКИХ ПОСЛЕДСТВИЙ РАДИАЦИОННОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ООПЕ

диспгРЕОндаьк состояний

14.00.23 т- гистология, шпрлопи, эмбриологии 14.00.16 — патологическая физкэлогив

АВТОРЕФЕРАТ диссертация на сснсгаииг ученой стгпеда кандидата медициной« нзук

Томке- 1999

Рсбота выполнена в Сибарсхом угднщо'схом уннясрсигос

Кгучлыг рузсогодктгяк:

доктор биологически: наук, х;рсфе;сор Ильинских Н. Н. докгор ксдицииских наук КселоаЮ.А.

Официальные оппоненты:

доктор мгдкцкл-жкх наук, профессор Пуликоз А. С. доктор нслгцзднсккх наук, црсфсссар Агифоноз В.И.

^.ацгг з^рсадкшс ■

Тюиёкскзя мглтаквскда акгдемин

3.'1Е1!гп1 состоктсзс?/ »1959г..е,

на згсгдгшш даоссртгциоююго сзкгга К 084.25.03 при Схонрскск исгащгсггкс ущсзсрс$;г«с (634050 г. Темсп, Московский трава: 2).

С дассгртггвсй можно озь-яксмяться г нз;,"гнс>-?лгд!Щ>аск'ой 6Н5.ТИОТЕ (^1фскогамсдш?гаггл{огсу7швсргуггг1г {534050. г. Томск, пр. Лекниа 107).

Азторгх-срггрезослаа

1599 г.

у чгныи сгпргтгрь тсс гргаатакиога совета кандидат ыгдкнинсхкх шух, доцгьт

РУ/5~ ^ / 0 5

А. В. Гсзаснмо.

ВВЕДЕНИЕ

Лхтуальпость проблемы. В последние годы проблема заболеваний, сея» иных с нарушением функции щитовидной железы, признана одной из аетуаль-гйших в медицинском и социально» аспехтах. Эта достаточно часто ветре чаю-аяся эндокринная патология определяет состояние здоровья населения и ян-!ллыпуальнмй уровень общества (Жуковсхий МА, 1995; Бвугг и, 1995; Ка-ггеинаЭ. Л.. 1997). '

Известно, что тйреоидиые гормоны занимают особое положение среди ?упсс гормонов. Они оказывают щшянве та различные функциональные сис-:мы организма (Рзчев Р.Р., Ещеии> Н.Д.. 1975; Розен В.Б., 1994; Шмидт Р., 1996; овицкий В.В, с соаат., 1997), воздействуя преимуществен.«) на индуишю и ре-рессию синтеза белков; регулируют процессы роста, развития и дифференци-звки тканей (Тай I. Я., 1963; Тхачук В.А., 1983; Држевецхая И.А.. 1937), атаке участвуют о формировании иммунного ответа (Лизтгргакт Ю.Э., 1980; Сотом , 1982; Епнщнн А.В., 1989). При гормональном днсбалансе йодшроияны мо-гг индуцировать геномные нарушения (Федорова А А, 1993; Ракешая В.В., ?95). Известно, что эти гормоны участвуют в регуляции адаптивных реакций зтанизма при воздействии неблагоприятных факторов внешней среды и влияют 1 противоопухолевую резистентность (Божхо АП.„ 1990; Розен В.Б., 1994). Бее го позволяет предположить, что изменение активности нштовддаой железы госит заметный вклад в формировагтг яммуногенсгяческого гемеоетгоа.

Одной из актуальнейших проблем сегодняшнего дня является исследовз-яе влияния некоторых физических агентов (конкзкрующей радиации) ка за&-эвье человека и животных с нарушенным тнреокдным гомеостатсм. Особый Перес прсдстг-вляет изучсние вопроса о спонтанных и индуцированных конн-фуюшим излучением цитопзтологических нарушевкях"в соматических и геке-1ТНЕНЫХ клетках человека и животных с дистиреокдными состояниями. Пора-ение генетических структур соматических клеток может «разиться на здоро->е человека; вызывать нарушенияфункциональнойактивности ¡слеток «тканей, юсобствовать перероаденхкх клеток организма из нормальных в раковые. Цн-«югически юменетсые генеративные клетки обладает более низкой сяособ-эстьга к оплодотворению. При этом увеличивается процент невыкалгивакия се» :мгнноста и количество детей с врожденной патологией (Соснозе Е. А, 1988; [амина В.П., 1993).

До сих пор неизвестно гак реализуется цитопатогеиное воздействие иони-фуюиего излучения на фоне дкетиреоидкых состояний организм! Взаимодей-зие этих двух патогенных фактороз может, иметь место в аварийных сктуапя-с, связанных с облучением человека в сочетании с поступлением а его озгаянзм

з-гйолкпяйспс изспопоа йояа (Касаткина Э.П., 1997).

Цель всслслозшгая - провести шггоморфологичсскин анализ последстш VwSimoijHoro ЕОздейстста на фоне дистиреоидкых состояний.

Для достижсвда «гям били поставлены следующие задачи:

1. Оценить in vitro кндудароеапнме нонюнруюшей радиацией ннтопзте .тггачгеккг изменения лимфоцитов периферической кревк больных с гкпер- ; пшзтирсозоы.

2. Оцг.чкть in vitro модифицирующее влияние трийодткроннна вз цитопа толсгапесхае дамснензи лимфоцитов периферической крови здоровых доноров.

3. Изучать в дниамихе цнтопзтологнчсские изменен»« клеток костаог sío.íra, печени нреяродукгнмдах органов у мышей, облучеюога в низкой (0,5 Гр iк ímsosoh {4 Гр) лтах, да фене гкпо- » гилергиреозд.

Нзучич» juismirç, В результате проасдснноп) ксслсдоваияя епервые i щт.ситьзошш^м cospevCKiiUx методов (шгголотческих, илп,экологических пре-ведена комплексная сценка осоагниогтек икгогшолопэн клеток хосшоп voira, печзнк, ргародуктканых органов к лимфоцитов периферической кров; , ipî! КрзйИКХ ДКСГИрЗОВД 1ЫХ состояниях.

Охарактеризована «орфофкзиодогнчсскля картина coswàCTUoro возденет û>:u тпреоиамах гсрмсказ и ионизирующего облучения. Найдена определенна) зазджмоэд цитогенсгаческоЗ стабильности соматических н геиераттдашх кп& гок млекопитакиаих or конаешрацна йодтиронинов как in vivo, так к ia «tro Установлено, что тмреокзиые гормоны способны модифицироезть мутагскнук т,^а~п.нтсдьность соматических и генеративных клеток организма млекопитгх* шях.

В результате проведенного исслсдоаанм получены новые знания фукла-ментального характера.

Праьгачеекзя значимость работы. Результаты исследования расширяют преггтзядвнке о шпигнии ногшзируюшей разкацми из организм человека в условиях ткреокдкой пзталогик. Неясность ксслтдоаиим определяется возможно-5tíio прогаозировмшз доаатнктсяьикх вдгтатогнчееккх ш.чснлбш у atîc, под-зсргаюаикся еоздсйстекк> ионизирующей радиации. Показано, что важюлес гтеблдгапризтш дла различных клеток ерпгшгача сочетание »иоких доз «окмзи-Х'югпсго издучгккя (0,5 Гр) с одновреыешш.« кгрушением тзгреоклного статуса Lrxci позволяет рекомендовать практическим врачам обраяить особое »нимашк нк свс-гаремеакос вкакеша к проф1'ЛЗКТж«-у еозкодсной тхреоидной патолог»«: у дкц, работающих с радксакгамсымя ясточникпми.

Осяо&вые положенно, вмносггкыг из зятату.

1. Дистиреокшше ахптшна у чсяокка conposcsci cnca повышением содержания лимфоцитов периферической крови с щпог^кетнчесюши нгругаеша-кн.

2. Трийолгнронип в условиях ia vitro обладает «утатешшн эффектом а отношении лимфоцитов здоровых доноров.

3. Патогенное влиюше ионизирующего излучения в дозе 0,5 Гр на фойе как гипер-, так и гипотиреоза усиливается; при этом увеличивается содержание шпологкческн-изкененных соматических н генеративных клеток.

4. Содержание соматических и генергптгых клеток.с цитологическими нарушениями снижает вра обличения а дозе 4 Гр на фоне как гипер-, так и гипотиреоза.

5. Восстановление нормальны» цитологических показателен при облучения шшеЗ с пики пресно« происходя- значительно медленнее в ерзапещш с контрольной группой и группой сппйЗпиреозом.:

Апробадпз работы. Осшзшдг положен:« рабегпл доложены и сбсу-кза-лнсь на П мезкдународаой нзучио-пракпкесгон msjepsnicnt "Безопасность жизнедеятельности я Сибири и на Крайнем Ctaepe", г. Тюие:», 1997; конференции, посвященной 35 - лялю ЦНИЛ "Меянкс^биолсгичесше згглгпт: цейро-гуыорзльиойрегудадкиж,г.Томск, 1997.

Публшсашш. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Объем а структура работтл. Диссертация изложена на 117 страницах и состоит нзвггдеккя, 4 пив, выводов й сп&ка л>псрату|рык Работа содержит 3S рисунков и 5 таблиц! Библиографический указатель включает 194 ксточшеа, го них 123 отечественных в 71 ююсфзнный.

МАТЕРИАЛ ИЛТЕТОдаЙССЛЕДОВАШШ

Объектами исследования в настоящей работе являлись доноры-доброволъпы и белке беспородные кыпга. Всо исследования били проведены в осенне-зимний период

Среди обследовгякых доноров были как Клинически здорозыа ягадп, так в больные с дйстареондкьога состояниями: гнгкь а гапергаргезом. Цктологпче-скнй в шгтогсяетяпескнЭ авалю проведен у 165 человек ("зггели г. Томска в Томской области) а возрасте от 25 до 65 лет.

Группа больных гипотиреозом состояла га 43 докороз, гру:ига больных гапгртнреозем - из 56 доноров. Группу гдчкпчески здоровых людей состазал 61 донор."

Материалом исследования дозоров служила кровь. Забор

крозп проводили из локтевой вены yvpou, пзтедгк.

л

Дисфункция щитовидной железы у пациентов подтзерасзалагь результзта-v«. -.г'орстэрных исследований. Содержание трийсцггирощша (Тз) и тироксина (Tj) в cKScpona; крови определяли кммунофермилиьш методом (табл. I).

Таблица I

Концентрация тркнодггронина (Т3) и тироксина (Т.,) в сыворотке крови здорова дсногив и больных с дистиреоидными состояниями (Х±го)_

Группа Концентрация Tj, Концентрация Тч,

кг/мл кг/мл

контрольная (п=61) 1,5±0,3 71,4±3,9

больные гипертиреозом (п=56) 3,б±1,1; РОД5 150,5±16,7; Р<0.05

больные гипотиреозом (п=48) 0.6±0,1; Р<0,05 42,0±5,7; Р<0,0S

Р-досговергость различий между показателями у больных с гало- н пшер-тиреозом я контрольной группой.

В работе также было исследовано 450 белых беспородных мышей-самцов, полученных из пктамниха Сибирского медицинского университета, в возрасте 812 недель, массой 20-25 г. Мыши содержались в стандартных условиях и получали полноценное питание.

Препараты, вызывающи« дистиреоидное состояние, вводили животным t течение 14 дней в утренние часы натощак Использовали L-тироксин и трийод-тироинн венгерского производства ("Reanal"), а также мерказолил - отечественный тгоггареоидный препарат. Используемые дозы гормонов и мерказолида, вызьшагоиах сботзгтстБгняо состояние экспериментального лшер- и гипотиреоза 5' мшвей, якшшеь стзвдгрпшки и общепринятыми в экспериментальной эндокринологии (Кабак Л.М., 1964; Ношвдай В.В. с соагт., 1997).

Гнперткреоз у мышей вызывали ежедневник введением per os с помощью зонда суспензии, содержащей Ь-тироксин (660 мкг/кг массы животного) и трий-одгароташ (160 мкг/кг массы животного). Для создания гиштиреоидного со-cicKHJw другой группе животных ежедневно с помошыд зонда вводили per os мерказолил - 30 ыг/кг массы животного. Состояние галер- и гипотиреоза у асах подопытных животных подтверждалось результатами шшуноферменпюго анализа, с использованием диагностических наборов и аппаратуры фирмы "Hoffinan-La Roche" (Швейцария).

После создания стойкого дистиреоидного состояния подопытных животных подвергали воздействию ионизирующего излучеше:,

Экспериментальных апшотных, а также периферическую коовь донопов в пластиковых шэобирках облучали а дозах 0.5 и 4 Гр. Рентгеновское облучение поизводили на аппарате РУМ-.17 з стшшштшых условиях: ü=20ü кй: i пич. чошность лозы 0.5 Го/мин: шильттш 0.э мм Си - t.O мм ai: «ожноюохусжч:

ояние 60 см.

Интастная группа не подвергалась облучению и юмеиеишо гормонялы»-ïryca. Были наделены котрольные группы, которые подвергалась только йствию конвоирующего излучения (0,5 am 4 Гр).

Животных дскатгтироиати через 96 и 336 ч (4 и 14 сут) после облучения, том осуществляли 22000 кроза. Части зкелеримегоальиых >;с;гасгп!ых за дза ю декалитации вводили кодхиции а дозе 5 глкг/ег.

Дчя проведения цнтс.черфологичегхого знллизз гсяользовали лнмфощгш кгрнческои кроан, клетки костного мозга зылагглдегигса из бгдргшых 4, сперматозоиды и сперматогонии, еыделсиные из егменшгкоа, а также >шпы. полученные из ткзни печем*..

Клеткитгостногомозгау мышей для проведения шгготкггачсского дглли-целяли стандартным методом (Гольдбсрг Е.Д. с созвт, 1992). На кзягдоу рате анатизироваля не менее ЮО мсгафзз.

Мазки костного мозга готовили стандартами методой (Гатумерг Е.Д. с 1992). На каждом препарате учитывали мнегоядерные вдета» п нпелок?-ты с патологическими митозами на 100 клеток, а тая» ик^еяаржматд с ядрами на 1000 клеток костного мозга.

Мазки-отпечатки ткани печени готовили сгыизртикм' «стадом (Гольдоерг соавт, 1992). При аиалгае ырлкоз отпечатков утажезяк катичгстаешюэ каике гепатодаггез с микроядрами, а тк-ск? и количество гздретзе« па 10*30

Реакцию бласттрансфсрмашк; лимфо:эгтсв (РНТЛ) 5я virto прозедияя с «агглютинином (ФГА) («ICN3, США) сбщеяряда-ш« мехедо« мина Н.Л., 1970). Из культуры лимфоцитов гстоаяли мазхн, фиксировали ноле, окрашивали азур И-зозином и на каждом препарате подсчитывали мфоцитоя, учитывая процент бластгрансфор^ирозаянтлй; и &туклгзрпкт: ых лимфоцитов.

<ромосомиые препарата готовили по методу Эвапсз (Evans Ш., 1S75). На ( га ш?х анализировали не менее 100 метаЬаз.

)ценку б:«»уклеарных вдтиаяозжпшдущфезаиннх лиыфсчягов с инкао-прсаодили по методу Лкндхолмз (Lmdhoîm С., 1991). I отдельной серии экспериментов изучали влияние Тч н мзрказояаяа яа анив лимфоцитов с цитсгенетячесгаши нарушениями з условиях in vitro, I каждой пробе анализировали не менее 1000 бинуклеавных лимшошпог ая бинуклеаоные лимй50шгш с мшязоядозми.

'леоматогенез v мышей окешгаали яо количеству апсоматочондск с пяо-я голоакой и содеожалию егтеоматогоний с микосяшзами. -лп «лсточяог:-гата семенника готоаиля гозепараты (Иванов Ю.В.. "979V На нажал« .с.

икя анализировали ас менее 1000 сперматогокни, отмечая все клетки с микрояд-раяу.

Из семекиок жидкости мышей готовили мазки обшепрншпгьде методом (Гсльдбсрг ЕЛ. с соавт, 1992) На каждом препарате анализировали ис менее 1000 сперматозоидов, отмечая все сперматозоиды с аномальной головкой.

Препараты окрашивали ззур П-эозкнсм по Нохга-Максимову стандартным, обшеиринстым методом (Годьдберг Е.Д., 1992).

Результаты ксследоагнкя обрабатывали Методом вариационной спггястн-ки с вычислением следующих параметров для каждой выборки: среднее арифметическое значение зелячккы (X), средксг- кйядргггичсскос отклонение средней Еслашагы (о), сшибки среднего арифметического (ni). Для псех выборок полученных даши-тх проверили гипотезу нормальности распределения по величине коэффициента асимметрии и эксцесса. Если эти коэффициенты по абсолютной йезяч1и;е не превышали соотестстгекио трехкратные и гатахратные значения их среднеквадратичных оталонетяй, ггрияняглась пшепгеза нормальности распределен!« случайной величины. Про&ерка гипотеза о рлвеистае средних проводились с нспольюзаикгм Ьафкгеркя Стмодекта. Различие двух. сравниваемых величии ечктглн догтегераык, еелн кроггиость кх тождества оказыаглзсь менее 5%(Р<0,05).

Кроме топ), дм отдельных выборок псполюаг-г.'М нег.'зр.аыетршгекий критерий Влшлксонэ-Маннг-Уитни в случае, если км елись отклонения распределений от роригльяого закона. Данные представлены в таблице как Х±т {epesuss ± срсдагкзазргтечная ошибка), ка рисунках отмечен доверительный интервал приР=0,05.

Автор, выражает признательность директору паликлянаки лрофосыотров Т.В. Сслоигшаой н зав. ддбораторкей иммуноферментного анализа Т.Н. Ва-сильейои за помоа» ъ проведении работа.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ ИИХ ОБСУЖДЕНИЕ

I. Шшшорфояогия лимфоцитов периферической краса у людей с rimo- п гняертнреозем

Результаты проведенного исследования показали, что язмевенне тареокд-ко"о статуса у люден сопровождается существенными отклонениями иитомор-фсяогаческих показателен лимфоцитов периферической крезк от нер.мм. При анализе исходного мерфофункикоиального соспгозеих дашфоцкгоз периферической хроаа больных с диспфеоианылш ссггоадшпдй выявлено сгатисттсчески достслграог пешшгнкг РБТЛ с ФГА у боды&гх. с высокой котаекгрзцней та-

реокдных гормонов в крови, (тонет бласпрансформации лимфоцитов составлял в среднем 43,6±3,2 %) в сравнении со здорс=ой группой (31.5±2,3 %, РО,05). Бласпраисфсрмзкия лкмфошгто» периферической кроки у болы:?,»* п;г>от -:ре зом била менее вырхкевз, чем в норме н составляла 22,7^1,9 % (Р'-0,05). П.-н гипотирсондлом состояния отмечалось таске существенное погьгасннг сэл-ржания спонтанных бинуклеарных властных лимфоцитов (5,1 ±0,8 %) в срз.«::еыи! со значениями в группе здоровых доноров (3,9л0,7 %, Р<0,05).

В хазе нашего исследования было установлено повышение содсрлдшиг лимфоцитов с аберрациями хромосом у больных гилстареозом в 2 рзза (5,5 ¿0,6 %), а у больных гилертнреозом в 3 раза (7,541,0 %) по .еравкенкю со зд<з?ски:;'л донорами (2,3±0,2 %, Р<0,05).

Просеченное исследование показало, что у больных с гипо- н гиц; ^•гир-с-зом было достоверно увеличено содержанке иатохмамю-индуцнрогзгпгих Сч-нуклеаршлх властных лимфоцитов с кнкроядраьв».,Кх-колнчестзо у я-.'р«»'.:?; составляло 39,8=2,9 Ъ, а у вторых • 37,5*2,6 а то время как з норме оно рзгня-лось 20,1=1,7 (Р<0,05). Известно, что шгкрояярэ гозникают в оедозкзм результате отставания одной или нескольких хромосом з про:;гссе деле::.'** идсг.си (Алев И.А, 1964; (Ьькпсигх Н.Н, 1992).

Б .Д. Соловьевым с ссз.тг. (1920) было установлено, что скижегеге функция щитовидной ;;:сл'-35л ведет к гарутде:г,но илтгрфгро:?осбразованга деккоиитамк кров к. Существуют сведения, что у-тггерфгрон способен стнмулирсаать процессы ДНК-репзрашм (Ззсухкнз Г.Д., 1979). А.В. Етжшн (1989, 1953) при исследовании Т-звена иммунитета пока?ал, что при гипотиреозе происходят уменьшение как процентного содерткаши лимфошггов периферической крег-и, так к абсолютного их чиста. Известно, что •¡■-интерферон вырабатываются Т-лимфоцитамм (\\Чтамн$ка-$1е'.угг: N5., 1951). Поскольку, многие цгггогенгт;-;1-::-скнг аберрации резко снижают жизнеспособность с-;с-ток (11дь<«гских Н.Н., 1990), по-видимому, некоторые ггнетнчгскя измененные лнмфс'гигы не способны к ФГА-бласттраксфермацшг и синтезу у-илтерферона при гипотиреозе.

Механизм образования яовыглекного содержанка клеток с аберрациями хромосом при коннеЕтрзции модтиронинов до сих пор не совсем

ясен, слизко высказываются предположения, что модифицирующий эффект тн-рео'лдных гормонов, может быть следствием прямого мзкмодейстгяж гормона с клеткой. Так. имеются данные (БеШт Ш\ «а а!, 1985), что г?реокдныг гормс.ча спосс'З'-л/. неег.ецифччгскя связываться б ядре с любым дсстуглшм учагггкзм ДНК.

В настоящем исследзкаакя было псказляо, что. трпйадпфоклй з кошзсп-тразии 1,9 нг.'мд, увглипяззет седеркзкке лимфоцитов с гберргтгнач« гсречссоя в культуре ляифешггов злороаых деггороз до 15,3^3,4 вря- ергдлкх дкзгк.гйдх

з ногтистых контрольных культурах 2,3 ¿ОД %*>. Эхот гормон повышал тазскг о дграсакяг бш!укдгаркых лимфоцитов с микроядрами почта п 4 раза (до 88 8 41«) по срзгксиию с контролем (20,1 ¿4,6 Р<0,05). Эти эксперименты сгид тепьстауюпг о том, что йодафонилы способны непосредственно влиять на с дггмфоштгоз с абсрргщтш хромосом и микроядрамя.

2. Ц'ггсморфолспю миелокарношгтсс, гспптоцптоп к гсяеративпьа клеток у мышек с гапо- и гнпергиреозом Результаты экспериментальных исследований из белых беспородных мз шах с индуцирозашшм гипо- и птгртиреозом показали следующее (Рис. 1-6). ксстном мозге у мышей с гипотиреозом было установлено достоверное повыш гаг содержания многояцгриых клеток костного мозга до 5,3 ¿0,7 %, при знзч шкх с контрольной группе животных - 2,8±0,4 %, (Р<0,05), а также миелокари щггоа с патологией митоза (в 3 раза, Р<0,05) и аберрациям« хромосом (с 1 раза, Р<0,05) (Рнг. 2.4).

У мышей с гнпертиреозом предает много ядерных мнелокариоинтов ] отличался от контрольных значсш'А, однако в костном мозге животных эк группы достоверно повышалось содержание клеток с . патологическими митоз мн (о 2 раза, Р<0,05) и аберрациями хромовом (в 2,5 раза, Р<0,05) (Рис. 2,4). , Повышение содержания ыногоядгрных мислокариоаитрв у мышей с эк перименгальяым гипотиреозом, а таюкс увеличение содержашм спонташн бластных клеток у болыых гипотиреозом, возможно саязако с нарушением си теза белков, принимающих непосредственно». участие с деления клеток. Вере.' по, сдор!>.енк<2 акгаваоггк РИК-яолимерззы, свойственное дадостаяу йодтнр никоя (Тага Д.К., 1963), способствует дефнцигу'комгпекса белков участвующие цетотомкк и, еозможно, белков ь;его ферментативного комплекса митотичес» го цикла, Поношение содержания ¡асто;: с пстологичссгагми митозеун при I перпфеозе, по-видимому, связмю с тем,, что кх количество увеличивается фон;- ьозргстаиил синтетической в нятоткчссюк активности (Розен В.Б., 3 9£ Шмидт Р., 19Р6; Ней шмш В В. с ссавт., 1997).

Содержа^« клгток с микрондрами прч изменении тирсондного стагу заметно увеличивалось также и в печеш! подэпггтьи: мышей (Ряс. 3), У жяв< ных с гипотиреозом эта величина составила в среднем *4,0±0,5 %о (Р<0,05), с мьппся с гипотиреозом - 6,0^0,5 %> (Р<0,05) при значениях в контрольной труп 1.3=0.4 ?■£„.

У мыиец с экспериментальным пшошреозом было обнаружено наруд ■ж с.^рматогеиеза (Ри;. 3, в). При этом у подопытных животных аиачихель увслатиг-хтось содержашм сперматогокиев с мккроздрами (в 1,5 раза. Р<0.05 лкрматозоидоь с аномальной головкой (з 3 раза, Р<0,05) по сраснс'.жо с ! гакгаым контролем. При пшертиреозс у мышей кагозх-лнбо отклонении в ог

•о

«зрфологин генеративных клеток пайдено яе бько.

Полученные результаты могут укачивать т то, что нодтхрсикпм необ;;о-зшы для нормвдького coipesamw половых клеток. В клетахСгртолн еннтези-lycrcs анлроггисвязысзязаппТ: бело< необходимый для транспорта и кони.гнтра-вш патовых гормснос (Држеченкля ИА, 19S7), Вграгога, сшсксшге синтеза ¡елка при гипотиреозе может ?ести к нзрушсютЭ работа ¡¿четок Ссрталя и, та-сим. образом, алиять на соде-рг'гание сперматозоидов егкомалшы.мяголопгсгчк три гипотиреозе. Яе ясклю-кно также, что увгл^сни^'спгрматозэгаоя с аномальными гояоакзмм сиязаио.с активацией процессов :iíepíXKCJ»o«> окигленше 1МПИЯ03 (ПОЛ), что .достаточно .характерно. дтя гипотиреоза. .Извссто, что та-токсин обладает а!т'оксидг!Ш1Ь!м дгйствк£м -я. способен, «мпшировать ПОЛ Владимиров, 10. А., 1978).

3. ЦптомбрффоТ5ЛЛ1гм-фэгв^ пси

облученнн in vifro ид фрнс г.чпо-исигкрпфгпга.

, Результат проведенного исследования похгззли, что рззяхгшьгг дозико-кизируюшего излучения (0,5 н- 4 Гр) т5Л)!Яют;'па интаморфо.топло дим-фоцтез периферической крови больниц сдислфеоиднии!» соахжртгя на дзишков».

После облучоша периферической крови больных; как с пгпер-, та;г п с пг» потнреоидным состояниями дозой 0,5 Гр было установлено ■достоверное повышение: содержания, лимфодатов с a.Ceppí^jsMK >фоногом.а. сраь!1е!Гйл с группой здоровых доноров.У больниц (Гпизопфеозомзтопгпоет^^ 15,7±1,8

%, а при пшерт>!реозс - 21,3±2,á %, г то гремя. етсв:.шпрольи.ой. группе - 5,0± 0,6% (Р<0,05). • .; -V;''-- ■'■'•■ .V.yy V; ' ' ."■•у.-. :. ■

При облучении перкф^нч.есте'гировт^^л!.!!^ гяпер- и ;т?:потервсзои дозой 4 Гр, еыхрд лимфоцитов с аберрациями-хромосом был, иро&зрег, ниже контрольных значений и 'соотоетстзовал в ггсрзом сл>?1ае 3Q.5¿2,0 ^^ а.Г'О Еггором -33,1 ±2,6 %. а то вргмя >;ак в норме * 43,7^2,9 % (Р<0,05). По-видимому, наблюдаемое нами.сниженив содержания лимфриитсв е аодамв'хромосом связано с гибелью поражгниых лимфоцитов пр»'обау^сна» в дозе 4 Гр. Возможно, также, у пораженных клеток угиетг.гтел способность к делению. «ели нарушения затрагивают ту часть гешм^ когора* .отвечает за вступлсияе кяшп п сагтета-ческую фазу. .. . -

Содержание нитохалазтг-к'йуцирозатгых окнуклезриых лимфоцитов с мнкреядрами у больных гнпгр- и гипотиреозом после облучения периферической крови з дозе 0,5 Гр на претерпевало существенных взкенвкий, оставаясь на уровне значений контрольной групгхгл.

;ИЁ£1

Рк.1. Содерааигие многоядгркых. клеток костного мозга у мышей, .облученных ъ дозе0,5и4 Гр ид фоне дцеткреоидкых состохшт. . - .

[ О* сут.

вМсуг

Соаержаийс ."¿агток костного ыоагз с патологией ыкгоза у мишек, оал>чсн2я>пс'пдсзеО,5й4Грнл фоне дастарго»:диихсостэя-Шз:. V -

| 0»сут

Е'Нсут

РксЛ, Содержав« гепзтоцитоь с мшфоядрзмк. а печена у ыкдгек, облученных а дозе 0,5 я 4 Гр 1а фоне .днсгареошагьгх соскхгккй.

и

В то же время после облучения периферической крови больных с дистн-реоидными состояниями » дозе 4 Гр установлено значительное снижение содержания бинухлеарных щггохалглин-ивдуц>фОвл1шых лнмфонктоа с мчкроялрзми по сравнению с контрольным« культурами. В группе больных гипотиреозом эти значешмг составили 110^15,8 9м, в группе с гипотиреозом - 94,0±12,5 в

бозначения групп на графиках располагаются в следующем порядке

ггактный; гипергиреоз; гипотиреоз; 0,5 Гр; 4 Гр; гипертиреОз+0,5 Гр; пшергиреоз+4 Гр; шлотиреоз+0,5 Гр; гипотиреоз-

нтроль

. После жиасй с экпгркме1ггал^кым гипотиреозом дозой 0,5 Гр

содержат» митозами сосгааляло на 4 и нз

14 сут ссответствето 15.S+I.8 % я 8,4 ±1,J что было-'достоверно вьодс (Р< 0,05) ^алогичных показателейз котролькой группе (см.'тика).-

• Подобна« данамнкаэтогопёказетела бмлз ycrairolieiia и после облучения той »ж дозой мышей с ¿таерттфешом.- На 4сут посла разизоиоююго воздейо jais чкало М!Кло4аряоШгт0в'спататоп<ческ^и мнгозал^ !ЗД±

1,4 %, на 14 суг - 3,4x0,5 %, в то время как в контрольной облученной группе -соотаетсгсенно 9,6±1,1 % и 5,1±0,7 % (Р<>,05).

:. Кзобброт, после облучения кодояыпшх жидопшх дозой 4 Гр было установлено, что содержаний клеток костного мозга с пазаяопстескими митозами достоверно' ниже Ь сразнегам с контролем: Так, в груше с гипотиреозом это значение составляло на 4 сут-14,3±1,5 % и нз 14" cjt - 10,5±1,9 %, а в коетроль-иой облучсшой группе в эта :хе сроки i 30,3±3,8 % i'. !4,4±1,7 % (Р0.05)» соответственна При облучеггкй той же дозой (4 Гр) ждартных с экспериментальным гипсрткрсозом содержание миедокариощгтов с птгололгек ш-ггоза также досто-веряо.уме.Чьгпалось из 4 суг (16,7±2,0 %) н на 14 с>~ (10,8 ±1,2 %) б сравнении с контрольной группой жнкоткых (Р<0,05).

Изучение влияния ионизирующей радиации ira «держание киелокзрио-шггоз с аберрапиями хромосом показало» что доза 0,5 Гр достоверно увеличивала число клеток костного мозга с абфрахтами хромосом у каплей как с гипо-, так и с пшерпфеозом (Рис. 4).

Облучение жквоттшх с экспериментальном птотарсезом в дозе 4 Гр на 4 сут эксперимента пригодкяо к достоверному умагьшекгао содер:какИя ииелока-рнецнтов с зберрсякяки хромосом (до 46,3316,3 % по сразк-.-да.ю с контрольным значением 58,3±7,1 %,-'Р<0,05), однако в дзльнейЕем (к. 14 сут опыта) у под-спёшо» мьаиеЗ'отасчалось.замедлса» дкиаггйж'пормайкззтзгя зтого сойаза-

теля по среткеголо с облученным контролем (Рнс. 4).

- * ■ . *. • -

13 '

фвд£СГйсш1ое агиошшс ;содсрзгани« ;.*ssptrçnç клеток костного мозга с -aScppaasuîMH хромосомбидо щщено у э^слерам^гпиькых аданпнмх с гипер-. ткреозом после облучен;« s дщ 4 Тр на 4 суг опита н далее - на 14 сут s сравнении со зшченячми показателей контрольной груплы (Р<0,05) (Риг, 4).

Содержание гепзтещггов с зющадрзми после облучен!« в дозе. 0,5 Гр на фон? дкегареокдаедх сост оят«! было достоверно увеличено: при гипотиреозе яа 4 суг - 5,8±0,9 а г;ри, гипертиреозе «а 4 сут -6,3+0,6 %i'u 14 суг - 5,S±0,S %*, в то время как а котрольиой группе с зги'же срок» - 2,3.40,3 ?« и. -2,940,3 % (Р< 0.05), соответственно (Рис. 2).

После облучеш« мышей С эксперименхалышм пето- и птертиреозом дозой 4 Гр установлено,. наоборот, достоверное понижение содержания гслагоци-тоа с миь-раглрамя: при гипершреозе - из И сут.(6,641,2 Ко), а:при гипотиреозе как на 4 сут (7,7*1,9 ЗД так и 14 сут (6,811,7 З^.йри зигче-тлях б контрольной группе s >тн же сроки эксперимента 12,642,8 %о и 10,641,2 % (Р<-0,05), соот-: вгтстЕС!о«о (Ркс.З).

В процессе изучения влиявдя ионизирующей радиации на сперматогенез у мышей нами было показано; что доза 0,5 Гр достоверно, увеличивала количество сперматозоидов,с аномальными головкзмк на фоне, как низкой, так и высокой концентрации тиреоианых гормонов в кровй. зЬспсрйме1ггальных' -животных в ерззнешш с контрольной, облученной группой (Piic. 5). Так, в группе с экспериментальным гипотиреозом содержание сперматозоидов с аномальными головками на 4 сутбыло увеличспо з2,7 раза,иа 14 суг - в 2 раза (Р<0,05), а в группе с птертарерзом "состаетстшшо а 4,3 и 3 раза по. сравнсиню с контролем (Р<0,05); (Рис.5). ; __ ' ' -

• ано-. ■

мальньгмц.грлоакгмн дос^ггерно;р1еньп1адось:у животных k3jj .ç гкпо-', так и с птертиреозом (Ркс. 5). ..." :

% '■ "" . . I 04еут * 531« сут

т

... кн ,

«

' IHV

.rw.....Ы..ГШ „„"Ъ,;.,.

Рис.4. Содержание клеток с аоерралиякк хромосом в костном мозге мышей облученных в лозе 0,5 и 4 Гр на фоне диспгоеоиднъпс состояний.

Рис.5. Содержание сперматозоидов с аномалиями голове* у мышей, обяучен-

Ркс.б. Содержание спгризтогоние» с мнкреядрами у мышей, опдупекяых в дозе 0,5и4Гр на-фенедагтаргокда« состояггий.

Оценка цптогенсткчсс::я,\ нарушений и слерматдгогамх с помощью мих-. роядернэго -геста показала следуюа:ее. После оаяучеккя з:слотт.;х с экспери- . метальным гипертиргозом s дозе 0,5 Гр содср;;;з1гис-гперматогзтп[ее с мнкроядрамн достоверно повышалось по сравнению с аггалогачикки- яоказзля-ми в хйгсрельной группе на 4 суг з 2,7 раза, з на 14 суг - в 3,5 раза (РО,05). При гипп-:?:р'.-032 яодобное увеличение €кяо найдено только на 14 сут (в ¡L5 раза, ?< 0,05) (Ряс. б).

Облутетае п дезе А Гр, наоборот, сопровождалось сугцестзеяным снижением содержанки сперматогониез с микроадрами как кз фоне гало-, так и ка фоне гсшертиреоза но ses сроки наблюдения (Рис: 6).

Таким образом, нарушение тяреокдного статуса организма способстаозй-ло усилению цигопатогекного воздействий ионизирующей рапиалик з дозе о-Гр на сперматогенез у мьппей. Для состояний гипотиреоза, кототюе само пп сгае

неблагоприятное слияние на сперматогенез, cjati хсракарен аддитив-u:зффскг. Нгблагопршгпшс последствия слабого облучения га шпоморфоло-г,но гскератм&иых клеток суммировались с таковыми, вызванными недостатков '¿едздрзникэв. Состояние гипергкреаза, не влиявшее на сперматогенез само пс гесг, ь сушествсннэк степени сенсибилизировало генеративные клетки к патогенному воздействию низких доз ионизирующей радиации. Логичнее всего зте мажет штгснгггься кзлеетмым калэрнгенним слиянием йодтнронипов, которое связанно е усилением потребление кислорода клетками организма и ролью кн-слсргдкзго эффекта s патогенезе лучевого поражения (Дубинин Н.П., 1966; Эй-дус Я.Х., Корыстиа Ю.Н.. 19S4; Хансои К.П., Комар В.Е., ICS5; Ксггл Дж. Î9S6),

Вместе с те:* доза 4 Гр оказийала на сперматогенез у животных с дисти-реоиднкми состояниями менее выраженное патологическое ьоздействие, чем j контрольных жкеотных. Пошо.г-нне содержания аномальных сперматозоидов t снерматогоннсЬ с м»нфоггдрзмн при облучении е дозе 4 Гр на фоне гнпертиреоз: v.cvcr был. слазгшо С йпткокекдамтлым действием ттгреокдных гормоног Е.Б., 1975). Иэгесгпо, что суперокси;va;с\:ут(СОД) кошкжет . KoaiííinpauKíO мутапгнкогто Ос-ралшезла з клетках (Fiidovich I., Î932), а при ese-кздгирониноа актпзность СОД поаыагастся (Божко Л. П., 1990). По мне ш-ж» некоторые автора» (Paies P.P., Ешс»шо Н.Д., 1975), зиреовдкые гор.мснь акгмзкр>тот также ггентозофосфатный аунт.тсм самым пополняя виутрнклегоч-и«е запасы КАДФчН;, необходимого для процесса регенерации глютатноял, игравшего важную роль ъ агаюкендактэн захайте.

Против с-лучгксе дейстаке Xi s условиях in vivo было установлено Е. К AîrnjîieHKO с сопат. Í1953) и А.И. Бзркадая (1977). Важно отметить. что ь этю зксперимг}гт£х, TKpOKCKîî вводился лишь после облучения. Высказывалось пред положение i л;ггипсжо Е. H.. 19S3. 19S4). что уменьшение количества клеток » ;.'г>1>мосйшпс1:;: аберрациями у зиготных, получавших Та в этот период, можг ахгть следствием стимуляции этим гормоном репарационных процессов.

Уменынекие содеркгннх аномглысых спермзтозокдоэ к спсрматогониев < микроадргмя после облучен;« s дозе 4 Гр ja фоне тгшотлрсозз, скорее г.сега может объясняться снижением пепре-блеккя кислорода тканями организма, ч-п СЕонствснно для недостатка нодтйронинов. Вероятно, на фоне этого гормсналь жго состсянк?. & ззметней стспекн ослабляется кислородный зс>фскт, которьп sïïuï.îsct i;:-;:ciioe место s патогенезе радиационного поражения. С другой стОро вы, с.гаксские синтеза белка, сеснсдведнее шпотнреопдно;.^' еоетеяш-зо, воз при-гытствует анншгп!»: апсгптттеско« гнбелк клеток после возденет вжрцднапяй (Нсвккед B.C., 1996; Умакскзй СР., 1955).

:aiíoтрсniir~s механизмы модкфшнр>ток:--2Х! дгйгтьия шло- и пн;;*рп<

реозз кз шггоморфолспгю генератквшлх клеток после радиационного воздейет-вия могут быть в знзч!гхелъной мере перенесены и на соматические клеп.и организма, поскольку' в нсследовз1Я!Ых нами мнелокзриоцитзх и ггпатоц..тач у пол-?пыгных живал гых огмечзлнсь сходные дозозавист{ые нарушения.

ВЫВОДЫ

1. При днстиреоидных состояниях наблюдаются 'морфологические нарушения ядерного аппарата сомаппеских н генеративных клеток организма млекопитающих и изменяется чу&етэктелъиость этих клегок к мутагенному действию жинснгруювдек ргзкзции.

2. У больных с дистирсокдными состояниями (гипо- и гиперпгреоз) [завышено содержание лимфоцитов с ми?-роядра>ди и стру^уршиш нарушат«-ми хромосом.

3. Облучение, в условиях :'п «Сто, периферической кроля п>-пер- и гипотиреозом в дозе 0,5 Гр гь-зыаагт повышение, а з дозе 4 Гр ксгос:.-е-НИ5 содержания л1!?;фсщ'.тоа с иггтогелсг.пгсскймя наруагешимм.

. 4. В условиях культуры лимфоцнгоа, патученных от 'засго^ых ^ : .=лре», озедекна трийэдтеронина в хониенгрзиии 1,9 нг/?,а, увеличивает кслачгстзэ лзгмфощггоа с микроядрами и со структурными нарушениями хромосом, а введение мерказолилз ке пр)скшт к таким послсдстеням.

5. Введение йодгирониноа белым беспородным мышам вызывает повышение содержания клеток с хромосомными аберрациями, патологическ!1Ми мнтозами и микроядрами в костном мозге, а также увеличение содержания гс-патецитоз с микроядр&чт.

6. Введение мерказолклз белым беспороден мышам поаышает содгр-хезиие сперматозоняоэ с аномальной голог.кей, сг.ерматогоний с микроядр-ки, клеток с хромосомными аберрациями, патолопггеекдага митозами и ыш-роЕДрами в костном мозге, а также содержание гепатоцнтов с микроядргмп.

7. Введение йодгкронинов сгаккаег у облученных в дозе 4 Гр мышей, тесло клеток с тггогенетичеекнмн нзменеггетмн в костном мезге, печепл я семештакгх во все сроки наблюдения.

&. Облучение белых беспородных мышей г дозе 0,5 Гр на фоне вгеде-$£кя йодтирегоетоз к меркгзолнлй на 4 и 14 суг эксперимента ¡гызызазт лгш-

числа клеток с щггогенгтнческими нарушен!« мл в костном мозге, печени и семенниках.

9. При прегеигиЕном ззеденйн меркззолшга белг.тм беспородный мышам, облученным в дозе 4 Гр, наблюдается ка 4 суг сшпкекке, а затем, т»з 14 :ут повышение числа клетод с ггпогекетатссюши гсарушгниамн в костном :-озге.

СШ'СОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иванова И.В., Илышсккх H.H., Козлов Ю.А, Иванчук И.И. Цитогс-негические изменения при гипер- и гиготиреокдных состояниях у экспериментальных животных / 2-ая Межзународная научно-практическая конференция. Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на Крайнем Севере. -Тюмень, 1997.-С. 53-54.

2. Иванова Н.В., Ильинских H.H., Козлов Ю.А, Иванчук И.И., Агеева Е.С. Мутагенез в генеративных клетках на фоне гипеотиреондных состояниях / 2-ая Международная научно-практачсскзя конференция. Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на Крайнем Севере. - Тюмень, 1997. -С. 52-53.

3. Иванова Н.В., Ильинских. H.H., Козлов Ю.А, Иванчук И.И., Васильева Т.Н. Оценка содержания цитогеиетичесхих нарушений у больных с дисти-рссад;ыми состояния?..'« / 2-ая международная научно-практическая конференция. Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на Крайнем Севере. -Тюмень, 1997. -С. 54-55.

4. Иванова Н.В., Ильинских H.H., Козлов Ю.А, Иваггчук И.И. Содержание эритроцитов с микроядрами при гииер- и гипотиреоидных состояниях у оксперимеизальных животных / Мсдико-биологическис аспекты кейрогумо-радыюй регуляции: Труды конфер. поевлщ. 35-летию ЦНИЛ. - Томск: СГМУ, 199S.-С. 281-282.

5. Иванова Н.В., Ильинских H.H., Козлов Ю.А, Иванчук И.И„ Агсеаа Е.С. Мутагенное вякание ионизирующей радиации га фон» гипертиреоидных состояний / Медико-биологические аспекты нейрогуморальной регуляции: Труды конфер. поСвящ. 35-летию ЦНИЛ. - Томск: СГМУ, 1998. -С. 282-283.

6. Иванова И.В., Ильинских H.H., Козлов Ю.А, Иванчук И.И., Васильева Т.Н. Оценка содержания спонтанного мутагенеза у больных с дистирсоид-нт.шл состояниями / Медико-биологические аспекты нейрогуморальнок регу-

ляции: Труда конфер. посыщ. 35-летаго ДНИЛ. - Томск: СГМУ, 199S. -С. 284-285.

(¿7