Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Анализ низкомолекулярного состава препората церебролизин и его воздействие на элементный Гомеостазмозга крыс при различных способах введения
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.25
Оглавление диссертации Катаев, Александр Станиславович :: 2009 :: Москва
ВВЕДЕНИЯ
14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология диссертация на соискание учёной степени кандидата медицинских наук
Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор О.А. Громова
Москва
ОГЛАВЛЕНИЕ
ПЕРЕЧЕНЬ УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА I ЦЕРЕБРОЛИЗИН: АНАЛИЗ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ КЛИНИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ.
1.1. Нейропептидный и аминокислотный состав церебролизина.
1.2. Макро- и микроэлементный состав головного мозга.
1.3. Макро- и микроэлементный состав церебролизина.
1.4. Церебролизин и металлотионеины.
1.5. Жирнокислотный и липидный состав церебролизина.
1.6. Пути введения церебролизина и его фармакокинетика.
1.7.Влияние церебролизина на функциональное состояние организма.
1.8.Доказательные исследования эффективности церебролизина при неврологических заболеваниях.
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Объект исследования.
2.2. Методы исследования неврологического статуса.
2.3 Определение содержания микроэлементов в мозге у крыс.
2.4. Экспериментальное моделирование ишемии головного мозга.
2.5. Определение пептидной фракции церебролизина.
2.6. Исследование уровней металлотионеинов.
2.7. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Неврологический статус обследуемых животных.
3.2. Мембранная пептидная фракция церебролизина.
3.3. Молекулярная масса пептидов церебролизина.
3.4. Сиквенс выделенных фракций пептидов.
3.5. Жирнокислотный состав церебролизина.
3.6. Содержание фосфора в церебролизине.
3.7. Нейропротективная роль церебролизина:микроэлементы.
3.8. Нейропротективная роль церебролизина:металлотионеины.
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Катаев, Александр Станиславович, автореферат
Чрезвычайно высокая распространенность цереброваскулярной патологии, инсульта по всему миру и, в частности, в России, привлекает значительный интерес к поискам препаратов, защищающим нейроны от воздействия ишемии. Нейропротективные и нейротрофические препараты открыли новые пути в увеличении потенциала выживаемости и реабилитации даже для тех больных, кто поступал позже трехчасового критического окна от начала цереброваскулярного инцидента (Гусев Е.И. с соавт., 2009, Скворцова В.И. с соавт., 2008, Яхно Н.Н. с соавт., 2008; Максимова М.И. с соавт., 2009).
В неврологической практике, наряду с синтетическими нейропротекторами, применяются лекарства, полученные из природного сырья растительного или животного происхождения. Наиболее известны и широко используемы цитофлавин и билобил (производимые из растительных биофлавоноидов); актовегин и кортексин (полученные, соответственно, из крови головного мозга телят и свиней) и церебролизин, производимый на основе экстракта коры головного мозга свиней до шестимесячного возраста. В связи со сложным составом и отсутствием стандартизации по каждому из компонентов, у многих препаратов природного происхождения не известны или слабо изучены фармакокинетические параметры. В большинстве случаев, производители предоставляют лишь общие характеристики препаратов, ограничиваясь указанием количества только наиболее важных действующих веществ, входящих в их состав. Более того, информация о примесях в препарате часто либо отсутствует, либо частично представлена. В то же время, совершенно очевидно - информация примесях (в ряде случаев, потенциально токсичных) крайне важна для оценки целесообразности использования препарата в клинической практике.
Наиболее известным и широко используемым из препаратов природного происхождения является церебролизин (FPF-1070) (Ebewe, Австрия), приготовляющийся на основе экстракта мозга свиней. Церебролизин известен как препарат с нейропротекторными, антиоксидантными и нейротрофическими эффектами. По данным электроэнцефалографии (в эксперименте), церебролизин улучшает функции головного мозга, например внимание и рабочую память, после его повреждения (Alvarez Х.А. et al., 2003). Методами современного молекулярного анализа было показано, что в состав экстракта для производства церебролизина входят свободные аминокислоты (более 80%), низкомолекулярные биологически активные соединения (15%), включая олигопептиды и, также, целый набор микроэлементов. Приготовляемый на основе экстракта препарат церебролизин строго стандартизирован фирмой-производителем по молекулярному весу пептидных компонентов и по аминокислотному составу.
Так как препарат практически целиком состоит из низкомолекулярных фракций, он относительно легко преодолевает гематоэнцефалический барьер и доходит непосредственно до нервных клеток. В этом заключается отличие церебролизина от экспериментального использования факторов роста нервов (NGF, BDNF и др. Fumagalli F, 2008), крупные молекулы не могут преодолеть ГЭБ (Sugrra Y. et al., 1993) и, как следствие, обладают крайне ограниченным терапевтическим потенциалом. В тоже время, высокотехнологичный процесс приготовления предохраняет нейротрофические свойства экстракта. То, что препарат проявляет активность ростовых факторов, подтверждается его способностью оказывать влияние на спраутинг и увеличение жизнеспособности нейронов (Satou Т. et al., 2000; WindischM. et al., 1993). На различных экспериментальных моделях с повреждения головного мозга добавление церебролизина в культуру ткани приводит к существенному увеличению нейрональной жизнеспособности (Hutter-Paier В., 1996).
Следует отметить что, несмотря на значительное количество клинических исследований, подтверждающих нейротрофную и нейропротекторную активности церебролизина, отдельные механизмы его действия не были известны. Ситуация значительно изменилась лишь в последние годы, когда появились новые данные, основанные на использовании современных лабораторных методов исследования. К данным эффектам относятся, прежде всего:
• Влияние на гомеостаз микроэлементов,
• Нейротрофическая активность подобная факторам роста нервов,
• Антиоксидантный эффект,
• Антиапоптотический эффект,
• Увеличение уровня белка МАР2,
• Нормализация обмена нейротрансмиттеров.
Так, была показана способность церебролизина влиять на гомеостаз микроэлементов. На основании экспериментальных данных стало известно, что церебролизин предупреждает повреждение нейронов, обусловленное токсическим действием свободного железа (Hutter-Paier В., с соавт., 1998), эксайтотоксичностью и активацией перикисного окисления липидов (ПОЛ) при мутации аполипопротеина Е (Veinbergs et al, 2000).
В целом ряде исследований была подтверждена нейротрофическая активность церебролизина, сходная с активностью естественных нейротрофических факторов. Так, например, при систематическом удалении ингибитора роста аксонов посредством моноклональных антител из фокальных ишемических поражений у крыс наблюдалось (Papadopoulos, 2006) более активное ветвление дендритов и плотность новых аксональных отростков нейронов обрабатываемых данными антителами. Действие церебролизина по своему конечному эффекту и его выраженности напоминает действие фактора роста нервов (Windisch М., 1998). Было доказано, что после перерезки бахромки в эксперименте свода головного мозга, ведущее к дегенерации ацетилхолинергических нейронов, введение церебролизина очень быстро существенно уменьшает выраженность мнестических нарушений.
К антиоксидантному воздействию церебролизина относятся защита клеток от повреждений, вызываемых глутаматом и иодацетатом (Gutmann, 2002), высокая общая активность супероксид-дисмутаз (Громова, Панасенко 2001), индуцирование экспрессии металлотионеинов 1 и 2 (Ramakrishnan S et all, 1995) и стимуляция экспрессии гена BBB-GLUT-1, специфического транспортера глюкозы (Boado R.J., 1999).
Антиапоптотические эффекты церебролизина проявляются как ингибирование активации глиальных клеток мозга (Lombardi, 1999), торможение апоптоза кортикальных нейронов провоцируемого стрессорными факторами и, в то же время, стимуляция роста кортикальных нейронов в культуре (Tayebayashi Y. et all, 2000), снижение количества апоптирующих клеток после стрессорного воздействия, ингибирование калпаинов что защищает цитоскелет нейрона (Wronski, Tompa 2000).
Экспериментальными исследованиями доказано, что на фоне действия церебролизина увеличивается уровень белка, ассоциированного с микротрубочками-2 (англ. - microtubule associated protein-2, сокр. - МАР2) и снижается образование фосфорилированного тау-протеина (Schwab М., 1998, Tatebayashi Y., 2000). Цитоскелетный белок МАР2 играет важную роль в жизнедеятельности нейронов. В основном, этот белок локализован в дендритах, а его изменения являются одним из наиболее чувствительных и ранних индикаторов развивающейся ишемии поврежденных клеток, которая предшествует возникновению необратимых изменений нейронов. В эксперименте на культурах клеток было показано, что церебролизин уже в малых дозах препятствует снижению уровня МАР2 в условиях ишемии (Windisch М. et al, 1997, Hutter-Paier В., 1998).
Церебролизин нормализует нейротрансмиттерные нарушения. Н. Xiong et al (1995, 1996) показали, что в эксперименте влияние препарата на структуры гиппокампа осуществляется путем непрямой (связанной с освобождением эндогенного агониста) стимуляции аденозиновых рецепторов. Аденозин является мощным тормозящим нейротрансмиттером, угнетающим выброс глутамата из пресинаптических терминалей. Экспериментальные данные также дают основания полагать, что церебролизин увеличивает плотность синапсов и индуцирует нейрогенез в области гиппокампа (Baskys А., 1994, Windisch М., 2000, Tatebayashi Y.et al., 2000). В частности, нейтрализация церебролизином нейротоксического действия глутамата имеет особое значение для нейропротективного эффекта данного препарата. Эксайтотоксичность глутамата известна по крайней мере с 1957 года, когда в работе Lucus (1957) было показано токсическое действие глутамата натрия на головной мозг. Позднее была предложена эксайтотоксическая гипотеза нейротоксичности Olney (1980) и проведены первые попытки первые попытки нейропротективной терапии Hossmann (1982), Simon (1984). Было доказано, что церебролизин предупреждает повреждение нейронов, обусловленное эксайтотоксичностью (Veinbergs, 2005).
Но, несмотря на стандартизацию препарата по аминокислотному составу, не говоря о повсеместном применении церебролизина уже более 20 лет, существует ряд насущных вопросов касающихся реального состава препарата и наиболее эффективного способа введение препарата. Экстракт мозговой ткани свиней, используемый для получения препарата, имеет исключительно сложный и многокомпонентный состав не только по аминокислотам, но и по жирам, макро- и микроэлементам и т.п. Макромикроэлементы могут попадать в церебролизин в результате цепи превращений: «почва-растение-пища-животное (свинья) - производственный процесс - церебролизин». Наиболее интересными исследовательскими вопросами, на наш взгляд, являются следующие:
A. Изучение состава олигопептидов в препарате.
B. Тестирование препарата на остаточные фракции жиров,
C. Влияние на уровни металлотионеинов, антиоксидантных белков,
D. Выбор наиболее рационального способа введения препарата в целях получения максимального эффекта его действия.
Таким образом, дальнейшее углубленное изучение состава и фармакологических свойств препарата церебролизин является актуальной исследовательской проблемой, решение которой позволит значительно глубже понять механизм действия препарата и расширить область его применения.
ЦЕЛЬ НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
Выделить из состава церебролизина пептидные и липидные фракции, идентифицировать их компоненты, изучить влияние препарата на элементный состав и уровни металлотионеинов головного мозга крыс при различных путях введения.
ЗАДАЧИ НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Выделить пептидную фракцию церебролизина;
2. Определить молекулярные массы пептидов выделенных из церебролизина;
3. Провести сиквенирование выделенных из церебролизина пептидов, идентифицировать их по библиотекам белков;
4. Произвести экстракцию фракций фосфолипидов и жирных кислот церебролизина и определить фосфолипидный и жирнокислотный состав препарата;
5. Изучить влияние церебролизина на элементный состав головного мозга у крыс.
6. Изучить эффективность различных способов введения препарата церебролизин.
7. Изучить влияние церебролизина на уровни экспрессии иРНК металлотионеинов 1 и 2 в головном мозге крыс.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Получены новые сведения о молекулярных массах пептидов церебролизина и определены аминокислотные последовательности основных пептидов.
2. Впервые получены данные о липидном составе препарата церебролизин.
3. Изучено влияние препарата церебролизин на элементный состав головного мозга крыс в зависимости от способа его введения.
4. Показана эффективность интраназального введения церебролизина.
5. Установлено, что церебролизин стимулирует экспрессию иРНК металлотионеинов.
ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ НАУЧНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ
1. В значительной мере дополнены сведения о пептидном, липидном и жирнокислотном составе церебролизина.
2. Доказана способность церебролизина эффективно влиять на элементный состав головного мозга крыс при интраназальном и внутрибрюшинном способах введения.
3. Установлено, что интраназальное введение церебролизина приводит к более высокому нейропротективному воздействию при экспериментальной хронической ишемии мозга у крыс.
ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ
1. Церебролизин состоит из пептидов, масса которых не превышает 10000 Да, что обуславливает высокую проницаемость препарата через ГЭБ.
2. Установлено, что церебролизин содержит биологически активные пептиды глутатион, тиролиберин и энкефалин-подобные пептиды.
3. Установлено наличие в препарате жирных кислот с концентрациями не более 50 мкг/мл.
4. В составе церебролизина имеются несколько классов фосфолипидов с концентрациями порядка 100 мкг/л.
5. Церебролизин способствует накоплению микроэлементов в определенных структурах головного мозга крыс.
6. Интенсивность накопления микроэлементов зависит от метода введения церебролизина.
7. Применение церебролизина, на модели экспериментальной хронической ишемии мозга у крыс, увеличивает экспрессию иРНК металлотионеинов 1 и 2 в 16.2 и 16.5 раз, соответственно, что в 2.1 и 2.3 раза выше по сравнению с группой контроля.
АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ
Основные результаты работы доложены и обсуждены на научно-практических конференциях ГОУ ВПО ИвГМА Росздрава (Иваново, 20062009), межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука: итоги и перспективы» (Иваново, 2006).
ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ
По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ (в т. ч., две работы в журналах рекомендованных ВАК и три статьи в международных журналах). Материалы диссертации доложены на научно-практических конференциях «Рациональная фармакотерапия в педиатрии», Москва, 2003; конгресс педиатров России, Москва, 2005; международном конгрессе «Профессия и здоровье», Москва, 2005, V международном научно-практическом конгрессе «Человек в экстремальных условиях: здоровье, надежность и реабилитация», Москва, 2006; симпозиумах в рамках XI, XII, XIIIV Российских национальных конгрессов «Человек и лекарство», Москва, 2004, 2005, 2006, 2007; 5 Российском конгрессе неврологов, Ярославль, 2006; на Национальном конгрессе неврологов Украины «Инсульт», Киев, 2006; Научно-практической конференции кардиологов, терапевтов и неврологов Украины, Судак, 2007; а также на научно-практических конференциях ИвГМА и ИвГУ, научных обществах фармакологов и клинических фармакологов, физиологов и патофизиологов 2006-2009.
Основные теоретические положения диссертации используются на лекциях и семинарах, проводимых на кафедре фармакологии и клинической фармакологии ГОУ ВПО «Ивановская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» для студентов и аспирантов кафедры.
ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ
Диссертация изложена на 104 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 рисунками, содержит 14 таблиц. Текст диссертации состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, обсуждения результатов, заключения, выводов, и списка литературы, включающего 56 отечественных и 89 зарубежных источников.
Заключение диссертационного исследования на тему "Анализ низкомолекулярного состава препората церебролизин и его воздействие на элементный Гомеостазмозга крыс при различных способах введения"
выводы
1. Пептидная фракция церебролизина состоит из пептидов массой до 10000 Да, при этом основная масса пептидов находится в диапазоне 20005000 Да.
2. В пептидной фракции церебролизина идентифицированы мотивы тиролиберина, энкефалина, глутатиона и коллагена.
3. Церебролизин содержит фосфолипиды из класса сфингмомиелинов: фосфотидилсерин и фосфотидилэтаноламин, а также тристеарат глицерина в количестве около 10 мкг/мл, а также триглицериды в количестве около 97 мкг/мл. Определены следующие жирные кислоты: стеариновая (~45,0 мкг/мл), миристоиловая, пальмитиновая (~25,0 мкг/мл), пальмитолеиновая (—5,6 мкг/мл), олеиновая (~3,5 мкг/мл), линолевая (~1,5 мкг/мл) и арахидоновая (~1,1 мкг/мл).
4. Церебролизин способствует значительному накоплению лития в гипоталамусе и, в несколько меньшей степени, в обонятельных луковицах у крыс; умеренному накоплению селена в обонятельных луковицах, гипоталамусе и лобной коре; ведёт к возрастанию содержания цинка и марганца в лобной коре, гипоталамусе и в обонятельных луковицах.
5. Интраназальный способ введения церебролизина приводит к большей, в сравнении с внутрибрюшинным введением, компенсации неврологического дефицита.
6. Применение церебролизина, на модели экспериментальной хронической ишемии мозга у крыс, увеличивает экспрессию иРНК металлотионеинов 1 и 2 в 16.2 и 16.5 раз, соответственно, что в 2.1 и 2.3 раза выше по сравнению с группой контроля.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Итак, в результате проведенного исследования было подтверждено наличие в церебролизине (FPF-1070, ЕВЕ WE, Австрия) определенных пептидов, липидов, фосфолипидов, триглицеридов, значительного числа микроэлементов. Они как компоненты мозговой ткани обеспечивают наисложнейшие процессы функционирования головного мозга. Однако нейропротективный механизм действия одного из нейротрофиков природного происхождения широко применяющегося во врачебной практике, церебролизина окончательно не изучен. Следует иметь в виду, что именно нейропептиды несут основную нейротрофическую фармакологическую нагрузку. Наряду с эффектами, обусловленными непосредственным воздействием на ткань нейропептидов и L-аминокислот, входящим в состав церебролизина, важным компонентом нейропротекции может выступать церебролизин как регулятор металлолигандного гомеостаза в центральной нервной системе. Избирательное накопление микроэлементов с накоплением цинка, марганца, селена и нейромодулирующего элемента лития может служить важным компонентом фармакодинамики церебролизина. Так, под влиянием введения церебролизина и обусловленной этим индукции металлотионеинов повышается способность мозговой ткани полноценно утилизировать продукты метаболизма, и замедлять (возможно, блокировать) негативные влияния и аккумулировать тяжелы металлов, что снижает токсическое воздействие на мозг, повышает устойчивость его к повреждающим действиям, возможно обеспечивает и накопительный профилактический нейропротекторный эффект церебролизина.
В эксперименте было установлено, что церебролизин повышает уровень Li, В, Se в гипоталамусе, центральной коре, обонятельных луковицах, вызывает избирательное накопление Мп в лобной коре крыс. Таким образом, модуляция микроэлементного гомеостаза может выступать одним из существенных компонентов нейропротективного эффекта церебролизина.
Принимая во внимание тот факт, что нервная ткань содержит очень небольшую пропорцию стволовых клеток, регенераторные и восстановительные способности нейронов низки, а их жизненный цикл чрезвычайно стабилен и нередко равен продолжительности жизни человека. В то же время, энергетические процессы в нервной ткани протекают исключительно интенсивно, в силу чего уровень требуются значительные антиоксидантные ресурсы. Стабильность энергетических и пластических процессов в определенной степени зависит от присутствия в необходимых количествах эссенциальных МЭ. Это определяют также высокую чувствительность нервной ткани к продуктам оксидативного стресса.
Из этого становится очевидно, что оптимизация содержания микроэлементов является перспективным средством манипуляции апоптозом, что открывает путь к созданию фармакотерапевтических подходов к лечению различных заболеваний нервной системы. Микроэлементы могут стать важным средством в стратегиях промоции здоровья, увеличения продолжительности жизни при сохранном интеллекте.
В ходе работы экспериментально получены данные о перспективности интраназального введения церебролизина. Такой путь введения можно предполагать, имеет большие перспективы. Отсутствие ферментов, расщепляющих нейропептиды на слизистой носа, хорошее всасывание макро- и микроэлементов в комплексе с нейропептидами обеспечивает быстрый транспорт нейротрофической композиции церебролизина в мозг. Важное значение имеет совместное курсовое интраназальное введение сульфата цинка и церебролизина. В экспериментальной модели на крысах разовое введение этих препаратов не приводило к статистически достоверному возрастанию содержания цинка в обонятельной луковице, лобной коре и гипоталамусе. Однако аналогичный десятидневный курс применения сульфата цинка с последующим таким же по времени курсом интраназального введения церебролизина способствовал троекратному возрастанию количества цинка в лобной коре и гипоталамусе.
Металлотионеины - эффективный метод защиты клеток от АФК и, следовательно, оказывают значительное влияние на выживаемость клеток. Применение препарата церебролизин оказывало значительное влияние на уровни МТ. Увеличение уровней металлотионеина оказывает положительное влияние на функционирование головного мозга через замедление кальциевого каскада эксайтотоксичности и элиминации свободных радикалов.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Катаев, Александр Станиславович
1. Авцын А.П., Жаворонков А.А., Риш М.А., Строчкова Л.С. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органопатология. -М.: Медицина, 1991,-496 С.
2. Ашмарин И. П. Прогнозирование и неожиданные физиологические эффекты органопептидов. Рос. Физиол. Журн. им И. М. Сеченова. 2001. т. 87, с. 1471-1488.
3. Ашмарин И.П., Стуколов П.В„ Нейрохимия. М.: НИИ биомедхимии, 1996- 196С.
4. Багметов М.Н. Церебропротективное действие композиций фенибута и фенотропила и их солей в условиях экспериментальной ишемии головного мозга: Дис .докт. мед. наук. Волгоград, 2006 - 321 С.
5. Бадалян О.В. Актуальные проблемы нейроэндокринологии: пептидергическая система мозга. М.: Медицина, 1982, 60 С.
6. Белоусов Ю. Б. Введение в клиническую фармакологию. М., 2002. 128 С.
7. Борисенко Г.Г, Громова О.А., Баранов Ю.В., Третьяков В.Е. Липиды и жирные кислоты в составе препарата Церебролизин. Журн. Неврология и псих. им. С.С. Корсакова, 2007. — С. 19-29.
8. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон П.; Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения / Пер. с англ. М.: Высшая школа, 1991.-399 С.
9. Верещагин Н.В., Лебедева Н.В. Легкие формы мультиинфарктной деменции: эффективность церебролизина. //Сов. мед. -1991. -N.11. -С.6-8.
10. Ю.Воронина Т. А. Экспериментальная психофармакология неоотропов. // Сб.: Фармакология ноотропов. М 1989. - С. 8-15.
11. П.Воронина Т. А., Серединин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и новые проблемы. // Эксперим. и клинич. фармакол. 1998. -Т. 64, №4. С.3-9.
12. Гаевый М. Д., Аджиенко JI. М., Макарова JI. М., Абдулсалам А. А. Ишемия головного мозга, вызванная гравитационной перегрузкой. //Эксперим. и клинич. фармакол. 2000. - №3. - С. 63-64.
13. И.Ганнушкина И.В. //Журн. невропатол. и психиатр. 1996. № 1. С.14.16.
14. Н.Гладышева О.С., Троицкая Г.Г., Раевский К.С. Влияние аминомасляной кислоты на внутривидовую агрессию самцов мышей при интроназальном введении. // Бюл. Эксп. Биол. и медиц. 1998. Т. 125, №4. С.401-403.
15. Гомазков О. А., Нейропептиды и ростовые факторы мозга. Информационно-справочное издание, Москва, 2001 239 С.
16. Громова О.А. Элементный статус и способы его коррекции у детей с различными последствиями перинатального поражения ЦНС, Дис. докт. мед. наук, Иваново, 2001, 324С.
17. Громова О.А., Авдеенко Т.В., Бурцев Е.М. и соавт. Влияние церебролизина на оксидантный гомеостаз, содержание микроэлементов и электролитов у детей с минимальной мозговой дисфункцией. //Журн. невролог, и психиатр. -1998. -Т.98, №.1. -С.27-30
18. Громова О.А., Панасенко О.М., Скальный А.В. Элементный анализ и ферментативная антиокислительная активностьнейрометаболических препаратов природного происхождения //Фармация, 2001, № 1. С. 21-23.
19. Громова О.А„ Кудрин А.В. Нейрохимия макро- и микроэлементов. Новые подходы к фармакотерапии. М.:Алев-В 2001,
20. Громова О.А., Красных Л.В., Лиманова О.А. Кутузова Н.А. Коррекция витаминного статуса при синдроме дефицита внимания и гиперактивности. Рос педиатр журн 2004; №2, С53-55.
21. Громова О.А., Красных A.M., Гусев Е.И., Никонов А.А. Витаминная активность церебролизина. Журн неврологии и психиатрии, 2005; №5: С.59-61.
22. Громова О.А. , Сотникова Н.Ю., Галустян А.Н., Красных Л.М., Мазина С.С. Протективная роль церебролизин-индуцированной экспрессии генов металлотионеина-1 и металлотиона-И при церебральной очаговой ишемии у крыс. Цитокины., М. 2005 , С.32-37.
23. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Нейрстротективная терапия в остром периоде церебрального ишемического инсульта. // Клинический вестник. 1995, №2. С.35-40.
24. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга. -М.: Медицина, 2006.-328 С.
25. Дарбре А., Практическая химия белка // М.: Мир. 1989. -621 С. 27.3аваденко Н.Н., Кемалов А.И., Петрухин А.С. Лечениепоследствий закрытой черепно-мозговой травмы у детей: оценка эффективности церебролизина. //Невролог, журн. -2001. -Т.6, №.3. -С.38-42
26. Калашникова Л.А. Неврология антифосфолипидного синдрома. М., Медицина,-2003,— 673 С.
27. Кейтс М. Техника липидологии // М.: Мир. 1975.- 322 С.
28. Ковалев Г.В. Неотропные средства. Волгоград.- 1990. - 368 С.
29. Коваленко Р.И., Зимина О. А., Чернышова М.П., Ноздрачев А.Д. Влияние интразаназального введения пептидов эпифиза на агрессивнооборонительное поведение адренолэктомированнных крыс. // Докл. РАН 2000. 370 (4) - С.554-558.
30. С.Кон Р., Рот К. Ранняя диагностика болезней обмена веществ.-М.: Медицина, 1986 637 С.
31. Кудрин А.В., Громова О.А. Микроэлементы в неврологии, М., ГеотарМед, — 2006, — 273 С
32. Маркова И.В., Михалов И.Б., Неженцев М.В. Фармакология. СПб,2001. 416 С.
33. Машковский М.Д. Лекарственные средства. Часть 2. 1993. — 5281. С.
34. Меныцикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К., Бондарь И.А Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. — М.: «Слово», 2006. 553 С.
35. Методические указания по экспериментальному изучению препаратов для лечения нарушений мозгового кровообращения и мигрени. Р.С. Мирзоян, А.С. Саратиков, М.Б. Плотников, А.В. Топчан, Т.С. Ганыпина 1998. С. 332-336.
36. Мирзоян Г.Р. Сравнительное изучение нимодипина при различных ишемических поражениях головного мозга: Дис. канд. мед наук. Москва, 2003.- 170 С.
37. Михайлов И.Б. Клиническая фармакология. СПб. -1999. 528 С.
38. Некрасова Е.М. Новая форма церебролизина. Церебролизин Е 021. // Материалы 3-его междун. Симп. По церебролизину. - М., 1991. С.61-70.
39. Оленев С.Н., Оленева А.С. Нейробиология-95 (на примере крыс как наиболее изучаемом объекте биологии и медицины). СПб.: издательство СПбГПМА. 1995. 213 С.
40. Петков В.Д. Нейромедиаторные механизмы реализации действия ноотропных препаратов. // В сб.: Фармакология неотропов. М., 1989. -С.20-25.
41. Приказ МЗ РФ №267 от 19.06.2003 г. «Об утверждении правил лабораторной практики».
42. Райцес B.C. Нейрофизиологические основы действия микроэлементов. Л.: Медицина, 1981 152 С.
43. Ребров В.Г., Громова О.А. Витамины и микроэлементы. М:Алев1. B, 2003.-157 С.
44. Румянцева С.А. Сравнительный анализ результатов лечения актовегином и церебролизином больных с нарушениями мозгового кровообращения старше 70. // Новые аспекты применения в клинической практике. -М. 1997. С.68-71.
45. Рябцева Е.Н. Флоуметры фирмы «Transonic System Inc.»// В сб. «Методология флоуметрии», Москва. 1998. - с. 7-19.
46. Саратиков А.С., Плотников М.Б. Патогенетичеки обоснованная коррекция циркуляторной гипоксии мозга в остром периоде экспериментального кровоизлияния. // Вестник АМН СССР. 1984. -№11.1. C.68-71.
47. Северин Е.С. Биохимия. М., Геотар-Мед, 2007, 790 С.
48. Смирнов А.Н. Элементы эндокринной регуляции /А.Н. Смирнов. М.: Гэотар-Мед, - 2006, - 351 С.
49. Фишер М., Шебитц В.Обзор подходов к терапии острого инсульта: прошлое, настоящее и будущее. // Журн. Неврологии и психиатрии им. А.С. Корсакова, Инсульт, прил. к журн. 2001, №1, С.21-33.
50. Черпакова В.А. Влияние введения парацетамола и церебролизина в молочном периоде на морфологические, цитохимические и биохимические показатели развития головного мозга двухмесячных крыс. // Дисс. канд. мед. наук. — Владивосток. -2001. 149 С.
51. Шляпина В.Г., Ракитская В.В. Петрова Е.И., Миронова В.И. Приспособительное поведение активных и пассивных1 крыс после интроназального введения корткотропин-рилизинг гормона. // Росс. Физиол. Журн. им. И.М.Сеченова. 2002. - Т.88, №9, С. 1212-1218.
52. Яхно Н.Н., Дамулин И.В., Захаров В.В. с соавт. Опыт применения высоких доз церебролизина при сосудистой деменции. //Тер. архив. -1996. -Т.68, №10. -С.65-69.
53. Anthony M. Nervous system.//J. Metal. Toxicology., 1995. P. 199235.
54. Baba HA, Schmid KW, Takeda A, et al., Metallothionein: localization in human transplant endomyocardium, relation to cytokines and allograft function. //J. Heart Lung Transplant. 1999 Oct; 18(10): P.963-71.
55. Baskys A., Wojtowicz M. Effects of brain tissue hydrolysate on synaptic transmission in the hippocampus. //Pharmac. Biochem. Behav. -1994. -Vol.49.-P. 1105-1107
56. Bauman J.W., Liu J., Liu Y.P., Klaassen C.D. Increase in metallothionein produced by chemicals that induce oxidative stress// Toxicol. Appl. Pharmacol., 1991, - N 110, P. 347-354.
57. Bi Y., Palmiter R.D., Wood K.M., Ma Q. Induction of metallothionein 1 by phenolic antioxidants requires metal-activated transcription factir 1(MTF-1) and zinc. //Biochem J. 2004. N. 380(Pt 3): P. 695-703.
58. Boado R.J. In vivo upregulation of the blood-brain barrier GLUT1 glucose transporter by brain-derived peptides. //Europ. J. Neurol. -1999. -Vol.6, suppl.3. —P.37
59. Boissier J.R., Simon P, L. Woff JM. Use of a particular mouse reaction (hole board method) for the study of psychotropic drugs therapie. 1964 may-juni; 19:571-83.
60. Cai L., Cherian M.G., Iskander S., Leblane M., Hammond R.R. Metallothionein induction in human CNS in vitro: neuroprotection from ionizing radiation. //J. Radiat. Biol. 2000, Vol.76, N7, P. 1009-1017.
61. Chen X. et all. Delivery of nerve grouth factor to the brain via olphactory pathway. // J.Alezheimer's Desease. 1998. Vol. 1(1). P. 34-44.
62. Combs D.J., D'Alecy LG. Functional Assessment After Cerebral Ischemia. Stroke Vol 18, No 2, March-April 1987, 503-511.
63. Cui L. Noveld-penicillamine carrying nanoparticles for metal chelation therapy in Alzheimer"s and others CNS deseases. //Eur. J. Pharm. Biopharm.59, 2005. P.263-272.
64. Dunn A.S. Physiologycal and bihavioral response to CRF administration: is CRF a mediator of anxiety of stress responses. // Brain Res. 1990. Vol.4. P. 71-153.
65. Fornace A.J., J. Schalch H., Alamo I. Jr. Coordinate induction of metallothionein I and II in rodents cells by UV-irradiation //Mol Cell Biol , 1988, N8, P. 4716-4720.
66. Frey W.N. Divery J-NGF to the brain via the olfactory roul. // Drug Delivery. 1997. Vol.4. P.87-92.
67. Garofalo L., Cuello A.C. Nerve growth factor and the monosialoganglioside GM1: analogous and different in vivo effects onbiochemical, morphological, and behavioral parameters of adult cortically lesioned rats//Exp Neurol.- 1994, Feb; 125(2) P.195-217.
68. Gavrilova S.I. Pharmacological approaches to the therapy of Alzheimer's disease.// Vestn Ross Akad Med Nauk. 2006;(9-10):30-4.
69. Geissler C., Powers H., Human Nutrition, Edinburgh, —2006, —1. P.763.
70. Gonzalez M.E., Francis L., Castellano O. Antioxidant systemic effect of short-term Cerebrolysin administration. //J. Neural. Transm. -1998. -Vol.53 (Suppl.). -P.333-341
71. Gonzalez M.E., Francis L., Castelleno O. System antioxidant activity of Cerbrolyzin. J Neurol Trasm 1998; 52: 333-341.
72. Goyer R.A. Role off chelating agents for prevention, intervention, and treatment of exposures to toxic metal Environ. Health Perspect.103., 2005, P. 10481052.
73. Gromova O.A. Burtsev E.M., Avdeenko T.V. et al. Cerebrolysin influence on antioxidant and element homeostasis in children with minimal cerebral dysfunction. Trace Elem Electrolyt 1997; 14: 3: 140-144.
74. Gromova O.A., Kudrin A.V., Mazina S.S., Volkov A.Y. Trace element status of the brain in rats following cerebrolysin administration. Trace Elements and electrolytes, Vol. 25.-No.4/2003
75. Gromova O.A., Sotnikova N.Yu. New perspectives in application of Cerebrolyzin: immunomodulatory effect. Rev.Internation.Congress «Advances in Immunology and Allergology on the Threshold of the XXI century», Eilat 2000, P.387.
76. Gromova O.A., Avdeenko T.V., Burtcev E.M.et all. Cerebrolysin Influence on antioxidant and element homeostasis in children with minimal brain dysfunction.//Trace Elements and Electrolytes (An International Journal), 1997, Vol. 14, No. 3 P. 140-144.
77. Gromova O.A., Tretyakov B.E., Moshkovsky S.A., Gusev E.I., Nikonov A.A., Valkova L.A., Glibin A.S., Kataev A.S. Oligopeptide membranous fraction of Cerebrolysin. Original article. 2003. P. 123-125.
78. Grubb B.R., Duval G.E., Morris J.S., Bentley P.J. Accumulation of cadmium by the eye with special reference to the lens //Toxicol. Appl. Pharmacol., 1985, N77, P. 444-450.
79. Hall C.S. The method of open field// J.Comparative Psychology.-1934.-N18.-P.385-403.
80. Horning M.S., Blakemore L.J., Trombley P.Q. Endogenous mechanisms of neuroprotection: role of zinc, copper, and carnosine. Brain Res. 2000; 852(1):56-61.
81. Hutter-Paier В., Eggenreich U., Windisch M. Effects of two protein-free peptide derivates on passive avoidance behaviour of 24-month-old rats. //Arzneimittelforschung.Drug res. -1996. -Vol.46. -P.237-241
82. Hutter-Paier В., Fruhwirth M., Grygar E., Windisch M. Cerebrolysin protects neurons from ischemia-induced loss of microtubule-associated protein 2. //J. Neural. Transm. -1996. -Vol.47 (Suppl.). -P.276-279.
83. Hutter-Paier В., Steiner E., Windisch M. Cerebrolysin protects isolated cortical neurons from neurodegeneration after brief histotoxic hypoxia. //J. Neural. Transm. -1998. -Vol.53 (Suppl.). -P.351-361.
84. Hutter-Paier B, Grygar E, Fruhwirth M, Temmel I, Windisch M. Further evidence that Cerebrolysin protects cortical neurons from neurodegeneration in vitro // J Neural Transm Suppl. 1998, 53:363-72.
85. Kagi J.H.R., Schafer A. Biochemistry of metallothionein. //Biochemictry, 1988, N 27, P. 8509-8515.
86. Karin M., Haslinger A., Holtgreve R.I., Krauter P., Westphal H.M., Beato M. Characterization of DNA sequences through which cadmium and glucocorticoid hormones induce human metallothionein-IIa gene// Nature, 1984, N308, P.513-519.
87. Kelly E.J., Quaife С J., Froelick G.J., Palmiter R.D. Metallothionein I and II protect against zinc deficiency and zinc toxicity in mice //J. Nutr. 1996, Vol. 126, P. 1782-1790
88. Kindermann В., Doring F., Pfaffl M., Daniel H. Identification of genes responsive to intracellular zinc depletion in the human colon adenocarcinoma cell line HT-29. //J.Nutr. 2004, Vol. 134, N 1. P. 57-62.
89. Kositsyn NS, Svinov MM, Goloborod'ko EV, Bozhevalova SV, Iablonskaia AM. Efficacy of cerebrolysin in cerebral hemorrhage model in rats. //Eksp Klin Farmakol. 2006 Nov-Dec;69(6): P. 27-30.
90. Ladurner G., Kalvach P., Moessler H.; Cerebrolysin Study Group. Neuroprotective treatment with cerebrolysin in patients with acute stroke: a randomised controlled trial. J. Neural Transm. 2005 Mar; 112(3):415-28. Epub 2004 Dec.
91. Lipton P. Ischemic Cell Death in Brain Neurons. // Physiological Reviews, Vol. 79, No. 4, October 1999, P. 1431-1568.
92. Manganelli R., Iannaccone S., Iannaccone M., De Simone E., Ferbo U., Nappi F., Avella F., De Simone W. Diagnostic pathway in a case with severe degree of hypertension //G Ital Nefrol. 2006, Jul-Aug;23(4) — P. 442-445
93. Michalska A.E., Choo K.H. Targeting and germ-line transmission of a null mutation at the metallothionein I and II loci in mouse //Proc Natl Acad Sci USA 1993, Vol. 90, P. 8088-8092.
94. Michalska A.E., Choo K.H. Kelly E.J., Quaife C.J., Brinster R.L., Palmiter R.D. Targeted disruption of metallothionein I and II genes increases sensitivity to cadmium //Proc Natl Acad Sci USA, 1994, Vol. 91, P. 584-588.
95. Nishimuta, M. The concept (intra and extra cellular minerals). In: Metal Ions in Biology and Medicine. Eds. Ph. Collery, L.A. Poirier, M. Manfait, J.C. Etienne. Paris: John Libbey Eurotext 2, 1990, P. 69-74.
96. Onishchenko L.S., Gaikova O.N., Ianishevskii S.N., Changes in the focus of experimental ischemic stroke under the influence of neuroprotective drugs. //Morfologiia. 2006;130(6):40-6.
97. Ozawa M. Inherited neurological disease relationship between an essential trace elements and Wilson/Menkes disease// Nippon Rincho. — 1996 Vol. 54, №1.-P. 117-122.
98. Panisset M., Gauthier S., Moessler H., Windisch M. Treatment of Alzheimer's disease: A randomized, double-blind, placebo-controlled trial with a neurotrophic agent. //Neurobiol. Aging. -2000. -Vol.21, N.1S. -P.S28
99. Panisset M, Gauthier S, Moessler H, Windisch M; Cerebrolysin Study Group. Cerebrolysin in Alzheimer's disease: a randomized, double-blind, placebocontrolled trial with a neurotrophic agent. J. Neural. Transm. 2002 Jul; 109(7-8):.P.1089-104.
100. Park J.D., Liu Y., Klaassen, C.D. Protective effect of metallothionein against the toxicity of cadmium and other metals (1)//Toxicology 2001, Vol. 163, P. 93-100.
101. Piette J.C. Antiphospholipids, systemic lupus, and atherosclerosis: clinical features // Rev Med Interne. — 2004, Jun;25 Suppl 1: — P. 12-23.
102. Pruszewicz A., Obrebowski A., Woznica В., Swidzinski P. Mozliwosci farmakologiczne leczenia niedosuchow odbiorczych u dzieci. // Otolaryngol. -1994. -Vol.48, N.l. -P.63-66.
103. Ramakrishnan S., Sulochana K.N., Selvaraj Т., Abdul Rahim A., Lakshmi M., Arunagiri K. Smoking of beedies and cataract: cadmium and vitamin С in the lens and blood //Br. J. Ophthalmol., 1995, - N 79, P.202-206.
104. Riley C, Hutter-Paier B, Windisch M, Doppler E, Moessler H, Wronski R. A peptide preparation protects cells in organotypic brain slices against cell death after glutamate intoxication. //J. Neural. Transm. 2006 Jan; 113(1): 10310.
105. Rockenstein E, Mante M, Adame A, Crews L, Moessler H, Masliah E. Effects of Cerebrolysin on neurogenesis in an APP transgenic model of Alzheimer's disease.//Acta Neuropathol. 2007 Mar;113(3): P.265-75.
106. Rohlff C. Proteomics in neuropsychiatric disorders. //Int J Neuropsychopharmacol. 2001, - Mar;4(l):P.93-102.
107. Ruther E., Moessler H., Windisch M. The MAD-B Study: A randomized, double-blind, placebo-controlled trial with a Cerebrolysin in Alzheimer's disease. //Neurobiol. Aging. -2000. -Vol.21, N.1S. -P.S28.
108. Ruther E., Ritter R., Apecechea M. Efficacy of peptidergic nootropic drug cerebrolysin in senile dementia of the Alzheimer's type. //Pharmacopsychiat. -1994. -Vol.27. -P.32-40.
109. Ruther E., Ritter R., Apecechea M. Sustained improvements in patients with dementia of Alzheimer's type (DAT) 6 months after termination of Cerebrolysin therapy. //J. Neural. Transm. -2000. -Vol.107. -P.815-829.
110. Satou Т., Imano M., Akai F. . Morphological observation of effects of Cerebrolysin on cultured neural cells. //Adv. Biosci. -1993. -Vol.87. -P. 195-196.
111. Saito K., Saito T. Trase Elements and Neurotransmitters in the Brain under Stress. Sapporo, Japon, 1991. P. 131.
112. Schwab M., Antonow-Schlorke I., Zweiner U., Bauer R. Brain-derived peptides reduce the size of cerebral infarction and loss of MAP2 immunoreactivity after focal ischemia in rats. //J. Neural. Transm. -1998. -Vol.53 (Suppl.). -P.299-311
113. Sirgita Y., Kondo Т., Kanazawa A. Teffect of Cerebrolysin on delayed neuronal death in the hippocampus and its relationship with OH-radical. J. Brain Nerv. 1993; 45: P.325-331.
114. Skorokhodov AP, Dudina AA, Kolesnikova EA, Koron AE, Kobantsev IuA, Sedova AA. Cortexin, nootropil and cerebrolysin have been used as neuroprotective. //Zh. Nevrol. Psikhiatr. Im S S Korsakova. 2006;Suppl 17.-P.52-56.
115. Skwortsova V.I., Stakhovskaia L.V., Shamalov N.A., Kerbikov O.B. Results of the multicenter prospective study of cerebrolysin safety and efficacy in acute stroke//Zh. Nevrol. Psikhiatr. Im S S Korsakova. 2006.; №16:P.41-45.
116. Sugrra Y., Kondo Т., Kanazawa A., Itoh K., Mizuno M. The protective effect of Cerebrolysin on delayed neuronal death in the hippocampus and its relationship with OH-radical.//J. Brain and Nerve, 1993. -45 (4).- P. 325-331.
117. Tate D J., Miceli M.V., Newsome D.A. Expression of metallothionein isoforms in human chorioretinal complex. //Curr. Eye res. 2002. N 3. - P.244 -251.
118. Tatebayashi Y., Lee M.H., Iqbal K., Grundke-Iqbal I. The peptidergic antidementia drug Cerebrolysin increases neurogenesis in the adult rat dentate gyrus and improves spatial learning and memory. //Neurobiol. Aging. -2000. -Vol.21, N.1S.-P.S42
119. Takeda A., Ishiwatari S., Okada S. Manganese uptake into rat brain during development and aging. J. Neurosci. Res. 1999, vol. 56, P.93-98.
120. Takeda A. et all. Zinc homeostasis in the hyppocampus of zinc-deficientyoung adalts rats. Neurochem. Int.46, 2006. P. 221-225.
121. Trombley P.Q., Horning M.S. Zinc and cooper ifluence excitability of rat olfactory bulb neurons by multiple mechanisms. J. Neuriphysiol. 2001; №86: P.1652-1660.
122. Thorne R.G. et all. Intranasal administreition of insulin like growth factor 1 (IGF-1) a non-invasiv CNS drug delivery strategy for by passing the blood brain barrier. //J. Neureal. Transm.-1999.-Vol. 107(2). P. 387-394.
123. Tubek S. Role of trace elements in primary arterial hypertension: is mineral water style or prophylaxis? Biol Trace Elem Res. 2006 Winter; 114(1-3): 1-6.
124. Umbach J.A. Lithium enhances secretion from large dense-core vesicles in nerve growth factor-differentiated PC 12 cells.Neurochem. 2005 Sep;94(5):P. 1306-14.
125. Valesini G., Alessandri C. New facet of antiphospholipid antibodies. //Ann N Y Acad Sci. -2005, Jun;1051 P.487-497.
126. Veinbergis I., Mante M., Mallory M., Masliah E. Neurotrophic effects of Cerebrolysin in animal models of excitotoxicity.// J Neural Transm Suppl. -2005; №59: P. 273-80.
127. Windisch M., Albrecht E., Eggenreich U, Paier B. Neurotrophic effects of the nootropic drug cerebrolysin a summary. /Лп: Third Int. Conference on Alzheimer's Disease and Related Disorders. -Padova, 1992. -P.4-5.
128. Windisch M., Fruhwirth M., Grygar E., Hutter-Paier B. Cerebrolysin normalizes MAP2 homeostasis after glutamate induced neuronal cell death. /In: XVI World Congress of Neurology. Buenos Aires, 1997. Abstracts. N.3-43-08/
129. Windisch M., Gschanes A., Hutter-Paier B. Neurotrophic activities and therapeutic experience with brain derived peptide preparation. //J. Neural. Transm. -1998. -Vol.53 (Suppl.). -P.289-298.
130. Windisch M., Piswanger A. In vitro effects of peptide derivates and extracts from calf blood on the oxidative metabolism of brain, liver and heart muscle homogenates of the rat. //Drug Res. -1985. -Vol.35. -P.87-89
131. Wong G.K., Zhu X.L., Poon W.S. Beneficial effect of cerebrolysin on moderate and severe head injury patients: result of a cohort study.//Acta Neurochir. Suppl. 2005; №95: P.59-60.
132. Xiong H., Baskys A., Wojtowicz J.M. Brain-derived peptides inhibit synaptic transmission via presynaptic GABA-B receptors in CA1 area of the rat hippocampal slices. //Brain Res. -1996. -Vol.737. -P.188-194