Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Активность некоторых мембранопротекторных препаратов как средств иммуномодуляции

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАБС0ХР;1КЕШ1Я РС5СР

владивосгокснии гос7дарстз2нный щ^пщююя институт

гайворояскип ваеы зикгорозш

АКТИВНОСТЬ НЕКОТОРЫХ ЫЕЫБРАНОПРОТЕКТОРКЬК ПРЕПАРАТОВ КАК СРВДСТВ КУЕДГлОАСДУЖЩ

14.00.36 - аллергология, иммунология 13.00.07 - микробиология

На правах рукописл

и

Автореферат диссертации на соискание ученой степегк

кандидата медицинских наук

Владивосток - 1990 год

Диссертация выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, шмузологки иаа. докт. кед. наук, профессор Г. АГ. Ларионов; Луганского медицинского института ^ректор -профессор З.Г.Казешникоз; и 4-й городской инфекционной больницы г.Луганска.

.ЧатчкмГг рутводчтель:

Ларионов Г.Я. - доктор медицинских: наук, професоор

ОгУгц'-а-тьныэ сппснеятк:

Усвяцов Б.Я. - доктор медицинских наук, профессор Любимова Н.Б. - кандидат медицинских; наук

Ведущие учравдение, дающее отзыв о каучно-практичеокой ценноста работы:

Киевокик медицинский институт имени академика А.А.Богомольца.'

Защита диссертации состоится " ^ ". г.

на заседании Специализированного Совета К.084.24, СЙ Владивостокского Государственного медицинского института ^690600 г.Владивосток, пр. Острякова, 2), С диссертацией можно ознакомиться 'В библиотеке института. .

Автореферат разослан " "_'. -1990 г.. «

Учеши секретарь Специализированного Солета - кандидат медицинских наук, доцент Р.Н.Диго. ^ / ^

- 3 -

' -; . ОБШ ХАРАМЕРИСГт РАБОТЫ

'чсс.'.';т1!;;т' 11 ■

—"---ддТ|/алт,}10рТЬ ^ рро0.те,м!.т, эизиологический иммунный ответ человека.на действие антигена (возбудителя) мочат задерживаться не только, латентной фаза исключающей в-овбя процеооы кооперации компетентных клеток, но и иного ч'ислетшки дефицитами, системы иымуютяа, 3 этих ситуациях облегчается размножение паразитов,формируется инфекционный процесс (Лыткин М.И.,1980{Петров Е,3.,1979)..• Предложенные в настоящее время многочисленные шлму-номодуляторы в осшюм направлены на коррекцию взаимоотношений паразита н хозяина- таким образом,чтобы иоключить начало инфекционного процесса, или значительно его облегчить (иммунотерапия)» лолыаке достижения в ишуконоду-ляции (базируются на бурном развитии иммунологии, и.гмуно-генетики, шлуноннаеиерии и молекулярной биологии (.BaW J.и., 1966). Определенные перспективы иммуномодуляцки имеются таете в случае гслояьзоыалия на практике результатов исследований патофизиология и-пагобиохшии системы иммунологического- надзора организма.

Антигены,как сильные а специфические сигналы для - системы 'цшунитэта,предъявляет шмунокойтввмша клеткам' высокие требования по скорости дыхания,- ресинтезу АТФ, биосинтезу медиаторов, антител, рецепторов л т.п. Действие антигена (возбудителя) не является одноударнкы, а скоре'е напоминает своеобразный прессинг. Поэтому, шмуно- -кошетентные клетки' не могут сразу адаптироваться,- включить рез ерш метаболизма и временно попадают в условия

гипоксии и недостатка макрсэргов лтф(Лариошв Г.Ы,, 1982).. Исходя зз этого иовно-предполагать, что иротяво-гипсксические препарата, антиокскдаты июыбранопротек-торп), пргаазыяекые в клаякке могут проявлять общее неопе-цгфичеоксс к физиологическое кшукомодулируюпее действие но типу метаболического облегчения крупного ответа. Из арсенала таких фарасредств бкл отобран пирэдинол (парли-дяк), .чоторыа прклекяется вс многих странах глира для лечения атеросклероза (Цашксвски М.Д. ,1984)Пиридпнол -производное пиридина, акгнспрстектор.

Целью диссерта™:;: являлось изучение закономерностей • в изменеыж некоторых звеньев сиотемм иммунитета и динамики, отдельных гопеостатическях констант под влиянием пирздинола и других г.:еглбракспротекторных препаратов а условиях антигенного воздействия.

Конкретны:.^ задача:;:? для доогпкения поставленной цели служили:

- исследовать имлуномодулирущэе действие пирздинола и некоторых других :,;ег.:бракспратекторных прзпаратсв в акопе"-ржленте ка-животных в условиях антигенного воздействия и беа него;

- определить пригодность пирадинола как ншуномодуля-тора в. комплексно:.; лечении инфекционных больных на-модели• острого вирусного гепатита А.

католические решпнкя-шотавленных задач - были" достигнуты путем развернутой леикограмш крови, качественно-количественной. оценки осневншс клеточных иммуноко:лпетентных скоте.-.: (определение субпопуляцаи Т-лиыфоцитов, определение 3-ли:.:фецптов, фагоцитирующих -лейкоцитоз) с исследована- , и.: их функциональной активности, исследования ответа на антиген клеточного звена £-лимфоцптов (определение титра) антител прЗтив д^терийного'анатоксина),определения активно»-

ста комплемента, определения йункщгонасьно-биохшлического

спстояшя лейкоцитов (определение степени насыщенности кле-'ток крови кислородом, определение концентрации цАМу и цШ5, скорости процоссофарекясясгс окисления липидов, степепя .наспщеннооти меток крови углекислые газом, концентрации ионов водорода, степени насыщенности клеток крови хлором* активности работы калий/натриевого насоса (Таблица I).

Таблица I

Направления, методы и объем исследовании

Направление Объем работы

исследования Метода исследования

I" 2 3

I .Характеристика цитогршжы крови

2.Характеристика фагонктарной активности лейкоцитов

3.Характеристика клеточного звена Т- и В-систем

Количественный анализ . I 744 пробы арптрограш крози"Склас- I 028 мазкой сическкй метод спределв'-кия общего 'количества эритроцитов по Фярордту 11960))}" лейяограш (классиче скки метод определения.общего количества лейкоцитов, подсчет лейкоцитарной;""_ '• формулы по Коот (1975)). Определение активно.стн ' 156 проб фаго цито з а ле йко цигами крови по количеству поглощенных микробных тел по Кост,Стенка (1947). I.Определение общего чпс- . 75 проб , ла розеткоабразутаадах Т-клеток (ЕРОК) по Заальбаргу (197.0)} • ••

2.Определение числа суб- . 72 пробы популяции активных Т-лки-

I • '2 3

• фоцптов (Ак) по Заальбергу (1970); I

3.Определение числа субпа- 72 пробц пулящш индукторных Т-кле-ток (С) по Заальбергу С1970)} 4. Определение числа незрз- 72 пробы лик 13-лньтусцктов (Ы) по ¡Заальбергу (1970);

5.Определение числа субпа- 72 пробы пуляцни предшественников . шхунсрегулирулцих Т-кле-ток (А) по Заальбергу Ц970); 6.Определение числа субпопу-ляцип Т-супресоороа (То) по • Шоре (1978);

7.Определение -числа субпо- ' 72 пробы пуляции Т-хэлпероа (Тх)по Шоре (1978); " '

8.Вычисление хелперно-супрес-. сорного яндекса (Тх/Тс), А.Характеристика Определение татра антител 32 пробы-ответа на антиген против дифтерийного ана-клеточногс звена токсина'(реакция пассив- ■ В-лкыфоцитов ной гемагглютянации пс

Бойдену (1951)). 5.Характеристика I.Определение активности 166 проб функццонально-био-1чошле?.юнта по Кзбот(1964); химического соото-2..0пределение фуккциональ- 283 проб яний лейкоцитов ной активности калай/натрае- , и вого насоса (алкалишкроана-лдзатор);

.. 3, Определение степени 216праб

насыщеннооти метек кро-* ли кислородом.(ыикроада- >

лизатор 0Р-21О/3);"

4.Определение изменения • 72 пробы кислотно-основного состояния Сыккроанализатор"

2

6.Статистическая обработка материала

0P-21Ü/3);

5. Определен:: о скорости 72 пробы

процессов перекпсксга

сккслсжя л:ешдов

(.Владимиров ¡O.A.,Арча-

кол A.II., 1972);

6.Определение активности 104 проба сг.гоц:та&а по степени активности биохимических процососз.Измерение концентрации цЛМФ и цП£3 .в плазме крови по Suthsr-land (1У72}.

1«"ег*од карлацкоккаи Зое

- статистики; цифровые

2.Корреляцийнккп сяслпз дана~е з сплошшп Аамарклэ. II.П. . к Воробьева A.A. {1962).

3

РАУ1РАЯ,, Г) результате проведению; исследовании

впервые установлено полсяетелъкое влияние пкркдлнола на З-клзтошош ответ, что сводится к продукции Ат з фазио-логкческих качествах, по в более ранние сроки. Это открывает козне воодпквоегг з коррекции пкфекционккх процессов.

Пярвдкнол проявляет элективно Илкуномодулпруэдео действие такке на Оэгсц^тирущке клвигя за счет качественной перестройки их работа. При этом в .крозя не увеличивается их' число,'ко существенно повышается поглотительная, иякробоцидная активность. Таким образом, пяридкнол как пдглуноыодулятор -тает несколько точек прилокзккя своего влияния в системе йймленойогкчос,хотс надзора организма, его эффект во многой связаны с мш$раиопро«ёкторюгл,

- 8 - ■

• противогипсксичесюм и антиоксидантным действием.

Практическая ценность лроведегжнх исследовании.

Во многих случаях медицинская практика нуждается в ишуномодуляторах метаболического действия для облегчения дыхания и биосинтеза в га.мунскоьйетентных клетках. Такие модуляторы не стимулируют, т.е. не ускоряют метаболизм клеток, а нормализуют его в ршлках действия их генов, ' В роли одного из возможных модуляторов такого типа нагл предлагается шгридинол, который в наш:х исследованиях пропел доклиническое исследование.

Апробация диссертации. На информационном уровне фрагменты диссертации бши представлены на I Всесоюзной съезде иммунологов (Сочи, 1989г.),ХУ Всесоюзном съезде патофизиологов (г.Кишинев,1988г.),1 Республиканской конференции (г.Зорошлозград, 1990г.), кафедре микробиологии Сг.Луганск,1930г.).Региональной: научно-практической конференции (Киев-Ворошшшгрзд, 1990).

Материалы диссертации фрагментарно отражены в 4-х публикациях.

Результаты работы внедрена в 4-ой городской осль-нице г. Луганска при лечении больных вирусными гепатитами А. •

Структура диссертации.Диссертационная работа изложена на 201 страницах, в том.числе текст её занижает -158 страниц. Она состоит из введения, I главы - обзор литературы, . 5 глав собственных исследования , зг: точения, общих выводов,рекомендаций для энедрения в науку.и практику, указателя литературы. Указатель литературы включает 46-оте-

чеотвенных и 55 иностранных источников. Диссертация проил- ' люс.трирована 8 таблицами, 5 рабочими схемами к 57 рисунками.

Ропррры, рьмсст.ще на „защиту. Лнгппротектср - пири-динол является активным неопецифическим шлуноыодулятором .В-лимфоцитов, которые на основе его прстивсгнпоксйческого действия достоверно раньше начинает биосинтез Ат. 3 этом метаболически облегченном ответе ванную роль играет и повышенный зыход АТу, также йОусяоьлвашЗ гозридиколо;?. !ш-ридинол, как 'янтяоколдант, повыше? активность Оагодатирующих клеток, что пс-сути является такие метаболической иммуномодуляцией.

В своих. исследованиеях полагали, что правильное воздействие на типовые патологические процессы, внзы^аь емые антигеном, монет реально проявлять как сзеобразнш 'тип или способ ишуношдуляцки.

Дело в том, что, например, развивавшаяся в инфекционном процессе гипоксия (Грачев С.В., Лосев Н.И., Хитров Н.К.,1982) не. иквет избирательности: при этом недостаток кислорода (и АТФ) неблагоприятно сказывается на функциях любых органов и тканей, включая органы, тканл и клетки системы' иммунитета. Поэтому в-зависимости от устойчивости к гипоксии (адаптации) иммунный отазт будет неоднозначный; наиболее сильно он будет задерживаться по времени у низкоустоичизых к кислородному голоданию инди-

видумоз. - •

На основании изложенного в нашей работе исследовались возможности иммуяомодуляции путем -применения проти-вогипоксическихпрепаратов, относящихся к мепбранопротек-юрам, антиоксидантам.

- 10 -

Изучение выбранных мекбранопротекторов в роли иммунокорректоров велооь в различных направлениях при помощи адекватных методик.

Общей целыо работы было определение динамики и наиболее важшх гомеостатических констант под влиянием выбранных корректоров и одновременно о эт;&1 отыёткть изменения в некоторых звеньях системы иммунитета.

Эти два направления исследований были необходимы с целыо показать, что коррекция метаболизма клеток разных органов и тканей при инфекции, действии антигена ■ может быть использована одновременно к кок метаболическая физиологическая шгунсмодуляция»

Вьгбоп ме^радртпогшогр. ттуножхрлреоъп. Выбор препарата вели в раочета на его безвредность, отоутствие токсичности, способность положительно коррегировать наиболее распространенный процесс - гипоксии через механизм мембраностабилязации, ¿[елательно'было указанный препарат отобрать сред/ известных в медицине лекарственных средств. Поиск противогкпокоичеокого иммуношдулятора бал обусловлен тем, что при инфекционных поражениях раньше всего и прежде всего страдают многие органы, ткани, включая целиком ■ткани и клетки сиотемы иммунитета (Грачев C.B., Лосев 'Н.И,, Хитров К. К.', 1982).

Другие типовые патологические процессы при инфек- . ции развиваются гипоксией или являются прямыми её следствием (дистрофия, некроз, аутолиз и т.д.). Поэтому глы полагали, что ишуноыодуляторы с противогишкспчески:»! действием могут облегчать иммунный ответ раньше, чем другие препараты коррешрущме метаболизмом клеток. Наиболее правильный для 'обцей цели кашей .работы является пирздинол (303-пиридинол,

Япопия-ангилин, Вангрпя-продоктнн, -(JGGP- пармндпн). Этим пргпйра-'ои лочились -л продашь.« длительно лечиться от ' атеросклероза кнопи :,яшкиш больных. Препарат в обсей алана обладает гырагешшй нротпхогпнскспческим действием .через отаспжгзацка рззли-шых клеточных &:еморан на основе блокад: огободнорадосшяьякх а перэкпених процессов (СРО, ПОЛ), т.е. через проявление акгкокоидаятных овсуотз (Кукес Б.Г,, .Машколскпп.^.Д., Федоров S.A., 1978).

Поэтому у пас зеекке основания зля того, чтобы изучить его в роли протязогипокозчосксго средства, пригодного для ишуномодуляцнк.

' о? УотсГгашостд у укпрйррц, Ззьдеяло терапевти-

ческих доз пирадннояа жтатнкм (крыса») с учетом их ус-'тийчйвости к гипоксии по результатам предварительного тестирования на фоне вакцинального процесса АКдС выявило заслуживающий пристального вшшания феномен, который сразу требует ' сценки.

На временное кислородное голодание, вызванное АКДС, по результатам наших исследовании опытные животные (защищенные пиридинело 1,0 и контрольные вакцинированные животные (но запущенные пиркдинолсм) в перзке 3-7 дней отвечают стереотипной реакцией - повишшои числа эритроцитов с целью усиленного транспорта 0Р. Этот "всплеск" примерно в 1,5 раза интенсивней под влиянием плридинола.

Начиная' с 7 по 21 дета в опыте количество эритроцитов прогрессивно снимается до исходного уровня, а

в контроле продолжает неуклонно нарастать. Сдедует заметить, что в эти сроки (7-28 дней) формируется и доо-'тигает максимума первичный иммунный ответ, шфшер, продукция иммуноглобулинов (Петров Р.В., 1976). Таким обрезом, в наших экспериментах-установлена, что под влиянием пиридинола в период формирования и развития первичного иммунного ответа возникает своеобразная динамика в числе клеток красной крови (эритроцитов), Ото факт, требующий анализа. Очевидно, что этот препарат сникает при гипоксии запрос ка киолородко- транспортные клетки (эритроциты) косвенно за счет сохранения на определенном уровне биоэнергетических процессов клеток на базе оаоих антпокои-дантных свойств.

Поэтому, под влиянием препарата быстро (уже к третьим дням) исчезает острая необходимость (запрос) в увеличении числа эритроцитов. В это время в контроле длительно сохраняется потребность в нарастании уровня эритроцитов, т.к. в клетках контрольных животных при "вакцинальной гипоксии" развиваются СРО,ПОЛ.дезоргашшрухощле дыхание в митохондриях и сниглюдае утилизацию 02 при синтезе АВД (Козлов Ю.П.,1975).

. В,, отношении, лейкоцитам действие пиридикола было другим. В группе высокоустойчпвых к гипоксии животных ' количество лейкоцитов нарастает с I по 3 сутки (на 2-е в 8 раз, на 3-й в 2,3 раза) по стноаенпю к контрольному« Сдвиги в отношении других клеток крови несущественные.

Рост популяции лейкоцитов,как известно, ведет к ускоренной обработке антигена и его презентации другим' . пммулокомпетентным кяедаегш (Петров Т.В., Хаитов P.M., 1933).

~ 13 -

Изучение .нового транспортакрсзя экслерпгйзк-талмасс чизотных 'как гоыоостат.тческогс .¿актера показало, что под Ближнем шгрпдпнола он сохраняется л не нарушается, а в некоторых случаях-улучшается (б группе зысокоус-тойчизах к гипоксии ка 3-Т4_день б. 2-3 раза, в группе, низкоустойчивых к гипоксии с I по 3 день з -¿-3 раза по отношению к контролю), при этом снижается утечка иолов, связанная о дезинтеграцией клегочаых мембран при гипоксии (концентрация внекяегочшго калия в груше зксокоустойчквкх снижается на всем протеяениа эксперимента,. а в группе, пи'зкоустой-чквкх только С I по 4 ден£ по отнешениэ к контролю).

Таким образем, полсиительнсе влияние паргдянола на конный транспорт облегчает фааологетеекзв $уккцяа клеток, включая клетки системы ишудатвта на фене введения вакцины

да.

Сказалось,'что в группе животных высокоустойчпвых ' к гипоксии под действием пирпдикола концентрация ионов водорода в.плазме скитается на всем протяжении вксаери-ueftia в сравнении с контролем до 7,2-7,25(p<G,05)'. У низ-, коустойчишх кивотных введение плридкнола а первые двое . суток до рН=7,1-7,2(р<0,05) по отношению к контролю, а в остальное время эксперимента, не отличается от контрольного уровня.

В любом случае значение рИ з опыте и контроле при введении животным АКДС в течении 21 дня (срок наблюдения) не выходи? за пределы кошенсаторяых возможностей организма, а ппридкнол не оказывает отрицательного влияния на механизм регуляции рН.

Ионы хлопа. В группе шгвоткых ьнсогаустойчш/х к

гипоксии под влиянием дирядшола парциальное давление хлора вше,.чем в контроле на воем протяжении вкоперямен- ■ та, В группе нивкоуотойчявцх к' гиггакоии ппридинол сказывает тот не эффект, но о 3 по 14 день (до 00-90 ш.рт.от, р<0,05), Бое колебания парциального Давления хлора, возникающие пая влияние;,! пирлдиноля имеит тенденцию к нормализации атои вазжой гомоостатическои константы. В контроле без препарата щ закономерно наблюдали но воех группах тенденц^о к сшп:ени:о уровня рСЬ?, что мойот неблагоприятно сказаться на пункциях окислительная системы фагосом лейкоцитов, на утилизации антигена и в конечном счете на презентации антигена сЬагзщкаш другими шядуно- . компетентными клетками (Дошакии М.О.,'1890),

рСО?.У низ ко устойчивых к гипох:оии ¡¡местных в опыте и контроле значения рСО^ колеблются в пределам поход- ' ного уровня до вакцинации АВДС, а у высокоуотойчивых -нарастает против контроля в опыта после введения пири-дннола.

Результаты изменении р02 в группе животных показали результаты, хорошо .согласующиеся с динамикой орит-роцятов. У высокоустойчивых к гипоксии животных рО^ крови-в течении вакцинального, процесса под влиянием пири-' динола не нарастало, а несколько снижалось паралельно со снпкйнием количества эритроцитов, Это мокно объяснять известной кислородсберагамщек активностью пнрйдинола (Ларионов Г.М., 1982) и более полной утилизацией О^в тканях под влиянием данного препарата.

1? контрольно:! группе р,0г и количество эритроцитов

било повышено от исходного уровня, что свидетельствовало о.дефиците энергии (ЛТд) и стремлении яшкшшх к его коррекции. У кнвотных илзкоустоичишх к гипоксии по рОр указанной особенности на отметили. Зато р0.> их крови било достоверно выше в опыте по сравнение 'с контролем, что мокко расценивать гак механизм срочной адаптации, усиленный я облегченный пиридина лап: у данных аивотдах по предварительному тестированию на была приобретено 'до опыта отработанных механизмов адаптации. Итак, у низкоустсй-чнвых к гипоксии яипотных влияние пирэдинола на вакгцг-наяъньм процесс можно расценивать как позитивное.

Ппода!куиж,пярвк.иоиого, окис тения лтандов „(малоновый дяальдегяд - ;,ЩА). Нирэдпгол а эксперименте и клинике снижает количество МДА, т.е. проявляет антиоксн-дантиое действие, В общем вида определение некоторых . яизненоважных гомеостатических гонстакт, провзденсе одновременно при Ьакцлналь'ном процессе у крыс, выявило кор-регирупщее влияние па них пирлдинола, что создает благоприятный фон для функционирования в условиях гипоксии клеток, злючая клетки системы ижунитета (Петров Р.В., 1981).

. Уне на стадии изучения названных констант мы' выявили факт снижения количества пшунооупре о сорных ¡теток системы эрптрока-оритроцитов.

Boo это могло полоаятряыш сказаться на продукции антител В-лпмфопитали. Поэтому-св одновременна определили в крови :?.пват[шх уровень антител против дифтерийного аяатоконна,. зходягазго з состаз ЛКДС. Получены обна-дегшпгюицте результаты в группа как высоко- так и низко-

устойчивых к гипокоии животных, -Под воздействием пкроди-нола в группе животных, выоокоустайчивых к гипоксии синтез антител к анатоксину начался на 7 суток раньше по отношению к контрольной группе и оставил 0,3-МБ, В котроле антитела определялись в этой уровне только на 14 день. К . саз?,¡у сроку в опыте под влиянием пиридинола уке был зарегистрирован максимум 'гадиуноглобулинов, В контроле пик отметили на 21 день. В этом опыте пиридинол не приводил к' продукции антител выше физиолсгичеокого уровня контроля, но облегчая иммунный ответ, формировал его в 2 раза быстрее.

Аналогичная закономерность выявлена к в группе низкоустойчивых к гипоксии крыс, но о более низким в пике количестве "антител.

Разработка и экспериментальная опенка сйрт.ат рротнвоишпзкппонноп запиты (в одном препарате) на основе ишуномодулирующей активности пиридинола были очередной ' задачей наших исследований. При этом ш пытались усилит^ названное действие пиридинола и определить его влияние на цетралъное звено кооперации ш-лунокошетентиых клеток, т.е. на фагоциты, поскольку мы ужо тлели по эритроциты и В-лимфоцитаы.информацию.

На основе анализа литературы, который мы уже приводили, был составлен препарат со следующими компо-.нентами :

Пиридинол - 2,4 г

Аспирин - I г'.

Хлорид лития - 0,25 г

ДМСО ' - 30 мл

Глицерин - до .100 мл

- Г7 -

Препарат представляет ссбся густуи кпдгоеть с длптель-. ныл ^роксм хранения. Все его компонента не токс'п-пш м Широко применяются в медицинская практике, сензргнчиы , по ■отиоиешпэ друг к другу. Отбирая компоненты препарата мы в основном ориентировались на то их свойства, которые стали известны сравнительно недавно: аепнрик-антп-оксидакт} хлорид лития - антикоагуляга; ДЖО - антпокси-дант; суперраотворитель апротонного типа: глицерин - разбавитель компонентов, но не растворитель (Московский Д1..1., 158-1).

Препарат применялся в качестве лекарственного средства при экспериментальной раневой инфекция у крыс. ,У опытных и контрольных кивотннх изучали некоторые ш-мунологичсскно г! другие показатели гомеостаэа. Зое показатели предварительно определяли' как исходный уровень до формирования гнойных ран. Сразу следует сказать, что препарат достоверно улучшал показателя раневого процесса, регенерации и сроков заживления рая «а фоне смягчения тя-аести клинического проявления инфекции у яивотннх в сравнении с контрольной группой.

'Положительное действие на раневой процесс со- , правоадалоя рядом интересных изменений., которые мы приводим.

Пагочмлдернца. дейкоцктя. Количество этих клиток

»

я в опыте и в контроле сншалссь от исходного уровня в . течении 3 суток; после етего события развивались рчзнона- ■ правлено. В опыте', где применялся препарат число зтих

клеток уменьшалось вплоть до 6 для и к 12 дшо их количество достигло исходного уровня. В контроле число палочкоядернкх лейкоцитов достигало исходной величины рте к 4-6 дню, ко такке на превышало уровень до опыта.

Описанная динамика макет прив'еоти к мысли о возможности подавления препаратом фагоцитарной активности лсикоцитод, что в действительности било наоборот. Об этом факте стоит сказать позже.

Сстментон,тт,ернм8|.лрйкотт^тл и базо^клн,Динамика изменении количества этих клеток в принципе была такой ко как и палочкоядерннх лейкоцитов: в спыте-сниаение числа до 6 дня в контроле - только.до 3 дня, затем нарастание числфтих двух типов клеток в опыте-только с 6 дня и с 3 дня раневой инфекции в контроле. Под влиянием препарата снишшюь з самый острый период гнойной инфекции возможности организма местных в отношении фагоцитоза патогенных стафилококков.

Эоззщ&ир.. Количество отих клеток одинаково и стереотипно снималось шсхе исходного уровня и в опыте, и в контроле а острый период раневой инфекции до 6 дня, после чего под влиянием препарата в опыте оно стабпла-зиройолось и стало нарастать вплоть до 12 дня, а в контроле к этому дню все еще продолжало падать.

•Можно предположить., что в контроле зозинофплы "потреблялись" формирующимися аллергическими реакциями. (ШлнскшГА.Н,, Г,!аяиский Д.Н., 1989).

ЛигкК-!;тпта. В опытной группе число лимфоцитов

под влиянием препарата нарастало о начала развития раневой инфекции вплоть до 6 дня (вше исходного уровня) и к 12 дни, снгшаяоь,, достигало первоначальных значений. Это очевидно о вязано с более раннем кллукнш с метоп данного типа клеток (Т- и З-димфоциты крови).

В контроле кжлункыГ! ответ лимфоцитов запаздывал*, их члоло- незначительно нарастало зышз -давня до 6 дня, затеи резко падоло низе уровня и п?о сни:г.зннэ продолжалось И после 12 дня. Клинически это наряжалось более длительным течением раневой инфекции у кязаткшс контрольной группы.

Препарат на основе лиридпкчла на (Токе снижения ■числа лейкоцитов крови одновременно длительно и достоверно увеличивает ("рекрутирует") число ^агоцитируацих клеток в крови яивомых. Чиоло участвующих в фагоцитозе лейкоцитоз нарастает в'опыте и к 3 дао, и к '6 дао,и к 12 дню, и nosse 12 доя.

Такпл образом препарат на основе ппридинола ски- -г.та.зт запрос организма на больше количество лейкоцитоз, поскольку.он резко повышает способность к фагоцитозу у тех лейкоцитов, которые утке циркулируют в крови.

, В контроле число фагоцитирующих клеток нарастает. и достигает пика к 3 дню и с этого гюмента резко падает непрерывно до 12 дня. Препарат создает, лучшие условия для лейкоцитов по дыханию, синтезу АТФ, мембранному транспорту и другим-параметрам.

Полученные нами результаты свидетельствуют о том,что'препарат-на основе яиридннсла не напутает обмен

в клетках крови калия и натрия.

рН плазмы крови.и в лиэате клеток -.тзови. Под влиянием препарата на основе пкридинола у яивотных.о острой гнойной инфекцией рН-изменяется. совсем незначительно к 3 дню до 7,45 (р<0,05) и полностью нормализуется к 6 дню наблюдения. Это, конечно, благоприятный фактор для, фагоцитирующих клеток, В контроле рН сдвигаетоя в целочную сторону и к 3, и к 6 дню, а затем падает • ниже нормы. Эти колебания рН затрудняют функционирование фагоцитирующих клеток крови.

Активность фагоцитов и их гидролиз лизосом зависит также от уровня внутриклеточной рН, В опыте у животных "внутриклеточная рН от 3 до 12 дня и дальше сдвигается в кислую сторону до 7,25 (р<0,05), что коррелирует с нарастанием фагоцитирующей активности фагоцитов крыс с острой гнойной раневой инфекцией. В контроле рН внутри клеток крови, наоборот, длительно сохраняется в щелочной зоне. Таким образом гомеоста-тический параметр рН коррегируется препаратом на ос' нове пиридинола з опыте в сторону его физиологических значений, что значительно облегчает нормальную функцию фагоцитов (Яошакин М.С., 19Э0).

3 опыте препарат обеспечивает через транспрт-ные мембраныфроцессы равномерное нарастание уровня ; хлора в течении всех 12 дней наблюдения. В отношении фагоцитов известно положительное влияние ионов хлора на формирование окислительной системы фагосом 'Цошакян Ы.С.,

1Э90),В контрольной группе кявотных в тачоние всего срока наблюдения уровень внутриклеточного хлора остается на исходном уровне. В опыте по запросу клеток уровень конов хлора в плазма нарастает максимально 6 дня, а петом ■падает, что коррелирует с достаточной фагоцитарной функцией лейкоцитов. В контроле мембранный транспорт хлора в клет--¿и нарушен; у них'сохраняется запрос на вти анионы и их уровень беспрерывно поэтому нарастает в плазме в течение 12-и дней наблюдения и позме.

рСО^. В наших .исследованиях по СО., в плазме к ли-зате крови получена динамика показателей походя на показатели по хлору, что монио расценивать такмо как события, ' . облегчающие метаболизм фагоцитоз (.'.¡ацлнин В.В., 1973).

Изучение р02 в плазме крови показало одинаковую дина],тку у опытных и контрольных животных: падение до 6-го дня л нарастание почтя до исходного уровня к 12 дна. Это стереотипная реакция - гипоксия, вызванная гнойной раневой инфекцией. Закио биле опредолить как в этих условиях кислород транспортируется в клетки крени, включая иммунокомпе-тентные клетки. По этому показателя получены очень значи-шз результаты. 3 опыте р0£ шутри ¡слеток крови падало . до 6. дня немного нике 60 им.рт.ст. (р<0,05), с 6-го дня,оно резко нарастало л к 1*2 дню достигло исходного уровня. Эти данные свидетельству о зацнте в опыте внутриклеточных систем, улучшении дыхания и функции клеток, что коррелирует с результата,я па фагоцитозу. В контроле значения внутриклеточного рОд прогрессивно.снижалось до 12 дня наблюдения

и позке, что такке коррелирует, 5:0 с ухудашиеа показателей фагоцитоза. В контроле ш не вздш за&гт впутхи-'клеточнпх кислородетранспортных систем.

Под влиянием препаратов на основе нярйдакола у животных с острой гнойней раневой ва$окцво2 урогия» '

в крови погашается незначительно от кзходиого уровня ц сохраняется так в течении всех 12 дней наблюдения. Это свидетельствует о достаточной уровне дыхания клеток крови, достаточной их энергетической обеспеченности, что справедливо к в отношении фагоцитов. В контроле у животных на фоне гипоксии наблюдается недостаток епергпн, поэтому уровень' цЛмФ неуклонно ра'стет в течении всех 12-;: дней наблюдения.

Таким образом почти все из изучаемых наш констант гомеостаза в опыте иод влияние» препарата изменяются, создавая условия близкие к норме для функционирования клеток крови, включая фагоцитирующие.Такое действие мокно считать облегчажцпм, метаболическим, физиологическим. На этой основе проявляется и.злуно,лодуляцая препаратов. В опыте под влиянием препарата количество комплемента в сыворотке крови неуклонно нарастало с первого дня развития раны вплоть до 12 дня и поз:;:е. Это, конечно, обеопечи- . вала коыяе,ментом указанные механизмы протпооинфекционной защити. Во многом усиленный синтез белков систеш комплемента обеспечивала изучение я описанные гомеостатическис факторы, коррегируеша пиридинолом. В контроле содержание " комплемента нарастало только до 3 дня, после чего оно рез-

го падало до исходного уровня и имело тенденцию к дальнейшему снижению. Итак, исследования фагоцитоза и активности комплемента на модели раневой инфекции показало; что препарат на основе пиридинола является активным не-опецифпческнм иду.унсмодулятором с протнюгипокспческим, мембрансстабилизпрухцш и антисксидаятным действие:.1!. Он физиологически, метаболически облегчает ответ илмуноксм-петбнткых клеток.

Клнничостад апрябаы^., лйтад-н-гола в качестве

руской инфекции,. Можно было предполагать, что положительные результаты лечения больных вирусным гепатите;-.! А в клиниках города Риги, города Ленинграда, города Чигы и города Луганска были связаны не только с защитой и нормализацией ф~ункций клеток печени, но и о жыуномодуляцией. Однако иммунный статус леченных больных- по разным причинам до сих пор не изучался. Б своих исследованиях мы выполнили эту задачу, вытекаядую из общей цели р-.бсты* Де-. та.ьное обоснование применения пиридинола в клинике мы -привели в начале главы 5.

Вторичный Т-холперннй ;1?т.-луно дефицит С Тх/Тс=1,Э и ниже). Указанный иммуксдефецит определяли у больных ■ галититом А при госпитализации, следили за его ннмекекиегд в процессе лечения по данным иммунологических исследований субпопуляцш Т-лилфоцитов. У больных с этим типом вторичного ишунодзфецита обнаружены з динамике интересные изменения гонео стаза. Динамика количества эритроцитов отражала результаты экспериментальных опытов;

нарастание числа клеток. эрктроццтарного рада да 5 дня, а затем резкое сникение их количества. Это, 'riß uokho ■ предполагать, быстро включало ишунооуиреосорное действие эритроцитов и не вело к углублению гипоксии: рОг, в плазме анарастало или же было близким к норме

Данник шакт позволяет предположить .в сомом общем виде, что запрос на увеличение числа эритроцитов при острой вирусной инфекции обусловлен не только степенью кислородного голодания, но и возможностью биологических событий в системе вирус-клетка. Нз исключена, что это может быть свойством вирусов, которые в зону своего размножения (печень, гепатоциты) привлекала' эритроциты для блокады иммунологической защиты. Пргд этом создаются условия для реализации стратегии вирусного генома: репродукция и выход из организма хозяина. -Возможно такие, что увеличение запроса на эрлтродаты-супрессоры определяется формированием аутоантигенов в печени. Если это так, то иммуносупрессия защищает печень от ау-тоишуной деструкции. В любой случае этот факт требует специального изучения, которое ш не могли предпринять в рамках целей и задач наией работы. Сникенке уровня эритроцитов и отсутствие серьезных сдвигов pOg в плазме дров;: можно расценивать как уяе названную ки-слородсберегаыщуы функции пиридинола, реализуемую через его антиокевдантше (мембранопротекторние) овоп-ства.

Стереотипным у больных с этой формой иммунодефицита было и изменение клеток белой крови: временное, до

Е дня, снижение, а затем нарастание до исходного уровня. Лейкоцитоз при этом не наблюдался. Несмотря на это для фагоцитов формировались под влиянием пиридииола необходимые условия а рамках гокеостаза: годдержвался должный уровень калия п натрия, сдвигалось л кислотную сторону pH внутри клеток крови, компенсаторно изменялось рС02. ■

Под влиянием пкрпдпнола прогрессивно нарастало до 10 дня (срок наблюдения) и дальше обцее количество Т-лшфоцитоз, активных Т-лнмфзцптов, количество индукторов .Т-Клаток и количество незрелых В^клеток.

Занна, что под влиянием пиридинола с 4-5 дня у больных неуклонно увеличивалось количество Т-хелперов до 10 дня, поэтому изменялся Ix/Тс индекс, выравнивался иммунодефицит в- сторону нормального иммунного статуса человека.'

Описанные изменения а йункцлокирозанпи различных типов к юток носят, конечно, неспецифпческ.п1 характер по своему механизму. Это метаболическая коррекция как фуккцш,гепатощстов, так и клеток системы иммунитета. Пиридинол метаболически облеглает а неблагоприятных условиях гомесстаза выполнение специальных (ишунных) свойств, обусловленных генотипом клеток (Федоров Б.А., Кукес 3.Г.,1970).

0 3 данной группе бслышх с Гх/Тс дефицитом отмечена положительная дшгамика и 3-клеточного. звена иммунного ответа. В основном это быстрое нарастание уке к 5 дни количества незрелых Б-клеток. Почти1 всегда это продолжалось вплоть до 10 дня наблюдения. Зтп розуль-

таты хсршо коррелирует о экспериментальны^:: даньы:.;.'?, полученными при изучении иязянае гшрндиксла на сак- . цкпашшЗ процесс у крпс, где пы установил;: судостзенпо белее ражие сроки синтеза -.илдукоглсСудкяов, ке прези-иаацогс фаподогическай уровень. Поэтому уззллчегке п на^ растанко незрелых В-млетск у больных яьчешшх паридкнолоы с вирусным гепатитом А мм расцениваем как облегченный ответ В-снстомы на вирусные апт/гонн.

Бее стаечеззшо цкн-: тыолсатэльиыо офмектп ппридшю-ла сводятся к созданию условий гомаестаза, ар:* которых значительно раньше начинал? работать то плп'":пь;е тень: с нормальной фцзлелегмчеокоп окорооткэ. К названным ус-лсакад относятся: транспорт кпелиреда в мьтокопдрик, рН, pCOg, pCIg, уровень ленов калзя, натрия ¿другие.

I. Антисклеротический нетоксичный шдчциксжЙ препарат шхрядгшл обладает действием

в отиоиенкл ле&'ликюа, что в гкеперп-мян^е я хлккккс при инфекционных поражениях проявляется синением их общего числа в ispean и одаовреыеян^'. резк;ил повывши числа фагецзифув'окх в 1,7 раза. Препарат способствует ак'/ив hocík фагоцитов свои;.; антксксидаптнгл.; действием, следствием которого является улучиенне транспорту кснев, улучшение дыхания и" iорнолекиа аерекиеккх процессов.

г.Пкрцдтеол метаболически облегчает я ускоряет первичный ответ З-лиафоцдагов на антигены, что характеризуется увеличением в организме", числа В-клегок в • 2л2> раза,формированием физиологического уровня синтези-

руемых иммуноглобулинов у яивотных ¡1 человека на 7 дней . раньше» чем у контрольной группы.

3, Под влиянием пиридинола увеличивается в крова на 15-20^ кол;пестао Т-киллероз, начиная с 5 дня прялене-ния препарата. Модуляция Т-киллероз лирндиналом не ведет и повыщеншз нормального уровня этих компетентных I--теток, • 4. При Т-хелперном вторичном дефиците применение пиридинола вздет к увеличение количества клеток этой субпопуляции лимфоцитов на 5-10$» ¡Летаболическая модуляция Т- ■ хелиероэ пирвдинолан не призиаат по числу меток показателей у здоровых лиц, поэтому Тх/Тс индекс у больных сдвигается только в сторону нормальных величин.

б. Общее количество лимфоцитов "и Т-активккх лимфоцитов, включая клетгси-индуеторы к1лмунал0глческих_ процессов,

е

под влиянием пиридинола координировано увеличивается з организме человека в 2,3 раза, начиная-с 5 дня к продолжается до уровня показателей . .здоровых ладей.

6. При гипоксии пкридинол блокирует резкое по- . вылениэ числа оритроцптов, которые-являются кислород-транспортными метками и иммуиосупрзесорами одновременно. При этом тканевое дыхание и рСц существенно не изменяются,. т.к. пропарат является анткоксидантсм.'то есть йпсло-родсберегаищшл средство!,1.

7. Пиридинол совместим, как шмунокодулятор{

д антпокоидаитами п другими средствами лечения больных, он макет вклйчагьоя я состав сложных лекарственных . форм. ,

о

8, Пиридинол является шлуноиодуляТороп общего ,

избнрательго действия-. Его активность в отношении , ■ системы ииуунитета проявляется ярд использованы.: в дозах от 50С до 1500 мг а сутки.

. Рекопеидащ-Гл игдя внедрения в практику:

1. Применение пиродккола в 'иедицинской практике по пряг.сму назначению как ангиодротек^ора (различные формы атеросклероза, сахарный диабет и т.п.) позволяет у этих категорий больных получить одновременно положительный им,:уномодул;грующий эффект з отношении фагоцитов, Т—, и 3-ли:%;ацитсз с целью нормализации иммунологического статуса.

2. Дирлдикол, используемым з роли противогапоксического препарата при острой вирусном гепатите А, вызызает одновременно и ш-куномоделирую'дпк эффект, -если у больных имеется вторичный иммунодефицит,

Оснозныо материалы диссертация отракены в еле-душих публикациях:

1. "Иммуноыодулирующая активность ппридинола при вторичных супресоизных а.муиодефпцптах". - ¡Материалы

I Всесоюзного съезда кшунслогоа (г.Сочи, 1989), о,. 230.

(Совместно с Г.М.Ларионовым и А.З.Баклановой).

2. "Коррекция некоторых механизмов регуляции гомео-стаза через меточные мембранные структуры в системе па-' разита - хозяина". - Материалы 17 Всесоюзного съезда патофизиологов по "Нарушению механизмов регуляции и их коррекции" (г.Кишинев, 1989), с. 458. (Совестно с ГЛчиЛа-рионовым и Е.М.Климочкиной).

3. "Влияние пиридинола на биоэнергетические процессы а порекионое окисление липэдов у гшзотных, вакцинированных АКДО". - материалы региональной научно-прак тической конференции гш "Влиянии факторов внешней среды на реактивность организма" (línea - Ворошиловград, 1990), с. 25.

'4, "Возыомнооти микроанализаторной техники функционального состояния кшунокомпетентных клеток". - Г<2атериалы I Республиканской конференция по "Новым физическим методам в медицина"(г.Ворошиловград, 1990), с. 30.(Совместно с. ■Г.М.Ларионовым).