Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Активность ферментов обмена предшественников ДНКпри опухолевом росте у человека

АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ

ИНСТИТУТ ПРОБЛЕМ ОНКОЛОГИИ И РАДИОБИОЛОГИИ им. Р. Е. КАВЕЦКОГО

На правах рукописи

БОРЗЕНКО Берга Георгиевна

Активность ферментов обмена предшественников ДНК при опухолевом росте у человека

14.00.14 — Онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

АКАДЕМИЯ НАУК УКРАИНЫ

ИНСТИТУТ ПРОБЛЕМ ОНКОЛОГИИ И РАДИОБИОЛОГИИ им. Р. Е. КАВЕЦКОГО

На правах рукописи

БОРЗЕНКО Берта Георгиевна

Активность фершнтов обме предшественников ДНК при опухолевом роете

у человека

14.00.14 — Онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Работа выполнена в Донецком государственном медицинском институте им. А. М. Горького

Научные консультанты: доктор медицинских наук, профессор

Г. В. БОНДАРЬ

доктор медицинских наук, профессор В. Н. ЕЛЬСКИЙ

Официальные оппоненты: доктор биологических наук

Ю. П. ШМАЛЬКО

доктор медицинских наук, профессор Д. В. МЯСОЕДОВ

доктор медицинских наук, профессор Э. Г. ГОРОЖАНСКАЯ

Ведущее учреждение — НИИ онкологии им. проф. Н. Н. Петрова

МЗ

Защита диссертации состоится ...... 199-^г.

в 13 часов 30 минут на заседании специализированного совета Д016. 38. 01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в Институте проблем онкологии и радиобиологии им. Р. Е. Ка-вецкого АН Украины (252022, Киев, ул. Васильковская, 45).

, С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

I Автореферат разослан «............»..............................199 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

Ю. В. Яниш

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Биохимической особенностью опухоли являются присущие ей и вызываемые ее влиянием сдвиги в обмене веществ большинства тканей организма и гомеостаза в целом (Ка-. вецкий Р. Е., 1977; Дильман В. М., 1983). Метаболические сдвиги обусловлены качественным и количественным энзимологическим дисбалансом, вызванным отклонениями в генетической экспрессии и проявляющемся в изменении активности ключевых ферментов различных жизненно важных процессов (Шапот В. С. 1986; е. а,,

1987). Учитывая вызванную нерегулируемым ростом огромную потребность опухоли в нуклеиновых кислотах и их предшественниках, можно предположить, что ключевые ферменты метаболизма пиримиди-новых и пуриновых нуклеотидов ДНК могут быть показателями неопластической трансформации клетки.

В решении одного из аспектов общей проблемы малигнизации— выявлении особенностей нуклеинового обмена в организме онкологических больных с различной локализацией опухоли в организме большой интерес представляют два подхода. Изучение обмена пиримиди-новых и пуриновых метаболитов ДНК в организме здоровых людей различного возраста (так как возраст относится многими иследова-телями к факторам риска при онкологических заболеваниях) и сравнительное исследование активности ключевых ферментов метаболизма предшественников ДНК в организме людей с патологиями, на фоне которых чаще, чем в обычной популяции, развиваются раковые заболевания, и в организме онкологических больных с различной распространенностью опухолевого процесса. Это позволит не только правильно оценить метаболические особенности неоплазмы, но и выяснить некоторые причины их появления.

В результате недостаточной активности таких ферментов пури-нового обмена как аденозиндезаминаза и 5,—нуклеотидаза наблюдаются нарушения иммунного статуса организма, связанные с изменением дифференцировки и функциональной готовности иммуноком-петентных клеток а., 1989). Сравнительное изучение ак-

тивности аденозиндезаминазы и 5,—нуклеотидазы в сыворотке и лимфоцитах периферической крови здоровых людей и онкологичес-

ких больных одного возраста и пола необходимо для понимания механизма иммунодепрессии и разработки путей фармакологической иммунокоррекции онкологических больных.

Особый интерес представляет изучение обмена ДНК в организме онкологических больных в процессе их комбинированного лечения. Известно, что многие противоопухолевые препараты являются метаболитами и антиметаболитами нуклеинового обмена, «летальный» синтез которых в организме человека идет с участием исследуемых ферментов (Герасимова Г. К.. 1983; /Сс?/?<с е. а. , 1983). В этом случае индивидуальная динамика активности изучаемых ферментов в процессе лекарственного лечения может служить тестом проводимой терапии. 4

Разработка намеченных направлений в исследовании метаболических особенностей нуклеинового обмена в процессе опухолевого роста у человека, позволяющая установить индивидуальные подходы к рациональному лечению онкологических больных представляет собой актуальную проблему в современной онкологии.

Цель работы. Выявить изменение активности ферментов метаболизма пиримидиновых и пуриновых предшественников ДНК в организме здоровых людей различного возраста, больных групп повышенного онкологического риска и онкологических больных, разработать критерии оценки эффективности лечения онкологических больных.

Основные задачи исследования:

1. Изучить сравнительную активность ферментов метаболизма тимидина в цитозоле тканей и сыворотке здоровых людей и онкологических больных с различной локализацией опухоли в организме.

2. Исследовать активность аденовиндезамидазы и 5'-нуклеоти-дазы в лимфоцитах и сыворотке крови здоровых людей и онкологических больных различного возраста и пола.

3. Изучить сравнительную активность ферментов метаболизма тимидина и аденозина в сыворотке крови здоровых людей, больных язвенной болезнью и раком желудка.

4. Исследовать ферментативные особенности обмена предшественников ДНК у женщин, больных мастопатией и раком молочной железы с различной степенью распространенности опухолевого процесса в организме.

5. Выявить взаимосвязь изменения активности ферментов метаболизма аденозина в лимфоцитах и сыворотке крови с функциональной готовностью Т- и В-звеньев иммунной системы у здоровых людей и онкологических больных различного возраста и пола.

6. Разработать способ использования активности исследуемых ферментов в сыворотке крови онкологических больных для оценки эффективности проводимого лечения.

Научная новизна. Впервые установлено изменение активности ферментов пиримидинового и пуринового обмена ДНК в тканях, лимфоцитах и сыворотке крови здоровых людей различного возраста и пола.

Показано, что у здоровых людей с возрастом, активность биосинтетических ферментов начинает превалировать над активностью катаболических ферментов.

Впервые обнаружено, что активность ферментов метаболизма пуринов в лимфоцитах и сыворотке крови, некоторые показатели иммунологической реактивности организма здоровых людей зависят от возраста и пола обследуемых.

У больных групп повышенного онкологического риска выявлены метаболические нарушения обмена ДНК в лимфоцитах и сыворотке крови, обусловленные снижением активности катаболических фэр-' ментов тимидинфосфорилазы и аденозиндезаминазы. Следствием этих нарушений возможно усиление пролиферативных процессов на фоне развивающегося иммунодефицита, усугубляющее вероятность неопластической трансформации в организме человека.

Впервые показано, что при биохимической гетерогенности опухолей человека общим для них является наличие ферментативного дисбаланса метаболизма пиримидиновых и пуриновых предшественников ДНК, обусловленного повышением активности биосинтетических ферментов при резком снижении активности ферментов, их деградации в тканях, лимфоцитах и сыворотке крови онкологических больных. Дисбаланс активности ферментов метаболизма тимидина и аденозина, обнаруживаемый на стадии Т1Г\ЮМо увеличивается с распространенностью опухолевого процесса в организме человека. Достоверное увеличение активности тимидинкиназы сыворотки кропи у больных раком молочной железы Т1№ОМо может использоваться для ранней дифференциальной диагностики заболеваний.

Впервые выявлено, что у больных раком желудка Т31МгШо мужчин иммунодепрессивное влияние опухоли выражено сильнее, чем у больных женщин, что может быть использовано при проведении иммуно-коррекции у таких больных.

Выявлена взаимосвязь нарушения активности ферментов метаболизма тимидина и степени дифференцировки опухоли.

Изучена динамика активности ферментов обмена предшественников ДНК в сыворотке крови больных раком молочной железы

ТЗМ'2Мо в процессе комбинированного лечения и показана возможность использования активности тимидинкиназы, тимидинфосфо-рилазы, аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы для оценки эффективности проводимой химиотерапии.

Научно-практическое значение работы. Полученные данные расширяют представление о метаболическом механизме опухолевого роста у человека и являются обоснованием нового биохимического подхода к рациональному лечению онкологических больных. Установлены особенности нуклеинового обмена в организме здоровых людей различного возраста, что указывает на необходимость строгого возрастного отбора контрольных групп как при научных исследованиях, так и в клинической практике.

Выявленные метаболические нарушения, наблюдаемые при язвенной болезни и мастопатии подтверждают необходимость профилактических осмотров таких больных и могут быть предпосылкой научного обоснования механизма перехода предопухолевых заболеваний в опухолевые процессы.

Показано, что недостаточность активности аденозиндезаминазы и 5,—нуклеотидазы б лимфоцитах онкологических больных в первую очередь отражается на функциональной готовности Т-системы лимфоцитов. Установлена обратная зависимость активности аденозиндезаминазы в сыворотке крови и величины индекса реакции бласттран-сформации лимфоцитов, что позволяет использовать биохимический показатель при изучении иммунологического статуса пациентов.

Новые биохимические данные подтверждают возможность использования сывороточных ферментов в качестве опухолевых маркеров, что дает определенные преимущества при дифференциальной диагностике и лечении онкологических больных.

В работе представлено новое направление в химиотерапии злокачественных новообразований: на основе данных об особенностях метаболизма в организме конкретного больного разрабатывать индивидуальный подход к его лекарственному лечению.

Исследование свойств тимидинкиназы организма опухоленоси-теля лежит в основе дифференциальной диагностики онкологических заболеваний желудочно-кишечного тракта. По данным материалов опубликовано информационное письмо МЗ Украины и получено свидетельство об изобретении,

Ряд методических разработок внедрен в 'клиниках и учебных учреждениях Украины.

Апробация работы и публикации. Материалы диссертации докладывались на республиканском биохимическом съезде (Донецк, 1977; Днепропетровск, 1982; Киев, 1987); республиканской научной конференции «Применение ферментов в медицине» (Одесса, 1981; Симферополь, 1987); Всесоюзном симпозиуме с международным участием «Структура и функции лизосом» (Тбилиси, 1986); Всесоюзном симпозиуме по медицинской энзимологии (Алма-Ата, 1983; Махачкала, 1986); Всесоюзной конференции по теоретическим вопросам криобиологии (Харьков, 1984); Всесоюзном съезде онкологов (Ленинград. 1986); Всесоюзном биохимическом съезде (Киев, 1986); заседании проблемной комиссии «Биохимия опухолей» ВОНЦ АМН СССР (Москва, 1987); Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989); Всесоюзном симпозиуме «Актуальные вопросы онкогеронтологии» (Волгоград, 1989).

По материалам диссертации опубликовано 35 работ, информационное письмо МЗ Украины, разработаны два рацпредложения, получено положительное решение на изобретение.

Положения, выносимые на защиту:

1. Дисбаланс ферментативной активности метаболизма предшественников ДНК при опухолевом росте у человека.

2. Особенности биохимического механизма нарушения Т-клеточ-ного иммунитета у больных раком желудка различного возраста и пола.

3. Возможность использования диагностики активности ферментов метаболизма тимидина и аденозина как теста эффективности при комбинированном лечении онкологических больных.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы (3 главы), экспериментальной части (4 главы), заключения, выводов и списка литературы, содержащего 495 источников. Объем диссертации — 223 страницы, иллюстративный материал ~ 3 схемы, 15 рисунков, 23 таблицы.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы исследования. При выполнении работы была исследована кровь 239 онкологических больных, из них в динамике кровь 149 больных раком желудочно-кишечного тракта и 90 больных раком молочной железы (всего 530 проб сыворотки крови), а также злокачественные опухоли 30 больных раком желудка, лимфоциты 60 больных. Исследована кровь и лимфоциты 70 больных групп повышенного онкологического риска (язвенная болезнь желудка, мастопатия).

В качестве контроля исследована сыворотка крови 211 практически здоровых лиц в возрасте от 18 до 80 лет и ткани 42 лиц, погибших от случайной травмы, лимфоциты 80 здоровых людей.

Активность тимидинкиназы определяли по модификации Г. И. Ворновицкой и сотр. (1972), используя в качестве субстрата меченый тимидин производства СССР, ЧССР. Активность тимидинфосфорилэ-зы ~ модифицированным нами методом (Борзенка Б. Г. и соавт., 1986).

Активность ферментов метаболизма аденозина — аденозиндез-аминазы и 5'-нуклеотидазы АМР определяли в сыворотке крови и лимфоцитах, выделенных в ступенчатом градиенте фикол-верографина (Бейум А., 1980). Активность-аденозиндезаминазы определяли спек-трофотометрическим методом по начальной скорости реакции в тер-мос'татируемой кювете на спектрофотометре СФ-26 (A#/^s^1947; y ^'tcAu 1983). Активность мембранной 5,—нуклеотидазы АМР определяли по методу £#/&<ЗМ/д1980).

Одновременно с активностью ферментов метаболизма аденозина определяли иммунологические показатели: реакцию бласттранс-формации лимфоцитов в микромодификации (П. Г. Назарова, 1975), определению розеткообразования клеток (Понякина Н. Д., 1986), определение концентрации иммуноглобулинов А, С, М (/ifonciw е. а., 1964).

Статистическую обработку результатов проводили методом вариационной статистики; при р<0,05 разницу величин рассматривали как достоверную (Бейли, 1962).

Проведен пошаговый регрессионный анализ полученных данных методами корреляционного анализа (Вучков И. и соавт., 1987).

Была поставлена цель — выявить изменение активности ферментов обмена предшественников ДНК при опухолевом росте у человека. Возможность изменения активности ферментов обусловлена тем, что, с одной стороны, интенсивность пролиферации тканей су-

щественно зависит от внутриклеточного уровня пиримидинового предшественника ДНК — тимидина, регуляция которого'по «запасному» пути осуществляется кооперативной работой тимидинкиназы и тимидинфосфорилазы. Именно «запасной» гть .метаболизма тимидина интенсивен (в быстрорастущих тканях ( У^&тт-ЯН-За II е. а., 1980; ^А/^еМ/'е. а., 1989). Установлено, что активность тимидинкиназы прямо коррелирует с синтезом ДНК и ростом тканей 1985; е. а., 1979). С другой стороны, многочисленные ис-

следователями показана ключевая роль метаболизма аденозина (пу-ринового предшественника ДНК) в процессах пролиферации, диф-ференцировки и нормального функционирования иммунокомпетерт-ных клеток (Г. И, Потапова, 1989; В. Ю. Уманский, 1991;). е. а., 1988). Следовательно, активность ключевых ферментов метаболизма тимидина и аденозина связана с изменяющимися для любой опухоли и организма — опухоленосителя характеристиками — скоростью клеточной пролиферации и уровнем иммунологической реактивности. Все вышесказанное и обусловило выбор исследуемых ферментов,

Нами установлено увеличение активности тимидинкиназы в ци-тозоле опухолей и сыворотке крови онкологических больных (рак ан-трального отдела желудка, молочной железы). При этом в исследуемых пробах повышается активность тимидинкиназы и достоверно снижается активность тимидинфосфорилазы.

Полученные результаты не только обнаруживают характер нарушения метаболизма тимидина в опухоли (увеличение биосинтетических процессов), но и подтверждают имеющиеся литературные данные ¿//гь/1987) об увеличении активности тимидинкиназы в сыворотке к'рови онкологических больных. Однонаправленность изменения активности тканевых и сывороточных ферментов метаболизма тимидина при раковых заболеваниях у человека позволила нам в дальнейшем использовать активность именно энзимов сыворотки. Это в определенной степени расширило спектр клинических исследований и сделало их более доступными. Возможность работы с сывороточными ферментами обусловила и несколько необычный подход к подбору контрольной группы. Мы обследовали не одну контрольную группу доноров, а изучали активность ферментов метаболизма аденозина и тимидина в сыворотке крови здоровых людей в возрасте 18—80 лет.

' При обработке полученных данных на ЭВМ установлено увеличение активности тимидинкиназы и тимидинфосфорилазы, прямо коррелирующее с возрастом обследуемых. Однако интенсивность увеличения активности тимидинкиназы на порядок выше, чем тимидинфос-

форилазы. (К-£тк=0,62; К .ргф—0,001). Нами установлено достоверное увеличение активности тимидинкиназы .и в цитозоле печени здоровых людей старше 45 лет. Известно, что активность тимидинкиназы регулируется глюкокортикоидами ( е. а., 1977). Возрастное изменение гормонального фона может отразиться и на активности фермента. В результате этого увеличение активности тимидинкиназы может оказаться предпосылкой онкологического риска у здоровых людей старших возрастных групп. Полученные данные >Гтот факт, что Еозраст все чаще в мировой клинической практике относится к факторам онкологического риска, были причиной того, что все дальнейшие исследования активности ферментов метаболизма тимидина и аденозина мы проводили в возрастном аспекте. При этом установлена зависимость активности ферментов метаболизма аденозина от возраста и пола обследуемых.

Особый интерес представляет изучение активности ферментов метаболизма предшественников ДНК у больных групп повышенного онкологического риска. К таким больным относят и больных язвенной болезнью желудка (Слинчак С. М., 1985; Портной Д М., 1988; ¿ЫЯУе^аЬСГ, 1988).

Из табл. 1 следует, что активность тимидинкиназы у язвенных больных в возрасте 23-35 лет достоверно выше контрольных значений. Активность тимидинфосфорилазы колеблется в пределах нормы и составляет 0,25±0,06 У.Е. У больных последующих возрастных групп активность тимидинкиназы соответствует контрольным величинам, но при этом у обследуемых в возрасте старше 45 лет наблюдается достоверное снижение активности катаболического фермента тимидинфосфорилазы.

Таким образом, динамика активности ферментов метаболизма тимидина изменяется с возрастом, но всегда таким образом, что наблюдается некоторый сдвиг соотношения активности ферментов в сторону анаболических процессов.

У больных раком желудка четко выраженный метаболический дисбаланс, основанный на противоположном изменении активности ключевых ферментов анаболизма и катаболизма: достоверное увеличение активности тимидинкиназы при резком снижении тимидин-фосфорилазной активности, Необходимо отметить, что снижение активности катаболического фермента усугубляется с возрастом пациента.

Следовательно, наблюдающийся сдвиг в сторону биосинтеза ти-мидилата, обнаруженный у больных язвенной болезнью, аналогичен более четко выраженным ферментативным изменениям, установленным при раке желудка.

При определении активности ферментов метаболизма аденозина в сыворотке крови больных язвенной болезнью желудка (табл. 1) было обнаружено достоверное увеличение активности сывороточной аде-нозиндезаминазы у больных всех возрастных групп. Нами установлено, что повышение аденозиндезаминазы а сыворотке крови всегда сопровождалось снижением активности фермента в лимфоцитах. Известно, что снижение активности аденозиндезаминазы в лимфоцитах является причиной накопления в них аденозина и его фосфорилиро-ванных производных (Дмитренко Н. П., 1984; Храмцова С. Н., 1987). которое сопровождается нарушением функциональной активности лимфоцитов.

Имеются данные о недостаточности Т-клеточного звена иммунной системы (уменьшение числа Т-лимфоцитов, в частности Т-хелпе-ров) у больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки (Енишин А. В. и др., 1988). Авторы считают эти нарушения одним из факторов повышенного онкологического риска. Наши данные указывают, что на таком фоне изменение активности ферментов метаболизма тимидина, тесно связанных с клеточной пролиферацией, усугубляет этот риск. У больных раком желудка Т31\М Мо всех возрастных групп установлено, что при выявленном ферментативном дисбалансе метаболизма тимидина наблюдается резкое снижение активности аденозиндезаминазы в лимфоцитах и повышение ее в сыворотке крови.

Необходимо отметить, что в сыворотке крови и лимфоцитах больных раком желудка установлена различная в зависимости от пола возрастная динамика активности ферментов (табл. 2). У больных раком желудка женщин активность аденозиндезаминазы резко увеличивается в возрасте 46-60 лет (в 3,73 раза), затем снижается и у больных в возрасте 61-70 лет не превышает контрольных величин. У онкологических больных-мужчин активность аденозиндезаминазы, также минимальная в период 46—60 лет (в 5,44 раза выше нормы), продолжает сохранять высокое значение (в 4,12 раз выше, чем в контрольной группе) до 70 лет. И у мужчин, и у женщин активность фермента в лимфоцитах достоверно ниже нормы.

Активность 5'-нуклеотидазы повышается в сыворотке крови и снижается в лимфоцитах у больных женщин всех обследуемых групп

(36—70 лет), у больных раком желудка мужчин изменяется таким же образом, но только после 45 лет. Подобное изменение активности ключевых ферментов метаболизма аденозина может привести к накоплению и быстрой аккумуляции в лимфоцитах аденозина и его фос-форилированных производных, что, в свою очередь: может вызывать нарушение пролиферации, дифференцировки и функциональной способности лимфоцитов.

Определение активности ферментов метаболизма аденозина в сыворотке крови и лимфоцитах больных раком желудка проводилось одновременно с изучением некоторых иммунологических показателей (табл. 3). Так как изучение ферментов пуринового обмена выявило достоверную зависимость их активности (особенно четко выраженная для аденозиндезаминазы) от возраста и пола, то и определение иммунологических маркеров проводило именно в этом аспекте. Установлено, что активность аденозиндезаминазы в сыворотке крови больных раком желудка (46—60 лет) максимальная, (в 4,33 раза выше нормы) при одновременном снижении ее в лимфоцитах в 2,86 раза. У больных этого возраста индекс реакции бласттрансформации лимфоцитов в 4 раза ниже, чем в соответствующей контрольной группе. В связи с тем, что у онкологических больных в возрасте 46—60 лет выявлены более глубокие сдвиги как биохимических, так и иммунологических показателей, в дальнейшем обследовали именно этот контингент больных. Оказалось, что женский организм менее подвержен угнетающему иммунологическую реактивность действию опухолевого процесса. Это четко прослеживалось при анализе ми-тогенной активности в обеих группах (ИС у женщин —34,4^5,23, а у мужчин — 23,80±3,07). Выявленная особенность подтвердилась и при сравнении розеткообразующей функции Т-лимфоцитов (р<0,05). Причем эту тенденцию не удалось выявить путем подсчета общепринятого показателя удельного веса Т-РОК, из-за различия общего количества лейкоцитов у мужчин и женщин. При анализе функции В-лимфоцитов как в зависимости от возраста, так и от пола существенных различий не обнаружено. Исключение в томив другом случаях представляет концентрация иммуноглобулинов класса М, уровень которой у мужчин почти вдвое ниже, чем у женщин. Сопоставить полученные данные об изменении иммунологических показателей организма человека в зависимости от возраста и пола с имеющимися в литературе не было возможности, ' хотя еще в конце 60-х годов отмечалась необходимость таких наблюдений (Го-родилова В. В. с соавт,, 1983).

Результаты одновременного изучения биохимических и иммунологических показателей помогли еще раз убедиться в значении пу-

ринового обмена иммунокомпетентных клеток для формирования иммунного статуса организма. Тот факт, что именно при злокачественном росте возраст и пол оказывают выраженное влияние на функциональную активность лимфоцитов может быть связан с влиянием, с одной стороны, возраста на гормональную регуляцию, а с другой, тем, что рост неоплазмы в организме часто вызывает стабильные сдвиги в гормональном балансе (AS to.\a ( е. а., 1981). А эти изменения в свою очередь могут привести к ослаблению функциональной готовности лимфоцитов, обусловленную антипролифе-ративным (Петров Р. В. и соавт., 1981) и цитолитическим действием гормонов на лимфоидные клетки, а также, их воздействие на миграцию и кооперацию лимфоцитов ( N & $ S.( I/ а., 1982).

Таким образом, выявленные возрастные изменения активности ферментов метаболизма аденозина в организме онкологических больных могут быть одной из причин нарушения функциональной активности, в первую очередь, Т-лимфоцитов. Не удивительно, что нарушение функциональной готовности Т-лимфоцитов наблюдается при сниженной активности в них аденозиндезаминазы, так как именно этот фермент играет важную роль в процессе дифференци-ровки лимфоцитов. Нами установлен не только тот факт, что при снижении аденозиндезаминазы в лимфоцитах повышается активность ферментов в сыворотке крови, но и обратная корреляция между активностью сывороточной аденозиндезаминазы и индекса реакции бласттрансформации лимфоцитов. Реакция бластной трансформации, наряду с другими методами, позволяет оценить функциональное состояние Т-лимфоцитов и их способность к иммунному ответу. Выявленная закономерность позволяет использовать биохимический показатель (сывороточную аденозиндезаминазу) как дополнительный маркер иммунологической реакции организма.

Обнаруженные нами метаболические нарушения обмена предшественников ДНК в сыворотке крови больных язвенной болезнью желудка, отдаленно напоминающие изменение при раке, заставили нас более подробно исследовать сравнительную активность ферментов метаболизма тимидина и аденозина у больных групп повышенного онкологического риска и онкологических больных с различной распространенностью опухоли в организме. Именно в таком аспекте изучалась активность исследуемых ферментов в сыворотке крови здоровых женщин, больных мастопатией и раком молочной железы I—1У стадий.

Установлено, что у больных мастопатией после 45 лет наблю-

Дается снижение активности катаболических ферментов обмена предшественников ДНК, что может приводить к изменению скорости репликации и биосинтеза ДНК, а следовательно изменять скорость пролиферативных процессов. Обнаруженное нами при этом достоверное снижение аденозиндезаминазы в лимфоцитах (табл. 4), обязательно отразится на их функциональной готовности (Но е. а., 1989) и, возможно, является одной из причин обнаруженных при мастопатии системных нарушений Т- и В-лимфоцитов (Гриневич Ю. А., 1981). Эти нарушения признаны одними из факторов онкологического риска, который, согласно нашим данным, усугубляется у больных мастопатией старше 45 лет нарушением метаболизма тимидина и связанного с ним процесса клеточной пролиферации. В последние годы в мировой клинической практике все чаще возраст считают одним из факторов онкологического риска е. а., 1989;

Р^ОМЯЗ , 1989). В группы риска рака молочной железы входят женщины старше 45 лет, для которых разрабатывается целый ряд профилактических мер, включающих скрининг с помощью различных клиническцх и экспериментальных методов (Заридзе Д. Г. и др., 1989; ^^¿У/С- е. а., 1989).

Нами выявлено (табл. 5), что у больных раком молочной железы Т1 ОМо в сыворотке крови достоверно увеличивается активность биосинтетического фермента тимидинкиназы и 5'-нуклеотидазы АМФ. Определение кинетических характеристик тимидинкиназы показало, что максимум активности фермента в сыворотке крови здоровых женщин и больных мастопатией наблюдается на 20-й минуте, у больных раком молочной ж елезы Т1№0Мо —на 10-й минуте инкубации. Экспериментально установлено, что повышение активности тимидинкиназы .обусловлено выходом в сыворотку крови опухолевого фермента в. а., 1979). При этом в сыворотке обнаружены и изофёрменты тимидинкиназы. Данные о различных пиках активности фермента в . норме и на Т1№ОМо рака молочной железы можно, на наш взгляд, использовать в дифференциальнй диагностике рака молочной железы и. при профилактических осмотрах женщин. Наши результаты подтверждают мнение ряда авторов, считающих возможным использование тимидинкиназы сыворотки крови как маркера «аномалий метаболизма ДНК», полезного для оценки эффективности и продолжительности процесса пролиферации при злокачественном росте.(Силаева С. А., 1983а., 1984). С увеличением распространенности опухолевого процесса на стадии "ПМОМо и особенно на Т302М1 наблюдается увеличение активности тимидинкиназы на фоне резкого снижения тимидинфосфори-лазы, что увеличивает скорость включения тимидина в ТМФ и ско-

рость репликации ДНК. Детальное исследование сывороточной ти-мидинкиназы у больных множественной миеломой позволило (1989) сделать вывод о высокой надежности тимидинкиназы как маркера прогрессии заболевания. Увеличивается активность ферментов метаболизма аденозина в сыворотке крови при снижении в лимфоцитах, что обязательно отразится на состоянии иммунологической реактивности организма обследуемых. Это подтверждается имеющимися данными динамического анализа иммунного статуса больных раком молочной железы, показавших, что нарушения иммунологической реактивности усугубляются с нарастанием агрессивности процесса (Еремина О. Ф. и др., 1985; Березин С. А., 1986).

Таким образом, нами установлен ферментативный дисбаланс метаболизма тимидина и аденозина в организме больных раком молочной железы. Этот дисбаланс является одной из причин усиления скорости пролиферативных процессов и возникающего иммунодефицита при злокачественном росте у человека. Он закономерен, поскольку обнаружен нами у больных с различной локализацией опухоли в организме: рак желудка, прямой и ободочной кишок, молочной железы,легкого.

Необходимо отметить, что уже у больных групп повышенного риска (язвенная болезнь, мастопатия) с возрастом наблюдается снижение активности катаболических ферментов. На I стадии опухолевого заболевания присовокупляется увеличение биосинтети ферментов, появляется ферментативный дисбаланс, который увеличивается с распространением опухолевого процесса в организме человека.

Высокая информативность определения активности ферментов метаболизма тимидина и аденозина в сыворотке крови онкологических больных в процессе развития опухолевого процесса создавала, на наш взгляд, определенную перспективу для использования их в качестве прогностических критериев. Прогноз при опухолевых заболеваниях имеет большое значение для клиницистов. С целью выработки соответствующих критериев, проводились исследования иммунологического гомеостаза (Коростелева Т. А., 1985),' гормонального статуса (Розанова Н. Б. и др., 1984), клинических показателей {К(/*7 Р^, 1987; |е. а., 1988), уровень гормона-

льных рецепторов, стероидных гормонов , пролиферативной активности онкогенной амплификации {/Ште. а., 1982; а 1989' &/с/ч>?о 1989).

Нами, при исследовании активности тимидинкиназы, тимидин-фосфорилазы, 5'-нуклеотидазы АМФ в сыворотке крови больных раком желудка ТЗМ'Шо установлено, что активность ферментовме-

таболизма тймидина зависит от степени дифференцировки опухоли. При низко дифференцированных формах рака желудка активность тимидинкиназы сыворотки достигает максимальных величин 8,33± 0,57 нмоль (час) мг, а активность тимидинфосфорилазы крайне низка (0,06±0,002 нмол/час./мг).

Проведено исследование активности ферментов метаболизма тимидина и аденозина ,в сыворотке крови больных раком желудка ТЗ№1Мо при различных формах оперативного вмешательства: пробных лапаротомиях, радикальных и симптоматических операциях (табл. 6). При этом установлено через! 3 дня после операции радикальной достоверное (р<0,05) снижение в 1,85 раза тимидинкиназы ив 1,55 — нуклеотидазы AMP при увеличении в 1,93 раза тимидинфосфорилазы. После симптоматической операции активностьтимидинкиназы снижалась в 2,79 раза (р<0,001). а тимидинфосфорилазы увеличивалась в 1,3 раза. Но абсолютная активность фермента была очень низкой как до операции (О.ОбЗ^О.ООб У. Е.), так и после нее (0,07±0,008 У. Е.). Активность аденозиндезаминазы практически не изменилась в послеоперационный период. Активность 5'-нуклеотидазы снизилась в 1,25 раза. При пробных лапаро-томиях, когда не происходило вмешательства в состояние больного, достоверно (р<0,001) изменилась лишь активность 5'-нуклеотида-зы AMP.

Таблица 6

Активность ферментов метаболизма предшественников ДНК

при различных формах оперативного вмешательства, М±/Л

Операции

Активность радикальные пробные симптоматические

ферментов ! после ДО после До после

Тимидинкинвэа (нмоль/мин/мг) I «-•■■ШТИНШ |''л 6,29 ± 1,47 3,40± 0,58х 6,43± 1,76 4,02± 5,50± 0,45 0,67 1,97± 0,20х

Тимидинфосфори-лаза, У. Е. 0,15± 0,04 0,29 ± 0,01 х 0,139± 0,027 0,135± 0,07 0,053 ± 0,005 0,07± 0,008х

Аденозиндезаминаза (нмоль/мин/мг) 7,19± 2,87 5,9 5 ± 0,61 7,45± 2,15 6,57± 31,52=Ь 10,31± 48,62± 10,96± 38,86±

5'-нуклеотидаза AMP (нмоль/мин/мг) 63,02± 8,11 40,58± 6,31 х 51,48± 1,13 1,25 3,89 2,53 6,42 1,49 5J3x

Примечание: х-р < 0,05.

Сравнительный анализ данных показывает — более отчетливо выражены сдвиги в послеоперационный период при радикальном вмешательстве, что обусловлено, по-видимому, удалением всей мас-

сы опухоли из организма больного. Дополнительные коррективы внесло наблюдение за динамикой исследуемых ферментов в течение 2-х недель после операции (рис. 2.2. — см. стр. 20). После радикального вмешательства продолжалось снижение активности тимидин-киназы и она приближалась к норме (2,09±0,56 нмоль/мин./мг). Активность тимидинфосфорилазы увеличивалась и составляла 0,50=^0,08 У.- Е. (при норме 0,47±0,05 У. Е.). Налюдалось достоверное (р<0,05) снижение активности аденозиндезаминазы (3,12±0,18 нмоль/мин./мг).

Однако активность фермента продолжала оставаться выше, чем в контрольной группе здоровых людей аналогично возраста (ЧЛ^ 0,15 нмоль/мин./мг). Активность 5'-нуклеотидазы AMP через 2 недели после радикальной операции находилась в пределах нормы (6,18±0,71 нмоль/мин./мг).

В этот же период после симптоматической операции, когда опухоль оставалась в организме (был ликвидирован основной симптом заболевания) активность тимидинкиназы уже на 6-й день после операции начинала увеличиваться и через две недели превышала исходную, предоперационную активность, достигая 4,17±0,68 Нмоль/мин./мг. Активность тимидинфосфорилазы в это время, наоборот, начинала снижаться, возвращаясь к исходным величинам— 0,058±0,07 У. Е. Активность аденозиндезаминазы весь исследуемый период находилась на высоком уровне, в 8-9 раз превышая контрольные величины. Такая же динамика наблюдалась при изучении активности 5'-нуклеотидазы АМР, но абсолютная активность фермента в 2 раза превышала норму.

Таким -образом, были обнаружены метаболические сдвиги нуклеинового обмена в организме больных раком желудка, зависящие от возраста обследуемых и формы проведенного оперативного вмешательства. Известны данные об изменении гормонального гомео-стаза в ближайший послеоперационный период после радикальной операции (Розанова Н. В. и др., 1984), указывающие на изменение обменных процессов в организме). Нами показано, что более информативным является не одноразовое определение биохимических показателей, а исследование их динамики в более продолжительный период после оперативного вмешательства. Только благодаря такому подходу, было выявлено системное влияние оставленной в организме опухоли при симптоматической операции. При этом изменялась не только динамика активности ферментов метаболизма тими-дина, непосредственно "связанных с процессом клеточной пролиферации ,но и ферментов пуринового обмена, отражающих состояние иммунологического статуса организма.

Проведенное нами через несколько лет обследование больных

раком желудка, выявил нарушений активности ферментов метаболизма тимидина и аденозина в сыворотке крови при рецидиве заболевания.

Полученные данные требуют дальнейшей разработки, однако уже сейчас с полной уверенностью можно предложить определение динамики активности тимидинкиназы, тимидинфосфорилазы и аде-нозиндезаминазы в сыворотке крови больных раком желудка для их обследования, прогноза и оценки эффективности проводимого лечения.

Обнаруженная информативность динамики ферментов метаболизма тимидина и аденозина при различных формах оперативного вмешательства у онкологических больных и тот факт, что метаболические звенья обмена ДНК являются мишенью действия большинства химиотерапевтических препаратов, послужили предпосылкой для подбора ферментативного теста определения эффективности комбинированного лечения больных раком молочной железы T3N 2Мо.

В последние годы при лечении больных раком молочной железы наметилась четкая тенденция к выполнению более экономных операций [ftCvtMC 1985) и использованию полихимиотера-

пии как паллиативной, так и адьювантной ¿/л'€ С/лв>>1,-1989). Именно поэтому на одно из первых мест выходит проблема опухолевых маркеров. Широко используются различные факторы прогноза: уровень рецепторов, полиаминов, иммунологических показателей, пролиферативной активности онкогенной амплифилакции (Н. К. Бердинских, 1989; е. а., 1989). Особые преимущества в

клинической практике имеют онкомаркеры, определяемые в сыворотке крови больных {Jbet а., 1988е. а., 1989).

Проведенное исследование активности ферментов метаболизма тимидина в организме онкологических больных с различной распространенностью опухоли в организме показало, что сопряжение активности тимидинкиназы и тимидинфосфорилазы отражает активность пролиферативных процессов в опухолевом организме, а динамика активности аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы АМР может использоваться для предварительной оценки иммунологической активности организма.

Кроме того, при лечении рака молочной железы наиболее часто используемыми препаратами являются 5-фторурацил и метатрек-сат, самостоятельно или вместе с другими лекарственными веществами. Одним из механизмов их влияния является торможение основного пути биосинтеза пиримидинового предшественника ДНК —тимидина (Белоусова А. К., 1977). Но при этом возможен интенсивный синтез его по «запасному» пути, ключевым ферментом которого является тимидинкиназа. Возможно, что при высокой активности

этого фермента будет интенсивно протекать образование тимидила-та и синтез ДНК в целом, а значит это скажется на эффективности применения химиотерапевтических препаратов. С другой стороны, летальный синтез 5-фторуцила происходит с участием тимидин-фосфорилазы, динамика активности фермента может служить одним из показателей эффективности лечения с использованием данного препарата.

Из 84 больных раком молочной железы ТЗМ2Мо были произ- • вольно отобраны 44 пациентки одного возраста (40—60 лет), которые получали одинаковое комбинированное лечение. Установлено, что после лучевой терапии активность тимидинкиназы и тимидинфосфо-рилазы достоверно не изменялась, аденозиндезаминазы и 5'-нукле-отидазы увеличивалась.

После радикальной мастэктомии 29 больным проводили одинаковое послеоперационное полихимиотерапевтическое лечение: 5-фто-рурацилом, метатрексатом, винкристином, циклофосфаном, обычными курсовыми дозами. Лечение осуществлялось в течение 2-х недель с последующим повторением курсов.

При индивидуальном анализе активности тимидинкиназы, ти-мидинфосфорилазы, аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы (табл. 7). перед химиотерапией произошло условное разделение больных на две группы, отличающиеся в основном по активности тимидинфосфорилазы и 5'-нуклеотидазы. Одновременно проанализировали имеющиеся в анамнезе клинические данные каждой больной. Оказалось, что в группе больных (15 чел.) с низкой исходной активностьютимидинфосфорилазы (0,11±0,03 У. Е.) при гистологическом исследовании опухоли был обнаружен скиррозный рак (низкодиффенреци-рованная форма), а в другой группе (14 чел.), у которых исходная активность тимидинфосфорилазы и 5'-нуклеотидазы колебалась в пределах нормы, — аденокарцинома различной степени диффе-ренцировки.

У больных I группы в процессе лечения активность тимидинкиназы выросла втрое, по сравнению, с исходной величиной. Активность тимидинфосфорилазы практически не изменялась, оставаясь в очень низких пределах. Столь высокая активность тимидинкиназы могла способствовать активному включению тимидина в тимидилат и, благодаря усилению «запасного» пути стимулировать синтез ДНК в целом, тем самым снижая эффективность метатрексата и 5-фтору-рацила, которые блокировали основной путь биосинтеза тимидилата в ДНК.

Эффективность 5-фторурацила могла снижаться и благодаря низкой активности тимидинфосфорилазы, фермента его превращения в противоопухолевые метаболиты.

Увеличение активности аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы

могло объясняться влиянием иммунодепрессантных свойств препаратов. Это подтверх<далось при одновременном исследовании индекса стимуляции реакции бласттрансформации лимфоцитов. Следовательно, при помощи ферментативного тестз была установлена низкая эффективность проводимого лечения.

Во 2-й группе активность тимидинкиназы в сыворотке крови больных несколько снизилась и значение ее не превышало норму. Активность гимидинфосфорилазы достоверно увеличилась. При такой динамике активности ферментов метаболизма тимидина возможна наибольшая интенсивность включения тимидилата в ДНК по «запасному» пути.

Динамика активности аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы также отличалась от динамики больных I группы. Активность ферментов снижалась в процессе лечения и для 5'-нуклеотидазы к концу лечения не превышала контрольных величин. Повышение активности аденозиндезаминазы в сыворотке крови свидетельствовала о влиянии химиопрепаратов на иммунологическую реактивность больных.

Больных обеих групп наблюдали в течение 4-5лет. Обратили внимание на тот факт, что у больных I группы чаще наблюдались рецидивы.

Анализ отдаленных результатов лечения показал, что в течение 4 лет смертность среди больных первой группы составила 25%, а во второй —0%.

Следовательно, у больных со скиррозной формой опухоли молочной железы полихимиотерапия по схеме СМ оказалась недостаточно эффективной, что подтверждалось и динамикой активности ферментов метаболизма, тимидина и аденозина.

Таким образом, изучение динамики активности тимидинкиназы, тимидинфосфорилазы, аденозиндезаминазы и 5.'-нуклеотидазы AMP показало возможность использования ее в качестве теста эффективности лекарственного лечения больных раком молочной железы.

Проведенные нами исследования активности ферментов обмена предшественников ДНК при опухолевом росте у человека выявили в тканях, лимфоцитах, сыворотке крови онкологических больных с различной локализацией опухоли в организме, четко выраженный энзиматический дисбаланс метаболизма тимидина и аденозина, углубляющийся с распространением опухолевого процесса в организме.

Установлена высокая информативность изучаемых ферментов, которую можно использовать в двух направлениях: использование кинетических характеристик тимидинкиназы сыворотки крови в качестве онкологических маркеров на ранних стадиях опухолевого заболевания, использование динамики активности тимидинкиназы, ти-мидинфосфорилазы, аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы АМФ в сыворотке крови как теста эффективности проводимого лечения.

1 4 6 е Ю 12_ |Ч 1С 16 I?

Рис. I. Динамика'активности апенозиндез-аминазы и индекса стимуляции лимфоцитов в процессе химиотерапев-тического лечения больных:

I - активность авеноэиндезамиказы;

П - индекс стимуляции лимфоцитов.

Рис. 2. Сравнительная динамика активности

тимидинкиназы и тиМЯййнфосфорилазы в

процессе оперативного лечения:

I ~ тимипинкиназа; П - тимипинфосфорилаза; Ш - операция.

По оси абсцисс --время, пни;

По оси ошинат - активность Фешентов.

ВЫВОД Ы:

1. Установлен ферментативный дисбаланс метаболизма тими-дина (увеличение активности тимидинкиназы и снижение тимидин-фосфорилазы) в тканях и сыворотке крови онкологических больных с различной локализацией опухоли в организме, который отчетливо проявлялся уже на ранних стадиях заболевания и усугубляется с прогрессией опухолевого процесса.

2. В лимфоцитах и сыворотке крови больных групп повышенного онкологического риска выявлено достоверное снижение активности ферментов деградации аденозина и тимидина, вследствие которого становится возможным усиление пролиферативных процессов и развитие иммунодефицита.

3. Установленное у больных раком молочной железы ТЮМо достоверное увеличение активности сывороточной тимидинкиназы может быть использовано в качестве одного из показателей при дифференциальной диагностике онкологического заболевания.

4. Анализ активности ферментов метаболизма аденозина в сыворотке крови и лимфоцитах онкологических больных показал, что повышает активности аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы в сыворотке крови наблюдается при одновременном снижении ее в лимфоцитах.

5. Биохимическими и иммунологическими исследованиями установлено, что нарушения активности ферментов метаболизма в лимфоцитах онкологических больных первоначально сказываются на состоянии Т-иммунитета. Обнаружено, что у больных раком желудка мужчин, ниже индекс реакции бласттрансформации лимфоцитов, показатель удельного веса Т-РОК вдвое ниже концентрация иммуноглобулинов класса М, то есть они более подвержены угнетающему иммунологическую реактивность действию опухолевого процесса.

6. Изменение активности аденозиндезаминазы в сыворотке крови и лимфоцитах (коррелирующее с иммунологическими показателями) может служить биохимическим маркером, отражающим нарушение иммунного статуса организма.

7. Динамика активности тимидинкиназы, тимидинфосфорила-зы, аденозиндезаминазы и 5'-нуклеотидазы в сыворотке крови больных раком молочной железы в процессе лекарственного лечения может быть использована как тест его эффективности.

8. Установлена прямая зависимость гистологической характеристики опухоли и активности катаболического фермента тимидин-фосфорилазы. Минимальная активность тимидинфосфорилазы наблюдается в низкодифференцированных опухолях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Действие дезоксиаденозина на синтез нуклеиновых кислог в присутствии ингибитора дезаминазы (Вопр. мед, химии.— 1975. № 5. —С, 192—195 (соавт. Г, И. Ворновицкая, И. А. Ионисянц, В. С.

- Шапот).

2. Некоторые ферменты анаболизма и катаболизма нуклеиновых кислот в нормальной печени человека при гепатоцеллюлярном раке и в печени больных с опухолями желудочно-кишечного тракта (Биохимия—1977 —Т.22, №7. -С. 1266—1270 (соавт. Г. И, Ворновицкая, И, М. Белоусов, Г. Гете, К. А. Дрель, В. С. Шапот).

3. Эволюция ключевых ферментов обмена нуклеиновых кислот в период раннего онтогенеза человека //Эволюционная биохимия и происхождение жизни: Тез. докл. Всесоюз. конф. —Ереван, 1978.— С. 127—128 (соавт. Г. И. Ворновицкая, Н. С. Сукманская, К. А. Дрель, В. С. Шапот, А. В. Соколовская).

4. Клинико биохимические аспекты обмена нуклеиновых кислот в быстрорастущих тканях //Перечень НИР по внедрению в медицинскую практику современных методов диагностики, профилактики и лечения заболеваний, выполненных молодыми специалистами. —Донецк, 4978. —С. 17—18 (соавт. Д. В. Соколовская, Н. С. Сукманская).

5. Клинико-биохимические аспекты обмена нуклеиновых кислот в быстрорастущих тканях //Перечень НИР по внедрению в медицинскую практику современных методов диагностики, профилактики и лечения заболеваний, выполненных молодыми специалистами. —Донецк, 1978. —С. 35—35 (соавт. В. Б. Соколовский, А. В. Соколовская, Н. С. Сукманская).

6. Некоторые черты биохимической дифференциации печени человека в раннем онтогенезе //1М-й Укр. биохимич. сьезд симпоз.дсг кладов. —Киев. 1977. —С. 68—69 (соавт, К. А. Дрель, Т. Г. Скоро-богатая, А. В. Соколовская)—на укр, яз.

7. Метаболизм нуклеиновых кислот в клеточных ядрах печени человека в раннем онтогенезе IIТез. УМ Всесоюз. симпоз. по струк-

туре и фукции клеточного ядра. —Харьков, 1980,—С. 58 (соавт. К. А. Дрель, Т. В. Драган, А. А. Никонова).

8. Особенности обмена нуклеиновых кислот в клеточных ядрах опухолей печени и здоровой печени больных - опухоленосителей //Применение ферментов в медицине: респ. конф.—Одесса, 1981.— С. 44 (соавт. Г. И. Ворновицкая, Н. С. Сукманская, К. А. Дрель, В. С. Шапот):

9. Метаболизм пиримидиновых нуклеотидов в печени человека в процессе онтогенеза //1У Укр. биохим. сьезд: Тез. докл. —Киев, 1982. —Т. 2. —С. 197 (соавт. К. А. Дрель, А. В. Соколовская, А. А: Никонова, Г: И. Ворновицкая, В. С. Шапот)—на укр. яз.

10. Активность ДНК-азы в сыворотке крови и тканях онкологических больных //Внедрение в практику здравоохранения научных исследований: Перечень работ молодых ученых и специалистов Донецк. обл.—Донецк, 1982 —С. 7 (соавт. Е. В. Касьянова).

11. Нарушение обмена ДНК в печени человека при онкологических заболеваниях//1У Всесоюз. конф, по медэнзимологии: Тез. докл. —Алма-Ата, 1983. —М., 1983—С. 59—60 (соавт. Г. И. Потапов. К. А. Дрель, В. С: Шапот):

13«. Некоторые свойства нуклеаз хроматита печени плодов человека в ходе антенатального развития //Ядерные белки и экспрессия гемома: Респ. симпоз. —Киев, 1983. —С. 58 (соав. К. А. Дрель).

13. Использование низких температур при выделении ультраструктур клеток микрометодом //II Всесоюз. конф, По теоретич. вопросам криобиологии. —Харьков, 1984.—С. 128—12 9(соавт. Е. В. Касьянова).

14. Ранний онтогенез человека и ферментные системы //'У Всесоюз. биох. съезд: Тез. докл. —М., 1986. —Т. 3. —С. 157—158 (соавт. К. А. Дрель, Т. Г. Скоробогатая, А. В. Соколовская, М. П. Черненкова, Т. А. Швец).

15. Сравнительная активность аденозиндезаминазы и AMP нук-леотидазы в организме здоровых людей и онкологических больных //Всесоюз. симпоз. по медэнзимологии.—М.,1986.—С. 45—46 (Соавт. А, А. Горбачев, В. В. Шевченко, Н. Н. Меизаренко).

16. Возрастные особенности метаболизма тимидина в организме здорового человека, при язвенной болезни и раке желудка //Вопр. медхимии. —1986. <—Т. 32, №6.—С. 52—54 (соавт. А. А. Горбачев,

Б. В. Думанский, С. М: Орлова, В. В. Шевченко).

17 Внутриартериальная лекарственная терапия в комплексном лечении местнораспространенного рака молочной железы //1У Все-союз. съезд онкологов: Тез. докл.—Д., 1986. —С. 22—24. (соавт. Г. В. Бондарь, В. П. Тюменцев, М. Н. Шепляков).

1.8. Возрастные особенности нуклеазной активности лизосом в норме и при неопластической патологии //Структура, и функции ли-посом: Тез. докл. НГВсесоюз. симпоз. с мсждунар. участием.—Тбилиси, 1986.—С. 20—-21.

19. Использование ферментативных тестов при лечении онкологических больных //Применение ферментов в медицине: Респ. конф. — Симферополь, 1987. —Киев, 1987.—С. 5. (соавт. А. А. Горбачев, О. В. Бухтаева, 3. И . Ярошенко, М. Н. Шепляков).

20. Активность некоторых ферментов, обеспечивающих функциональную активность эритроцитов беременных при гипоксическ; состояниях //У Укр. биохимич. сьезд: Тез. докл.—Киев, 1987,—С. 73 (С. В. Макаров, Т. Г. Скоробогатая, М. П. Черненкова)—на укр. яз.

21. Особенность метаболизма пиримидиновых нуклеотйдов в печени человека в процессе патогенеза опухолевого роста IIУ Укр. биохимич. сьезд: Тез. докл.—Киев, 1987.—С. 219 (соавт. 3. М. Ско-робогатова, Л. В. Соколовская, Т. Г. Скоробогатая, С. В. Макаров).

22. Возрастная динамика активности ферментов метаболизма аденозина у здоровых людей и онкологических больных //Лабор. дело. —1988—№ 11. —С. 53—57 (соавт. А, А. Горбачев, О. А. Бухтаева, Ш. Главмон, В. В. Шевченко).

23. Активность ферментов метаболизма в лимфоцитах и сыворотке крови здоровых людей и онкологических больных //Эксперим. онкология.—1988. —№ 6. —С. 73 (соавт. А. А. Горбачев, В. В. Шевченко).

24. Активность ферментов метаболизма ДНК в крови больных, оперированных по поводу рака желудка //Вопр. онкологии.—1989.— Т. 35, N25.—С.—579—583 (соавт. А. А, Горбачев, Ю. В. Думанский, В. В. Шевченко).

25. Изменение активности ферментов метаболизма предшественников ДНК при язвенной болезни и раке желудка //Клинич. медицина, 1989.—№ 5. —С. 87—90.

26. Возрастные особенности метаболизма ДНК у больных раком желудка 60—80 лет //Актуальные вопросы онкотерОнтологии: Матер. Всесоюз. симпоз. —Д., 1989. —С. 17—18.

27. Механизм нарушений метаболизма пиримидиновых предшественников ДНК и его коррекция антагонистами этого обмена при злокачественном росте у человека //Матер. 1У Всесоюз. сьезда патофизиологов. —М„ 1989.—Т. 2. -С. 815.

28. Использование динамики активности тимидинфосфорилазы как теста при послеоперационном лечении 5-фторурацилом больных раком желудка // 1У съезд респ. об-ва врачей-лаборантов: Тез. докл.— К., 1989.—G. 212 (соавт. Н. П. Букович, О. А. Верхова, M. Н. Шепля-ков).

29. Активность ферментов аденозина и тимидина в крови онкологических больных разного возраста //Укр. биохим. журн. —1990. — Т. 62, № 1.—С. 39—43.

30. Активность ферментов метаболизма ДНК в сыворотке крови больных раком молочной железы //Вопр. онкологии.—1990. — Т. 36, № 1. —С. 17—23. (соавт. А. А. Горбачев, Ю. В. Думанский, В. В. Шевченко, M. Н. Шепляков).

31. Динамика активности ферментов метаболизма ДНК в процессе лечения больных раком желудка //Врач, дело,—1990. — № 4.— С. 11—13 (соавт. А. А. Горбачев, Ю. В. Думанский, И. А. Ефимова).

32. Возрастные особенности метаболизма аденозина и иммунный статус онкологических больных //УШ съезд онкологов УССР: Тез. докл. —Киев, 1990. -С. 545-546 (соавт. О. А. Верхова, А. П. Жовниренко).

33. Возрастные особенности метаболизма предшественников ДНК в организме здоровых женщин, больных мастопатией, раком молочной железы //Вопр. медхимии.—1990.—Т. 35, N2 5. —С. 58—61.

34. Использование ферментативного теста при химиотерапии больных раком молочной железы //Клинич. медицина. —1990.— N° 11. — С. 66—69.

35. Использование динамики активности ферментов метаболизма ДНК в качестве тест-системы при лечении больных раком молочной железы //Сов. медицина.—1991.—№ 2. С. 14—17.

Активности ферментов метаболизма тимидина и аденозина в сыворотке

Возраст (лет)

'Здоровые I люди

Больные язвенной болезнью

ТИМИДИНКИНАЗА (нмоль/час./мг.) 23—35 1,95±0,05 3,79±0,82х

36—45 2,96±0,51 3,54±0,85

46—60 3,87±0.71 3,19±0,28

61—70 3,05±0,32

71—80 3,26±0,44

Онкологические больные

5,98±1,10х 6,38±0,98х 4,28±0,89х 5,78±0,22х

23—45

36—45 46—60 61—70 71—80

АДЕНОЗИНДЕЗАМИНАЗА (нмоль/мин./мг.) 1,03±0,18 4,58±1,35х

2,51 ±0,37 5,16±0,73х 7,55±0,Ыхх

1,71 ±0,15 4,88±0,83х 7,35±0,98хх

2,14±0,29 9,72±0,82хх

1,05±0,22 8,96±1,08хх

Примечание: х — р<0,05 хх — р< 0,001

крови здоровых людей и больных язвенной болезнью и раком желудка

здоровые люди

Больные язвенной болезнью

1" -У. •

ТИМИДИНФОСФОРИЛАЗА (У. Е.) 0,36±0,15 0,25±0,06

0,41 ±0,07 0,26±0,02х

0,47±0,05 0,13±0,02хх

0,51 ±0,09 | —

0,37±0,06 ! —

Онкологические больные

0,31 ±0,06 0,14±0,05хх 0,19±0,09хх 0,20±0.04х

5'-НУКЛЕОТИДАЗА АМР (нмоль/мин./мг.) 6,02±0,35 5,11 ±0,98 —

6,24±0^9 4,59±0,41 5,57±0,45

5,73±0,20 5,51 ±0,94 8,30±0145х

4,83±0,42 ) 9,35±0,43хх

4,71 ±0,28 ; — 5,07±0,78

Активность ферментов метаболизма аденозина в сыворотке

I и .....I---1--л—тгдмшгшгитптч 1 И--1-Т1

1

Аденозиндезаминаза

Возраст

лет здоровые онкологические больные

- сыворотка | лимфоциты 1 1 сыворотка |лимфоциты

ЖЕНЩИНЫ

3(5—45 3,434= 158,53± 6,90± 56,66±

0,45 2,83 0,71 2,07

46—60 1,68± 165,40± 7,27± 54,99±

0,22 9,71 0,42 6,52

61—70 2,10± 98,7± 2,25± 83,17±

- 0,40 3,14 0,35 5,32

МУЖЧИНЫ

36—45 1,83± 182,41 =Ь 6,92 ± 94,2±

0,14 9,05 0,27 1,13

46—60 1,74± 178,38± 9,46± 89,6±

0,22 12,07 2,63 3,61

61—70 2,18± 8,98± 73,38±

0,45 7,15 1,21 3,95

кроаи и лимфоцитах крови больных раком желудка

5'-нуклеотидаза

здоровые онкологические

больные

сыворотка лимфоциты сыворотка лимфоциты

7,24± 42,12± 14,00±018 26,77±2,97

0,96 0,86

5,70± 53,03 10,24±0,32 28,77±4,1

0,31 7,80

4,22± 47,07± 11,45±0,20 38,24±3,7

0,31 3,14

5,48± 50,32± 5,20±0,33 25,39±015

0,52 3,07

5,76± 48,03± 9,99±0,54 36,76±0,92

0,26 5,70

5,63± '45,13± 10,33±0,57 28,95±1185

0^46 2,15

Активность аденозиндезаминазы, Т- и В-РОК, индекса стимуляции лимфоцитов

Аденозиндезаминаэа в сыворотке --нмоль/мин/мг Аденозиндезаминаэа в лимфоцитах нмоль/час/10 6 кл Т-лимфоциты

здоровые поди онкологические больные здоровые люди онкологические больные здоровые люди

МУЖЧИНЫ

1,74±0,22 9,46±2,63хх 178,38±12,07 89,63±3,61х 915,00±3,17

- ЖЕНЩИНЫ

1,68±0,22 6,28±0,94хх 155,40±9,71 64,99±6,32 988,75±10,Ю

Примечание: х XX — р<0,05 -Р<0,01

у больных раком желудка мужчин и женщин в возрасте 46—60 лет

або число В-лимфоциты абс. число Индекс стимуляции | лимфоцитов

онкологические больные здоровые люди онкологические больные здоровые люди" онкологические богьные

631,63±20,05хх 288,0±2,17 ;160,48±15,04х 57,58±3,16 23,80±2,07х

898,67±41,28хх 310,12±8,05 186,39±10,05х 64,)7±1,08 34,40±5,23хх

Активность аденозиндезаминазы и 5-нуклеотидазы в сыворотке крови и

молочной железы

¡Активность аденозиндезаминазы

Диагноз сыворотка лимфоциты

нмоль. мин—1 Р нмоль. 10—6

/мг—1 кл. час —1

Здоровые 1,68±0,22 150,0±10,02

женщины ;■< 0,001

Больные 6,78±0,42 70,08±2,94

мастопатией ' '< 0,001

Больные раком молочной

железы 8,81 ±1,01 44,07±3,12

лимфоцитах здоровых женщин и больных мастопатией и раком (возраст 46—60 лет)

Активность 5'-нуклеотидазЫ

р сыворотка нмоль. мин —1 /мг —1 р лимфоциты нмоль. 10 —6 кл. час —1 Р атшкхяп.

5,70±0,31 53,03±7,2

< 0,05 < 0,05 < 0,05

6,47±0,46 46,90±3,2

< 0,05 < 0,05 < 0,05

11,27±0,65 36,80±2,04

Активность ферментов метаболизма тимидина и аденозина в сыворотке

I—1У стадии, в

Диагноз

Тимидинкиназё нмоль/час/мг

Здоровые, женщины

Больные мастопатией

16

8

3,14±0,55 3,58±0,29

Больные РМЖ I стадии

3,82±0,01х

Больные РМЖ II стадии

12

3,98±0,04хх

Больные РМЖ III стадии

Больные РМЖ 1У стадии

22

4,28±0128хх 4,94±0,14хх

Примечание: х — р < 0,05 хх — р < 0,001

крови здоровых женщин, больных матопатией и раком молочной железы возрасте 46—60 лет

Тимидинфосфорилазы Аденозиндезаминаэа У. Е. нмоль/мин/мг

0,6±0,04 0,27±0,03х

1,68±0,22 6,78±0,42хх

5'-нуклеотидаза АМФ нмоль/мин/мг

5,76±0,26 7,02±0,96

0,30±0,01

0,28±0,01х

5,85±0,34хх

5,79±0,52хх

8,60±0183х 9,23±1,00хх

0,23±0,03хх

8,81 ±1,01 хх

11,27±0,65хх

0,15±0,01хх

8,02±0,55хх

10,27±0,95хх

Активность ферментов метаболизма предшественников ДНК в сыворотке

Тимидинкиназа нмоль/мин/мг Тимидинфосфорилаза У. Е.

до ле- В процессе ПХТ, дни до ле- В процессе ПХТ, дни

чения 5 I ! 'о I 15 чения 5 10 15

1 группа

3,14± 0,95 1,67± 0,34 3,22± 0,61 9,16± 1,11 0,11 ± 0,03 0,17± 0,05 0,13± 0,03 0,16± 0,05

II группа

2,97± 0,34 1,05± 0,06 1,13± 1,85± 0,02 0,67 0,36± 0,03 0,33± 0,07 0,33± 0,04 0,46 ± 0.01

крови больных раком молочной железы до и в процессе химиотерапии М±т)

Аденозиндезаминаза нмоль/мин/мг 5'-нуклеотидаза АМР нмоль/мин/мг

ле-ния В процессе ПХТ, дни до лечения В процессе ПХТ, ДНИ

5 10 15 5 10 15

(15 человек)

9,84± 7,83± 10,9 7± 8,83± 10,56± 6,35± 7,46± 9,06±

1,15 0,72 1,02 0,98 2,01 1,31 1,20 2,05

4 человек)

7,75± 4,26± 9,94 ± 5,«0± 4,84± 7,27± 3,63± 3,71 ±

1,59 0,88 1,17 1,01 0,98 1,03 0,74 0,92