Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Активационный апоптоз субпопуляций Т-лимфоцитов при ишемической болезни сердца

Актуальность проблемы

Ишемическая болезнь сердца является одной из наиболее распространенных патологий сердечно-сосудистой системы, на долю которой приходится до 50% всех случаев смерти. Морфологической основой ИБС является атеросклеротическое повреждение коронарных артерий. В настоящее время атеросклероз рассматривается как неспецифический системный воспалительный процесс, развивающийся в ответ на повреждающее действие дислипидемии и других факторов риска (артериальная гипертензия, курение, гиподинамия, метаболические нарушения).

В последние годы активно ведутся исследования, касающиеся роли иммунной системы в патогенезе атеросклероза [Stemme S., 1994, Hansson G.K., 2002]. Воспалительный процесс, протекающий в атеросклеротических бляшках, привлекает различные клеточные элементы, и, в частности, Т-лимфоциты: в основном CD4+-T-лимфоциты, при небольшом уровне С08+-лимфоцитов, а также NKT лимфоцитов [Пигаревский П.В., 2002]. Активация иммунного ответа осуществляется за счет стимуляции неоантигенами (апоптотические клетки и окисленные ЛПНП). В атеросклеротическом процессе клетки иммунной системы участвуют по одному из трех механизмов: межклеточное взаимодействие между антигенпредставляющими клетками (макрофаги, B-лимфоциты или дендритные клетки) и Т-лимфоцитами; секреция различных цитокинов активированными Т-лимфоцитами, модулирующих активность макрофагов в атеросклеротической бляшке; продукция различных антител (включая аутоантитела) B-лимфоцитами по Т-зависимому или Т-независимому механизмам. Некоторые из антител обладают свойством блокировать взаимодействие окисленных ЛПНП и scavenger-рецепторов макрофагов.

В процессе атерогенеза иммунная система выступает, с одной стороны, как индуктор воспаления в стенке артерии, а с другой стороны, факторы повреждения сосудов могут вызывать различные изменения в иммунной системе, такие как дисбаланс субпопуляций Т-клеток, функциональные нарушения активации лимфоцитов. От степени активационного потенциала лимфоцитов in situ зависит модулирование воспалительного процесса, протекающего в атеросклеротической бляшке: ее дальнейший рост и нестабильность.

Существует мнение, что функциональная недостаточность лимфоцитов, сопровождающаяся высокой долей апоптоза клеток иммунной системы, может привести к преждевременному старению организма. [Ковальчук Л.В., Чередеев А.Н., 1999, Ярилин

A.A., 2003]. Вместе с тем, усиление апоптотической гибели лимфоцитов, вызывая нарушения регуляции иммунного ответа, может оказывать влияние на атерогенез. Однако, в настоящее время активационный апоптоз лимфоцитов остается мало изученным, а его роль в развитии атеросклероза до сих пор не выяснена.

Большой интерес представляет изучение активационного апоптоза субпопуляций лимфоцитов у больных, подвергшихся воздействию малых доз ионизирующего облучения, учитывая быстрое прогрессирование ИБС у этих пациентов.

Все выше изложенное послужило основанием для проведения настоящего исследования.

Цель исследования

Цель настоящей работы - изучение активационного апоптоза Т-лимфоцитов при атерогенезе у больных ИБС. Задачи исследования

1. Сформировать клинические группы больных, отражающие прогрессирование атеросклероза коронарных артерий.

2. Определить субпопуляционный состав Т-лимфоцитов у пациентов с атеросклерозом магистральных артерий и ИБС.

3. Оценить выраженность спонтанного раннего и позднего апоптоза субпопуляций Т-лимфоцитов (CD4 , CD8 ), а также чувствительность к индукции позднего апоптоза Т-лимфоцитов (CD4+, CD84), активированного ФГА, у пациентов с атеросклерозом магистральных артерий и ИБС.

4. Изучить неравномерность апоптоза CD4+, CD8+ Т-лимфоцитов при прогрессировании атеросклероза коронарных артерий.

5. Определить зависимость между активационным апоптозом CD4+, CD8+ Т-лимфоцитов и концентрацией СРБ, а также уровнем AT к кардиолипину.

6. Изучить влияние гиполипидемической терапии статинами на активационный апоптоз субпопуляций Т-лимфоцитов у больных ИБС.

7. Оценить особенности клинической картины заболевания, субпопуляционного состава лимфоцитов, чувствительности к апоптозу и его неравномерности у больных ИБС, подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения.

Научная новизна

Впервые проведено комплексное клинико-иммунологическое исследование с оценкой активационного апоптоза лимфоцитов у больных атеросклерозом магистральных артерий и ИБС, в т.ч. у пациентов, подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения.

Впервые установлена зависимость активационного апоптоза СЭ4+ и СБ8+ Т-лимфоцитов от степени выраженности атеросклероза коронарных сосудов, в отличие от показателей спонтанного раннего и позднего апоптоза.

Впервые показана неравномерность активационного апоптоза среди субпопуляций Т-лимфоцитов при прогрессировании атеросклероза коронарных артерий у больных ИБС, причем степень этой предпочтительности меняется от высокой доли СБ8+ Т-лимфоцитов, до высокой доли СБ4+ Т-лимфоцитов среди апоптотической фракции клеток.

Впервые показано влияние гиполипидемической терапии статинами на чувствительность к активационному апоптозу субпопуляций Т-лимфоцитов у больных ИБС.

Разработана методика подсчета неравномерности активационного апоптоза Т-лимфоцитов на основании средних значений активационного индекса.

Впервые установлено соответствие между чувствительностью к активационному апоптозу субпопуляций лимфоцитов и уровнем СРБ, а также АТ к кардиолипину при прогрессировании ИБС.

Впервые выявлены клинико-иммунологические особенности ИБС у больных, подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения.

Практическая значимость диссертации

Выявленные особенности функциональной активности Т-лимфоцитов, на различных стадиях атеросклероза коронарных артерий позволили уточнить его патогенез.

Полученные результаты позволяют рекомендовать определение активационного апоптоза субпопуляций Т-лимфоцитов с целью уточнения выраженности атеросклеротического процесса и оценки риска сосудистых осложнений у больных ИБС.

Определены иммунологические параметры активационного апоптоза на примере созданной клинической модели прогрессирования коронарного атеросклероза. Эта модель может быть использована', в различных сравнительных исследованиях с применением лекарственных препаратов, а также при изучении сопутствующих хронических иммунопатологических процессов.

Выявленные клинико-иммунологические особенности развития атеросклероза коронарных артерий у больных ИБС, подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения, обосновывают целесообразность более «агрессивного» применения статинов у этой группы пациентов, начиная с доклинической стадии заболевания.

Обнаруженные взаимосвязи развития атеросклероза и функциональной активности клеток иммунной системы обосновывают применение рекомбинатных цитокинов (Тврр) и рекомбинатных молекул адгезии (Е-селектин) как стабилизаторов мембран эндотелиальных клеток коронарных сосудов.

Внедрение результатов исследования

Метод оценки степени неравномерности активационного апоптоза субпопуляций лимфоцитов при прогрессировании ИБС используется в научном и учебном процессе кафедры иммунологии ГОУ ВПО РГМУ Росздрава. Определение параметров активационного апоптоза введено в терапевтических отделениях Центральной клинической больницы РАН и научно-консультативного отделения клиники ГНЦ Института Иммунологии ФМБА для оценки риска сосудистых осложнений.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы докладывались на научных заседаниях кафедр иммунологии и внутренних болезней с курсом функциональной и ультразвуковой диагностики МБФ ГОУ ВПО РГМУ, на клинических конференциях ЦКБ РАН, Объединенном иммунологическом форуме (г. Екатеринбург, 2004), Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия» (г. Курск, 2006).

Публикации

Основные положения диссертационного исследования отражены в 6 публикациях.

выводы

1. У больных ИБС по мере прогрессирования заболевания в периферической крови достоверно (р<0,05) возрастают абсолютные и относительные показатели CD8+CD25+ Т-лимфоцитов при отсутствии изменений показателей CD3+ Т-лимфоцитов, CD4+CD25+ регуляторных Т-клеток и субпопуляций CD3+CD16+CD56+ NKT клеток.

2. Ранний и поздний спонтанный апоптоз Т-лимфоцитов не отражают прогрессирования ИБС и не коррелируют с такими маркерами воспаления атеросклеротического процесса, как С-реактивный белок и антитела к кардиолипину.

3. Прогрессирование ИБС сопровождается значимыми (р<0,05) изменениями чувствительности Т-лимфоцитов к позднему активационному апоптозу в ответ на стимуляцию клеток ФГА in vitro: достоверным повышением для CD3+CD4+- и снижением для CD3+CD8+ Т-лимфоцитов. Усиленное вовлечение в апоптоз CD3+CD4+ Т-клеток соответствует более высокому уровню экспрессии CD95 молекул.

4. У больных хроническими формами ИБС определяется различная избирательность вовлечения субпопуляций Т-лимфоцитов в активационный апоптоз. Неравномерность апоптоза на ранних стадиях атерогенеза коронарных артерий' выражена за счет высокой доли в апоптотической фракции CD8+ Т-лимфоцитов, а прогрессирование ИБС характеризуется преобладанием CD4+ Т-лимфоцитов.

5. Преобладание CD3+CD4+ Т-лимфоцитов в апоптотической фракции клеток при прогрессировании ИБС соответствует повышению уровня в сыворотке крови маркеров атеросклеротического воспаления.

6. Применение гиполипидемической терапии у больных ИБС статистически значимо (р<0,05) снижает чувствительность к активационному апоптозу субпопуляций Т-лимфоцитов.

7. Ранний дебют и быстрое прогрессирование ишемической болезни сердца у пациентов, подвергшихся воздействию малыми дозами ионизирующего облучения, сопровождаются особенностями динамики субпопуляций лимфоцитов и их чувствительности к активационному апоптозу. В отличие от больных основной группы, происходит достоверное (р<0,05) увеличение абсолютного содержания CD3 Т-лимфоцитов, CD3 CD8 -клеток, NKT-лимфоцитов и снижение степени чувствительности к позднему активационному апоптозу с одновременным повышением в сыворотке уровня антител к кардиолипину, что, возможно, способствует формированию аутоиммунных реакций.

8. Активационный апоптоз субпопуляций Т-лимфоцитов периферической крови in vitro отражает динамику атеросклероза коронарных артерий и может рассматриваться как один из важных факторов патогенеза ИБС.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. У больных ИБС рекомендуется исследование чувствительности к активационному апоптозу субпопуляций Т-лимфоцитов с определением его неравномерности для оценки выраженности атерогенеза и риска сосудистых осложнений, а также эффективности проводимой терапии.

2. В комплексную терапию лиц, подвергшихся действию малых доз ионизирующего облучения, целесообразно включение статинов в максимально эффективных дозах как при наличии ИБС, так и в доклиническую стадию заболевания с целью его профилактики.

3. Разработанные методики определения параметров активационного апоптоза и его неравномерности (индекс активационного апоптоза и индекс неравномерности) рекомендуются для применения в клинической практике для оценки влияния лекарственных препаратов на функциональный потенциал лимфоцитов как у больных ИБС, так и при другой патологии.