Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Адаптогенное действие растительного средства "Адаптон-6"

(СИ

ТУЛЕСОНОВА АЮНА СЕРГЕЕВНА АДАПТОГЕННОЕ ДЕЙСТВИЕ РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА

—«АДАПТОН-6»

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

- 1 ДЕК 2011

Улан-Удэ- 2011

005004661

Работа выполнена в ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» Министерства образования и науки РФ

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Шанганова Лариса Николаевна

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Жамсаранова Сэсэгма Дашиевна

кандидат медицинских наук Раднаева Дарима Базаровна

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Читинская государственная меди-

цинская академия» Минздравсоцразвития РФ

Защита состоится «22» декабря 2011 г. в 1400 на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН.

Автореферат разослан «21» ноября 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

^Кл^^' В.Б. Хобракова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Радикальные изменения социально-экономической обстановки современного техногенного общества способствовали возобновлению интереса ученых к исследованию механизмов адаптации индивида при психоэмоциональном стрессе. В рамках общебиологической теории Н. Selye психоэмоциональный стресс трактуют как генерализованную реакцию физиологического и эмоционального напряжения, возникающую в связи с действием факторов, требующих от организма человека мобилизации адаптивных возможностей со значительным превышением диапазона повседневных нагрузок (Крыжановский, 2006; Агаджанян, Баевский, 2006; Mastorakos et al., 2006; Me Ewen, 2007).

В результате, подвергаясь разного рода антропогенным стрессорным воздействиям, современный человек зачастую не в состоянии справиться с перегрузками и адаптироваться к новым условиям существования, вследствие чего наблюдается повсеместное распространение «болезней цивилизации» (Разумов, 2004; Глазачев, 2006; Weisberg, 2009). Так, по данным статистики в России только 7-8% населения можно отнести к категории абсолютно здоровых (Григорьев, 2008). При этом заболеваемость и смертность в трудоспособном возрасте за последние 10 лет увеличились на 30% (Виленский, 2008).

В связи с этим, повышение резистентности организма к действию стрессор-ных факторов является актуальной задачей современной медицинской науки. В решении указанной проблемы большое значение принадлежит разработке и внедрению в клиническую практику новых эффективных адаптогенных средств, преимущественно, природного происхождения (Яременко, 2008). В этом плане особый интерес представляет тибетская традиционная медицина, располагающая большим количеством тонизирующих средств, называемых «жудлэны», рецептурные прописи которых приведены в ее первоисточниках «Чжуд-ши: Канон тибетской медицины» (2001), «Кунпан-дудзи: Большой рецептурный справочник Агинского дацана» (2008). Характерными особенностями тибетских препаратов является многокомпоненгность, обеспечивающая одновременное корригирующее влияние на заинтересованные органы и системы организма; безвредность при длительном применении; содержание комплекса биологически активных веществ, близких по своей природе эндогенным физиологическим соединениям; многоуровневое регулирующее влияние на системы организма, благодаря чему они оказывают не только терапевтическое влияние на патологический процесс, но и обеспечивают повышение неспецифической резистентности организма.

В связи с вышеизложенным, в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН на основе тибетской рецептурной прописи «Жудлэн -15» разработано новое многокомпонентное растительное средство, в состав которого входит сырье следующих видов растений: шиповника коричного (Roza cinnamomea

L.), боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguínea Pall.), облепихи круши-новидной (Hippophae rhamnoides L.), астрагала перепончатого (Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge), левзеи сафлоровидной {Rhaponticum carthamoides Willd.), ревеня тангутского (Rheum tanguticum Maxim.), условно названное «Адаптон-б».

Целью настоящего исследования явилось определение спектра адаптоген-ной активности «Адаптона-6» и фармакотерапевтической эффективности при экспериментальных стресс-индуцированных повреждениях, а также оценка механизмов адаптогенного действия.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

-изучить влияние «Адаптона-6» на устойчивость организма животных к действию экстремальных факторов различной природы;

- оценить влияние испытуемого средства на физическую выносливость организма животных;

- определить лечебно-профилактическую эффективность «Адаптона-6» при состояниях, приводящих к дезадаптации;

- определить влияние фитосредства на функциональное состояние ЦНС;

- определить особенности механизма адаптогенного действия «Адаптона-

6».

Научная новизна. Работа представляет собой исследование адаптогенного действия нового средства растительного происхождения. Установлено, что испытуемое средство в экспериментально-терапевтических дозах (50 - 150 мг/кг) повышает неспецифическую сопротивляемость организма к экстремальным воздействиям различной природы: интенсивным физическим нагрузкам, гипо-барической, гиперкапнической, гемической и тканевой гипоксии, иммобилиза-ционному стрессу. Показано, что «Адаптон-6» повышает ориентировочно-исследовательскую активность животных, оказывает анксиолитическое и ноо-тропное действие. Психотропные эффекты фитоэкстракта обусловлены активацией ГАМК-ергической системы.

Профилактическое курсовое введение «Адаптона-6» на фоне иммобилиза-ционного стресса уменьшает выраженность всего комплекса вегетативных проявлений стресс-реакции, что связано с оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма под его влиянием. Установлено, что испытуемое средство оказывает фармакотерапевтическое влияние при интоксикации белых крыс тетрахлорметаном, обеспечивая нормализацию морфофункционального состояния печени животных на более ранних сроках патологического процесса. Выявлено также, что «Адаптон-6» обладает существенным иммуномодулирующим потенциалом, повышая активность гумо-

рального и клеточного звеньев иммунного ответа при иммуносупрессивных состояниях.

Широкий спектр адаптогенной активности испытуемого средства связан с формированием под его влиянием состояния неспецифически повышенной резистентности, обусловленного стабилизацией мембранных структур клеток. Молекулярно-клеточный механизм мембраностабилизирующего действия «Адаптона-6» связан с ограничением окислительного стресса, обусловленного как ингибированием процессов перекисного окисления липидов, так и повышением мощности системы эндогенной антиокислительной защиты организма при экстремальных воздействиях.

Практическая значимость. Установленные адаптогенные свойства нового средства природного происхождения аргументируют целесообразность его применения в качестве средства, повышающего неспецифическую сопротивляемость организма. Полученные экспериментальные данные явились основой для производства и применения нового адаптогенного средства в клинической практике в качестве биологически активной добавки к пшце «Арура-тан №8». Кроме того, материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 14 октября 2011г.).

Основные положения, выносимые на защиту:

- растительное средство «Адаптон-6» в экспериментально-терапевтических дозах оказывает выраженное адаптогенное действие, повышая неспецифическую резистентность организма к действию стрессорных факторов различной природы;

- испытуемое средство обладает профилактической и фармакотерапевтиче-ской эффективностью при интенсивных физических нагрузках, экспериментальном токсическом повреждении печени, иммобилизационном стрессе и иммунодефицитом состоянии;

- «Адаптон-6» повышает ориентировочно-исследовательские реакции, проявляет аюссиолитические и ноотропные свойства;

- базисным молекулярно-клеточным механизмом адаптогенного действия испытуемого средства является его способность ингибировать процессы свободно-радикального окисления и, тем самым, стабилизировать мембранные структуры клеток, а также повышать энергетический потенциал организма при экстремальных воздействиях различной природы.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факуль-

тета Бурятского государственного университета (Улан-Уда, 2009); научно-практической конференции, посвященной 110-летию НУЗ ОКБ на станции Улан-Удэ ОАО «РЖД» (Улан-Удэ, 2010); научно-практической врачебной конференции «Артериальная гипертензия: этиология, клиника, лечение» в НУЗ ОКБ на станции Улан-Удэ ОАО «РЖД» (Улан-Удэ, 2010); 5 International symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine (Ulaanbaatar, 2011); научно-практической конференции, посвященной 50-летию нейрохирургического отделения РКБ им. H.A. Семашко (Улан-Удэ, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 6 научных работ, из них 3 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ.

Работа выполнена в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 7 глав с изложением результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего 244 источника: 180 отечественных и 64 зарубежных авторов. Работа изложена на 132 страницах компьютерного текста и иллюстрирована 32 таблицами и 3 рисунками.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследованию подвергался сухой экстракт «Адаптон-6», полученный из сырья 6 наименований лекарственных растений: плодов шиповника коричного (Roza cinnamomea L.), боярышника кроваво-красного (Crataegus sanguínea Pall.), облепихи крушиновидной (Hippophae rhamnoides L.), корневищ астрагала перепончатого (Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge), левзеи сафлоровидной (Rhaponticum carthamoides Willd.), ревеня тангутского (Rheum tanguticum Maxim.). Сухой экстракт получали путем экстракции растительного сырья 40% этиловым спиртом, упаривания и последующей сушки. Полученный экстракт представляет сумму экстрактивных веществ, представленных, преимущественно, флавоноидами, полисахаридами и органическими кислотами.

Эксперименты выполнены на 388 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-220 г и 90 мышах линии Fl (СВАхС57В1/6) обоего пола массой 2022 г. Животные находились в стандартных условиях вивария на обычном рационе (Приказ МЗ СССР № 1179 от 10.10.83.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием эксперимен-

тальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР № 755 от 12. 08. 77г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Протокол исследования согласован этическим комитетом Бурятского государственного университета (протокол №10 от 16.12.2008). Эвтаназию животных осуществляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Разделение животных на группы производили с учетом принципа рандомизации. Кроме того, в качестве объектов исследования были использованы культуры тканей: суспензия эритроцитов, суспензия липосом и биохимические тест-системы.

Острую токсичность определяли по методу Кербера (Руководство..., 2000).

Общую физическую нагрузку моделировали общепринятым методом путем плавания белых крыс с грузом, составляющим 7% от массы тела (Методические рекомендации..., 1999). Силовые физические нагрузки воспроизводили по методу С.Я. Арбузова (1960) путем виса животных на шесте.

Гипобарическую гипоксию воспроизводили общепринятым методом в барокамере при разряжении воздуха, соответствующему «подъему» животных на высоту 10000 м. Модель гемической гипоксии воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора натрия нитрита в дозе 210 мг/кг (Костюченков, 1982). Модель гиперкапнической гипоксии создавали путем помещения животного в герметичную камеру (Руководство..., 2000). Для воспроизведения тканевой гипоксии животным однократно внутри-брюшинно вводили водный раствор натрия нитропруссида в дозе 42 мг/кг (Воронина, Неробкова, 2000).

Модель иммобилизационного стресса воспроизводили путем фиксации животных в положении на спине в течение 12 и 24 ч. Для оценки антистрессорной активности определяли выраженность «триады Селье»: гипертрофию надпочечников, инволюцию иммунокомпетентных органов и количество деструкций в слизистой оболочке желудка с подсчетом «язвенного индекса Паулса» (ИЛ) (Амосова и соавт., 1998).

Оценку влияния фитосредства на поведенческую и познавательную активность животных проводили с использованием методов «открытое поле», «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), «условного рефлекса пассивного избегания» (УРПИ) (Методические рекомендации..., 2005). Анксиолитическое действие и влияние на ГАМК-ергическую систему исследовали с использованием метода конфликтной ситуации по Vogel (Воронина, Середенина, 2000).

Модель токсического повреждения печени воспроизводили путем подкожного введения 50% масляного раствора четыреххлористого углерода в объеме 0,4 мл/100 г в течение 3 дней (Венгеровский и соавт., 2000).

Иммунодепрессивное состояние у животных воспроизводили путем внут-рижелудочного введения азатиоприна в дозе 50 мг/кг в течение 5 дней (Лазарева, Алехин, 1985). При исследовании иммуномодулирующей активности «Адаптона-б» состояние гуморального иммунитета оценивали методом локаль-

ного гемолиза (Cunningham, 1965); клеточного иммунитета - в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (Петров и соавт., 1987); макрофа-гального звена иммунного ответа - в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в отношении частиц коллоидной туши (Руководство..., 2005).

Для оценки противовоспалительного действия использовали модели острого асептического воспаления путем подкожного введения 0,5 мл 9%-ного раствора уксусной кислоты (Ойвин, Шетель, 1961), однократного субплантарного введения 0,1 мл 3%-ного раствора формалина (Стрельников, 1960), внутрибрю-пшнного введения 1,0 мл 0,2% раствора серебра нитрата (Александров и соавт., 1986).

О влиянии испытуемого средства на энергетические процессы судили по содержанию АТФ (Алейникова, Рубцова, 1988) и концентрации гликогена в печени (Seifter, 1950). В сыворотке крови определяли концентрацию глюкозы, триацилглицеридов, билирубина; активность щелочной фосфатазы (ЩФ), ала-нин- и аспартатаминотрансферазы (АлТ и АсТ) - с использованием биохимического анализатора «Sapphire 400» (Япония).

Для оценки антиоксидантной активности в сыворотке крови определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) (Темирбулатов, Селезнев, 1981), активность супероксиддасмутазы (Чевари и соавт., 1985), каталазы (Короток и соавт., 1988).

Перекисный гемолиз эритроцитов донорской крови воспроизводили с использованием реактива Фентона, осмотический гемолиз - добавлением равного объема дистиллированной воды (Ковалев и соавт., 1986). Антирадикальную активность фитосредства определяли по отношению к радикалам ABTS*+ (Re et. а!., 1999), супероксидным анион-радикалам (Chen et al., 2003), NO (Govindarajan et al., 2003). Хелатирующую активность оценивали с использованием О-фенантролинового метода (Теселкин, 1997), динамику накопления ТБК-активных продуктов - по методу Клебанова Г.И. и соавт. (1988).

Полученные данные обработаны статистически с использованием U-критерия Манна-Уитни (Сергиенко, Бондарева, 2001). Различия считали достоверными при Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование острой токсичности сухого экстракта «Адаптон-6» показало, что его внутрижелудочное и внутрибрюшинное введение в максимально возможных дозах (6000-8000 мг/кг) не сопровождается гибелью лабораторных животных. Таким образом, полученные данные позволяют отнести испытуемое средство к группе практически безвредных веществ по классификации К.К.Сидорова (Требования..., 1984).

При исследовании спектра адаптогенной активности «Адаптон-6» вводили белым крысам внутрижелудочно однократно и многократно (в течение 7 дней) в

диапазоне доз 50 - 200 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали де-алкоголизированный экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Установлено, что внутрижелудочное однократное введение «Адаптона-6» в дозах 100 - 200 мг/кг повышает устойчивость животных к действию интенсивных физических нагрузок: динамических и силовых (табл. 1).

Таблица 1

Влияние «Адаптона-6» на физическую выносливость белых крыс

Группы животных Доза, мг/кг Продолжительность, мин

плавания виса

при однократном введении

Контрольная (п=8) 14,6±1,32 12,5+1,42

Опытная 1 (Адаптон-6) (п=10) 50 15,5±1,40 -

Опытная 2 (Адаптон-6) (п=10) 100 19,3±1,70* 16,3±1,35*

Опытная 3 (Адаптон-6) (п=10) 200 20,1±1,48* -

Опытная 4 (элеутерококк) (п=10) 5,0 мл/кг 19,0±0,94* 16,111,42*

при многократном введении

Контрольная (п=8) 17,1±1,55 12,9±1,62

Опытная (Адаптон-6) (п=10) 100 28,2±2,40* 20Д±1,45*

Примечание: здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от данных животных контрольной группы при Р<0,05;

Как следует из данных, приведенных в таблице 1, однократное введение испытуемого средства в дозе 50 мг/кг не оказывало существенного влияния на продолжительность плавания животных, тогда как при использовании его в дозах 100 и 200 мг/кг отмечалось повышение общей физической выносливости соответственно на 32 и 38% по сравнению с показателями животных контрольной группы. Исходя из этого, в дальнейших экспериментах в качестве экспериментально-терапевтической использовали дозу «Адаптона-6» 100 мг/кг. Более выраженное актопротекторное действие испытуемого средства установлено при его многократном введении: при семидневном превентивном введении продолжительность плавания увеличивалась на 64% по сравнению с контролем. Также установлено, что профилактическое введение испытуемого средства сопровождается повышением силовой выносливости: продолжительность виса животных увеличивалась при однократном и много-

кратном введении соответственно на 30 и 60% по сравнению с данными у животных контрольной группы, при этом действие исследуемого препарата было аналогичным таковому у препарата сравнения - экстракта элеутерококка.

Установлено, что «Адаптон-6» в дозе 100 мг/кг обладает выраженной антигипоксической активностью при кислороддефицитных состояниях различного генеза. Так, при гипобарической гипоксии его 7-дневное введение в дозе 100 мг/кг сопровождалось двукратным увеличением продолжительности жизни крыс; при гемической и гиперкапнической гипоксии продолжительность жизни животных опытных групп увеличивалась в среднем на 50% по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы. При гистотоксиче-ской гипоксии введение испытуемого средства в дозе 100 мг./кг сопровождалось умеренным антигипоксическим эффектом: продолжительность жизни крыс опытной группы увеличивалась на 28% по сравнению с контролем, при этом действие исследуемого препарата было аналогичным таковому у препарата сравнения - экстракта элеутерококка.

Показано, что «Адаптон-6» в экспериментально-терапевтической дозе оказывает выраженное стресс-протективное действие при 12 часовой иммобилизации, о чем свидетельствует уменьшение выраженности признаков «триады Се-лье»: степени гипертрофии надпочечников - на 23%, инволюции тимуса и селезенки - соответственно на 23 и 26% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Кроме того, в слизистой оболочке желудка крыс опытной группы имелись лишь единичные точечные кровоизлияния, тогда как у животных контрольной группы кровоизлияний было почти в 5 раз больше.

Влияние «Адаптона-б» на функциональное состояние центральной нервной системы

Установлено, что «Адаптон-6» при превентивном 7-дневном введении в дозе 100 мг/кг оказывает выраженное психотропное действие, о чем свидетельствует повышение общей двигательной активности животных за счет увеличения вертикальной активности и норкового рефлекса (соответственно на 31 и 40% по сравнению с аналогичными показателями в контроле), а также почти трехкратное возрастание количества выходов животных в центральную зону камеры (табл. 2).

Наряду с этим, отмечалось уменьшение числа болюсов и количества актов груминга на 23 и 60% соответственно. Показано также, что курсовое введение «Адаптона-6» сопровождается уменьшением времени пребывания животных в «закрытых рукавах» ПКЛ на 31%, увеличением времени пребывания в «открытых рукавах» на 52%, увеличением количества выглядываний и вертикальных стоек в 2,5 и 2,3 раза соответственно по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют о повышении ориентировочно-исследовательской активности, сни-

жении уровня тревожности и ускорении периода адаптации животных к новым незнакомым условиям. Установлено также, что «Адаптон-6» в дозе 100 мг/кг оказывает ноотропное действие, стимулируя когнитивные функции животных. Так, на фоне его курсового введения животным наблюдали 100% выработку условного рефлекса и сохранение памятного следа в отдаленные сроки: через 1, 3 и 7 суток после обучения, латентный период захода в темный отсек увеличивался на 28, 44 и 61% соответственно по сравнению с данными у животных контрольной группы.

Таблица 2

Влияние «Адаптона-6» на поведенческую активность белых крыс в тестах «открытое поле» и «приподнятый крестообразный лабиринт»

Показатели Группы животных

Контрольная (п=10) Опытная 1 (Адаптон-6) (п=10) Опытная 2 (элеутерококк) (п=10)

Общая двигательная активность 23,1±1,58 29,6*2,31* 33,7±3,71*

Горизонтальная активность 13,6±1,23 17,0±1,3* 23,1±2,15*

Вертикальная активность 8,<Ш),35 10,5±1,01* 9,0±0,55

Норковый рефлекс 1,5±0,17 2,1±0,17* 1,6±0,08

Дефекация 3,0±0,10 2,3±0,18* 2,3*0,16*

Груминг 5,7±0,40 2,2±0,16* 2,4±0,18*

Кол-во выходов в центральную зону 1,4±0,12 3,9±0,44* 3,1±0,31*

Время, закрытый рукав 183,8±4,10 126,7±10,10* -

Время, открытый рукав 23,4±1,72 35,7±2,31* -

Результаты исследований влияния испытуемого средства на ГАМК-ергическую систему показали, что введение «Адапгона-6» в дозе 100 мг/кг на фоне блокатора хлорного канала - пикротоксина и блокатора ГАМКА-рецептора - бикукуллина увеличивало количество наказуемых взятий воды в 3,7 и 3 раза соответственно по сравнению с данными у животных контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют, что механизм аксиолитического действия испытуемого фитоэкстракта связан с активацией тормозной ГАМК-ергической системы.

Фармакотерапевтнческая эффективность «Адаптона-6»

При оценке актопротекторной активности «Адаптона-6» установлено, что его курсовое профилактическое введение в дозе 100 мг/кг сопровождается повышением общей физической выносливости животных на 60% по сравнению с данными у животных контрольной группы (табл. 3). Показано, что повышение работоспособности обусловлено повышением скорости ресинтеза АТФ в скелетной и сердечной мышцах соответственно на 73 и 33% по сравнению с контролем. Кроме того, введение «Адаптона-6» сопровождалось увеличением концентрации гликогена в печени на 34%, глюкозы и триацилглицеридов в сыворотке крови соответственно на 40 и 60% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы.

Таблица 3

Влияние «Адаптона-6» на общую физическую выносливость и биохимические показатели у белых крыс на фоне интенсивной физической нагрузки

Показатели Г )уппы животных

Интактная (п=6) Контрольная (п=8) Адаптон-6 (п=8)

Продолжительность плавания, мин - 6,8±1,92 10,8±1.64*

АТФ в скелетной мышце, мкм/г 2,8±0,18 1,5±0,10 2,6+0,24*

АТФ в миокарде, мкм/г 1,5±0,05 0,9±0,04 1,2±0ДЗ *

Гликоген в печени, мг% 2017,0±80,63 1462,0±129,9 1966,0±86,б1*

Триацилглицериды, ммоль/л 2,3±0,61 1,0±0,35 1,6±0,26*

Глюкоза, ммоль/л 6,7±0,78 4,0±0,29 5,6±0,36*

У животных опытной группы концентрация МДА снижалась на 25%, а активность катал азы и СОД повышалась на 30% и в 2,5 раза соответственно по сравнению с контролем, что указывает на снижение интенсивности процессов свободнорадикального окисления и повышение активности эндогенной антиок-сидантной системы под влиянием испытуемого средства.

При исследовании фармакотерапевтической эффективности «Адаптона-6» при токсическом повреждении печени установлено, что его курсовое внутриже-лудочное введение в дозе 100 мг/кг на фоне интоксикации тетрахлорметаном оказывает гепатопротективное действие, о чем свидетельствует нормализация

маркерных показателей токсического повреждения печени на более ранних сроках патологического процесса (табл. 4). Так, на 21 сутки исследования в сыворотке крови животных опытной группы наблюдается снижение уровня прямого билирубина и активности АлТ, АсТ и ЩФ на 48, 46, 66 и 37% соответственно по сравнению с данными у крыс контрольной группы. Отмечено также повышение концентрации гликогена в печени на 23% по сравнению с данными у животных контрольной 1руппы.

Таблица 4

Влияние «Адаптона-6» на биохимические показатели белых крыс при интоксикации тетрахлорметаном (21 сутки)

Показатели Группы животных

Интактная (п=6) Контрольная (п=8) Адаптон-6 (п=8)

АлТ, ед/л 33,7±1,87 73,1±6,30 39,0±1,27*

АсТ, ед/л 17,0±1,07 58,2±4,82 19.6tl.61*

ЩФ, ед/л 75,8±3,41 128,0±9,80 79,8±2,68*

Билирубин прямой, мкмоль/л 1,4±0,04 2,9±0,16 1,5±0,05*

МДА в крови, нмоль/мл 10,8±0,15 18,4±0,93 13,4±0,12*

Каталаза в крови, мкат/л 6,9±0,06 4,1±0,03 6,3±0,02*

Установлено, что курсовое введение испытуемого средства в указанной дозе сопровождается снижением интенсивности процессов свободнорадикального окисления (СРО): концентрация МДА и активность каталазы в сыворотке крови животных опытной группы на 21 сутки достигали значений физиологической нормы.

При исследовании фармакотерапевтической эффективности «Адаптона-6» в дозе 100 мг/кг при 24 часовом иммобилизационном стрессе установлено, что его курсовое профилактическое введение сопровождается уменьшением массы надпочечников и увеличением массы иммунокомпетентных органов белых крыс. Наряду с этим, показано увеличение клеточности тимуса и селезенки соответственно на 21 и 50% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Отмечалось также уменьшение количества десгрукций в слизистой оболочке желудка: число точечных кровоизлияний и эрозий встречалось в 75% случаев при 100 % поражении в контроле (ИП для точечных кровоизлияний составил 1,4 против 3,25 в контроле; для эрозий 0,75 против 1,25). При этом у крыс, получавших «Адаптон-6», не наблюдали образования полосо-видных язв при 100% встречаемости в контроле. Установлено, что механизмы стресс-протективного действия «Адаптона-6» связаны с ограничением процес-

сов СРО, о чем свидетельствует снижение концентрации МДА на 40%, а также повышение активности каталазы на 32% и СОД в 2,5 раза по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

Установлено, что «Адаптон-б» в экспериментально-терапевтической дозе обладает выраженными иммуномодулирующими свойствами, повышая активность клеточного, гуморального и макрофагального звеньев иммунитета в условиях его супрессии (табл. 5). Как следует из данных, приведенных в указанной таблице, под влиянием курсового введения фитосредства в дозе 100 мг/кг отмечается двукратное увеличение количества антителообразующих клеток (АОК), повышение индекса реакции ГЗТ в 3,5 раза, а также фагоцитарного индекса в среднем в 2,5 раза по сравнению с аналогичными показателями у мышей контрольной группы.

Таблица 5

Влияние «Адаптона-6» на выраженность реакций гиперчувствительности замедленного типа, антителообразования и фагоцитоза на фоне азатиоприновой иммуносупрессии у мышей линии Р1(СВАхС57В1/б)

Группы животных

Показатели реакций Интактная (п=10) Контрольная (п=10) Адаптон-6 (п=10)

Индекс реакции ГЗТ 32,5 ±2,58 16,2±0,90 57,7±3,96*

Количество АОК на селезенку 87524±4114 53013±3691 94022±7051*

Количество АОК на 10й спле-ноцитов 606±34,42 373±15,65 707±61,13*

Фагоцитарный индекс (Е 620 нм) 0,029±0,0020 0,013±0,0009 0,036±0,0032*

При исследовании противовоспалительной активности «Адаптона-6» показано, что данное средство оказывает положительное влияние на фазы альтерации и экссудации процесса воспаления. Так, на фоне его курсового введения в дозе 100 мг/кг на 7 сутки исследования площадь альтерации тканей была на 23%, на 14 сутки - в 2 раза меньше, чем в контроле. На 21 сутки поврежденные участки кожи у животных опытной группы практически полностью восстанавливались. Установлено также, что испытуемое средство в указанной дозе оказывает выраженное антиэкссудативное действие, угнетая развитие формалинового отека на 47% по сравнению с данными у животных контрольной группы.

Механизмы адаптогенного действия испытуемого фитосредства обусловлены стабилизацией мембранных структур клеток. Так, с

использованием суспензии эритроцитов донорской крови установлено, что добавление испытуемого средства в дозах, эквивалентных экспериментально-терапевтическим, оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, уменьшая степень гемолиза эритроцитов при перекисном гемолизе на 64%, при осмотическом - 52% по сравнению с контролем. С использованием методов in vitro выявлено, что мембраностабилизирующая активность «Адаптона-6» связана с его антиоксидантными свойствами, обусловленными прямым антирадикальным и опосредованным - хелатирующим действием веществ фенольной природы, входящих в его состав. Так, наличие выраженной антирадикальной активности исследуемого средства было установлено по отношению к супероксидным анион-радикалам, радикалам NO и ABTS» . Показано, что индекс половинного ингибирования (IC») в отношении супероксидных анион-радикалов составил 20,9 мкг/мл и превосходит таковой у препарата сравнения кверцетина (1С50 = 31,82 мкг/мл); в отношении NO-радикалов ICjo «Адаптона-6» составил 0,467 мг/мл, при ICjo у аскорбиновой кислоты и кверцетина соответственно 1,14 мг/мл и 0,150 мг/мл; в отношении ABTS*+ 1С50 испытуемого средства составил 3,52 мкг/мл, тогда как 1С50 для аскорбиновой кислоты и ионола составил 2,1 и 1,6 мкг/мл соответственно. Наряду с этим показано, что «Адаптон-6» снижает скорость накопления ТБК-активных продуктов в модельной системе: индекс его антиокислительной активности составил 47 мкг/мл при 1С50 ионола - 21 мкг/мл. Установлено, что «Адаптон-6» обладает Fe2+- хелатирующей активностью: 1С50 = 682 мкг/мл, для препарата сравнения (аскорбиновой кислоты) данный показатель составил 150 мкг/мл.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что многокомпонентное растительное средство «Адаптон-6» повышает неспецифическую резистентность организма к действию экстремальных факторов различной природы: интенсивным физическим нагрузкам, гипоксическим состояниям, иммобилиза-ционному стрессу, интоксикации ксенобиотиками. Испытуемое средство повышает ориентировочно-исследовательскую активность, оказывает анксиолитическое и ноотропное действие. Установлено, что «Адаптон-6» при его курсовом введении в экспериментально-терапевтической дозе 100 мг/кг обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при действии интенсивных физических нагрузок, длительной иммобилизации, интоксикации тетрахлорметаном и иммунодепрессивном состоянии. В основе адаптационной перестройки организма, развивающейся под влиянием «Адаптона-6» лежит ряд функциональных и метаболических изменений на различных уровнях биологической организации. Центральные механизмы адаптогенного действия испытуемого средства связаны с активацией тормозных систем ЦНС, в частно-

ста, ГАМК-ергической, что ограничивает гиперактивацию стресс-реализующих систем и, тем самым, предотвращается развитие негативных последствий стресс-реакции. Установлено, что периферические адаптогенные эффекты испытуемого фитоэкстракта связаны с ускорением ресинтеза макроэргических соединений в сердечной и скелетной мышцах, повышением уровня энергетических запасов организма (гликогена), нормализацией обмена веществ, повышением активности иммунной системы в условиях ее супрессии. Важное значение при реализации адапто генных свойств «Адаптона-б» имеет выявленный антигипоксический эффект, обнаруженный при кислороддефицитных состояниях различного генеза: гипобарической, гиперкапнической, гемической и гистотоксической гипоксии, поддерживающий на более высоком уровне кислородное обеспечение тканей организма в экстремальных ситуациях.

Можно полагать, что одним из важных молекулярно-клеточных механизмов в адаптогенном действии данного средства является наличие выраженной анти-оксидантной активности, поскольку известно, что «оксидативный стресс» является ведущим патогенетическим фактором, приводящим к срыву адаптационных механизмов организма и развитию патологических состояний (Зенков и соавт., 2001; Меньшикова и соавт., 2008; Уа1ко, 2005, 2007). При этом антиок-сидантная активность испытуемого средства обусловлена ингибированием процессов СРО и повышением мощности эндогенной антиокислительной системы организма, на что указывают полученные данные о снижении содержания продуктов пероксидации липидов в тканях, повышение активности ферментов ан-тиоксидантной защиты организма при экстремальных воздействиях. Установлено, что ингибирование процессов СРО обеспечивается входящими в состав данного экстракта соединениями фенольной природы (флавоноидами, дубильными веществами и др.), обладающими прямым радикалперехватывающим и опосредованным - хелатирующим действием, тем самым, обеспечивая структурную и функциональную целостность биологических мембран. Наряду с этим, испытуемое средство способствует оптимизации энергетического обмена, поддерживая на более высоком уровне процессы энергообеспечения структур, ответственных за реализацию адаптивных реакций организма.

ВЫВОДЫ:

1. Комплексное растительное средство «Адаптон-6» обладает широким спектром адаптогенной активности, повышая неспецифическую резистентность организма к действию экстремальных факторов различной природы.

2. Профилактическое курсовое введение «Адаптона-6» в экспериментально-терапевтической дозе оказывает фармакотерапевтическое влияние при интенсивных физических нагрузках, иммобилизационном стрессе, интоксикации тет-

рахлорметаном и иммуносупрессивном состоянии.

3. «Адаптон-6» повышает ориентировочно-исследовательскую активность, снижает уровень тревожности и эмоциональности, повышает когнитивные функции икс.

4. Адаптогенная активность «Адаптона-6» обусловлена оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем.

5. Базисным молекулярно-клеточным механизмом в стресс-протективном действии «Адаптона-6» является его способность ингибировать процессы сво-боднорадикального окисления и, тем самым, стабилизировать мембранные структуры клеток, повышать энергетический потенциал клеток при экстремальных воздействиях различной природы.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Петрова С.С. Влияние комплексного растительного средства на выраженность повреждений слизистой оболочки желудка белых крыс на фоне им-мобилизационного стресса / С.С. Петрова, Д.Б. Гатыпова, А.С Тулесонова, В.М. Болдогуев, Э.А. Алексеева, Л.Н. Шантанова // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2009. -№3 (67). - С. 283-285.

2. Гатыпова Д.Б. Антигипоксическая активность комплексного растительного средства / Д.Б. Гатыпова, С.С. Петрова, A.C. Тулесонова, В.М. Болдогуев, Э.А. Алексеева, Л.Н. Шантанова II Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2009. - №3 (67). - С. 235-236.

3. Тулесонова A.C. Актопротекторное действие комплексного растительного средства / A.C. Тулесонова, П.Ц. Елбаева, Л.Н. Шантанова, В.Г. Банза-ракшеев, Т.П. Григорьева, В.М. Болдогуев // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2010. -№3. - С. 264-267.

4. Тулесонова A.C. Гепатопротективное действие растительного адап-тогенного средства / A.C. Тулесонова, С.С. Петрова, Д.Б. Гатыпова, В.М. Болдогуев, Э.А. Алексеева, Л.Н. Шантанова, Д.Ц. Дышенова, И.М. Бальхаев // Бюлл. ВСНЦ СО РАМН. - 2011. -№1(77), часть 2. - С. 185-187.

5. Тулесонова A.C. Определение иммуномодулирукяцей активности комплексного растительного средства / A.C. Тулесонова, В.Б. Хобракова, Д.Б. Гатыпова // Медицинская иммунология. -2011. - № 4-5. - С.338.

6. Gatypova D.B. Influence of adaptogenic plant remedy on the course of acute toxic liver injury / D.B Gatypova, A.S. Tulesonova, L.N. Shantanova, S.S. Si-denova // Journal of surgery Мэс Засал. - 2011. -№13. - С. 147.

Подписано в печать 18.11.2011 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,2 печ. л. Тираж 100. Заказ № 61.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН. 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахьяновой, 6.

Актуальность темы. Радикальные изменения социально-экономической и политической обстановки современного техногенного общества способствовали возобновлению интереса ученых к исследованию механизмов адаптации индивида при психоэмоциональном стрессе (Крыжановский, 2006; Агаджанян, Баевский, 2006; МазШгакоБ е1 а1., 2006; Мс Е\уеп, 2007).

В результате, подвергаясь разного рода антропогенным стрессорным воздействиям, современный человек зачастую не в состоянии справиться с перегрузками и адаптироваться к новым условиям существования, вследствие чего наблюдается повсеместное распространение «болезней цивилизации» (Разумов, 2004; Глазачев, 2006; \Veisberg, 2009). Нарушения психосоматических связей лежат в основе развития большинства сердечнососудистых заболеваний, болезней дыхательной и пищеварительной систем, соматоформных расстройств и соматизированных психических реакций (Вознесенская, 2007). Так, по данным статистики в России только 7-8 % населения можно отнести к категории абсолютно здоровых (Григорьев, 2008). При этом заболеваемость и смертность в трудоспособном возрасте за последние 10 лет увеличились на 30% (Виленский, 2008).

В связи с этим, повышение резистентности организма к действию стрессорных факторов является актуальной задачей современной медицинской науки. В решении указанной проблемы большое значение принадлежит разработке и внедрению в клиническую практику новых эффективных адаптогенных средств, преимущественно, природного происхождения (Яременко, 2008). В этом плане особый интерес представляет тибетская традиционная медицина, располагающая большим количеством тонизирующих средств, называемых «жудлэны», рецептурные прописи которых приведены в ее первоисточниках «Чжуд-ши: Канон тибетской медицины» (2001), «Кунпан-дудзи: Большой рецептурный справочник

Агинского дацана» (2008). Характерными особенностями тибетских препаратов является многокомпонентность, обеспечивающая одновременное корригирующее влияние на заинтересованные органы и системы организма; безвредность при длительном применении; содержание комплекса биологически активных веществ, близких по своей природе эндогенным физиологическим соединениям; многоуровневое регулирующее влияние на системы организма, благодаря чему они оказывают не только терапевтическое влияние на патологический процесс, но и обеспечивают повышение неспецифической резистентности организма.

В связи с вышеизложенным, в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН на основе тибетской рецептурной прописи «Жудлэн-15» разработано новое многокомпонентное растительное средство, условно названное «Адаптон-6», в состав которого входит сырье следующих видов растений: корневища астрагала перепончатого {Astragalus membranaceus (Fish.) Bunge) - 15 б.ч., корневища левзеи сафлоровидной (.Rhaponticum carthamoides Willd.) - 20 в.ч., корневища ревеня тангутского {Rheum tanguticum Maxim.) - 10 в.ч., плоды боярышника кроваво-красного {Crataegus sanguínea Pall.) - 15 в.ч., плоды облепихи крушиновидной {Hippophae rhamnoides L.) - 15 в.ч., плоды шиповника коричного {Roza cinnamomea L.) -25 в.ч.

Указанная композиция ингредиентов, входящих в состав фитосредства, составлена с учетом сложных патогенетических механизмов стресс-индуцированных состояний. В частности, при выборе оптимального варианта рекомендуемой композиции сбора были учтены основные причины их развития: гиперактивация стресс-реализующих систем с нарушениями энергетического, метаболического, иммунного, антиоксидантного статуса организма. В связи с этим, на основании данных литературы и собственных исследований, в состав испытуемого средства были включены растения, обладающие адаптогенными (левзея, астрагал, ревень), анксиолитическими (астрагал, боярышник), иммуномодулирующими (левзея, астрагал, облепиха), мембраностабилизирующими (астрагал, шиповник, облепиха), антиоксидантными (левзея, астрагал, шиповник, облепиха) свойствами.

Целью настоящего исследования явилось определение спектра адаптогенной активности «Адаптона-6» и фармакотерапевтической эффективности при экспериментальных стресс-индуцированных повреждениях, а также оценка механизмов адаптогенного действия.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. выявить влияние «Адаптона-6» на устойчивость организма животных к действию экстремальных факторов различной природы;

2. оценить влияние испытуемого средства на физическую выносливость организма животных;

3. определить лечебно-профилактическую эффективность «Адаптона-6» при состояниях, приводящих к дезадаптации;

4. определить влияние фитосредства на функциональное состояние ЦНС;

5. определить особенности механизма адаптогенного действия «Адаптона-6».

Научная новизна. Работа представляет собой исследование адаптогенного действия нового лекарственного средства растительного происхождения «Адаптон-6». Установлено, что испытуемое средство в экспериментально-терапевтических дозах (50 - 150 мг/кг) повышает неспецифическую сопротивляемость организма к экстремальным воздействиям различной природы: интенсивным физическим нагрузкам, гипобарической, гиперкапнической, гемической и тканевой гипоксии, иммобилизационному стрессу. Показано, что «Адаптон-6» повышает ориентировочно-исследовательскую активность животных, оказывает анксиолитическое и ноотропное действие. Психотропные эффекты фитоэкстракта обусловлены активацией ГАМК-ергической системы.

Профилактическое курсовое введение «Адаптона-6» на фоне иммобилизационного стресса уменьшает выраженность всего комплекса вегетативных проявлений стресс-реакции, что связано с оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма под его влиянием. Установлено, что испытуемое средство оказывает фармакотерапевтическое влияние при интоксикации белых крыс тетрахлорметаном, обеспечивая нормализацию морфофункционального состояния печени животных на более ранних сроках патологического процесса. Выявлено также, что «Адаптон-6» обладает существенным иммуномодулирующим потенциалом, повышая активность гуморального и клеточного звеньев иммунного ответа при иммуносупрессивных состояниях.

Широкий спектр адаптогенной активности испытуемого средства связан с формированием под его влиянием состояния неспецифически повышенной резистентности, обусловленного стабилизацией мембранных структур клеток. Молекулярно-клеточный механизм мембраностабилизирующего действия «Адаптона-6» связан с ограничением окислительного стресса, обусловленного как ингибированием процессов перекисного окисления липидов, так и повышением мощности системы эндогенной антиокислительной защиты организма при экстремальных воздействиях.

Практическая значимость. Установленные адаптогенные свойства нового средства природного происхождения аргументируют целесообразность его применения в качестве средства, повышающего неспецифическую сопротивляемость организма. Полученные экспериментальные данные явились основой для производства и применения нового адаптогенного средства в клинической практике в качестве биологически активной добавки к пище «Арура-тан №8». Кроме того, материалы диссертационной работы используются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии медицинского факультета ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 14 октября 2011г.).

ВЫВОДЫ:

1. Комплексное растительное средство «Адаптон-6» обладает широким спектром адаптогенной активности, повышая неспецифическую резистентность организма к действию экстремальных факторов различной природы.

2. Курсовое введение «Адаптона-6» в экспериментально-терапевтической дозе оказывает фармакотерапевтическое влияние при интенсивных физических нагрузках, иммобилизационном стрессе, интоксикации тетрахлорметаном и иммуносупрессивном состоянии.

3. «Адаптон-6» повышает ориентировочно-исследовательскую активность, снижает уровень тревожности и эмоциональности, повышает когнитивные функции ЦНС.

4. Адаптогенная активность «Адаптона-6» обусловлена оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимимитирующих систем.

5. Базисным молекулярно-клеточным механизмом в стресс-протективном действии «Адаптона-6» является его способность ингибировать процессы свободнорадикального окисления и, тем самым, стабилизировать мембранные структуры клеток, повышать энергетический потенциал клеток при экстремальных воздействиях различной природы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Выраженные адаптогенные свойства «Адаптона-6» аргументируют целесообразность его применения в клинической практике для повышения работоспособности, предупреждения утомления при повышенных физических и психических нагрузках у практически здоровых лиц, а также работающих на производствах с вредными условиями труда; для повышения сопротивляемости инфекциям, при астенических состояниях и повышенной утомляемости, а также в период реабилитации после перенесенных тяжелых заболеваний. Наличие иммуномодулирующей активности позволяет рекомендовать данное средство для лечения и профилактики таких широко распространенных заболеваний как грипп, острые респираторные инфекции, а также онкологических заболеваний, вторичных иммунодефицитов.