Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Теоретическое и экспериментальное обоснование разработки профилактических средств, рекомендуемых при заболеваниях мочеполовой системы, и их стандартизация

На правах рукописи

Маркарян Артем Александрович

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ РАЗРАБОТКИ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ, РЕКОМЕНДУЕМЫХ ПРИ ЗАБОЛЕВАНИЯХ МОЧЕПОЛОВОЙ СИСТЕМЫ, И ИХ СТАНДАРТИЗАЦИЯ

1S.90.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

15.00.01 - технология лекарств н организация фармацевтического дела.

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук

Москва - 2005 г.

Диссертационная работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН и во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН

Научные консультанты:

доктор фармацевтических наук, профессор

Даргаеаа Тамара Дарижаповна доктор фармацевтических наук

Сокольская Татьяна Александровна

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор Краснюк Иван Иванович доктор фармацевтических наук Боковикова Татьяна Николаевна

доктор фармацевтических наук Гузев Константин Сергеевич

Ведущая организация: Санкт-Петербургская государственная химико-фармацевтическая академия

Защита состоится «${»^И&ЬрЛ 200^г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 во Всероссийском НИИ лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина,7.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу:! 17216, г. Москва, ул. Грина,7.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета, канд. с./х. наук

М.В. Кирцова

г

чтд

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

Актуальность темы.

Заболевания мочеполовой системы занимают одно из ведущих мест в общей структуре болезней. В настоящее время до 90 % мужчин старше 60 лет страдают заболеваниями почек, мочевого пузыря и предстательной железы, а также около 70 % женщин в возрасте старше 50 лет страдают почечно-каменной болезнью, пиелонефритом, циститом. По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), воспалительные заболевания мочевых путей у детей занимают второе место после острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Около 15% женщин в замужестве, во время беременности и родах страдают воспалительными заболеваниями мочеполовой системы. Медико-социальная значимость указанных нозологических форм, помимо их широкой распространенности, обусловлена тем, что они являются одной из ведущих причин инвалидизации и смертности. Синтетические препараты, используемые в базисной фармакотерапии и профилактике заболеваний почек, несмотря на их высокую эффективность, оказывают неблагоприятное воздействие на функциональное состояние мочеполовой сферы. Нередко наблюдается развитие лекарственной устойчивости патогенной микрофлоры к используемым средствам, развитие побочных эффектов, среди них наиболее значимой является нефротоксичность антибиотиков.

В настоящее время выбор средств, оказывающих комплексное нефропротекгорное действие, весьма ограничен. Природные вещества растительного происхождения, как правило, отличаются широким спектром терапевтического действия, малой токсичностью и связанной с этим возможностью длительного их применения. Весьма эффективными при терапевтическом и профилактическом использовании являются многокомпонентные растительные препараты и биологически активные добавки к пище (БАД), содержащие биологически активные вещества, относящиеся к разным классам химических соединений и оказывающих комплексное фармакотерапевтическое воздействие на основные звенья патологического процесса. Особенно полезно применение БАД при их превентивном использовании у лиц с ослабленн »внесенных тяжелых

заболеваний и лиц, проживающих в неблагоприятных климатогеографических условиях Сибири и Крайнего Севера. Кроме растительных сборов и чаев, широко используются суммарные сухие экстракты, выгодно отличающиеся рациональностью {фименения и сохраняющие все преимущества многокомпонентных лекарственных средств: соответствие наличествующих-ингредиентов поливалентности патогенеза заболевания, их синергизм в действии, влияние на организм как корригирующей системы. Получение сухих экстрактов - концентратов с применением современных технологических процессов, обеспечивающих максимальное извлечение всех действующих веществ из исходного растительного сырья, доведение их до удобной для употребления формы будет способствовать рациональному, экономичному использованию растительного сырья, позволит осуществить стандартизацию средств как на стадии изготовления, так и на стадии получения конечного продукта, повысит точность дозирования, удобство при хранении и применении.

Таким образом, научное обоснование разработки и стандартизации БАД, профилактическая эффективность которых обусловлена гармоничным сочетанием биологически активных веществ, содержащихся в растениях, и представляющих собой своеобразные корригирующие системы, является актуальной задачей фармацевтической науки и практического здравоохранения.

Целью настоящих исследований является теоретическое и экспериментальное обоснование разработки и стандартизации комплексных профилактических средств, рекомендуемых для использования при заболеваниях мочеполовой системы.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

- разработать новый методический подход к составлению растительных смесей, рекомендуемых для профилактики и лечения заболеваний мочеполовой системы;

- с учетом патогенеза заболеваний урогенитальной системы теоретически и экспериментально обосновать выбор оптимальных составов для разработки биологически активных добавок к пище;

- изучить химический состав растительных смесей, являющихся объектами исследований, а также получаемых на их основе экстрактов, гранул и таблеток;

- установить оптимальные параметры экстракции по выходу биологически активных веществ из сборов, разработать рациональную схему получения сухих экстрактов н готовых форм;

- разработать методики количественного определения по сумме действующих веществ в чае «Байкальский - б», сухом экстракте и таблетках; в сухих экстрактах и гранулах «нефрофит» и «фитопрост», для проведения их «сквозной» стандартизации;

- разработать нормативную документацию на БАД: рецептуру, технические условия (ТУ) и технологические инструкции (ТИ) для их внедрения.

Научная новизна.

Установлены общие закономерности, которые позволили теоретически и экспериментально обосновать новый подход к разработке составов, а также технологию получения биологически активных добавок к пище, рекомендуемых для профилактики заболеваний органов мочеполовой системы, заключающийся во включении в композицию не менее 3 видов лекарственного растительного сырья, с учетом многофакторного механизма развития заболеваний органов урогенитальной сферы и современных принципов регуляции их функций.

С учетом химического состава исходного растительного сырья подобраны оптимальные параметры технологических процессов по получению экстрактов и готовых форм, выявлены закономерности экстрагирования биологически активных веществ.

На основании фармакологических исследований предложены составы для гранул « нефрофит» и « фитопрост», а также для таблеток из чая « Байкапьский-6».

Качественными реакциями, тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографией, УФ-спектрофотометрией подтверждено наличие биологически активных веществ в чае «Байкальский -б» и получаемых из него форм, в экстрактах и гранулах «нефрофит» и «фитопрост».

В связи с доминированием в изучаемых объектах флавоноидов и фенологликозидов разработана «сквозная» методика их количественной оценки в пересчете на рутин- и арбутин-стандарты методом УФ-спекгрофотометрии. Учитывая, что в состав гранул «фитопрост» входят корни солодки, предложена

методика, позволяющая контролировать их качество по содержанию глицирризиновой кислоты методом ВЭЖХ.

Приоритет проведенных исследований защищен патентом РФ на изобретение: «Средство «Чай Бакапьский-б», обладающее диуретической активностью и способ его получения».

Практическая значимость:

На основании проведенных исследований получены регистрационные удостоверения в МЗ РФ:

- Биологически активная добавка к пище экстракт почечного чая - РУ № 004724.Р.643.08.2002.

- Биологически активная добавка к пище чай «Байкальский - 6» - РУ № 005463.Р.643.06.2003.

- Биологически активная добавка к пище гранулы «нефрофит» - РУ № 005449.Р.643.07.2003

- Биологически активная добавка к пище гранулы «фитопрост» - СЭЗ № 77.99.20.919.Б.000677.05.04,

Результаты, полученные в ходе работы, использовались при разработке учебных и учебно-методических пособий «Болеутоляющие (анальгезирующие) средства», Москва-Улан-Удэ, 2003; «Побочное действие препаратов из лекарственных растений», Улан-Удэ, 2002; «Фитотерапия и фитопрофилактика пиелонефрита», Улан-Удэ, 2002.

Связь задач исследования с проблемным планом

Работа выполнена в соответствии с планами научных исследований Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по программе «Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока», являющейся разделом (6.3) Государственной программы «Сибирь» на период 199б-2005гг. и Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН (№ гос. регистрации 01860074455) на основании договора о научно-техническом сотрудничестве на период 1993-2010 гг.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на съездах, конгрессах, научно-практических конференциях (Москва - 2001, 2002, 2003, 2004гг.; Санкт-Петербург - 2001, 2004гг.; Пятигорск - 2004г.; Черноголовка, МО - 2002, 2003, 2004гг.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 50 научных работ: из них 1 монография, 1 патент РФ на изобретение, 45 статей и тезисов, 1 учебное и 2 учебно-методических пособий.

Основные положения, выносимые на защиту:

- данные теоретических, экспериментальных, фармакологических и клинических исследований по обоснованию необходимости разработки составов, технологии получения сухих экстрактов и готовых форм, рекомендуемых для профилактики и лечения заболеваний органов мочеполовой системы;

- результаты исследования химического состава в изучаемых объектах основных групп биологически активных веществ методами УФ - спектрофотометрии, ТСХ и ВЭЖХ;

- результаты анализов по установлению характеристик подлинности и определению показателей качества в сырье, экстрактах, гранулах и таблетках.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 294 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы (1 главы), собственных исследований (6 глав), заключения, выводов, списка литературы, который включает 364 источника, в том числе на иностранных языках - 78, приложений. Работа иллюстрирована 103 таблицами и 56 рисунками.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, представлены научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе, на основании обзора данных литературы, обсуждены возможности применения фитокомпозиций с лечебной и профилактической целью при заболеваниях мочеполовой системы. Дана краткая характеристика российского рынка лекарственных препаратов растительного происхождения и биологически

активных добавок к пище указанного профиля. Отражены особенности современного производства экстрактов и готовых форм.

Во второй главе приведены сведения об объектах изучения, используемых методах и приборах, а также другие данные методического характера.

Третья глава посвящена разработке теоретических и методологических подходов к созданию БАД к пище - чая «Байкальский-6» и содержит результаты по подбору и обоснованию рационального состава растительной смеси, а также данные исследований по стандартизации сбора с использованием современных методов фармакогностического и физико-химического анализов.

В главе 4 представлены результаты по разработке рациональной технологии получения сухого экстракта из сбора. Отражены данные по оценке его качества и изучению химического состава, позволившие в дальнейшем осуществить стандартизацию экстракта по основным группам биологически активных веществ. Обсуждены вопросы по отработке оптимальной схемы получения готовой формы -таблеток из сухого экстракта. Разработаны методы контроля их качества.

В пятой главе описаны данные по оптимизации состава и соотношения компонентов для создания нефропротекториого средства «нефрофит», и по разработке способа получения, входящих в его состав индивидуальных сухих экстрактов, включающего выбор экстрагента, температурных условий и других факторов, влияющих на полноту экстрагирования БАВ из отдельных видов лекарственного растительного сырья. Приведены методики стандартизации суммарного сухого экстракта с использованием физико-химических методов анализа. Подобрана оптимальная технология получения грйнул из сухого экстракта и отражены результаты по оценке их качества.

Шестая глава содержит экспериментальные данные по разработке и стандартизации профилактического средства - гранулы «фитопрост».

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. Объекты и методы исследования

Объектом исследования служило лекарственное растительное сырье, различных морфологических групп, отвечающее требованиям нормативной документации: листья брусники обыкновенной, листья крапивы двудомной, листья

ортосифона тычиночного, листья толокнянки обыкновенной, цветки ноготков лекарственных, корни солодки, трава горца птичьего. На основе указанного сырья созданы смеси, используемые для получения сухих экстрактов и готовых форм в виде биологически активных добавок к пище, рекомендуемые для профилактики заболеваний мочевыделительной и половой системы.

Сырье приобретено на ОАО «Красногорсклексредства».

Отбор проб проводили в соответствии с ГФ XI издания, вып.1, стр. 273.

В работе использованы реактивы, растворители, стандарты, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации.

Изучение внешних признаков растительных смесей проводили в соответствии с указаниями статьи « Сборы »(ГФ XI изд., вып.1, стр. 266).

Микроскопическое исследование сборов осуществляли согласно методике, описанной в ГФ XI изд., вып.1, стр. 277 («Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья »).

Идентификацию биологически активных веществ (флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, дубильных веществ, тритерпеновых сапонинов и др.) проводили с помощью качественных реакций и методами одномерной и двумерной бумажной хроматографии на бумаге марки «Ленинградская-М», FN-16, FN-13 (Германия) в системах растворителей: 1) н-бутанол-уксусная кислота-вода (4:1:2); 2) уксусная кислота - 15%, а также с помощью тонкослойной хроматографии на пластинах «Kieselgel 60 F254» в системах растворителей: 1) этилацетат-метилэтилкетон-муравьиная кислота-вода (50:30:10:10); 2) изопропанол-муравьиная кислота-вода (70:6:24); 3) этилацетат-уксусная кислота-вода (25:5:5).

Электронные спектры соединений, исследуемых растворов в УФ и видимой областях записывали на приборах: СФ-46, UV-VIS (Германия), Hitachi (Япония), Gelios (США) в кюветах с толщиной слоя 1 см.

При разработке методик количественного определения основных групп биологически активных веществ были использованы хроматографически чистые вещества и стандарты: ГСО рутина (ФС 42-2508-87), PCO арбутина - Fluka, кат. № 10960, ВИЛАР (ТУ 9363-133-048668-44-01), PCO глицирризиновой кислоты - Fluka, кат. №50531, ВИЛАР (ТУ 9369-148-0486-8244-02).

ВЭЖХ анализ фенольных соединений и глицирризнновой кислоты проводили на хроматографе «Gilson» (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром» для «Windows» В работе использовали обращеннофазный вариант метода, в качестве неподвижной фазы была использована металлическая колонка «Platinum EPS С-18» 100А размером 4,6x250 мм. Подвижная фаза: метанол-вода-фосфорная кислота (конц.) в соотношении - 40:60:0,5. Анализ проводили при комнатной температуре, скорость подачи элюента - 1 мл/мин. Детектирование проводилось с помощью УФ-детектора при длине волны 254 им.

Содержание свободных и связанных аминокислот определяли методом ВЭЖХ на приборе «Gilson-321» (Франция) с последующей компьютерной обработкой результатов с помощью программы «Мультихром» для «Windows».

Получение опытных серий сухих экстрактов проводилось на оборудовании экспериментального завода ГУП «ВИЛАР»: экстрактор из нержавеющей стали вместимостью 5 л, с мешалкой лопастного типа при 60 оборотах в минуту, с подогревом и охлаждением (Волго-Вятского СНХ), вакуум-выпарной аппарат (ЧССР), производительностью 20 л/ч, сепаратор, распылительная сушилка с рабочим давлением -5,2 кгс/см 3'

Разработка технологии получения гранул и таблеток, осуществлялась с применением методов прямого прессования, влажного гранулирования на оборудовании фирмы «Erweka».

Первичный скрининг по определению биологической активности анализируемых объектов проводили при помощи биотест-систем in vitro в НИЦ БМТ ВИЛАР, используя в качестве тест-объектов ферменты антиоксидантной защиты -глутатионредуктазу, глутатионпероксидазу, каталазу, а также регуляторный фермент углеводного обмена - пируваткиназу.

Фармакологический скрининг, определение специфической активности на различных моделях, острой и хронической токсичности, эмбриотоксичности и тератогенности , а также микробиологические исследования проводились в отделе биологически активных веществ ИО и ЭБ СО РАН.

Математическое моделирование осуществляли с использованием критерия Стьюдента.

2. Разработка профилактического средства - чай «Байкальский-6» и его стандартизация.

Обоснование состава растительной смеси С привлечением опыта народной и традиционной медицины, а также современных данных о химическом составе и фармакологической активности, составлен чай из лекарственного растительного сырья, рекомендуемый для профилактики заболеваний мочевыделительной системы, обладающий выраженным антимикробным, противовоспалительным, диуретическим действием. В его состав включены: трава горца птичьего (Herba Polygoni avicularis L.) - 30%, листья толокнянки обыкновенной (Folia Uvae ursi L.) - 20 %, листья брусники (Folia Vitis-idaeae L.) - 20 %, листья крапивы двудомной (Folia Urticae dioicae L.) - 15 %, цветки ноготков лекарственных (Flores Calendulae officinalis L.) - 15 %.

Клиническое изучение, проведенное в Центре восточной медицины Министерства Здравоохранения Республики Бурятия, показали, что чай «Байкальский -6» оказывает диуретическое, а также противовоспалительное действие, на что указывает повышение скорости диуреза, исчезновение лейкоцитоза и снижение количества лейкоцитов и эпителиальных клеток в мочевом осадке. Отсутствие бактерий в моче больных, принимавших настой данного сбора, свидетельствует, о том, что он проявляет синергидное действие с уросептиками. На основании данных биохимических исследований крови можно полагать, что сбор оказывает мочегонное, гипоазотемическое и антиоксидантное действие, о чем свидетельствует снижение уровня азотистых метаболитов и малонового диальдегида в сыворотке крови пациентов, увеличение скорости диуреза.

Разработка характеристик подлинности и доброкачественности сбора Для установления критериев подлинности чая, содержащего растительное сырье, относящееся к различным морфологическим группам, проводили изучение его внешних и анатомо-диагностических признаков с помощью макро- и микроскопического методов анализа. Результаты исследований достоверно подтвердили присутствие в сборе пяти видов лекарственного растительного сырья. Установлены наиболее значимые по диагностике признаки, которые использовались

при разработке соответствующих разделов нормативной документации на чай « Байкальский-6».

В рамках оптимизации контроля качества целесообразна разработка методов определения подлинности и доброкачественности чая и получаемых из него экстракционных, а также готовых форм по БАВ.

Учитывая, что в состав сбора входят 3 компонента (листья толокнянки и брусники, трава горца птичьего) стандартизацию которых проводят по сумме флавоноидов и фенологликозидов, а также опираясь на данные фармакологического скрининга и исходя из поставленных задач, основное внимание при проведении анализа уделялось доминирующей группе фенольных соединений.

С помощью качественных реакций в водном и в 70% спиртовом извлечении из чая установлено наличие флавоноидов, дубильных веществ, фенологликозидов, фенолкарбоновых кислот, полисахаридов.

Методом одномерной и двумерной бумажной хроматографии (БХ) в системах 1 и 2 в присутствии свидетелей ГСО, PCO и хроматографически чистых образцов подтверждено наличие кверцетина Rr~ 0,68 (1), Rf~ 0,39 (2); рутина Rr~ 0,45 (1), Rf ~ 0,57 (2); лютеолин-7-гликозида Rr~ 0,50 (1), Rf~ 0,65 (2); мирицетина Rr~ 0,35 (!), Rf ~ 0,25 (2). С помощью тонкослойной хроматографии (ТСХ) в системе 1, идентифицировали: рутин (Rr~ 0,29), кверцетин (Rf - 0,82), хлорогеновую кислоту (Rf ~ 0,36), арбутин (Rf ~ 0,55), галловую кислоту (Rf ~ 0,72). Полученные данные подтверждены и дополнены методом ВЭЖХ (Рис 1). В ходе анализа обнаружены следующие соединения фенольного характера: кофейная кислота, гесперидин, апигенин, лкггеолин-7-гликозид, рутин, кверцетин, арбутин, галловая кислота, хлорогеновая кислота.

С использованием метода ВЭЖХ установлен качественный и количественный аминокислотный состав чая. Среди свободных аминокислот превалируют тирозин и аланин, а среди связанных - гистидин. (таблица 1 и 2).

Таблица 1.

Результаты определения свободных аминокислот в чае «Байкальский-б»

Название аминокислоты Чай «Байкальский-6», 1 мг

пМоль мкг аминокислоты

Треонин 4,16 0,0005

Алании 39,34 0,0035

Пролин 4,858 0,0006

Цистин 7,265 0,002

Тирозин 107,6 0,02

Валин 8,571 0,001

Фенил аланин 2,106 0,0004

Метионин 4,923 0,0007

Всего: 178,82 0,28

Принимая во внимание данные о широком спектре фармакологического действия фенольных соединений, а также учитывая их присутствие в изучаемом объекте, стандартизацию сбора предлагаем проводить по содержанию суммы флавоноидов и фенологликозидов в пересчете на рутин и арбутин - стандарты, методом УФ-спектрофотометрии.

Таблица 2.

Название аминокислоты Чай «Байкальский-6», 1мг

пМоль мкг аминокислоты

Гистидин 4334 0,7

Аргинин 12,54 0,0022

Треонин 97,56 0,012

Аланин 19,09 0,0017

Пролин 117,0 0,013

Цистин 38,79 0,0093

Тирозин 388,8 0,07

Валин 6,363 0,00075

Лизин 41,1 0,006

Фенилаланин 23,46 ь 0,0039

Всего: 5078,7 0,82

Хроматограмма 70% спиртового извлечения из чая « Баикальскнй-б »

ним -----.....- - -• ............

1---- . - •• .--;• !-• ■ ;

. : ■ 1 "; " |.......... "' ........

| [^'¡¿ин'.^ «и,»"» , 1 : '. :....... : ; ..... - .

т 1 ( 1 и 11 14 1« «линии

№ Время,сек Площадь, МУ'сек Площадь, % Название

1 137_5 ' 3.33 0.01 Олеаиол

2 221.9 4751.22 8.64 Арбутин

3 242.7 4637.30 8.43 Галловая к-та

4 269.1 5411.67 9.84

5 310 8701.82 15 82 Хлорогеновая к-та

б 368.8 14582.91 26.51 Кофейная к-та

9 653.6 379.90 0 69 Геспернлин

13 862.7 919.86 1 67 Апигенин

14 901.5 870.50 1.58 Люте0лин-7-глик01ИД

15 1090 5621.22 10.22 Рутнн

16 1320 644.45 1.17

21 1968 475.36 0.86 Квериетнн

21 3045 55001.36 100 00

Рис Л

Для разработки методики количественной оценки суммы действующих веществ в чае «Байкальский-6» нами были подобраны оптимальные условия проведения анализа: выбор экстрагента, его соотношение с сырьем, размер частиц сырья, время и кратность экстракций, аналитическая длина волны.

В ходе эксперимента при разработке методики количественного определения по сумме флавоноидов использовали общеизвестную реакцию комплексообразования с алюминия хлоридом, которая приводит к батохромному сдвигу УФ-спектра, что позволяет отделить флавоноиды от значительной группы сопутствующих фенольных

соединений. В качестве стандартного вещества выбран рутин, максимум в спектре поглощения которого совпадал с максимумом в спектре извлечения из чая (рис. 2).

Метрологические характеристики методики количественного определения отражены в таблице 3. Относительная ошибка определения не превышает ±4,35 %. Отсутствие систематической ошибки подтверждено опытами с добавками ГСО рутина в навеску образца.

Спектры поглощения ГСО рутина (1) и комплекса флавоноидов чая «Байкальский-6» (2) с раствором алюминия хлорида

D

01

оа

04

02 00

350 Э60 380 400 430 440 4в0 480 500 Я.,ИМ

Рнс.2

В методике определения суммы фенологликозидов, использовали предварительную очистку и концентрацию БАВ на колонке с оксидом алюминия IV степени активности. Полноту экстракции контролировали методом ТСХ. Оптическую плотность полученного элюата измеряли при длине волны 284 нм (рис. 3).

Таблица 3

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в чае «Байкальский-б», в пересчете на рутин-стандарт

F X SJ S Р,% Чр. D Лх Е, %

10 1,45 0,0008 0,0283 95 2,23 0,0631 ±4,35

Спектры поглощения PCO арбутина (1) и комплекса фенологликозидов чая «Байкальский-б » (2)

D

Рис.3

Метрологические характеристики методики представлены в таблице 4. Относительная ошибка определения не превышает ±3,49%. Отсутствие систематической ошибки подтверждено опытами с добавками PCO арбутина в навеску сырья.

Таблица 4

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенологликозндов в чае «Байкальский -6», в пересчете на арбутин-стандарт

f X Sl S Р,% Цр.о Ах Е,%

10 6,71 0,1214 0,3484 95 2,23 0,2343 ±3,49

Полученные показатели качества и нормы содержания действующих веществ, токсичных элементов, радионуклидов и микроорганизмов в чае включены в технические условия. Установлен срок годности - 2 года.

3. Разработка способа получения сухого экстракта и таблеток из чая «Байкальскпй-6 ».

Разработка способа получения сухого экстракта

Создание сухих экстрактов из лекарственного растительного сырья, по сравнению с применением водных извлечений, обеспечивает большую экономичность и рациональность его использования, поскольку в этом случае достигается максимальный выход биологически активных веществ, повышается фармакотерапевтическая эффективность средства за счет возможности дозирования сухого экстракта. В этой связи нами разработан способ получения сухого экстракта из чая «Байкальский-6».

Основными управляющими факторами, влияющими на скорость и полноту экстракции биологически активных веществ, являются тип экстрагента, температура, размер частиц сырья, продолжительность экстрагирования и гидродинамические условия. В качестве экстрагента была выбрана вода (80-90°С), что обусловлено поставленной задачей - получение сухого экстракта с заданной фармакологической активностью. Опытным путем подобрано соотношение сырья и экстрагента -1:10.

Экспериментально доказано, что равновесное состояние в системе по доминирующим компонентам при первом контакте фаз достигается за 120 минут, при втором - за 60 минут. Двукратная экстракция обеспечивает истощение сырья по основным компонентам в среднем на 85-90 % от их исходного содержания.

На основании проведенных исследований на базе экспериментального завода ГУП «ВИЛАР» была разработана технологическая схема получения сухого экстракта (рис.4).

Полученный экстракт представляет собой аморфный порошок от коричневого до темно-коричневого цвета, запах специфический, гигроскопичен, растворим в горячей воде и в 20-40% спиртах. Насыпная масса при свободном падении - 0,385 г/см3, при уплотнении - 0,69 г/см3, сыпучесть - 1,1-1,5 г/с, угол естественного откоса - 35-45°, потеря в массе при высушивании (100-105°С) - не более 5 % (ГФ XI изд.,

Технологическая схема производства сухого экстракта из чая «Байкальский-6»

ВОДА

ТП 2.1 Экстракция ^ измельченного ^ сырья |

ТП 2.2 Упаривание' экстракта • е

ТП 2.3 N. Сепарирование - \

ТП 2.4 V- -1 Сушка1 и измельчение и г ■ . - <-., -Ч

СЫРЬЕ

ТП 1. Измельчение сырья 'уядащ

ТП 2. Получение готового продукта

УМ01. Фасовка и упаковка сухого экстракта

31 5

и

я "

X

Рис.4

вып. 1, стр. 176), содержание тяжелых металлов не превышало 0,01 % (ГФ XI изд., вып. 1, стр. 165).

Стандартизация сухого экстракта

Предварительное изучение качественного состава сухого экстракта показало присутствие в нем флавоноидов, дубильных веществ, тригерпенов, фенологликозидов, фенолкарбоновых кислот, полисахаридов.

Методами БХ, ТСХ и ВЭЖХ удалось идентифицировать компонентный состав: флавоноидов - рутин, кверцетин, апигенин, гесперидин, мирицетин, лютеолин-7-гликозид; фенолкарбоновых кислот - галловая, хлорогеновая, кофейная кислоты; фенологликозидов - арбутин.

Контроль качества сухого экстракта проводили по методикам, разработанным для исходной растительной смеси. При этом подбирали навеску экстракта, количество растворителя, аналитическую длину волны.

Содержание суммы флавоноидов в экстракте определяли методом УФ-спекгрофотометрии при длине волны 413 нм в пересчете на рутин-стандарт, а суммы фенологликозидов в пересчете на PCO арбутина при Х= 284 нм. В сухом экстракте чая «Байкальский-б» должно быть суммы флавоноидов не менее 3%, фенологликозидов не менее 14%. Относительная ошибка определения соответственно не превышает +3,13% и +2,94% (таблица 5). Установлен срок годности - 2 года.

Создание готовой формы - таблеток

Данные, полученные в ходе исследования технологических свойств сухого экстракта, свидетельствуют о довольно низкой сыпучести, гшроскопичности и способности электризоваться. Этими обстоятельствами продиктована необходимость разработки готовой формы - таблеток.

Подбор наполнителей осуществлялся с учетом получения удовлетворительных гранулятов. На основании проведенных исследований в качестве вспомогательных веществ выбраны молочный сахар и кальция стеарат. Для увлажнения гранулята использовали 5% раствор крахмального клейстера.

Состав таблеток: Сухого экстракта - 0,1 г; Сахара молочного - 0,054г; Крахмала картофельного - 0,044г; Кальция стеарата - 0,002г.

Общая масса - 0,2г

Полученные таблетки по показателям прочности отвечают требованиям ГФ XI издания, однако отмечена их незначительная истираемость, что в целом находится в допустимых пределах, и не оказывает существенного влияния на их качество. Также для таблеток определены показатели: распадаемость, общая зола и средняя масса. На основании теста растворения установлено, что через 45 минут анализа в водный раствор перешло 85% суммы фенологликозидов от их общего количества в таблетке.

Схема получения таблеток включает следующие стадии: просеивание сырья; приготовление увлажнителя; получение массы для таблетирования (смешивание и увлажнение); влажное гранулирование; сушка влажной массы; сухое гранулирование и опудривание гранул, таблетирование и обеспыливание; фасовка и упаковка таблеток.

Оценка качества таблеток Изготовленные образцы таблеток охарактеризовывали не только по технологическим показателям, но и по качественному и количественному содержанию действующих веществ.

Изучение качественного состава проводили при помощи общеизвестных реакций и хроматографических проб в условиях описанных для исходной растительной смеси и сухого экстракта. Результаты исследований подтвердили наличие основных групп биологически активных веществ идентифицированных ранее в сборе и экстракте.

Стандартизацию таблеток осуществляли по содержанию суммы фенологликозидов в пересчете на PCO арбутина по методике разработанной для сырья и полученного на его основе экстракта, обращая внимание на подбор массы навески, аналитической длины волны и объемы разведений.

Результаты анализа представлены в таблице 5.

Таблица 5

Метрологические характеристики методик количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин-стандарт (I) и суммы фенологликозидов в пересчете на PCO арбутина (II) в сухом экстракте и таблетках чая «Байкапьский-6».

f X S S Р,% Цр.о Дх Е,%

I (экстракт) 10 3,34 0,0022 0,0469 95 2,23 0,1046 ±3,13

II (экстракт) 10 14,54 0,4047 0,6362 95 2,23 0,4278 ±2,94

II (таблетки) 10 0,0289 0,8x10"* 0,0008944 95 2,23 0,0006 ±2,08

Содержание суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин-стандарт и среднюю массу таблетки должно бьггь не менее 0,02г.

Относительная ошибка определения не превышает ± 2,08%.

Критерии подлинности, нормы содержания действующих веществ, токсических элементов, а также микробиологическая чистота включены в нормативные документы.

4. Разработка и стандартизация гранул «пефрофит».

Разработка технологической схемы получения сухих экстрактов ортосифона тычиночного, толокнянки обыкновенной и горца птичьего.

Учитывая многофакторность механизмов развития заболеваний мочевыделительной системы, а также опираясь на результаты фармакологического скрининга и поставленные задачи, нами был подобран состав для комплексного средства «Нефрофит», представляющего собой смесь сухих экстрактов горца птичьего, ортосифона тычиночного, толокнянки обыкновенной, в соотношении 40:40:20. Фармаколо! ическими исследованиями было установлено, что суммарный продукт, полученный при совместном экстрагировании лекарственного растительного сырья, в значительной степени уступает по своей специфической

активности, экстракту, состоящему из смеси индивидуальных сухих экстрактов, в связи с чем на начальном этапе работы подбирались оптимальные условия для их разработки (табл. 6).

Таблица 6.

Основные параметры экстракции лекарственного растительного сырья горца птичьего, ортосифона тычиночного, толокнянки обыкновенной.

___4

Наименование Трава горца птичьего Листья ортосифона тычиночного Листья толокнянки обыкновенной

Экстрагент Спирт 40% Спирт 40% Спирт 50 %

Соотношение сырье экстрагент 1:10-12 1:10-12 1:10-12

Температурный режим 40-50 "С 40-50 °С 50-60°С

Размер частиц, мм 5-7 мм 7 мм 1-2 мм

Кратность экстракций, время 3 раза по 1 часу 3 раза по 1 часу 3 раза по 1 часу

Особое внимание, при этом уделялось способам сушки: распылительной и вакуумной. Более стабильные результаты получены при сушке методом распыления.

Технологический процесс по получению сухих экстрактов включал следующие основные стадии: измельчение сырья, приготовление экстрагента, экстрагирование, фильтрование, упаривание, сепарирование, сушку, фасовку и упаковку готового продукта. На основании проведенных исследований на базе экспериментального завода ООО «Астромар» была разработана технологическая схема получения сухих экстрактов.

В результате проведенных мероприятий, наработано 5 серий экстрактов, в которых определены технологические параметры, показатели качества, а также установлено содержание основных групп БАВ.

В дальнейшем, путем смешивания экстрактов получали суммарный продукт, представляющий собой аморфный порошок от коричневого до темно-коричневого цвета, со специфическим запахом, гигроскопичный, растворимый в горячей воде (80-90°С) и в 20-40% спиртах. Насыпная масса при свободном падении - 0,39-43 г/см3, при уплотнении - 0,62-68 г/см3, сыпучесть - 1,5-1,7 г/с, угол естественного откоса -

35-40°, потеря в массе при высушивании (100-105°С) - не более 5 % (ГФ XI изд., вып.1, стр. 176), содержание тяжелых металлов не превышало 0,01 % (ГФ XI изд., вып.1, стр.165).

Фармакологическое изучение сухого экстракта «нефрофит».

На основании результатов фармакологических испытаний, проведенных в отделе биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН (ИО и ЭБ СО РАН), было установлено, что превентивно-курсовое введение сухого экстракта лабораторным животным в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг на фоне постишемической почечной недостаточности оказывает защитное действие уже на 1 сутки исследования, существенно уменьшая выраженость синдрома гиперазотемии. Наряду с этим, введение экстракта способствовало повышению диуретической функции почек, а также снижению концентрации продуктов пероксидации липидов как в сыворотке крови, так и в гомогенате почек. Изучение антибактериальной активности сухого экстракта показало, что он обладает бактерицидным действием по отношению к Staphylococcus aureus и Streptococcus faecalis в концентрациях 30 и 15 мг/мл. По отношению к Proteus vulgaris, проявляется бактериостатическое действие, а также установлено отсутствие какой-либо активности по отношению к Escherichia coli.

Исследования эмбриотоксичности и безопасности, проведенные в лаборатории безопасности лекарственных средств Института общей и экспериментальной биологии СО РАН, показали, что средство относится к группе практически безвредных веществ, его длительное (в течение 3 месяцев) введение в максимальных дозах не оказывает отрицательного влияния на функциональное состояние жизненно важных органов и систем лабораторных животных. Установлено также, что «нефрофит» не оказывает местнораздражающего действия, не кумулируется в организме, не проявляет аллергенных, мутагенных, тератогенных, эмбриотоксических свойств и не оказывает отрицательного влияния на постнатальное развитие потомства. Определить показатели острой токсичности (DLj0) per os не удалось, так как однократное внутрижелудочное введение в максимально возможном объёме 40 мл/кг не вызывало гибели лабораторных животных, не было признаков интоксикации в течение 14 суток наблюдения.

Изучение качественного состава сухого экстракта «Нефрофит».

Предварительное изучение качественного состава сухого экстракта показало присутствие в нем следующих групп БАВ: флавоноиды, фенологликозиды, фенолкарбоновые кислоты, дубильные вещества, тритерпены, полисахариды, аминокислоты.

Нами проведено изучение доминирующей группы фенольных соединений методом ВЭЖХ (рис.5). В результате исследования обнаружены: рутин, кверцетин, апигенин, гиперозид, гесперидин, лютеолин-7-гликозид, лютеолин - относящиеся к флавоноидам; кофейная, галловая, хлорогеновая кислоты, а также арбутин, представляющий группу фенологликозидов.

Хроматограмма 70 % спиртового извлечения из сухого экстракта «нефрофит»

ШаУ

> (

4 « М111ИИЯ»ПНМаЖЯИХ)1««41««Ж51Я»Я

№ Врем», мин Площадь, Площадь, */• Название

МУсек

1 4.228 321.05 4.60

2 4.784 1145.09 16.40 Арбутин

3 5.224 900.43 12.90 Галловая кислота

4 5.905 697.75 10.00 Кофейная кислота

5 «.803 1055.69 15.12 Лютеолин

8 11.26 69.22 0.99 Хлорогеновая к-та

9 13.15 236.43 3.39 Лютеолин-7-гликоэия

10 16.61 12.93 0.19 Гесперидин

11 19.02 121.90 1.75 Гиперозид

12 24.83 129.02 1.85 Рутин

1« 32.98 0.39 0.01 Апигенин

26 58.25 0.71 0 01 Кверцетин

33 63.32 0.21 0.00

33 63.85 6980.246 100.00

Рис.5

Разработка методик количественного определения суммы флавоноидов и фенолагликозидов в сухом экстракте.

В связи с тем, что фармакологическая активность экстракта преимущественно обусловлена группой фенольных соединений, стандартизацию полученного продукта проводили по содержанию суммы флавоноидов и фенологликозидов. Для этого была разработана методика количественного определения, в основу которой положен метод УФ-спектрофотометрии. В качестве стандартных образцов выбраны ГСО рутина и PCO арбутина, максимумы дифференциальных спектров которых, совпадают с максимумами спектров исследуемого образца (412±2 нм для анализа суммы флавоноидов и 285±2 нм для определения суммы фенологликозидов).

При подборе оптимальных условий анализа исследовано влияние следующих факторов: количество сухого экстракта и экстрагента, время экстракции и другие параметры.

Метрологические характеристики методик количественного определения представлены в таблице 7,8.

Таблица 7

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте «нефрофит», в пересчете на ГСО рутина

f X S Р,% Цр,о Дх Б, %

9 2,94 0,0448 95 2,26 0,10 ±3,44

Таким образом, содержание суммы флавоноидов и суммы фенологликозидов в сухом экстракте «нефрофит» составило - 2,94% и 8,24% соответственно при относительной ошибке определения - ±3,44% и ±3,26%.

Таблица 8

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенологликозидов в сухом экстракте, в пересчете на PCO арбутина

f X SJ S Р,% t<P, 0 Ах Е, %

10 8,24 0,1447 0,12029 95 2,23 0,26824 ±3,26

Изучение аминокислотного состава сухого экстракта.

При использовании метода ВЭЖХ определен качественный и количественный аминокислотный состав сухого экстракта. Среди свободных аминокислот превалируют аспарагиновая кислота и гидроксипролин, а среди связанных - серии и гистидин (таблица 9 и 10).

Таблица 9

Результаты определения свободных аминокислот в сухом экстракте «нефрофит»

Название аминокислоты Сухой экстракт «Нефрофит», 1 мг

пМоль мкг аминокислоты

Гидроксипролин 198,2 0,029

Аспарагиновая кислота 43,72 0,0058

Глицин 13,37 0,001

Серии 7,33 0,0008

Фенил апанин 3,40 0,00056

Всего: 618,3 0,037

Разработка гранул

Благодаря ряду преимуществ перед другими формами, гранулы получили широкое распространение. Специфика технологии изготовления (высокая производительность, точность дозирования, возможность варьирования размеров, малая габаригность, удобство приема и др.) создали возможность более широкого их

Таблица 10

Результаты определения связанных аминокислот в сухом экстракте «нефрофит»

Название аминокислоты Сухой экстракт «Нефрофит», 1 мг

пМоль мкг аминокислоты

Серии 407,1 0,043

Глутаминовая кислота 13,09 0,0019

Глицин 57,64 0,0043

Гистидин 173,3 0,027

Аргинин 12,01 0,0021

Тирозин 44,99 0,0081

Алании 5 0,00044

Пролин 28,28 0,0037

Лизин 3,16 0,00046

Фенил ал анин 2,527 0,00042

Всего: 747,4 0,091

производства и значительного увеличения номенклатуры лекарственных препаратов, а также биологически активных добавок к пище.

Перед разработкой готовой формы необходимо изучить основные физико-химические свойства экстракта: сыпучесть, насыпную массу и объемную плотность. С целью выбора способа получения и подбора вспомогательных веществ были изучены технологические характеристики экстракта: прессуемость и угол естественного откоса.

Поскольку экстракт имеет среднюю степень сыпучести и низкую прессуемость, а также обладает электростатическими свойствами, забивает отверстия сит и слипается, необходимо применение вспомогательных веществ.

Введение вспомогательных веществ, подбор их оптимального соотношения, обусловлен необходимостью оптимизации процессов грануляции, получения гранул с заданной распадаемостью и качественным внешним видом.

Введение сахара молочного в состав гранул целесообразно в связи с тем, что экстракт гигроскопичен, кроме того, молочный сахар улучшает показатели прессуемости и сыпучести. Для улучшения органолептических показателей использовался сахар-рафинад. В качестве связывающего средства апробировали 5% крахмальный клейстер, воду, 96% спирт, 15 %, 20% и 35 % растворы поливинилпирролидона. Грануловочная масса при увлажнении крахмальным клейстером дает липкую массу и забивает отверстия сита, затем быстро высыхает и образует комки. На основании экспериментальных данных в качестве связывающего средства предложен 20% раствор поливинилпирролидона.

Процесс получения гранул включает следующие стадии: подготовка сырья; просеивание сырья; подготовка посуды; приготовление увлажнителя; смешивание экстрактов сухих; изготовление гранул (смешивание и увлажнение; влажное гранулирование; сушка гранулята; сухое гранулирование; просеивание гранул); фасовка и упаковка гранул.

Для качественной характеристики гранул разработаны методики анализа, включающие обнаружение флавоноидов, фенолкарбоновых кислот, дубильных веществ и фенологликозидов. Компонентный состав фенольных соединений, установленный методом ВЭЖХ, оказался идентичным составу сухого экстракта.

Состав гранул «Нефрофнт» на одну дозу (2 г): Экстракта горца птичьего сухого - 0,02 г Экстракта ортосифона тычиночного сухого - 0,02 г Экстракта толокнянки обыкновенной сухого - 0,01 г Сахара молочного - 1,0 г Сахара-рафинада - 0,9 г Поливинилпирролидона - 0,05 г

Оценку качества готовой формы проводили методами УФ - и хроматоспектрофотометрии по сумме флавоноидов и фенологликозидов в пересчете на рутин и арбутин-стандарты. Анализ проводили по методикам, разработанным для сухого экстракта. При этом обращали внимание на подбор массы навески, ее соотношение с растворителем, объемы разведений и аналитическую длину волны. Полученные в ходе изучения результаты и метрологические характеристики методик представлены в таблице 11 и 12.

Таблица 11

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в гранулах «Нефрофит», в пересчете на ГСО рутина

f X S S Р,% V.0 Дх Е, %

6 0,07 0,002050 0,0045277 95 2,45 0,110299 ±3,39

Содержание действующих веществ, в гранулах составило - 0,07% (сумма флавоноидов) и 0,289% (сумма фенологликозидов) при относительной ошибке единичного определения с 95 % вероятностью - ±3,39% и ±6,88 %. Отсутствие систематической ошибки методик подтверждено опытами с добавками рутина и арбутина - стандартов в навеску исследуемого образца.

Таблица 12

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенологликозидов в гранулах «нефрофит», в пересчете на PCO арбутина

1 f I X S2 S Р,% Vp.O Дх Е, % 1

1 10 | 0,289 0,00008 0,00894 95 2,23 0,01995 ±6,88 1

Установлен срок годности для гранул при хранении в обычных условиях, составляющий 2 года. Показатели качества (описание, подлинность, потеря в массе при высушивании, содержание суммы флавоноидов и фенологликозидов) определялись каждые шесть месяцев хранения.

5. Разработка и стандартизация гранул «фитопрост».

Обоснование состава сбора

Проблема рационального сочетания растений, обладающих специфической активностью, является одной из важнейших при составлении композиций.

Как известно по статистическим данным, простатит занимает одно из ведущих мест по частоте, среди заболеваний органов половой сферы у мужчин, главным образом в наиболее трудоспособном и репродуктивном возрасте 20-55 лет. По клиническим проявлениям при простатите выделяют три группы симптомов: 1) болевые симптомы, отличающиеся стойкостью; 2) учащение мочеиспускания, рези при мочеиспускании, никтурия; 3) половые расстройства (преждевременная эякуляция, ослабление эрекции).

Течение заболевания отличается резистентностью к лечению, которое должно предусматривать воздействие на все звенья патологического процесса. В этой связи, предложен состав растительной смеси, основу которой составляет лекарственное растительное сырье, входящее в экстракт и гранулы «нефрофиг» (листья толокнянки обыкновенной, листья ортосифона тычиночного, трава горца птичьего), с добавлением корней солодки и цветков календулы лекарственной, чье включение в сбор обусловлено необходимостью усиления специфического фармакологического действия.

При разработке сбора и выборе оптимального соотношения входящих в его состав индивидуальных компонентов были учтены основные причины, приводящие к развитию нарушений в предстательной железе и в других органах мочеполового тракта.

Опираясь на результаты фармакологического скрининга, а также на данные литературы о химическом составе индивидуального растительного сырья, подобрана и обоснована рецептура сбора, имеющего следующий состав: Трава горца птичьего -35%; Листья ортосифона тычиночного - 30%; Листья толокнянки обыкновенной -20%; Цветки календулы лекарственной - 5%; Корни солодки голой - 10%.

Оценка качественного и количественного состава сбора

Учитывая тот факт, что на растительную смесь не предусмотрено составление нормативной документации, а рекомендуется ее последующее использование в качестве сырья для получения экстракта и готовой формы, ниже остановимся на ее краткой характеристике.

Для разработки критериев подлинности сбора, на первом этапе исследований проводили его изучение методами макро- и микроскопического анализа, с целью установления наиболее значимых по диагностике признаков, позволяющих подтвердить состав растительной смеси по входящим в нее компонентам.

Исходя из того, что основными БАВ, влияющими на проявление сбором специфического фармакологического действия, являются фенольные соединения и тритерпеновые сапонины, анализ изучаемого объекта проводили по вышеуказанным группам.

Качественными реакциями с водным и 70%- м спиртовыми извлечениями, установлено наличие флавоноидов, фенологликозидов, тритерпеновых сапонинов, дубильных веществ, полисахаридов.

С помощью методов БХ, ТСХ и ВЭЖХ идентифицирован компонентный состав сбора. Доказано присутствие флавоноидов - рутина, кверцетина, гиперозида, апигенина, лютеолина, лютеолин-7-гликозида, ликуразида, мирицетина; фенолкарбоновых кислот - галловой, хлорогеновой, кофейной; фенологликозида арбутина, а также глицирризиновой кислоты относящейся к группе тритерпеновых сапонинов.

Определение содержания основных групп действующих веществ, проводили по методикам ГФ X и XI изданий. Полученные результаты представлены в таблице 13.

Таблица 13

Содержание основных групп БАВ в сборе

Группа БАВ Содержание, в %

Сумма фенологликозидов, в пересчете на PCO арбутина 2,05±0,03

Сумма флавоноидов, в пересчете на ГСО рутина 1,12±0,01

Дубильные вещества 4,87±0,66

Органические кислоты 1,92±0,04

Глицирризиновая кислота 1,27±0,1

Таким образом, данные проведенного комплексного изучения растительной смеси позволили установить ее подлинность и доброкачественность, а также определить параметры необходимые для разработки рациональной технологии получения сухого экстракта.

Разработка способа получения сухого экстракта

Сухие экстракты являются наиболее перспективной лекарственной формой для растительных сборов, представляющие собой сумму БАВ в концентрированном виде.

С целью создания оптимальной технологической схемы получения сухого экстракта были изучены: влияние и природа экстрагента, его соотношение с сырьем, температурный режим, размер частиц сырья, продолжительность и кратность экстракций и другие гидродинамические факторы.

Опытным путем подобран растворитель - 40% спирт, его соотношение с сырьем - 1:10, измельченность сырья варьирует от 0,5 - 1 мм для листьев толокнянки и корней солодки, до 4-5 мм для цветков календулы, травы горца птичьего и листьев ортосифона. Оптимальной температурой извлечения действующих веществ, является 55-65°С.

На основании проведенных исследований установлено, что равновесное состояние в системе по доминирующим компонентам при первом контакте фаз достигается за 60 минут, при втором за 30 минут. Двукратная экстракция обеспечивает истощение сырья по основным компонентам в среднем на 85-90 % от их исходного содержания. При этом потери биологически активных веществ составляют 10-15 %.

Установленные оптимальный режим экстракции, условия очистки извлечений и сушки позволили в дальнейшем разработать технологическую схему получения сухого экстракта.

Экстракт представляет собой аморфный порошок от коричневого до темно-коричневого цвета, со специфическим запахом. Гигроскопичный, комкуется. Насыпная масса экстракта при свободной засыпке 0,350 г/см3, при уплотнении 0,67-0,69 г/см3. Угол естественного откоса 37-40°, сыпучесть 1,0-1,3

г/с. Согласно дериватограмме, основное удаление влаги происходит при температуре от +40° до +56°С. При температуре +115°С происходит термическое разложение. Потеря в массе при высушивании не должна превышать - 5,0 % (ГФ XI изд., вып.1, стр. 176), содержание тяжелых металлов не превышало 0,01 % (ГФ XI изд., вып.1, стр.165). Растворим в горячей воде, в водно-спиртовых смесях- 20-40 %.

Сухой экстракт использовался для изготовления гранул.

В условиях опытно-промышленного производства получали пять образцов сухого экстракта, которые были заложены на хранение в естественных условиях.

Оценка качества сухого экстракта

Стандартизация полученного продукта по доминирующим веществам осуществлена с применением современных физико-химических методов анализа.

На первом этапе проведено предварительное фотохимическое изучение экстракта. При этом установлено, что в экстракте содержатся БАВ, относящиеся к различным классам соединений: тритерпеновые сапонины, полисахариды, фенологликозиды, флавоноиды, дубильные вещества.

Методами БХ и ТСХ идентифицированы:

- фенольные соединения: рутин, кверцетин, лютеолин, лютеолин-7-гликозид, апигенин, мирицетин, арбутин; фенолкарбоновые кислоты: галловая, хлорогеновая.

С помощью ВЭЖХ-анализа удалось ' подтвердить присутствие обнаруженных ранее веществ, а также идентифицировать кофейную кислоту и соединения, содержащиеся в корнях солодки - флавоноид ликуразнд и глицирризиновую кислоту (рис.6).

Разработка методик количественного определения по доминирующим группам БАВ.

Исходя из приведенных выше результатов качественного анализа экстракта, а также опираясь на данные его фармакологического изучения, для осуществления контроля качества были разработаны методики количественного

определения по сумме флавоноидов, сумме фенологликозидов и глицирризиновой кислоте методами УФ-спектрофотометрии и ВЭЖХ.

Хроматограмма 70% спиртового извлечения из сухого экстракта "фитопрост"

№ Время, сек Площадь, MV'cck Площадь, % Название

1 216.3 1256.21 8 86 Арбутин

2 238.5 1964.06 12.83 Галловая кислота

3 265 1991.79 13.02

4 296 1796.08 11.74 Хлорогсновая кислота

5 355 2496.48 16.31 Кофейная кислота

10 581.4 31.94 0.21 Гиперозид

13 874.4 674.70 4.41 Апигении

14 940.1 2.04 0.01 Люгеолнн-7-гликозид

16 1074 1054.97 6.89 Глнцирризиновая к-та

17 1109 6.42 0.04 Рутин

21 1605 297.35 1.94 Ликурозид

22 2444 9.83 0.06 Кверцетин

22 2671 15302.77 100.00

Рис.6

При определении суммы флавоноидов и суммы фенологликозидов в качестве стандартов выбраны ГСО рутина и PCO арбутина, максимумы спектров поглощения которых совпадают при длинах волн 413 нм и 280 нм соответственно, с максимумами спектров извлечений из сухого экстракта. В процессе разработки методики подбирали массу навески, растворитель, его соотношение с образцом, обращали внимание на объемы разведений.

Установлено, что подчинение закону Ламберта-Бугера-Бэра наблюдается при оптических плотностях от 0,2 до 0,7. lflii шцши hj шбниц 14-и 15, данные

т рос национальная]

i си&лиотека i

<_О» т uv I

методик воспроизводимы, их ошибки при доверительной вероятности 95 % не превышают ± 2,82% и ± 2,13%.

Таблица 14

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте, в пересчете на ГСО рутина

f X S* S P,% •<p.n Дх E, %

10 2,32 0,00086 0,02932 95 2,23 0,06539 ±2,82

Таким образом, содержание суммы флавоноидов и суммы фенологликозидов в сухом экстракте составляет - 2,32% и 4,23% соответственно.

Таблица 15

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы фенологликозидов в сухом экстракте, в пересчете на PCO арбутина

f X S1 S P,% t(l>.n Дх E, %

10 4,23 0,0172 0,13105 95 2,23 0,09 ±2,13

Разработка методики количественного определения глицирризиновой кислоты методом ВЭЖХ.

Анализ проводили на хроматографе «Gilson» с последующей компьютерной обработкой результатов с помощью программы « Мультихром » для « Windows ». Время анализа - 37 минут. Скорость подачи элюента - 1,0 мл/мин. Длина волны детектирования - 254 нм. Методика определения.

По 20 мкл 70% спиртового раствора сухого экстракта и раствора PCO

глицирризиновой кислоты, вводят в хроматограф и анализируют в

вышеописанных условиях. Расчет количественного содержания проводили

методом абсолютной калибровки и с помощью формулы:

Sdcx/Ccr. • 100-21,75

С= -----------------------------• 100%;

S„. a(lOO-W)-100

где:

Skc*. - площадь пика глицирризиновой кислоты в исследуемом растворе; SCT - площа^пи^а^^1щ^{юго раствора глицирризиновой кислоты;

«" .(МП tfedi ;

» » ! 34

* <*

а - навеска вводимой в хроматограф пробы, в граммах; С - концентрация глицирризиновой кислоты, в %; Сст. - концентрация PCO глицирризиновой кислоты, в г/мл; W- потеря в массе при высушивании экстракта, в %.

21,75/100 - коэффициент перерасчета общей площади на площадь пика глицирризиновой кислоты, установленный экспериментально с помощью диодно-матричного детектора при определении чистоты данного пика в исследуемом растворе.

Для подтверждения объективной оценки содержания глицирризиновой кислоты была определена чистота ее пика с помощью диодно-матричного детектора.

Условия диодно-матричного детектирования для определения чистоты пика: шкала поглощения 0,0-0,01; длина волны 254 нм; фиксирующий минимум площади пика от 0,0001 интенсивности поглощения в минуту. Согласно полученным данным время удерживания пика глицирризиновой кислоты составило - 15,64 минуты. Начало выхода чистого пика - 15,57 минуты, конец выхода -15,69 мин. При наложении пика PCO определено, что при длине волны 254 нм в исследуемом растворе доля чистого пика составляет 21,75 %, что в последующем было учтено при составлении расчетной формулы.

Результаты проведенных исследований и метрологические характеристики методики представлены в таблице 16.

Таблица 16

Метрологические характеристики методики количественного определения глицирризиновой кислоты в сухом экстракте «фитопрост»

f X SJ S Р,% tan Дх Е, %

9 2,87 0,05451 0,01724 95 2,26 0,12 ±4,18

Как видно из приведенной выше таблицы, содержание глицирризиновой кислоты в сухом экстракте составляет - 2,87%, при относительной ошибке определения - ± 4,18%.

Изучение аминокислотного состава сухого экстракта.

Идентификацию и количественное определение аминокислот в сухом экстракте проводили методом ВЭЖХ. По результатам исследования установлено, что среди свободных аминокислот превалирует лизин и аланин, а среди связанных - серии и аспарагиновал кислота (таблица 17 и 18).

Результаты определения свободных аминокислот

Таблица 17

Название аминокислоты Сухой экстракт, 1 мг

пМоль мкг аминокислоты

Серии 22,99 0,0024

Аргинин 9,001 0,0016

Треонин 4.308 0,0005

Тирозин 14,64 0,0027

Аланин 86,79 0,0077

Метионин 79,96 0,012

Лизин - 94,66 0,014

Фенил аланин 17,14 0,0028

Всего: 329,489 0,044

Разработка и стандартизация гранул. Для разработки оптимальной технологии получения гранул, первостепенной задачей исследований является изучение основных технологи -

Таблица 18

Результаты определения связанных аминокислот _в сухом экстракте «фитопрост»._

Название аминокислоты Сухой экстракт, 1 мг

пМоль мкг аминокислоты

Гидроксипролин 279,8 0,041

Аспарагиновая кислота 631,72 0,084

Глицин 31,02 0,0023

Серин 699,6 0,074

Аргинин 2,419 0,00042

Гистидин 537,6 0,083

Пролин 23,1 0,003

Треонин 12,13 0,00144

Фенилаланин 1,476 0,00024

Всего: 2218,85 0,289

ческих и физико-химических свойств сухого экстракта, таких как сыпучесть, насыпная масса, объемная плотность, прессуемость, а также угол естественного откоса.

Из приведенных в предыдущей главе данных, очевидно, что экстракт имеет среднюю сыпучесть и низкую прессуемость, а также- обладает электростатическими свойствами: забивает отверстия сит и слипается, в связи с чем необходимо введение вспомогательных веществ. Выбор наполнителей проводили, ориентируясь на показатели контроля качества готовой формы (точность дозирования, распадаемость), которые позволяют получить гранулы, соответствующие требованиям ГФ XI издания, вып.2, стр.139.

В качестве вспомогательных веществ экспериментально предложены: молочный сахар, сахар-рафинад. Увлажнение осуществлялось 35% раствором поливинилпирролидона.

Состав гранул « Фитопрост » на одну дозу ( 2г): Экстракт сбора сухой - 0,12г Сахар молочный - 0,9г Сахар-рафинад - 0,94г Поливинилпирролидон - 0,04г

Технология получения гранул аналогична технологии гранул «Нефрофит».

Оценка качества гранул Качественный анализ гранул проводили по методикам разработанным для изучения сухого экстракта, акцентируя внимание на подбор массы навески и ее соотношение с растворителем. В ходе исследований удалось обнаружить следующие группы БАВ: флавоноиды, фенологликозиды, тритерпеновые сапонины, полисахариды, органические кислоты. Результаты изучения показали, что доминирующими группами являются: флавоноиды, фенологликозиды и тритерпеновые сапонины, по которым и осуществлялся контроль качества готовой формы.

Оценку качества гранул проводили методами УФ- и хроматоспектрофотометрин по сумме флавоноидов и фенологликозидов в

пересчете на рутин- и арбутин-стандарты, а также методом ВЭЖХ по содержанию глицирризиновой кислоты. При проведении анализа, за основу брали методики разработанные для изучения сухого экстракта. При этом обращали внимание на подбор массы навески, ее соотношение с растворителем, объемы разведений и аналитическую, длину волны. Полученные в ходе работы результаты и метрологические характеристики методик представлены в таблице 19.

Таблица 19

Метрологические характеристики методик количественного определения суммы флавоноидов (I), суммы фенологликозидов (II) и глицирризиновой кислоты (III) в гранулах «фитопрост»

f X S5 S P,% Цр.о Дх E, %

I 6 0,15 0,00478 0,00144 95 2,45 0,00321 ±2,14

II 6 0,22 0,00018 0,01332 95 2,45 0,01234 ±5,61

III 9 0,17 0,00003 0,00559 95 2,26 0,004 ±2,35

Таким образом, содержание суммы флавоноидов и суммы фенологликозидов в гранулах составило 0,15% и 0,22% соответственно при относительной ошибке единичного определения с 95 % вероятностью - ±2,14% и ±5,61 %. Содержание глицирризиновой кислоты - 0,17% при относительной ошибке - ±2,35%. Отсутствие систематической ошибки методик подтверждено опытами с добавками стандартных образцов рутина, арбутина и глицирризиновой кислоты.

Установлен срок годности готовой формы при хранении в обычных условиях, составляющий 2 года. Показатели качества (описание, подлинность, потеря в массе при высушивании, содержание суммы флавоноидов и фенологликозидов) определялись каждые шесть месяцев хранения.

Фармакологическое изучение гранул Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что курсовое введение гранул «фитопрост» в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг на фоне хронического простатита оказывает выраженное фармакотерапевтическое действие. Так под влиянием готовой формы

улучшаются параметры, отражающие морфофункциональное состояние предстательной железы животных. В частности, введение «фитопроста» на фоне ортоксилолового хронического простатита способствует нормализации показателей содержания лейкоцитов в крови и в секрете предстательной железы, значений СОЭ крови.

Исследования безопасности гранул показали, что средство относится к группе практически нетоксичных веществ по общепринятой классификации Сидорова К.К., так как их пероральное введение в максимально возможной дозе не вызывало гибели лабораторных животных в течение 14 суток.

Экспериментальные фармакологические исследования гранул, проводимые в соответствии с требованиями, предъявляемыми к разработке БАД (определение безопасности и эффективности биологически активных добавок к пище: Методические указания 2.3.2.721-98), показали наличие у них при моделируемом хроническом простатите выраженной противовоспалительной, спазмолитической, диуретической, антибактериальной, анальгезирующей активности, а также ингибирующего влияния на процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), что по-видимому, обусловлено содержанием преимущественно веществ фенольной природы, обладающих прямой антирадикальной активностью.

Биотест-системы в скрининге изучаемых объектов

С использованием специфических ферментных систем in vitro проведены исследования по выявлению адаптогенной, антиоксидантной и антимикробной активности извлечений сбора «Байкальский-б», сухого экстракта на его основе и таблеток, гранул «Нефрофит» и «Фитопрост».

Для оценки изучаемых объектов использовали ферменты: глутатион -редуктаза (ГР), глутатионпероксидаза (ГП), каталаза (КГ), пируваткиназа (ПК).

Полученные данные свидетельствовали об активизации ферментов ГР и ГП в эксперименте с водным настоем сбора «Байкальский-6», что подразумевает его антиоксидантное действие. Наряду с этим наблюдается снижение активности каталазной тест-системы, характерное для антимикробной активности, а активация ГР при одновременном ингибировании FCT присуще веществам,

проявляющим адаптогенное действие. Извлечение из сбора «Байкальский-б» активирует фермент ПК, на основании чего можно сделать вывод о способности веществ, содержащихся в нем, регулировать углеводный обмен.

Экстракт и таблетки проявляли антиоксидантную, адаптогенную и противомикробную активность. Для -исключения возможности влияния на ход эксперимента вспомогательных веществ, их тестирование проводили в аналогичных условиях. Полученные результаты, показали отсутствие какой-либо активности.

Помимо этого, с помощью ферментных тест-систем in vitro, исследованы гранулы «нефрофит» и «фитопрост». В ходе эксперимента выявлены адаптогенная, антиоксидантная и противомикробная активность. Гранулы «Фитопрост» в эксперименте ингибируют ГР, КТ, ГП и ПК, активность ферментов ГП и ПК снижается при увеличении дозы испытуемого препарата. Такое изменение скорости ферментной реакции наиболее характерно для антибактериальных средств. Небольшая активация ГР наблюдается в пределах концентрации 10-50 мкг/мл гранул, поэтому можно предположить наличие у них менее выраженных адаптогенных свойств.

Таким образом, в эксперименте in vitro с использованием ферментных биотест-систем выявлены адаптогенные, антиоксидантные, противомикробные свойства изучаемых объектов. Результаты наших исследований, являлись начальным этапом определения основных фармакологических эффектов, необходимым для последующего проведения более глубокого, направленного скрининга по установлению специфической активйости растительных смесей и получаемых на их основе экстрактов, гранул и таблеток. Последующие доклинические испытания подтвердили результаты предварительных исследований.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ.

На основании данных литературы и проведенного сравнительного анализа дана характеристика уровня стандартизации лекарственных средств, применяемых в профилактике и лечении заболеваний мочеполовой системы. Разработан и предложен методический подход к созданию комплексных профилактических средств и обоснована рациональность составов чая «Байкальский-б» и полученных из него сухого экстракта и таблеток, а также сухих экстрактов и гранул «нефрофит» и «фигопрост». Установлены закономерности влияния технологических факторов (полярность экстрагента, его концентрация и температура, соотношение сырья и экстрагента, время экстракции), на выход экстрактивных и действующих веществ в указанных объектах; разработана и предложена оптимальная схема получения сухих экстрактов для создания лекарственных и профилактических средств данного профиля.

На основе сухих экстрактов разработаны: таблетки «Байкапьский-6», гранулы «фитопрост» и «нефрофит»; рациональность выбранных рецептур подтверждена фармакологическими и клиническими исследованиями. Исследован качественный состав исходного сырья, сухих экстрактов и готовых форм в сравнительном аспекте методами ТСХ и ВЭЖХ; установлены следующие группы биологически активных веществ: флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, фенологликозиды, тритерпеновые сапонины, свободные и связанные аминокислоты. Полученные результаты согласуются с интерпретацией данных фармакологических исследований указанных средств.

Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы фенологликозидов в пересчете на ГСО рутина и PCO арбутина в чае «Байкальский-6», в сухом экстракте и таблетках, полученных на его основе, в сухих экстрактах и гранулах «нефрофит» и «фитопрост» методом УФ-спектрофотометрии, а также глицирризиновой кислоты с помощью ВЭЖХ-анализа в сухом экстракте и гранулах «фитопрост».

Разработан состав и способ получения чая «Байкальский-б», защищенный патентом РФ на изобретение.

По результатам проведенных исследований в МЗ РФ получены регистрационные удостоверения на экстракт почечного чая, чай «Байкальский-б», гранулы «нефрофит» и санитарно-эпидемиологическое заключение на гранулы «фитопрост».

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1. Исследования по определению специфической активности новой биологически активной добавки - чай «Байкальский-6». / Маркарян А.А. Даргаева Т.Д. Николаева Г.Г, Николаев С.М., Мантатов В.В., Зиновьев А И.// Сб.науч.трудов «Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты». Вып. б. - Москва. - 2002 . - С. 288-294

2. Разработка и стандартизация сухого экстракта и гранул «Нефрофит». / Маркарян A.A., Нагаслаева Л.А., Даргаева Т.Д., Николаева Г Г., Николаев С.М. // Материалы научно-практической конференции «Современные исследования в медицине и фармации». - Казань. - 2002. Изд. КГМУ. - С. 126- 127.

3. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаев С.М., Николаева Г.Г. Разработка и стандартизация новой БАД - .чай «Байкальский-б». // Материалы научно-практической конференции «Современные исследования в медицине и фармации». - Казань. - 2002. Изд. КГМУ. - С. 127- 128

4. Побочное действие препаратов из лекарственных растений / Николаев С М , Чукаев С.А., Етобаева И.Г., Махакова Г.Ч., Убеева И.Л., Маркарян A.A. // Учебно-методическое пособие. МО РФ, БГУ, МЗ РФ, ИИУВ БФ. - Улан-Удэ. -2002. - 18с.

5. Фитотерапия и фитопрофилактика пиелонефрита. / Етобаева И.Г, Махакова Г.Ч., Маркарян A.A., Башелханов И.С., Мантатов В.В. // Учебно-методическое пособие. МО РФ, БГУ, МЗ РФ, ММА им И.М. Сеченова. - Улан- Удэ. - 2002. -21с.

6. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д. Получение и контроль качества фитоэкстракта, применяемого при патологиях предстательной железы. // Сборник научных трудов «Нетрадиционные природные ресурсы, инновационные технологии и продукты». Вып.9. - Москва. - 2003. Изд. РАЕН. - С. 222-226.

7. Пахомов В.П., Копейкина А.В, Маркарян A.A. Определение in vitro фитоантиоксидантного потенциала лекарственных растений. // Российские аптеки, №5, Вып.1. - Москва. - 2003. Изд. «Ремедиум ». - С. 64-66

8. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаев С.М., Моидодоев А.Г. Организационно-методические аспекты клинико-экспериментальных исследований новой БАД // МЗ РФ «Проблемы управления здравоохранения». -Москва. - 2003. №4 (11). Изд. Профтек. - С. 83-88

9. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаева ГГ., Николаев С.М. Разработка и стандартизация БАД к пище - сухой экстракт «Фитопрост». // Материалы 2 Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создание функциональных продуктов». - Москва. - 2003. Изд.РАЕН. - С. 225-226

10. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаева ГТ., Николаев С.М. Получение и разработка методов контроля качества БАД - гранулы «Нефрофит». // Материалы 2 Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создание функциональных продуктов». - Москва. - 2003. Изд. РАЕН. - С 226-227.

11. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаева ГГ., Николаев С.М. Создание и разработка методов контроля качества БАД - чай «Байкальский-б». //Материалы 2 Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создание функциональных продуктов». - Москва. - 2003. Изд. РАЕН. - С. 227-228

12. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д. Получение и контроль качества фитоэкстракта, применяемого при патологиях предстательной железы. //Материалы 2 Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные проблемы инноваций с нетрадиционными природными ресурсами и создание функциональных продуктов». - Москва. - 2003. Изд. РАЕН. - С. 238

13. Болеутоляющие средства растительного происхождения. / Аляутдин Р Н.;-Давыдова О.Н., Крендаль Ф.П., Николаев С.М., Маркарян A.A., Башелханов И.С. // Материалы научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине». - Улан- Удэ. - 2003. Изд. БНЦСО РАН.-С.25-27

14. Югдурова Е.Д., Маркарян A.A., Николаева Г.Г., Даргаева Т.Д. Разработка методики количественною определения суммы флавоноидов в чае «Байкал ьский-6». // Материалы научно-практической конференции

«Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине». - Улан- Уда. - 2003. Изд. БНЦ СО РАН. - С. 99-100

15. Югдурова Е.Д., Николаева Г.Г., Маркарян A.A., Даргаева ТД. Изучение содержания аминокислот в чае « БаГжальский-6 » методом ВЭЖХ. // Материалы научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине». - Улан-Удэ. - 2003. Изд. БНЦ СО РАН.-С.110-112

16. Мантатов В.В., Дармаев П.Д., Маркарян A.A. Влияние настойки корней малочая Фишера на течение хронического простатита. // Материалы научно-практической конференции, посвященной 70-летию службы контроля качества лекарственных средств, в Бурятии. - Улан-Удэ. - 2003. - С. 107-108.

17. Болеутоляющие (анальгезирующие средства). / Аляутдин Р.Н., Николаев С.М., Маркарян A.A., Давыдова О.Н., Крендаль Ф.П., Башелханов И.П., Мантатов В.В. // Учебное посо.бие. МЗ РФ, ММА им. И.М.Сеченова, МО РФ, БГУ. - Москва-Улан-Удэ. - 2003. - 33с.

18. Экспериментальная фитотерапия повреждений почек. / Николаев С.М, Шантанова JIН, Мондодоев А.Г., Матханов Н.Э., Маркарян A.A. // Монография. ИО и ЭБ СО РАН, МЗ РФ, ММА им. И М. Сеченова, МО РФ, БГУ. - Улан-Удэ. - 2003. Изд. БНЦ СО РАН. - 184с.

19. Разработка методов контроля качества и фармакологическое изучение комплексного средства растительного происхождения - гранулы «Нефрофит». / Маркарян A.A., Абрамов A.A., Даргаева Т.Д., Николаева Г.Г., Николаев С.М. // Вестник Московского Университета. Сер. 2. Химия. - Т. 44. - №6. - Москва. -2003. - С. 422-425

20. Маркарян A.A., Абрамов A.A. Хроматографическое изучение фенольного состава сухого экстракта «Нефрофит». // Вестник Московского Университета. Сер. 2. Химия. - Т. 44. - №5. - Москва. - 2003. - С. 356-360

21. Маркарян A.A., Вандышев В.В. Разработка и характеристика новой растительной композиции гранулы «Нефрофит». // Вестник РУДН. Сер. Медицина. - №3. - Москва. - 2003. - С. 143-145

22. Мантатов В.В., Дармаев П.Д., Маркарян A.A., Иванов В В. Фитотерапия хронического простатита. // Вестник Бурятского Университета. Сер. Медицина. Вып.З. - Улан-Удэ. - 2003. - С. 132- 136

23. Сокольская Т.А., Даргаева Т.Д., Маркарян A.A. Стандартизация растительных смесей, получаемых из лекарственного растительного сырья. // Мат. Международной конференции « Волшебный аромат чая и кофе». - Москва - 2003. - С. 69- 70.

24 Фитотерапия хронического простатита комплексным природным средством. / Мантатов В.В., Дармаев П.Д., Маркарян A.A., Иванов В.В., Башелханов И.С, Раднаева С.Д. // Сборник трудов Байкальские чтения - 1. Разгрузочно-диетическая терапия и традиционная медицина. - С. Пб.: Спец. Лит. - 2003. - С 168- 170

25. Маркарян A.A. Основные принципы составления и стандартизации комплексных средств растительного происхождения. // МЗ РФ «Проблемы управления здравоохранения». - Москва. - 2003. - №6 (13). Изд. Профтек. - С. 7881.

26. Клиническое изучение биологически активной добавки растительного " происхождения гранул «Фитопрост». / Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаева Г.Г., Аляутдин Р.Н., Николаев С.М., Мантатов В.В., Матыпов Д.Л. // Российский медицинский журнал. - №6. - Москва. - 2003. Изд. Медицина. - С. 42-44.

27. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаева Г.Г., Николаев С.М. Разработка методики количественного определения по сумме флавоноидов в сухом экстракте «Нефрофит». // Тезисы докладов X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2003. - С. 734

28. Маркарян A.A., Даргаева Т Д., Николаева Г.Г., Николаев С.М. Определение показателей качества сухого экстракта, применяемого при патологиях предстательной железы. // Тезисы докладов X Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2003. - С. 631

29. Югдурова Е.Д., Маркарян A.A., Николаева Г.Г., Даргаева Т.Д. Антиоксидантное действие многокомпонентного чая растительного происхождения нефропротекторного действия. // Материалы международной научной конференции. - Сухе-Батор. - 2003. - С. 35-37

30. Югдурова Е.Д., Маркарян A.A., Мондодоев А.Г. Перспективы поиска и разработки биологически активных добавок для больных с патологией органов мочевыделительной системы. // Материалы международной научной конференции. - Сухе-Батор. - 2003. - С. 57-58

31. Жукова О.Л., Маркарян A.A. Исследования по разработке методов контроля качества сухого экстракта, применяемого при патологиях предстательной железы. // Материалы 3 конференции молодых ученых России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». - Москва. - 2004. Изд. ММА им. И.М. Сеченова,- С. 350-351.

32. Маркарян A.A. Сухие экстракты из лекарственного растительного сырья: основные принципы разработки и стандартизации. // Материалы 3 конференции молодых ученых России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». - Москва. - 2004. Изд. ММА им. И.М. Сеченова. - С. 351

33. Захарова С.Б., Балабаньян В.Ю., Маркарян A.A. Теоретическое обоснование компонентного состава растительного сбора, обладающего седативным действием. // Материалы 3 конференции молодых ученых России «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины». - Москва. - 2004. Изд. ММА им. И.М. Сеченова. - С. 357

34. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Мондодоев А.Г. Антиоксидантная активность нового растительного сухого экстракта «Нефрофит». // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - №1. - Т.137. - Москва. - 2004. Изд. РАМН.-С. 39-41

35. Маркарян A.A. Современное состояние стандартизации лекарственного растительного сырья и получаемых из него фитопрепаратов. И Материалы 5-й международной научной конференции «Фитотерапия, биологически активные вещества естественного происхождения». - Черноголовка. - 2004. Изд. ИПХФ РАН. - С. 224-230

36. Маркарян A.A., Аляутдин Р.Н., Мондодоев А.Г. Аминокислотный состав нового комплексного растительного препарата «Нефрофит» и его возможная роль в коррекции сулемовой острой почечной недостаточности у крыс. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - №2. - Т.137. - Москва. -2004. Изд. РАМН. - С. 190-193.

37. Маркарян A.A., Аляутдин Р.Н., Даргаева Т.Д. Экспериментальное исследование антиоксидантных свойств нового сухого экстракта «Нефрофит», полученного на основе лекарственного растительного сырья. // Вестник РАМН. -№4.- Москва. - 2004. Изд. Медицина. - С. 33-35.

38. Исследование сухого экстракта, применяемого при заболеваниях предстательной железы. /Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Николаева Г.Г., Николаев С.М., Мантатов В.В.// Фармация. - №2. - Москва. - 2004. Изд. дом Русский врач. - С. 25-27.

39. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Аляутдин Р.Н., Бурков В.Л. Ускоренная гидрофобная хроматография растительных экстрактов: перспективный инструмент исследования биологически активных полифенолов. // Биомедицинская химия. - Т.50. - №2. -Москва. - 2004. Изд. РАМН.- С. 217- 220

40. Маркарян A.A., Абрамов A.A., Даргаева Т.Д., Сокольская Т.А. Экспериментальное обоснование разработки технологии получения и методов контроля качества сухого экстракта, применяемого при заболеваниях предстательной железы. // Вестник Московского Университета. Сер.2. Химия. -Т.45. - №3. - Москва. - 2004. - С. 208-212

41. Маркарян A.A., Даргаева Т.Д., Сокольская Т.А. Изучение фенольного состава сухого экстракта полученного из растительной смеси «Байкальский-б ». // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- Москва. - 2004. - С. 811

42. Маркарян АЛ., Даргаева Т.Д., Сокольская Т.А. Стандартизация растительного сбора «Байкальский-б» и получаемого из него сухого экстракта. // Тезисы докладов XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва. - 2004. - С. 811 - 812

43. Маркарян A.A. Новый метод выделения и очистки фармакологически активных полифенолов растительного происхождения с использованием гидрофобной хроматографии на фенил-агарозе. // Российский биотерапевтический журнал. - №2. - Т.З. -Москва. - 2004. Изд. Зоомедвет. - С.25

44. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов методом УФ-спекгрофотометрии в чае «Байкальский-б». / Югдурова Е.Д.,

Николаева Г.Г., Нагаслаева Л.А., Николаев С.М., Маркарян A.A. // Сибирский медицинский журнал. - №4. - Иркутск. - 2004. - С. 74-76

45. Маркарян A.A., Сокольская Т.А., Даргаева Т.Д. Стандартизация растительной смеси «Байкапьский-6» и получаемых из нее лекарственных форм. // Сборник научных трудов «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции». Вып.59. - Пятигорск. - 2004. - С. 198 -199

46. Маркарян A.A. Количественное определение суммы фенологликозидов в многокомпонентном растительном чае «Байкапьский-6». // Вестник РУДН. Сер. Медицина. - №1(25). -Москва. - 2004. - С. 27-30

47. Разработка способа получения сухого экстракта «Фитопрост». / Гармаева Е.А., Николаева Г.Г., Мантатов В.В., Даргаева Т.Д., Российская Г.И., Маркарян A.A., Сокольская Т.А. // Материалы научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ. - 2004. - С. 65-67

48. Механизмы антибактериальной активности «фитоуросепта»У Башкуева Ю.Л., Шантанова Л.Н., Мондодоев А.Г., Маркарян A.A., Даргаева Т.Д. // Материалы научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России». - Улан-Удэ. - 2004. - С. 82-84

49. Маркарян A.A. Изучение состава фенолькых соединений растительной композиции «Байкальский-б». // Хим.-фарм. журнал. - 38(11). - Москва. - 2004. -С. 28-29.

50. Средство «Чай Байкапьский-6», обладающее диуретической активностью и способ его получения. / Югдурова Е.Д., Маркарян A.A., Николаева Г.Г., Нагаслаева Л.А., Мондодоев А.Г., Николаев С.М., Даргаева Т.Д. II Патент РФ на изобретение № 2237488,- Москва. - 2004г.

>J

««

9

I

к

t.

V

У ?

Подписано в печать 15.11.2004

Отпенчатано НИЦ БМТ Вилар, бумага офсетная, тираж 100 экз.

A. JL^Ju*' A J %/Wàk.Jf^ifjL

2005-4 47721

f-1 072

Актуальность темы

Заболевания мочеполовой системы занимают одно из ведущих мест в общей структуре болезней. В настоящее время до 90% мужчин старше 60 лет страдают заболеваниями почек, мочевого пузыря и предстательной железы, а также около 70% женщин в возрасте старше 50 лет страдают почечнокаменной болезнью, пиелонефритом, циститом (Ужегов Г.Н., 1999). По данным Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ), воспалительные заболевания мочевых путей у детей занимают второе место после острых респираторных вирусных инфекций (ОРВИ). Около 15% женщин в замужестве, во время беременности и родах страдают воспалительными заболеваниями мочеполовой системы (Корсун В.Ф., Суворов П.П., 1999). Медико-социальная значимость указанных нозологических форм, помимо их широкой распространенности, обусловлена тем, что они являются одной из ведущих причин инвалидизации и смертности (Маждраков,1980; Тареев, 1983). Синтетические препараты, используемые в базисной фармакотерапии и профилактике заболеваний почек, несмотря на их высокую эффективность, оказывают неблагоприятное воздействие на функциональное состояние мочеполовой сферы. Нередко наблюдается развитие лекарственной устойчивости патогенной микрофлоры к используемым средствам, развитие побочных эффектов, среди них наиболее значимой является нефротоксичность антибиотиков.

В настоящее время выбор средств, оказывающих комплексное нефро-протекторное действие, весьма ограничен. Природные вещества растительного происхождения, как правило, отличаются широким спектром терапевтического действия, малой токсичностью и связанной с этим возможностью длительного их применения. Весьма эффективными при терапевтическом и профилактическом использовании являются многокомпонентные растительные препараты и биологически активные добавки к пище (БАД), содержащие биологически активные вещества, относящиеся к разным классам химических соединений и оказывающих комплексное фармакотерапевтическое воздействие на основные звенья патологического процесса. Особенно полезно применение БАД при их превентивном использовании у лиц с ослабленным здоровьем, после перенесенных тяжелых заболеваний и лиц, проживающих в неблагоприятных климатогеографических условиях Сибири и Крайнего Севера. Кроме растительных сборов и чаев, широко используются суммарные сухие экстракты, выгодно отличающиеся рациональностью применения и сохраняющие все преимущества многокомпонентных лекарственных средств: соответствие наличествующих ингредиентов поливалентности патогенеза заболевания, их синергизм в действии, влияние на организм как корригирующей системы. Получение сухих экстрактов — концентратов с применением современных технологических процессов, обеспечивающих максимальное извлечение всех действующих веществ из исходного растительного сырья, доведение их до удобной для употребления формы будет способствовать рациональному, экономичному использованию растительного сырья, позволит осуществить стандартизацию средств как на стадии изготовления, так и на стадии получения конечного продукта, повысит точность дозирования, удобство при хранении и применении.

Таким образом, научное обоснование разработки и стандартизации БАД, профилактическая эффективность которых обусловлена гармоничным сочетанием биологически активных веществ, содержащихся в растениях, и представляющих собой своеобразные корригирующие системы, является актуальной задачей фармацевтической науки и практического здравоохранения.

Целью настоящих исследований является теоретическое и экспериментальное обоснование разработки и стандартизации комплексных профилактических средств, рекомендуемых для использования при заболеваниях мочеполовой системы.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

- разработать новый методический подход к составлению растительных смесей, рекомендуемых для профилактики и лечения заболеваний мочеполовой системы;

- с учетом патогенеза заболеваний урогенитальной системы теоретически и экспериментально обосновать выбор оптимальных составов для разработки биологически активных добавок к пище;

- изучить химический состав растительных смесей, являющихся объектами исследований, а также получаемых на их основе экстрактов, гранул и таблеток;

- установить оптимальные параметры экстракции по выходу биологически активных веществ из сборов, разработать рациональную схему получения сухих экстрактов и готовых форм;

- разработать методики количественного определения по сумме действующих веществ в чае «Байкальский - 6», сухом экстракте и таблетках; в сухих экстрактах и гранулах «нефрофит» и «фитопрост», для проведения их «сквозной» стандартизации;

- разработать нормативную документацию на БАД: рецептуру, технические условия (ТУ) и технологические инструкции (ТИ) для их внедрения.

Научная новизна

Установлены общие закономерности, которые позволили теоретически и экспериментально обосновать новый подход к разработке составов, а также технологию получения биологически активных добавок к пище, рекомендуемых для профилактики заболеваний органов мочеполовой системы, заключающийся во включении в композицию не менее 3 видов лекарственного растительного сырья, с учетом многофакторного механизма развития заболеваний органов урогенитальной сферы и современных принципов регуляции их функций.

С учетом химического состава исходного растительного сырья подобраны оптимальные параметры технологических процессов по получению экстрактов и готовых форм, выявлены закономерности экстрагирования биологически активных веществ.

На основании фармакологических исследований предложены составы для гранул «нефрофит» и «фитопрост», а также для таблеток из чая «Бай-кальский-6».

Качественными реакциями, тонкослойной и высокоэффективной жидкостной хроматографией, УФ-спектрофотометрией подтверждено наличие биологически активных веществ в чае «Байкальский-6» и получаемых из него форм, в экстрактах и гранулах «нефрофит» и «фитопрост».

В связи с доминированием в изучаемых объектах флавоноидов и фено-логликозидов разработана «сквозная» методика их количественной оценки в пересчете на рутин- и арбутин-стандарты методом УФ-спектрофотометрии. Учитывая, что в состав гранул «фитопрост» входят корни солодки, предложена методика, позволяющая контролировать их качество по содержанию глицирризиновой кислоты методом ВЭЖХ.

Приоритет проведенных исследований защищен патентом РФ на изобретение: «Средство «Чай Бакальский-6», обладающее диуретической активностью и способ его получения». Практическая значимость

На основании проведенных исследований получены регистрационные удостоверения в МЗ РФ:

- Биологически активная добавка к пище экстракт почечного чая - РУ № 004724.Р.643.08.2002.

- Биологически активная добавка к пище чай «Байкальский-6» - РУ № 005463.Р.643.06.2003.

- Биологически активная добавка к пище гранулы «Нефрофит» - РУ № 005449.Р.643.07.2003

- Биологически активная добавка к пище гранулы «Фитопрост» СЭЗ № 77.99.20.919.Б.000677.05.04.

Результаты, полученные в ходе работы, использовались при разработке учебных и учебно-методических пособий «Болеутоляющие (анальгезирую-щие) средства», Москва-Улан-Удэ, 2003; «Побочное действие препаратов из лекарственных растений», Улан-Удэ, 2002; «Фитотерапия и фитопрофилак-тика пиелонефрита», Улан-Удэ, 2002.

Связь задач исследования с проблемным планом

Работа выполнена в соответствии с планами научных исследований Иститута общей и экспериментальной биологии СО РАН по программе «Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока», являющейся разделом (6.3) Государственной программы «Сибирь» на период 1996-2005гг. и Всероссийского научно-исследовательского института лекарственных и ароматических растений РАСХН (№ гос. регистрации 01860074455) на основании договора о научно-техническом сотрудничестве на период 1993-2010 гг.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на съездах, конгрессах, научно-практических конференциях (Москва - 2001, 2002, 2003, 2004гг.; Санкт-Петербург - 2001, 2004гг.; Пятигорск - 2004г.; Черноголовка, МО -2002, 2003, 2004гг.).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 50 научных работ: из них 1 монография, 1 патент РФ на изобретение, 45 статей и тезисов, 1 учебное и 2 учебно-методических пособий.

Основные положения, выносимые на защиту:

- данные теоретических, экспериментальных, фармакологических и клинических исследований по обоснованию необходимости разработки составов, технологии получения сухих экстрактов и готовых форм, рекомендуемых для профилактики и лечения заболеваний органов мочеполовой системы;

- результаты исследования химического состава в изучаемых объектах основных групп биологически активных веществ методами УФ-спектрофо-тометрии, ТСХ и ВЭЖХ;

- результаты анализов по установлению характеристик подлинности и определению показателей качества в сырье, экстрактах, гранулах и таблетках.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРИНЦИПЫ И СРЕДСТВА ФАРМАКОТЕРАПИИ И ФАРМАКОПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ МОЧЕПОЛОВОЙ СИСТЕМЫ

Современные условия напряженного психоэмоционального темпа жизни, неблагоприятная экологическая обстановка во многих промышленных регионах [231], чрезмерная химизация сельскохозяйственного производства, нерациональное использование химиотерапевтических средств, неправильное питание [110,157,217], и многие другие факторы приводят к развитию хронических заболеваний, в том числе заболеваний органов мочеполовой сферы [95,109,183]. В последние годы наблюдается значительный рост неф-рологической патологии в общей структуре заболеваний населения [161]. Так, по статистическим данным за 1995 г в России на 100 тысяч человек взрослого населения приходилось 5351,7 больных с заболеваниями почек и мочевыделительной системы, а в 2000 году — 8 794,6 [110]. Социальная значимость нефрологической патологии, помимо их широкой распространенности, определяется тем фактом, что в последние десятилетия отмечается ее значительное омоложение. Проведенные скрининговые исследования в различных регионах России, выявили у детей разных возрастов почти в 20% случаев наличие патологического мочевого синдрома [49,54,209]. В частности, хронические заболевания легких и кишечника в 20-30% таят угрозу инфицирования почек и мочевых путей. У взрослых гипертония в 40-45% бывает связана с заболеваниями почек или почечных сосудов [110,161,183,260]. Заболевания почек, как правило, характеризуются тяжелым течением, частыми рецидивами заболевания, приводящими к длительной потере трудоспособности и инвалидизации [15, 18, 95, 113, 215, 216, 259, 296] .

Помимо широкой распространенности нозологических форм заболеваний почек, поражения их встречаются при многих патологических состояниях. Особую тревогу вызывает тот факт, что в последнее время все чаще встречаются случаи лекарственной нефропатии, возникающие при использовании сильнодействующих средств [8, 15,18, 253, 258]. К числу лекарственных препаратов, оказывающих нефротоксическое действие, относятся антибиотики, нестероидные противовоспалительные препараты, рентгеноконтра-стные вещества, туберкулостатики, цитостатики и др. [266,267,268] .

В этой связи, фармакотерапия и фармакопрофилактика заболеваний почек требует осторожного подхода, поскольку многие применяемые для лечения заболеваний почек препараты вызывают побочные эффекты, в том числе — нефротоксические. С этим обстоятельством связано значительное повышение интереса к использованию растительных препаратов. В России, разрешено к применению около 50 препаратов, созданных на основе растительного сырья, из которых 23 - диуретики; 14 - средства, тормозящие образование мочевых конкрементов и только 4 препарата (леспенефрил, леспеф-лан, канефрон и фларонин) обладают гипоазотемической активностью [71,77, 147,181,210,223,243,264,338,353].

Учитывая широкое распространение заболеваний почек, их прогрессирующее течение, приводящее к развитшо почечной недостаточности, тяжелый медико-социальный прогноз, недостаточное количество нефропротекторных препаратов, актуальной задачей остается разработка и внедрение новых безопасных лекарственных и профилактических средств, предназначенных для лечения и предупреждения заболеваний органов мочеполовой системы.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании данных литературы и проведенного сравнительного анализа дана характеристика уровня стандартизации лекарственных средств, применяемых в профилактике и лечении заболеваний мочеполовой системы.

2. Разработан и предложен методический подход к созданию комплексных профилактических средств и обоснована рациональность составов чая «Байкальский-6» и полученных из него сухого экстракта и таблеток, а также сухих экстрактов и гранул «нефрофш» и «фитопросг».

3. Установлены закономерности влияния технологических факторов (полярность экстрагента, его концентрация и температура, соотношение сырья и экстрагента, время экстракции), на выход экстрактивных и действующих веществ в указанных объектах; разработана и предложена оптимальная схема получения сухих экстрактов для создания лекарственных и профилактических средств данного профиля.

4. На основе сухих экстрактов разработаны: таблетки «Байкальский-6», гранулы «фитопросг» и «нефрофш»; рациональность выбранных рецептур подтверждена фармакологическими и клиническими исследованиями.

5. Исследован качественный состав исходного сырья, сухих экстрактов и готовых форм в сравнительном аспекте методами ТСХ и ВЭЖХ; установлены следующие группы биологически активных веществ: флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, фенологликозиды, тритерпеновые сапонины, свободные и связанные аминокислоты Полученные результаты согласуются с интерпретацией данных фармакологических исследований указанных средств.

6. Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов и суммы фенологликшидов в пересчете на ГСО рутина и PCO арбутина в чае «Байкальский-6», в сухом экстракте и таблетках, полученных на его основе, в сухих экстрактах и гранулах «нефрофш» и «фитопросг» методом УФ-спектрофотометрии, а также глицирризиновой кислоты с помощью ВЭЖХ-анализа в сухом экстракте и гранулах «фитопросг».

7. Разработан состав и способ получения чая «Байкальский-6», защищенный патентом РФ на изобретение.

8. По результатам проведенных исследований в МЗ РФ получены регистрационные удостоверения на экстракт почечного чая, чай «Байкальский-6», гранулы «нефрофит» и санитарно-эпидемиологическое заключение на гранулы «фитопросг».

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Актуальность разработки нового подхода, обоснования создания комплексных, эффективных средств, безопасных при длительном применении с лечебно-профилактической целью при заболеваниях мочеполовой системы обусловлена широкой их распространенностью, тяжестью течения, тенденцией к хронизации процесса, ростом в последние десятилетия показателей инвалидиза-ции и смертности. Из материалов, приведенных в обзоре данных, а также сведениях по частоте регистрации острых форм, обострений хронических заболеваний почек и мочевыводящих путей в различных возрастных группах следует, что продолжается рост показателей, несмотря на используемые усовершенствованные методы лечения, и применения новых химически чистых лекарственных препаратов. Более того, в последние годы наблюдается тенденция к их «омоложению», связанная с загрязнением среды обитания в ряде регионов России, нерациональным применением с малых лет химиотерапевтических и других сильнодействующих лекарственных препаратов. Как известно, мочеполовая система является ответственным за нейтрализацию и экскрецию многих ксенобиотиков, включая лекарственные средства. По данным Гуськовой Т.А. (2003) около 70% используемых в настоящее время лекарственных препаратов могут вызывать почечную недостаточность и другие расстройства мочеполовой системы. Многие из них утяжеляют наличествующий в мочеполовой системе патологический процесс, раздражая паренхиму почек и слизистых оболочек мочевыводящих путей, подавляя сперматогенез в гонадах, нарушая эректильные функции у мужчин. К сожалению, выбор практически безвредных лекарственных препаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний мочеполовой системы, не усугубляющих без того отягощенное состояние функциональной системы уроге-нитальной сферы, весьма ограничен. В настоящее время клиническая практика остро нуждается в профилактических средствах, экранирующих (отводящих) побочные эффекты базисных химиопрепаратов, повышающих резистентность мочеполовой системы к действию агрессивных факторов, крайних по силе и длительности их влияния, на функцию мочеполовой системы.

В этой связи исследования по теоретическому и экспериментальному обоснованию, разработке нового подхода и по созданию комплексных профилактических средств из растительного сырья, безопасных при длительном применении, отвечающих современным требованиям, можно рассматривать как социальный заказ фармацевтической науке и практическому здравоохранению. На основе интеграции полезного ответа народной, традиционной медицины и достижений современной фармацевтической науки разработан новый подход при создании комплексных средств, заключающийся в использовании нескольких видов растительного сырья, биологически активные вещества которых, оказывают корригирующее действие на основные патогенетические звенья, мобилизуя их регулирующий потенциал в направлении выздоровления. Влияя непосредственно на иерархические центры регуляции, оптимизируя механизмы адаптации, наличествующиеся в средствах природные соединения модулируют естественные механизмы выздоровления, сопрягая полезные эффекты и нивелируя негативные реакции. Составленные таким образом комплексные средства можно рассматривать как регулирующие системы, при которых совокупный фармакологический эффект выражается в восстановлении или нормализации гомеостаза, повышении адаптивных механизмов, компенсации функции органов. Этим обстоятельством можно объяснить многовековой опыт применения сложных композиционных препаратов во многих традиционных медицинских системах, который должен быть использован в настоящее время в широком спектре дисциплины по лекарствоведению. В частности, включение во многие составы препаратов традиционной медицины дублирующих элементов предполагает обеспечение надежного, гарантированного эффекта в действии лекарственных препаратов. Использование данного подхода при разработке чая «Байкальский — 6», гранул «нефрофит» и «фитопрост» позволили создать средства, которые выгодно отличаются широтой спектра действия, безопасностью при длительном применении, возможностью стандартизации и удобством в применении. Так, полученные в ходе экспериментов данные подтверждают эти доводы.

В целом, результаты проведенных исследований и данные по внедрению научных разработок в практику свидетельствуют о перспективностагразрабщан^/; ного подхода при составлении и создании комплексных профилактических | средств (биологически активных добавок к пище), выраженной их клинической эффективности при соответствующих расстройствах органов мочеполовой системы, возможности обеспечения гарантированного качества разработанных средств и могут служить основой для развития нового направления в области создания комплексных профилактических средств из природного сырья.

260