Стандартизация сырья и препаратов элеутерококка колючего и лимонника китайского

Степанов, Алексей Сергеевич

Диссертации по фармакологии → Фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация сырья и препаратов элеутерококка колючего и лимонника китайского

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Степанов, Алексей Сергеевич Пермь 2004 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 15.00.02

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Стандартизация сырья и препаратов элеутерококка колючего и лимонника китайского

На правах рукописи

СТЕПАНОВ АЛЕКСЕЙ СЕРГЕЕВИЧ

СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ ЭЛЕУТЕРОКОККА КОЛЮЧЕГО И ЛИМОННИКА КИТАЙСКОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь - 2004

Работа выполнена в Дальневосточном государственном медицинском университете и Вычислительном центре Дальневосточного отделения РАН

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, профессор Т. А. Степанова Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, профессор В.А. Куркин доктор .фармацевтических наук, профессор Ю.А. Хомов

Ведущая организация: Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова

Защита диссертации состоится "22" июня 2004 г. в_часов на заседании Диссертационного совета Д 084.70.01 при Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: 614000, г. Пермь, ул. Ленина, 48

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пермской государственной фармацевтической академии по адресу: г. Пермь, ул. Крупской, 46

Автореферат разослан С£&{1С&С(%''2.004 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 084.70.01 кандидат фармацевтических наук, доцент

Е.В.

Метелева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Несмотря на возросшую мировую популярность таких известных дальневосточных адаптогенов, как элеутерококк колючий и лимонник китайский, за более чем десятилетний период на их основе не было зарегистрировано оригинальных отечественных лекарственных средств. Это и послужило предпосылкой для разработки на кафедре фармакогнозии и ботаники Дальневосточного медицинского университета нового многокомпонентного препарата "Элима". Для производства препарата, кроме сырья элеутерококка и лимонника, используется сырье витаминных растений.

Чрезвычайно важно при оценке подлинности многокомпонентных препаратов подтверждение присутствия действующих веществ, обусловленных каждым из сырьевых компонентов, особенно дорогостоящих видов сырья, таких, как семена лимонника китайского.

Современные требования к стандартизации фитопрепаратов предполагают оценку их качества по содержанию действующих веществ, обеспечивающих фармакологическую активность. Наиболее важным в фармакологическом отношении и относительно нестабильным из биологически активных веществ (БАВ) элеутерококка является элеутерозид В. В связи с этим разработка метода количественного определения элеутерозида В в новом препарате и, соответственно, в сырье элеутерококка представляет научно-практический интерес.

В последние годы за рубежом для анализа фитопрепаратов и растительного сырья все большее значение приобретает метод высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ). В частности, этот метод приводится в американской монографии на плоды лимонника китайского. Метод ВЭТСХ особенно актуален для анализа многокомпонентных фитопрепаратов. '

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА СПтрбург илО ♦ .03 МО¡^жг'лО I

используется в фармации: высушенные плоды в основном не поступают на фармацевтический рынок, а свежие и замороженные применяются как пищевое сырье, преимущественно для получения соков и сиропов. Это связано с отсутствием положительного практического опыта по сушке плодов и научных данных по содержанию БАВ в свежих и замороженных плодах, в соке и сиропе лимонника, обосновывающих возможность их применения в фармации. Следовательно, научное обоснование использования свежего сырья лимонника для производства лекарственных средств и биологически активных добавок к пище (БАД), изучение способов консервирования свежих плодов и разработка методов оценки их качества в определенной степени обеспечивают решение описанной проблемы.

Таким образом, разработка вопросов стандартизации сырья и препаратов элеутерококка и лимонника, в первую очередь оригинального лекарственного средства «Элима», относится к важному направлению фармацевтических исследований.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы - разработка научно-обоснованных методов стандартизации сырья и препаратов лимонника и элеутерококка. В связи с этим были поставлены следующие задачи: определить качественный химический состав препарата "Элима"; разработать метод определения подлинности препарата "Элима"; разработать методики количественного определения элеутерозида В в препарате «Элима», сырье элеутерококка и экстракте элеутерококка жидком; определить содержание БАВ в свежих плодах, соке и настоях лимонника; определить влияние сушки и замораживания плодов лимонника на содержание БАВ;

разработать метод стандартизации свежих плодов и сиропа лимонника; изучить влияние сроков и условий хранения на содержание БАВ в сиропе лимонника.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом. научно-исследовательских работ Дальневосточного государственного медицинского университета и Вычислительного Центра ДВО РАН. Тема диссертации утверждена на заседании научно-плановой комиссии ДВГМУ (прот. № 7 от 12.04.02).

Научная новизна. Изучен качественный состав нового препарата «Элима», установлено содержание основных макро- и микроэлементов, идентифицированы 17 веществ в препарате. Установлено положение экстремальных точек в УФ спектре элимы, разработаны условия хроматографирования и идентификации препарата.

Разработан ВЭТСХ метод количественного определения элеутерозида В в препарате «Элима», сырье и экстракте элеутерококка. Метод ВЭТСХ впервые предложен для стандартизации отечественных фитопрепаратов.

Определено количественное содержание БАВ в свежих плодах, соке и настоях лимонника. Впервые проведена идентификация лигнанов в мякоти и соке лимонника. Исследовано влияние трех способов сушки на содержание БАВ в плодах лимонника.

Научно обоснована возможность использования свежих плодов лимонника в фармацевтической практике. Установлены фармакогностические показатели плодов и рекомендованы нормативы содержания действующих веществ, обеспечивающие рациональное использование свежего сырья лимонника.

Статистически обоснованы спектральные характеристики плодов и сиропа лимонника. Исследовано влияние сроков хранения сиропа на содержание БАВ: количественные изменения БАВ выражены в уравнениях регрессии. Приведенные формулы позволяют рассчитывать срок хранения по исходному содержанию веществ при заданном нормативе и определять содержание БАВ в любой срок хранения.

Практическая значимость. Определенное значение для гарантий эффективности и безопасности многокомпонентного препарата «Элима» имеет

обоснованное сочетание методов, позволяющих надежно идентифицировать препарат и выявлять возможные фальсификации, связанные с невложением или заменой сырьевых компонентов. Полученные стандартные хроматограммы («fingerprint») включены в Объяснительную записку к ФСП на препарат и переданы производителю «Элимы» для проведения серийного контроля препарата.

Определение содержания элеутерозида В посредством ВЭТСХ с УФ денситометрией в элиме, сырье и препаратах элеутерококка при высокой точности анализа позволяет значительно упростить пробоподготовку по сравнению с ВЭЖХ. Разработанный метод предлагается включить в ФС на сырье и экстракт элеутерококка в качестве альтернативы ВЭЖХ.

Обоснован норматив содержания элеутерозида В в экстракте элеутерококка жидком.

Показана возможность использования сушки и замораживания в качестве способов консервирования плодов лимонника. Установлено, что плоды лимонника в замороженном виде могут храниться до урожая следующего года, что обеспечивает круглогодичную переработку сырья. Для получения высушенных плодов рекомендовано использовать конвективную или терморадиационную сушку.

Практическое значение имеет разработка вопросов стандартизации свежих плодов и сиропа лимонника. Определены оптимальные условия хранения и установлен гарантированный срок годности сиропа.

Материалы диссертации включены в нормативные документы и объяснительные записки к ним: ФСП 42-0281122001 на препарат «Элима» и ТУ 9163001-33129878-99 на биологически активную добавку «Сироп лимонника». Методы анализа элимы и сиропа лимонника использованы в работе ОТК предприятий-производителей. Получены акты внедрения.

тета в 1999 и 2000 гг., региональной научно-практической конференции "Клиническая фармакология на Дальнем Востоке" в 2001 году, международной научной конференции «Азиатско-тихоокеанский регион в глобальной политике, экономике и культуре XXI века» (Хабаровск, 2002), межлабораторной конференции Вычислительного центра ДВО РАН (Хабаровск, 2003), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 65-летию Хабаровского края «Природные ресурсы Хабаровского края: проблемы науки и образования» (Хабаровск, 2003), межкафедральной научной конференции (Хабаровск, 2003), заседании Ученого Совета ВЦ ДВО РАН (Хабаровск, 2004).

На защиту выносятся: обоснование методик определения подлинности и количественного содержания элеутерозида В в препарате "Элима", сырье и препаратах элеутерококка; результаты изучения содержания БАВ в свежих и замороженных плодах, соке и настоях лимонника, влияния способов сушки на содержание БАВ; обоснование методов стандартизации плодов и сиропа лимонника, результаты изучения влияния сроков и способов хранения сиропов на содержание действующих веществ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 165 страницах, содержит 52 таблицы, 32 рисунка. Работа состоит из введения, литературного обзора (I гл.), экспериментальной части (П-У гл.), выводов, списка литературы, включающего 141 источник, и приложения.

В литературном обзоре рассматриваются вопросы, касающиеся химического состава сырья лимонника и элеутерококка, методы стандартизации сырья и препаратов этих растений, а также фармакологическое действие индивидуальных веществ. Во второй главе описана разработка метода определения подлинности и количественного определения элеутерозида В в препарате «Элима». В третьей главе приводятся разработанные методики качественного и количественного определения элеутерозида В в сырье элеутерококка, экстракте элеутерококка жидком и биологически активных добавках, содержащих сырье элеутерококка. В четвертой главе приводятся данные качественного и количе-

ственного анализа свежих плодов и сока лимонника, результаты изучения влияния сушки и замораживания на содержание БАВ в плодах лимонника. В пятой главе описана разработка метода стандартизации свежих плодов и сиропа лимонника. В приложении приведены документы на элиму и сироп лимонника, а также акты внедрения материалов диссертации.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ'

Разработка метода стандартизации препарата «Элима»

Элима представляет собой новый многокомпонентный препарат, получаемый из сырья семи видов лекарственных растений: семян лимонника, подземных органов элеутерококка и аралии, листьев крапивы, плодов шиповника, калины и рябины.

Для решения вопросов стандартизации нового фитопрепарата нами в соответствии с современными требованиями было проведено изучение химического состава элимы, в результате которого подтверждено присутствие в препарате фенольных соединений: лигнанов, флавоноидов, дубильных веществ, ан-тоцианов, оксикоричных кислот; тритерпеновых соединений, органических кислот, полисахаридов, хлорофиллов, каротиноидов и минеральных веществ. Хроматографическими методами идентифицировано 17 индивидуальных веществ в препарате, в частности, элеутерозид В, хлорогеновая, кофейная и олеа-ноловая кислоты, рутин, схизандрины и др.

Работа по выбору условий и разработке методов стандартизации элимы проводилась с учетом выявленных в препарате веществ и исходя из основного требования к стандартизации многокомпонентных препаратов - подтверждения сырьевых компонентов препарата. Для определения подлинности элимы было выбрано сочетание традиционных и новых методов качественного анализа. С помощью качественных реакций предложено определять присутствие сапонинов, дубильных и тритерпеновых веществ в препарате. Для качественной оценки препарата был также исследован УФ спектр растворов элимы, в том числе с

добавками. Экспериментально в сочетании с методом математической статистики установлено положение экстремальных точек в УФ спектре элимы: минимум водного раствора препарата обнаруживается при Х=263,8±0,8, коротковолновой максимум - при А=282,7±1,3 нм и длинноволновой максимум или плечо - при Х=315,7±3,4 нм (рис. 1).

Рис. 1 УФ спектр препарата "Элима"

Из современных специфичных методов для качественного анализа элимы был использован метод ВЭТСХ. Работа выполнялась на хроматографе «Camag». Были опробованы два варианта определения подлинности: по веществам-свидетелям (элеутерозид В, рутин) и по стандартной хроматограмме.

Для подтверждения присутствия в препарате элеутерозида В, рутина и схизандринов были выбраны оптимальные условия хроматографирования. Оценка свойств системы сорбат-сорбент проводилась по показателям: подвижность, коэффициент разделения двух соседних компонентов, число теоретических тарелок и высота эквивалентной теоретической тарелки. В качестве примера на рисунке 2 приведены схемы хроматограммы элимы, монопрепаратов элеутерококка и аралии и стандартного образца элеутерозида В в УФ и видимом свете до и после обработки сернокислым реактивом.

Рис. 2 Схема хроматограммы образцов в системе растворителей БУВ (85:5:10) в УФ свете при 254 нм (А) и в видимом свете после Обработки Сернокислым реактивом (В): I - препарат "Элима", II - экстракт элеутерококка жидкий, III - раствор саларала, IV - раствор СОВС элеутерозида В

Таким образом, сочетание методов определения подлинности, включающих качественные реакции, УФ спектр препарата и тонкослойную хроматографию с детектированием хроматограмм в различных условиях позволяет надежно идентифицировать препарат и выявлять возможные фальсификации.

Другим важным вопросом стандартизации нового препарата является разработка методов количественного определения БАВ. Нами проводилось количественное определение элеугерозида В методом ВЭТСХ с денситометрией, позволяющим при высокой точности анализа значительно упростить пробопод-готовку по сравнению с ВЭЖХ. Кроме того, затраты на проведение анализа методом ВЭТСХ ниже, чем ВЭЖХ.

При разработке методики количественного определения элеугерозида В существенным оказалось следующее обстоятельство: спектр пятна стандартного образца элеугерозида В имеет максимум при 265 нм, а спектр соответствующего пятна в треке препарата два максимума - при 265 нм и 310 нм (рис. 3). Как

видно из рисунка, использование предварительной очистки на колонке с алюминия оксидом дало положительный результат: спектр пятна в треке препарата, пропущенного через колонку, соответствует стандарту.

т-1-1-1-г

240 260 280 300 320 340 Х"нм

Рис. 3 Уф Спектры пятен С ЯГ=0,53: 1 - "Элима", 2 - стандартный образец элеутерозида В, 3 - очищенный препарат

Апробация разработанной методики показала ее воспроизводимость и отсутствие систематической ошибки, средняя относительная погрешность определения составляет 1,3%. Метрологическая характеристика методики приведена в таблице 1.

Таблица 1

Метрологическая характеристика методики определения элеутерозида В в препарате «Элима» (Р=0,95)

Статистические параметры п X А х ст

Значения 10 0,0198 0,00027 0,00037 4,2 1,3

На основании анализа опытных серий препарата и статистической обработки данных был установлен норматив содержания элеутерозида В в элиме: он составляет 0,014 - 0,041%.

Методики определения подлинности, нормы содержания основного действующего вещества и методика его количественного определения в препарате включены в ФСП 42-0281122001 Элима. Цветные фотокопии стандартных хроматограмм включены в Объяснительную записку к препарату и переданы производителю элимы для проведения серийного контроля препарата.

Анализ сырья элеутерококка и экстракта элеутерококка жидкого с использованием метода ВЭТСХ

В соответствии с принципами сквозной стандартизации и в связи с тем, что метод ВЭТСХ хорошо зарекомендовал себя в анализе наиболее «проблематичных» многокомпонентных препаратов, к каким относится элима, была исследована возможность его применения для анализа сырья элеутерококка, а также препаратов, содержащих этот известный сырьевой источник. В качестве объектов исследования, помимо сырья и экстракта элеутерококка жидкого, были выбраны биологически активные добавки (БАДы) — таблетки "Элевита" и драже "Элеутерококк", а также оригинальный многокомпонентный фитопрепарат, разработанный Владивостокской фармацевтической фабрикой.

Для определения подлинности вышеназванных объектов использована методика подтверждения присутствия элеутерозида В в элиме.

При разработке методики количественного определения элеутерозида В в сырье элеутерококка в качестве базовой использовалась методика, приведенная в Изменении № 1 к ФС 42-2725-90 на сырье элеутерококка. Результаты проведенных исследований по оптимизации пробоподготовки представлены в таблице 2.

Таблица 2

Влияние параметров методики на определение элеутерозида В в сырье элеутерококка

Условия экстрагирования Содержание элеутерозида В в % при соотношении сырье-экстрагент

1:50 1:100

120 мин 0,061 0,063

60 мин 0,057 0,059

30 мин 0,059 0,057

3-х кратная -экстракция по 30 мин 0,064 -

Сравнение данных по критериям Стьюдента и Фишера (Р=0,95) показало отсутствие значимого влияния выбранных параметров методики на результаты анализа ^^ < Fкp. и tкр). В связи с этим время экстрагирования было сокращено с 2 часов до 30 минут. Также, помимо оптимизации пробоподготов-ки, при разработке методик определения содержания элеутерозида В в объектах, содержащих элеутерококк, устанавливалось соответствие спектральных характеристик пятна в треке каждого объекта спектральным характеристикам пятна элеутерозида В в треке раствора стандартного образца, после чего решался вопрос о целесообразности очистки на хроматографической колонке.

Методики количественного определения элеутерозида В, предложенные для анализа сырья элеутерококка, экстракта жидкого и оригинального разрабатываемого препарата имеют погрешность, не превышающую 5%.

Применительно к БАДам заключительная денситометрия не проводилась, однако качество хроматографического разделения свидетельствует о том, что разработанная хроматографическая методика в разных модификациях - с дополнительной очисткой или без очистки - применима в анализе различных. лекарственных средств и БАДов, содержащих элеутерококк. Это значит, что

методика ВЭТСХ определения элеутерозида В может рассматриваться как универсальная при стандартизации сырья и препаратов элеутерококка. Метод ВЭТСХ предлагается включить в качестве альтернативного ВЭЖХ в НД на корневища и корни элеутерококка и экстракт элеутерококка жидкий, что дает возможность при серийном контроле выбирать метод анализа в зависимости от оснащения соответствующих лабораторий.

Разработанные методики использованы для оценки содержания эле-утерозида В в сырье и препаратах элеутерококка. Количественное содержание элеутерозида В в корневищах и корнях элеутерококка колебалось от 0,039 до 0,063%. Экспериментально и расчетно полученный нижний показатель содержания действующего вещества соответствует нормативу, установленному в ФС 42-2725-90. Среднее содержание элеутерозида В в экстракте составляет 0,042 ± 0,005%. Экспериментально и математически обоснован норматив содержания элеутерозида В в экстракте элеутерококка - 0,027-0,057%. Содержание элеуте-розида В в оригинальном препарате Владивостокской фармацевтической фабрики составило 0,017%.

Изучение содержания БАВ в свежих, высушенных и замороженных плодах лимонника, в настоях и соке из плодов

Качественный анализ подтвердил присутствие в свежих плодах и соке лимонника органических кислот, полисахаридов, фенольных соединений, анто-цианов. Из индивидуальных соединений хроматографически идентифицированы лимонная, яблочная, янтарная, щавелевая, винная и сорбиновая кислоты, лютеолин-7- глюкозид. Два последних вещества идентифицированы в плодах лимонника впервые.

Методом ВЭТСХ в системе растворителей толуол: этилацетат: ледяная уксусная кислота (70:33:3) проведено исследование мякоти и сока плодов на содержание в них лигнанов. Установлено, что схизандрины А и В, содержащиеся в семенах и плодах, обнаруживаются в мякоти и соке в следовых количествах. Схизандролы А и В, хотя и идентифицируются во всех четырех образцах

сырья, но количество их в мякоти и соке соответственно в 3 и в 10 раз меньше, чем в семенах (табл. 3).

Таблица 3

Относительное содержание лигнанов в семемах, плодах, мякоти и соке лимонника*

Количественное определение проводилось для четырех основных групп БАВ плодов, содержащихся преимущественно в мякоти. По результатам анализа 12 партий свежих плодов лимонника установлено, что среднее содержание окисляемых веществ составляет 1,22%, фенольных - 0,34%, полисахаридов -3,6%, антоцианов - 0,10%, органических кислот - 26,4% (табл. 4). Среднее содержание окисляемых и фенольных веществ, антоцианов и органических кислот в соке соответственно составляет 0,2%; 0,055%; 0,013%; 6,2%. Все перечисленные группы БАВ содержатся в плодах и соке лимонника в терапевтически значимых количествах.

На следующем этапе исследовалось влияние разных способов сушки — конвективной и инфракрасной, а также замораживания на содержание БАВ в плодах лимонника. Эксперимент проводился на образцах соответственно четырех и пяти партий сырья.

Таблица 4

Результаты статистической обработки данных содержания БАВ в свежих плодах лимонника (разных лет сбора)

Статистические параметры (Р=0,95) группы БАВ

окисляемые вещества фзЮПЫ&Е соединения полисахариды анпинаны органические кислоты

п 12 12 7 12 12

х,% 1,22 0,34 3,6 0,098 26,4

Д х 0,089 0,054 0,34 0,014 2,88

Б2 0,019 0,007 1,57 0,0004 20,46

V 11,4 25,3 34,7 22,4 17,1

Установлено, что сушка в целом влияет на количество БАВ в плодах лимонника: показатель содержания окисляемых веществ, антоцианов и органических кислот снижается при искусственной сушке от 5 до 19%, показатель суммы фенолов возрастает на 12 - 14% (рис. 4). Выбор способа сушки - конвективная или инфракрасная - не оказывает достоверного влияния на содержание основных БАВ в высушенных плодах. Естественная сушка в условиях промышленных заготовок практически не применима: ее продолжительность составляет около 2,5 месяцев.

Замораживание является также приемлемым способом сохранения действующих веществ в плодах лимонника. Как видно из диаграммы, относительное снижение БАВ при замораживании происходит на 6 - 20% (рис. 4).

Сравнение результатов анализа свежих, высушенных и замороженных плодов показывает, что изменения в содержании БАВ при обоих способах консервирования плодов во-первых, находятся на одном уровне; во-вторых, происходят в направлении снижения количества БАВ, за исключением изменения содержания фенольных соединений в процессе сушки. В-третьих, эти измене-

ния находятся в пределах колебаний содержания БАВ в отдельных партиях свежих плодов.

Рис. 4 Относительное изменение содержания БАВ в плодах

лимонника при разных способах сушки и замораживании

Исследования по хранению замороженных плодов показали; что плоды лимонника в замороженном виде могут храниться до урожая следующего года, при этом содержание БАВ в плодах, хранившихся в морозильной камере 12 месяцев, соответствует количеству БАВ в тех же партиях высушенных плодов. Снижение в содержании основных веществ через год хранения в замороженном виде происходит на 11 -25% относительно содержания в свежих плодах.

В связи с тем, что высушенные плоды используются для приготовления настоев, а свежие и замороженные для получения сока, было проведено сравнительное изучение выхода БАВ в настои и сок.

При исследовании настоев из плодов лимонника установлено, что выход БАВ в водные извлечения не зависит от способа сушки сырья. Содержание БАВ в настоях, приготовленных из измельченных плодов, в 2 - 4 раза выше, чем из цельных.

Результаты сравнительного исследования настоев и сока лимонника представлены на диаграммах 5 и 6. Количество окисляемых и фенольных веществ, антоцианов и органических кислот в равных объемах сока и настоя различаются примерно в два раза в пользу сока (рис. 5). При этом показатели абсолютного выхода БАВ в настои и соки из 100 г свежих плодов очень близки (рис. 6).

Рис. 5 Сравнительное содержание БАВ в 100 мл настоя и сока, г.

Рис. 6 Абсолютный выход БАВ из 100 г свежих плодов, г.

Относительный выход в настой и сок составляет от 11 до 17% для основных групп БАВ.

Таким образом, свежие, замороженные, высушенные плоды лимонника, а также получаемый при переработке сок лимонника являются перспективным сырьем для производства лекарственных средств и БАДов.

Разработка вопросов стандартизации -свежих плодов и сиропа лимонника

Необходимым условием введения в практику новой продукции - разработанного в ДВГМУ сиропа лимонника - является решение вопросов стандартизации препарата и сырья. Для этого необходимо обосновать метод стандартизации и нормы качества сиропа и свежих плодов лимонника.

В ходе проведенного исследования свежего сырья были установлены фармакогностические характеристики, которые могут быть включены в НД на свежие плоды лимонника в качестве числовых показателей: изменивших окраску и пораженных плодов - не более 7%, давленых плодов - не более 7%, остатков цветоложа и плодоножек, в том числе отделенных при анализе - не более 10%, органической примеси - не более 0,5%, минеральной примеси - не более 0,5%, золы общей - не более 5%, золы, нерастворимой в 10 % растворе кислоты хлористоводородной - не более 1,5%, влаги - не менее 76% и не более 88%.

Для установления подлинности, кроме определения внешних признаков и микроскопии, нами предложена качественная реакция с натрия гидроксидом и УФ спектр. Для оценки качества свежих плодов лимонника по содержанию органических кислот была предложена методика потенциометрического определения, установлены ее метрологические характеристики - относительная погрешность определения отдельной варианты не превышает 2,2%. Рекомендуемый для включения в НД нижний предел содержания действующих веществ -13%.

Было установлено, что для определения подлинности сиропа лимонника целесообразно также использовать спектрофотометрию. При подтверждении • подлинности сиропа лимонника в УФ спектре должны обнаруживаться два экстремума: максимум в интервале 274-286 нм и минимум - 247 - 268 нм. По ана-

логии со свежими плодами лимонника, для определения подлинности сиропа лимонника также предложена качественная реакция с натрия гидроксидом, а для количественной оценки применялась методика потенциометрического определения суммы органических кислот. Апробация разработанной методики показала ее воспроизводимость, средняя относительная погрешность определения составляет 3,5%. Установленный норматив содержания суммы органических кислот - не менее 1,9%.

Для оценки изменений в содержании БАВ, происходящих при хранении сиропа лимонника в разных условиях, нами были получены экспериментальные данные и соответствующие уравнения регрессии, на основании которых установлены гарантированный срок годности сиропа - 18 месяцев с момента изготовления, и условия хранения - в прохладном, защищенном от света месте. Для рационализации работы аналитика выведена формула расчета минимального срока хранения по заданному содержанию органических кислот в сиропе

,где

0,053

а - исходное содержание органических кислот в сиропе, %. Полученные результаты послужили обоснованием разделов "методы испытаний" и "хранение" в ТУ 9163-001-33129878-99 "Сироп лимонника".

Также нами был проведен сравнительный анализ образцов сиропа, представленных на региональном рынке, показаны преимущества сиропа, разработанного в ДВГМУ, по содержанию БАВ и органолептическим характеристикам. В ходе этих исследований показана универсальность предложенных методик для анализа сиропов лимонника различных производителей.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Определен качественный химический состав нового препарата «Эли-ма»: показано присутствие лигнанов, флавоноидов, антоцианов, окси-коричных кислот, тритерпеновых соединений, минеральных веществ и

др. Хроматографически идентифицировано 17 индивидуальных соединений.

2. Разработан метод определения подлинности препарата «Элима», включающий идентификацию с помощью ВЭТСХ, УФ спектра и качественных реакций.

3. Разработан метод количественного определения элеутерозида В посредством ВЭТСХ с УФ денситометрией и обоснован норматив его содержания в препарате «Элима» - 0,014 - 0,041%.

4. Разработаны ВЭТСХ методики качественного и количественного определения элеутерозида В в сырье элеутерококка и экстракте элеутерококка жидком. Показана универсальность ВЭТСХ для анализа препаратов элеутерококка. Обоснован норматив содержания элеутерозида В в экстракте элеутерококка жидком - 0,027 - 0,057%.

5. Проведен качественный и количественный анализ БАВ в свежих плодах и соке лимонника. Хроматографически идентифицированы 7 соединений. Впервые установлено присутствие лигнанов в соке и мякоти лимонника, при этом количество схизандролов А и В в мякоти и соке соответственно в 3 и 10 раз меньше, чем в семенах, а схизандрины А и В содержатся в следовых количествах. Определены коэффициенты вариации и среднее содержание окисляемых и фенольных веществ, анто-цианов и органических кислот в свежих плодах и соке.

6. Установлено влияние сушки и замораживания на содержание БАВ в плодах лимонника. Относительные количественные изменения в комплексе БАВ составляют от 5 до 20%. Установлено, что количественные изменения БАВ при хранении замороженных плодов в течение 12 месяцев находятся в пределах колебаний содержания БАВ в отдельных партиях плодов лимонника.

7. Показано, что содержание основных групп БАВ в равных объемах сока и настоя различается в два раза в пользу сока. Установлено, что показа-

тели абсолютного и относительного выхода БАВ в настои и сок практически не различаются. Относительный выход составляет от 11 до 17% для разных групп БАВ. 8 , Разработан метод стандартизации свежих плодов лимонника: установлены фармакогностические характеристики плодов, обоснованы методики определения подлинности и количественного содержания органических кислот и рекомендованы нормативы содержания допустимых , примесей, влаги, золы, действующих веществ.

9. Разработан метод стандартизации сиропа лимонника: обоснованы методики определения подлинности и количественного содержания органических кислот, срок годности и условия хранения сиропа. Норматив содержания действующих веществ, включенный в ТУ, составляет 1,9%, гарантированный срок хранения - 18 месяцев.

10. Разработанные методики и нормативы включены в ФСП 420281122001 «Элима» и в ТУ 9163-001-33129878-99 «Сироп лимонника», а их обоснование в соответствующие Объяснительные записки к НД.

Основные результаты исследования отражены в опубликованных работах:

1. Степанов А.С. Определение подлинности соков и сиропов калины и лимонника // Актуальные проблемы фармацевтической науки и образования: итоги и перспективы: Материалы конф.- Пермь: ПГФА, 2000.- с. 193-194

2. Степанов А. С. Влияние условий сушки на содержание биологически активных веществ в плодах лимонника китайского // Научно-практическая конференция "Клиническая фармакология на Дальнем Востоке", Хабаровск, 29-30 мая 2001 г: Тез. докл - Хабаровск, 2001.- с. 199-200.

3. Степанов ОБ, Степанов А С. О возможности использования замороженных плодов калины и лимонника в фармацевтической практике // Научно-практическая конференция "Клиническая фармакология на Дальнем Востоке", Хабаровск, 29-30 мая 2001 г: Тез. докл.- Хабаровск, 2001.- с. 201-202.

практическая конференция "Клиническая фармакология на Дальнем Востоке", Хабаровск, 29-30 мая 2001 г: Тез. докл.- Хабаровск, 2001.- с. 201-202.

4. Степанов А. С. Перспективы использования хроматографического метода в анализе сырья и препаратов лимонника // Межд. научн. конф. "Азиатско-тихоокеанский регион в глобальной политике, экономике и культуре XXI века", Хабаровск, 22-23 октября 2002 г: Материалы конф.- Хабаровск, 2002.-Т. IV.- с. 146-149.

5. Степанова Т.А, Степанов СВ., Стусенко О.В., Степанов А.С, Матющенко Н.В., Цимбалист Н. А. Новые фитопрепараты из растений Дальнего Востока // Межд. научн. конф. "Азиатско-тихоокеанский регион в глобальной политике, экономике и культуре XXI века", Хабаровск, 22-23 октября 2002 г: Материалы конф.- Хабаровск, 2002.- Т. IV.- с. 96-101.

6. Степанов А.С, Степанова Т. А. Определение подлинности препарата "Эли-ма"//Фармация.-2003.-№ 1.-е. 10-13.

7. Степанов А.С. Количественное определение элеутерозида В в препарате "Элима" методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии // Хим.-фармацевт. журн.-2003.- Т. 37, № 4.- с. 54-56.

8. Степанов А.С Количественная оценка элеутерозида В в сырье и препаратах элеутерококка колючего методом ВЭТСХ // 60-я юбилейная итоговая научная конференция "Актуальные вопросы современной медицины", Хабаровск, апрель 2003 г: Материалы.-Хабаровск: ДВГМУ, 2*003.- с. 130-131.

9. Степанов А.С. Сравнительное изучение выхода биологически активных веществ плодов лимонника в настои и сок // Всеросс. научн.-практ. конф., посвященная 65-летию Хабаровского края "Природные ресурсы Хабаровского края: проблемы науки и образования". Хабаровск, 11-12 ноября 2003 г: Тез. докл.- Хабаровск, 2003.- с. 116-117.

№10 6 95

Лицензия ПД № 15 - 0054 от 28.12.2001 г Подписано к печати 13 апреля 2004 г. Печать офсетная, формат 60x84/16, усл. п л. 1,1 Тноаж100 экз. Заказ 762_

Офсетно-ротаприитный цех ИВЭП ДВО РАН 680000 г. Хабаровск, ул. Ким Ю Чена, 65

Оглавление диссертации Степанов, Алексей Сергеевич :: 2004 :: Пермь

Введение.

Глава I. Химический состав, биологическая активность и методы стандартизации сырья и препаратов элеутерококка и лимонника (литературный обзор).

1.1 Химический состав корневищ и корней элеутерококка колючего.

1.2 Химический состав плодов и семян лимонника китайского.

1.3 Стандартизация сырья и препаратов элеутерококка.

1.4 Стандартизация сырья и препаратов лимонника.

1.5 Фармакологическая активность действующих веществ элеутерококка колючего.

1.6 Фармакологическая активность действующих веществ лимонника китайского.

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Степанов, Алексей Сергеевич, автореферат

В последние годы за рубежом для анализа фитопрепаратов и растительного сырья все большее значение приобретает метод ВЭТСХ. В частности, этот метод приводится в американской монографии на плоды лимонника китайского. Метод ВЭТСХ особенно актуален для анализа многокомпонентных фитопрепаратов.

Не менее важным для отечественной фармации является вопрос использования плодов лимонника. Несмотря на тот общеизвестный факт, что лимонник представляет собой ценное лекарственное растение, он недостаточно используется в фармации: высушенные плоды в основном не поступают на фармацевтический рынок, а свежие и замороженные применяются как пищевое сырье, преимущественно для получения соков и сиропов. Это связано с отсутствием положительного практического опыта по сушке плодов и научных данных по содержанию БАВ в свежих и замороженных плодах, в соке и сиропе лимонника, обосновывающих возможность их применения в фармации. Следовательно, научное обоснование использования свежего сырья лимонника для производства лекарственных средств и биологически активных добавок, изучение способов консервирования свежих плодов и разработка методов оценки их качества в определенной степени обеспечивают решение описанной проблемы.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы явилась разработка научно-обоснованных методов стандартизации сырья и препаратов лимонника и элеутерококка. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

- определить качественный химический состав препарата "Элима";

- разработать метод определения подлинности препарата "Элима";

- разработать методику количественного определения элеутерозида В в препарате «Элима», сырье элеутерококка и экстракте элеутерококка жидком;

- определить содержание БАВ в свежих плодах, соке и настоях лимонника;

- определить влияние сушки и замораживания плодов лимонника на содержание БАВ;

- разработать метод стандартизации свежих плодов и сиропа лимонника;

- изучить влияние сроков и условий хранения на содержание БАВ в сиропе лимонника.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Дальневосточного государственного медицинского университета и Вычислительного Центра ДВО РАН. Тема утверждена на заседании научно-плановой комиссии ДВГМУ (прот. № 7 от 12.04.02).

Методы анализа элимы и сиропа лимонника использованы в работе ОТК предприятий-производителей. Получены акты внедрения.

Публикации и апробация работы. По материалам диссертации опубликовано 9 работ. Основные результаты доложены на научных конференциях молодых ученых Дальневосточного государственного медицинского университета в 1999 и 2000 гг., региональной научно-практической конференции "Клиническая фармакология на Дальнем Востоке" в 2001 году, международной научной конференции «Азиатско-тихоокеанский регион в глобальной политике, экономике и культуре XXI века» (Хабаровск, 2002), межлабораторной конференции Вычислительного центра ДВО РАН (Хабаровск, 2003), Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 65-летию Хабаровского края «Природные ресурсы Хабаровского края: проблемы науки и образования» (Хабаровск, 2003), межкафедральной научной конференции (Хабаровск, 2003), заседании Ученого Совета ВЦ ДВО РАН (Хабаровск, 2004).

Заключение диссертационного исследования на тему "Стандартизация сырья и препаратов элеутерококка колючего и лимонника китайского"

Общие выводы

1. Определен качественный химический состав нового препарата «Элима»: показано присутствие лигнанов, флавоноидов, антоцианов, оксикоричных кислот, тритерпеновых соединений, минеральных веществ и др. Хроматографически идентифицировано 17 индивидуальных соединений.

5. Проведен качественный и количественный анализ БАВ в свежих плодах и соке лимонника. Хроматографически идентифицированы 7 соединений. Впервые установлено присутствие лигнанов в соке и мякоти лимонника, при этом количество схизандролов А и В в мякоти и соке соответственно в 3 и 10 раз меньше, чем в семенах, а схизандрины А и В содержатся в следовых количествах. Определены коэффициенты вариации и среднее содержание окисляемых и фенольных веществ, антоцианов и органических кислот в свежих плодах и соке.

7. Показано, что содержание основных групп БАВ в равных объемах сока и настоя различается в два раза в пользу сока. Установлено, что показатели абсолютного и относительного выхода БАВ в настои и сок практически не различаются. Относительный выход составляет от 11 до 17% для разных групп БАВ.

8. Разработан метод стандартизации свежих плодов лимонника: установлены фармакогностические характеристики плодов, обоснованы методики определения подлинности и количественного содержания органических кислот и рекомендованы нормативы содержания допустимых примесей, влаги, золы, действующих веществ.

10. Разработанные методики и нормативы включены в ФСП 42-0281122001 «Элима» и в ТУ 9163-001-33129878-99 «Сироп лимонника», а их обоснование в соответствующие Объяснительные записки к НД.

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2004 года, Степанов, Алексей Сергеевич

1. Агеенко, A.C. Лимонник и его лечебное применение. / A.C. Агеенко, Б. Т. Комиссаренко. - Ю-Сахалинск, 1960. - 36 с.

2. Барабой, В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. / В.А. Бара-бой. М.: Наука, 1984. - 160 с.

3. Баранов, A.JI. Медицинское использование женьшеня и близких видов: последние исследования в Советской литературе // Журнал этно-фармакологии.- 1982.- № 6.- С. 339-353.

4. Бенькович, Е.И. Изменение полифенольного состава виноградных вин при хранении. / Е. И. Бенькович, Н.Д. Манджгаладзе. // Хранение и переработка сельхозсырья. 1996.- №1. - С. 53.

5. Биохимия фенольных соединений. / Под ред. Д. Харборна. М.: Мир, 1968.-451 с.

6. Бранке, Ю.В. Химизм диких плодов и ягод Дальневосточного края. Химический состав и использование. / Ю.В. Бранке. Владивосток: Изд-во Дальневост. фил. АН СССР, 1935.-71 с.

7. Брехман, И.И. Материалы к изучению стимулирующих и тонизирующих средств — корня женьшеня и лимонника. / И.И. Брехман. Владивосток, 1951.- Вып. 1.- 92 с.

8. Брехман, И.И. Женьшень и элеутерококк источники лекарственных средств нового типа. / И.И. Брехман, О.И. Кириллов. // Раст. Ресурсы.-1968.-№4.- С. 3-13.

9. Влияние методов сушки и длительности провяливания на содержание флавоноидов в соцветиях пижмы. / K.JI. Стуккей, Г.М. Терентиенко, М.Д. Тихонова и др.// Хим.-фармацевт. журн 1981- № 10 - С. 64-68.

10. Влияние режимов замораживания на качество плодов нектарина. / В.И. Иванченко, Э.Л. Дженева, Е.Л. Боленко и др. //.Пищевая промышленность. 1993. - № 8.- С. 8-9.

11. Влияние способов настаивания на качество водных извлечений. / И.Д. Титова, И.М. Безрученко, A.A. Сорокина и др. // Фармация.- 1993 — Т. 42, № 1.-С. 35-37.

12. Влияние температуры сушки на содержание и состав алкалоидов чистотела. / Г.Н. Бузук, A.A. Булатов, М.Я. Ловкова и др. // Фармация.-1991. Т. 40, №2.-С. 15-16.

13. Ворошилов, А.И. Влияние режимов сушки листьев нарцисса на содержание в них галантамина. / А.И. Ворошилов, Б.А. Кривут, O.A. Черкасов. // Хим.- фармацевт. журн.-1987.- № 6.- С. 706-708.

14. ВФС 42-1961-90 Сбор «Элекасол».

15. ВФС 42-2090-92 Экстракт элеутерококка сухой.

16. ВФС 42-2406-94 Эликсир «Демидовский».

17. ВФС 42-2868-97 Сбор «Гепафит».

18. ВФС 42-3471-99 Плоды калины свежие.

19. ВФС 42-3472-99 Сироп калины.

20. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. / Е.А. Краснов, Т.П. Березовская, Н.В. Алексеюк и др.- Томск: Изд-во Томского университета, 1987.- 184 с.

21. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений. / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е Дмитрук. — Новосибирск: Наука, Сиб. Отделение, 1990. 333 с.

22. Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии (планарная хроматография). / Ф. Гейсс. Москва, 1999.- Т. I.- 406 с.

23. Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии (планарная хроматография). / Ф. Гейсс. Москва, 1999.- Т. II.- 348 с.

24. Гликозиды Eleutherococcus senticosus Мах. I. Выделение и некоторые свойства элеутерозидов В и Е / Ю.С. Оводов, Р.Г. Оводова, Т.Ф. Соловьева и др. // Химия природных соединений.- 1965.- №1.- С. 3-7.

25. Гмурман, В.Е. Теория вероятностей и математическая статистика. / В.Е. Гмурман М.: Высшая школа, 1977 - 479 с.

26. Государственная Фармакопея СССР 10-е изд.-М.: Медицина, 1968 -1080 с.

27. Государственная Фармакопея СССР.- 11-е изд.- М.: Медицина, 1987.-Вып. 1.-333 с.

28. Государственная Фармакопея СССР— 11-е изд.- М.: Медицина, 1990.-Вып. 2,- 400 с.

29. Государственный Реестр лекарственных средств.—М.: 2000.- 1204 с.

30. Гринкевич, Н.И. Химический анализ лекарственных растений. / Н.И. Гринкевич, JI.H. Сафронич. М.: Высшая школа, 1983.- 176 с.

31. Захаренков, A.C. Недревесные лесные продукты юга ДВ: основы оптимизации управления и использования: Автореф. дисс. . канд. сель-хоз. наук. / А. С. Захаренков.- Уссурийск, 2003.- 26 с.

32. Зориков, П.С. Биологическая активность экстрактов из дальневосточных и интродуцированных растений: Автореф. дисс. . докт. биол. наук. / П.С. Зориков.- Владивосток, 1999.- 40 с.

33. Ибрагимов, Ф.И. Основные лекарственные средства китайской медицины. / Ф.И. Ибрагимов, B.C. Ибрагимова.- М.: Государственное изд-во медицинской литературы, I960.- С.235-237.

34. Измоденов, А.Г. Естественные ягодники Хабаровского края. / А.Г. Измоденов. Хабаровск, 1967. - 63 с.

35. Исследование фармакокинетики и механизма действия гликозидов элеутерококка. / Г.М. Баренбойм, А.Г. Стерлина, Н.В. Бебякова и др. // Хим.-фарм. журн.- 1986.- Т. 20, № 8.- С. 914-920.

36. К механизму действия адаптогенов. / В.Н. Федоров, Н.И. Смирнова, Т.Б. Федорова и др. // 2-й Всерос. нац. конгр. "Человек и лекарство": Тез. докл.- М., 1995.- С. 246.

37. Киселева, T.JI. Разработка методологических подходов к созданию лекарственных средств природного происхождения на основе опыта традиционной медицины России: Автореферат дисс. .докт. фарм. наук. / Т.Л. Киселева. СПБ, 2000.- 44 с.

38. Ковалева, Н.Г. Лечение растениями (очерки по фитотерапии). / Н.Г. Ковалева М.: Медицина, 1971 - 352 с.

39. Колбасина, Э.И. Перспективы использования лимонника Schisandra chinensis в качестве пищевого и лекарственного сырья. / Э.И. Колбасина. // Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения.- 2001.-№5.- С. 18

40. Количественный анализ хроматографическими методами. / Под ред. Э. Кэц. Москва: Мир, 1990.- 298 с.

41. Коржикова, Е.Б. Высокоэффективная тонкослойная хроматография в фармацевтическом анализе. / Е.Б Коржикова. // Фармация. -1986. -№4.- С. 74-77.

42. Кочетков, Н.К. Химическое исследование китайского лимонника. / Н.К Кочетков, А.Я. Хорлин, О.С. Чижов. // Журнал общей химиии.-1960.- T. XXXI, вып. 10. С. 3454-3460.

43. Кротова, И.В. Исследование химического состава плодов лимонника китайского. / И.В. Кротова, A.A. Ефремов. // Химия растительного сырья.- 1999.-№4.- С. 131-133.

44. Купчак, Т.В. Количественное определение антоцианов в надземной части гибридной формы Zea mays L. / T.B. Купчак, JI.А. Николаева, Л.Л. Шимолина. // Раст. ресурсы 1995.- Т. 31, вып. 3,- С. 105-111.

45. Куркин, В.А. Фенилпропаноиды перспективные природные биологически активные соединения. / В.А. Куркин. - Самара: СамГМУ,-1996. - 80 с.

46. Куркин, В.А. Фенольные соединения Eleutherococcus senticosus. / В.А. Куркин, Р.И. Евстратова, Г.Г. Запесочная. // Химия природных соединений.- 1991. №6.- С. 854-856.

47. Лапаев, И.И. Лимонник и его лечебные свойства. / И.И. Лапаев. Хабаровск, 1978.- 28 с.

48. Лапчик, В.Ф. О локализации элеутерозидов в тканях стебля и корня элеутерококка колючего. / В.Ф. Лапчик, Ю.С. Оводов. // Растительные ресурсы.- 1970.- Т. 6.- Вып. 2.- С. 228-229.

49. Лапчик, В.Ф. Количественное определение гликозидов элеутерококка колючего. / В.Ф. Лапчик, Ю.С. Оводов. // Растительные ресурсы. 1960.- Т. 5.-Вып. 3.- С. 455-457.

50. Матющенко, Н.В. Количественное определение суммы флавоноидов в новом фитопрепарате "Элима". / Н.В. Матющенко, Т.А. Степанова. // Хим.-фарм. журн. 2003.- Т. 37.- № 5. - С. 42-44.

51. Международная фармакопея. Общие методы анализа. Всемирная организация здравоохранения.- 3-е изд.- Женева, 1981.- Т. 1.- 242 с.

52. Международная фармакопея. Спецификация для контроля качества фармацевтических препаратов. Всемирная организация здравоохранения.- 3-е изд.- Женева, 1981.- Т. 3.- 436 с.

53. Микаэлян, Е.М. Антиоксидантные возможности элеутерококка. / Е.М. Микаэлян, В.Г. Мхитарян. // Биологический журнал Армении.- 1986.- № 3,- С. 593-597.

54. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация. / Под ред. проф. B.JL Багировой, проф. В.А. Северцева. СПБ.: спецлит, 2001. - 223 с.

55. Орлова, Н. Я. Консистенция и влагоудерживающая способность замороженных плодов. / Н.Я. Орлова. // Пищевая промышленность.— 1992.-№ 1.-С. 24-25.

56. Пастушенков, J1.B. Растения-антиоксиданты (фитотерапия). / JI.B. Пас-тушенков, Е.Е. Лесиовская. СПб.: Химико-фармацевтический ин-т, 1991.-96 с.

57. Почему растения лечат. / М.Я. Ловкова, A.M. Рабинович, С.М. Пономарев и др.- М.: Наука, 1990.- 256 с.

58. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование: Семейства Magnoliaceae — Limoniaceae — Л.: Наука, 1984.-460 с.

59. Растительные ресурсы СССР. Цветковые растения, их химический состав, использование: Семейства Rutaceae — Elaegnaceae.- Л.: Наука, 1988.- 357 с.

60. Растительные ресурсы России и сопредельных государств: часть И. Дополнение к 1 7-му томам.- СПБ: Мир и семья, 1996 — 571 с.

61. Самойленко, Л.И. Содержание лигнанов в лимоннике китайском. / Л.И. Самойленко, Н.И. Супрунов. // Растительные ресурсы 1974-Т.10, вып.1- С.75-81.

62. Сенов, П.Л. Материалы по фармако-химическому изучению некоторых лекарственных частей лимонника китайского. / П.Л. Сенов. // Аптечное дело.- 1952.- №3.- С. 5-8.

63. Скорикова, Ю.Г. Полифенолы плодов и ягод и формирование цвета продуктов: Текст лекций. / Ю.Г. Скорикова. Краснодар: Издательство КПИ, 1988.-70 с.

64. Соколов, С.Я. Справочник по лекарственным растениям. / С .Я. Соколов, И.П. Замотаев. Харьков: Основа, 1993.- 438 с.

65. Соловьева, А.Г. Анализ и стандартизация корневищ и корней элеутерококка и его экстракта жидкого по содержанию биологически активных соединений. / А.Г. Соловьева, Т.В. Петухова, Р.Д. Грешных. // Химия природ, соедин.- 1988.-№ 1.- С. 25-27.

66. Сопоставительное изучение химического состава фитопрепарата и его растительных источников как основа стандартизации жидких спиртосодержащих лекарственных форм / H.A. Тюкавкина, Ю.А. Колесник,

67. И.А. Селиванова и др. //Третий международный съезд "Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" Санкт-Петербург Пушкин 29 июня - 1июля 1999 г: Материалы съезда.- СПБ., 1999. - С. 159 - 171.

68. Степанова, Т.А. Фармакогностическое изучение викарных видов лекарственных растений Дальнего Востока: Автореферат дисс. .докт. фарм. наук. / Т.А. Степанова. Москва, 1998.- 49 с.

69. Строение и свойства элеутерозида В, гликозида элеутерококка колючего / Ю.С. Оводов, Г.М. Фролова, А.К. Дзизенко и др. // Известия АН СССР. Сер. химии.- 1969. -№6.- С. 1370-1372.

70. Стуккей, К.Л. Исследование сушки соцветий пижмы. / К.Л. Стуккей, Г.М. Терентиенко. // Хим.-фармацевт, журн 1983.- № 11- С. 13311334.

71. Супрунов, Н.И. К изучению полисахаридов лимонника. / Н.И. Супрунов. // Вопросы разработки новых лекарственных средств. Рязанский мед. ин-т им. акад. И.П. Павлова: Науч. тр.- Т. 50.-Рязань, 1975.-С. 1214.

72. Супрунов, Н.И. Фармакогностическое изучение растений семейства аралиевых АгаНасеае. / Н.И. Супрунов. // Материалы к изучению женьшеня и лимонника,- Л., 1960.- вып. 4.- С. 216-221.

73. Сухомиров, Г.И. Что может дать наша тайга. / Г.И. Сухомиров. Хабаровск, 1986. - 224 с.

74. Танчев, С.С. Антоцианы в плодах и овощах. / С.С. Танчев. М.: Пищевая промышленность, 1980. - 302 с.

75. Тимофеева, В.Н. Изменение качества соков при хранении. / В.Н. Тимофеева, Л.П. Яромич. // Науч.-техн. прогресс в пищ. пром-сти: Меж-дунар. науч.-техн. конф., Могилев, 22-24 нояб.: Тез. докл. Могилев, 1995. - С.31-32.

76. Трегубов, Г. А. Лимонник китайский и его разведение. / Г.А. Трегу-бов, С.Д. Емашев. Хабаровск, 1955. - С. 16-23.

77. ТУ 9163-001-33129878-99 Сироп лимонника.

78. ФС 42-1822-90 Настойка семян лимонника.

79. ФС 42-2725-90 Корневище и корень элеутерококка колючего.

80. ФС 42-2725-90 Изменение № 1. Корневище и корень элеутерококка колючего.

81. ФС 42-2833-92 Экстракт элеутерококка жидкий.

82. Чарыков, А.К. Математическая обработка результатов химического анализа. / А.К. Чарыков. Л.:Химия, 1984.- 168 с.

83. Шеппард, Э. Количественная хроматография на бумаге и в тонком слое. / Э. Шеппард. М.: Мир, 1971.- 332 с.

84. Acyl-CoA: Cholesterol acyltransferase inhibitory activity of lignans isolated from Schisandra, Machilus and Magnolia species / В. M. Kwon, H. J. Jung, J.H. Lim et al. // Planta med.- 1999.-Vol. 65.- P. 74-76.

85. American Herbal Pharmacopoeia, Astragalus root.- October 1999.- 54 p.

86. American Herbal Pharmacopoeia, Schisandra berry.- October 1999.- 48 p.

87. Analysis of the essential oil of schisandra chinensis with GC/MS / Li Xiao-ning, Cui Hui, Song You-gun et al. // Acta Pharmaceutica Sinica.- 2001.-Vol. 36, №3. -P. 215-219.

88. Arras, G. Variazioni deglioli essenziali del mandarino durante la conser-vazione. / G. Arras, F. Gambella, A. Petretto. // Freddo. 1995. - Vol. 49, №3. - P. 257-264.

89. Bladt S. Taiga Wurzel. DC- und HPLC-Analyse von Eleutherococcus-bzw. Acanthopanax-Extrakten und diese enthaltenden Phytopr^paraten. / S. Bladt, H. Wagner, W.S. Woo. // Deutsche Apotheker Zeitung.- 1990.-Vol.30.-P. 1499-1508.

90. Bone, K. Standardized extracts. Neither poison nor panacea. / K. Bone. // HerbalGram.- 2001.- Vol. 53.- P. 50 59.

91. Burmistrov, A. Schisandra berry. / A. Burmistrov. // Dragen report. 1987.-№ 7.- P. 83-96.

92. Comparison of the pharmacological effects of seven constituents isolated from the fruits of Schisandrae / T. T. Bao, G. T. Liu, X. Li et al. // Acta pharm. Sin.- 1980.-№ 14.-P. 1-7.

93. Enzymatic browing of model solutions and apple phenolic extracts by apple polyphenoloxidase. / P. Goupy, M.J. Amiot, F. Duprat et al. // J. Food Sei. 1995.-Vol. 60, №3. - P. 497-501.

94. Fructus Schisandrae (Wuweizi). / H. Wagner, R. Bauer, Xiao Peigen et al. // Chinese Drug Monographs and analysis. 1996. - Vol. 1.- 48 p.

95. Gaffney, B.T. The effects of Eleutherococcus senticosus and Panax ginseng on steroidal hormone indices of stress and lymphocyte subset numbers in endurance athletes. / B.T. Gaffney, H.M. Hugel, P.A. Rich. // Life Sci.-2001.- Vol. 70, №4.- P. 431-442.

96. Glatthaar-Saalmuller, B. Antiviral activity of an extract derived from roots of Eleutherococcussenticosus. / B. Glatthaar-Saalmuller, F. Sacher, A. Esperester. // Antiviral Res.- 2001,- Vol. 50, № 3.- P. 223-228.

97. Hostettmann, K. Chemistry and pharmacology of natural products: Saponins. / K. Hostettmann, A. Marston.- Cambridge: Cambridge University Press, 1995.- 128 p.

98. Imming, R. Grundlagen der Farbstoffbil dung in nochkonzentrierten Saccharoselosungen. / R. Imming, K. Bliesener, K. Buchnoiz. // Zuckerindustrie.- 1994.- Vol. 119, № 11P. 915-919.

99. Isocratic igh-performance Liquid chromatography of dibenzocycloocta-diene lignans from seeds of Schisandra chinensis. / J. Slanina, E. Taborska, H. Bochorakova et al. // Scripta medica.- 1995.- Tom. 68, Fasc. 8.- P. 335342.

100. Isolation and hypoglycemic activity of eleutherans A, B, C, D, E, F, and G, glycans of eleutherococcus senticosus roots. / H. Hikino, M. Takahashi, K. Otake et al. // J. Nat. Product.- 1986.- № 49,- p. 293-297.

101. Iversen, C.K. Black currant nectar: effect of processing and storage on anthocyanin and ascorbic acid content. / C.K. Iversen. // J. Food Sci.1999.- Vol.64, № p. 37-41.

102. Jamshidi, A. Determination of kaempferol and quercetin in an extract of Ginkgo biloba leaves by high-performance thin-layer chromatography (HPTLC). / A. Jamshidi, M. Adjvadi, S.W. Husain. // J. Planar Chroma-togr.- 2000.- Vol.13.- P. 57-59.

103. Katsaboxakis, K. Stability of pigmented orange anthocyanins in model and real food systems. / K. Katsaboxakis, D. Papanicolaou, M. Melanitou. // Ital. J. FoodSci.- 1998.- Vol.10, № 1. P. 17-25.

104. Lalla, J.K. Application of HPTLC to alternative medicines qualitative and quantitative evaluation of the Ayurvedic formulation 'Triphala Churna'. / J.K Lalla., P.D. Hamrapurkar, H.M. Mamania. // J. Planar Chromatogr.2000.-Vol.13.-P. 390-393

105. Li, X.C. A new lignan glycoside from Eleutherococcus senticosus. / X.C. Li, D.L. Barnes, I.A. Khan. // Planta Med.- 2001.- Vol.67, № 8,- P. 776-778.

106. Lignans from Eleutherococcus senticosus (Siberian Ginseng). / T.N. Makarieva, A.S. Dmitrenok, V.A. Stonik et al. // Pharmaceutical sciences.-1997.-№3.-P. 525-527.

107. Mangle, M.S. HPTLC studies on Tribulus terrestris L. (Chota Gokhru) and Pedalum murex L. (Bada Gokhru). / M.S. Mangle, C.I. Jolly. // Indian Drugs.- 1998.- Vol.35, № 4. P. 189-194.

108. Peripheral blood changes in Eleutherococcus pretread mice exposed to acute gamma radiation / M. Minkova, T. Pantev, S. Topalova et al. // Ra-diobiol. Radiotther.- 1982.- Vol. 23.- P. 675-678.

109. Pharmacological studies on Schizandra fruit. I. General pharmacological effects of gomisin A and schisandrin. / S. Maeda, K. Sudo, M. Aburada et al.//Yakugaku zasshi.- 1981.-№ 101.-P. 1030-1041.

110. Protective effects of Acanthopanax senticosus and its components on gastric ulcer. / T. Fujikawa, A. Yamaguchi, I. Morita et al. // Biol. Pharm. Bull. 1996.- Vol.19, № 9. - P. 1227-1230.

111. Purvis Albert, C. The role of desiccation in chilling injury of produce stored at low temperatures. / C. Purvis Albert. // Froid et qual. legumes frais: C. r. Commis. C2, D2/3, Brest (France), sept. 7-9, 1994: Inst, int froid. Paris, 1994. - P. 65-72.

112. Quantative analysis of lignans in the fruits of Schisandra ch. / K. Naka-jima, H. Taguchi, Y. Ikeya et al. // Yakugaku Zasshi.- 1983.- № 7.- P. 743749.

113. Salo, J.-P. Quantitative and qualitative thin-layer chromatography, basics and hyphenated techniques. / J.-P. Salo, H. Salomies. // Farmaseutti-nen aikakauskirja.- 1996.- Vol.12.- P. 152-164.

114. Sargent, D. Thick juice degradation during storage. / D. Sargent, S. Briggs, S. Spencer. // Int. Sugar J. 1998. - Vol. 100, № 1196. - P. 425.

115. Sikorska, M. Standardisation of some herbal medicines by TLC method. / M. Sikorska, I. Matlawska, I. Glinka. // Пятый международный съезд

116. Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения" Санкт-Петербург-Петродворец 5- 7 июля 2001 г: Материалы съезда.- СПБ., 2001. С. 381 - 382.

117. Slanina, J. Lignans in the seeds and fruits of Schisandra chinensis cultured in Europe. / J. Slanina, E. Taborska, L. Lojkova. // Planta medica.- 1997.-Vol.63.-P. 277-280.

118. Sonneborn, U. Eleutherococcus senticosus. / U. Sonneborn, R. Hansel. //Adverse effects of herbal drugs, 1993.- Vol. 2.- P. 159-169.

119. Steinmann, G.G. Immunopharmacological in vitro effects of Eleutherococcus senticosus extracts. / G.G. Steinmann, A. Esperester, P. Joller. // Arzneimittelforschung.- 2001.- Vol.51, №1.- P. 76-83.

120. Suu, W. J. Determination of syringin in Acanthopanax senticosus by HPLC. / W. J. Suu, Z.I. Sha. // Bull. Chin. Mat. Med. -1986.- № 11.- P. 234-235.

121. Tang W. Chinese drugs of plant origin. / W. Tang, G. Eisenbrand. Berlin: Heidelberg Springer Verlag, 1992.- 1039 p.

122. Turian, G. Problems insolved in standardization of flavonoids in crude drugs and extracts from medicinal plants. / G. Turian, L. Farkas-Tompa. // Acta Pharm. Hungarica.- 1987.- № 5.- P. 193-198.

123. Wang, K. Determination of the active ingredients in Chinese drug Wu-weizi, Schisandra chinensis, by thin-layer chromatography. / K. Wang, Y. Tong, W. Sung. // Acta Pharm. Sinica. 1990.- Vol. 25.- P. 49-51.

124. Whiting, D.A. Lignans, neolignans and related compounds. / D.A. Whiting. // J. Prod. Reports.-1987.-Vol.4, № 5.- P. 499-525.

125. Xie, P. Identification of Chinese patent medicine by using chromatographic finger print technique. / P. Xie // J. Chinese Trad. Patent Med. -2000.-Vol. 22, № 6. P. 391-395.

126. Xu, Z.B. Assay of active constituents in different parts of manypricle acanthopanax. / Z.B. Xu, WJ. Tong, G. Yang. // Chin. Trad. Herb Drugs.-1984.-Vol. 15.-P. 224-226.

127. Xu, Z.B. Content variation of some chemical constituents of Ci Wu Jia (Acanthopanax senticosus) during storage. / Z.B. Xu, M.Y. Wang // Chin. Trad. Herb Drugs.- 1984.- Vol. 15.- P. 15-17

128. Yun-Choi, H.S. Platelet anti-aggregating plant materials. / H.S. Yun-Choi, S.O. Kim, J.R. Lee. // Korean J. pharmacogn.- 1986.- № 17.- P. 161.

129. УТВЕРЖДАЮ Гениальный директор ТОО "Люми"/А.Е. Федотов/ ¿Г^иыи^Л 1999 г.1. АКТо внедрении результатов научных исследований в практику работы Екатеринбургской фармацевтической фабрикич